SU1178761A1 - Способ идентификации ингибиторов протеиназ - Google Patents
Способ идентификации ингибиторов протеиназ Download PDFInfo
- Publication number
- SU1178761A1 SU1178761A1 SU833653896A SU3653896A SU1178761A1 SU 1178761 A1 SU1178761 A1 SU 1178761A1 SU 833653896 A SU833653896 A SU 833653896A SU 3653896 A SU3653896 A SU 3653896A SU 1178761 A1 SU1178761 A1 SU 1178761A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- film
- proteinase
- gel
- filter paper
- inhibitors
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНАЗ путем фракционировани белка в гел х, отличающ и и с тем, что, с целью повышени чувСтвительно(:ти и упрощени способа, на раздел ющий гель после фракционировани накладывают лист фильтровальной бумаги, смоченной раствором протеиназы в буфере с рН, оптимальным дл используемой протеиназы , и с активностью протеиназы , соответствующей активности трипсина в концентрации 0,0250 ,05 мг/мл, через 10-30 мин бумагу удал ют, на гель накладывают фотопленку типов Фото или Аэропленка и инкубируют до визуального обнаружени на фотопленке полос неразрушенного желатина, снимают фотопленку с гел , накладьшают на нее лист влажной фильтровальной бумаги и идентифицируют ингибиторы по зо . нам неразрушенного желатина в виде i темных полос на прозрачном фоне фотопленки или светлых полос на (Л темном. фоне на фильтровальной бумаге .
Description
|
сх
Ч
05
Изобретение относитс к биохимии растений и может быть использовано также в области генетики, селекции и защиты растений, биохш-ши питани и кормлени .
Цель изобретени - повышение чувствительности и упрощение способ
Пример. Идентификаци ингибиторов трипсина среди белков зерна пшеницы.
Зерно пшеницы размалывают, навеску муки зДпивают 4-кратным объемом 2 М мочевины и выдерживают 18 ч при 4 С. Смесь центрифугируют, осадок отбрасывают.
Изофокусирование белков провод т ,в пластине полиакриламидного гел 125Х250 0,2 мм на приборе типа Мултифор фирмы LKB (Швеци ) или другом приборе дл изофокусировани . Состав гел : 6% акриламида, 0,28% метиленбисакриламида, 1% амфолитов типа Сервилат (Serva, ФРГ), можно также использова.ть амфолиты других фирм, например Амфолины (LKB ), с интервалом рН 2-11. Гель полимеризуют на свету после дегазации , добавив к 10 мл раствора гел 0,5 МП раствора рибофлавина (10 мг/100 мл) и 20 мкл ТЕМЕДа. Экстракт белков зерна нанос т на гель капл ми объемом 0,5-25 мкл на образец. Поскольку ингибиторы трипсина отличаютс у фазных сортов и видов пшениц по компонентному составу и активности, объем Ъкстракта нужно подбирать в каждом отдельном случае дл того, чтобы получить контрастный спектр ингибиторов. В описываемых услови х следует наносить 6-9 мкл экстракта из муки м гкой пшениЩ) сорта Безоста Т, твердой пшеницы 20-25 мкл, диплоидной однозерн нки 0,5-1,0 мкл. На одной пластине анализируют одновременно 24 образца (1 см на образец) или 48 образцов (по 0,5 см). На гель накладьшают электродные полоски, смоченные 1 М NaOH (-) и 1 М HjPO (+). Сверху накладывают крьш1ку с
платиновыми- электродами. ИзофокусироваНие ведут 2,5 ч при посто нной мощности тока 10 В. Конечное напр жение 1800 В. Электродные полоски удал ют вместе с тем участком гл , на котором они лежали. На гель накладьшают лист гладкой фильтровальной бумаги, смоченной раствором трипсина (0,03 мг/мл, фирма Spota, Чехословаки ) в 0,2 М фосфатном буфере рН 8,0. Оптимальный рН трипсина около 8,0-9,0. Гель накрывают полимерной пленкой дл предотвращени высыхани . Через 15 мин бумагу убирают и на гель накладывают фотопленку типа Фото-65, предварительно смочив гель фосфатным буфером. Сверху накладьюают жесткую полимерную пленку дл предотвращени подсыхани и деформации краев фотопленки и выдерживают в термостате 35 мин при . Под действием фермента , адсорбированного поверхностью гел , желатин разрушаетс , что можно контролировать по по влению мутной жидкости из-под краев фотопленки. Можно также просматривать гель с пленкой на свету, не наклон гель. Момент завершени инкубации определ етс по мере по лени различных полос - неразрушенными остаютс лишь участки сло желатина, соответствующие ингибиторам данной протеиназы. Фотопленку снимают с гел , накладывают на нее влажную фильтровальную бумагу, которую затем подсушивают листом сухой фильтровальной бумаги. Фотопленку отдел ют от бумаги. Зоны, соответствующие ингибиторам трипсина , обнаруживаютс на фотопленке в виде темных полос на прозрачно фоне. Фотопленку подсушивают на воздухе и фотографируют в проход щем свете. Ингибиторы можно также вы вить на фильтровальной бумаге, которую накладывали на фотопленку после инкубации.Ингибиторам соотв , ствуют светлые полосы на темном фоне
Claims (1)
- СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНАЗ путем фракционирования белка в гелях, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, на разделяющий гель после фракционирования накладывают лист фильтровальной бумаги, смоченной раствором протеиназы в буфере с pH, оптимальным для используемой протеиназы, и с активностью протеиназы, соответствующей активности трипсина в концентрации 0,0250,05 мг/мл, через 10-30 мин бумагу удаляют, на гель накладывают фотопленку типов Фото или Аэропленка и инкубируют до визуального обнаружения на фотопленке полос неразрушенного желатина, снимают фотопленку с геля, накладывают на нее лист влажной фильтровальной бумаги и идентифицируют ингибиторы по зонам неразрушенного желатина в виде темных полос на прозрачном фоне фотопленки или светлых полос на темном. фон'е на фильтровальной бумаге.SU ,,„1178761
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU833653896A SU1178761A1 (ru) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | Способ идентификации ингибиторов протеиназ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU833653896A SU1178761A1 (ru) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | Способ идентификации ингибиторов протеиназ |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1178761A1 true SU1178761A1 (ru) | 1985-09-15 |
Family
ID=21085996
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU833653896A SU1178761A1 (ru) | 1983-10-11 | 1983-10-11 | Способ идентификации ингибиторов протеиназ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1178761A1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997032035A1 (fr) * | 1996-02-29 | 1997-09-04 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Procede d'analyse de proteases et membrane fine utilisee dans ce procede |
EP1085097A1 (en) * | 1999-08-18 | 2001-03-21 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Method for judging effectiveness of protease inhibitors |
EP1292700A1 (en) * | 2000-06-21 | 2003-03-19 | Novapharm Research (Australia) Pty. Limited | Enzyme detection and measurement |
-
1983
- 1983-10-11 SU SU833653896A patent/SU1178761A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Hligaard J.-Anal. Biochem., 1981, V. 116, № 2, 444-449. * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997032035A1 (fr) * | 1996-02-29 | 1997-09-04 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Procede d'analyse de proteases et membrane fine utilisee dans ce procede |
EP1295948A3 (en) * | 1996-02-29 | 2005-02-02 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Method of measurement of protease and thin membranes used for said method |
EP1085097A1 (en) * | 1999-08-18 | 2001-03-21 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Method for judging effectiveness of protease inhibitors |
US6413734B1 (en) | 1999-08-18 | 2002-07-02 | Fuji Photo Film Co., Ltd | Method for judging effectiveness of drug having protease inhibitory activity |
EP1292700A1 (en) * | 2000-06-21 | 2003-03-19 | Novapharm Research (Australia) Pty. Limited | Enzyme detection and measurement |
EP1292700A4 (en) * | 2000-06-21 | 2005-07-13 | Novapharm Res Australia | DETECTION AND MEASUREMENT OF ENZYMES |
US7244554B2 (en) | 2000-06-21 | 2007-07-17 | Novapharm Research (Australia) Pty Ltd. | Enzyme detection and measurement |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Shewry et al. | A comparison of methods for the extraction and separation of hordein fractions from 29 barley varieties | |
Wilding | Use of gel filtration in the study of human amylase | |
Brown et al. | Control of endosperm proteins in Triticum aestivum (var. Chinese Spring) and Aegilops umbellulata by homoeologous group 1 chromosomes | |
Yan et al. | Identification of oxidized proteins based on sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis, immunochemical detection, isoelectric focusing, and microsequencing | |
US4030995A (en) | Alkaline phosphatase isoenzyme determination | |
Spiker et al. | Identification and fractionation of plant histones | |
Cowie | Identification of fish species by thin‐slab polyacrylamide gel electrophoresis of the muscle myogens | |
Altland et al. | Paraffin oil protected high resolution hybrid isoelectric focusing for the demonstration of substitutions of neutral amino acids in denatured proteins: The case of four human transthyretin (prealbumin) variants associated with familial amyloidotic polyneuropathy | |
SU1178761A1 (ru) | Способ идентификации ингибиторов протеиназ | |
Catsimpoolas | Isolation of soybean lipoxidase by isoelectric focusing | |
Turner et al. | Mitochondrial ATPase Complex of Aspergillus nidulans and the Dicyclohexylcarbodiimide‐Binding Protein | |
Kühnl et al. | An Improved Method for the Identification of Gc1 Subtypes (Group‐Specific Component) by Isoelectric Focusing | |
Giri et al. | Detection of electrophoretically separated amylase inhibitors in starch-polyacrylamide gels | |
Goldring et al. | Solubilization of protein–dye complexes on nitrocellulose to quantify proteins spectrophotometrically | |
Bonnett et al. | Inhibition of moccasin (Agkistrodon piscivoris) venom proteolytic activity by the serum of the Florida king snake (Lampropeltis getulus floridana) | |
Rajasingham et al. | A comparative study of the isoenzymes of mammalian a-amylase | |
Boschetti et al. | A Two‐Dimensional Separation of Proteins from Chloroplast Thylakoids and Other Membranes | |
Pretsch et al. | The agar contact replica technique after isoelectric focusing as a screening method for the detection of enzyme variants | |
Clark et al. | Activity variation between and within two soybean trypsin inhibitor electrophoretic forms | |
SU1175967A1 (ru) | Способ идентификации ингибиторов @ -амилаз | |
Suh et al. | Biochemical characterization of six trisomics of grain sorghum, Sorghum bicolor (L.) Moench | |
Popescu | A simple method for drying polyacrylamide slab gels using glycerol and gelatin | |
Lee et al. | A simple method of identifying peroxidase isoenzymes from crude pea seed extracts | |
Quail et al. | Combined gradient-gel electrophoresis procedures for determining buoyant densities or sedimentation coefficients of all multiple forms of an enzyme simultaneously | |
Moya et al. | Effects of high‐molecular‐mass substrates on protein migration during sodium dodecyl sulfate‐polyacrylamide gel electrophoresis |