SU1212430A1

SU1212430A1 - Method of obtaining diabetogenic factor

Info

Publication number: SU1212430A1
Application number: SU843747660A
Authority: SU
Inventors: Борис Александрович Кудряшов; Людмила Анисимовна Ляпина; Александр Михайлович Ульянов
Original assignee: МГУ им.М.В.Ломоносова
Priority date: 1984-05-31
Filing date: 1984-05-31
Publication date: 1986-02-23

Description

Изобретение относитс к способам получени биологически активного фактора и может найти применение при изучении этиологии и патогенеза сахарного диабета, в экспериментальной фармакологии, биохимии физиологии и патофизиологии.The invention relates to methods for producing a biologically active factor and can be used in studying the etiology and pathogenesis of diabetes mellitus, in experimental pharmacology, biochemistry of physiology, and pathophysiology.

Целью изобретени вл етс повышение активности. The aim of the invention is to increase activity.

Яр«л(.ер /. ivfin плазмы крови от крьГс р .раз&йвшймс ал оксановым диабетом , добавл ют равный бъем (10мл) насыщенного охлажденчого {)асц-БОра сернокислого Д1()они , выдерживак - 15-30. мин на-хоДо у, центриф ги,р| ют в гечение 15 мин при lepO об/мий. Ocaflewf содержащий гло- булинь, отбрасьй ают, а к центрифугату добавл ют тонко измельченный порощок сер- но-кислого аммони до полного насыщени . Через 15-30 мин сто ни проб на холоду их центрифугируют в течение 10-15 мин при 1800 об/мин. Осадок, альбумины, раствор ют в 3,3 мл физиологического раствора NaCl и став т на диализ против физиологического раствора NaCl на 16-18 ч дл освобождени от ионов аммони . Диализат подвергают ультрацентрифугированию в градиенте плотности сахарозы в течение 1,5-2 ч при 105-107 тыс. на ультрацентрифуге при +2,5-3°С с использованием 4% сахарозы.Yar "l. (.Er /. Ivfin plasma of blood from crustaceans of races and amp; diabetes), add an equal volume (10 ml) of saturated () cooled asc-bohr D1 sulfate (), soaking 15-30. min on-hodo, centrifuges, p | for 15 minutes at lepO rev / min. Ocaflewf containing globulin is discarded, and a finely powdered ammonium sulphate is added to the centrifugal until complete saturation. After 15-30 minutes, a hundred samples in the cold are centrifuged for 10-15 minutes at 1800 rpm. The precipitate, albumin, is dissolved in 3.3 ml of physiological NaCl solution and placed on dialysis against physiological NaCl solution for 16-18 hours to free it from ammonium ions. Dialysate is subjected to ultracentrifugation in a sucrose density gradient for 1.5-2 hours at 105-107 thousand in an ultracentrifuge at + 2.5-3 ° С using 4% sucrose.

Фракции, выделенные над 4% сахарозой, подвергают электрофоре 1г:ческому анализу на чистоту препаратов и на диабетоген- ность. Фракци над 4% сахарозой при SDS- электрофорезе в геле полиакриламида была гомогенна (содержала одну полосу) с молекул рной массой 60 тыс. При проверке фракции на диабетогенность установленоThe fractions isolated over 4% sucrose are subjected to electrophore 1g: a chemical analysis for the purity of the preparations and for diabethogenicity. The fraction over 4% sucrose in SDS-electrophoresis in a gel of polyacrylamide was homogeneous (contained one band) with a molecular weight of 60 thousand. When checking the fraction for diabetes pathogenicity

повышение уровн сахара крови уже черезan increase in blood sugar levels already through

7дней после начала опыта на 40-50 мг%. Это повышение сохран лось до 30 дней опыта.7 days after the start of the experiment at 40-50 mg%. This increase was maintained for up to 30 days of experience.

Пример 2. Берут 10 мл плазмы крови от больных сахарным диабетом людей и 10 мл контрольной донорской, плазмы от здоровых людей. Дальнейшие операции провод т согласно примеру 1.Example 2. Take 10 ml of blood plasma from people with diabetes mellitus and 10 ml of the control donor, plasma from healthy people. Further operations are carried out according to example 1.

Получают фракции над 5% сахарозой,Get fractions over 5% sucrose,

их провер ют на чистоту, определ ют молекул рную массу с помощью SDS-электро- фореза в геле полиакриламида. Установлена гомогенность фактора над 5% сахарозой от больных людей. Этот фактор имел молекул рную массу 60 тыс. дальтон. В контрольной фракции над 5% сахарозой от здоровых людей установлено 3 полосы - с молекул рными массами 15 тыс, 40 тыс и 68 тыс.they are checked for purity, the molecular weight is determined by SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The homogeneity of the factor over 5% sucrose from sick people has been established. This factor had a molecular weight of 60 thousand daltons. In the control fraction over 5% sucrose from healthy people, 3 bands were established - with molecular masses of 15 thousand, 40 thousand and 68 thousand.

Выделенные фракции над 5% сахарозой подвергают анализу на диабетогенность, дл чего крысам-самцам ежедневно через каждые 24 ч ввод т внутривенно по 1 мл фракции на 200 г массы тела в течение трех дней. Через 7, 14 и 30 дней после введени у крыс в крови определ ют уро- вень сахара. Фракци больного человека над 5% сахарозой вызывает стойкое повышение уровн сахара крови - от 109 мг% (фон) до 142 мг% (через 7 дней), 180 мг% (через 14 дней), 172 мг% (через 30 дней).The isolated fractions above 5% sucrose are analyzed for diabetic potency, for which male rats are given intravenous 1 ml of the fraction per 200 g of body weight daily for 24 days every 24 hours. 7, 14 and 30 days after administration, the level of sugar in the rats is determined in the blood. The fraction of a sick person over 5% sucrose causes a persistent increase in blood sugar level - from 109 mg% (background) to 142 mg% (after 7 days), 180 mg% (after 14 days), 172 mg% (after 30 days).

8то же врем фракци над 5% сахарозой контрольной плазмы крови от здоровых людей никакого изменени в уровне сахара не вызывает-111мг% (фон),106мг% (через 7 дней), 108 мг% (через 14 дней), 102 мг% (через 30 дней).At the same time, the fraction over 5% sucrose of the control blood plasma from healthy people does not cause any change in the level of sugar — 111 mg% (background), 106 mg% (after 7 days), 108 mg% (after 14 days), 102 mg% (through 30 days).

Claims

METHOD FOR PRODUCING A DIABETOGENIC FACTOR by treating blood with an anticoagulant (citrate or sodium oxalate) followed by purification, characterized in that, in order to increase activity, the blood is treated with saturated chilled solution of ammonium sulfate, ammonium sulfate powder is added to the supernatant, the precipitate dissolved in physiological saline, dialysis, dialysate is subjected to ultracentrifugation in a sucrose density gradient.