SU1271873A1 - Способ определени формиат-иона в водных растворах - Google Patents
Способ определени формиат-иона в водных растворах Download PDFInfo
- Publication number
- SU1271873A1 SU1271873A1 SU843807843A SU3807843A SU1271873A1 SU 1271873 A1 SU1271873 A1 SU 1271873A1 SU 843807843 A SU843807843 A SU 843807843A SU 3807843 A SU3807843 A SU 3807843A SU 1271873 A1 SU1271873 A1 SU 1271873A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- formate
- reactor
- formate dehydrogenase
- aqueous solutions
- nad
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биохимии , может быть использовано дл анализа формиата в сложных биологических смес х. Цель изобретени увеличение чувствительности и упрощение способа путем исключени использовани растворов формиатдегидрогена J ff . ЗЫ с различной активностью, заменой их НАД (никотинамидадениндинуклеотид )-зависимой формиатдегидрогеназой , иммобилизованной на нерастворимом неорганическом носителе. Дл этого исследуемый раствор, содержащий формиат-ионы: НАД
Description
Изобретение относится к области биохимии и может быть использовано для анализа формиата в сложных биологических смесях.
Цель изобретения - увеличение чувствительности и упрощение способа за счет устранения необходимости использования растворов формиатдегидрогеназы с различной активностью, путем их замены НАД-зависимой формиатдегидрогеназой, иммобилизованной на нерастворимом неорганическом носителе.
На чертеже изображены калибровочные кривые для определения формиата при степенях конверсии субстрата 5% (1) и 15% (2 и 3) (кривая 1 реактор 0,2 мл, активность формиатдегидрогеназы 0,080 мкмоль/мин, скорость прокачивания образца 0,5 мп/мин, объем образца 0,5 мл; кривая 2 - реактор 0,8 мл, активность фермента
2.2 мкмоль/мин, скорость подачи раствора 5 мл/мин, объем образца
1.2 мп; кривая 3 - реактор 0,6 мл, активность фермента 1,1 мкмоль/мин, скорость прокачивания 2,5 мл/мин, объем образца 0,9 мл; концентрация НАД во всех экспериментах 1,25 мМ,· 0,05 М фосфатный буфер, pH 7,0, °C).
Способ осуществляется следующим образом.
Исследуемый раствор, содержащий формиат-ионы, НАД (1-10 мМ) и стабилизатор активности формиатдегидрогеназы, пропускают со скоростью 0,55,0 мл/мин через проточный реактор с ' вытеснением, заполненный НАД-зависимой формиатдегидрогеназойл иммобилизованной на нерастворимом неорганическом растворителе с суммарной активностью 0,075-2,2 мкмоль/мин, так, чтобы степень превращения субстрата составила 5-15%, Для этого объем образца в 1,5-8 раз превышает объем реактора. На выходе из реактора регистрируют величину максимальной оптической плотности образующегося НАД и по калибровочному графику определяют концентрацию ата, форми50 реактор содерПример 1. Проточной с вытеснением объемом 0,2 мл жит 80 мг иммобилизованной на аминированном силохроме или стекле формиатдегидрогеназы с суммарной активностью 0,075 мкмоль/мин при pH 7,0 и
1271873 2
20°С. К 0,3 мл раствора формиата натрия (1,5 объема реактора) в 0,05 М фосфатном буфере (pH 7,0) добавляют 25 мкл 25 мМ раствора.НАД и пропускают через реактор со скоростью 0,5 мл/мин при 20°С. Оптическую плотность раствора на выходе из реактора измеряют при 340 нм в проточной кювете. Минимально определяемая концентрация формиата составляет 1,5v И0'5М. Зависимость оптической плотности от концентрации формиата представлена на чертеже (кривая 1).
Пример 2, Выполняют способ, как в примере 1, за исключением того, что активность фермента составляет 2,2 мкмоль/мин, скорость подачи раствора 5,0 мл/мин, соотношение объемов образца и реактора 8:1 (4,8 и 0,6 мл соответственно), Зависимость оптической плотности от концентрации формиата представлена на чертеже (кривая 2), Минимально определяемая концентрация формиата равна 5- 10-6 М.
Пример 3. Способ выполняют, как в примере 1, - Объем реактора 0,6 мп, активность фермента 1,1 мкмоль/мин, объем образца 1,2 мл (соотношение 2:1), скорость подачи раствора в реактор 2,5 мл/мин. Данные представлены на чертеже (кривая 3), Минимально определяемая концентрация формиата 5··10'6Μ, ла изобретения определения формиат-иона
Claims (2)
- Способ водных растворах путем фермента40 втивного восстановления никотинамидадениндинуклеотида. при помощи ,Независимой формиатдегидрогеназы с последующей регистрацией содержания восстановленного никотинамйдадениндинуклеоФида, отличающийс я тем, что, с целью увеличения чувствительности и упрощения способа за счет устранения необходимости использования растворов формиатдегидрагеназы с различной активностью, анализируемый образец пропускают со скоростью 0,5-5,0 мл/мин через проточный реактор с вытеснением, заполненный иммобилизованной на нерастворимом неорганическом носителе НАД-зависимой формиатдегидрогеназой при активности фермента 0,075-
- 2,2 мкмоль/мин и соотношении объемов образца и реактора (1,5-8):1.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU843807843A SU1271873A1 (ru) | 1984-10-31 | 1984-10-31 | Способ определени формиат-иона в водных растворах |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU843807843A SU1271873A1 (ru) | 1984-10-31 | 1984-10-31 | Способ определени формиат-иона в водных растворах |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1271873A1 true SU1271873A1 (ru) | 1986-11-23 |
Family
ID=21145033
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU843807843A SU1271873A1 (ru) | 1984-10-31 | 1984-10-31 | Способ определени формиат-иона в водных растворах |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1271873A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7435557B2 (en) | 2002-09-06 | 2008-10-14 | Basf Aktiengesellschaft | Methods of identifying inhibitors of GTP cyclohydrolase I and II |
FR2961825A1 (fr) * | 2010-06-29 | 2011-12-30 | Univ Toulouse 3 Paul Sabatier | Nouveau procede de regeneration enzymatique continue de nadh et de detection de nad+ et systeme pour sa mise en oeuvre |
-
1984
- 1984-10-31 SU SU843807843A patent/SU1271873A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Патент US № 3838011, кл. 195 - 103.5, 1974. Ж. Аналитической химии, 1978, т. 33, № 2, с. 364 - 367. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7435557B2 (en) | 2002-09-06 | 2008-10-14 | Basf Aktiengesellschaft | Methods of identifying inhibitors of GTP cyclohydrolase I and II |
US7691596B2 (en) | 2002-09-06 | 2010-04-06 | Basf Se | Methods for determining GTP cyclohydrolase I or II activity |
FR2961825A1 (fr) * | 2010-06-29 | 2011-12-30 | Univ Toulouse 3 Paul Sabatier | Nouveau procede de regeneration enzymatique continue de nadh et de detection de nad+ et systeme pour sa mise en oeuvre |
WO2012001305A3 (fr) * | 2010-06-29 | 2012-04-05 | Universite Paul Sabatier Toulouse Iii | Nouveau procédé de régénération enzymatique continue de nadh et de détection de nad+ et système pour sa mise en oeuvre |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Appelqvist et al. | Enzymatic determination of glucose in a flow system by catalytic oxidation of the nicotinamide coenzyme at a modified electrode | |
Gorton et al. | Flow injection analysis for glucose and urea with enzyme reactors and on-line dialysis | |
Matsumoto et al. | Amperometric flow injection determination of fructose with an immobilized fructose 5-dehydrogenase reactor | |
Lazaro et al. | Individual and simultaneous determination of ethanol and acetaldehyde in wines by flow injection analysis and immobilized enzymes | |
Gunasingham et al. | Platinum-dispersed Nafion film modified glassy carbon as an electrocatalytic surface for an amperometric glucose enzyme electrode | |
Rogler-Brown et al. | Tight binding inhibitors—VI: Interactions of deoxycoformycin and adenosine deaminase in intact human erythrocytes and sarcoma 180 cells | |
Polášek et al. | Amperometric glucose sensor based on glucose dehydrogenase immobilized on a graphite electrode modified with an N, N′-bis (benzophenoxazinyl) derivative, of benzene-1, 4-dicarboxamide | |
Kawashima et al. | Potentiometric enzyme electrode for uric acid | |
Sundaram et al. | Routine glucose determination in serum by use of an immobilized glucose dehydrogenase nylon-tube reactor. | |
US4220503A (en) | Stabilization of activated galactose oxidase enzyme | |
Coleman et al. | Growth, isolation, and characterization of a yeast manganese alcohol dehydrogenase | |
Asouzu et al. | Flow injection analysis of L-lactate with enzyme amplification and amperometric detection | |
SU1271873A1 (ru) | Способ определени формиат-иона в водных растворах | |
US5378332A (en) | Amperometric flow injection analysis biosensor for glucose based on graphite paste modified with tetracyanoquinodimethane | |
Rosario et al. | Use of ionomer membranes to enhance the selectivity of electrode-based biosensors in flow-injection analysis | |
Yao et al. | Simultaneous determination of sulfite and phosphate in wine by means of immobilized enzyme reactions and amperometric detection in a flow-injection system | |
Yao | Amperometric determination of glucose in blood serum with a chemically modified enzyme membrane electrode in a continuous flow system | |
Tabata et al. | Automated assay of creatinine in serum as simplified by the use of immobilized enzymes, creatinine deiminase, and glutamate dehydrogenase | |
Kunz et al. | Immobilized glucose oxidase used to measure glucose in serum | |
Yao et al. | Amperometric flow-injection determination of glucose, urate and cholesterol and blood serum by using some immobilized enzyme reactors and a poly (1, 2-diaminobenzene)-coated platinum electrode | |
Zhang et al. | Simultaneous determination of glucose and sucrose by a dual‐working electrode multienzyme sensor flow‐injection system | |
Deng et al. | Adenosine-selective electrode | |
Appelqvist et al. | Determination of glucose in fermentation processes by means of an on-line coupled flow-injection system using enzyme sensors based on chemically modified electrodes | |
Lubrano et al. | Amperometric alcohol electrode with extended linearity and reduced interferences | |
Meyerhoff et al. | Simultaneous enzymatic/electrochemical determination of glucose and l‐glutamine in hybridoma media by flow‐injection analysis. |