SU1116394A1 - Method of determining lytic activity of substances - Google Patents

Method of determining lytic activity of substances Download PDF

Info

Publication number
SU1116394A1
SU1116394A1 SU802987588A SU2987588A SU1116394A1 SU 1116394 A1 SU1116394 A1 SU 1116394A1 SU 802987588 A SU802987588 A SU 802987588A SU 2987588 A SU2987588 A SU 2987588A SU 1116394 A1 SU1116394 A1 SU 1116394A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
cells
determining
substances
concentration
substance
Prior art date
Application number
SU802987588A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Николай Михайлович Митрохин
Виктор Викторович Юртаев
Юрий Викторович Голиков
Original Assignee
Научно-Исследовательский Институт По Биологическим Испытаниям Химических Соединений
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Научно-Исследовательский Институт По Биологическим Испытаниям Химических Соединений filed Critical Научно-Исследовательский Институт По Биологическим Испытаниям Химических Соединений
Priority to SU802987588A priority Critical patent/SU1116394A1/en
Application granted granted Critical
Publication of SU1116394A1 publication Critical patent/SU1116394A1/en

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВнести ВЕЩЕСТВ, заключающийс  в смешивании клеток посто нной концентрации с лизирующим веществом различной концентрации, определении времени лизиса 50% клеток по изменению оптической плотности, отличающийс   тем, что, с целью повышени  точности измерений и сокращени  времени анализа, смешивание клеток с лизирующим веществом провод т з непрерывном потоке, а изменение оптической плотности определ ют путем посто нного слежени  за точкой 50% лизиса во всем диапазоне концентраций лизирующего вещества.Щ (ЛMETHOD FOR DETERMINING LITICAL ACTIVITY OF SUBSTANCES, which consists in mixing cells of constant concentration with a lysing substance of different concentrations, determining the lysis time of 50% of the cells by changing the optical density, characterized in that, in order to improve the accuracy of measurements and reduce the time of analysis, the cells are mixed with the lysing substance is carried out on a continuous stream, and the change in optical density is determined by continuously monitoring the point of 50% lysis over the entire range of concentrations of the lysing substance. tva.Sch (L

Description

Изобретение относитс  к клинической медицине и экспериментальной био логии и, в частности, к изучению действи  литических агентов, например кислот, щелочей, детергентов и т.п., на мембраны эритроцитов, а так же может быть использовано в промышленности дл  определени  концентрации сапонина в выт жках лекарственного сырь  и в онкологии дл  определени  селективной литической активности веществ в отношении опухолевых клеток. Известен способ определени  литической активности поверхностно-актив ных веществ (ПАВ) от их концентрации (1 J и ,23, предусматривающий регистрацию кинетики лизиса эритроцитов с посто нной концентрацией под действием ПАВ при различных концентраци х изучаемых веществ фотометрически , по измерению изменени  интенсивности поглощени  света взвесью эритр цитов. Критерием литической активнос ;Ти служит врем  лизиса 50% клеток T.Q, регистрируемое дл  различных концентраций исследуемого вещества. По полученным данным стро т графичес кую зависимость литической активност веществ от их концентрации. Существенными недостатками этого способа  вл ютс  значительные затрат времени, так как дл  построени  одно кривой необходимо большое количество данных - до 10, причем дл  получени  каждого из них затрачиваетс  от 0,5 до 20 мин; неточность разведени  вно сит значительные погрешности в регистрируемые показатели, построение графической зависимости по дискретным значени м концентраций не дает истинного представлени  о взаимосв зи концентраци -эффект, так как возможн потери аномальных областей, где исследуемое вещество может про вл ть неожиданно высокую или низкую актив .ность. Цель изобретени  - повышение точности измерений и сокращение времени анализа. Указанна  цель достигаетс  тем, что согласно cnoccf6y определени  литической активности веществ, заключающемус  в смешивании клеток посто нной концентрации с лизирующим веществом различной концентрации, определении времени лизиса 50% клето по изменению оптической плотности, смешивание клеток с лизирующим ве1 4 ществом производ т в непрерывном потоке, а изменение оптической плотносТи определ ют путем посто нного слежени  за точкой 50% лизиса во всем диапазоне концентраций лизирующего вещества. Сущность изобретени  заключаетс  в том, что в способе определени  литической активности веществ смешивание клеток с лизирующим веществом производ т при непрерывной подаче в проточную кювету суспензии клеток с посто нной концентрацией и раствора вещества с градиентом кон центрации во времени при посто нном соотношении скоростей потоков. От момента смешивани  и до лизиса клеток проходит определенное врем , завис щее от концентрации вещества и его литической активности: чем больше концентраци  и литическа  активность вещества, тем меньше требуетс  времени от момента смешивани  до лизиса клеток, тем меньшее рассто ние проход т клетки по проточной кювете. Непрерывное слежение за заданной величиной оптической плотности или светорассе ни , соответствующей выбранному значению, например 50% содержанию клеток, осуществл ют измерительный оптрон, в оптической части которого помещают проточную кювету. Проведение анализа в проточной кювете с использованием градиента концентрации вещества во времени и развертка процесса во времени позвол ют исключить регистрацию литической активности дл  дискретных концентраций вещества, что значительно ускор ет проведение анализа и повышает точность измерений. На чертеже показана зависимость литической активности сапонина от концентрации. Пример. Определение зависимости гемолитического эффекта сапонина фирмы Мерке от концентрации по предлагаемому способу. Используют свежевз тую кровь человека . Эритроциты трижды отмывают в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты суспендируют в физиологическом растворе до концентрации 34 тыс.клеток на мм. Предварительно, до проведени  анализа , наход т величину оптической плотности (светорассе ни ), соответствуюую 50% содержанию красных клеток осле разведени  1:1, и след щую 3 систему устанавливают на на1аденное значение. В проточную кювету подают сапонин, приготовленный на физиологическом растворе, с убывающей во времени по экспоненциальному закону концентраций и стандартно разведенную взвесь эритроцитов с соотношение скоростей потоков 1:1. В результате в рабочей кювете -содержание клеток составл ет 17 тыс.шт./мм, а .концент раци  сапонина убывает с до . Система слежени  обеспечивает автоматическое перемещение оптрона вдоль проточной кюветы до точки, - соответствующей 50% содержанию эритр цитов, и поддерживает оптрон над данной точкой. Смещение оптрона вдоль проточной кюветы служит мерой литической активности вещества, а развертка процесса во времени даёт Зависимость литической активности са понина от концентрации (см.чертеж). Развертка по оси абсцисс соответствует концентрации препарата, а по оси ординат - времени 50% гемолиза. Крива  1 соответствует эквиконцен рацнонным лини м, крива  2 пропи 1 1ываетс  след щим устройством, а крива  3 построена с учетом эквиконцентрационных линий и отражает зависимость гемолитического эффекта сапо нина от концентрации. 944 Построение кривой литической зависимости сапонина от концентрации в координатах Со so °% пр мую линию с углом наклона равным 2, что соответствует наклону, полученному по точкам СО, и указьгоает на применимость предлагаемого способа дл  изучени  зависимости литической ак1ТИВНОСТИ веществ от концентрации. Дл  проведени  анализа по предлагаемому способу необходимо 10-15 мин. по способу-прототипу - до 90 мин. Кроме того, отсутствует необходи ,мость построени  кривой по точкам, так как зависимость концентраци  эффект регистрируетс  непосредственно , что повышает точность анализа. Использование предлагаемого способа определени  литической активности веществ обеспечивает по сравнению с известным способом следующие пЕ еимущества: отсутствует необходимость разведени  испытуемого вещества до дискретных значений концентраций до начала анализа, что увеличивает производительность труда; непрерывна  регистраци  зависимости литй-ческой активности веществ от концентрации позвол ет исключить построение кривой по точкам, что также увеличивает производительность труда и повьшает точность анализа. The invention relates to clinical medicine and experimental biology and, in particular, to the study of the action of lytic agents, such as acids, alkalis, detergents, etc., on erythrocyte membranes, as well as can be used in industry to determine the concentration of saponin in the skin. drugs and oncology to determine the selective lytic activity of substances in relation to tumor cells. The known method of determining the lytic activity of surface-active substances (surfactants) from their concentration (1 J and 23) envisages the registration of the kinetics of erythrocyte lysis with a constant concentration under the action of surfactants at various concentrations of the studied substances photometrically by measuring the change in the intensity of light absorption by the suspension erythritis. The criterion of lytic activity; Ti is the time of lysis of 50% of TQ cells recorded for different concentrations of the test substance. Immunity of the lytic activity of substances from their concentration. Significant drawbacks of this method are considerable time consuming, since a large amount of data is required to create one curve - up to 10, and it takes from 0.5 to 20 minutes to obtain each of them; There are significant errors in the recorded indicators, the construction of a graphical dependence on discrete values of concentrations does not give a true idea of the relationship between concentration and the effect, since losses are possible abnormal areas where the test substance can exhibit unexpectedly high or low asset .nost. The purpose of the invention is to improve the measurement accuracy and reduce the analysis time. This goal is achieved by the fact that, according to the cnoccf6y determination of the lytic activity of substances, which consists in mixing cells of a constant concentration with a lysing substance of different concentrations, determining the lysis time of 50% of the cell by the change in optical density, the cells are mixed in a continuous stream, and the change in optical density is determined by continuously monitoring the 50% lysis point over the entire range of lysing substance concentrations. The essence of the invention is that in the method of determining the lytic activity of substances, the cells are mixed with the lysing substance while continuously feeding the cell suspension with a constant concentration and the solution of the substance with a concentration gradient over time at a constant ratio of flow rates. From the moment of mixing to the lysis of the cells, a certain time elapses, depending on the concentration of the substance and its lytic activity: the greater the concentration and lytic activity of the substance, the less time is required from the moment of mixing to lysis of the cells, the less distance the cells pass through the flow cell. . Continuous tracking of a given value of optical density or light scattering corresponding to the selected value, for example 50% cell content, is carried out by measuring the optocoupler, in the optical part of which a flow cell is placed. Analyzing the flow cell using a concentration gradient of a substance over time and scanning the process over time eliminates the registration of lytic activity for discrete concentrations of a substance, which greatly speeds up the analysis and improves the measurement accuracy. The drawing shows the dependence of the lytic activity of saponin on the concentration. Example. Determination of the dependence of the hemolytic effect of saponin company Merke on the concentration of the proposed method. Use fresh human blood. Red blood cells are washed three times in a 10-fold volume of saline. The washed erythrocytes are suspended in a physiological solution to a concentration of 34 thousand cells per mm. Previously, prior to the analysis, the optical density (light scattering) value corresponding to the 50% red cell content after 1: 1 dilution was found, and the following 3 system was set to the desired value. Saponin, prepared in a physiological solution, with a decreasing in time according to the exponential law of concentrations and a standard diluted erythrocyte suspension with a ratio of flow rates of 1: 1 is fed into the flow cell. As a result, in the working cell, the cell content is 17 kb / mm, and the concentration of saponin decreases from to. The tracking system provides automatic movement of the optocoupler along the flow cell to the point - corresponding to 50% of the content of erythrocytes, and supports the optocoupler above this point. The displacement of the optocoupler along the flow cell serves as a measure of the lytic activity of the substance, and the sweep of the process over time gives the concentration dependence of the sonic activity of sononin (see drawing). The sweep along the abscissa corresponds to the concentration of the preparation, and the ordinate shows the time of 50% hemolysis. Curve 1 corresponds to the equiconcene racial lines, curve 2 propi 1 is the follower, and curve 3 is constructed taking into account the equiconcentration lines and reflects the dependence of the hemolytic effect of Saponin on concentration. 944 Construction of the curve of lytic dependence of saponin on concentration in coordinates Co so °% straight line with a slope angle of 2, which corresponds to the slope obtained from the CO points, and indicates the applicability of the proposed method for studying the dependence of the lytic activity of substances on the concentration. For the analysis of the proposed method, 10-15 minutes are needed. according to the method prototype - up to 90 minutes In addition, there is no need to build a curve by points, since the dependence of the concentration effect is recorded directly, which increases the accuracy of the analysis. The use of the proposed method for determining the lytic activity of substances provides, in comparison with a known method, the following advantages: there is no need to dilute the test substance to discrete values of concentrations prior to the analysis, which increases labor productivity; the continuous recording of the dependence of the lithium activity of substances on the concentration makes it possible to exclude the construction of a curve by points, which also increases labor productivity and increases the accuracy of the analysis.

Claims (1)

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ВЕЩЕСТВ, заключающийся в смешивании клеток постоянной концентрации с лизирующим веществом различной концентрации, определении времени лизиса 50% клеток по изменению оптической плотности, отличающийс я тем, что, с целью повышения точности измерений и сокращения времени анализа, смешивание клеток с лизирующим веществом проводят э непрерывном потоке, а изменение оптической плотности определяют путем постоянного слежения за точкой 50% лизиса во всем диапазоне концентраций лизирующего веществаMETHOD FOR DETERMINING LITHUANIC ACTIVITY OF SUBSTANCES, which consists in mixing constant-concentration cells with a lysing substance of various concentrations, determining the lysis time of 50% of cells by changing the optical density, characterized in that, in order to increase measurement accuracy and reduce analysis time, mixing cells with a lysing substance conduct e continuous flow, and the change in optical density is determined by constantly monitoring the point of 50% lysis in the entire range of concentrations of the lysing substance SU „„ 1116394SU „„ 1116394 1 1116394 21 1116394 2
SU802987588A 1980-06-12 1980-06-12 Method of determining lytic activity of substances SU1116394A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU802987588A SU1116394A1 (en) 1980-06-12 1980-06-12 Method of determining lytic activity of substances

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU802987588A SU1116394A1 (en) 1980-06-12 1980-06-12 Method of determining lytic activity of substances

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1116394A1 true SU1116394A1 (en) 1984-09-30

Family

ID=20919861

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU802987588A SU1116394A1 (en) 1980-06-12 1980-06-12 Method of determining lytic activity of substances

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU1116394A1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2577719C1 (en) * 2015-01-15 2016-03-20 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина" (ФГБНУ "НИИНФ им. П.К. Анохина") Method for determining lysis multiple modified low density lipoprotein

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. Березовска И.В., Власов М.Е., Голиков Ю.В., Митрохин Н.М., Уль нов М.И. Вли ние антисептиков катамина АБ и роккала на форменные элементы периферической крови и состо ние кроветворени белых крыс. ВИНИТИ. Депонированна рукопись № 3428-78 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2577719C1 (en) * 2015-01-15 2016-03-20 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им. П.К. Анохина" (ФГБНУ "НИИНФ им. П.К. Анохина") Method for determining lysis multiple modified low density lipoprotein

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3707620B2 (en) Reticulocyte analysis method and apparatus using light scattering technology
SU753346A3 (en) Method of preparing cell suspension
KR100276144B1 (en) Reagent composition and their use in the identification and characterization of reticulocytes in whole blood
JP2711786B2 (en) Reagent composition and its use for cell sphering
US4751188A (en) Method for the simultaneous quantitative determination of cells and reagent therefor
US5693484A (en) Method of classifying and counting cells in urine
DE69223931T2 (en) Reagent compositions and their use in the identification and characterization of reticulocytes in whole blood
JP4212827B2 (en) Bone marrow nucleated cell automatic analysis method
US4747685A (en) Biological microparticle inspection apparatus
CN107076766B (en) Blood CRP Quality Control object and its quality control method
US5958776A (en) Method for classifying and counting immature leukocytes
EP0137269B1 (en) Process for the simultaneous determination of fibrinogen and cleavage products of fibrinogen in plasma
JPH01199161A (en) Assay and identification of white corpuscle
CN101501497A (en) Method of measurement of cellular hemoglobin
JPS61502277A (en) Method for differentially quantifying leukocytes into four populations and reagent system used for this method
ATE258677T1 (en) METHOD FOR RAPID AND SIMULTANEOUS ANALYSIS OF NUCLATED RED BLOOD CELLS
EP2021764B1 (en) Method to detect states of anemia present in a blood sample
SU1116394A1 (en) Method of determining lytic activity of substances
CN109459372A (en) Erythroblast simulation particle and the preparation method and application thereof
DE3787706T2 (en) Method for the quantitative determination of antigens and antibodies.
Borders et al. Ultrasonic energy backscattered from blood: An experimental determination of the variation of sound energy with hematocrit
JPH034863B2 (en)
US5633169A (en) Measurement of carbon dioxide in blood
ATE142332T1 (en) METHOD FOR VISITING CELLS OR SHAPED BODIES WITH SELECTED PROPERTIES USING A DETECTION PARAMETER
Toffaletti et al. Spectrophotometric micro method for measurement of dialyzable calcium by use of cresolphthalein complexone and continuous-flow analysis.