SU1310403A1 - Способ получени @ - и @ -субъединиц из лютенизирующего гормона - Google Patents
Способ получени @ - и @ -субъединиц из лютенизирующего гормона Download PDFInfo
- Publication number
- SU1310403A1 SU1310403A1 SU853953858A SU3953858A SU1310403A1 SU 1310403 A1 SU1310403 A1 SU 1310403A1 SU 853953858 A SU853953858 A SU 853953858A SU 3953858 A SU3953858 A SU 3953858A SU 1310403 A1 SU1310403 A1 SU 1310403A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- butanol
- subunits
- acetic acid
- water
- subunit
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение касаетс получени природных веществ, в частности об и р-субъединиц (СЕ) из лютенизирующего гормона, которые используют в биологии , медицине и фармацевтической промьшшенности. Цель - повьшение выхода СЕ и упрощение процесса. Последний ведут пропусканием раствора лютенизирующего гормона из кашалота или быка в другой смеси растворителей при объемном соотношении н-бутанола, воды и СН,СООН (50-60):(25-30):(15- 20) через колонку с сорбирующей насадкой , в качестве которой используют сефадекс С-25 при загрузке гормона 1-2 мг на 1 мл сорбента. Элюиро- вание провод т ступенчато, т.е. вы- мьшают -субъединицу указанной смесью растворителей (лучше при объемном соотношении 10:5:3), а затем oi-субъединицу , но с другим соотношением растворителей , т.е. (0-35);(50-65):(15- 35), преимущественно 2:4:1. Затем полученные растворы упаривают, лиофили- зируют и провод т гельфильтрацию на сефадексе G-100 фракции, содержащей oi -субъединицу. Способ обеспечивает увеличение выхода с 75 до 96% и позвол ет упростить процесс за счет сокращени стадий обессоливани и гельфильтрации при исключении использовани мочевины и гуанидинхло- рида, которые содержат примеси, снижающие биологическую ценность белков. 2 з.п. ф-лы, 1 табл. & (Л io 4 о со
Description
11
Изобретение относитс к усовершенствованному способу получени Qi- и -субъединиц из лютенизирующего гормона и может найти применение в биологии, медицине, фармацевтической гфомьпиленности.
Цель изобретени - упрощение процесса и повышение выхода целевого продукта.
Предлагаемый способ благодар использованию в качестве сорбирующей насадки сефадекса G-25 и ступенчатого градиента при элюции вначале системой н-бутанол - вода - уксусна кислота, в объемных процентах 50-60; :25-30:15-20 дл вымывани р-субъединиц , а затем системой н-бутанол - вода - уксусна кислота; в объемных процентах 0-35:50-65:13-35 дл вымывани об -субъединиц, позвол ет повысить выход целевых продуктов до 96%, вместо 75% в известном способе, а таклсе упростить процесс, сократив количество стадий (обессоливание и гель-фильтрацию) и исключив использование мочевины или гуанидинхлори- да, которые к тому же содержат примеси , снижающие биологическую активность белка,
.Пример 1. 500 мг ЛГ кашалота раствор ют в 50 мл системы, содержащей н-бутанол, воду и уксусную кислоту в объемном соотношении 10:5:3j в об.% 50-60:25-30:15-20. Раствор белка внос т в колонку с сефадексом G-25 тонкий (3,6-25 см), уравновешенную той же системой (нагрузка 1-2 мг белка на 1 мл), скорость элюции 10- 20.МГ/СМ ч. После выхода первого пика , содержа1цего /3-субъединицу колон- ку отмывают до исчезновени белка в элюате и дальнейшую глюцию провод т системой с объемным соотношением компонентов н-бутанол - вода - уксусна кислота 2:4:1, в об.% 0-35:50-65:15- 35, Скорость элюции 120 мл/ч. Первый и второй пики собирают раздельно и упаривают на роторном испарителе в при 35 С до 1/10 исходного
объема. Полученные фракции разбавл ют водой и лиофилизируют. Материаль .второго пика подвергают гельфильт- рации на колонке с сефадексом G-100 в 0,05 М аммоний бикарбонатном буфере . Б результате гельфильтрации получают два. пика. Первый пик - белковые примеси (не ЛГ), второй пик содержит ci -субъединицу. Фракции объедин ют и лиофнлизируют. Выход/3-субъ
s
0
0
04032
единицы 240 мг, c«L-субъединицы 220 мг, примесные белки 20 мг. Таким образом, выход субъеднниц с учетом примесей 96%.
5 Пример2. 500 мг ЛГ минке обрабатывают аналогично примеру 1. В1тход -субъединиць ЛГ 215 мг, и - субъединицы ЛГ 220 мг и примесные белки 21 мг (87%).
П р и м е р 3. 100 мг ЛГ быка обрабатывают , как в примере 1, кроме следующих изм:ерений: белок раствор ют в 12 мл ш ходной трехкомпонентной системы н-бутанол - вода - уксусна кислота 10:5:3. Размер колонки с сефадексом G-25 (2,515 см). Выходоб-, субъединицы 42 мг,/3-субъединицы
5
9
43 мг, примесные белки 6 мг.
П р и м е р 4. 50 мг ЛГ кашалота раствор ют в 25 мл системы н-бутанол- вода - уксусна кислота 13:4:4 и про- 1тускают через колонку с сефадексом G-25 объемом 50 мл. Втора система элюции и прочие услови аналогичны npi-шеру 1. Выход |5-субъединииы 15 мг,, к.-субъединиЩ)1 18 мг.
Пример5. 50 мг ЛГ кашалота раствор ют в 5 мл системы н-бутанол - вода уксусна кислота 10:5:3 и пропускают через колонку с сефадексом G-25 объемом 30 мл,и -Субъединицу де сорбируют системой с соотношением компонентов н-бутанол - вода - уксус- на кислота 3:3:2. Остальные услови 5 подобны примеру 1„ Выход (Л-субъединицы 13 мг, 3-субъединицы 22 мг.
Замена сефадекса в качестве сорбента на целлюлозу приводит к уменьшению отношени белок/объем сорбента , а таклче к замедлению процесса из- за большего сопротивлени току э юен- та колонок с целлюлозой.
П р и м е р 6. Дл разделени 100 мл ЛГ кашалота на субъединицы 5 используют колонку с целлюлозой (3,6 25 см)5 скорость элюции 30 мл/ч, при прочих услови х одинаковых с примером 1. Выход ь:.-субъединицы 35 мг, ;3-субъеднницы 38 мг.
50 .
Критерием частоты полученных препаратов oi- и 3-субъединиц вл етс изс аминокислотный состав. В таблице приведены данные ло аминокислотному
55 составу Л- и р-субъединиц ЛГ из гипофизов быка и кита кашалота, полученные при опреде.пении аминокислотного состава и аминокислотной последовательности .
Из таблицы видно, что аминокислот ньш состав субъединиц, полученных предлагаемым и известным способами, практически совпадает.
Предлагаемьй в данном способе ин- тервал нагрузок по белку обусловлен следующим. Увеличение (2, мг/мл) соотношени белок/сорбент будет приводить к проскоку об-субъединицы во фракцию -субъединицы. Чрезмерное умень- шени е (1 мг/мл) соотношени белок/со бент приведет к замедлению процесса и увеличению объема фракций, в которые вход т fti- и 8-субъединицы.
Процесс элюировани фракций об- и В субъединиц контролируют с помощью УФ детектора при 280 нм, объем элюи- рованных фракций oi - и -субъединиц не превышает обычно удвоенного объема нанесени .
Поскольку сёфадексы - сорбенты не приспособленные к работе с противодавлением , то обычно используетс естественна текучесть колонки с се- фадексом. Р скусственное заг-шдление процесса элюции приводит к уменьшению объема фракций злюирующихс oi- и р-субъединиц до 1,3 - 1,5 объема нанесени , но одновременно увеличиваетс врем разделени . Естествен- на текучесть колонки длиной 20 см, заполненной сефадексом G-25 (тонкий)
пределах 10-20 мл/см ч. Дл элюировани используют систе
мы растворителей из н-бутанола - воды - уксусной кислоты. Дл первой системы с интервалом дл н-бутанола 50-60%, дл воды 25-30%, а дл ук- сусной кислоты 15-20%. Снижение дл этой системы содержани бутанола до 50% и ниже, а также увеличение содержани уксусной кислоты до 20% и вьше приводит в целом к уменьшению сорбционных свойств сефадекса по от- ношению к -субъединнце. Это влечет за собой снижение нагрузочной емкос- ти колонки с сефадексом, а еще большее снижение концентрации бутанола или (и) увеличени концентрации ук- сусной кислоты приводит в конце концов к проскоку oi-субъединицы во фракцию А-субъединицы. Снижение (в первой системе) содержани воды до 15% и ниже приводит к снижению растворимое ти белка в первой системе, а увеличение содержани воды до 20% и вьш1е влечет за собой увеличение содержани уксусной кислоты (обусловлено
O
5 0
5 0
5
Q г
условием смешиваемости системы) и как следствие к увеличению веро тности проскока (Х. -субъединицы во фракцию -субъединицы.
Состав второй системы допускает большие вариации содержани компонентов . Основные требовани предъ вл емые к ней: хороша растворимость в ней(1/-субъединицы, хороша смешива- емость с первой системой и отсутствие сорбционных взаимодействий между сефадексом иoi-субъединицей в зтой системе.
Снижение во второй системе содержани н-бутанола вплоть до 0% влечет увеличение содержани уксусной кислоты до 35%. В целом смешиваемость первой и второй систем лучше, когда обе системы содержат н-бутанол, кроме того позьш1ение содержани уксусной кислоты - это более жесткие нежелательные услови дл белка. Содержание воды во второй системе целиком определ етс приведенными вьште трем требовани ми.
Claims (3)
1. Способ получени - и ,в -субъединиц из лютенизирующего гормона, включаюш;ий пропускание раствора лютенизирующего гормона в смеси растворителей через колонку с сорбирующей насадкой, элюирование растворителем переменного состава, последующее упаривание, лиофилизацию и гель- фильтрацию на сефадексе G-100 фракции , содержащей сб-субъединицу, о т- личающийс тем, что, с целью упрощени процесса и повьш1ени выхода, в качестве сорбирующей на- садки используют сефадекс G-25, в качестве растворител - смесь н-бутанол - вода - уксусна кислота при соотношении, об.: 50-60:25-30:15-20 при загрузке гормона из расчета 1- 2 мг на 2 мл сорбента, а элюирование провод т ступенчато с использованием вначале указанной смеет- растворителей до полного вымывани Б-субъединицы , затем элюирование провод т смесью н-бутанол - вода - уксусна кислота при соотношении 0-35:50-65:15- -35, об.%.
2. Способ по п.1, отличающийс тем, что состав элюента первой ступени н-бутанол - вода - уксусна кислота 10:5:3, об.%.
3. Способ по П.1, о т,л Ц и и с тем, что состав
1310-51336
и ч а ю - второй ступени н-бутанол - вода - yKn элюента
сусна кислота 2:4:1, об.%.
Аминокислотный состав субъединиц, полученных известными методами.
А
Аминокислотньш состав субъединиц„ полученных предлагаемым методом.
Редактор И.Сегл ник
Составитель В.Волкова
Техред н.Глущенко Корректор И.Эрдейи
Заказ 1865/24Тираж 348 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР
по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушска наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предпри тие, г.Ужгород,ул.Проектна ,4
второй ступени н-бутанол - в
сусна кислота 2:4:1, об.%.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU853953858A SU1310403A1 (ru) | 1985-09-16 | 1985-09-16 | Способ получени @ - и @ -субъединиц из лютенизирующего гормона |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU853953858A SU1310403A1 (ru) | 1985-09-16 | 1985-09-16 | Способ получени @ - и @ -субъединиц из лютенизирующего гормона |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1310403A1 true SU1310403A1 (ru) | 1987-05-15 |
Family
ID=21197476
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU853953858A SU1310403A1 (ru) | 1985-09-16 | 1985-09-16 | Способ получени @ - и @ -субъединиц из лютенизирующего гормона |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1310403A1 (ru) |
-
1985
- 1985-09-16 SU SU853953858A patent/SU1310403A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Hennen G., Prusik Z., Maghuin G. - Rogister Porcine Lu- tainizing Hormone and its Subunits. Isolation and characterization Eur. J.Biochem. 1971, 18, . * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2552263B2 (ja) | 抗凝固作用を有する新規ポリペプチド | |
US4872987A (en) | Process for separating and producing chlorogenic acid | |
Carra | Purification and N-terminal analyses of algal biliproteins | |
JPS6011424A (ja) | 繊維芽細胞成長因子の精製および特性表示 | |
US6180757B1 (en) | Process for the separation of proteins using a CA++ containing eluant | |
Roncari et al. | On the chemical nature of the antibiotic edeine | |
JPS5930685B2 (ja) | 粗製ウロガストロンを3成分に分別する方法 | |
US4457917A (en) | Peptide, process for its preparation and pharmaceutical composition containing same | |
Free et al. | Separation and properties of multiple components of bovine growth hormone | |
SU1310403A1 (ru) | Способ получени @ - и @ -субъединиц из лютенизирующего гормона | |
JPH03118393A (ja) | ペプチド又はプソイドペプチド構造の低分子量化合物の精製方法 | |
Scanes et al. | Fractionation of basic proteins and polypeptides. Clupeine and salmine | |
CN112175068A (zh) | 一种司美格鲁肽的纯化方法 | |
US3905870A (en) | Purification of kallikrein | |
US3310471A (en) | Placental lactogenic factor process | |
CN109879938B (zh) | 一种醋酸加尼瑞克的制备方法 | |
Waley et al. | Rearrangement of the amino-acid residues in peptides by the action of proteolytic enzymes | |
US3503950A (en) | Lipolytic peptide and process for production | |
Chernoff | The amino acid composition of hemoglobin: I. An improved method for separating the peptide chains of human hemoglobin | |
JPH0354678B2 (ru) | ||
US4336187A (en) | Purification of calcitonin by partition chromatography | |
US4166113A (en) | Cardiotonic agent | |
US3994782A (en) | Methods for extracting and purifying kallidinogenase | |
US4422967A (en) | Purification of calcitonin by partition chromatography | |
Wallace et al. | The chromatography on DEAE-cellulose of pituitary extracts from several species |