SU1458827A1

SU1458827A1 - Способ диагностики вирусных гепатитов

Info

Publication number: SU1458827A1
Application number: SU874193313A
Authority: SU
Inventors: Анатолий Федорович Блюгер; Хацкель Мозусович Векслер; Ольга Юрьевна Сондоре; Наталья Александровна Осна
Original assignee: Рижский Медицинский Институт
Priority date: 1987-02-09
Filing date: 1987-02-09
Publication date: 1989-02-15

Abstract

Изобретение относитс к вирусологии . Цель изобретени - повышение точности диагностики. Суспензию лим- фоцитов внос т в пробирки и в четыре из них добавл ют вирус гепатита А. В следующие 4 пробирки внос т вирус гепатита В. Все пробы став т в термостат . Из каждой группы вынимают по пробирке через 5; 30; 60 и 90 мин, добавл ют раствор акридинового оранжевого , смешивают и нанос т на .предметное стекло. Провод т питофотомет- рическое измерение препарата. При нарастании флюоресценции более 25% в пробе с вирусом гепатита В диагностируют вирусный гепатит В. Способ позвол ет достоверно диагностировать заболевание в стади х разгара и рекон- ралесценции. (Л

Description

1

Изобретение относитс к медицине, касаетс гепатологии, в частности вопросов иммунологической диагностики вирусных гепатитов А (ВГА) и В (ВГВ).

Цель изобретени - повышение точности диагностики вирусных гепатитов.

Способ осуществл ют следующим об- разом.

Из крови выдел ют лимфоцитарную взвесь в градиенте плотностиг фиколл- верографина. Эту взвесь, довод т до концентрации 210 ,кл/мл в растворе Хзнкса (рН 7,2). В 12 пробирок внос т по 100 мкл суспензии лимфоцитов в концентрации 210 кл/мл, в 4 из них добавл ют HAAg в концентрации 20 мкг/мл и в 4 пробирки - HBgAg в концентрации 20 мкг/мл (по белку).

Все пробы став т в термостат при 37 С. По 1 пробирке из каждой группы (контрольные лимфоциты, с HAAg и с HBgAg), вынимают через 5; 30; 60 и 90 мин, добавл ют раствор акридинового оранжевого (концентраци 10 М на ацетатном буфере, рН 4,4), смешивают, через 10 мин нанос т на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и закрепл ют парафином. Цитофотометрические измерени препарата провод т на зондовом цитофотометре при Л е 365 нм и длине волны 530 нм. На каждом препарате флюоресценцию 30-50 клеток измер ют и подсчитывают среднее значение интен-, сивности флюоресценции. Высчитывают нарастание интенсивности флюоресценции в опыте по сравнению с контрол ми и этот показатель используют дл диагностики ВГА и ВГВ.

При нарастании флюоресценции более 25% в пробе с HBgAg диагности у- ют ВГВ, при нарастании флюоресценции более 25% в пробе с HAAg .диагностируют ВГА.

вли нием HBgAg на 2% - отрицательный результат. При использовании предлагаемого способа в пробе с HBsAg (20 мкг/мл) наблюдалось повышение интенсивности флюоресценции

на 25% на 30-й мин инкубации при 37°С; в опытах с HHAg интенсивность флюоресценции не изменилась. При проПримерь Больна А. предъ в- ю ведении способа в нестандартных ус- л ла жалобы на недомогание, ломотулови х (использовании HBgAg в конв суставах, тошноту (в

суставах, тошноту в анамнезе - три мес ца назад внутримышечные инъекции ) . Объективно: желтушность склер и кожи, повьпиение уровн билирубина, АлАТ. Произведено обследование с помощью известного и предлагаемого способов. При применении способа-прототипа наблюдалось торможение прилипани в опытном (обработанном HBgAg) образце лимфоцитов по сравнению с контрольным, которое составл ло 3%, т.е. получен отрицательный результат. При использовании предлагаемого способа при Инкубации лимфоцитов в центрации 2-10 кл/мл в течение 60 мин при 37° С с HBsAs интенсивность флюоресценции акридино.вого оранжевого повысилась на 150%, инкубаци лимфоцитов с HAAg в аналогичных услови х не дала увеличени флюоресценции акридинового оранжевого. Проведение предлагаемого способа с использованием лимфоцитов в концентрации

20

центрации 50 мкг/мл) интенсивность флюоресценции повысилась лишь на 15%. На основании данных, полученных 15 предлагаемым способом, был диагностирован ВГВ. Диагноз был подтвержден тем, что в сыворотке крови встречным нммуноэлектрофорезом.обнаружен HBgAg.

Примерз. Больной Б. предъ вл л жалобы на слабость, тошноту, боли в правом подреберье. Объективно: желтушность склер и кожи, повьш1е- ние билирубина и АлАТ. С помощью спокон- 25 соба-прототипа не представл лось воз- можнь1М у Е-очнить диагноз. .С помощью предлагаемого способа было обнаружено отсутствие изменени интенсивности флюоресценции при обработке лимфоци- 30 тов HBgAg и повышение на 30% св зьта- ни акридинового оранжевого под действием HAAg.

Применение неоптимальных условий (инкубаци лимфоцитов с HAAg и HBgAg

кл/мл позволило вы вить измене- gg в течение 2.мин) позволило вы вить ние интенсивности флюоресценции акри- нарастание интенсивности флюоресценции под вли нием HAAg на 10%, что позволило диагностировать ВГА. Циагноз подтвержден отсутствием HBgAg в сыво- 40 ротке крови при регул рном контроле (каждые О дней) и обнаружением IgM антигенов-антител . (иммуноэнзимный метод, набор фирмы Эббот),

С помощью способа-прототипа в 45 разгаре ВГВ правильный диагноз был поставлен.в 5 из 9 случаев, в рекон- валесценции - .в 3 из 9 случаев. Способ-прототип не позвол ет диагностировать ВГА, поскольку он не адапти- cQ рован к использованию антигена вируса гепатита А.

С помощью предлагаемого способа верный диагноз ВГВ и ВГА в период, разгара и реконвалесценции был .по- gg ставлен у 100% больных. Правильность диагноза ВГА и ВГВ подтверждена кли- нико-беохимическими и иммунологичесдинового оранжевого на 15% при обработке HBgAg и отсутствие изменени под действием HAAg. Таким образом способ позволил диагностировать ВГВ., при этом концентраци лимфоцитов 510 кл/мл оказалась неоптимальным условием постановки реакции.

В сьшоротке крови больной методом встречного иммуноэлектрофореза вы влен HBgAg, чем подтверждена правильность выставленного диагноза, .

П р и м е р 2. Больной П. предъ вл л жалобы на боли в правом подребе- рье, тошноту (в анамнезе - парентеральные вмешательства). Г оспитализи- рован с подозрением на вирусный гепатит . Объективно: желтушность кожных покровов и склер, повышение билирубина и АлАТ.

Обследован с помощью известного и предлагаемого способов. При применении способа-прототипа вы влено торможение прилипани лимфоцитов под

кими .исследовани ми больных на прот жении 1-3 мес заболевани .

58827

на 25% на 30-й мин инкубации при 37°С; в опытах с HHAg интенсивность флюоресценции не изменилась. При прокими .исследовани ми больных на прот жении 1-3 мес заболевани .

51458827

Таким образом, предлагаемый способдополнительно берут пробу с лимфоципозвол ет достоверно диагностироватьтами, добавл ют в нее вирус гепативирусные гепатиты А и В в стади х та А, далее обе пробы инкурируют в

разгара и реконвалесценции,gтечение 5; 30; 60 и 90 мин при 36Формула изобретени 38 С, далее окрашивают раствором акСпособ диагностики вирусных ге-ридинового оранжевого, оцредел ют

патитов, включающий забор у больногоинтенсивность флюоресценции дер и

крови, выделение лимфоцитов, добавле-при нарастании флюоресценции по сравние HBs антигена и инкубирование,юнению с пробами бе антигенов более

отличающийс тем, что, счем на 25% диагностируют соответстцелью повьппени точности способа,венно гепатит А или гепатит В.

Claims

Формула изобретения

Способ диагностики вирусных гепатитов, включающий забор у больного крови, выделение лимфоцитов, добавление HBs антигена и инкубирование, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно берут пробу с лимфоцитами, добавляют в нее вирус гепатита А, далее обе пробы инкубируют в

5 течение 5; 30; 60 и 90 мин при 3638°С, далее окрашивают раствором акридинового оранжевого, оцределяют интенсивность флюоресценции ядер и · при нарастании флюоресценции по срав· 10 нению с пробами бе^ антигенов более чем на 25% диагностируют соответственно гепатит А или гепатит В.