SU1144629A3 - Method of determining creatinine in blood serum - Google Patents

Method of determining creatinine in blood serum Download PDF

Info

Publication number
SU1144629A3
SU1144629A3 SU721777222A SU1777222A SU1144629A3 SU 1144629 A3 SU1144629 A3 SU 1144629A3 SU 721777222 A SU721777222 A SU 721777222A SU 1777222 A SU1777222 A SU 1777222A SU 1144629 A3 SU1144629 A3 SU 1144629A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
creatinine
creatine
sample
blood serum
buffer
Prior art date
Application number
SU721777222A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Валефельд Меллеринг Аугуст
Бернт Эрих
Грубер Вольфганг
Ульрих Бергмайер Ханс
Original Assignee
Берингер Маннхайм Гмбх (Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE2122255A external-priority patent/DE2122255B2/en
Application filed by Берингер Маннхайм Гмбх (Фирма) filed Critical Берингер Маннхайм Гмбх (Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU1144629A3 publication Critical patent/SU1144629A3/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/70Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving creatine or creatinine

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРЕАТИНИНА В СЬгаОРОТКЕ КРОВИ, о т л ич а ю щ и и с   тем, что, с целью повьшени  специфичности способа, к пробе добавл ют гфеатининаминогвдролазу , инкубируют при рН 7,8-8,3 в течение 45-60 мин при 37°С и по уровню уменьшакщегос  креатинина или образовавшегос  креатина определ ют креатинин в пробе. i wMETHOD FOR DETERMINING CREATININ IN BLOOD TREATMENT, in a tl ia and so that, in order to increase the specificity of the method, hepatinin aminogram is added to the sample and incubated at pH 7.8-8.3 for 45-60 minutes at 37 ° C and creatinine in the sample is determined from the level of the decreased creatinine or the creatine produced. i w

Description

Изобретение относитс  к медицине а именно к способу дл  специфическ го ферметативного определени  креатинина . Известе-н способ определени  креа тинина путем смешивани  креатинина с щелочным пикратом il . Однако данный способ  вл етс  недостаточно специфическим при вы в лении креатинина в сыворотке крови Цель изобретени  - повышение специфичности способа. Поставленна  цель достигаетс  тем, что согласно способу определени  креатинина к пробе добавл ют кр атининаминогидролазу, инкубируют при рН 7,8-8,3 в течение 45-60 мин при 37 С и по уровню уменьшающегос  креатинина или образовавшегос  креатинина определ ют креатинин в пробе. Способ осуществл ют следующим образом. Фермент - креатининаминогидролаз получают по известному методу. Этот фермент катализирует реакцию : Креатинамидогидролаза Креатинин+Н-рО у . : Креатин Образовавшийс  креатин можно измерить известными способами, например , фосфорилированием креатиновой киназой и аденозинтрифосфатом (АТФ с образованием адёнозиндифосфата. Друга  возможность состоит в измерении уменьшени  количества креатинина по Жафе. Способ осуществл ют при рН между 7,8 и 8,3. Дл  установки величины рН можно примен ть любые буферные растворы. Однако следует обращать внимание на то, чтобы примен емый буфер не преп тствовал используемом методу определени . Если, например затем по Жафе определ ют изменение содержани  креатинина, нужно применить буфер, который не подавл ет реакцию Жафе. Неблагопри тные дл  реакции, например, глициновые и гли цилглициновые буферные растворы. Предпочтительными  вл ютс  фосфатны и пирофосфатные буферы. Однако если определение производитс  не по Жафе а образовавщийс  креатин определ ют с помощью креатиновой киназы и АТФ . то можно примен ть также глициновые и им подобные буферные растворы. 9J Согласно предлагаемому способу предварительное отделение белка не требуетс . Однако отделение белка целесообразно дл  последующего определени  креатина. Креатин перевод т при применении фермента креатиназы в саркозин и мочевину и последнюю определ ют с помощью известных методов. Этот вид осуществлени  способа примен етс  дл  определени  фермента , содержащего креатинкиназу и креатиназу в смеси. Если образовавшийс  креатин определ ют известным способом с применением креатиназы и АТФ, то отделение белка выгодно, так как благодар  этому повышаетс  чувствительность теста. Применение фермента, содержащего креатинамидогидролазу и креатиназу, предпочтительно, когда определение креатинина производитс  по Жафе, так как благодар  креатиназе равновесие перемещаетс  в сторону образованн  креатина. Изобретение создает также новую комбинацию реактивов дл  специфического определени  креатинина, котора  состоит из креатинового стандарта , пикриновой кислоты, едкого натра, креатининамидогидролазы (одной или вместе с буфером), а также в том или ином случае креатиназы, в не смешиваемом до употреблени  состо нии . Кроме того, комбинаци  состоит из буфера, восстановленного никотинамид-аденин-динуклеотида (NADN), АТР и фосфоенолпирувата (ФЕП): лактатдегидрогенозы (LDH), пируваткиназы (РК) и MgC ; креатинкиназы (СК), креатининамидогидролазы в не смешиваемом до употреблени  состо нии, 1 П р и м е р 1. Определение с непосредственно/ следующим применением реакции Жафе, 1,0 мл содержащей креатинин пробы (сыворотка или разбавленна  моча) инкубируют в 0,050-0,2 М буфера (особенно пригодны пирофосфатный, фосфатный, диэтаноламии) HCR, или глицилглицин (НСЕ - буфер) креатининамидогидролазой в количестве минимум 5 и (тест), 1 U 1 ммоль, превращенного субстрата за 1 мин и креатиназой в количестве минимум 0,8 и (тест) при З7с в течение 453 60 мин. Затем производ т отделение белка с помощью 3 М трихлоруксусной кислоты вместе с пробой, к которой не прибавл ют смеси ферментов. В на досадочной жидкости обеих проб прово д т реакцию Жафе. Из разности экстинкций обеих проб при 546nm получаетс  количество креатинина по отно шению к стандартной величине креатинина . Реакцию окрашивани  по Жафе провод т путем добавлени  пикриновой кислоты и NaOH, выдержки в течение 15 мин при комнатной температуре и измерени  и кювете с толщиной сло  2 см при 546 . П р и м е р 2. Измерение креатина с помощью креатинкиназы. С помощью креатинкиназы креатинин гидролизуетс  в креатин и образовавшийс  креатин фосфорилируетс  по известной методике креатинкиназой и АТФ. Образовавшийс  АБФ превращаетс  посредством ФЕК и ПК в АТФ и при этом получившийс  пируват восстанавливаетс  посредством NADH и лактатдегидрогеназы в лактат при 294 об1эазовании NAD. Обмен 1 ммоль NADH, измерение при 334, 340 или 366 п m (соответствует присутствию 1 ммоль креатинина). определени  смесь реактивов, содержаща  NADH, ATP, PEP и хлорид магни  в 0,11 М буфера при рН 9,0 смешивают с лактатдегидрогеназой (LDH), пируваткиказой (РК) и термостатируют до . Затем добавл ют сыворотку и креатинкиназу, и при указанной температуре производ т инкубирование максимум в течение 30 мин. Путем добавлени  минимум 5 U креатинкиназы начинают реакцию. Падение экстинкции регистрируют. Продолжительность реакции составл ет 40- 90 мин. Содержание креатина вычисл ют непосредственно по мол рным коэффициентам экстинкции NADH. Преимуществом данного способа  вл етс  повышение специфичности определени  креатинина, упрощение по сравнению с базовым способом, отсутствие необходимости отделени  белка в сыворотке крови.This invention relates to medicine, in particular to a method for the specific enzymatic determination of creatinine. The known method for the determination of creatinine by mixing creatinine with an alkaline picrate il. However, this method is not specific enough in the detection of serum creatinine. The purpose of the invention is to increase the specificity of the method. The goal is achieved by the method of determining creatinine by adding kr atininomine hydrolase to the sample, incubating at pH 7.8-8.3 for 45-60 minutes at 37 ° C and creatinine in the sample is determined by the level of diminished creatinine or creatinine. The method is carried out as follows. The enzyme creatinine aminogrolase is obtained by a known method. This enzyme catalyzes the reaction: Creatamide hydrolase Creatinine + H-pO y. : Creatine Creatine formed can be measured by known methods, for example, by phosphorylation of creatine kinase and adenosine triphosphate (ATP with the formation of adenosine diphosphate. Another possibility is to measure the decrease in creatinine Jafe. The method is performed at a pH between 7.8 and 8.3. To set the value Any buffer solution can be used in the pH. However, care should be taken that the buffer used does not interfere with the determination method used. If, for example, then the change in soda is determined by Jafe creatinine, a buffer that does not inhibit the Jafa reaction needs to be applied. Unsuitable for the reaction, for example, glycine and glycylglycine buffer solutions. Phosphate and pyrophosphate buffers are preferred. However, if the determination is not carried out by Jafe, the resulting creatine is determined by creatine kinase and ATP. glycine and the like buffer solutions can also be used. 9J According to the proposed method, no preliminary protein separation is required. However, protein separation is appropriate for the subsequent determination of creatine. Creatine is converted by the use of the enzyme creatinease to sarcosine and urea, and the latter is determined using known methods. This type of implementation of the method is used to determine an enzyme containing creatine kinase and creatinease in a mixture. If the creatine produced is determined by a known method using creatinease and ATP, the separation of the protein is beneficial, since it increases the sensitivity of the test. The use of an enzyme containing creatine, hydrolase and creatine, preferably, when creatinine is determined by Jafa, because, due to creatine, equilibrium is shifted towards creatine. The invention also creates a new combination of reagents for the specific definition of creatinine, which consists of a creatine standard, picric acid, caustic soda, creatinine dimethrolase (alone or with a buffer), and also in one or another case of creatinase, in a state that is not miscible before use. In addition, the combination consists of nicotinamide-adenine dinucleotide (NADN), ATP and phosphoenolpyruvate (PEP) buffer: lactate dehydrogenosis (LDH), pyruvate kinase (RK) and MgC; creatine kinase (CK), creatinamide hydrolase in a state that is not miscible before use, 1 EXAMPLE 1. Determination with Direct / Next Use of Gaefe reaction, 1.0 ml creatinine-containing sample (serum or diluted urine) is incubated at 0.050-0 , 2 M buffer (pyrophosphate, phosphate, diethanolamia) HCR, or glycylglycine (HCE - buffer) with creatinine amide hydrolase in an amount of at least 5 and (test), 1 U 1 mmol, converted substrate for 1 min and creatinase in at least 0.8 and (test) at 3-7s for 453 60 minutes. Then the protein is separated with 3 M trichloroacetic acid together with a sample, to which no enzyme mixture is added. In the annoying liquid of both samples, the reaction was performed by Jafa. From the difference in extinction of both samples at 546nm, the amount of creatinine is obtained relative to the standard value of creatinine. The Jacaf staining reaction is carried out by adding picric acid and NaOH, aging for 15 minutes at room temperature and measuring the cell with a layer thickness of 2 cm at 546. PRI mme R 2. Measurement of creatine with creatine kinase. With the aid of creatine kinase, creatinine is hydrolyzed to creatine and the resulting creatine is phosphorylated by the known method creatine kinase and ATP. The resulting ABP is converted by FEC and PC to ATP, and the resulting pyruvate is reduced by NADH and lactate dehydrogenase to lactate at 294 formation of NAD. Exchange 1 mmol NADH, measurement at 334, 340 or 366 p m (corresponds to the presence of 1 mmol creatinine). Determining a mixture of reagents containing NADH, ATP, PEP and magnesium chloride in 0.11 M buffer at pH 9.0 is mixed with lactate dehydrogenase (LDH), pyruvate case (RK) and thermostatically. Serum and creatine kinase are then added and incubation is carried out for a maximum of 30 minutes at the indicated temperature. By adding a minimum of 5 U, creatine kinase starts the reaction. Drop extinction register. The reaction time is 40 to 90 minutes. The creatine content is calculated directly from the molar extinction coefficients of NADH. The advantage of this method is to increase the specificity of the determination of creatinine, simplification compared with the basic method, no need to separate the protein in the blood serum.

Claims (1)

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КРЕАТИНИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, отличают и й с я тем, что, с целью повьшения специфичности способа, к пробе добавляют креатининаминогид ролазу, инкубируют при pH 7,8-8,3 в течение 45-60 мин при 37°С и по уровню' уменьшающегося креатинина или образовавшегося креатина определяют креатинин в пробе.A METHOD FOR DETERMINING CREATININ IN BLOOD SERUM is distinguished by the fact that, in order to increase the specificity of the method, creatinine aminogide is added to the sample rolase, incubated at pH 7.8-8.3 for 45-60 minutes at 37 ° C and determine the creatinine in the sample by the level of 'decreasing creatinine or the resulting creatine. SU „ 1144629SU „1144629
SU721777222A 1971-05-05 1972-04-17 Method of determining creatinine in blood serum SU1144629A3 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2122255A DE2122255B2 (en) 1971-05-05 1971-05-05 Method for the specific determination of creatinine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1144629A3 true SU1144629A3 (en) 1985-03-07

Family

ID=5806955

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU721777222A SU1144629A3 (en) 1971-05-05 1972-04-17 Method of determining creatinine in blood serum

Country Status (8)

Country Link
JP (1) JPS5443397B1 (en)
DK (1) DK139769C (en)
FI (1) FI53367C (en)
HU (1) HU163672B (en)
IL (1) IL38918A (en)
IT (1) IT968190B (en)
SE (1) SE377723B (en)
SU (1) SU1144629A3 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. Биохимические методы исследовани в клинике. М., 1969, с. 103105. *

Also Published As

Publication number Publication date
HU163672B (en) 1973-10-27
FI53367C (en) 1978-04-10
IL38918A (en) 1974-12-31
DK139769B (en) 1979-04-09
DK139769C (en) 1979-09-24
JPS5443397B1 (en) 1979-12-19
IL38918A0 (en) 1972-05-30
IT968190B (en) 1974-03-20
SE377723B (en) 1975-07-21
FI53367B (en) 1977-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6068971A (en) Process for determination of ions in fluids by masking of interfering ions
SU1338787A3 (en) Method of identifying hydrogen peroxide in fermentation reaction
Bell et al. A colorimetric method for determination of isocitric dehydrogenase
US5384247A (en) Determination of sodium ions in fluids
GB1512328A (en) Method and reagent for determining the activity of creatinekinase-mb
Lundin et al. Sensitive assay of creatine kinase isoenzymes in human serum using M subunit inhibiting antibody and firefly luciferase
IL46545A (en) Analytical process for the enzymatic determination of substrates in biological fluids
Laursen et al. A fluorimetric method for measuring the activity in serum of the enzyme glutamic pyruvic transaminase
Scopes A new enzymic method for inorganic phosphate determination
SU1144629A3 (en) Method of determining creatinine in blood serum
Meiattini et al. Adenylate kinase inhibition by adenosine 5'-monophosphate and fluoride in the determination of creatine kinase activity.
Rosano et al. Evaluation of adenosine 5'-monophosphate and fluoride as adenylate kinase inhibitors in the creatine kinase assay.
DK164512B (en) PROCEDURE FOR SIMULTAN DETERMINATION OF PROCALLIC CLEAN AND PARTIAL THROMBOPLASTINE TIME
US4329425A (en) Method for determination of transaminases and relative diagnostic kit
US3335069A (en) Composition and method for determining uric acid
US4596772A (en) Reagent for assaying cholinesterase
CN111057746B (en) Creatine kinase isoenzyme determination kit
US4206280A (en) Determination of acid phosphatase
US3591459A (en) Method of enzyme determination
US6413733B1 (en) Stabilized reagent and method for determining creatine kinase
Wilkinson Enzyme kinetics and its relevance to enzyme assay.
US3536588A (en) Method of enzyme determination
AU662510B2 (en) Determination of ions in fluids
JPH07303497A (en) Assay of biological component and reagent composition therefor
AU662516B2 (en) Determination of ions in fluids