SU1361152A1 - Сложные моноэфиры 5 @ -андростандиола-3 @ ,17 @ ,про вл ющие противоопухолевую и гормональную активность - Google Patents

Abstract

Сложные моноэфиры 511б-андростан-про вл кщие противоопухолевое и гор- Д1 ола-3р,. 17, общей формулы мональное действие. ее 35

Description

113611

Изобретение относитс  к химическим соединени м, конкретно моноэфи- ам 5е6-андростандиола-3|5, 17|3общей формулы

где R, - OCOCHjCgH NCCHj CH CDj в.

случае, когда R-г- ОН - андро- цит (1а) или ОН , в случае, когда R - OCOCHjCbH NCCHjCH Cl) - стандицил (16),

обладающим противоопухолевым и гормональным действием,

сн.

15

20

Поставленна  цель достигае ноэфирами 5с6-андростандиола-3 общей формулы (I), обладающим воопухолевым и гормональным д ем.

Синтез целевых соединений ствл етс  по следующей схеме

RI

А

Нз pj

(С1СН2СН2) CH/ S Xx-bJ(C Hsla N С

XAJ

1

н

22

Наиболее близким  вл етс  -пГди-(2 хлорэтил)-амино -фенилаце- тат-дигидротестостерон, обладающий противоопухолевой и гормональной активностью .

Цель изобретени  - создание нйвых стероидных производных, обладающих противоопухолевым и го рмональным действием и имеющих преимущества в свойствах перед известными соединени ми той же структуры.

Поставленна  цель достигаетс  мо- ноэфирами 5с6-андростандиола-3р, 17|i общей формулы (I), обладающими противоопухолевым и гормональным действием .

Синтез целевых соединений осуществл етс  по следующей схеме:

AIR,- ОН; RI - -о. II R, О; RZ ОН .

U

Б I R, - -ococH CgH N( ; R-, - -0.

RZ - -0. II R, - -О;

Ч - -О; R - -OCOCH CgH NCCH CH Cl).

В la R, - -ОСОСН СбН М(СН2СН2.С1)2, ;

R-z. - ОН,. 116 R, - ОН,

Rj - -OCOCH Cg H NCCH CH Cl) . Синтез осуществл ют избирательной этерификацией карбонильного произврд- ного 5ог.-андростандиола 3в, 17|5 хлор™ ангидридом (2 хлорэтил)-амино - фенилуксусной кислоты с последующим восстановлением продуктов этерифика- ции боргидридом натри .

Избирательность этерификации определ етс  положением кетогруппы в исходном гормоне, Этерификацию провод т при длительном кип чении реагентов (20-24 ч) в среде бензола в присутствии триэтиламина.

Последующее гидрирование продуктов реакции осуществл ют в обычных услови х - с помощью боргидрида натри  в метаноле с последующим их выделением . Выходы конечных продуктов достигают (I) 95-97%, (II) 65-67% в расчете на исходный продукт стадии восстановлени .

Соединени  представл ют собой аморфные порошки белые с желтоватым оттенком, без четкой температуры плавл ени . Вещества практически не растворимы в воде, растворимы в спирте, бензоле и этилацетате. При длительном хранении на свету приобретают желтую окраску. Структура соединений (1а) и (16) подтверждены данными элементного микроанализа, ИК- и HMR-спектров.

Пример 1, Синтез -(2-хлорэтил)-амино -фенплацетата- -5(/-андростандиола-3№, 17В-андро- цит (1а),

Стади  этерификации.

К взвеси 3,0 г 5о -андростан 3й -ол 17-она в 80 мл безводного бензола при перемешивании прибавл ют 1,12 г (1,53 мл) триэтиламина и 37 хлорангидрида (2-хлорэтил)-- -амино -фенилуксусной кислоты (хло фенацила), Реакционную массу перемешивают при 80°С 20 ч. Бензольный раствор промывают последовательно водой, 10%-ным раствором карбоната натри  и повторно водой,

Бензольньш слой отдел ют, частино упаривают, хроматографируют на лонке с силикагелем (Chemapol &i 40/100) , Элюируют смесью бензол/ ртилацетат 9:1, собирают фракцию, содержащую ЗВ-п (2-xлopэтил)- -амино -фенилацетат-5pi,-андростан- -17-он с Rf около 0,89 в системе бензол/этилацетат 4:1 (Silufol UV 254). Получают 4,22 г вещества в виде аморфного порошка (73,5%) в расчете на исходный гормон.

Вычислено, %: С 67,89; Н 7,84; С1 12,95.

C,H,0,NC1,

Найдено. %: С 67,51; Н 7,91; С1 12,39.

Стадии восстановлени ,

4,2 г ЗВ-п- ди-(2-хлорэтил)- -амино -фенилацетата-5oi-андростан- -17-он смешивают с 90 мл сухого метанола и при-5 С прибавл ют 0,4 г боргидрида натри , перемешивают 1 ч подкисл ют лед ной уксусной кислото до рН 6, раствор упаривают, остаток раствор ют в бензоле, промывают водой и сушат безводным сульфатом натри . Бензол отгон ют. Получают 4,0 г (95,0%) конечного продукта - андроцита с R около 0,72 в системе бензол/этилацетат 4:1,

Вычислено, %: С 67,59; Н 8,25; С1 12,88.

С„Н„Оз С1г

Найдено, %: С 67,90; Н 8,16;

С1 12,95.

1-у -спектр: оц 3410; „ 731; 1160; с-се 730,662 , , 74, 1; С,; 81,9;

18

11,1 М . /1, .

Пример 2, Синтез 17pi-п- (2-хлорэтил)-аминоЗ -фенилацета- (,-андростандиолагЗр, 17 - стан- дицила (16).

Стади  этерификации,

В 200 мл безводного бензола смешивают 10 г 5cf.-андростан-17-ол, 3.

5 0

5

О

Q

5

5

0

5

она (дигидротестостерона) , 12,5 хлорангидрида п-Гди(2-хлорэтил)-амино -фенилуксусной кислоты (хлорфена- цила) и 3,83 г (5,25 мл) триэтилами- на. Реакционную массу перемешивают при 80 С 24 ч. Бензольный раствор промывают последовательно водой, 10%-ным раствором карбоната натри  и оп ть водой. Органический слой отдел ют , высуишвают безводным сульфатом натри . Растворитель отгон ют в вакууме, остаток хроматографируют на колонке, заполненной окисью алюмини  (нейтральна  второй степени активности ), Элюируют бензолом, отбирают фракции, содержащие 17/3-п- ди(2-хлор- этил)-амино -фенил ацетат-5с -анд рос- тан-З-он с Rf 0,87 в системе бензол/этилацетат 4:1, Конечный продукт кристаллизуют из эфира, выход 9,1 г (47,4%) в расчете на исходный гормон, т, пл. 8-100°С.

Стади  восстановлени ,

К взвеси 5,0 г 17S-п- ди(2-хлор- этил )-тамино -фенилаце тата-5л-анд рос- тана-3-она в 200 мл безводного метанола прибавл ют при 20 С 0,5 г бор- гидрида натри  и перемешивают магнитной мешалкой. Осадок раствор ет-- с . Раствор перемешивают без нагревани  4 ч, подкисл ют лед ной уксусной кислотой до рН 6, Метанол отгон ют , остаток раствор ют в бензоле и промывают водой. Органический слой сушат сульфатом натри , частично растворитель упаривают и хроматогра- фируют на колонке-с силикагелем (Chemapolоб 40/100). Элюируют смесью бензола/этилацетат 9:1, Собирают фракцию, содержащую смесь стереоизо- меров, из которой выдел ют станди- цил 3,35 г (67,0%) с R.f около 0,53 в системе бензол/этилацетат 4:1,

Вычислено, %: С 67,59; Н 8,25; С1 12,88.

Найдено, %: С 67,54; Н 8,26; С1 13,03,

ИК-спектр: QH 345 1; Ifo 1730; соо 1132; с-а 735,667 ,

ЯМР С: С, 71,2; С,7 83, 1; С,8 12, 1; С,9 12,4 м,д,

Исследование биологической активности .

Из структуры соединений видно, чтч в качестве носител  цитотокси- ческой п-ди-(2-хлорэтил)-аминогруппы использован 5сС-андростандиол-3,

17й,  вл к цийс  метаболитом гормона андростанового р да дигидротестосте- рона, гормон-носитель содержит две свободные функциональные группы. Наличие свободных функциональных групп в молекуле гормона  вл етс  важным фактором дл  про во1ени  его биологической активности. Нар ду с противоопухолевой активностью исследова- ли специфические гормональные свойства соединений.

Дл  опытов использовали мышей линий С57В1/ 6 и СВА, гибридов первого поколени  BDF(C57B)6xDBA и беспород- ных крыс,

Противоопухолевую активность изучали на перевиваемых опухол х мышей: лимфобластном лейкозе L-1210, адено- карциноме молочной железы Са-755, карциноме легкого Льюис LLC, раке шейки матки РШМ-5 и раке  ичника ОЯМ Лечение начинали через 48 ч после дозированной перевивки опухоли. Вещества вводили животным подкожно в оливковом маете или в смеси спирта и оливкового масла, с конечной концентрацией спирта 15%, ежедневно в

течение 5 дней в дозах, исчисл емых в миллиграммах на килограмм массы тела. Терапевтический эффект оценивали по известной методике.

Данные противоопухолевого действи андроцита и стандицила на перевиваемые опухоли приведены в табл, 1,

Изучение противоопухолевой активности описываемых веществ показало, что они обладают высоким противоопухолевым действием (табл, 1), В разовых дозах 5-50 мг/кг при 5-дневном курсе введени  они тормоз т рост Са-755, ОЯМ и на 65-100%, Между веществами (1а) и (16) имеютс  различи  в спектре противоопухолевого действи , Андроцит (1а) более активен при раке легкого LLC, чем стандицил (16).

Описываемые соединени  отличаютс  по спектру противоопухолевого действи  и от известного дистрона. Они высоко активны при ОЯМ, на котором практически не активен дистрон и про  вл ют лишь пороговое действие на , на котором активен дистрон.

Особенностью андроцита (1а) и стандицила (16) в сравнении С дист- роном  вл етс  их терапевтическа  широта. Вещества (1а) и (16) активны в дозах 5-50 мг/кг в отличи.

от дистрона (25-50 мг/кг). Однако из табл. 1 видно, что диапазон терапевтических доз зависит от вида опухоли и линии животных.

Изучение гормональных свойств описываемых соединений с помощью библо- гических тестов показало, что они слабыми андрогенными и ана- болическИми свойствами. Их андро- генный индекс после 10-дневного введени  в дозе 20 мг/кг ежедневно составл ет 2,5 и 2,6 (у дистрона 8,5). Особенностью стандицила (16)  вл етс  кратковременное андрогенное действие , тогда как андроцит (1а) сохран ет зто действие и через 2 нед,, после окончани  введени  (подобно дистрону). Анаболического действи  вещества (1а) и (1бУ практически не про вл ют (индексы 0,9 и 1,2), тогда как анаболический индекс у дистро- на равен 2, .

Особенности гормональных свойств описываемых соединений про вились значительнее при изучении их вли ни  на рецепцию дигидротестостерона (ДГТ) и зстрадиола-17|3 (Е) в ткани вентральной простаты крыс. Эти исследовани  проводили на нормальных и пред- варительнокастрированных (за. 2 нед,) взрослых крысах, получавших терапевтический курс препаратов (20 мг/кг в течение 5 дней). Обнаружены различи  между андроцитом (1а) и стандици- лом (16), а также дистроном в действии на рецепцию ДГТ и, особенно, на рецепцию Е в цитоплазматических зкстрактах вентральной простаты, У интактных крыс после введени  андро- цита (1а) специфическое св зывание ( Н)Еj в цитозоле возросло в 5 раз, а после .введени  дистрона - в 10 раз,

После введени  стандицила (16) специфического св зывани  (, V.)E в ци- тозоле не наблюдалось (оно полностью подавл лось), У кастрированных крыс стандицил (16), подобно дистрону, увеличиваетс  специфическое св зывание ( н)Е в цитозольных экстрактах, а андроцит (1а) оказывал наименьшее вли ние на св зывание с рецепторами Е, Различие во вли нии на рецепцию гормонов у андроцита (1а) в сравнении с стандицилом (16) и дистроном св зано с наличием алкилирующей группы в андроците (1а) по третьему углероду стероида, поскольку стероиды

7

взаимодействуют с рецепторами именно этой частью молекулы.

Рассматриваемые вещества различаютс  также по метаболизму в ткан х, особенно в ткан х-мишен х дл  андро генов.

Результаты вли ни  андроцита и стандицила в сравнении с дистроном на активность ферментов метаболизма андротенов в вертикальной простате крыс приведены в табл, 2,

Изучение активности п ти ферментов метаболизма андрогенов показало что имеютс  различи  в действии ан- |дроцита, стандицила и дистрона на активность этих ферментов. Из табл. видно, что стандицил оказывает значительное вли ние на активность 5ot-pe- дуктазы - ключевого фермента метаболизма андрогенов, снижа  ее у ин- тактных ЖИВОТНЫХ , тогда как андроцит и дистрон, ее увеличивают, он также увеличивает активность Зoi-гидpoкcи- лазы у интактных животных, не измен   активность 6о(.,-гидроксилаз у интактных животных, тогда как ан- дроцит и дистрон ее стимулируют, ан- дроцит и стандицил отличаютс  от дистрона и во вли нии на активность Зр-гидроксилазы, причем как у интакт ных, так и у кастрированных животных ,

Таким образом, андроцит и, особенно , стандицил отличаютс  от дистро- на по разнообразию их вли ни  (качественно и количественно) на активность ферментов метаболизма андрогенов .

Результаты вли ни  андроцита и стандицила на .массу тела и некоторых эндокринных и внутренних органов у половозрелых крыс самцов после 5-дненого курса введени  приведены в табл, 3,

При изучении вли ни  описываемых веществ на организм и некоторые внутренние органы установлено, что стандицил (16) менее токсичен, чем андроцит (1а) при применении их в эквимол рных дозах. Из табл, 1 видно , что у мышей С57В /6 с Са-755 при курсовой дозе андроцита; (1а) 250мг/кг гибнет от токсичности 5 из 7 мышей, т,е, доза представл ет собой Щ, тогда как эта же доза стандиципа (16) составл ет ЛДц,

Така  же закономерность в про влении различного токсического дей0

5

0

1

5

0

5

5

0

5

152 ,8

стви  препаратов (1а) и (16) найдена. у мышей С57В1/6 с опухолью LLC и у .. мышей СВА с опухолью Р1 1М-5, Из табл, 2 видно, что стандицил (16) в терапевтической дозе 20 мг/кг в течение 5 дней не уменьшает массы тела и вызывает незначительное уменьшение массы селезенки и тимуса (на 5 и 9% соответственно), тогда как андроцит (1а) значительнее уменьшает массу селезенк и и тимуса (на 20 и 29% соответственно ). Из табл, 3 видно также , что стандицил (16) отличаетс  от андроцита (1а) и от дистрона в де.йствии на надпочечник, почки и сердце. Соединени  (1а) и (16) различаютс  между собой по вли нию на массу кроветворных и внутренних органов , что обусловлено их химической структурой.

Таким образом, результаты исследовани  показали, что описываемые соединени  андроцит (1а) и стандицил (16)  вл ютс  активными противоопухолевыми соединени ми, отличающимис  по своим свойствам андрогеноцито- статика дистрона. Эти различи  обнаружены в противоопухолевых и других биологических свойствах веществ. Описываемые соединени  имеют иной спектр противоопухолевого действи  и про вл ют противоопухолевую активность в большем диапазоне доз, Преимуп1;еством описываемых соединений по сравнению с дистроном  вл етс  терапевтическа  широта. Они про вл ют активность в дозе 5 - 50 мг/кг, тогда как оптимальна  терапевтическа  доза дистро- на 25 мг/кг и при ее уменьшении эффект значительно падает.

По биологическому действию на организм преимуществом описываемых соединений по сравнению с дистроном  вл етс  нар ду с их меньшей андро- генностью отличи  по вли нию на рецепцию андрогенов и экстрогенов и на метаболизм андрогенов, особенно стандицила (16), Андрогенность соединени  при их клиническом применении может давать нежелательные побочные эффекты в виде вирилизации, Стандицил (16) обладает, кроме того, токсическим действием на организм по сравнению с андроцитом (1а). Все сказанное позвол ет характеризовать со- единенце стандицил как активный гор- моноцитостатик с сочетанием гормональных и противоопухолевых свойств, отличным от дистрона.

В знаменателе - число мышей в одном из опытов, в числителе - погибшие от токсичности

Эффект оценви по увеличению продолжительности жизни.

35

Таблица 2

Активность 5|б-Р-аэы оценивалась по сумме образующихс  5об-восстановленных метаболитов. Повышение активности фермента (f), снижение активности Фермента (Oi активность фермента не измен лась - 0. Активность ферментов по сравнению с контролем: один знак - слабое вли ние, два знака - сильное вли ние, три знака - очень сильное вли ние.

Таблица 1

Таблица 2

11

1361152

12 Таблица 3

Claims (2)

1. Сложные моноэфиры 5&0-андростандцола-Зр,. 17/3, общей формулы

   где К, - ОСОСН₅,С₆Н₄И(СН₅,СН_гС1)₂ в случае, когда К- ОН, или

   - ОН в случае,.когда - ОСОСН₂С₆Н₄Ы(СН_гСН_гС^ ,

   проявляющие противоопухолевое и гормональное действие. »

   со

   05

   СП

   ю

   1
2. 2