SU1644830A1

SU1644830A1 - Method for preparation of potato regenerants in vitro

Info

Publication number: SU1644830A1
Application number: SU884656629A
Authority: SU
Inventors: Галина Васильевна Рассадина; Любовь Вениаминовна Крашенинникова; Людмила Михайловна Хромова; Сергей Петрович Смирнов
Original assignee: Институт общей генетики им.Н.И.Вавилова; Научно-Производственное Объединение По Картофелеводству Агропрома Нечерноземной Зоны Рсфср
Priority date: 1988-11-30
Filing date: 1988-11-30
Publication date: 1991-04-30

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии и может примен тьс в генетической инженерии растений, а также в сельском хоз йстве при микро- клональном размножении безвирусных растений картофел . Целью изобретени вл етс ускорение получени ре- генерактов при сохранении их генетической стабильности. Способ предусматривает предварительное культивирование на агаризовачной среде, содержащей макроэлементы и р д фитогормонов с последующим переносом ткани на модифицированную среду Мурасиге-Скуга дл получени регенерантов 2 табл. а 8 (ЛThe invention relates to biotechnology and can be applied in genetic engineering of plants, as well as in agriculture, for microclonal propagation of virus-free potato plants. The aim of the invention is to accelerate the production of generators while maintaining their genetic stability. The method involves pre-cultivation on an agar medium containing macronutrients and a number of phytohormones, followed by transfer of tissue to the modified Murashige-Skoog medium to obtain regenerants 2 tab. a 8 (L

Description

Изобретение относитс к биотехнологии и может примен тьс в гене- тичесой инженерии растений, а также в сельском хоз йстве при микрокло- нальном размножении безвирусных растений картофел .The invention relates to biotechnology and can be applied in the genetic engineering of plants, as well as in agriculture for the microclonal propagation of virus-free potato plants.

Целью изобретени вл етс ускорение получени регенерантов при сохранении их генетической стабильности .The aim of the invention is to accelerate the production of regenerants while maintaining their genetic stability.

Способ осуществл етс следующим образом.The method is carried out as follows.

Стеблевые междоузли пробирочных растений картофел вычлен ют и помещают на,питательную среду, содержащую NH4N03 40-60 мг/л„ CaCli Ю0 150 мг/л, ИУК 8-15 мг/л, БАИ 10 15 мг/л, агар 0-8000 мг/л, воду до 1 л, и инкубируют при 24°С, освещен 3Stem interstices of test-tube potato plants are isolated and placed on a nutrient medium containing NH4N03 40-60 mg / l „CaCli U0 150 mg / l, IAA 8-15 mg / l, BAI 10 15 mg / l, agar 0-8000 mg / l, water up to 1 l, and incubated at 24 ° C, lit 3

ности 4000 лк и 16-часовом фотопериоде в течение 20-30 ч. Затем эксплантаты перенос т на модифицированную питательную среду Мурасиге -Скуга, .содержащую сахарозу 1000-1500 мг/л, маннит 3000-5000 мг/л, ИУК 0,005- 0,3 мг/л, БАЛ 2-3 мг/л, агар 0- 0,8000 мг/л и культивируют при тех же услови х в течение 6-8 сут„ Затем эксплантаты перенос т на модифицированную среду Мурасиге-Скуга, содержащую 12000-20000 мг/л сахарозы, 2- 3 мг/л БАЛ, 3-6 мг/л гибберелловой кислоты и 0-8000 мг/л агара, и куль- тивируют в течение сут при тех же услови х до получени реге- нерантов.4000 lx and a 16-hour photoperiod for 20-30 hours. Then the explants are transferred to Murashige -Skuga modified nutrient medium containing sucrose 1000-1500 mg / l, mannitol 3000-5000 mg / l, IAA 0.005-0, 3 mg / l, BAL 2-3 mg / l, agar 0- 0.8000 mg / l and cultured under the same conditions for 6-8 days. "The explants are then transferred onto a modified Murashige-Skoog medium containing 12000- 20,000 mg / l sucrose, 2–3 mg / l BAL, 3–6 mg / l gibberellic acid, and 0–8000 mg / l agar, and cultured for 24 hours under the same conditions until regenerants are obtained.

Пример I. Стеблевые эксплантаты растений картофел сорта Сме-Example I. Stalk explants of plants of potato variety Sme-

Јь .ЈЈь .Ј

00 СО00 WITH

на вычлен ют и помещают на среду, содержащую з 40 мг/л, CaCl 100 мг/л, ИУК 8 мг/л, БАЛ 10 мг/л, агар 8000 мг/л. После инкубации на данной среде в течение 20 ч при 24°С, освещенности 4000 лк и 16-часовом фотопериоде культивирование продол жают при тех же услови х на модифи- цированной среде Мурасиге-Скуга, со держащей 1000 мг/л сахарозы, 3000 мг/ маннита, 0.,005 мг/л ИУК и 2 мг/л БАП После культивировани в течение 6-8 сут растительный материал перенос т на модифицированную питательную среду Мурасиге-Скуга, содержащую сахарозу 12000 мг/л, БАП 2 мг/л, гибберелловую кислоту 3 мг/л На 20-е сутки образуютс регенеранты, которые в дальнейшем укорен ют иThey were isolated and placed on the medium containing s 40 mg / l, CaCl 100 mg / l, IAA 8 mg / l, BAL 10 mg / l, agar 8000 mg / l. After incubation on this medium for 20 hours at 24 ° C, illumination of 4000 lux and a 16-hour photoperiod, cultivation is continued under the same conditions on a modified Murashige-Skoog medium containing 1000 mg / l of sucrose, 3000 mg / mannitol, 0., 005 mg / l IAA and 2 mg / l BAP After cultivation for 6-8 days, the plant material is transferred to a modified nutrient medium Murashige-Skoog containing sucrose 12000 mg / l, BAP 2 mg / l, gibberellic acid 3 mg / l On the 20th day, regenerants are formed, which subsequently rooted and

адаптируют к услови м открытого грун- та.Adapt to outdoor conditions.

Пр.имеры 2, 3 осуществл ют аналогично примеру 1, при этом эксплантаты помещают на питатель ные среды, содержащие компоненты в концентраци х, соответствующих верх ним и средним значени м за вленных интервалов, в исследовани включают гибрид 1 и гибрид 750 Регенеранты получают на 22-е сутки после помещени на последнюю модифицированную среду. Результаты представлены в табл. 1, 2.Dimers 2, 3 are carried out analogously to example 1, with the explants placed on nutrient media containing components at concentrations corresponding to the upper and average values of the intervals, and in studies include hybrid 1 and hybrid 750 Regenerants are obtained at 22 day after placement on the last modified medium. The results are presented in table. 12.

Из представленных материалов вид но, что способ вл етс очень эффективным: большое число регенерантов получают в течение недель при обычном их получении через 13-18 недель культивировани Кроме того, при отсутствии стадии недифференцированного роста клеток возможно получение генетически стабильного материала , который можно использовать в генетической инженерии растений.From the presented materials it is clear that the method is very effective: a large number of regenerants are obtained within weeks of their usual production after 13-18 weeks of cultivation. Moreover, in the absence of a stage of undifferentiated cell growth, it is possible to obtain a genetically stable material that can be used in genetic plant engineering.

Claims

Invention Formula

The method of obtaining regenerants of potatoes in vitro, including planting stem explants on a nutrient medium and cultivation to

obtaining regenerants, which are promoted by the fact that, in order to accelerate the production of regenerants while maintaining their genetic stability, cultivation is carried out in the following sequence: first, the explants are placed for 20-30 hours in a nutrient medium of the following composition, mg / l:

Mnfshz CaClo

40-60 1 OSY 50

8-15 10-15 0-8000

IUK BAP Agar Distilled water Up to 1 liter is then cultivated for 6-8 days on a modified Murashige-Skooga nutrient medium containing sucrose in the amount of 1000-1500 mg / l, mannitol 3000-5000 mg / l, IAA 0.005-0.3 mg / l, BAP 2-3 mg / l, then transferred to a modified nutrient medium Murasige-Skoog, containing sucrose in an amount of 12-20 g / l, BAP 2-3 mg / l and gibberellic acid 3-6 mg / l, at which regenerants are obtained.

Table 1

table 2

Way

Proposed

Known

The number of regenerants with altered morphological signs,%

Not found 5О-60