SU1314268A1

SU1314268A1 - Method of detecting helminth eggs in soil samples and bottom sediments

Info

Publication number: SU1314268A1
Application number: SU843824754A
Authority: SU
Inventors: Александр Сергеевич Шурандин; Николай Алексеевич Романенко; Людмила Александровна Новикова
Original assignee: Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им.Е.И.Марциновского
Priority date: 1984-12-17
Filing date: 1984-12-17
Publication date: 1987-05-30

Abstract

Изобретение относитс к области медицинской паразитологии, а именно к способам санитарно-гельминтологи- ческого обследовани объектов внешней среды. Цель изобретени - повьше- ние точности способа. Дл этого весь надосадочный слой флотационного раствора с удельной плотностью 1 ,40г-1 ,42 (оптимальной дл Диффузии иц гельминтов из осадка в надосадочную жидкость ) перенос т в чистые пробирки The invention relates to the field of medical parasitology, in particular, to methods of sanitary-helminthological examination of environmental objects. The purpose of the invention is to increase the accuracy of the method. For this, the entire supernatant layer of the flotation solution with a specific density of 1, 40g-1, 42 (optimal for Diffusion of the helminth eggs from the sediment into the supernatant) is transferred to clean tubes

Description

Изобретение относитс к медицинской паразитологии, а именно к способам санитарно-гельминтологического обследовани .объектов внешней среды.The invention relates to medical parasitology, in particular to methods of sanitary and helminthological examination of environmental objects.

Целью изобретени вл етс повышение точности способа.The aim of the invention is to improve the accuracy of the method.

Сущность способа заключаетс в .следующем.The essence of the method is as follows.

Весь надосадочный слой флотационного раствора с удельной плотностью 1,40-1,42, оптимальной дл диффузии . иц гельминтов из осадка в надосадоч ную жидкость и послойного распределени последних в зависимости от их собственного удельного веса, перенос т в чистые пробирки и разбавл ют водой, снижают удельную плотность раствора до,1,05. После центрифугировани полученный осадок концентрируют и микроскопирутет. Пробы обрабатывают в стандартных клинических пробирках , используют малогабаритную клиническзпо центрифугу ОПн-3.The entire supernatant of a flotation solution with a specific density of 1.40-1.42 is optimal for diffusion. The helminth eggs from the sediment into the supernatant and the layer-by-layer distribution of the latter, depending on their own specific gravity, are transferred to clean tubes and diluted with water, reducing the specific gravity of the solution to 1.05. After centrifugation, the resulting precipitate is concentrated and microscopic. Samples are processed in standard clinical tubes, using a small-sized clinical centrifuge OPN-3.

При этом в 20 клинических пробирок предварительно наливают по 6 мл 3%-ного раствора калиевой или натриевой щелочи, после чего в каждую пробирку внос т по 2-2,5 г обрабатываемого материала. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и центрифугируют , надосадочную жидкость сливают, а осадок одноразово промывают водой, После чего к осадку добавл ют 3 мл насьш;енного раствора соли, содержащего в определенных количествах натриевую и аммиачную селитру с удельной плотностью 1,40, содержимое перемешивают и центрифугируют. Образовавшуюс надосадочную жидкость переливают в чистые пробирки.In this case, 6 ml of a 3% aqueous solution of potassium or sodium alkali are pre-poured into 20 clinical tubes, after which 2-2.5 g of the processed material is added to each tube. The contents of the tubes are thoroughly mixed and centrifuged, the supernatant is drained and the precipitate is washed once with water, then 3 ml of the whole salt solution, containing sodium and ammonium nitrate with a specific density of 1.40, is added to the precipitate, the contents are mixed and centrifuged . The resulting supernatant is poured into clean tubes.

К перенесенному раствору флотационной жидкости доливают в каждую пробирку определенное количество воды , пробирки встр хивают и центрифугируют , после чего надосадочную жидкость сливают, а образовавшийс осадок из 20 пробирок концентрируют в 4 К осадку в каждую пробирку добавл ют воду и сверху наслаивают эфир. Пробирки встр хивают и центрифугируют, надосадочный слой сливают,а осадок микроскопируют.To the transferred solution of flotation liquid, a certain amount of water is added to each tube, the tubes are shaken and centrifuged, after which the supernatant is drained, and the resulting precipitate from 20 tubes is concentrated in 4 To the precipitate, each layer is layered with ether. The tubes are shaken and centrifuged, the supernatant layer is drained, and the precipitate is microscoped.

Пример. Приготовление солевого раствора.Example. Saline preparation.

Дл приготовлени насьш1;енного раствора можно примен ть как химически чистую соль, так и техническую селит РУ.For the preparation of all solution, it is possible to use both a chemically pure salt and a technical salt of the RU.

5five

00

5five

Реактивы смешивают с водой в следующей пропорции: 800 г NaNO,j+400 г NH NOj+ln , что соответствует мол рному соотношению 9,4:3 соответст- венно, и довод т до кипени , ложкой снима накипь. Раствор кип т т на небольшом огне 10-15 мин, после чего его охлаждают и ареометром измер ют удельную плотность, котора должна быть 1,40-1,42. Раствор хран т при комнатной температуре в закрытых емкост х в течение 7-10 дней.The reagents are mixed with water in the following proportion: 800 g of NaNO, j + 400 g of NH NOj + ln, which corresponds to the molar ratio of 9.4: 3, respectively, and brought to a boil, remove scum with a spoon. The solution is boiled over low heat for 10-15 minutes, after which it is cooled and the specific gravity is measured with a hydrometer, which should be 1.40-1.42. The solution is stored at room temperature in closed containers for 7-10 days.

Обработка пробы почвы.Processing soil samples.

В 20 клинических центрифужных пробирок объемом 10 мл напивают по 6 мл 2%-ного раствора едкого натра. Затем в каждую пробирку внос т такое количество почвы, чтобы объем раствора , налитого в пробирку, увеличилс до 7 мл. Такое увеличение объема на 1 1лл соответствует весу почвы от 2 до 2,5 гр. При исследовании пробы в 20 клинических пробирках общий вес навески составит от 40 до 50 гр. Стекл нной палочкой тщательно перемешивают содержимое пробирок, после чего пробирки центрифугируют при 1500 об/мин в течение 3 мин. В дальнейшем режим центрифугировани оставл ют посто нным.In 20 clinical centrifuge tubes with a volume of 10 ml, 6 ml of a 2% solution of caustic soda are drunk. Then, the amount of soil is added to each tube so that the volume of the solution poured into the tube increases to 7 ml. Such an increase of 1 lll corresponds to a soil weight of 2 to 2.5 grams. In the study of samples in 20 clinical tubes, the total weight of the sample will be from 40 to 50 grams. Glass tube thoroughly mix the contents of the tubes, after which the tubes are centrifuged at 1500 rpm for 3 minutes. Subsequently, the centrifuging mode is kept constant.

После центрифугировани надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавл ют 8 мл воды. Содержимое тщательно перемешивают и центрифугирзгют. 5 Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавл ют 3 мл раствора, содержащего натриевую и аммиачную селитру при мол рном соотношении 9,4:5 соответственно. При этом удельна плотность раствора 1,40-1,42 обеспечивает переход иц гельминтов из осадка в надосадочный слой жидкости. Яйца, обладающие удельной плотностью менее 1,40-1,42, флотируютс ,в поверхностную пленку, а с удельной плотностью более 1,40 распредел ютс по всему столбику надосадочной жидкости. Содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют. Отцентрифу- гированные пробирки оставл ют в состо нии поко в течение 5 мин, после чеГ о надосадочную жидкость переливают в следующий чистый р д пробирок (од- на в одну) и далее работают только с ней. К перенесенному раствору фло- тационной жидкости доливают в каждую пробирку воду до отметки 10 мл. При этом удельна плотность раствора па0After centrifugation, the supernatant was decanted, and 8 ml of water was added to the precipitate. The contents are thoroughly mixed and centrifuged. 5 The supernatant is discharged, and 3 ml of a solution containing sodium and ammonium nitrate are added to the precipitate at a molar ratio of 9.4: 5, respectively. In this case, the specific density of the solution 1.40-1.42 provides for the transfer of the helminth eggs from the sediment to the supernatant layer of the liquid. Eggs with a specific gravity of less than 1.40-1.42 are floated, into a surface film, and with a specific density of more than 1.40 are distributed throughout the entire column of supernatant. The contents of the tubes are mixed and centrifuged. The centrifuged tubes are left at rest for 5 minutes, after the supernatant is poured into the next clean row of tubes (one to one), and then they are only used with it. To the transferred solution of flotation liquid, water is added to each tube to the 10 ml mark. In this case, the specific density of the solution pa0

00

5five

00

5five

дает с Ij40 до 1,05. Пробирки встр хивают и цейтрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин. Этот прием позвол ет сконцентрировать йц гельминтов в осадке. Надосадочнуто жидкость сливают, а осадок из каждых 10 пробирок перенос т в 2 из них. Осадок из пробирок собирают пастеровской пипеткой. Таким образом, из 20 пробирок остаетс только 4, в которых и сконцентрирован весь осадок, содержащий йца гельминтов.gives from Ij40 to 1.05. The tubes are shaken and centrifuged at 1500 rpm for 5 minutes. This technique allows the concentration of helminths in the sediment. The supernatant was drained, and the sediment from each 10 tubes was transferred to 2 of them. The pellet is collected with a Pasteur pipette. Thus, out of 20 test tubes, only 4 remain, in which all the sediment containing the helminth eggs is concentrated.

В каждую пробирку к осадку доливают 7 мл воды и сверху наслаивают 1 МП эфира. Пробирки интенсивно встр хивают в течение 30-40 с и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 3 мин.To each tube, 7 ml of water are added to the sediment and 1 MP of ether is layered on top. The tubes are shaken vigorously for 30-40 seconds and centrifuged at 1500 rpm for 3 minutes.

Затем надосадочньй слой жидкости сливают, стенки пробирки вытирают ватным тампоном, при этом пробирка находитс в горизонтальном положении Полученньй осадок из каждой пробирки перенос т пастеровской пипеткой на предметное стекло и накрывают двум покровными стеклами размером 2020. В случае если осадка в пробирке малое количество, то его просматривают весь, если большое - то к неThen the supernatant layer of the liquid is drained, the walls of the tube are wiped with a cotton swab, the tube is in a horizontal position. The resulting precipitate from each tube is transferred with a Pasteur pipette onto a glass slide and covered with two cover glasses of 2020 size. browsing the whole, if big - then not

Составитель Е. Колмакова Редактор А. Лежнина Техред ЛоОлийнык Корректор С. ЧерниCompiled by E. Kolmakova. Editor A. Lezhnin Tehred Lo Olynyk Proofreader S. Cherni

. Заказ 2208/46 Тираж 777Подписное. Order 2208/46 Circulation 777 Subscription

ВНИИПИ Государственного комитета СССРVNIIPI USSR State Committee

по делам изобретений и открытий 113035, Раушска наб., д. 4/5on affairs of inventions and discoveries 113035, Raushsk nab., d. 4/5

Производственно-полиграфическое предпри тие, г. Ужгород, ул. Проектна ,4Production and printing company, Uzhgorod, st. Project, 4

OO

5five

00

5five

му добавл ют до 0,5 мл воды и просматривают из всего осадка только 0,1 или 0,2 мл, а полученный результат пересчитьтают на весь объем осадка , умнол а в первом случае на 5, а во втором на 2,5, Результаты просмотра осадка из каждой пробирки суммируют .The mixture is added to 0.5 ml of water and only 0.1 or 0.2 ml is viewed from the whole sediment, and the result is recalculated for the whole sediment volume, multiply in the first case by 5, and in the second by 2.5. View the sediment from each tube summarized.

Claims

Invention Formula

The method of detecting helminth eggs in soil samples and bottom sediments, which consists in treating the samples with an alkaline solution, water and flotation liquid, followed by centrifuging, microscopy and counting helminth eggs, characterized in that, to increase the accuracy, a 40- . 50 g, divided into equal parts by weight, are placed in tubes. Centrifugation is carried out at 1500 rpm for 3-5 minutes, and a flotation solution with a density of 1.40-1.42 is added to each tube, forming a supernatant t in clean tubes and dilute with water, re-centrifuge and microscopic precipitate.