SU1594427A1

SU1594427A1 - Способ спектрофотометрического количественного определени но-шпы, выделенной из биологического материала

Info

Publication number: SU1594427A1
Application number: SU874324411A
Authority: SU
Inventors: Владимир Антонович Карташов; Владимир Андреевич Кнауб
Original assignee: Алтайский государственный медицинский институт им.Ленинского комсомола
Priority date: 1987-11-03
Filing date: 1987-11-03
Publication date: 1990-09-23

Abstract

Способ относитс к медицине, точнее к химико-токсикологическому анализу. Цель - повышение специфичности. Способ осуществл етс путем добавлени к 10,0 мл спиртового раствора но-шпы 0,1 мл 1% раствора гидроксида аммони / образование непротонированной формы но-шпы/ и измерени величины оптической плотности раствора при длине волны 360 нм, затем к раствору добавл ют 0,1 мл концентрированного раствора сол ной кислоты/ образование протонированной формы но-шпы/ и повторно измер ют величину оптической плотности раствора при указанной длине волны. Дл количественного определени но-шпы, выделенной из биологического материала, используют разность при вычислении оптической плотности непротонированной формы из величины оптической плотности протонированной формы но-шпы при длине волны 360 нм. Табл.1,2.

Description

Изобретение относитс к фармации, точнее ic химико-токсикологическому анализу, а именно к количественному определению но-шпы, выделенной из биологического материала.

Целью изобретени вл етс повышение специфичности способа.

Способ осуществл ют путем последо- в ательного добавлени к 10,0 мл спиртового раствора но-шпы, выделенной из биологического материала ,0,1 мл 1%-но- го раствора гидроксида аммони и . 0,1 мл концентрированной сол ной кислоты , сн ти спектров но-шпы в прото- нированной и непротонированной формах .

При добавлении 0,1 мл 1%-ного пад- роксида натри но-шпа переходит в непротонированную форму, котора не имеет поглощени при длине волны 360 нм. В этом случае вел1тчина изме- рейнсй относительно растворител оптической плотности равн етс оптической плотности примесей ()- добавлении к 10,0 мл раствора но-шпы 0,1 мл концентрированного раствора сол ной кислоты переходит в протонированную форму с максимумом поглощени в области длин волн 350- 360 нм. Измеренна относительно растворител при дл1ше волны 360 нм оптическа плотность (Д,,.) складываетst

с из оптической плотности но-шпы (Д| ) и оптической плотности примесей (Д j,). Зна последнюю величину наход т оптическую плотность но-шпы

(п ).

.Wел ю

Н 360 360 ДгЗ«о

Оптические плотности спиртовых liacTBopoB примесей при последовательном добавлении 0,1 мл 1%-ного раст- вора аммони гидроксида и 0,1 мл концентрированного раствора сол ной кислоты не измен ютс .

Количественное содержание но-шпы (Tjf) в исследуемых растворах (в мкг) определ ют по стандартному раствору, ёодержащему определенное количество н|о-шпы (Т) по формуле

т Д н ato T ст

J.

нет ate

) нстз«Г оптические плотности спиртовых -растворов но-шпы соответственно в опытной и стандартной пробах при длине волны 360 нм. Под- чйн емость закону Бугера наблюдаетс в интервале концентрации 5-50 мкг/мл . Пример 1. К 10,0 мл мочи до- б$вл ли 0,2 мл О,1000%-ного раствора нб-шпы в 0,01 н.растворе сол ной кис- лфты, 2,0 мл 0,1 н.раствора сол ной КИСЛОТЫ, 10,0 мл гексана, встр хивали в течение 5 мин, центрифугировал : 5|мин при 2,5 тыс. об/мин. Гексано- взЬо фазу отдел ли, водную фазу пвДще- л4чиваИи 1 н.раствором гвдроксвд на- трк до рН 10-11 по универсальному индикатору, прибавл ли 10,0 мл гексана , встр хивали в течение 5 мин, центрифугировали при 2,5 тыс.об/мин. Сг(ой органического растворител от- де1л ли, добавл ли к нему 1 каплю i н. спиртового раствора сол ной кислоты, пе ремешивали и испар ли под током во йдуха при 60° С. Сухой остаток раст- вор ли в 10,0 мл спирта. Параллельно с опытными пробами проводили холостые пробы с мочой, не содержащей но-шпы. Стандартные пробы готовили путем испарени 0,2 мл О,1000%-ного раствора но-шпы и растворени сухого остатка в-10,О мл спирта. Дл сравнени из- вестного способа с предлагаемым сначала измер ли оптические плотности спиртовых растворов при длине волны 30,5 нм с помощью спектрофотометра в односантиметровых кюветах проводили исследовани по предлагаемому способу, дл этого добавл ли ко всему объему спиртового paiSTBopa 0,1 мл раствора гидроксида аммони , перемешивали и измер ли оптическую плотность при длине волны

5

10

0 0 5

360 нм (Д), затем добавл ли ко всему объему раствора 0,1 мл концентрированного раствора сол ной кислоты и вновь измер ли оптическую плотность при длине волны 360 нм (Д).

Результаты количественного определени но-шпы, вьиеленной из мочи, приведены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, известный способ по сравнению с предлагаемые да- . ет завьппенные результаты (в среднем :на 18%) за счет вли ни примесей на результаты количественного определе- J5 ии .

Пример 2. К 5,0 г измельченной на м сорубке трупной печени добавл ли 0,5 мл О,1000%-ного раствора но-шпы в 0,01 н. растворе сол ной кислоты, тщательно перемешивад{1 и оставл ли на 2 ч при комнатной температуре . После этого получали щелочные хлороформные .извлечени по методу Васильевой А.А. (объем реактивов уменьшали пропорционально навеске биологического материала). Дл подщела- чивани использовали 1 н. раствора гидроксида натри . К щелочному хлороформному извлечению добавл ли 1 кап- JBO 1 н. спиртового раствора сол ной кислоты и органический растворитель испар ли под током воздуха при . Сухой остаток раствор ли в 10,0 мл спирта. Параллельно с опытными пробами проводили холостые пробы с трупной печенью, не содержащей но-шпы. Стандартные пробы готовились путем испарени 0,1 мл О,1000%-ного раство- ра но-шпы в 0,01 н. растворе сол ной кислоты и растворени сухого остат- Ка в 10,0 мл спирта. Далее поступали, к огшсано в примере 1.

Результаты количественного определени но-шпы, выделенной из ткани трупной печени по методу А.А. Васильевой , приведены в табл. 2.

Из табл. 2 видно, что известный способ по сравнению с предлагаемым дает завышенные результаты (в среднем на 65%) за счет вли ни примесей.

Claims

Формула изобретени

Способ спектрофотометрического количественного определени но-шпы, выделенной и з биологического материала,, включающий УФ-спектрофотометрическое

измерение экстракта биологического, материала с последующим расчетом по калибровочной кривой, отличающийс , что, с целью повышени специфичности способа, измер ют

величину дифференциальной оптической плотности путем регистрации разности абсорбции растворов но-шпы в протонированной и непротонированной формах при длине волны 360 нм.

Таблица 1