SU1199796A1

SU1199796A1 - Method of storing cell cultures of man and animals

Info

Publication number: SU1199796A1
Application number: SU843717762A
Authority: SU
Inventors: Валерий Николаевич Карнаухов; Борис Карпович Гаврилюк
Original assignee: Институт биологической физики АН СССР
Priority date: 1984-03-29
Filing date: 1984-03-29
Publication date: 1985-12-23

Abstract

СПОСОБ ХРАНШИЯ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА в ростовой среде, отличающийс тем, что, с цепью увеличени длительности переживани клеток, клеточщто культуру предварительно выдерживают в питательной среде, содержащей 0,05-0,1% масл ного раствора каролшоидов в виде субмикронной змульсии, в течение 1-2 суток.THE METHOD OF STORAGE OF ANIMAL AND HUMAN CELL CULTURES in a growth medium, characterized in that, with a chain for increasing the duration of cell survival, the cell is pre-cultured in a nutrient medium containing 0.05-0.1% of an oil solution of carolsoid in the form of a submicron emulsion, 1-2 days.

Description

99

Г-G-

ОABOUT

;о;about

СОWITH

о Изобретение относитс к биологии и може быть использовано в биотехнологии, медицин и BCTepifflapHH дл обеспечени переживани и сохранени клеток животных и человека. Цель изобретени - увеличение длительнос ти переживани клеток. Пример 1. Хранение культуры кле-ток фибробластов ВНК-21. - Готов т 1%-ную субмикронную эмульсию . комерческого масЛй ого раствора витамина А (содержащего витамина А или 25(00 м. ед. в 1 мл) путем экструзии смеси 9 -мл среды Игла ( Хенкса), 1 мл масл ного, расувора витамина А и 0,1 мл фосфодшидаДилн-нроксанола), который доба ЛЯЮ1 дан получени устойчивой эмульсии, на дезинтеграто1)е клеток микроорганизмов (ДКМ-1) до получени эмульсии с размером частиц 0,1-0,2 мкм. Получетгую субмикронную эмульсикГ добав л ют в количестве 0,1% (т.е. 0,01% исходного масл ного раствора витамина А) в питательную среду Игла, содержащую 10% сыворотки крупного рогатого скота, куда затем внос т выращеннуй культуру клеток фибробластов ВНК-21 в количестве 2 10 кл/мл и вырапдивают в этой среде в течение 24 ч. при 37°С. ; Затем выдер;ка1шые в такой среде клетки перенос т в обычную дл фибробластов росховзю питательную среду Игла с 10% сыворотки крупного рогатого скота и хран т в ней лри З7с без смены питательной среды . В этих услови х клетки сохран ют свою жизнеспособность в течение 50 сут. Жизнеспособность клеток определ ют с помощью прижизненной окраски 0,1%-ным раствором акридинового оранжевого и нейтрального красного в течение 1-2 мин. Количество ; живых клеток после хранени предлагаемым способом составл ет 50%. .Пример 2. Хранение культуры кле ток зпидермоцитов человека. ; Готов т 1%-ную субмикрогщую эмульсию комерческого масл ного раствора смеси витаминов А и. Е аналогично примеру I, и добавл ют ее в количестве 0,5% (т. е. 0,005% исходного масл ного раствора) в питательную среду 199, содержащую 20% фетальной сыворотки крупного рогатого скота . Выращенную культуру клеток кератиноцигов человека внос т в полученную среду в количестве 210 кл/мл и выдерживают в ней в течение 48 ч при 37°С. Затем выдержанную таким образом культуру перенос т в питательную среду 199, содержащую 20% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, и хран т в ней при 37 С ;без смены питательно среды. В этих услови х клетки сохран ют свою жизнеспособность в течение 160 сут. Kojraчество жизнеспособных клеток после хранени составл ет 50%. Жизнеспособность определ ют аналогично приржру 1. Пример 3. Хранение культуры клеток почек эмбриона человека. Готов т 1%-ную субмикрош1ую эмульсшо комерческого облепихового масла (содержит 230-300 мг каротнноидов: об, Д , V -каротины, ликонин, зеаксантин, фитофлюин и т. д.) аналогипга примеру 1 и добавл ют ее в количестве 1% (т.е. 0,01% исходного облепихового масла) в питательную среду 199, содержащую 10% сыворотки крупного рогатого асота. Первичную культуру клеток почечного эпители эмбриона человека в количестве кл/мл помещают в приготовленную среду и выдерживают в ней при 37°С в течение 24 ч. Затем эти клетки перенос т дл хранени в обычную ростовую питательную среду 199 с 10% Сыворотки/ крупного рогатого скота и хран т в. ней при 37 С без смены питательной среды. . В этих услови х клетки сохран ют свою :. жизнеспособность в течение 90 сут. Жизнеспо собность клеток определ ют аналогично примеру 1. Количество живых клеток после хранени их в течение 90 дней составл ет 50%.o The invention relates to biology and can be used in biotechnology, medicine and BCTepifflapHH to ensure the survival and preservation of animal and human cells. The purpose of the invention is to increase the cell survival time. Example 1. Storage culture cells fibroblasts VNK-21. - Prepare 1% submicron emulsion. a commercial oil solution of vitamin A (containing vitamin A or 25 (00 m units per 1 ml) by extrusion of a mixture of 9 ml Eagle's medium (Hanks), 1 ml of oil, vitamin A and 0.1 ml of phosphoxide Diln-nroxanol ), which is added to obtain a stable emulsion, on disintegrato1) e of microorganism cells (DKM-1) to obtain an emulsion with a particle size of 0.1-0.2 µm. The resulting submicron emulsion G is added in an amount of 0.1% (i.e., 0.01% of the original oil solution of vitamin A) into the nutrient medium Eagle, containing 10% cattle serum, to which the culture of HBK fibroblasts is then grown. -21 in the amount of 2 to 10 cells / ml and sown in this medium for 24 hours at 37 ° C. ; Then, the cells that are expelled in such an environment are transferred to the usual nutrient medium for fibroblasts Roskhozu Needle with 10% bovine serum and stored there in it without changing the nutrient medium. Under these conditions, cells retain their viability for 50 days. Cell viability is determined by in vivo staining with 0.1% acridine orange and neutral red for 1-2 minutes. Amount ; living cells after storage by the proposed method is 50%. Example 2. Storage of culture cells of human zperdermocytes. ; A 1% submicrocial emulsion is prepared with a commercial oil solution of a mixture of vitamins A and. E as in Example I, and add it in the amount of 0.5% (i.e., 0.005% of the original oil solution) to the nutrient medium 199 containing 20% fetal bovine serum. The grown cultured cells of human keratinocygs are introduced into the resulting medium in the amount of 210 cells / ml and kept there for 48 hours at 37 ° C. The culture thus aged is then transferred to medium 199, containing 20% fetal bovine serum, and stored in it at 37 ° C without changing nutrient medium. Under these conditions, cells retain their viability for 160 days. The number of viable cells after storage is 50%. Viability is determined in the same manner as in Figure 1. Example 3. Storage of a culture of human embryonic kidney cells. Prepare a 1% submicroscopic emulsion of commercial sea buckthorn oil (contains 230-300 mg of carotenoids: ob, D, V-carotene, likonin, zeaxanthin, phytofluine, etc.) analogue of example 1 and add it in an amount of 1% ( i.e., 0.01% of the original sea-buckthorn oil) in a nutrient medium 199 containing 10% bovine asot serum. A primary culture of human renal epithelium cells of the embryo in the amount of cells / ml is placed in the prepared medium and kept there at 37 ° C for 24 hours. Then these cells are transferred for storage in normal growth medium 199 with 10% Serum / cattle and stored in. it at 37 C without changing the nutrient medium. . Under these conditions, the cells retain their:. viability for 90 days. Cell viability is determined as in Example 1. The number of living cells after storing them for 90 days is 50%.

Claims

METHOD FOR STORING ANIMAL AND HUMAN CELL CULTURE in a growth medium, characterized in that, in order to increase the duration of cell survival, the cell culture is preliminarily maintained in a nutrient medium containing 0.05-0.1% oil solution of carotenoids in the form of a submicron emulsion for 1-2 days.

SU .... 1199796