SU1189448A1

SU1189448A1 - Среда для криоконсервации спермы быков

Info

Publication number: SU1189448A1
Application number: SU843742635A
Authority: SU
Inventors: Lyudmila A Begma
Original assignee: Uk Nii Razvedeniya Iskusstvenn
Priority date: 1984-04-13
Filing date: 1984-04-13
Publication date: 1985-11-07

Description

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, а именно к защитным средам для разбавления и криогенной консервации спермы животных, и может быть использовано на племпредприятиях и станциях искусственного осеменения.

Цель изобретения — повышение сохранности биологической полноценности сперми-

ев при их криоконсервации. Пример 1. Используется с	:перма быков
черно-пестрой породы, а также	симментальс-
кой. Непосредственно после получения эяку-
лят делят на 3 части, каждую из них раз-
бавляют одной из сред: предлагаемой, извест
ной или базовой.
Известная среда содержит,	мас.%:
Рафиноза	18,0
Глутатион восстанов-
ленный	0,46
Трис(гидроксиметил)
аминометан	0,15
р-Амилаза	0,1
£-Глюкуронидаза	0,26
Альдолаза	0,5
Капроновая кислота	0,25
Яичный желток	20,0
Вода дистиллированная	Остальное

Предварительно проведено сравнение различных вариантов известной среды. Указанный вариант имеет наиболее высокие показатели сохраняемой спермы, согласно рецептуре соотношение понижает качествен- ³⁰ные показатели оттаянной спермы более, чем в 2 раза.

В качестве базовой среды используют общеприменяемую в искусственном осеменении лактозо-глицерино-желточную среду, имеющую следующий состав:· ⁴⁵

38—40°С. Жизнедеятельность оттаянной спермы оценивают по показателям подвижности и выживаемости.

Подвижность определяют в раздавлен5 ной капле спермы под микроскопом в проходящем свете при увеличении в 100— 180 раз с использованием нагревательного столика при 40—41°С. Оценку подвижности производят по десятибальной шкале.

Выживаемость в часах определяют по количеству времени, прошедшего от размораживания спермы до ее гибели при хранении в термостате (ί = 38°С).

Абсолютный показатель выживаемости (5а): для его определения проводят оценку

15 подвижности оттаянной спермы, хранящейся при 38°С через каждый час до ее гибели. Суммарная подвижность спермиев за время их жизни и является абсолютным показателем выживаемости.

Показатели жизнедеятельности разморо²⁰ женной спермы (п = 8) приведена в табл. 2.

Из табл. 2 следует, что предлагаемая среда обеспечивает повышение подвижности и выживаемости спермиев по сравнению с известной средой. При этом пока25 затель выживаемости увеличивается на 15—35%. В сравнении с базовой средой

предлагаемая обеспечивает повышение выживаемости и абсолютного показателя выживаемости на 42—73%.

Пример 2. В опыте используют известную среду, базовую, а также предлагаемую среду, переведенную методом сублимации в сухое состояние. Предварительно для высушивания готовят предлагаемую среду следующего состава:

Лактоза, г	11,5
Желток куриных яиц, мл	20,0
Глицерин, мл	5,0
Спермосан-3, тыс.ед.	50,0
Вода дистиллированная,
мл	100,0
Помимо указанных, в опыте используют

предлагаемые среды, составы которых приведены в табл. 1.

Среды для криоконсервации спермы животных готовят следующим образом: навеску ⁴⁵сахарозы растворяют прокипяченной дистиллированной водой и стерилизуют в кипящей водяной бане 5—10 мин, затем охлаждают до 40—50°С и вводят остальные компоненты. 50

Разбавленную сперму охлаждают в холодильнике до 5°С и замораживают на фторопластовой пластине в парах азота при —60°С в течение З мин.

Замороженную сперму хранят в жидком 55 азоте при —196°С.

Размораживание спермы производят в 2,9% водном растворе цитрата натрия при

Сахароза, г Глутатион восстановлен-	9,5
ный, г	0,4
Трис(гидроксиметил)-	0,34
аминометан, г
Глутаминовая кисло-
та, г	0,22
Серицин, г	0,4
Желток куриных яиц, мл	20,0
Спермосан-3, тыс.ед. Вода дистиллирован-	50,0
ная, мл	100,0
Затем среду замораживают и высуши-

вают путем сублимации. Сухую среду хранят в запаянных ампулах. Непосредственно перед использованием растворяют в прокипяченной и остывшей дистиллированной воде в соотношении 1:4,5 или 1:5.

Сперму, разбавленную предлагаемой средой, а также известной средой и базовой охлаждают в холодильнике до 5°С и замораживают в гранулах на фторопластовой пластине в парах азота при —60°С.

Замороженную сперму хранят в жидком азоте при 1 = — 196°С. Размораживают сперму в 2,9% водном растворе цитрата натрия при с = 40°С.

I

3

1189448

4

Показатели жизнедеятельности размороженной спермы представлены в табл. 2 (см. сухая среда).

Пример 3. В опыте используют известную среду базовую, а также предлагаемые среды следующего состава (см. табл. 3).

Разбавление спермы предлагаемой средой проводят в два этапа — вначале состав А на половину конечной степени разбавления при 30°С.

Разбавленную сперму охлаждают в холодильнике до 4°С в течение 4—5 ч и затем вторично разбавляют предлагаемой средой Б. Температура среды в момент дополнительного разбавления равна 4°С. Замораживание проводят через час после вторичного разбавления на фторопластовой пластине при —60°С.

Замороженную сперму хранят в жидком азоте при —196°С.

Биологическую полноценность замороженной спермы оценивают по показателям подвижности и выживаемости.

Показатели жизнедеятельности размороженной спермы быков (п = 24) приведены в табл. 4.

Определение оплодотворяющей способности спермы, разбавленной и замороженной проверяемыми средами проводят в опытном хозяйстве. Оплодотворяемость коров определяли ректальным способом по истечении 120 дн.

Оплодотворяемость телок после осеменения спермой, замороженной в различных средах, приведена в табл. 5.

Приведенные в примерах результаты свидетельствуют о более высокой биологической полноценности спермы при применении предлагаемой среды в сравнении с из₅ вестной средой (а также и с базовой средой). Это проявляется в более высокой подвижности оттаянных спермиев на 7% (табл. 3), что свидетельствует о более высокой устойчивости спермиев к замораживанию;

10

в повышении времени выживаемости оттаянных спермиев на 16% (табл. 4) — 19,5% (табл. 2);

в значительном увеличении абсолютного ,5 показателя выживаемости на 43% (табл. 4) при статистически значимой разнице (р<0,01). что свидетельствует о более высокой жизнеспособности оттаянной спермы и в повышении оплодотворяющей способности спермы, замороженной в предлагае²⁰ мой среде в сравнении с известной на 17,1%.

Таким образом, предлагаемая среда эффективно защищает спермин при замораживании и позволяет сохранять их в тече25 ние длительного времени. При этом после размораживания спермин характеризуются хорошей подвижностью, выживаемостью и оплодотворяющей способностью. Кроме того, предлагаемая среда сохраняет свои качества и будучи переведена в сухое состоя30 ние, что значительно упрощает ее использование, транспортировку, а также длительное хранение.

			Табл	и ц а 1
Компоненты состава	Состав
1	2	3	4
Сахароза, г	6,7	9,5	11,5	13,0
Глутатион восстановленный, г	0,2	0,4	0,8	0,2
Трис(гидроксиметил)аминоме-
тан, г	0, 18	0,34	0,51	0,41
Глутаминовая кислота, г	0,1	0,22	0,22	0,3
Серицин, г	0,2	0,4	0,2	0,4
Желток куриных яиц, мл	15,0	20,0	20,0	20
Спермосан-3, тыс. ед.	75,0	50,0	75,0	50,0
Вода дистиллированная, мл	100,0	100,0	100,0	100

1189448

6

5

Таблица 2

Защитные среды	Подвижность спермиев, баллы	Выживаемость, ч	Абсолютный показатель выживаемости
Предлагаемые	4,08±0,174	8,25+0,619	26,2+1,69
	4,23+0,125	8,38+0,460	25,5+1,401
	4,1 +0,149	7,13±0,718	21,8+1,98
	4,13+0,13	8,0 +0,91	24,4+2,34
Сухая	4,21+0,113	9,21+0,648	26,5+2,56
Известная	4,07+0,175	6,18±0,81	21,2+2,93
Базовая	4,47+0,195	4,83+0,58	15,25+3,6

Таблица 3

Компоненты состава	Состав
А	Б
Лактоза, г	6,7	13
Глутатион восстановленный, г	0,4	0,8
Трис(гидроксиметил)аминометан, г	0,34	0,51
Глутаминовая кислота, г	0,22	0,22
Серицин, г	0,2	0,4
Желток куриных яиц, мл	20,0	20,0
Спермосан-3, тыс. ед.	50,0	50,0
Вода дистиллированная, мл	До 100	До 100

3

7

8

1189448

Таблица 4

Показатели	Среда		Разница,	2
Предлагаемая	Известная	Базовая	к базовой	к известной
Подвижность спер-
миев, баллы	4,69+0,09	4,3±0,36	4,60±	+ 2	+ 7
			±0,099
Выжимаемость, ч	10,0+0,534	8,6+0,71	5,67+	+ 76	+ 16
			+0,683
Абсолютный показа-
тель выживаемости	36,96+2,229	25,88+	18,67+	+98	+43
		±1,9	±2,806

Таблица 5

Среда

	Предлагаемая	Известная	Базовая
Осеменено, голов	52	36	29
Оплодотворилось, голов	45	25	20
Оплодотворяемость, %	86,5	69,4	69

Claims

СРЕДА ДЛЯ КРИОКОНСЕРВАЦИИ СПЕРМЫ БЫКОВ, содержащая сахарозу или лактозу, глутатион восстановленный, трис(гидроксиметил) аминометан, желток куриных яиц, спермосан-3 и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения сохранности биологической полноценности спермиев, она дополнительно содержит серицин и глутаминовую кислоту при следующем соотношении компонентов, мае. %:

Сахароза или лактоза 6,7—13,0

Глутатион восстановленный 0,2—0,8 Трис(гидроксиметил)

аминометан 0,18—0,54

Серицин 0,2—0,8

Глутаминовая кислота 0,1-^-0,3

Желток куриных яиц 15—20

Спермосан-3, тыс.ед. 50—75

Вода дистиллированная Остальное

00

00

1
2

1189448