SU1271873A1 - Способ определени формиат-иона в водных растворах - Google Patents

Способ определени формиат-иона в водных растворах Download PDF

Info

Publication number
SU1271873A1
SU1271873A1 SU843807843A SU3807843A SU1271873A1 SU 1271873 A1 SU1271873 A1 SU 1271873A1 SU 843807843 A SU843807843 A SU 843807843A SU 3807843 A SU3807843 A SU 3807843A SU 1271873 A1 SU1271873 A1 SU 1271873A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
formate
reactor
formate dehydrogenase
aqueous solutions
nad
Prior art date
Application number
SU843807843A
Other languages
English (en)
Inventor
Владимир Иванович Тишков
Алексей Михайлович Егоров
Original Assignee
МГУ им.М.В.Ломоносова
Институт биохимии им.А.Н.Баха
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by МГУ им.М.В.Ломоносова, Институт биохимии им.А.Н.Баха filed Critical МГУ им.М.В.Ломоносова
Priority to SU843807843A priority Critical patent/SU1271873A1/ru
Application granted granted Critical
Publication of SU1271873A1 publication Critical patent/SU1271873A1/ru

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относитс  к биохимии , может быть использовано дл  анализа формиата в сложных биологических смес х. Цель изобретени  увеличение чувствительности и упрощение способа путем исключени  использовани  растворов формиатдегидрогена J ff . ЗЫ с различной активностью, заменой их НАД (никотинамидадениндинуклеотид )-зависимой формиатдегидрогеназой , иммобилизованной на нерастворимом неорганическом носителе. Дл  этого исследуемый раствор, содержащий формиат-ионы: НАД

Description

Изобретение относится к области биохимии и может быть использовано для анализа формиата в сложных биологических смесях.
Цель изобретения - увеличение чувствительности и упрощение способа за счет устранения необходимости использования растворов формиатдегидрогеназы с различной активностью, путем их замены НАД-зависимой формиатдегидрогеназой, иммобилизованной на нерастворимом неорганическом носителе.
На чертеже изображены калибровочные кривые для определения формиата при степенях конверсии субстрата 5% (1) и 15% (2 и 3) (кривая 1 реактор 0,2 мл, активность формиатдегидрогеназы 0,080 мкмоль/мин, скорость прокачивания образца 0,5 мп/мин, объем образца 0,5 мл; кривая 2 - реактор 0,8 мл, активность фермента
2.2 мкмоль/мин, скорость подачи раствора 5 мл/мин, объем образца
1.2 мп; кривая 3 - реактор 0,6 мл, активность фермента 1,1 мкмоль/мин, скорость прокачивания 2,5 мл/мин, объем образца 0,9 мл; концентрация НАД во всех экспериментах 1,25 мМ,· 0,05 М фосфатный буфер, pH 7,0, °C).
Способ осуществляется следующим образом.
Исследуемый раствор, содержащий формиат-ионы, НАД (1-10 мМ) и стабилизатор активности формиатдегидрогеназы, пропускают со скоростью 0,55,0 мл/мин через проточный реактор с ' вытеснением, заполненный НАД-зависимой формиатдегидрогеназойл иммобилизованной на нерастворимом неорганическом растворителе с суммарной активностью 0,075-2,2 мкмоль/мин, так, чтобы степень превращения субстрата составила 5-15%, Для этого объем образца в 1,5-8 раз превышает объем реактора. На выходе из реактора регистрируют величину максимальной оптической плотности образующегося НАД и по калибровочному графику определяют концентрацию ата, форми50 реактор содерПример 1. Проточной с вытеснением объемом 0,2 мл жит 80 мг иммобилизованной на аминированном силохроме или стекле формиатдегидрогеназы с суммарной активностью 0,075 мкмоль/мин при pH 7,0 и
1271873 2
20°С. К 0,3 мл раствора формиата натрия (1,5 объема реактора) в 0,05 М фосфатном буфере (pH 7,0) добавляют 25 мкл 25 мМ раствора.НАД и пропускают через реактор со скоростью 0,5 мл/мин при 20°С. Оптическую плотность раствора на выходе из реактора измеряют при 340 нм в проточной кювете. Минимально определяемая концентрация формиата составляет 1,5v И0'5М. Зависимость оптической плотности от концентрации формиата представлена на чертеже (кривая 1).
Пример 2, Выполняют способ, как в примере 1, за исключением того, что активность фермента составляет 2,2 мкмоль/мин, скорость подачи раствора 5,0 мл/мин, соотношение объемов образца и реактора 8:1 (4,8 и 0,6 мл соответственно), Зависимость оптической плотности от концентрации формиата представлена на чертеже (кривая 2), Минимально определяемая концентрация формиата равна 5- 10-6 М.
Пример 3. Способ выполняют, как в примере 1, - Объем реактора 0,6 мп, активность фермента 1,1 мкмоль/мин, объем образца 1,2 мл (соотношение 2:1), скорость подачи раствора в реактор 2,5 мл/мин. Данные представлены на чертеже (кривая 3), Минимально определяемая концентрация формиата 5··10'6Μ, ла изобретения определения формиат-иона

Claims (2)

  1. Способ водных растворах путем фермента40 в
    тивного восстановления никотинамидадениндинуклеотида. при помощи ,Независимой формиатдегидрогеназы с последующей регистрацией содержания восстановленного никотинамйдадениндинуклеоФида, отличающийс я тем, что, с целью увеличения чувствительности и упрощения способа за счет устранения необходимости использования растворов формиатдегидрагеназы с различной активностью, анализируемый образец пропускают со скоростью 0,5-5,0 мл/мин через проточный реактор с вытеснением, заполненный иммобилизованной на нерастворимом неорганическом носителе НАД-зависимой формиатдегидрогеназой при активности фермента 0,075-
  2. 2,2 мкмоль/мин и соотношении объемов образца и реактора (1,5-8):1.
SU843807843A 1984-10-31 1984-10-31 Способ определени формиат-иона в водных растворах SU1271873A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU843807843A SU1271873A1 (ru) 1984-10-31 1984-10-31 Способ определени формиат-иона в водных растворах

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU843807843A SU1271873A1 (ru) 1984-10-31 1984-10-31 Способ определени формиат-иона в водных растворах

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1271873A1 true SU1271873A1 (ru) 1986-11-23

Family

ID=21145033

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU843807843A SU1271873A1 (ru) 1984-10-31 1984-10-31 Способ определени формиат-иона в водных растворах

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU1271873A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7435557B2 (en) 2002-09-06 2008-10-14 Basf Aktiengesellschaft Methods of identifying inhibitors of GTP cyclohydrolase I and II
FR2961825A1 (fr) * 2010-06-29 2011-12-30 Univ Toulouse 3 Paul Sabatier Nouveau procede de regeneration enzymatique continue de nadh et de detection de nad+ et systeme pour sa mise en oeuvre

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Патент US № 3838011, кл. 195 - 103.5, 1974. Ж. Аналитической химии, 1978, т. 33, № 2, с. 364 - 367. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7435557B2 (en) 2002-09-06 2008-10-14 Basf Aktiengesellschaft Methods of identifying inhibitors of GTP cyclohydrolase I and II
US7691596B2 (en) 2002-09-06 2010-04-06 Basf Se Methods for determining GTP cyclohydrolase I or II activity
FR2961825A1 (fr) * 2010-06-29 2011-12-30 Univ Toulouse 3 Paul Sabatier Nouveau procede de regeneration enzymatique continue de nadh et de detection de nad+ et systeme pour sa mise en oeuvre
WO2012001305A3 (fr) * 2010-06-29 2012-04-05 Universite Paul Sabatier Toulouse Iii Nouveau procédé de régénération enzymatique continue de nadh et de détection de nad+ et système pour sa mise en oeuvre

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Appelqvist et al. Enzymatic determination of glucose in a flow system by catalytic oxidation of the nicotinamide coenzyme at a modified electrode
Gorton et al. Flow injection analysis for glucose and urea with enzyme reactors and on-line dialysis
Matsumoto et al. Amperometric flow injection determination of fructose with an immobilized fructose 5-dehydrogenase reactor
Lazaro et al. Individual and simultaneous determination of ethanol and acetaldehyde in wines by flow injection analysis and immobilized enzymes
Yao Flow injection analysis for cholinesterase in blood serum by use of a choline-sensitive electrode as an amperometric detector
Gunasingham et al. Platinum-dispersed Nafion film modified glassy carbon as an electrocatalytic surface for an amperometric glucose enzyme electrode
Rogler-Brown et al. Tight binding inhibitors—VI: Interactions of deoxycoformycin and adenosine deaminase in intact human erythrocytes and sarcoma 180 cells
Kawashima et al. Potentiometric enzyme electrode for uric acid
Sundaram et al. Routine glucose determination in serum by use of an immobilized glucose dehydrogenase nylon-tube reactor.
US4220503A (en) Stabilization of activated galactose oxidase enzyme
Coleman et al. Growth, isolation, and characterization of a yeast manganese alcohol dehydrogenase
SU1271873A1 (ru) Способ определени формиат-иона в водных растворах
US5378332A (en) Amperometric flow injection analysis biosensor for glucose based on graphite paste modified with tetracyanoquinodimethane
Asouzu et al. Flow injection analysis of L-lactate with enzyme amplification and amperometric detection
Yao et al. Simultaneous determination of sulfite and phosphate in wine by means of immobilized enzyme reactions and amperometric detection in a flow-injection system
Tabata et al. Automated assay of creatinine in serum as simplified by the use of immobilized enzymes, creatinine deiminase, and glutamate dehydrogenase
Matsumoto et al. Simultaneous biosensing of inosine monophosphate and glutamate by use of immobilized enzyme reactors
Kunz et al. Immobilized glucose oxidase used to measure glucose in serum
Mabrouk First direct interfacial electron transfer between a biomolecule and a solid electrode in non-aqueous media: direct electrochemistry of microperoxidase-11 at glassy carbon in dimethyl sulfoxide solution
Zhang et al. Simultaneous determination of glucose and sucrose by a dual‐working electrode multienzyme sensor flow‐injection system
Deng et al. Adenosine-selective electrode
Appelqvist et al. Determination of glucose in fermentation processes by means of an on-line coupled flow-injection system using enzyme sensors based on chemically modified electrodes
Kjellén et al. Enzyme electrode for phenol
Lubrano et al. Amperometric alcohol electrode with extended linearity and reduced interferences
Hemphill et al. 5′-Adenosine Monophosphate Aminohydrolase: EVIDENCE FOR ANOMALOUS SUBSTRATE SATURATION KINETICS AT LOW ENZYME CONCENTRATIONS