SU1576562A1

SU1576562A1 - Method of cultivating leucocytes of swine

Info

Publication number: SU1576562A1
Application number: SU884420223A
Authority: SU
Inventors: Иван Ильич Гаврилюк
Original assignee: И.И.Гаврилюк
Priority date: 1988-05-03
Filing date: 1988-05-03
Publication date: 1990-07-07

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии, а именно к культивированию клеток животных, необходимых дл производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически активных веществ, проведени диагностических исследований. Цель изобретени - повышение выхода целевого продукта. Способ включает засев суспензии лейкоцитов свиньи на питательную среду с добавлением 15% сыворотки крупного рогатого скота и последующим инкубированием культур до образовани моносло , причем в культивируемую среду добавл ют 20-250 мг/л фитогормонов, например индолилуксусную или гибберелловую кислоту. Выход лейкоцитов увеличиваетс в 6-8 раз по сравнению с прототипом.The invention relates to biotechnology, in particular to the cultivation of animal cells necessary for the production of viral vaccines, monoclonal antibodies, biologically active substances, and diagnostic studies. The purpose of the invention is to increase the yield of the target product. The method involves inoculating a suspension of porcine leukocytes on a nutrient medium with the addition of 15% bovine serum and subsequent incubation of the cultures to form a monolayer, with 20-250 mg / l of phytohormones, such as indolylacetic acid or gibberellic acid, added to the cultured medium. The yield of leukocytes is increased by 6-8 times in comparison with the prototype.

Description

Изобретение относитс к биотехнологии и имеет отношение к культивированию клеток животных, необходимых дл производства вирусных вакцин, мо- ноклональных антител, биологически активных веществ, проведени диагностических исследований.The invention relates to biotechnology and is related to the cultivation of animal cells necessary for the production of viral vaccines, monoclonal antibodies, biologically active substances, and diagnostic studies.

Целью изобретени вл етс повышение выхода целевого продукта.The aim of the invention is to increase the yield of the target product.

Пример 1. Во флаконы с питательной средой № 199 и 15% сыворотки крупного рогатого скота (КРС) после добавлени антибиотиков из расчета пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мг/л пипеткой стерильно внос т индолилуксусную или гибберелловую кислоту 20 мг/л. Клетки лейкоцитов подсвинков в возрасте 3 мес суспендируют в приготовленной таким образом среде, довод их концентрацию до 3 млн кл/мл. 1 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асептики внос т в бактериологические пробирки . Пробирки укладывают в штатив под углом 30-401 и помещают в термостат при 37°С, Через 3 сут культивировани формируетс монослой клеток типичной морфологии. Численность клеток определ ют в камере Гор ева.Example 1. After addition of antibiotics at the rate of penicillin 100 units / ml, streptomycin 100 mg / l, 20 ml / l of indolylacetic acid or gibberellic acid were sterilely poured into the vials with nutrient medium No. 199 and 15% of bovine serum (cattle). Cells of leukocytes of pigs at the age of 3 months are suspended in the medium prepared in this way, bringing their concentration to 3 million cells / ml. 1 ml of the cell suspension with a pipette under aseptic conditions is introduced into bacteriological tubes. The tubes are placed in a tripod at an angle of 30-401 and placed in a thermostat at 37 ° C. After 3 days of cultivation, a monolayer of cells of typical morphology is formed. Cell numbers are determined in a Gorev chamber.

Количество клеток лейкоцитов при использовании питательной среды с 20 мг/мл индолилуксусной или гибберел- ловой кислоты составл ет соответственно 4,81-5,Ю-106 и 5,15-5,71 х х 10 кл/мл, в то врем как в контроле 3,50-4,10-10 кл/мл (при посевной дозе клеток 3,0-3,5 млн кл/мл),The number of cells of leukocytes using a nutrient medium with 20 mg / ml of indolylacetic or gibberellic acid is 4.81-5, U-106 and 5.15-5.71 x x 10 cells / ml, respectively, while control 3.50-4.10-10 cells / ml (at a seeding dose of cells of 3.0-3.5 million cells / ml),

П р и м е р 2. Во флаконы со средой № 199 и 15% сыворотки КРС после добавлени антибиотиков из расчета пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл пипеткой внос т индолилуксусную или гибберелловую кислоту 150 мг/л. Клетки лейкоцитов подсвинУ1 EXAMPLE 2. Vials with medium No. 199 and 15% of cattle serum after adding antibiotics at the rate of penicillin 100 u / ml, streptomycin 100 µg / ml pipette 150 mg / l of indolyl acetic acid or gibberellic acid. Leukocyte cells

3535

:л: l

3535

N5N5

31573157

ков в возрасте 3 мес суспендируют в приготовленной таким образом среде , довед их концентрацию до Змлн кл/мл По 1 мл суспензии клеток пипеткой при соблюдении условий асептики внос т в бактериологические пробирки . Пробирки укладывают в штатив под углом 30-40° и помещают в термостат при 37&С. Через 3 сут культиви- ровани формируетс монослой клеток типичной морфологии. Численность клеток определ ют в камере Гор ева.at the age of 3 months, they are suspended in the medium prepared in this way, bringing their concentration to 3 mln cells / ml. Each 1 ml of the cell suspension is pipetted under aseptic conditions and placed into bacteriological tubes. The tubes are placed in a tripod at an angle of 30-40 ° and placed in a thermostat at 37 ° C. After 3 days of cultivation, a monolayer of cells of typical morphology is formed. Cell numbers are determined in a Gorev chamber.

Количество клеток лейкоцитов при использовании питательной среды с индолилуксусной или гибберелловой кислотой составл ет соответственно 27,00 - 28,15-10 и 20,05 - 21,10 «10 по сравнению с контролем 3,50- 4,10-10 кл/мл (при посевной дозе клеток 3-3,5 млн кл/мл).The number of cells of leukocytes using nutrient medium with indolylacetic or gibberellic acid is respectively 27.00 - 28.15-10 and 20.05 - 21.10 "10 compared with the control 3.50-4.10-10 cells / ml (at a seeding dose of cells 3-3.5 million cells / ml).

Пример 3. Опыт провод т в соответствии с примерами 1 и 2,но в питательную среду внос т 250 мг/л индолилук- усной или гибберелловой кислоты. В этих услови х количество клеток лейкоцитов при использовании питательной среды с индолилуксусной или гибберелловой кислотой составл етExample 3. The experiment was carried out in accordance with examples 1 and 2, but 250 mg / l of indolyl-acetic or gibberellic acid was introduced into the nutrient medium. Under these conditions, the number of leukocyte cells when using nutrient medium with indolylacetic or gibberellic acid is

соответственно 5,33-5,41-10 и5.33-5.41-10 and

5 five

00

4four

6,10-6,34-10 кл/мл по сравнению с контролем 3,50-4,10 -10 6 кл/мл (при посевной дозе клеток 3-3,5 млн кл/мл). i6.10-6.34-10 cells / ml as compared with the control 3.50-4.10 -10 6 cells / ml (with a seeding dose of cells of 3-3.5 million cells / ml). i

Способ позвол ет значительно повысить стимул цию роста клеток лейкоцитов свиньи на питательной среде с применением фитогормонов. Количество клеток культуры при добавлении фитогормонов увеличиваетс в 6-8 раз. Стимулирование роста клеток некоторых очень важных клеток животного организма может быть использовано также в диагностических исследовани х .The method allows to significantly increase the stimulation of the growth of porcine leukocyte cells on a nutrient medium using phytohormones. The number of cultured cells with the addition of phytohormones increases 6-8 times. Stimulating the growth of cells of some very important cells of the animal organism can also be used in diagnostic studies.

Claims

Invention Formula

The method of cultivation of porcine leukocytes, including seeding cell suspension on nutrient medium with the addition of cattle serum and subsequent incubation of the cultures to form a monolayer, characterized in that, in order to increase the yield of the target product, indolyl acetic acid or giberellic acid is added to the cultured medium concentrations of 20-250 mg / l of medium.

Compiled by A.Manykin

Proofreader A. Obruchar

Editor N.Rogulich Tehred L. Serdgakova

fffl mf,. “.-„ ..-, .Ts.-, “- -., .- ... -..-., -,, .-,

, - - ... - ".--" .- - - - .- -. - - “-

Order 1830 Circulation 484 Subscription

VNIIPI State Committee for Inventions and Discoveries at the State Committee on Science and Technology of the USSR 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk nab. 4/5

Proofreader A. Obruchar