SU1084295A1

SU1084295A1 - Способ определени адгезивных свойств микроорганизмов,вызывающих кишечные инфекции

Info

Publication number: SU1084295A1
Application number: SU823489481A
Authority: SU
Inventors: Лариса Сергеевна Михайлова; Алексей Юрьевич Самострельский
Priority date: 1982-07-07
Filing date: 1982-07-07
Publication date: 1984-04-07

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДГЕЗЙВiHMX ,СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫЗЫЗАКЯЦИХ КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ, путем :введени исследуемой культуры в жиBCfti организм с последующим определением адгезивных свойств по индексу а дгезии, отличающийс тем, что, с целью ускорени и повьшени точности способа, исследуемую культуру ввод т в аллантоисную полость развивающихс куриных эмбрионов , инкубируют в течение 3-6 ч, дополнительно определ ют частоту гибели куриных эмбрионов, коэффициент прочности адгезии, абсолютное количество прочноприкрепившихс микроорганизмов и достижение максимальwax значений этих показателей к кон .цу инкубировани . (Л g 00 4 Г) са

Description

Изобретение относитс к медицинской микробиологии и касаетс изучени вирулентных свойств микроорганизмов ...

Известен способ определени адгезивных свойств микроорганизмов путем контактировани исследуемой культуры с кусочками ткани кишечника в буферном растворе, после чего определ ют индекс адгезии Л .

Известен также способ определени адгезибных свойств микроорганизмов, вызывающих кишечные инфекции, путем введени исследуемой культуры в живой организм - изолированные петли тонкой кишки взрослого кролика с последующим определением адгезивных свойств по индексу адгезии 2 .

Однако известные способы длительны и не обеспечивают высокой точности определени , так как предусматривают оценку только одного показател - индекса адгезии.

Целью изобретени вл етс ускр .рение и првьшение точности способа.i

Цель достигаетс тем, что согласн способу определени адгезионных свойств микроорганизмов, вызывающих кишечные инфекции, пзтем введени . исследуемой культуры в живой организм с последующим определением адгезионных свойств по индексу адгезии , исследуемую культуру ввод т в аллантоисную полость развивающихс куриных эмбрионов, инкубируют в течение 3-6 ч, дополнительно определ ют частоту гибели куриных эмбрионов коэффициент прочности адгезии, абсолютное количество прочноприкрепившихс микроорганизмов и достижение максимальных значений этих показателей к концу инкубировани .

Пример 1. Изучаемой 16-часовой культурой на бульоне Хоттингера рН 7,2-7,4 в дозе 1-310 (холерные вибрионы 0,5-0,9-10 ) микр.клеток в 0,1 мл заражают 10 куриных эмбрионов 11-12-дневного срока развити . Заражение осуществл ют в аллантоисн Яо полость общеприн тым методом. Контролем служат эмбрионы, которым ввод т стерильный бульон. Такие эмбрионы продол5лают нормально развиватьс в течение нескольких суток. Гибель опытных эмбрионов начинают регистрировать через 3-4 и каждый последующий час путем просмотра их на овоскопе . О гибели суд т по обездвиживанию

зародьша, истончению и запустению кровеносных сосудов. Культуры, вызывающие гибель 50% и более зараженных эмбрионов через 5-6 ч, относ тс к I группе и обладают выраженной способностью к адгезии. Культуры, вызывающие гибель большей части эмбрионов через 8-24 ч (поздн гибель) относ тс к И группе и не имеют выраженных адгезивных свойств.

П р и м е 2. Каждой исследуемо ( холерный вибрион, кишечна палочка) культурой заражают по 4 куриных эмбриона общеприн тым способом. На каждом сроке вскрывают по 2 эмбриона . Дл стерильного вз ти тканей и жидкостей после инкубации скорлупу над воздушной полостью прожигают, срезают ее ножницами и разрезают подлежащие оболочки. Отсасывают аллантоисную жидкость и замер ют ее объем. Переворачива эмбрион над стерильной посудой, с помощью ножниц и пинцетов удал ют амниотический мешок с зародышем, желточный мешок. Затем отслаивают ХАО и перенос т ее на стерильную чашку Петри, удал ют белковую массу. Далее провод т последовательное промывание 2 оболочек вместе в 3-4 объемах по 100-150 мл теплого физраствора (37°). Промытые ХАО растирают в ступке с небольшш4 |количеством кварцевого песка. Гомо|генат 2 ХАО смывают 2 мл физраствора затем пипеткой перенос т в мерную пробирку. Отмечают его объем, вычита объем кварцевого песка. Дл посева три первые промывные воды сливают вместе. Количественные микробиологические посевы производ т общеприн тым методом на агаровую пластину с пересчетом количества микроорганизмов на весь объем пробы.

. Количественные показатели, характеризующие адгезию, определ ют по формуле

100%,

Т .

(в,+в)

а + t +

индекс адгезии, т.е. процент

Т прочноприкрепившихс микроорганизмов;

абсолютное количество прочt ноприкрепившихс микроорганизмов;

наменатель - сумма микроорганизвсей попул ции: а - абсолютное количество микро организмов, не обладающих способностью прикрепл тьс (содержатс : в аллантоисной жидкости) , 7 ъ,.ь,абсолютное количество слабо прикрепившихс микроорганиз мов (смытые соответственно в трех первых и последней промывных водах). Величины А (количество микроорганизмов , неспособных к адгезии), В и Б (микроорганизмы, обладающие слабой адгезией) вычисл ют аналогично индексу адгезии Т. t КПА --, показывает во сколько « раз больше осталось микроорганизмов на оболочке, чем в.последней промывной воде, т.е. характеризует степень прочности прикреплени . Применение куриных эмбрионов вместо трудоемкого метода изолированных петель тонкой кишки кролика делает предлагаемый способ широко доступным, обеспечивает стандартные услови проведени опыта. Предлагаемые критерии оценки адгезивной способности с использованием индекса адгезии еще двух показателей - КПА и количества прочноприкрепившихс возбудителей с учетом их максимальных значений через 4-5 ч - позвол ют, достоверно определ ть способность культур к адгезии. Возможность пред .варительной качественной оценки зна чительно экономит врем (в прототипе 30-36 ч, в предложенном способе 20-24 ч) и трудозатраты, так как исключает из дальнейшего количественного изучени до 18% культур (среди НАГ вибрионов и кишечных палочек значительно больше).

Claims

2. Freter R. I.Texnic Repair Biology and Medicine, 1969, 27 Suppl, ¢. 299-316 (прототип)_vί(54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДГЕЗИВ_;НЫХ СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫЗЫ(ВАВДИХ КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ, путем введения исследуемой культуры в живой организм с последующим определением адгезивных свойств по индексу адгезии, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, исследуемую культуру вводят в аллантоисную полость развивающихся куриных эмбрионов, инкубируют в течение 3-6 ч, дополнительно определяют частоту гибели куриных эмбрионов, коэффициент прочности адгезии, абсолютное количество прочноприкрепившихся микроорганизмов и достижение максимальных значений этих показателей к концу инкубирования.