4four
СО 00 Изобретение относитс к биологии и медицине, а именно к цитологическим способам олределени реакции трансформации лейкоцитов в краткосрочной культуре in vitro, что характеризует состо ние клеточного иммунитета организма, и может быть использовано в клинических медицинских и ветеринарных лаборатори х. Цель изобретени - повышение точности и сокращение времени определени клеточного иммунитета. Пример 1.У исследуемого донора берут из локтевой вены кровь в объеме 1-2 мкл в предварительно обработанную гепарином пробирку (8 - 10 ед/мл). С момента забора крови и ее доставки врем не должно превышать 1 - 2 ч. Кровь отстаивают в течение 30 40 мин при комнатной температуре.. Затем взвесь лейкоцитов в плазме перенос т в центрифужную пробирку и .. центрифугируют 10 NMH при 800 об/мин Плазму отсасывают при помощи пас- теровской пипетки и к лейкоцитам добавл ют питательную среду, состо щую из среды 199 и 35-40%-ной аутологичной плазмы. Конечна концентраци лейкоцитарных клеток должна составл ть 1,5 -10 - 2,0-10в 1 мкл суспензии. В случае, если содержание нелимфоидных элементов более 70%, их необходимо выделитъ отдельно и добавить в необходимой пропорции. Суспензию клеток нанос т а виде капель на обезжиренное предметное стекло и помещают во влажную камеру. Инкубируют лейкоциты при в течение 1-2 ч. Стекла вынимают из камеры, осторожно споласкивают дистиллированной в дой, высушивают иа воздухе,фиксируют и окрашивают ро Паппе гейму ..Подсчитывают число бласттрансформированных ли фоцитов (по включению зц-римидина) транформированных клеток нелимфоидно природы. После инкубации число тран формированных лимфоцитов у здоровых людей 42%, трансформированных клеток нелимфоидной природы 21%. Пример 2. Больна К.,28 ле Диагноз: ревматизм,, активна форма, II-1II степени рецидивирующий ревмо кардит. Жалобы на боли в суставах и в области грудной клетки слева, пер дическое повьшение температуры. Бол с п ти лет. Объем движеНРЙ в коленн суставах ограничен, суставы болезненны , припухлость кожи над суставами, субфебрильна температура, комбинированный митральньй порок. При поступлении: количество эритроцитов 4-10 л, гемоглобин 110 г/л,, ц.п. 0,8, количество лейкоцитов 8,8.10 л, РОЭ 27 ,мм/ч, ревмопроба отрицательна . Количество лимфобластов 57%, трансформированных клеток нелимфоидной природы76%. Больна принимала лечение: капли Стражеско, бисептол, фуразолин, димедрол , адонизид, комплекс витаминов. В результате проведенного лечени состо ние больной улучшилось и в удовлетворительном состо нии она была выписана . При вьшиске; количество эритроцитов 4,2. 10 л, гемоглобин 113 г/л, ц.п. 0,8, количество лейкоцитов 610 л, РОЭ 10 мм/ч, ревмопроба отрицательна , Лимфобласты 41%, трансформированные нелимфоидные клетки 35%, Анализ препаратов по предлагаемому . способу показал, что изменение количества трансформированных клеток лимфоидной и нелимфоидной природы коррелирует с изменением клинического состо ни больной. П р и м .е р 3. Больна К., 23 года , поступила 02.12.82, вьшисалась 24.12.82 г. Диагноз: ревматизм, активна форма, 1 ст., рецидивирующий миокардит . Жалобы на боли в суставах и в области ГРУДНОЙ клетки слева, субфебрильную температуру, слабость. Заболевание началось 1,5 мес назад после острой.ангины. Хруст в суставах , болезненность при сгибании, объем движений в суставах ног ограничен . При поступлении: количество эритроцитов 4,4 -10 л, гемоглобин 133 г/л, ц.п. 0,9, количество лейкоцитов 8,3-10 л, РОЭ 8 мм/ч, ревмопроба отрицательна . Лимфобластов 68%, трансформированных нелимфоидных клеток 43%. В стационаре больна получила лечение: , аскорутин, пенициллин, анальгин , олеотетрин, делагил. В результате проведенного лечени состо ние больной существенно улучшилось и она в удовлетворительном состо нии была выписана из стационара. При выписке: количество эритроцитов 4, л, гемоглобин 136 г/л. 0,9, количество лейкоцитов 10 л, РОЭ 6 мм/ч, ревмопроба отрицательна . Лимфобластов 51% трансформированных клеток нелимфоидной природы 27%.5 Снижение степени трансформации лейкоцитов при выписке свидетельствует о нормализации клеточной иммунологической реактивности, что коррелирует с улучшением общего состо - jlO ни больных ис другими лабораторными анализами. Таким образом, предложенный способ (таблица) позвол ет в более короткие сроки (1-2 ч, а по известному is 72 ч) с более высокой точностью определить состо ние клеточного иммунцтета и использовать его в качестве экспресс-метода при диагностике иCO 00 The invention relates to biology and medicine, in particular to cytological methods for determining the transformation of leukocytes in a short-term culture in vitro, which characterizes the state of cellular immunity of the body, and can be used in clinical medical and veterinary laboratories. The purpose of the invention is to improve the accuracy and reduce the time for determining cellular immunity. Example 1. In the donor under study, blood is taken from a ulnar vein in a volume of 1-2 μl to a tube pretreated with heparin (8–10 U / ml). From the time of blood collection and delivery, the time should not exceed 1 to 2 hours. Blood is defended for 30–40 minutes at room temperature. Then the suspension of leukocytes in the plasma is transferred to a centrifuge tube and centrifuged. 10 NMH at 800 rpm Sucked off with a Pasteur pipette, and a nutrient medium consisting of medium 199 and 35-40% autologous plasma is added to the leukocytes. The final concentration of leukocyte cells should be 1.5 -10-2.0-10 V in 1 µl of the suspension. In case the content of non-lymphoid elements is more than 70%, they must be isolated separately and added in the necessary proportion. The cell suspension is applied in the form of droplets onto a defatted slide and placed in a moist chamber. Leukocytes are incubated for 1-2 hours. Glasses are removed from the chamber, gently rinsed with distilled into doy, dried with air, fixed and stained with Pappa game. After incubation, the number of transformed lymphocytes in healthy people is 42%, the transformed cells of non-lymphoid nature are 21%. Example 2. Sick K., 28 years old Diagnosis: rheumatism, the active form, II-1II degrees, recurrent rheumatic carditis. Complaints of pains in the joints and in the left chest area, the usual increase in temperature. Bol with five years. The volume of movement in the knee joints is limited, the joints are painful, the skin swells over the joints, low-grade fever, combined mitral defect. On admission: the number of erythrocytes 4-10 l, hemoglobin 110 g / l, ts.p. 0.8, white blood cell count of 8.8.10 l, ROE 27, mm / h, rheumatic test is negative. The number of lymphoblasts 57%, transformed cells of non-lymphoid nature 76%. The patient took the treatment: Strazhesko drops, biseptol, furazolin, diphenhydramine, adonizid, a complex of vitamins. As a result of the treatment, the patient's condition improved and, in a satisfactory condition, she was discharged. When executing; RBC count 4.2. 10 l, hemoglobin 113 g / l, ts.p. 0.8, the number of leukocytes 610 l, ROE 10 mm / h, rheumatic test is negative, Lymphoblasts 41%, transformed non-lymphoid cells 35%, Analysis of the drugs on offer. the method showed that a change in the number of transformed cells of a lymphoid and non-lymphoid nature correlates with a change in the clinical condition of the patient. Pr and m p 3. Boln K., 23 years old, entered 02.12.82, entered 12/24/82. Diagnosis: rheumatism, active form, 1 tbsp., Recurrent myocarditis. Complaints of pain in the joints and in the left chest cell, subfebrile temperature, weakness. The disease began 1.5 months ago after acute. Angina. Crunch in the joints, pain when flexing, range of motion in the joints of the legs is limited. Admission: the number of erythrocytes 4.4 -10 l, hemoglobin 133 g / l, ts.p. 0.9, the number of leukocytes 8.3-10 l, ROE 8 mm / h, rheumatic test is negative. Lymphoblasts 68%, transformed non-lymphoid cells 43%. In the hospital, she received treatment:, askorutin, penicillin, analgin, oleoetrin, delagil. As a result of the treatment, the patient's condition improved significantly and she was discharged from the hospital in a satisfactory condition. At discharge: the number of red blood cells 4, l, hemoglobin 136 g / l. 0.9, the number of leukocytes 10 l, ROE 6 mm / h, rheumatic test is negative. Lymphoblasts 51% of transformed cells of non-lymphoid nature 27% .5 Reduction in the degree of transformation of leukocytes at discharge indicates normalization of cellular immunological reactivity, which correlates with an improvement in the general state of patients with other laboratory tests. Thus, the proposed method (table) allows for a shorter time (1-2 hours, and by what is known is 72 hours) with a higher accuracy to determine the state of cellular immunity and use it as a rapid method in the diagnosis and
подборе лекарственной терапии зи ро ла та Соотношение количества ДНК-синтеующих клеток в культуре стимулианной ФГА и по известному и предаемому способам представлено в лице.the selection of drug therapy for the virus The ratio of the number of DNA-synthesizing cells in the culture of stimulated PHA and according to well-known and committed methods is represented in the face.