SU1119983A1 - Method of preparing histologic specimen of liver tissue - Google Patents

Method of preparing histologic specimen of liver tissue Download PDF

Info

Publication number
SU1119983A1
SU1119983A1 SU813339543A SU3339543A SU1119983A1 SU 1119983 A1 SU1119983 A1 SU 1119983A1 SU 813339543 A SU813339543 A SU 813339543A SU 3339543 A SU3339543 A SU 3339543A SU 1119983 A1 SU1119983 A1 SU 1119983A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
acetone
phosphate buffer
preparing
staining
liver tissue
Prior art date
Application number
SU813339543A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Александр Гамшеевич Гиновкер
Лазарь Ефимович Немировский
Николай Маркович Вахтель
Original Assignee
Тюменский государственный медицинский институт
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Тюменский государственный медицинский институт filed Critical Тюменский государственный медицинский институт
Priority to SU813339543A priority Critical patent/SU1119983A1/en
Application granted granted Critical
Publication of SU1119983A1 publication Critical patent/SU1119983A1/en

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ТКАНИ ПЕЧЕНИ, включающий фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее приготовление срезов и их окрашивание, отличающийс  тем, что, с целью четкой диЛференцировки паренхимы от стромы, фиксацию в течение 45-48 ч при 4-6°С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 7.0-30. мин в смеси, содержащей сС-нафтил ацетат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,27 ,4 при. следуювщх соотношени х компонентов, вес.%: оС-Нафтил ацетат 20-45 Прочный синий Б 20-45 АцетонО,3-0,7 С Фосфатный буфер ОстальноеA method for preparing a histological preparation of the liver tissue, including fixation of the biopsy in formalin solutions, subsequent preparation of sections and their staining, characterized in that, in order to clearly differentiate the parenchyma from the stroma, fixation within 45 to 48 hours at a rate of 4 or 5, using a 5 to set 5, and staining is carried out at 18-24 C for 7.0-30. min in a mixture containing cC-naphthyl acetate, strong blue B, acetone and phosphate buffer pH 7.27, 4 at. The following ratios of components, wt.%: ° C-Naphthyl acetate 20-45 Durable blue B 20-45 Acetone O, 3-0.7 C Phosphate buffer Remaining

Description

I Изобретение относитс  к медицине а именно к области микроскопических исследованиУ паренхиматоаньпс органо в частности печени. Известен способ приготовлени  гистологического препарата ткани паренхиматозных органов, в частное ти ткани миокарда,включающий фиксацию биоптата в осмиевой кислоте, приготовление срезов и их окрашивание 2 Однако данный способ не позвол ет приготовить.гистологический препарат ткани печени. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности  вл етс  способ приготовлени  гистологического препарата ткани печени, включающий фиксацию биоптата в раство-. pax формалина, последующее приготов ление срезов и их окрашивание в гематоксилин - эозин . Однако известный способ не позво л ет четко дифференцировать паренхи му от стромы, что затрудн ет проведение цитоспектроскопических исследований при изучении структуры печени. Цель изобретени  - четка  дифференцировка паренхимы от стромы Поставленна  цель достигаетс  согласно способу приготовлени  гист логического препарата ткани печени включающему фиксацию биоптата в ра ворах формалина,последующее приготовление срезов и их окрашивание , тем, что фиксацию провод т в. течение А5-48 ч, при А-6°С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 20-30 мин в смеси, содержащей о(,-нафтил ацетат, прочньй синий Б, ацетон и фосфатн буфер рН 7,27 ,4 при следующих соотношени х компонентов , вес.%: о(,-Нафтил ацетат 20-45 Прочный синий Б 20-45 Ацетон0,3-0,7 Фосфатный буфер Остальное Способ осуществл ют следукмцим об разом. Биоптат ткани печени фиксируют 10-12Z-HOM нейтральном формалине в 45-48 ч при . Далее биоптат гфомывают водой в течение 10 мин, приготавливают замороженные срезы на криомикротоме, которые окрашивают при 18-24 С в течение 20-30 м в смеси, содержащей в6 -нафтил. аце31 тат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношени х компонентов,вес.%: ct-Нафтил ацетат 20-45 Прочный синий Б 20-45 Ацетон0,3-0,7 Фосфатный буфер Остальное Фиксаци  биоптата в 10-12%-ном растворе формалине в меньше 45 и больше 48 ч при температурах меньше 4 и больше 6 С не,позвол ет получить четкую дифференцировку паренхимы от стромы,что видно из таблицы , где приведены показатели опти- ческого поглощени  стромы и паренхимы печени интактного золотистого хом ка через различное врем  после экспозиции образцов ткани в 1012%-ном нейтральном формалине при -6 С (в условных единицах оптической плотности). Окрашивание при температурах меньше 18 и больше в течение времени меньше 20 и больше 30 мин также приводит к менее четкой дифференцировке паренхимы от стромы за счет полной илактивации вы вл емь х красителем эстераз, имеющей место при этих режимах обработки. Пример 1. У наркотизированного животного вскрьшали брюшную полость, удал ли печень и из каждой доли ее вырезали кусочки, которые помещали в 10-12%-ный нейтральньй формалин на 45 ч, предварительно охлажденньй до 4 С, после чего промывали кусочки в дистиллированной воде 10 мин, изготовл ли на микротоме замороженные ере зы. Срезы наклеивали белком на сухие обезжиренные предметные стекла и окрашивали при температуре 8°С в течение 20 мин в смеси, содержащей С-нафтил ацетат, прочный синий Б,ацетон и фосфатньй буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношени х компонентов, nof 7 . /о . ot-Нафтил ацетат20 Прочный синий Б20 Ацетон0,3 Фосфатный буфер Остальное Соотношение стромы и паренхимы в печени у интактного животного, в частности золотистого хом ка, проводитс  при планиметрии на микровидеомате на тестовой площади, равной. 19200 мк, прин той за 100%, и равно 0,096710,01.. . Пример 2.У наркотизированного животного (золотистого хом ка). инвазированного эписторхозом, вскры вали брюшную полость, удал ли печен которую помещали в 10-12%-ный нейтральный формалин на 48 ч, предварительно охлажденный до , после чего промывали кусочки в дистиллиро ванной воде 10 мин, изготавливали замороженные срезы, которые окрашивали при 24®С в течение ЗП мин в смеси, содержащей cL -нафтил ацетат, прочный синий Б,ацетон и фосфатньй буфер рН 7,2-7,4 при следующих соотношени х компонентов, вес.%: сС-Пафтил ацетат 45 Прочный синий Б 45 АцетонО,7 Фосфатный буфер Остально Соотношение стромы и паренхимы у золотистого хом ка при описторхозе 1,1iO,13. Специфичность и достоверность маркировани  стромы и паренхимы обусловлены избирательным маркированием этцх структур. Интенсивна  окраска паренхге атозного компонента ткани св зана с вы влением в нем неспецифических эстераз. Четка  дифференцировка паренхимы от стромы позвол ет проводить количественныеисследовани  с помощью телевизионного планиметра Микровидеомат и цитоспектрофотометра, что повышает точность определени  различных патологических состо ний. Строма Паренхима Врем  экспозиции в формалине , ч 24,71 0,71,2±0,12 24,11 0,50,71± 0,06 17,810,9О 15,1tO,90,5tO,1I The invention relates to medicine, namely to the field of microscopic examination of the parenchymatous organ in particular the liver. A known method of preparing a histological preparation of tissue of parenchymal organs, in particular, of myocardial tissue, including fixation of the biopsy material in osmic acid, preparation of sections and their staining 2 However, this method does not allow preparing a histological preparation of liver tissue. The closest to the proposed technical essence is a method of preparing a histological preparation of liver tissue, including fixing the biopsy in solution. pax formalin, the subsequent preparation of sections and their staining in hematoxylin – eosin. However, the known method does not allow a clear differentiation of the parenchyma from the stroma, which makes it difficult to carry out cytospectroscopic studies in the study of the structure of the liver. The purpose of the invention is to clearly differentiate the parenchyma from the stroma. The goal is achieved according to the method of preparing a histological preparation of the liver tissue, including fixation of the biopsy material in formalin solutions, subsequent preparation of sections and their staining, by fixing in. A5-48 hours, at A-6 ° C, and staining is carried out at 18-24 ° C for 20-30 minutes in a mixture containing o (, - naphthyl acetate, strong blue B, acetone and phosphate buffer pH 7.27 , 4 in the following ratios of components, wt.%: O (, - Naphthyl acetate 20-45 Durable blue B 20-45 Acetone 0.3-0.7 Phosphate buffer Else The method is carried out by following the procedure. A biopsy of the liver tissue is fixed 10- 12Z-HOM neutral formalin at 45-48 hours at. Next, the biopsy is washed with water for 10 minutes, frozen sections are prepared on a cryomicrotome, which are stained at 18-24 ° C for 20-30 m in mixture, B6-naphthyl acetone, tough blue B, acetone and phosphate buffer pH 7.2-7.4 with the following ratios of components, wt%: ct-Naphthyl acetate 20-45 Durable blue B 20-45 Acetone 0.3 -0.7 Phosphate buffer Else Biopsy fixation in 10-12% formalin solution in less than 45 and more than 48 hours at temperatures less than 4 and more than 6 C does not allow for a clear differentiation of the parenchyma from the stroma, as can be seen from the table, where The optical absorption parameters of the stroma and the liver parenchyma of the intact golden hamster are shown at various times after exposure. tissue samples in 1012% neutral formalin at -6 ° C (in arbitrary units of optical density). Staining at temperatures less than 18 and more for a time less than 20 and more than 30 minutes also leads to less distinct differentiation of the parenchyma from the stroma due to complete deactivation revealing esterase dye that occurs during these treatment modes. Example 1. In the anesthetized animal, the abdominal cavity was opened, the liver was removed, and slices were cut out from each lobe, which were placed in 10-12% neutral formalin for 45 hours, cooled to 4 ° C, and then washed in distilled water 10 min, frozen ereas were made on the microtome. Sections were glued with protein onto dry defatted slides and stained at 8 ° C for 20 minutes in a mixture containing C-naphthyl acetate, strong blue B, acetone and phosphate buffer pH 7.2-7.4 at the following ratios of components, nof 7. /about . ot-Naphthyl acetate20 Durable blue B20 Acetone0.3 Phosphate buffer Else The ratio of stroma and parenchyma in the liver of an intact animal, in particular a golden hamster, is carried out with a planimetry on a microvideomat on a test area equal to. 19200 µm, taken as 100%, and equal to 0.096710.01 ... Example 2. In anesthetized animal (golden homa ka). an abdominal cavity infested with an epistorchosis, the livers were removed and placed in 10–12% neutral formalin for 48 h, pre-cooled to, after which the pieces were washed in distilled water for 10 min, frozen sections were prepared and stained at 24® C for ZP min in a mixture containing cL-naphthyl acetate, strong blue B, acetone and phosphate buffer pH 7.2-7.4 at the following ratios of components, wt.%: CC-Paftil acetate 45 Durable blue B 45 Acetone O , 7 Phosphate buffer Rest of the ratio of the stroma and parenchyma in golden homo ka with opisthorchosis 1,1iO, 13. The specificity and reliability of the labeling of the stroma and parenchyma is due to the selective labeling of these structures. The intense coloring of the parenchyx of the atotic component of the tissue is associated with the detection of nonspecific esterases in it. The clear differentiation of the parenchyma from the stroma allows quantitative studies using a MicroVideotomator television and a cytospectrophotometer, which improves the accuracy of determining various pathological conditions. Stroma Parenchyma Exposure time in formalin, h 24.71 0.71.2 ± 0.12 24.11 0.50.71 ± 0.06 17.810.9 O 15.1 tO, 90.5 tO, 1

Claims (1)

454) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА ТКАНИ ПЕЧЕНИ, включающий фиксацию биоптата в растворах формалина, последующее приготовление срезов и их окрашивание, отличающийся тем, что, с целью четкой дифференцировки паренхимы от стромы, фиксацию в течение 45-48 ч при 4-6°С, а окрашивание ведут при 18-24 С в течение 20-30. мин в смеси, содержащей eL-нафтил ацетат, прочный синий Б, ацетон и фосфатный буфер pH 7,2-454) METHOD FOR PREPARING A HISTOLOGICAL PREPARATION OF LIVER TISSUE, including fixation of the biopsy specimen in formalin solutions, subsequent preparation of sections and their staining, characterized in that, in order to clearly differentiate the parenchyma from the stroma, fixation for 45-48 hours at 4-6 ° C at 4-6 ° C and staining is carried out at 18-24 C for 20-30. min in a mixture containing eL-naphthyl acetate, strong blue B, acetone and phosphate buffer pH 7.2- 7,4 при. следующих соотношениях компонентов, вес.Х: сС-Нафтил ацетат Прочный синий Б Ацетон Фосфатный буфер7.4 at. the following ratios of components, wt. X: cC-Naphthyl acetate Durable blue B Acetone Phosphate buffer
SU813339543A 1981-09-21 1981-09-21 Method of preparing histologic specimen of liver tissue SU1119983A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU813339543A SU1119983A1 (en) 1981-09-21 1981-09-21 Method of preparing histologic specimen of liver tissue

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU813339543A SU1119983A1 (en) 1981-09-21 1981-09-21 Method of preparing histologic specimen of liver tissue

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1119983A1 true SU1119983A1 (en) 1984-10-23

Family

ID=20977333

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU813339543A SU1119983A1 (en) 1981-09-21 1981-09-21 Method of preparing histologic specimen of liver tissue

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU1119983A1 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. Непомн щих Л.М. и Колесни кова Л.В. Количественные взаимоотношени стромы и паренхимы миокарда кроликов при атеросклеротическом кардиосклерозе. - Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 1977, 84. 8, с. 247-250. 2. Лилли Р. Патогистологическа техника и практическа гистохими . М., Мир, 1969, с. 205. () *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tanaka et al. A preparation method for observing intracellular structures by scanning electron microscopy
Hincke et al. Purification and immunochemistry of a soluble matrix protein of the chicken eggshell (ovocleidin 17)
Emmart et al. Localization of prolactin within the pituitary of a cyprinodont fish, Fundulus heteroclitus (Linnaeus), by specific fluorescent antiovine prolactin globulin
US4911915A (en) Method of processing tissue specimens and dehydrant solvent for use therein
Klosen et al. PEG embedding for immunocytochemistry: application to the analysis of immunoreactivity loss during histological processing.
Slotnick et al. The Production of Congenital Malformations Using Tissue Antisera: V. Fluorescent Localization of Teratogenic Antisera in the Maternal and Fetal Tissue of the Rat
DE3311287A1 (en) METHOD FOR PHOTOMETRICALLY DETERMINING THE ACTIVATED PARTIAL THROMBOPLASTIN TIME AND REAGENT TO IT
SU1119983A1 (en) Method of preparing histologic specimen of liver tissue
EP1476739B1 (en) Tissue fixative composition
Dhillon et al. Immunohistochemical studies on the innervation of human transplanted liver
D'souza Staining pollen tubes in the styles of cereals with cotton blue; fixation by ethanol-lactic acid for enhanced differentiation
Sweney et al. Rapid preparation of uncoated biological specimens for scanning electron microscopy
Ohno et al. Advanced application of the in vivo cryotechnique to immunohistochemistry for animal organs
Moran et al. Application of microwave irradiation to immunohistochemistry: preservation of antigens of the extracellular matrix
Blau et al. Morphogenesis of the silkmoth chorion: Patterns of distribution and insolubilization of the structural proteins
SU1515091A1 (en) Fixative for histological preparations
Crossett Autoradiography of 32P in maize roots
Faszewski et al. Histology and lectin-binding patterns in the skin of the terrestrial horned frog Ceratophrys ornata
Nusbickel et al. Enzyme histochemical investigation of glycol methacrylate embedded chick embryonic tissue
SU1185162A1 (en) Method of determining polyvinyl alcohol in tissues
Gruber General methods in light microscopy of the nervous system
SU1314251A1 (en) Method of fixing specimens of biological tissues for histological investigation
Bulger et al. Morphological techniques for study of the kidney
Katayama et al. NAPHTHOL AS–D CHLOROAGETATE ESTERASE REACTION: Systematic Modifications for Optimization to Smears and Sections
SU1091058A1 (en) Method of dyeing blood vessels in internal parts of a body on hystological preparation