SU1228809A1 - Способ определени сульфгидрильных групп в крови - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к биохимии, в частности к способам физико-химического (электрохимического ) анализа крови на содержание сульфгидрильных (SH)-групп.

Цель изобретени  -- повышение точности способа и сокращение времени исследовани  за счет изменени  носледовательности добавлени  реагентов и определенного соотношени  азотпо-кислого серебра и сульфгидрильных групп.

Способ осуществл етс  следующим образом .

Вначале пробу крови приливают к буферному раствору, затем добавл ют растнюр азотно-кислого серебра в количестве, заведомо большем, чем необходимо дл  св зывани  сульфгидрильных групп в крови, в соотношении с сульфгидрильными группами 1:(1,5- -2) и измер ют диффузионный ток, но величине которого с помощью номограммы определ ют содержание сульфгидрильных групп.

Пример. 0,1 мл исследуемой крови ге- молизируют в бидистиллированной воде при разведении 1:20, 0,5 мл полученного гемо- лизата перенос т в электролитическую  чейку , содержащую 20 мл буферного раствора NH40H и NH4NO:i. Затем добавл ют 0,6 мл 0,001 М раствора азотно-кислого серебра. Далее измер ют диффузионный ток, характеризующий концентрацию избытка ионов серебра, оставщихс  в исследуемом растворе, по величине которого определ ют содержание SH-rpynn. При этом исследовательска  установка снабжена номограммой , на которой отражена линейна  зависимость диффузионного тока, измер емого на последней стадии анализа, от концентрации избыточного азотно-кислого серебра. Дл  повьциени  точности определени  указанна  линейна  зависимость (дл  данного комплекта аппаратуры) может быть выражена простейшей формулой. Сила тока зависит от концентрации электролитов в растворе и от величины потенциала. При амперометри- ческих исследовани х разность потенциалов между двум  электродами электролитической  чейки поддерживают посто нной, что позвол ет по силе тока судить о величине (и за изменением) концентрации электролитов в растворе.

Учитыва , что 1 мл 0,001 М раствора азот- но кислого серебра эквивалентен 1 мкМ сульфгидрильных грунп, содержание которых обычно относ т к 100 мл субстрата, формула имеет вид

S

-b(Ii--lo),

гл,е S - количество SH-rpynn субстрата на 100 кл крови, в мкМ 100 мл; VSH - объем исследуемого субстрата, мл;

А - степе} ь разбавлени  крови; Aij - объем раствора 0,001 М азотнокислого серебра, мл; };. - масштабный коэффициент, определ емый дл  данного комплекта а-п- паратуры в холостом опыте, в мкМ/мкА; . - диффузионный ток, соответствуюищй избытку .4p.NO(, мкА; 1о фоновой диффузионный ток, мкА.

При посто нных услови х опыта (степень разбавлени , объемы используемых растворов ) формула может упроститьс : S : с -- b(I,-Io),

К анализируемому раствору (гемолизату,

растворенному в буферном растворе NH4OH и NH-jNO.;), не содержащему электроактивных компонентов, которые могли бы обусловить диффузионный ток более I-2 мкА, добавл ют избыток раствора AgNOj. Пос ледний взаимодействует с имеющимис  SH- группами анализируемого раствора, в результате чего диффузионный ток, измер емый после этой добавки, соответствует концентрации избыточной части введенного азотнокислого серебра. Зна  исходное количество

ионов и величину их остатка, по израсходованному количеству определ ют концентрацию SH-rpynn (CUg Cs). В описываемых услови х опыта Vs/, 0,5 мл; а 20; VA 0,6 .мл; b 40 мкМ/мкА; Ii 32 мкА;

0 1о 1 мкА. Тогда S 1160 мкМ/100 мл. При посто нных услови х опыта (посто нны степень разбавлени , объемы исследуемого субстрата и раствора азотно-кислого серебра) С 2400 мкМ/100 мл и S также равно 1160 мкМ/100 мл.

В таблице гфивод тс  дополнительные примеры на средние и граничные значени  соотношени  количеств SH-rpynn и AgNOs при определении SH-rpynn в 0,1 мл крови.

5

1220 1176 1216

4-5 4-5 4-5

Claims (1)

1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЛЬНЫХ ГРУПП В КРОВИ путем смешивания аммиачного буферного раствора, раствора азотно-кислого серебра и исследуемой пробы с последующей регистрацией диффузионного тока, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и сокращения времени исследования, пробу добавляют к буферному раствору, затем приливают раствор азотнокислого серебра при молярном соотношении с сульфгидрильными группами 1:(1,5—2), а диффузионный ток измеряют однократно.

   ω ю ю QO QO о

   С0