SU1364979A1 - Способ количественного определени дезоксиниваленола в злаках и продуктах их переработки - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к пищевой промышленности и может быть использовано дл  определени  в злаках и продуктах их переработки токсичных з агр знений, в частности деЭоксини- валенола. Цель изобретени  - улучшение селективности и повышение чувствительности анализа. FlaaecKy зерна или муки экстрагируют смесью ацето- нитрил-вода в объемном соотношении 84:16, фильтруют, пробу фильтра подают в хроматографическую колонку и элюируют тем же растворителем. К полученному элюату добавл ют изопропа- нол и упаривают в вакууме. Сухой остаток , растворенный в смеси ацето- нитрил-хлороформ (4:1), нанос т на тех пластину. Затем осуществл ют двухмерное элюирование пробы в системе растворителей: эфир-метанол-вода-бензол в объемном соотношении 88- 92:2,5-3,5:0,4-0,8:2-4 и хлороформ- ацетон-изопропанол-бензол в объемном соотношении 76-82:18-24:9-11:О,8- 1,2:2,5-3,5. Про вл ют хроматограмму 15%-ным спиртовым раствором хлористого алюмини  с последующим нагреванием пластины и УФ-облучением. Дезоксини- валеном идентифицируют по голубой флуоресценции и величине хроматогра- фической подвижности, совпадающей с подвижностью стандарта. (/. С со О5 СО Г)

Description

11

Изобретение относитс  к пищевой промышленности и может быть исполь- товано дл  определени  в злаках и продуктах их переработки опасных загр знителей , в частности один из его наиболее опасных и распространенных представителей этой группы - дезокси ниваленол (ДОН), обладающий высокими токсическими свойствами.

Цель изобретени  - увеличение селективности разделени  и повышение чувствительности анализа.

Способ осуществл етс  следующим образом.

Измельченную навеску зерна или муки экстрагируют смесью ацетонит- рил - вода в объемном соотношении 84:16 при встр хивании в течение 30 мин, фильтруют. Аликвоту фильтрата нанос т на хроматографическую колонку с окисью алюмини  и активированным углем. Колонку промывают порцией смеси ацетонитрила с водой в указанном соотнощении. Элюат удал ют в вакууме, После удалени  основной массы растворител  к остатку добавл ют изопропанол и упаривают в вакууме досуха. Сухой остаток раствор ют в смеси хлороформ - ацетонит- рил (4:1) и нанос т на ТСХ пластину с силикагелем. На ту же пластину нанос т стандарт ДОН. Элюируют пластику в первом направлении в системе эфир - метанол - вода - бензол в соотношении 88-92:2,5-3,5:0,4-0,8: :2-4. По достижении фронтом растворител  карандашной линии, проведенной в 10 см от старта, пластинку извлекают из хроматографической камеры , сушат на воздухе, а затем помещают в систему растворителей хлороформ - ацетон - изопропанол - вода бензол в соотнощении 78-82:18-24:9- 11:0,8-1,2:2,5-3,5. При достижении фронтом растворител  контрольной четы пластинку извлекают из камеры, сшат на воздухе и опрыскивают 15%-ны спиртовым раствором хлористого алю

мини . После нат ревани  пластинки при 100 С в течение 6 мин пластинку рассматривают в длинноволновом УФ- свете. ДОН идентифицируют по голубой флуоресценции и величине хроматографической подвижности, совпадающей с подвиж)юстью стандарта.

Концентрацию ЛОН (мг/кг) в образце- расс чцтывают по формуле

Y, Y.

.m 5000

где Y - объем раствора перед нанесением на ТСХ пластинку, мкл; Yj - объем раствора, нанесенный

на ТСХ пластинку, мкл; m - количество (нг) ДОН в

Y (мкл) раствора, оцененное денситометрическим или визуальным сравнением со стандартом на ТСХ пластинке. Пример 1. Анализ кукурузы на дезоксиниваленол по предлагаемому способу.

Отобранную пробу измельчают в течение 1-2 мин на лабораторной мельнице или в кофемолке. Навеску 25 г измельченного зерна кукурузы помеп;ают в плоскодонную коническую колбу на 250 мл, добавл ют 125 мл смеси ацетонитрила с водой в объемном соотношении 21:4. Встр хивают на аппарате дл  встр хивани  в течение 30 мин. Полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерный цилиндр, отбира  25 мл фильтрата.

В стекл нную хроматографическую колонку с в-нутренним диаметром 10 мм на дно помещают кусочек ваты, насыпают 0,75 г окиси алюмини  и сверху слой активированного уг л  0,75 г, предварительного растертого в ступке . Над слоем угл  помещают кусочек ваты. Приливают в колонку 25 мл экстракта анапизируемой кукурузы, со- ответствующие 5 г исходного образца. Отбирают элюат и, не дава  колонке просохнуть, добавл ют еще 10 мл смеси ацетонитрил - вода в указанном соотношении . Объединенные элюаты фильтруют через бумажный складчатый фильтр в колбу на 50 мл, бумажный фильтр промывают 7 мл изопропилового спирта в ту же колбу. Фильтрат упаривают на ротационном испарителе до объема 5 мл. Добавл ют 15 мл изопропилового спирта и повторно упаривают на ротационном испарителе досуха.Остаток в колбе после упаривани  не должен содержать капель воды.

5В

Остаток в колбе раствор ют в 150 мкл смеси хлороформ - ацетонитрил в объемном соотнощении 4:1 (раствор А) .

3

Пластинку Силуфол размером 15X15 см размечают легкими карандашными лини ми следующим образом. На рассто нии 1,5 см от сторон пластинки провод т две взаимно перпендикул рные линии, кажда  из которых параллельна ближайшей стороне пластинки . В точку пересечени  этих линий (в правом нижнем углу) нанос т с по- мощью микроишрица 15 мкл раствора А. В правом верхнем и левом нижнем угла пластинки на рассто нии 1,5 см от сторон нанос т 2, 3, 4 и 6, 8 мкл стандартного раствора ДОН (концент- рацией 20 нг/мкл) соответственно. Рассто ние между п тнами стандартов 6-8 мм. Пластинку помещают в камеру дл  тех со смесью растворителей зфир - метанол - вода - бензол в объемном соотношении 90:3:0,5:3 и р.азливают ее в первом направлении до достижени  фронтом растворител  карандашной линии, проведенной в 3-х см от верхнего кра  пластинки. Плас- тинку извлекают из камеры и сушат на воздухе 5 мин. Затем развивают пластинку во втором, перпендикул рном, направлении в системе растворителей хлороформ - ацетон - изопропанол - вода - бензол в объемном соотношении 78:22:10:1 :3.

После достижени  фронтом растворител  контрольной линии, проведенной в 3-х см от верхнего кра  пластинки, ее извлекают из камеры и сушат на воздухе 5 мин. Пластинку опрыскивают 15%-ным раствором 6-водного хлорис

,того алюмини  в этиловом спирте, нагревают -6 сушильном шкафу при lOO С в течение 5 мин, затем рассматривают в длинноволновом (365 нм) УФ-свете.

Дезоксиниваленол про вл етс  в виде п тен с синей флуоресценцией. Наличие в экстракте п тен, соответствующих по цвету флуоресценции и хро- матографической подвижности п тнам ДОН, свидетельствует о наличии в анализируемом образце ЛОН. Дл  количественного определени  ДОН провод т флуороденситометрию п тен стандартов и п тна ПОИ в экстракте или сравнивают интенсивность флуоресценции разных количеств стандарта ЛОН с интен- СИВНОСТ1.Ю ei o п тен в образце, при- близит( чык (щенива  количество дез- оксинин.ч. 1е-1И)ча (раО в нанесенных на пллс типку обт.емах растр 1р  Л,

Концентрацию ДОН (мг/кг) в образце рассчитывают по формуле

У

Y.

ID 5000

где Y, Y

m объем раствора А, мкл; объем раствора А, нанесенны на пластинку, мкл; количество ДОН (нг) в объем раствора А (мкл), оцененное денситометрическим сравнением со стандартом на ТСХ пла тинке.

При рассматривании пластинки в УФ-свете обнаруживаетс  п тно с синей флуоресценцией, наход щеес  на пересечении перпендикул ров к направлени м развити  хроматограммы, проведенных через центры п тен стандартов . Провед  денситометрическое определение интенсивности флуоресценции п тен ДОН, определ ют, что п тно экстракта соответствует 110 нг ДОН. Концентраци  ДОН в кукурузе С 0,22 мг/кг.

Таким образом, в 1 кг данного образца кукурузы содержитс  0,22 мг дезоксиниваленола.

Пример 2. Анализ пшеницы на Дезоксиниваленол по предлагаемому способу.

5

0

5

0

5

Анализ провод т аналогично примеру 1. По данным флуороденситометрии п тно экстракта соответствует 432 нг ДОН.

Концентраци  ДОН в пшенице С 0,92 мг/кг.

Таким образом, в 1 кг образца пшеницы содержитс  0,92 мг ДОН.

Пример 3. Анализ кукурузы на Дезоксиниваленол по предлагаемому способу.

К образцу кукурузы добавл ют ДОН на уровне 0,25 мг/кг и осуществл ют анализ аналогично примеру 1. Хрома- тографическую пластинку с нанесенными п тнами стандарта и экстракта элю- ируют в двух направлени х в оцноц, и той же системе растворителей эфир - метанол - вода - бензол в объемном соотношении 90:3:0,5:3. После обработки пластинки хлористым алюминием и нагревани  определ ют содержание ДОН методом флуороденситометрии. П тно токсина частично перекрываетс -с п тном одного из компонентов экстрлкта , флуоресцирующего синим цветом и похожим на п тно ДОН, из-за чего его количественна  оценка затруднена. На десиНтограмме плошади пиков токсина и примеси перекрываютс  приблизительно на 30%,

Таким образом, при использовании одной и той же системы растворителей в двухмерной тех возможно получение ложноположительного вывода о наличии ДОН в образце из-за близких хроматог рафических параметров ДОН в примеси, содержащейс  в экстракте.

Пример А. Анализ кукурузы на дезоксиниваленол по предлагаемому способу.

Анализ осуществл ют аналогично примеру 5, Хроматографическую пластинку элюируют в двух направлени х в одной и той же системе растворителей хлороформ - ацетон - изопропа- нол - вода - бензол в объемном соотношении 78:22:10:1:3. Дальнейшую обработку провод т аналогично примеру 1 и определ ют содержание ДОН с помощью флуороденситометрии. П тно ДОН, содержащегос  в экстракте, перекрываетс  с п тном одного из компонентов экстракта, флуоресцирующего синим .цветом и похожим на п тно ДОН, из-за чего его идентификаци  и количественное определение затруднены. На денситограмме площади пиков токсина и примеси прекрываютс  более, чем на 60%.

Таким образом, при использовании одной из предлагаемых систем растворителей в двух взаимно перпендикул рных направлени х возможно получение ложноположительного результата наличи  ДОН в исследуемом образце из-за близких хроматографических параметров ДОН и флуоресцирующей примеси, содержащейс  в экстракте.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ количественного определени  дезоксинивапенола в злаках и продуктах их переработки, включающий экстракцию образца, очистку его колоночной хроматографией, нанесение пробы образца на тонкослойную пластину с силик гелем, элюирование пробы в системе органических растворителей, идентификацию и количественное определение дезоксиниваленола по флуорес- ценции после обработки пластины про вл ющим агентом, отличающийс  тем, что, с целью улучшени  селективности разделени  и повышени  чувствительности анализа, осуществл ют двухмерное злюирование пробы в системе растворителей: эфир - метанол - вода - бензол в объемном соотношении 88-92:2,5-3,5:О,4-0,8:2-4 и хлороформ - ацетон - изопропанол - вода - бензол в объемном соотношении 76-82:18-24:9-11:0,8-1,2:2,5-3,5,