SU1642399A1

SU1642399A1 - Method for determination of antibodies class igm for corantigen of hepatitis b virus

Info

Publication number: SU1642399A1
Application number: SU884626700A
Authority: SU
Inventors: Владимир Викторович Цибиногин; Вера Яковлевна Лосева
Original assignee: Институт Органического Синтеза Ан Латвсср
Priority date: 1988-12-27
Filing date: 1988-12-27
Publication date: 1991-04-15

Abstract

Изобретение относитс к медицинской биотехнологии, св зано с генной инженерией и касаетс диагностики вирусного гепатита В С целью упрощени способа на твердую фазу сорбируют антитела к Ig M человека, внос т исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиес в них Ig M св зывают с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавл ют меченый антиген, который взаимодействует со св занными специфическими Ig M. Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце антител класса Ig M. Кор-антиген высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е coli Антиген мет т радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европи или другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакци х. Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола, полихлорвинила или другого материала, используемого в иммунологических реакци х соThe invention relates to medical biotechnology, is associated with genetic engineering and concerns the diagnosis of viral hepatitis B. In order to simplify the method, antibodies against human Ig M are absorbed onto the solid phase, and the serum or plasma samples contained in them are bound to the sorbed ones. antibodies. After incubation and washing, labeled antigen is added, which interacts with associated specific Ig M. Increasing the signal compared to the negative control indicates the presence of antibodies of class Ig M in the sample. High purity core antigen is obtained from the lysate of the recombinant cell strain E coli Antigen Marked with a radioactive label, an enzyme, a Europium chelate complex, or another label used in highly sensitive immunological reactions. The solid phase is balls, wells or tubes made from polystyrene, polyvinyl chloride or other material used in immunological reactions with

Description

Изобретение относитс к медицинской биотехнологии, в частности к генной инженерии , и может быть использовано дл диагностики вирусного гепатита В.The invention relates to medical biotechnology, in particular to genetic engineering, and can be used to diagnose viral hepatitis B.

Цель изобретени - упрощение способа .The purpose of the invention is to simplify the method.

На твердую фазу сорбируют антитела к Ig M человека, затем внос т исследуемые образцы сыворотки или плазмы, при этом содержащиес в них Ig M св зываютс с сорбированными антителами. После инкубации и отмывки добавл ют меченый антиген, который взаимодействует со св заннымиAntibodies to human Ig M are adsorbed to the solid phase, then test serum or plasma samples are introduced, and the Ig M contained in them is bound to the adsorbed antibodies. After incubation and washing, labeled antigen is added, which interacts with the associated

специфическими Ig M Повышение сигнала по сравнению с отрицательным контролем свидетельствует о наличии в образце анти- НВс класса Ig M.Specific Ig M Increase of the signal compared with the negative control indicates the presence in the sample of anti-HBc Ig M class.

Согласно предлагаемому способу в качестве меченого компонента используют меченый кор-антиген, который взаимодействует с антителами класса Ig M, предварительно св занными с сорбированными на твердой фазе антителами к Ig M человека.According to the proposed method, a labeled core antigen is used as a labeled component, which interacts with Ig M antibodies, previously bound to human Ig Ig M sorbed on a solid phase.

НВс Ад высокой степени чистоты получают из лизата рекомбинантного штамма клеток Е. coli.High purity HBs Hell is obtained from the lysate of the recombinant E. coli cell strain.

ЈьЈ

го со о юgo so about

НВс Ад мет т радиоактивной меткой, ферментом, хелатным комплексом европи или любой другой меткой, используемой в высокочувствительных иммунологических реакци х.HBs Ad is labeled with a radioactive label, an enzyme, a europium chelate complex, or any other label used in highly sensitive immunological reactions.

Твердой фазой служат шарики, лунки или пробирки, изготавливаемые из полистирола , полихлорвинила или другого материала , используемого в иммунологических реакци х на стадии сорбции первого сло .The solid phase is balls, wells, or tubes made from polystyrene, polyvinyl chloride, or other material used in immunological reactions during the sorption stage of the first layer.

Изобретение позвол ет упростить процесс определени антител класса Ig M к кор-антигену вируса гепатита В. При этом чувствительность метода не снижаетс . Кроме того, исключаетс необходимость использовани крови человека,The invention makes it possible to simplify the process of determining antibodies of the Ig M class to the core antigen of the hepatitis B virus. At the same time, the sensitivity of the method is not reduced. In addition, the need to use human blood is eliminated.

Пример. Определение анти-НВс класса Ig M в радиоиммунологической реакции .Example. Determination of anti-HBs class Ig M in the radioimmunological reaction.

На твердую фазу сорбируют антитела против т желых цепей Ig M человека в концентрации 10 мкг/мл в объеме 0,1 мл в 0,05 М карбонат-бикарбонатном буфере, рН 9,5, в течение 16-18 ч при +4°С. После трехкратной отмывки дистиллированной водой в лунки внос т разведени испытуемых человеческих сывороток 1:t02, 1:103 и т. д. доAntibody against human IgM M heavy chains at a concentration of 10 µg / ml in a volume of 0.1 ml in 0.05 M carbonate-bicarbonate buffer, pH 9.5, are adsorbed to the solid phase for 16-18 h at + 4 ° С . After washing three times with distilled water, dilute the test human sera 1: t02, 1: 103, etc., into the wells to make up

1:10 по 0,1 мл в 0,4 М Na-фосфатном буфере , рН 7,2-7,4, содержащем 0,15 М хлорида натри , 0,1% тритона Х-100 и 0,1% бычьего сывороточного альбумина. После инкубации в течение 1-2 ч при +37°С лунки отмывают 5-6 раз дистиллированной водой и внос т раствор меченного 1251 НВс Ад в том же фосфатном буфере. После инкубации с антигеном 1-2 ч при +37°С следует отмывка1:10 0.1 ml in 0.4 M Na-phosphate buffer, pH 7.2-7.4, containing 0.15 M sodium chloride, 0.1% Triton X-100 and 0.1% bovine serum albumin. After incubation for 1-2 hours at + 37 ° C, the wells are washed 5-6 times with distilled water and the solution of labeled 1251 HBc Hell is added in the same phosphate buffer. After incubation with the antigen for 1-2 hours at + 37 ° C, washing follows

5-6 раз. Затем лунки вырезают и определ ют их радиоактивность ву-счетчике. Результаты, полученные по известному и предлагаемому способам, совпадают, т. е. чувствительность обоих методов не отличаетс .5-6 times. Then the wells are cut and their radioactivity is determined by a vu meter. The results obtained by the known and proposed methods are the same, i.e., the sensitivity of both methods does not differ.

Claims

DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION A method for detecting Ig M antibodies to the core antigen of the hepatitis B virus, comprising conducting an immunological reaction between an antibody and an antigen on a solid phase using a labeled component, characterized in that, in order to simplify the method, the core antigen is used as a labeled component. and Ig M antibodies from test samples are bound to human anti-Ig M antibodies sorbed on the solid phase.