SU1467515A1 - Method of analyzing condition of b-system of immunity - Google Patents

Method of analyzing condition of b-system of immunity Download PDF

Info

Publication number
SU1467515A1
SU1467515A1 SU874205408A SU4205408A SU1467515A1 SU 1467515 A1 SU1467515 A1 SU 1467515A1 SU 874205408 A SU874205408 A SU 874205408A SU 4205408 A SU4205408 A SU 4205408A SU 1467515 A1 SU1467515 A1 SU 1467515A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
immunity
ldh
activity
state
activation
Prior art date
Application number
SU874205408A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Валерий Ильич Левин
Григорий Павлович Матвейков
Елена Семеновна Калия
Наталья Михайловна Санько
Original Assignee
Белорусский научно-исследовательский институт переливания крови
Минский государственный медицинский институт
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Белорусский научно-исследовательский институт переливания крови, Минский государственный медицинский институт filed Critical Белорусский научно-исследовательский институт переливания крови
Priority to SU874205408A priority Critical patent/SU1467515A1/en
Application granted granted Critical
Publication of SU1467515A1 publication Critical patent/SU1467515A1/en

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относитс  к иммунологическим методам исследовани  и может быть использовано дл  вы влени  активации В-системы иммунитета. Цель изобретени  - повьпление точности способа . Дл  оценки состо ни  В-системы иммунитета определ ют изоэнзимный спектр лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в В-лимфоцитах периферической крови и по коэффициенту соотношени  величин активности ЛДГ,: ЛДГ, (Кс) суд т о состо нии В-системы. Значение коэффициента выше 1,45 свидетельствует об активации- В-системы иммунитета. Положительный эффект предлагаемого способа заключаетс  в его большей точности по сравнению с известным, использу  который, не всегда удаетс  вы вить активацию В-системы, т.к. противоположна  направленность изменений активности изоэнзимов может не привести к изменени м общей активности лактатдегидрогеназы. с $ (ЛThe invention relates to immunological research methods and can be used to detect the activation of the B-system of immunity. The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method. To assess the state of the B-system of immunity, the isoenzyme spectrum of lactate dehydrogenase (LDH) in B-lymphocytes of peripheral blood is determined and the ratio of the values of LDH activity: LDH (Cc) is judged on the state of the B-system. The value of the coefficient above 1.45 indicates activation of the B-system of immunity. The positive effect of the proposed method lies in its greater accuracy in comparison with the known method, using which, it is not always possible to determine the activation of the B-system, since the opposite direction of changes in the activity of isoenzymes may not lead to changes in the overall activity of lactate dehydrogenase. with $ (L

Description

1one

Изобретение относитс  к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено дл  вы влени  активации В-системы иммунитета.The invention relates to medicine, in particular to immunology, and is intended to detect the activation of the B-system of immunity.

Цель изобретени  - повышение точности способа определени  состо ни  В-системы иммунитета.The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method for determining the state of the B-system of immunity.

Способ осуществл ют следующим образом .The method is carried out as follows.

Лимфоциты периферической крови выдел ют в градиенте плотности фиколл- верографина. Общую попул цию лимфоцитов раздел ют на Т- и В-фракции любым из прин тых в лаборатории методов розеткоббразовани  или сепарацией на нейлоновой вате. Полученные В-клет- кй довод т изотоническим раствором хлористого натри  до концентрации I lO в 1 мл. Клетки разрушают по методу , прин тому в лаборатории, например замораживанием - оттаиванием. Дл  разделени  изоэнзимов лактатдегид-. рогеназы (ЛДГ) в В-клетках используют метод энзимов электрофореза в поли- акриламидном геле. Активность изоэнзимов ЛДГ оценивают денситометрически, После чего высчитывают коэффициент соотношени  величин активности ДЦГ j- (К) путем делени  величины активности ЛДГ, на величину активности .Peripheral blood lymphocytes are isolated in a ficoll-verografenn density gradient. The total lymphocyte population is divided into T- and B-fractions by any of the laboratory-approved methods of rosetting or separation by nylon wool. The B-cells obtained are adjusted with an isotonic solution of sodium chloride to a concentration of I lO in 1 ml. Cells are destroyed according to the method adopted in the laboratory, for example, by freezing - thawing. For the separation of lactate dehydrate isoenzymes. rogenase (LDH) in B-cells use the method of enzymes of polyacrylamide gel electrophoresis. The activity of LDH isoenzymes is estimated densitometrically. Then the ratio of the values of the activity of DSH j- (K) is calculated by dividing the amount of activity of LDH by the amount of activity.

Пример . Донор А. проиммуни- зирован к резус-антигену, титр резус- антител 1:512. Из локтевой вены вз то 20 мл крови на консерванте.An example. Donor A. is immunized to the Rh antigen, the rhesus antibody titer is 1: 512. 20 ml of blood was taken from the ulnar vein on a preservative.

Кровь осторожно наслаивают на смесь фиколл-верографин и центрифугируют 30 мин при 1500 об/мин. Образо3-1А6The blood is carefully layered on the ficoll-urografin mixture and centrifuged for 30 minutes at 1500 rpm. Pattern 3-1A6

вавшеес  кольцо лимфоцитов осторожно собирают пипеткой в центрифужную пробирку и отмывают дважды раствором Хэнкса по 10 мин при 1500 об/мин. - Осадок лимфоцитов ресуспендируют в среде 199, содержащей 5% инактивиро- ванной тел чьей сыворотки, довод  концентрацию лимфоцитов до 8 - () 10 в 1 мл. Количество лимфоцитов определ ют путем подсчета под микроскопом в камере Гор ева. Разделение лимфоцитов на Т- и В-попул цию провод т на колонках с нейлоновой ватой. В-лимфоциты разрушают путем 10-крат- кого замораживани  (-20°С) и оттаивани  (18-20 с).A wrinkled lymphocyte ring is carefully pipetted into a centrifuge tube and washed twice with Hanks solution for 10 min at 1500 rpm. - The lymphocyte sediment is resuspended in medium 199 containing 5% inactivated calf serum, bringing the concentration of lymphocytes to 8 - () 10 in 1 ml. The number of lymphocytes is determined by counting under a microscope in the Gorev chamber. The separation of lymphocytes into T- and B-populations is carried out on nylon wool columns. B-lymphocytes are destroyed by 10-fold freezing (-20 ° C) and thawing (18-20 s).

Электрофорез изоферментов ЛДГ в полиакриламидном геле провод т на аппарате дл  вертрпсапьного гель-элек- трофореза. Исследуемую взвесь разру-. шенных лимфоцитов в количествеElectrophoresis of LDH isoenzymes in polyacrylamide gel is carried out on an apparatus for vertical gel electrophoresis. Investigated suspension disruption. number of lymphocytes

0,1 мл нанос т в трубочки, заполненные гелем. Сверху осторожно наслаивают трис-буфер, трубочки закрепл ют в катодной камере аппарата. В катодную и анодную камеры заливают по 1 л трис-буфера (рН 8,3). Продолжительность электрофореза 2 ч в холо- - дильнике (4-8°С). Извлечение гел  провод т .в кювете с водой под давлением из шприца. Гель промывают водой, помещают в пробирки и заливают краской , прогретой до 37°С.0.1 ml is applied to the tubes filled with gel. Tris buffer is carefully layered on top, the tubes are fixed in the cathode chamber of the apparatus. In the cathode and anode chambers pour 1 liter of Tris buffer (pH 8.3). Duration of electrophoresis for 2 hours in the refrigerator (4-8 ° С). Removing the gel is carried out in a pressurized cuvette from a syringe. The gel is washed with water, placed in test tubes and filled with paint, heated to 37 ° C.

Состав краски: Li - лактат (288 мг в 3 мл ), НАД (45 г в 1,5 мл ), NaCi (0,1 М - 3 мл), MgCli (0,1 М - 3 мл), фосфатный буфер (рН 7,4-7,5), нитротетразолевый синий (15 мг в 4 мл ) и непосредственно перед заливкой добавл ют ФМС (феназинметасульфат) (1%-ныл раствор - 0,75 мл). Пробирки став т в термостат и выдерживают дл Paint composition: Li - lactate (288 mg in 3 ml), NAD (45 g in 1.5 ml), NaCi (0.1 M - 3 ml), MgCli (0.1 M - 3 ml), phosphate buffer ( pH 7.4-7.5), nitrotetrazole blue (15 mg in 4 ml) and FMS (phenazine metasulfate) was added just before pouring (1% solution - 0.75 ml). The tubes are placed in a thermostat and kept for

0 0

5five

00

5 0 50

15 -415 -4

развити  окраски в течение 1 ч при 37 С. После окрашивани  изоферментных фракций гель промывают водой и заливают 7%-ным раствором уксусной кислоты . Активность изоферментных фракций определ ют денситометрически. У донора А, величина активности ЛДГ,30,85%, ЛДГа 12,77%, ЛДГз 46,81%, Д1и 5, 32%, ЩГ 4,26%. Высчитывают коэффициент соотношени  ЛДГ,: , кото- .рый составил 7,24. У здоровых лиц Хс равен 1,01+0,44, Следовательно, согласно предлагаемому способу у донора вы влена активаци  В-системы иммунитета.develop color for 1 hour at 37 ° C. After staining the isoenzyme fractions, the gel is washed with water and poured with 7% acetic acid solution. The activity of the isozyme fractions is determined densitometrically. In donor A, the level of LDH activity was 30.85%, LDHa 12.77%, LDHs 46.81%, D1i 5, 32%, and AH 4.26%. Calculate the ratio of LDH ,:, which was 7.24. In healthy individuals, Xc is equal to 1.01 + 0.44, Therefore, according to the proposed method, the donor has detected activation of the B-system of immunity.

Положительнь1й эффект предлагаемо го способа состоит в обеспечении большей точности в вы влении активации В-системы иммунитета по сравнению с известным, поскольку увеличение активности одной из фракций изофермента свидетельствует об активации В-системы иммунитета, хот  обща  активность ЛДГ остаетс  без изменений.The positive effect of the proposed method is to provide greater accuracy in detecting the activation of the B-system of immunity compared to the known one, since an increase in the activity of one of the isoenzyme fractions indicates the activation of the B-system of immunity, although the overall LDH activity remains unchanged.

Claims (1)

Формула изобретени Invention Formula Способ определени  состо ни  В-системы иммунитета путем вы влени  активности лактатдегидрогеназы В-лим- фоцитов, о тличающийс  тем, что, с целью повьшени  точности способа, с помощью электрофореза вы вл ют активность изоферментов лактат- дегидрогеназы ЛДГ,, ДЦГ, ЛДГз, ДДГ-г и ЛДГд, далее устанавливают соотношение между показател ми, максимально различающимис  по электрофоретический подвижности, и при значении коэффи-; циента 1,45 и выше определ ют активированное состо ние В-системы иммунитета .The method of determining the state of the B-system of immunity by detecting the activity of lactate dehydrogenase of B-lymphocytes, is characterized by the fact that, in order to increase the accuracy of the method, electrophoresis reveals the activity of lactate-dehydrogenase isoenzymes LDH, DTG, LDH, DGD -d and LDGd, further establish the ratio between the indicators most different in electrophoretic mobility, and at the value of the coefficient; 1.45 and above, the activated state of the B-system of immunity is determined. Редактор Н.ТупицаEditor N. Tupitsa Составитель М.ГубаревCompiled by M.Gubarev Техред И. Be рее- Корректор Л. ПилипенкоTehred I. Be re-Corrector L. Pilipenko Заказ S192/43Order S192 / 43 Тираж 788Circulation 788 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретени м и открыти м при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушска  наб., д. 4/5VNIIPI State Committee for Inventions and Discoveries at the State Committee on Science and Technology of the USSR 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk nab. 4/5 ПодписноеSubscription
SU874205408A 1987-03-02 1987-03-02 Method of analyzing condition of b-system of immunity SU1467515A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874205408A SU1467515A1 (en) 1987-03-02 1987-03-02 Method of analyzing condition of b-system of immunity

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874205408A SU1467515A1 (en) 1987-03-02 1987-03-02 Method of analyzing condition of b-system of immunity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1467515A1 true SU1467515A1 (en) 1989-03-23

Family

ID=21289028

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU874205408A SU1467515A1 (en) 1987-03-02 1987-03-02 Method of analyzing condition of b-system of immunity

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU1467515A1 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Иммунологи ,1983, № 3, 43-46. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lambeth et al. Purification and properties of rat‐liver‐mitochondrial adenosine triphosphatase
Brewer et al. Disc electrophoresis
SU735153A3 (en) Method of detecting surface antigen of hepatitis
Witteveen et al. Kinetic properties of the isoenzymes of human creatine phosphokinase
Soulier et al. A new method to assay des-γ-carboxyprothrombin: results obtained in 75 cases of hepatocellular carcinoma
Lolkema et al. The transmembrane electrical potential in Rhodopseudomonas sphaeroides determined from the distribution of tetraphenylphosphonium after correction for its binding to cell components
US4410660A (en) Binding assay for the detection of mycobacteria
Zalitis et al. Purification and properties of UDPG dehydrogenase from beef liver
Dons et al. Isolation and characterization of aldose reductase from calf brain
US4575484A (en) Binding assay for the detection of mycobacteria
Mercer Simultaneous separation of serum creatine kinase and lactate dehydrogenase isoenzymes by ion-exchange column chromatography
Yasuda et al. Determination of urea in whole blood using a urea electrode with an immobilised urease membrane
SU1467515A1 (en) Method of analyzing condition of b-system of immunity
Goudswaard et al. Immunochemical determination of human lysozyme by laser nephelometry.
Kahan et al. Immunochemical determination of ß-lipoproteins
Foti et al. Counterimmunoelectrophoresis in determination of prostatic acid phosphatase in human serum.
Viallard et al. Rapid electrophoretic determination of neuron-specific enolase isoenzymes in serum.
Girotti et al. Bioluminescent flow sensors: l‐lactate dehydrogenase activity determination in serum
Griffin Separation and characterization of HeLa alkaline pyrophosphatase isoenzymes
Guilbault et al. Rapid, sensitive, and selective assay for tryptophan in serum
Dolník et al. Determination of oxalate in human serum by multicolumn isotachophoresis
YEH et al. Progression of the proportion of hepatitis B virus precore stop mutant following acute superinfection of hepatitis C
Jokl et al. 2‐Pyridinecarboxylate as counter ion in capillary isotachophoresis of low‐mobility bases
CN212275659U (en) Gamma-glutamyl transpeptidase isozyme II detection kit
Loshon et al. Immunoprecipitation and electrophoresis used to demonstrate and evaluate interference by CK-BB and atypical-CK's with CK-MB determinations by immunoinhibition.