SU1076034A1 - Способ выращивани растений томатов @ @ - Google Patents

Abstract

1. СПОСОБ ВЫРАЙЩВАНИЯ РАСТЕНИЙ ТОМАТОВ IN VITRO, включающий получение эксплантатов, выращивание из них первичного каллуса, культивирование его в среде дл  регенерации ,в услови х, способствующих образованию стеблевых почек и проростков, доращивание полученных стеблевых почек на среде с уменьшенным вдвое содержанием макросолей без гормонов и последующую высадку в грунт, отличающийс  тем, что, с целью ускорени  процесса выращивани  и увеличени  выхода растений, эксплантаты культивируют непосредственно на среде дл  регенерации, при этом культивирование провод т первые 7-10 сут в темноте. 2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что в качестве эксплантата испольэуют листь  проростков . 3.Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с   тем, что среда дл  регеi нерации представл ет собой модифицированную среду Мурасиге и Скуга, (Л котора  содержит кинетина 4 мг/л, а индолилуксусной кислоты 0,4 мг/л. С

Description

о

оо

4

} зобретение относитс  к сельском хоз йству и может быть использовано g селекции и семеноводстве растений в частности селекции томатов, в исследовани х по генетике: фитопатологии и физиологии растений.

Известен способ размножени  на искусственной питательной среде клевера, согласно которому в качестве исходного материала используют листочки растений с надрезами,по всей плоскости листовой пластинки, которые 2-3 недели инкубируют на агариЗованной питательной среде Гамборга Bj с добавлением нитрата аммони , 2,4-«дихлорфеноксиуксусной кислоты (8-16 мг/л), кинетина (.6-10 мг/л) и нафтилуксусной кислоты (0,1-0,5 мг/л) .при непрерывном освещении люминесцентными лампами с последующей пересадкой на ту же питательную среду, но без нитрата аммони , в которой вышеназванных тр гормона заменены одним бензиламинопурином (0,2-0,8 мг/л). На этой среде они культивируютс  в те же услови х в течение двух-четырех недель до по влени  зеленых стебле .вых почек и проростков., которые Леренос т на агаризованную среду Гамборга Е, разбавленную вдвое без гормонов си.

Известен способ размножени  на искусственных питательных средах растений культурных и диких видов томатов, согласно которому отрезки сем долей, листьев и стеблей стерильных проростков томатов дл  получени  первичного каллуса высаживают на среду Мурасиге и Скуга с высоким содержанием гормонов (ауксина ИУК 16 мг/л , кинетина 4 мг/л, аденина 40 мг/л) и инкубируют при 24-26 0 под лампами дневного света 3-4 над. Затем дл  меристематизации образовавшегос  каллу его перенос т в условий повышенног освещени  (5-10 тыс.люкс и выше) н среду дл  регенерации (6-8 мг/л кинетина и 5-6 мг/л ИУК) либо остал ют на исходной среде. При этом стеблевые почки и проростки образуютс  у 15-25% полученных каллусов. Затем проростки пересаживают на среду дл  корнеобразовани  без гормонов и с пониженным содержанием агар-агара. Регенеранты с корн ми высаживают сначала в вермикулит с питательным раствором Кнопа, а затем (через 5-7 дней) в обычный грунт.

Получение регенерантов по данному способу требует в лучшем случае около 70 дней (всего из тыс чи с лишним каллусов получено 50 растений сорта Бизон 12 растений вида L.peruvianum и Одно растение вида L.hirsutum) С23

Недостатками этого способа  вл ютс  низкие продуктивность и надежность и оольшие временные затраты.

Цель изобретени  - ускорение процесса выращивани .

Поставленна  цель достигаетс  тем, что согласно способу выращивани  растений томатов in vitro эксплантаты культивируют непосредственно на среде дл  регенерации при этом культивирование провод т первые 710 сут в темноте. .Причем в качестве эксплантата используют листь  проростков.

Кроме того, среда дл  регенерации представл ет собой модифицированную среду Мурасиге и Скуга, котора  содержит -канетина 4 мг/л, а индолилуксусной кислоты 0,4 мг/л.

Способ осуществл ют следующим образом.

Материал инкубируют 7-10 сут в полной темноте при 25-27 С и относительной влажности воздуха 95-100% в закрытых прозрачных сосудах. К концу этого периода на утопленной в среде части черешка образуетс  тканевой наплый с этиолированными стеклевыми почками и отдельными проростками до 2/3 мм длиной. Затем сосуды с указанными эксплантатами перевод т в услови  16-часового фотопериода при освещенности 30005000 лк и той же температуре, после чего этиолированные стеблевые почки ,и проростки зеленеют и начинают быстро расти и развиватьс . Обычно у основани  черешка наиболее активно развиваетс  1-3 регенеранта, которые начинают доминировать, подавл   развитие менее развитых регенерантов и неразвившихс  стеблевых почек, достига  через две-три/недели 1-2 см

Размножившеес  у основани  черешк регенеранты и стеблевые почки расчлен ют и рассаживают на агаризованную , разбавленную вдвое среду Мурасиге и Скуга без гормонов дл  доращивани  и укоренени . При тех же температурных услови х и фотопериоде выращивание на данной среде продолжают еще одну-две недели до по влени  у регенерантов 2-,3 листьев и корКей, после чего их пересаживают в почвенно-торф ную смесь с рН 5-6,5 и выращивают в обычных услови х.

В случае необ содимости одновременого получени  большего количества одновозрастных регенерантов ткань со сформировавшимис  стеблевыми почкс1Ми и проростками отдел ют от листа-питател , дроб т на несколько кусочков, пересаживают на исходную среду дл  регенерации.и культивирую в указанных выше услови х фотопернода . При этом в течение 10-15 дн объем этих кусочков и количество

стеблевых почек и проростков можно повторить несколько раз, после чего эксплантаты расчлен ют на отдельные регенеранты и стеблевые почки и высаживают на среду дл  доращйвани  и укоренени . В этом случае добавл етс  определенное количество циклов, что снижает скорость получени  взрослых регенерантов . Однако благодар  размножению меристематических очагов при дроблении и последующем культивировании эксплантатов на среде дл  регенера .ции неограниченно возрастает количество получаемых регенерантов.

Пример 1. Листочки стерильных проростков гибрида М 394хм 504

высаживают на вышеупом нутую среду , дл  регенерации, фиксиру  их вертикально , погружени  среза черешка в среду на 1,5-2 IVIM. Высаг женный материал дел т на две части.

Первую часть (вариант) инкубируют в услови х 16-часового фотопериода, вторую (вариант П) - первые 10 сут инкубируют в полной темноте, а затем также перенос т в услови 

того же фотопериода. Интенсивность регенерации оценивают по 5-балльной шкале.

Результаты, полученные в обоих вариантах опытов представлены в таб. 1 .

Таблица

С первичным действием темноты

В услови х фотопериода

Таким образом, первоначальный темновой период инкубации способствует повышению интенсивности и сокращению сроков регенерации.

Пример 2. На вышеуказанную среду дл  регенерации высаживают листочки стерильных проростков томатов гибрида Мо393хМо504, которые фиксируют вертикально путем погружени  среза черешка в среду на 1,5100

100

Из данных табл. 2 следует, что использс5вание структурно целостного листочка по сравнению с высечкой листа также приводит к повышению, интенсивности и сокращению сроков регенерации.

Пример 3. На среду регенерации высаживают листочки стерильных

5,0

1-2

X

3-4

1,4

2 мм и высечки аналогичных листочков диаметром 0,8 мм помеща  на поверхность среды. Ьба варианта культивируют 10 сут в темноте, а затем перенос т в услови  16-часового фотопериода . Интенсивность регенерации также оценивают в 5-балльной шкале.

Результаты опыта представлены в табл. 2.

Таблица 2

1-2

5,0 2-4 2,8

проростков гибрида Мо393хМо504 и помещают на 10 сут в услови  абсолютной темноты. По истечении темнового периода инкубации материал опыта делили на три части (варианта). Первый вариант перенос т в услови  фотопериода, второй и третий оставл ют еще на 10 сут в темноте, причем

у третьего на среде оставл ют лишь ткань с этиолированными стеблевыми почками и проростками, образующуюс  на срезе черешка, а сам листочек удал ют. По истечении указанного времени второй и третий варианты также перенос т в услови  16-часового фотопериода. Две недели спуст  по п тибалльной шкале оценивают регнерационную способность эксплантато трех.вариантов. Регенерационна  способность эксплантатов первого варианта .5, второго 3,2 и третьего 1,6 балла.. Таким образом-, Оптимальное врем  первичной иикубации в темноте равно приблизительно 10 сут, поскольку увеличение этого времени приводит к существенному понижению регенерационной способности эксплантатов . Удаление листочка от образовавшейс  на срезе черешка ткани с этиолированными стеблевыми почками

. и проростками приводит к еще боль-, шему понижению регенерационной способности эксплантата.

Пример 4. На среду дл  регенерации высаживают листочки стерильных проростков томатов Мо393хМо504, инкубируют 10 сут в темноте, затем перенос т в услови  фотопериода. Спуст  две недели опыт делили на две части (варианты| В первом варианте образовавшиес  D тканевом наплыве на срезе черешка доминирующие регенеранты (1-3 шт) и стеблевые почки (7-10 шт отдел ют,

и высаживают на разбавленную вдвое агаризованную среду Мурасиге и Скуга без гормонов и продолжают инкубировать в тех же услови х. Во втором варианте от основани  черешка отдел ют и высаживают на разбавленную среду Мурасиге и Скуга только доминирующие регенеранты, а тканевый наплыв с оставшимис 

недоразвитыми проростками, стеблевыми почками и листочком-питателем оставл ют на исходной среде и продолжают его культивирование в услови х фотопериода . Спуст  2-3 недели от каждого подвергавшегос  дроблению эксплантата получено в среднем 10 развившихс  регенерантов, а на эксплантатах же второго варианта развились доминирующие регенеранты (1-3 шт. в среднем на эксплантат). Затем операцию отделени  регенерантов повтор ют , после чего эксплантаты продолжают культивироватьс  в тех жеуслови х до образовани  новых регенерантов и т.д.

Таким образом, в первом варианте опыта за 30-40 дней от каждого эксплантата получено в среднем 10 регенерантов , во втором варианте за 45-75 дн-4 регенеранта.

Предлагаемый способ испытан помимо указанных опытов на томатах сортов Новинка Приднестровь  и Ранний-83, мутантах Мо393 и Мо50Ю, диких видах L.hirsutum и Solanum pennellii , а также их гибридах с сортом Новинка Приднестровь  и мутантом МоБОО, вз тыми в качестве материальной формы. Регенерационна  способность Q культурных сортов и мутантов в 1,52 раза ниже, чем дикарей и гибридов, из каждого эксплантата которых получено в среднем 10 регенерантов.

Примен   два типа питательных сред, темновой первоначальный период и систему лист-питатель-ткань с регенерантами в течение 30-40 дней от каждого эксплантата получили 5-10 сформировавшихс  растений-регенерантов , которые будучи высаженными в почвенно-торф ную смесь развивались здоровыми и морфологически не отличались от исходных.

Claims (3)

1. СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ РАСТЕНИЙ ТОМАТОВ IN VITRO, включающий получение эксплантатов, выращивание из них первичного каллуса, культивирование его в среде для регенерации в условиях, способствующих образованию стеблевых почек и проростков, доращивание полученных стеблевых почек на среде с уменьшенным вдвое содержанием макросолей без гормонов и последующую высадку в грунт, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса выращивания и увеличения выхода растений, эксплантаты культивируют непосредственно на среде для регенерации, при этом культивирование проводят первые 7-10 сут в темноте.

2. Способ поп. 1, отличающийся тем, что в качестве эксплантата используют листья пророст ков .

3. Способ по π. 1, о т л и чающий с я тем, что среда для регенерации представляет собой модифицированную среду Мурасиге и Скуга, которая содержит кинетина 4 мг/л, а индолилуксусной кислоты 0,4 мг/л.

SS