SU1576564A1 - Способ выделени кислой фосфатазы - Google Patents
Способ выделени кислой фосфатазы Download PDFInfo
- Publication number
- SU1576564A1 SU1576564A1 SU884371270A SU4371270A SU1576564A1 SU 1576564 A1 SU1576564 A1 SU 1576564A1 SU 884371270 A SU884371270 A SU 884371270A SU 4371270 A SU4371270 A SU 4371270A SU 1576564 A1 SU1576564 A1 SU 1576564A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- acid phosphatase
- specific activity
- elution
- sephadex
- phosphatase
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биохимии и медицине, касаетс выделени кислой фосфатазы и может быть использовано дл создани иммунодиагностикумов. Целью изобретени вл етс повышение удельной активности фермента. Способ заключаетс в следующем. Из э кул та получают спермоплазму путем центрифугировани . Затем кислую фосфатазу, содержащуюс в полученной спермоплазме, очищают хроматографией с последовательным использованием фенилсефарозы 4В, сефадекса G-200 и целлюлозы ДЕАЕ-52. Полученна таким образом кисла фосфатаза обладает удельной активностью до 1200 ед/мг.
Description
I
(21)4371270/30-13
(22)28.01.88
(46) 07.07.90. Бюл. № 25
(71)Всесоюзный научно-исследовательский институт биологического приборостроени
(72)Л.П.Евсеев, В.В.Евдокимов, В.В.Светличкин, А.В.Соколов
и К.М.Лед н
(53)577.15(088.8)
I
(56) Lam W.K.W. et al. Clin Chem, 1979, 25, F, 1285-1289.
(54)СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КИСЛОТНОЙ ФОС- ФАТАЗЫ
(57) Изобретение относитс к биохимии и .медицине, касаетс выделени кислой фосфатазы и может быть использовано дл создани иммунодиагностикумов . Целью изобретени вл етс повышение удельной активности фермента. Способ заключаетс в следующем. Из э кул та получают спермоплазму путем центрифугировани . Затем кислую фосфатазу , содержащуюс в полученной спермоплазме, очищают хроматографией с последовательным использованием фенилсефарозы 4В,сефадекса G-200 и целлюлозы ДЕАЕ-52. Полученна таким образом кисла фосфатаза обладает удельной активностью до 1200 ед/мг.
с 9
Изобретение относитс к биохимии и медицине и касаетс выделени кислой фосфатазы и может быть использовано дл создани иммунодиагностикумов.
Целью изобретени вл етс повышение удельной активности фермента.
Способ заключаетс в следующем.
Из э кул та получают спермоплазму путем центрифугировани э кул та. Затем кислую фосфатазу, содержащуюс в полученной спермоплазме, очищают хро- мотографией с последовательным использованием фенилсефарозы 4В, сефа- декса G-200 и ДЕАЕ-52-целлюлозы. Центрифугирование позвол ет отделить кислую фосфатазу от клеточного дебри- са и сконцентрировать кислую фосфатазу в малом объеме. Предлагаем последовательность операций очистки с использованием указанных наполнителей позвол ет наиболее полно провести очистку кислой фосфатазы от сопутствующих белков. Полученна таким образом кисла фосфатаза обладает удельной активностью до 1200 ед/мг.
Пример 1. Берут 150 мл э кул та . Удельна активность кислой фосфатазы в общем объеме исходного материала составл ет 4,3 МЕ/мл. Затем этот объем центрифугируют 15 мин при 3000 g дл отделени спермоштазмы от клеточных элементов э кул та. Далее спермоплазму, содержащуюс в надоса- дочной жидкости, хроматографируют в колонке с фенилсефарозой CL-4B ( мм), уравновешенной Ш сернокислым аммонием в ацетатном буфере 0,005М, рН 5,0 с 0,15М хлористого натри . Скорость элюции 15 мл/ч, фракции по 15 мл. Собранные фракции провер ют на содержание КПФ в иммуно- диффузионном анализе. Фракции, содержащие КПФ в области 0,2М (NH4)2SOt, концентрируют ультрафильтрацией на
ел
05
ел
О5 4ь
фильтре УМ-tO до 90 мл. Чистота препарата составл ет около 90%.
Полученный материал хроматографи- руют в колонке с сефадексом G-200 150x1100 мм, уравновешенно ацетатным буфером 0,005М рН 5,0 с 0,15М хлористого натри . Скорость элюции 15 мл/ч, фракции по 15 мл. Собранные фракции провер ют на содержание КПФ р иммунодиффузионном анализе. Этот материал имеет концентрацию белка 1,45мг/мл,а концентраци КПФ состав т 1,3 мг/мл.
Таким образом, чистота препарата составл ет около 90%. При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата Натри вы вл ютс несколько минорных компонентов (2-3), но иммунозаци кроликов этим материалом позвол ет получать хорошую моноспецифическую антисыворотку . Материал после гельфильтрации на сефадексе G-200 буфера, рН 7,4, ввод т в колонку с ДЕАЕ-52-целлюлозы . Скорость элюции 30 мл/ч, фракции по Ю мл. Элюции провод т ступенчатым градиентом возрастающих концентраций хлористого натри в трис-НС1 буфере, рН 7,4. КПФ обнаружена во фракци х, элюированных с колонки
5
0
5
0
0,1М раствором хлористого натри . Эти фракции сливают вместе и провод т анализ. Концентраци белка в полученном материале 760 мкг/мл, а титр в тест-системе на КПФ V:800. Определ ют концентрацию КПФ с помощью радиоиммунного анализа на простатическую кислую фосфатазу. КПФ составл ет 760000 Полученна кисла фосфатаза обладает высокой удельной активностью до 1200 ед/мг.
Claims (1)
- Формула изобретениСпособ выделени кислой фосфатазы, предусматривающий получение э кул та, экстракцию из него суммарной белковой фракции и ее хромсграфическую очистку , о тличающийс тем, что, с целью повышени удельной активности фермента, из э кул та перед его экстракцией выдел ют спермоплазму центрифугированием, а хроматографи- ческую очистку провод т последовательно на фенилсефарозе GL-4B с элю- цией снижающимс градиентом сульфата аммони от 1 до О,1М9 на сефадексе G-200 и на целлюлозе ДЕ-52 - с элюци- ей возрастающим градиентом хлористого натри от 0,05 до 1М.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU884371270A SU1576564A1 (ru) | 1988-01-28 | 1988-01-28 | Способ выделени кислой фосфатазы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU884371270A SU1576564A1 (ru) | 1988-01-28 | 1988-01-28 | Способ выделени кислой фосфатазы |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1576564A1 true SU1576564A1 (ru) | 1990-07-07 |
Family
ID=21352736
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU884371270A SU1576564A1 (ru) | 1988-01-28 | 1988-01-28 | Способ выделени кислой фосфатазы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1576564A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015102650A1 (en) * | 2014-01-02 | 2015-07-09 | Aerial Biopharma, Llc | Prostatic acid phosphatase, compositions comprising the same, and methods for producing and/or purifying the same |
-
1988
- 1988-01-28 SU SU884371270A patent/SU1576564A1/ru active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015102650A1 (en) * | 2014-01-02 | 2015-07-09 | Aerial Biopharma, Llc | Prostatic acid phosphatase, compositions comprising the same, and methods for producing and/or purifying the same |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Varon et al. | The isolation of the mouse nerve growth factor protein in a high molecular weight form | |
| Roe | Studies on human tRNA I. The rapid, large scale isolation and partial fractionation of placenta and liver tRNA | |
| Korb et al. | Biogenesis of cytochrome c in Neurospora crassa: synthesis of apocytochrome c, transfer to mitochondria and conversion to holocytochrome c | |
| Staes et al. | Improved recovery of proteome‐informative, protein N‐terminal peptides by combined fractional diagonal chromatography (COFRADIC) | |
| Gevaert et al. | Reversible labeling of cysteine‐containing peptides allows their specific chromatographic isolation for non‐gel proteome studies | |
| Hindennach et al. | Ribosomal Proteins: Isolation of Proteins from 50 S Ribosomal Subunits of Escherichia coli | |
| Sadka et al. | A 150 kilodalton cell surface protein is induced by salt in the halotolerant green alga Dunaliella salina | |
| US4340581A (en) | Process for the immunological determination of basal membrane material and new basal membrane suitable therefor | |
| US4230691A (en) | Nerve growth factor antibody and process | |
| Moon et al. | Multiple forms of elongation factor 1 from calf brain | |
| Seegers et al. | Purification of prothrombin and thrombin by chromatography on cellulose | |
| US4407744A (en) | Process for obtaining nerve growth factor | |
| EP0002139A1 (en) | Nerve growth factor and process for obtaining it | |
| Moroz et al. | Isolation and characterization of a neurotoxin from Vipera palestinae venom | |
| KR910008643B1 (ko) | B형 간염 비루스 표면항원(HBs 항원)의 정제 방법 | |
| Marcus et al. | [11] Protein chain initiation in wheat embryo | |
| Lee‐Huang et al. | Isolation and properties of crystalline initiation factor F1 from Escherichia coli ribosomes | |
| SU1576564A1 (ru) | Способ выделени кислой фосфатазы | |
| Scholz et al. | Studies on Seed Globulins from Legumes: I. Separation and Purification of Legumin and Vicilin from Vicia faba L. by Zone Precipitation | |
| Nisonoff et al. | Effect of hydrolysis by papain on the combining sites of an antibody | |
| Womack et al. | Purification and serological comparison of the yeast hexokinases PI and P-II | |
| Levi et al. | Isolation and characterization of chicken thymic electrolectin | |
| Lai et al. | Isolation and sequence analysis of a peptide from the active site of transaldolase | |
| Simons et al. | The use of preparative polyacrylamide-column electrophoresis in isolation of electrophoretically distinguishable components of the serum group-specific protein | |
| Malhotra | Purification and characterization of dicoumarol-induced prothrombins. II. Barium oxalate atypical (5-Gla) variant |