SU1114020A1 - Циклический октапептид,обладающий гипотензивной активностью и устройство к действию карбоксипептидаз - Google Patents
Циклический октапептид,обладающий гипотензивной активностью и устройство к действию карбоксипептидаз Download PDFInfo
- Publication number
- SU1114020A1 SU1114020A1 SU833620454A SU3620454A SU1114020A1 SU 1114020 A1 SU1114020 A1 SU 1114020A1 SU 833620454 A SU833620454 A SU 833620454A SU 3620454 A SU3620454 A SU 3620454A SU 1114020 A1 SU1114020 A1 SU 1114020A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- effect
- carboxypeptidases
- pro
- arg
- stability
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Циклический октапептид формулы fLys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ifc-LeuT, обладающий гипотензивной активностью и устойчивостью к действию карбоксипептидаз .
Description
1 зобретение относитс к новому .биологически активному соединению циклическому октапептиду формулы 1 . Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ige-Leui обладающему гипотензивной активно- . стью и устойчивостью к действию карбоксипептидаз , которое может найти применение в медицине. Известен природньй трвдекапептиднейротензин формулы p-Glu-Leu-Tyr-Glu-Asu-Lys-Pro-Avg-Avg-Pro-Tyt-1 Ге-Leu, обладающий гипотензивным действием. Известно, что фрагмент нейротензина последовательности 8-13: Arg-Arg-Pro-Tyr-IJe-Leu, обладает полным спектром биологического дейс ви нейротензина и, в частности, гипотензивным действием. Недостатком нейротензина и его уко роченного аналога вл етс их быстр расщепление в организме под действи карбоксипептидаз, что определ ет кратковременность их действи . Наиболее близким по химической структуре к описываемому октапептиду вл етс циклический гексапептид формулы U Lys-Arg-Pro-Tyr-Ife-Leu т обладающий гипотензивным действием и устойчивостью к действию карбокси пептидаз 4. Недостатком его в сравнении с нейротеи ином; вл етс невысока гипотензивна активность. Цель изйбретени - новый аналог .нейротензина, обладающий более высок -гипотензивной активностью и устойчивостью к действию ферментов. Поставленна цель достигаетс ци лическим октапептидом формулы J. . Синтез циклического октапептида форму.пы I осотествл ют твердофазным методом путем ступенчатого наращива НИН пептидной цепи, начина с С-кон ценой аминокислоты, ковалентно св занной с полимерным носителем, с использованием дициклогексилкарбоди имида в качестве конденсирующего агента, с последующим отщеплением защищенного линейного октапептида 20. 2 от полимерного носител , циклизацией и удалением защитных группа Дл защиты cL -аминогруппы аминокислоты используют трет-бутилбксикарбонильную группу, за исключением N-концевого лизина, где используют бензилоксикарбонильную группу. Дл защиты боковых функциональных групп тирозина , аргинина и лизина используют соответственно бензильную, нитро- и трет-бутилоксикарбонильную группы. Все аминокислоты имеют L-конфигурацию. Твердофазный синтез защищенного октапептида:осуществл ют с помощью автоматического синтезатора Beckman990 В (США). В качествеполимерного носител используют хлорметилированный полимер Bio Bends с 1%-ным содержанием дивинилбензола и емкостью 4,2 ьмоль/г. Гомогенность полученных соединений контролирзпот с помощью тонкослойной хроматографии и электрофореза. Тонкослойную хроматографию осуществл ют на пластинках с силикагелем фирмы; Мерк (ФРГ) в следун цих системах: А. Хлороформ - метанол - уксусна кислота (9:1:0,5); Б. Пиридин уксусна кислота вода - этилацетат (20:6:11 г :3,25)} Хлороформ - метанол - уксусна кислота - вода (60:18:2:3); Хлороформ - метанол - уксусна кислота - вода (30:20:4:6); Этилацетат - уксусна кислота н-бутанол - вода (2:1:1:1); н-Бутанол - пиридин - уксусна кислота - вода (15:10:3:12). Электрофорез провод т на бумаге FN-17 -(ГДР) в 1 н. уксусной кислоте (рН 2,1) nprf напр жении 30 в/см. Электрофоретическа подвижность соединений приведена по отнощению к гис;г тидину (Е fyg ). Вещества на хроматограммах и электрофореграммах детектируют с помощью реактива Сакагуси, Паули, а также нингидриновым и бензидиновым реактивами. Удельные углы оптического вращени измер ют на пол ргадетре Parkin .Elmer-142 (США). Аминокислотный состав определ ют на анализаторе Liguimat Ш (ФРГ) после кислотного гидролиза пептидов в течейие 24 ч при 110С в 6 н.сол ной кислоте , содержащей 1% фенола. Массспектр циклоаналога снимали на приборе Varian MAT CH-5DF и приставкой EI-FI-FD. Пример . Получение циклическ го октапептида формулы I . Ы -бензилоксикарбонш1-Н -трет-бyтилoкcикapбoнил-лизшI-пpoлил-N -нитроаргинил-N -нитроаргинил-проли -пролил-о-бензил-тироэил-иэолейцил- лейцин () Z-Lys (Вое) -Pro-Arg (NOj.) -Arg (NO г.) -Pro-Туг(Bzl)-IEe-LeuOH. Исходный Boc-Leu-полимер получаю исход из 5 г полимера и 7 г Boc-Le Начальна емкость аминоацилполимера определенна по привесу и данным аминокислотного анализа, составл ет 5,0 1умоль/г полимера. Твердофазный синтез линейного защищенного октапептидилполимера провод т по програм мам i и 2, приведенным в табл. 1 и Защищенные аминокислоты присоедин ю к пептидил полимеру карбодиимидным методов по программе 1 д После завершени реакции на каждо стадии синтеза выполн лась программа 2 - повторение реакции конденсации и ацетилирование непрореагировав ших аминогрупп уксусным ангидридом. Н трет-бутилоксикарбониламинокислоты перед загрузкой в реактор синтезатора раствор ют в хлористом метилене, N -трет-бутилоксикарбонил-N -нитроаргинил раствор ют в хлористом метилене. Содержащем 10% диметилформамвда. В итоге после отщеплени полимерного носител методом щелочного омылени получают 6,7 г (4,2 ммоль) сырого продукта, который очищают на препаративной колонке с силикагелем ,фирмы Мерк (ФРГ) с использованием в качестве элюента системы А. В итог получают 2,9 г (46%)защищенного линейного октапептида Ш , гомогенного по данным ТСХ: RI 0,45 (А), 0,33 (Б), 0,86 (Д). оС 2. Пентафторфениловый эфир N -бензилоксикарбонил-N -трет-бутилоксикарбонш1-лизил-пролил-Ы -нитроаргинил-N -нитроаргинил-пролил-о- -бензилг-тирозил-изолейцин-лецина (1У Z-Lys (Boc)-Pro-Arg(NO)-Arg(N02)-Pro Tyr (Bzl)-IPe-Leu-OPfp 1 г (0,62 fмoль) Ш раствор ют в 10 мл хлороформа и 10 мл диоксана, при 0°С добавл ют 590 мг (0,55 мМ) комплекса F, представл ющего ссзбой комплекс пентафторфенола и N,N -дициклогексилкарбодиимида (3:1) и оставл ют на 12 ч при О С. Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают, остаток растирают с эфи; ром. В итоге получают 1,0 г (91%)У , R 0,59 (Б). Ш. Хлоргидрат пентафторфенилового эфира М -бензилбксикарбонил-лизил-пpoлшI-N -нитроаргинил-N -нитроаргинил-пролил-о-бензилтирозил-изолейцил-лейцина (1). 4,0 г (0,57 ммоль) ly раствор ют в 5 мл уксусной кислоты, добавл ют 30 мл насыщенного раствора хлористого водорода в уксусной кислоте,через 30 миндобавл ют сухой эфир, выпавщий продукт отфильтровывают.. В итоге получают 0,800 г (84%)1 , R ,04 (Б). ly . Цикло-(Н -бензилоксикарбонил-лизил-пролш1-М -нитроаргинил-N -нитроаргинил-пролш1-о-бензш1-тирозил-изолейцил-лейцил ) (W ). 0,8 г (0,46 ммоль)у раствор ют в смеси, состо щей из 40 мл диметилформамида и 800 мг перегнанного диоксана . При 20 С по капл м при перемешивании добавл ют 0,2 г (1,5 ммоль) диизопропилзтиламина. Реакционную смесь перемешивают 64 ч, затем упаривают в вакууме. Остаток раствор ют в 10 мл смеси этнлацетатэтанол (10:1), осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают и остаток растирают с эфиром. Полученны(1 сырой продукт очищают хроматографически на препаративной колонке с силикагелем фирмы Мерк с использованием в качестве элюента системы. В итоге получают 220 мг (30%) vi , R|.0,62 (Б), 0,56 (В). J. Цикло-(лизил-пролил-аргинилпролнл-тирозил-изолейцил-лейцил ) (1) |-Lys-Pro-Arg-Arg-Pro- Tyr-If e-Leu 220 мг (0,15 ммоль)yi раствор ют 25 мл смеси метанол - уксусна кисота - вода (10:1:1), добавл ют паладиевую чернь и гидрируют 20 ч. атем катализатор отфильтровьгоают, . фильтрат упаривают, добавл ют эфир и выпавший продукт отфильтровьгоают. Получаадт 130,г (74%) Л . Выделенный свободный пептид очгацают хроматографически на носителе типа обратна фаза Zorbax Cg, с использованием в качестве элюента смеси, состо щей из 30% этанола и 70% 0,25М водного раст вора ацетата аймонйй. Досле упаривари растворител остаток лиофилизуют из воды. В итоге получают .27 мг (27%) I , Rf 0,38 (Г) 0,12 (Д), , (Е); Е s 0,86, ы.-67,5 (С 0,2% метанол). Аминокислотный анализа: Pro 1,90 (Z); зее. 1,0«| (I); Leu 0,94 (i); Туг 0,88 (I); Lys 1,0 (Т); Arg 2,24 (Г) мол.вес 1023. Выход 1 рассчитьгоа на первую аминокислоту 8,7% Исследована биологическа активность описываемого дикйооктапептида; . в опытах invivon invitro. В качестве стандартного соединени использовали синтетический нейротензин фирмы Sigma (США). Дл сравнени биологического действи использовали такж циклический гексапептид М . В опытах in vivo изучена гипотензивна активность - вли ние циклооктапептида 1 на артериальное давление наркотизированных этаминал-натрием крыс обоего пола массой 200-220 г, имеющих начальное артериальное давление ,120-140 мм рт.ст. Исследуемые вещес,тва ввод т в дозах 0,12525 в бедренную вену. Артериальное давление регистрируют из общей сонной артерии при помощи ртут ного манометра. Полученные результат представлены в табл. 3. Миотропное действие циклического октапептвда Т изучают в опытах in vitro на изолированной подвздошной морских свинок обоего пола мдссой 350-400 г. 20ft Эксперименты провод т в изотоническом режиме по методу регистрации кумул тивньЬс кривых концентраци эффект с вычислением параметров: внутренн активность об и сродство к рецептору pD2 (см. табл. 4). Острую токсичность i определ ют на белых безлинейных мьш1ах при внутривенном введении. При исследовании вли ни описываемого соединени (I) на артериальное давление наркотизированных крыс показано , что соединение I в услови х опыта обладает значительным депрессорным действием. Эквидепрессорный эффект аналога достигаетс при дозах, в среднем, в два раза превышакщих дозы нейротензина, за исключением дозы 5 нм/кг, котора вызьшает одинаковый эффект у нейротензина и описываемого соединени J (см. табл. 3). Сравнени с ближайшим структурным аналогом гексапептидом 1L показьгоает, что Эквидепрессорный эффект аналога достигаетс в дозах в- 10 раз превосход щих дозы описываемого циклооктапептида .. В опытах in vitro установлено, что опиа 1ваемый циклооктапептид обладает более йизкой миотропной активностью,чем нейротензин. Сродство к рецёптоду гладкой мускулатуры ниже примерно на два пор дка при значительно сниженной внутренней активности (см. табл. 4), т.е. описываемый циклический октапептвд обладает большей избирательностью действи . ТЩдаДЛЯ описываемого соединени составл ет 9 мг/кг, т.е. летальна доза более чем в 18000 раз превышает дозу, при которой наблюдаетс вный депрессорный эффект (0,3 мкг/кг). Циклический октапептид X устойчив к действию карбоксипептидазы В в среде О,2 М буферного раствора ацетата Н-метилморфолина при рН 8,5 и 37 С.
Программа 1 твердофазного синтеза на 10 г полимера (отщепление защитной группы и конденсаци )
Таблица 1
8Добавление Вос-аминокислоты0 ,5М BQC-a.K.
9Добавление
10 Реакци конденсации
11 Промывка
Переход к 1-ой строке программы 2
1М DCC/CHj Cl
10
60
40 X 5 1,5
91114020
. Программа твердофазного синтеза № 2 (повторна конденсаци и ацетилирование)
1 Промывка
2 То же
, 3 Нейтрализаци
4 Промывка
5 Добавление Вое/аминокислоты0 ,5М Вос-а.к.. 20
Переход к 1-он строке программы 1
10 Таблица 2
40
40
1,5
40 X 8 1,5 25% Etj, 40x2 1,5
Claims (1)
- Циклический октапептид формулы обладающий гипотензивной активностью и устойчивостью к действию карбоксипептидаз . 1
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU833620454A SU1114020A1 (ru) | 1983-07-13 | 1983-07-13 | Циклический октапептид,обладающий гипотензивной активностью и устройство к действию карбоксипептидаз |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU833620454A SU1114020A1 (ru) | 1983-07-13 | 1983-07-13 | Циклический октапептид,обладающий гипотензивной активностью и устройство к действию карбоксипептидаз |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1114020A1 true SU1114020A1 (ru) | 1986-07-15 |
Family
ID=21073915
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU833620454A SU1114020A1 (ru) | 1983-07-13 | 1983-07-13 | Циклический октапептид,обладающий гипотензивной активностью и устройство к действию карбоксипептидаз |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1114020A1 (ru) |
-
1983
- 1983-07-13 SU SU833620454A patent/SU1114020A1/ru active
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4261886A (en) | Peptides having thymopoietin-like activity | |
US4350627A (en) | Biologically active peptides | |
US4190646A (en) | Polypeptide compositions and methods | |
JPH03504013A (ja) | T細胞ヘルパー活性を有するペプチド | |
JPS62129297A (ja) | カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体 | |
RU2067000C1 (ru) | Пептид и способ его получения | |
US4215111A (en) | Peptides having ubiquitin-like activity | |
KR101176890B1 (ko) | 단백질 결합 메토트렉사트 유도체 및 상기 유도체를 포함하는 약제 | |
US4397842A (en) | Peptides having thymopoietin-like activity | |
US4209442A (en) | Angiotensin II analogs and process for the preparation thereof | |
EP0018182B1 (en) | Peptides having thymopoietin-like activity, therapeutic compositions containing them, and process for their preparation | |
CA1105925A (en) | Pentapeptide compositions and methods | |
US4179433A (en) | Angiotensin II antagonist peptides containing an alpha-aminooxyacid in the position-1 | |
SU1114020A1 (ru) | Циклический октапептид,обладающий гипотензивной активностью и устройство к действию карбоксипептидаз | |
JPH051798B2 (ru) | ||
Or et al. | Cysteine alkylation in unprotected peptides: synthesis of a carbavasopressin analog by intramolecular cysteine alkylation | |
US4058512A (en) | Synthetic peptides having growth promoting activity | |
RU2010799C1 (ru) | Производные пентапептидов | |
Diaz et al. | A large-scale synthesis of somatostatin for clinical use by a novel alternating solution/solid-phase procedure | |
WO1986003495A2 (en) | Derivatives of substances p and of fragments thereof | |
US4258152A (en) | Pentapeptide modified resin | |
WO2002068457A2 (en) | Antiangiogenic peptides derived from endostatin | |
BUKU et al. | Probes for vasopressin receptors Attachment of affinity and fluorescent groups in vasopressin | |
JP3354173B2 (ja) | ポリペプチドおよびその用途 | |
FI77874C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya, terapeutiskt anvaendbara peptider. |