SU1467515A1 - Method of analyzing condition of b-system of immunity - Google Patents
Method of analyzing condition of b-system of immunity Download PDFInfo
- Publication number
- SU1467515A1 SU1467515A1 SU874205408A SU4205408A SU1467515A1 SU 1467515 A1 SU1467515 A1 SU 1467515A1 SU 874205408 A SU874205408 A SU 874205408A SU 4205408 A SU4205408 A SU 4205408A SU 1467515 A1 SU1467515 A1 SU 1467515A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- immunity
- ldh
- activity
- state
- activation
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к иммунологическим методам исследовани и может быть использовано дл вы влени активации В-системы иммунитета. Цель изобретени - повьпление точности способа . Дл оценки состо ни В-системы иммунитета определ ют изоэнзимный спектр лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в В-лимфоцитах периферической крови и по коэффициенту соотношени величин активности ЛДГ,: ЛДГ, (Кс) суд т о состо нии В-системы. Значение коэффициента выше 1,45 свидетельствует об активации- В-системы иммунитета. Положительный эффект предлагаемого способа заключаетс в его большей точности по сравнению с известным, использу который, не всегда удаетс вы вить активацию В-системы, т.к. противоположна направленность изменений активности изоэнзимов может не привести к изменени м общей активности лактатдегидрогеназы. с $ (ЛThe invention relates to immunological research methods and can be used to detect the activation of the B-system of immunity. The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method. To assess the state of the B-system of immunity, the isoenzyme spectrum of lactate dehydrogenase (LDH) in B-lymphocytes of peripheral blood is determined and the ratio of the values of LDH activity: LDH (Cc) is judged on the state of the B-system. The value of the coefficient above 1.45 indicates activation of the B-system of immunity. The positive effect of the proposed method lies in its greater accuracy in comparison with the known method, using which, it is not always possible to determine the activation of the B-system, since the opposite direction of changes in the activity of isoenzymes may not lead to changes in the overall activity of lactate dehydrogenase. with $ (L
Description
1one
Изобретение относитс к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено дл вы влени активации В-системы иммунитета.The invention relates to medicine, in particular to immunology, and is intended to detect the activation of the B-system of immunity.
Цель изобретени - повышение точности способа определени состо ни В-системы иммунитета.The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method for determining the state of the B-system of immunity.
Способ осуществл ют следующим образом .The method is carried out as follows.
Лимфоциты периферической крови выдел ют в градиенте плотности фиколл- верографина. Общую попул цию лимфоцитов раздел ют на Т- и В-фракции любым из прин тых в лаборатории методов розеткоббразовани или сепарацией на нейлоновой вате. Полученные В-клет- кй довод т изотоническим раствором хлористого натри до концентрации I lO в 1 мл. Клетки разрушают по методу , прин тому в лаборатории, например замораживанием - оттаиванием. Дл разделени изоэнзимов лактатдегид-. рогеназы (ЛДГ) в В-клетках используют метод энзимов электрофореза в поли- акриламидном геле. Активность изоэнзимов ЛДГ оценивают денситометрически, После чего высчитывают коэффициент соотношени величин активности ДЦГ j- (К) путем делени величины активности ЛДГ, на величину активности .Peripheral blood lymphocytes are isolated in a ficoll-verografenn density gradient. The total lymphocyte population is divided into T- and B-fractions by any of the laboratory-approved methods of rosetting or separation by nylon wool. The B-cells obtained are adjusted with an isotonic solution of sodium chloride to a concentration of I lO in 1 ml. Cells are destroyed according to the method adopted in the laboratory, for example, by freezing - thawing. For the separation of lactate dehydrate isoenzymes. rogenase (LDH) in B-cells use the method of enzymes of polyacrylamide gel electrophoresis. The activity of LDH isoenzymes is estimated densitometrically. Then the ratio of the values of the activity of DSH j- (K) is calculated by dividing the amount of activity of LDH by the amount of activity.
Пример . Донор А. проиммуни- зирован к резус-антигену, титр резус- антител 1:512. Из локтевой вены вз то 20 мл крови на консерванте.An example. Donor A. is immunized to the Rh antigen, the rhesus antibody titer is 1: 512. 20 ml of blood was taken from the ulnar vein on a preservative.
Кровь осторожно наслаивают на смесь фиколл-верографин и центрифугируют 30 мин при 1500 об/мин. Образо3-1А6The blood is carefully layered on the ficoll-urografin mixture and centrifuged for 30 minutes at 1500 rpm. Pattern 3-1A6
вавшеес кольцо лимфоцитов осторожно собирают пипеткой в центрифужную пробирку и отмывают дважды раствором Хэнкса по 10 мин при 1500 об/мин. - Осадок лимфоцитов ресуспендируют в среде 199, содержащей 5% инактивиро- ванной тел чьей сыворотки, довод концентрацию лимфоцитов до 8 - () 10 в 1 мл. Количество лимфоцитов определ ют путем подсчета под микроскопом в камере Гор ева. Разделение лимфоцитов на Т- и В-попул цию провод т на колонках с нейлоновой ватой. В-лимфоциты разрушают путем 10-крат- кого замораживани (-20°С) и оттаивани (18-20 с).A wrinkled lymphocyte ring is carefully pipetted into a centrifuge tube and washed twice with Hanks solution for 10 min at 1500 rpm. - The lymphocyte sediment is resuspended in medium 199 containing 5% inactivated calf serum, bringing the concentration of lymphocytes to 8 - () 10 in 1 ml. The number of lymphocytes is determined by counting under a microscope in the Gorev chamber. The separation of lymphocytes into T- and B-populations is carried out on nylon wool columns. B-lymphocytes are destroyed by 10-fold freezing (-20 ° C) and thawing (18-20 s).
Электрофорез изоферментов ЛДГ в полиакриламидном геле провод т на аппарате дл вертрпсапьного гель-элек- трофореза. Исследуемую взвесь разру-. шенных лимфоцитов в количествеElectrophoresis of LDH isoenzymes in polyacrylamide gel is carried out on an apparatus for vertical gel electrophoresis. Investigated suspension disruption. number of lymphocytes
0,1 мл нанос т в трубочки, заполненные гелем. Сверху осторожно наслаивают трис-буфер, трубочки закрепл ют в катодной камере аппарата. В катодную и анодную камеры заливают по 1 л трис-буфера (рН 8,3). Продолжительность электрофореза 2 ч в холо- - дильнике (4-8°С). Извлечение гел провод т .в кювете с водой под давлением из шприца. Гель промывают водой, помещают в пробирки и заливают краской , прогретой до 37°С.0.1 ml is applied to the tubes filled with gel. Tris buffer is carefully layered on top, the tubes are fixed in the cathode chamber of the apparatus. In the cathode and anode chambers pour 1 liter of Tris buffer (pH 8.3). Duration of electrophoresis for 2 hours in the refrigerator (4-8 ° С). Removing the gel is carried out in a pressurized cuvette from a syringe. The gel is washed with water, placed in test tubes and filled with paint, heated to 37 ° C.
Состав краски: Li - лактат (288 мг в 3 мл ), НАД (45 г в 1,5 мл ), NaCi (0,1 М - 3 мл), MgCli (0,1 М - 3 мл), фосфатный буфер (рН 7,4-7,5), нитротетразолевый синий (15 мг в 4 мл ) и непосредственно перед заливкой добавл ют ФМС (феназинметасульфат) (1%-ныл раствор - 0,75 мл). Пробирки став т в термостат и выдерживают дл Paint composition: Li - lactate (288 mg in 3 ml), NAD (45 g in 1.5 ml), NaCi (0.1 M - 3 ml), MgCli (0.1 M - 3 ml), phosphate buffer ( pH 7.4-7.5), nitrotetrazole blue (15 mg in 4 ml) and FMS (phenazine metasulfate) was added just before pouring (1% solution - 0.75 ml). The tubes are placed in a thermostat and kept for
0 0
5five
00
5 0 50
15 -415 -4
развити окраски в течение 1 ч при 37 С. После окрашивани изоферментных фракций гель промывают водой и заливают 7%-ным раствором уксусной кислоты . Активность изоферментных фракций определ ют денситометрически. У донора А, величина активности ЛДГ,30,85%, ЛДГа 12,77%, ЛДГз 46,81%, Д1и 5, 32%, ЩГ 4,26%. Высчитывают коэффициент соотношени ЛДГ,: , кото- .рый составил 7,24. У здоровых лиц Хс равен 1,01+0,44, Следовательно, согласно предлагаемому способу у донора вы влена активаци В-системы иммунитета.develop color for 1 hour at 37 ° C. After staining the isoenzyme fractions, the gel is washed with water and poured with 7% acetic acid solution. The activity of the isozyme fractions is determined densitometrically. In donor A, the level of LDH activity was 30.85%, LDHa 12.77%, LDHs 46.81%, D1i 5, 32%, and AH 4.26%. Calculate the ratio of LDH ,:, which was 7.24. In healthy individuals, Xc is equal to 1.01 + 0.44, Therefore, according to the proposed method, the donor has detected activation of the B-system of immunity.
Положительнь1й эффект предлагаемо го способа состоит в обеспечении большей точности в вы влении активации В-системы иммунитета по сравнению с известным, поскольку увеличение активности одной из фракций изофермента свидетельствует об активации В-системы иммунитета, хот обща активность ЛДГ остаетс без изменений.The positive effect of the proposed method is to provide greater accuracy in detecting the activation of the B-system of immunity compared to the known one, since an increase in the activity of one of the isoenzyme fractions indicates the activation of the B-system of immunity, although the overall LDH activity remains unchanged.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874205408A SU1467515A1 (en) | 1987-03-02 | 1987-03-02 | Method of analyzing condition of b-system of immunity |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU874205408A SU1467515A1 (en) | 1987-03-02 | 1987-03-02 | Method of analyzing condition of b-system of immunity |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1467515A1 true SU1467515A1 (en) | 1989-03-23 |
Family
ID=21289028
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU874205408A SU1467515A1 (en) | 1987-03-02 | 1987-03-02 | Method of analyzing condition of b-system of immunity |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1467515A1 (en) |
-
1987
- 1987-03-02 SU SU874205408A patent/SU1467515A1/en active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Иммунологи ,1983, № 3, 43-46. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lambeth et al. | Purification and properties of rat‐liver‐mitochondrial adenosine triphosphatase | |
Brewer et al. | Disc electrophoresis | |
SU735153A3 (en) | Method of detecting surface antigen of hepatitis | |
Witteveen et al. | Kinetic properties of the isoenzymes of human creatine phosphokinase | |
Soulier et al. | A new method to assay des-γ-carboxyprothrombin: results obtained in 75 cases of hepatocellular carcinoma | |
Lolkema et al. | The transmembrane electrical potential in Rhodopseudomonas sphaeroides determined from the distribution of tetraphenylphosphonium after correction for its binding to cell components | |
US4410660A (en) | Binding assay for the detection of mycobacteria | |
Zalitis et al. | Purification and properties of UDPG dehydrogenase from beef liver | |
Dons et al. | Isolation and characterization of aldose reductase from calf brain | |
US4575484A (en) | Binding assay for the detection of mycobacteria | |
Mercer | Simultaneous separation of serum creatine kinase and lactate dehydrogenase isoenzymes by ion-exchange column chromatography | |
Yasuda et al. | Determination of urea in whole blood using a urea electrode with an immobilised urease membrane | |
SU1467515A1 (en) | Method of analyzing condition of b-system of immunity | |
Goudswaard et al. | Immunochemical determination of human lysozyme by laser nephelometry. | |
Kahan et al. | Immunochemical determination of ß-lipoproteins | |
Foti et al. | Counterimmunoelectrophoresis in determination of prostatic acid phosphatase in human serum. | |
Viallard et al. | Rapid electrophoretic determination of neuron-specific enolase isoenzymes in serum. | |
Girotti et al. | Bioluminescent flow sensors: l‐lactate dehydrogenase activity determination in serum | |
Griffin | Separation and characterization of HeLa alkaline pyrophosphatase isoenzymes | |
Guilbault et al. | Rapid, sensitive, and selective assay for tryptophan in serum | |
Dolník et al. | Determination of oxalate in human serum by multicolumn isotachophoresis | |
YEH et al. | Progression of the proportion of hepatitis B virus precore stop mutant following acute superinfection of hepatitis C | |
Jokl et al. | 2‐Pyridinecarboxylate as counter ion in capillary isotachophoresis of low‐mobility bases | |
CN212275659U (en) | Gamma-glutamyl transpeptidase isozyme II detection kit | |
Loshon et al. | Immunoprecipitation and electrophoresis used to demonstrate and evaluate interference by CK-BB and atypical-CK's with CK-MB determinations by immunoinhibition. |