SU1508168A1

SU1508168A1 - Способ вы влени нестабильного гемоглобина в крови

Info

Publication number: SU1508168A1
Application number: SU874253420A
Authority: SU
Inventors: Татьяна Павловна Молчанова
Original assignee: Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови
Priority date: 1987-05-29
Filing date: 1987-05-29
Publication date: 1989-09-15

Abstract

Изобретение относитс к экспериментальной медицине, гематологии, а именно к способам вы влени нестабильного гемоглобина в крови. Целью изобретени вл етс упрощение способа. Берут кровь из пальца в количестве 0,1-0,2 мл капилл ром, предварительно смоченным гепарином, отстаивают, плазму удал ют. Гемолизат не готов т, а дл анализа используют эритроциты, которые в количестве 0,01-0,02 мл добавл ют к 2,5-3 мл приготовленной за 30 мин до анализа и тщательно перемешанной смеси 6,5-5,5% н-бутанола в 0,1 М натрий-фосфатном буфере, содержащем 10^-3М NA₂ этилен диамино-тетрацксусной кислоты с PH 7,4 при 18-25°С. Суспензию эритроцитов в смеси осторожно перемешивают. Через 3±1 мин эритроциты донора и пациента раствор ютс в этой смеси, и суспензи становитс прозрачной. Оба раствора - контрольный и исследуемый-инкубируют при температуре 18-25°С. Через 5-60 мин раствор эритроцитов носител нестабильного Нв мутнеет, а контроль остаетс прозрачным. Помутнение раствора регистрируют визуально или путем измерени оптической плотности при 700±5 нм. Установлена обратна зависимость между температурой и объемной концентрацией н-бутанола в фосфатном буфере.

Description

1

(21)4253420/28-14

(22)29.05.87

(46) 15.09.89. Бюл. № 34

(71)Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливани крови

(72)Т.П. Молчанова

(53)612.015X088.8)

(56)Carrell R.W. and Kay R. Simple Method for the detection of unstable haemoglobin. - But. Y. Haematology,

1972, V. 25, p. 615-629.

(54)СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ НЕСТАБИЛЬНОГО ГЕМОГЛОБИНА В КРОВИ

(57)Изобретение относитс к экспериментальной медицине, гематологии, а именно к способам вы влени нестабильного гемоглобина в крови. Целью изоб- ретенил вл етс упрощение способа. Берут кровь из пальца в количестве

0,1-0,2 мл капилл ром, предварительно смоченным гепарином, отстаивают, плазму удал ют. Гемолизат не готов т, а дл анализа используют эритроциты, которые в количестве 0,01-0,02 мл добавл ют к 2,5-3 мл приготовлен ой за 30 мин до анализа и тщательно перемешанной смеси 6,5-5,5% н-бутанола в 0,1 М натрий-фосфатном буфере, содержащем 10 МНа2 ЭДТАс рН 7,4 при 18-25 0. Суспензию эритроцитов в смеси осторожно перемешивают. Через 3±1 мин эритроциты донора и пациента раствор ютс в этой смеси, и суспензи становитс прозрачной. Оба раствора - контрольный и исследуемый - инкубируют при 18-25°С. Через 5-60 мин раствор эритроцитов носител нестабильного Нв мутнеет, а контроль остаетс прозрачным . Помутнение раствора регистрируют визуально или путем измерени оптической плотности при 700±5 нм. Установлена обратна зависимость между температурой и объемной концентрацией н-бутанола в фосфатном буфере.

§ .

(П

Изобретение относитс к экспериментальной медицине, к гематологии, а именно к диагностике, гемоглобинопатии , обусловленных носительством мутантных нестабильных гемоглобинов (Нв).

Цель изобретени - упрощение способа .

Цель достигаетс тем, что непосредственно эритроциты крови донора и пациента , вз той из пальца, суспензируют в специально приготовленной смеси нормального бутилового спирта - н-бу- танола с фосфатным буфером при 1825 С с получением прозрачного раствора . Наличие в крови нестабильного Нв регистрируют по помутнению раствора через 5-60 мин по сравнению с прозрачным контролем.

Способ осуществл етс следующим образом.

Дл ,исследовани кровь берут из пальца в количестве О,1-0,2 мл капилл ром , предварительно смоченным гепарином . Затем кровь отстаивают в течение 30-60 мин, плазму удал ют. Дл анализа используют эритроциты. Эритроциты в количестве 0,01-0,02 мл

3150

добавл ют к 2,5-3 мл приготовленной за 30 мин до анализа и тщательно перемешанной смеси 6,5-5,5% н-бутанола в О,I М натрий-фосфатном буфере, содержащем 10 М натриевой соли этилен- диаминотетрауксусной кислоты (Naj, ЭДТА) с рН 7,4 при 18-25°С. Суспензию эритроцитов в смеси осторожно переме- щивают палочкой или покачива пробирку рукой. Через 3-1 мин эритроциты донора и пациента раствор ютс в этой смеси и суспензи становитс прозрачной . Оба раствора - контрольный и исследуемый инкубируют при 18-25 С 30 мин. Через 5-60 мин раствор эритроцитов носител нестабильного Нв мутнеет, а контроль остаетс прозрачным . Помутнение раствора регистрируют визуально или путем измерени рассе ни растворов без предварительного центрифугировани при 700-f5 нм на спектрофотометре.

Установлена обратна зависимость между температурой и объемной концентрацией н-бутанола в фосфатном буфере. Дл различных интервалов температур составлена таблица, которой следует руководствоватьс при выборе условий вы влени нестабильного Нв в крови предложенным способом.

Пример 1 . Больна Б (Московска городска детска клиническа

больница № 1, истори болезни № 9143) ,, Из пальца берут 0,15 мл крови гемато- страдает врожденной гемолитической критным капилл ром. Кровь отстаивают 60 мин, плазму удал ют капилл ром. 0,02 мл эритроцитов больной добавл анемией и цианозом. Из пальца берут 0,1 мл крови гематокритным капилл ром . Отстаивают, через 30 мин плазму

удал ют капилл ром. 0,01 мл эритроци- Q товленной и тщательно перемешанной тов больной добавл ют при 20°С к 2,5 мл за 30 мин приготовленной и тщательно перемешанной смеси 6,5% н-бутанола в 0,01 М натрий-фосфатном буфере , содержащем Ю М рН ремешивают путем покачивани пробир- 7,4. Аналогичным образом готов т кон- ки рукой. Через 3 мин суспензии эрит- троль. Смеси осторожно перемешивают путем покачивани пробирки рукой. Через 4 мин суспензии эритроцитов стают при 25 С к 3 мл за 30 мин пригосмеси 5,5% по н-бутанола в 0,1 М натрий-фосфатном буфере, содержащем 10 М Nag SflTA с рН 7,4. Аналогичным образом готов т контроль. Смеси осторожно пероцитов станов тс прозрачными. Оба раствора инкубируют 60 мин при 25 С. Раствор эритроцитов больной через 60 мин мутнеет, а контроль остаетс прозрачным. После регистрации оптических плотностей при 700 нм на спектрофотометре Спекорд получают следующие показани : контроль 0,035 опт.ед,, больна - 0,93 опт.ед, У больной диагносцировано носительство нестабильного Нв.

ли прозрачными. Оба раствора инкубируют при . Через 5 мин раствор эритроцитов больной мутнеет, а контроль остаетс прозрачным. После регистрации оптических плотностей растворов на спектрофотометре Спекорд пр и 700 нм получают следующие показани : контроль 0,03 опт.ед., больна 0,7 опт.ед. У больной диагносцировано носи тельство нестабильного Нв

Пример 2. Больна Р (ЦНИИ гематологии и переливани крови МЗ СССР, истори болезни № 299) страдает наследственной гемолитической анемией . Из пальца берут 0,1 мл крови капилл ром , предварительно смоченным гепарином. Кровь отстаивают 45 мин, плазму удал ют капилл ром. 0,015 мл эритроцитов больной добавл ют при 23 С к 3 мл за 30 мин приготовленной и тщательно перемещанной смеси 6,0% н-бутанола в 0,1 Ы натрий-фосфатном буфере, содержащем с

рН 7,4. Аналогичным образом готов т контроль. Смеси осторожно перемешивают стекл нной палочкой. Через 3 мин обе суспензии эритроцитов станов тс прозрачными. Инкубируют при 23 С. Через 15 мин раствор эритроцитов значительно мутнеет, а контроль остаетс прозрачным. После регистрации оптических Плотностей растворов при 702 нм на спектрофотометре Спекорд

получают следующие показани : контроль 0,02 опт.ед., больна 1,4 опт. ед. У больной диагносцировано носи- тельство нестабильного Нв.

Пример 3. Больна Ш (Московска городска детска клиническа больница № 1, истори болезни № 17462) имеет жалобы на повьпиенную утомл емость , периодические.головные боли.

ют при 25 С к 3 мл за 30 мин приготовленной и тщательно перемешанной ремешивают путем покачивани пробир- ки рукой. Через 3 мин суспензии эрит-

смеси 5,5% по н-бутанола в 0,1 М натрий-фосфатном буфере, содержащем 10 М Nag SflTA с рН 7,4. Аналогичным образом готов т контроль. Смеси осторожно петовленной и тщательно перемешанной ремешивают путем покачивани пробир- ки рукой. Через 3 мин суспензии эрит-

роцитов станов тс прозрачными. Оба раствора инкубируют 60 мин при 25 С. Раствор эритроцитов больной через 60 мин мутнеет, а контроль остаетс прозрачным. После регистрации оптических плотностей при 700 нм на спектрофотометре Спекорд получают следующие показани : контроль 0,035 опт.ед,, больна - 0,93 опт.ед, У больной диагносцировано носительство нестабильного Нв.

Упрощение способа вы влени нестабильного Нв позвол ет: проводить ана51508

ЛИЗ на микроуровне - на крови объемом- 0,1-0,2 мл, вз той из пальца; сократить стадии приготовлени гемолиза- та, термостатироваии и прецизионных спектральных измерений, которые дли- тельны и требуют использовани специального оборудовани . Введенные упрощени позвол ют не только детектировать нестабильные Нв у гематолог гических больных, но и проводить массовые профилактические и попул - ционные обследовани населе - ни .

686

Claims

Формула изобретени

Способ вы влени нестабильного гемоглобина в крови, включающий вз тие крови, получение эритроцитов и последующую обработку пробы органическим растворителем с последующей регистрацией оптической плотности пробы , отличающийс тем, что, с целью упрощени способа, пробу эритроцитов инкубируют 30 мин при 18-25 С в смеси, состо щей из 6,5- 5,5% н-бутанола в 0,1 М натрий-фосфатном буфере, при рН 7,4, содержащем 10 М этилендиаминтетраацетат натри .