SU1509403A1 - Способ получени слюны иксодовых клещей - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской паразитологии, в частности к вопросам изучени  процессов слюноотделени  у переносчиков болезней /клещей/, осуществл ющих передачу вирусов со слюной при укусе человека. Целью изобретени   вл етс  отдельное получение двух фракций слюны. Дл  достижени  цели провод т инъекцию секретотропных веществ и сбор слюны, причем используют голодных клещей, в качестве секретотропных веществ примен ют 10 мм раствор допамина и 10%-ный раствор пилокарпина, которые ввод т соответственно в количестве 0,2-0,6 и 0,2-0,4 мл на особь.

Description

Изобретение относитс  к биологии и медицине, а именно к медицинской паразитологии и энтомологии, к способам управлени  слюноотделением у переносчиков болезней человека и животных , осуществл ющих передачу возбудителей со слюной при укусе.

Целью изобретени   вл етс  получение двух фракций слюны клещей.

Указанна  цель достигаетс  тем, что используют живых голодных йксодо- вых клещей, гипостом которых ввод т в последовательно смен емые сухие капилл ры после перентерального введени  секретотропных веществ.

Дл  получени  разных фракций клещу с гипостомом, вставленным в капил л р, ввод т адрензнергетик - допамин 10 мМ раствор в количестве О,2-0,6 мл на особь и получают жидкую слюну, затем капилл р замен ют и ввод т хо- линэнергетик - пилокарпин 10%-ный раствор в количестве 0,2-0,4 мл на

особь - получают цемент. Каждую из фракций исследутЬт на наличие вируса путем титровани  на сосунках белых мышей о

Пример 1. Получение фракций слюны от клещей Hgalomna anatolicum.

Самок клещей Hgalonina anatolicum, полученных из неочаговой по клещевому энцефалиту территории в виде нимф, заражают парентерально вирусом клещевого энцефалита и затем содержат в. термостате при 37 С в течение 7 дней, через 7-8 дней содержани  при комнатной температуре фиксируют на спине на стержне, конец которого обернут липким пластырем. Параллельно телу клеща наносит две капли парафина дл  фиксации конечностей. Затем под контролем бинокул ра гипостом ввоДйт в сухой капилл р (отт нутую пасте- ровскую пипетку) с внутренним диаметром , равным диаметру гипостома самки.

ел

&0

В сочленение вертлуга и коксы IV пары конечностей стекл нной микроиглой , изготовленной на микрокузнице аппарата Фонбрюна и закрепленной на металлической игле микродозатора на 10 мкл, ввод т 0,2-0,4 мп 10 мМ- раствора допамина, и после начала слюноотделени  или через 5-10 мин еще 0,2-0,4 мп . 100 М раствора гамма-амин омас л  ной кислоты - синергис- та допамина.

Сменив капилл р, ввод т 0,2- 0., 4 мл 10%-ного раствора пилокарпина .

Полученную в капилл р порцию слюны вместе с кончиком капилл ра растирают в ступке с 0,8 мл стерильного физиологического раствора, отцентдержит . Под вли нием пилокарпина получают вьщеление цементной фракции слюны, твердеющей на воздухе и в

капле дистилли1)ованной воды. В це ментной фракции слюны у всех оказавшихс  зараженными самок клещей Hgalonma anatolicum содержитс  вирус клещевого энцефалита, причем в максимальных - по сравнению с другими экспериментами - до 2,2 Ig в 0,03 МП. В некоторых опытах у одной и той же особи Н. anatolicum в жидкой спонтанно вьщелившейс  порции

слюны, вирус обнаружить не удаетс , тогда как в цементной фракции он присутствует

, Таким образом, показано, что уже первые порции слюны, вводимые в самом

рифугированную от стекла надосадочную 20 начале питани  как в кровь и Лимфу

позвоночного (жидка  фракци  слюны) так и контактирующие с живым слоем кожи (цементна  пробка), мргут со- держать вирус в достаточных дл  начала репродукции количествах и пото му представл ющих опасность дл  нач ла заболевани .

жидкость ввод т по общеприн той ме- toдикe в мозг сосункам белых мышей дл  определени  наличи  и титра возбудител , в данном случае - вируса клещевого знцефалита, в разных порци х слюны.

Пример 2. Получение слюны и определение вируса в ней от клещей Dennacentor marginatus.

Полученных из природы неэаражен- ных самок Dermacentor marginatus 2-3 и 3-го физиологического возраста заражают парентерально вирусом. Через 20 дней каждой самке описанным способом ввод т 0,4-0,6 МП допамина. Во всех случа х как в опыте (13 самок ) , так и в контроле (9 самок) Получают слюну, среднее количество которой составл ет 0,17 мп. В 5 случа х из 10 исследованных проб вьще- л ют вирус с титром 0,1 Ig LDj в 0,03 МП.

Проведенные опыты показывают, что под вли нием допамина и гамма- аминомасл ной кислоты голодными клещами вьщел етс  жидка  фракци  слюны , в которой затем устанавливают наличие вируса клещевого энцефалита (показано на клещах Ixodes persulca- tus и Dermacentor marginatus - самках и Ixodes ricinus - самцах). Под вли нием введени  гамма-аминомасл - ной кислоты также получают жидкую слюну от Hgalomma anatolicum, котора  так же, как и спонтанно выдел ема  под вли нием механического раздражени  капилл ром жидка  слюна, вируса в обнаруживаемых количествах в болыоинстве случаев не соначале питани  как в кровь и Лимфу

позвоночного (жидка  фракци  слюны), так и контактирующие с живым слоем кожи (цементна  пробка), мргут со- . держать вирус в достаточных дл  начала репродукции количествах и потому представл ющих опасность дл  начала заболевани .

Предлагаемый способ позвол ет получить различные фракции слюны голодных клещей.

Получение фракций слюны позвол ет не только обнаруживать наличие возбудител  в них, но и осветить р д не сных эпидемиологических и эпизо- отологических  влений, св занных с диспропорцией между числом обнарз жи- ваемых присосавшихс  клещей и р ов- нем иммунной прослойки у людей и животных . В первом случае это св зано с неучитываемым количеством кратковременно присасывающихс  самцов ик- содид, в жидкой слюне которых в значительном количестве присутствует вирус, во втором с тем, что грызуны уничтожающие (скусьшак ци1е, счесывающие ) присосавшихс  клещей (личинок и нимф), оставл ют в коже цементные пробки, которые, как показано, могут содержать вирус. То же  вление может наблюдатьс  и у людей даже при извлечении присосавшихс  клещей.

Claims (1)

1. Формула изобре-ч-е. ни 

   Способ получени  слюны иксодовьк клещей, включакищй ин: екцию секрете- тропных веществ и сбор слюны, о, т - личающийс  тем, что, с

   5 .15094036

   целью отдельного получени  двух фрак- мина и 10%-ный раствор пилокарпина, ций слюны, используют голодных кле-которые ввод т соответственно в кощей , в качестве секретотропных ве-личестве 0,2-d ,6 и 0,2-0,4 мл на

   ществ примен ют 10 мМ раствор допа-особь.