SU1242823A1 - Способ дифференциальной диагностики первичной пищевой аллергии от вторичной - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине . Цель изобретени  - повьшение точности способа за счет и спользо- вани  в качестве маркера субстрата белка меченного J. Больному дают 10 мл 0,01%-ного водного раствора сывороточного альбумина, меченного изотопом . Через 110-120 Мин берут пробы дуоденального содержимого. Пробы центрифугируют. Полученный су- пернатант подвергают колоночной хроматографии на сефарозе, конъюгиро- банной с моноспецифическими антителами против введенного белка. Затем колонку отмывают фосфатным буфером. Элюируют св завшиес  с антителами меченые антигены 0,1 М глицин-HCl буфером. Подсчитывают их радиоактивность , соотнос т ее с радиоактивностью материала, нанесенного на колонку . Выражают в процентик количество нерасщепленного белка, сохранившего антигенную специфичность. При значении полученного показател  1-2% от количества введенного белка диагностируют первичную пищевую аллергию, 1 табл. (Л ISD 4аь Nd 00 to 00

Description

I12A2823

Изобретение относитс  к медицине , может быть использовано при диагостике заболеваний желудочно-кишечого T.pakTa.

Цель изобретени  - повьппение точости за счет использовани  в качестсо ге

43 с уч са  с 19 ин но д  ЖИ си ал ни ей но ки ор вы ци ло ло че че не ли лу тр на ам жи тр ам

ве маркера и субстрата белка, меченного

ISI

J.

Способ осуществл етс  следующим образом,

Больному натощак дают выпить 10 мл 0,01%-ного водного раствора человеческого сывороточного альбумина , меченного изотопом J общей радиоактивностью 1,510 срм (имп, в.минуту). С помощью зонда отбирают пробы дуоденального содержшчого через 30, 60, 90 и 120 мин после введени  белка. Определ ют их радиоак- тивност. После этого центрифугируют . Полученный супернатант подвергают колоночной хроматографии на сефарозе, конъю-гированной с моноспецифическими антителами против введенного белка. Затем колонку от- мьюают 0,1 N фосфатным буфером рН 7,4-7,5, элюирутот св завшиес  с антителами меченые антигены 0,1 М глицин-НСЕ буфером рН 2,8-3,,О, подсчитывают их радиоакткЕ.ность, соотнос т ее с радиоактивностью материала , нанесенного на колонку, и выражают количество нерасщепленного белка , сохранившего антигенную, специфичность , в процентах

Дл  получени  моноспецифических антител к данному антигену человеческого сывороточного альбумина (Reanal, ВНР) готов т антисыворотку путем подкожной иммунизации кроликов с неполным адьювантом Фрейнда (Dif- со, США). Моноспецифические антитела к человеческому сывороточному альбумину вьщел ют на соответствующе иммуносорбенте (ЧСА, иммобилизован- ньш на BrCN - активированной сефарозе 4В, Pharmacia, Швеци ). Затем антитела адсорбируют на протеин-А се- фароэе (Pharmacia, Швеци ) следующим образом; на колонку с протеин-А се- фарозой (объ ем гел - 1,0 мл) нанос т 0,7 мл 1%-ного раствора антител в 0,1 М фосфатном буфере рН 7,4, после чего пров од т элюцию 10 мл этого же буфера до полного удалени  антител, не св завшихс  с протеин-А сефарозой Удельна  емкость полученного иммуно

)

5

0

5

0

.

5

40

50

55

сорбента составл ет 5 мг ЧСА на 1 мл гел .

Пример 1. Больна  Л-а Л.Е. 43 года, госпитализирована в св зи с приступообразными бол ми в разных участках живота, склонностью к поносам , общей слабостью. Из анамнеза вы снено , что считает себ  больной с 1969 г, после перенесенной пищевой интоксикации. Периодически отмечает ноющие боли по всему животу, перехо- . д щие по временам в сваткообразные, ЖИДКИ стул 3-5 раз в день, прогрес- сируюпдую потерю в весе. Дифференциальный диагноз проводилс  между хроническим энтороколитом и дискинези- ей тонкого кишечника по гипермоторному .типу. При пассаже по тонкой кишке рентгенологических признаков органического поражени  кишечника не вы влено,, При холецистографии - функционирующий желчный пузырь. Копро- логическое исследование: мьш1ечные волокна , переваренные в умеренном количестве , крахмал - значительное количество , жирные кислоты - немного, нейтрешьный жир - незначительное ко- личество,. Активность ферментов .поджелудочной железы в сыворотке крови: трипсина 4,6 Кед, ингибитора трипси- на 466 Ме,д-липазы 27,7 ммоль/мл, амилазы 315 ед. В дуоденальном содержимом: .трипсина 346 Мед, ингибитора трипсина 56 Мед, липазы 473 ммоль/мл, амилазы 782 ед.

Таким образом, примен емые в кли- н:ических услови х диагностические методы, характеризующие функциональное состо Яние кишечника, не давали указаний на органическое поражение тонкой кишки. Дл  уточнени  диагнос-, тики с помощью вы влени  нарушг.ний протеолитической активности желудочно-кишечного тракта применен предлагаемый способ.

Дл  получе.ни  химуса из проксимальных отделов тощей кишки используют 4-канальный зонд с латексным баллоном, расположенным дистальнее эспирационного отверсти . Зонд вводитс  больному натощак под рентгенологическим контролем с таким расче- том, чтобы окклюзи  кишки путем наполнени  баллона.воздухом производилась на уровне 20-25 см ниже трейце- вой св зки. Как правило, дл  полного перекрыти  кишки достаточно 20 мл воздуха, вводимогб в баллон с

помощью шприца. Надежность окклюзии контролируетс  путем аспирации содер жнмого кишки ниже баллона. После установлени  зонда на нужном уровне и раздувани  баллонй больному натощак перорально ввод т человеческий .сывороточньй альбумин, меченный , в количестве 10 мд О,01%-ного водного раствора. Пробы кишечного содержимого получают через 30, 60, 90 и 120 мин после введени  препарата.

Дл  определени  человеческого сывороточного альбумина, сохранив- шего специфичность в дуоденальном содержимом, примен ют метод иммуно- сорбции на колонках. В качестве им- муносорбента используют протеин-А-4В сефарозу с иммобилизованными на ней антителами против человеческого сывороточного альбумина (см. методику получени  иммуносорбентов). Перед нанесением образцов кишечного химуса на иммуносорбент в пробах, получен - ных через 30, 60, 90 и 120 мин, опре дел ют радиоактивность на к лодезНОМ гамма-счетчике NZ-138 .GAMMA (Венгри ). Затем пробы объедин ют, отбирают 10-15 мл и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин.« После этого 1,0 мл супернатанта нанос т на колонку с иммуносорбентом (объем гел  - 0,5 мл, удельна  емкость 5 мг ЧСА на Т мл гел ). Колонку отмьгоают 20 мл 0,1 N фосфатного буфера рН 7,4-7,5, а затем элюиру- ют: св завшиес  с антителами меченые антигены 5 мл 0,1М глицин- НС буфером рН 3,0. Радиоактивность элюантов определ ют аналогично описанному.

В химусе, полученном из проксимальных отделов тонкой кишки больной Л-ой Л.Е., обнаружено до 82% человеческого сывороточного альбумина с антигенной активностью исходного белка. При этом рН желудочного содержимого 7,8, протеолитическа  активность желудочного сока 7,2 ед. Отсутствие у больной изменений ферментативной активности поджелудочной железы позвол ет считать, что нарушение протеолиза обусловлено органическим поражением тонкой кишки и служит подтверждением диагноза хронического энтерита.

Пример 2. Больна  А-А Л.П. 41 год, поступила в клинику в св зи с пищевой аллергией, про вл ющейс 

28234

рецидивирующей крапивницей, отеками Квинке.

Учитыва  полиморфизм этиопатогене- тических механизмов пищевой аллергии, требовалось уточнить их характер. В первую очередь было необходимо оценить ферментативную активность желудочно-кишечного тракта. Наличие у больной ожирени  П степени как

будто бы исключало возможность ферментативной недостаточности. Действительно , при исследовании функции поджелудочной железы не вы вл лось патологических сдвигов. Активность фер- .

ментов поджелудочной железы в сыворотке крови бьша представлена следую-: щими показател ми: трипсина 3,8 Мед, ингибитора трипсина 484 Мед, липазы 15 ммоль/мл, амилазы 280 ед в дуоденальном содержимом: трипсина -1

392 Мед, ингибитора трипсина 484 Мед, липазы 15 ммоль/млр амилазы 902 ед..

По методике 1 проведено количественное определение степени

гидролиза белка,

В полученных образцах дуоденального содержимого больной А-вЬй Л,П. было вы влено до 35% белка с исходной антигенной активностью. Обнаружение столь значительного количества антигенного материала в просвете тонкой кишки рассматриваетс  как одна из причин развити  пищевой аллергии и позвол ет провести целенаправленную коррекцию вы вленных нарушений

пищеварени  с помощью медикаментозных средств -(ферментных препаратов)Пример 3. Больной 3-р Ф.М., 36 лет, поступил с жалобами на приступообразные интенсивные опо сывающие боли в верхней половине живота, сопровождающиес  рвотой, расстройством стула (плохо оформленный стул 1-2 раза в день). Из анамнеза вы снено , что с 1980 г. у больного наблюдаютс  приступы абдоминальных болей описанного характера. При обследовании обнаружено резкое повышение секреторной функции желудка, при рентгеноскопии желудка - выраженна  де- ,формаци  луковицы 12-перстной кишки (что позволило констатировать наличие  звенной болезни), при холецистогра- фии - камни желчного пузыр . При неоднократном исследовании панкреатических ферментов определ лось повышение их концентрации в крови и моче. Сканирование Se-75 селенметионином

показало неравномерное снижение фиксации изотопа в поджелудочной железе

Несмотр  на констатируемую у больного нормальную активность ферментов поджелудочной железы в сыворотке крови, их нормальную концентрацию в дуоденальных образцах и наличие избыточной массы тела удалось вы вить патологическое отклонение -в гидролизе белка пищеварительного тракта (количество нерасщепленного ЧСА в дуоденальном содержимом 17%). Приведенные результаты обследовани  позволили установить диагноз калькулезного холецистита с реактивным панкреатитом,  звенной болезни 12-перстной кишки в фазе ремиссии. Из сопутствующих заболеваний у боль- ного имелось ожирение II-III степени обменно-элиментарной фдрмы.

Как следует из приведенных примеров , исследовани  показателей протео литической активности желудочно-кишечного тракта (активность пепсина, трипс ина, ингибитора трипсина, рН желудочного сока и др.) дают представление о нарушени х лишь в отдельных звень х цепи переваривани  белка Предлагаемый способ  вл етс  принци- пиально новым, поскольку дае,т интегральную оценку зффективности протеи наз в желудке и тонком кишечнике, основанную на анализе продуктов пере

варивани  белка.

Результаты исследовани  с помощью предлагаемого метода больных с различной патологией желудочно-кишечного трактэд пищевой аллергией и здо- ровьпс лиц представлены в таблице,

Количество нерасщепленного J-ЧСА, сохранившего антигенную специфичность , %

Здоровые лица

Пищева  аллерги  без поражени  желудочно-кишечного тракта

ГТродолжение таблицы.

Пищева  аллерги  с сопутствующими заболевани ми желудочно-кишечного тракта

Хронический гастрит с секреторной недостаточностью

Хронический панкреатит

Хронический энтерит

25-35

4-7

17 82

Проведенные исследовани  в клинических услови х продемонстрировали простоту предлагаемого метода, его доступность и относительную безопас ность, поскольку обща  радиоактивность вводимого белка не превьш1ает количеств, допустимых санитарными нормами дл  клинических условий.

Наиболее .сложным в предлагаемом методе  вл етс  иммунологический анализ полученного материала. Однако достаточно высока  оснащенность современных клиник и диагностических ла-- бораторий делает его, тем не менее, вполне доступным дл  практического здравоохранени .

Claims (1)

1. 40 Формулаизобрр. тени 

   Способ дифференциальной диагностики первичной пищевой аллергии от вторичной путем клинического исследовани  больного, о тлич.ающий- с   тем, что, с целью повышени  точности способа, больному ввод т человеческий сывороточный альбумин, ме- ченньй , через 110-120 мин после введени  альбумина производ т забор содержимого из проксимального отдела тонкого кишечника и определ ют в нем содержание экзогенного альбумина, сохранившего антигенные детерминанты, и при значении полученного показател  1-2% от количества введенного белка диагностируют первичную пищевую аллергию.