SU1069817A1 - Способ дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител к вирусу щура - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПОСТИНФЕКЦИОННЫХ И. ПОСТВАКЦИ НАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЯЩУРА включающий постановку серологической реакции с испытуемой сывороткой, отличающийс  тем, что, с целью повышени  достоверности способа, в качестве серологической реакции используют непр мую реакцию иммунофлюоресценции , испытуемую сыворотку берут в р.азведени х 1:16-2048, причемпостинфекционные антитела определ ют по наличию специфического свечени , a поствакциональные - по его отсутствию.

Description

Од

со

00 Изобретение относитс  к ветеринарии и может быть использовано при ускоренной серодиагностике  щура. Специфические противо щурные антитела в сыворотке крови животных вы вл ют с помощью реакций угнетени  св зывани  комплемента , нейтрализации и серозащиты. В последнее врем  дл  этой же цели используют тест ингибиции бл шек, реакции радиальной иммунодиффузии, диффузионной преципитации и др 1. Однако указанные способы не позвол ют дифференцировать антитела, по вивщиес  в сыворотке в результате инфекции, от антител , индуцированных инактивированной вакциной против  щура. Известен способ дифференциации постинфекционных и поствакциналкных антител к вирусу  щура, включающий постановку реакции диффузионной преципитации испытуемой сыворотки с via-антигеном. По обнаружению антител к via-антигену дифференцируют постинфекционные антитела от поствакцинальных 2. Однако известный способ  вл етс  недостаточно точным,- поскольку антитела к viaантигену могут по вл тьс  в сыворотках крови не только при переболевании животных  щуром. Но и при вакцинации и даже при отсутствии контакта их с вирусом 3. Цель изобретени  - повышение достоверности способа дифференциации антител к вирусу  щура, индуцированных инфекцией , от антител, св занных с вакцинацией. Поставленна  цель достигаетс  тем, что согласно способу дифференциации постинфекционных и поствакцина чьных антител к вирусу  щура, включающему постановку серологической реакции с испытуемой сывороткой , в качестве серологической реакции используют непр мую реакцию им.мунофлюоресценции ,,испытуемую сыворотку берут в разведени х 1:16-2048, причем постийфекционные антитела определ ют по наличию специфического свечени , а поствакцинальные - по его отсутствию. Пример. Дл  приготовлени  препаратов (антигенов) дл  непр мой реакции иммунофлюоресценции используют однослойную культуру клеток, выращенную в матрицах РУ или «Клинских, Ее инфицируют вирусом  щура (любой штамм) так, чтобы 10-30% клеток моносло  было поражено через 8- 18 ч. Затем клетки диспергируют 0,25%-ным раствором трипсина или 0,02°/о-ным раствором версена при 37°С и готов т суспензию с концентрацией 1-5x10 клеток/мл на растворе Хенкса (без индикатора). По 3-4 капли этой суспензии нанос т на предметное стекло и высушивают путем выпаривани  жидкости при 37°С. Затем клетки фи ксируют аце тоном при 4°С в течение 20-30.мни и. полученные препараты хран т до использоваг НИИ в сухой банке при 4°С. Каждую партию препаратов провер ют с по.мощью реакции иммунофлюоресценции на наличие в них достаточного количества (т.е. 10-30%) антигеносодержащих клеток, а также на степень  ркости специфического свечени . Постинфекционные антитела- в сыворотках обнаруживают в период с 5-7 дн  болезни до 6 мес после переболевани  животных  щуро.м. Перед исследованием сыворотки инактивируют при 56°С в течение 30 мин и развод т физиологическим раствором с рН 7,2-7,4 в соотношении 1:16,1:32-2048. Постановка реакции заключаетс  в нанесении на нрепараты (антигены) на 1-м ее этапе последовательных разведений исследуемой сыворотки в количестве 0,05-0,1 мл на препарат. После 30 .мин инкубации при 37°С и двукратного промывани  в течение 20 мин в охлажденном до 4°С буферном физиологическом растворе на эти же препараты (на 2-м этапе реакции) нанос т аналогичный объем смеси рабочих разведений гомологической антивидовой люминесцирующей сыворотки и бычьего альбумина, меченого родамином. После 30 мин инкубации при 37°С и трехкратного в течение 30 мин про .мывани  в буферном физиологическом растворе , охлажденном до 4°С, препараты высушивают на воздухе и просматривают под микросокопом любой марки при объективе х40 и окул ре х4 или х5. Микроскопически о наличии постинфекционных антител в испытуемой сыворотке суд т по ее активности в реакции иммунофлюоресценции, т.е. при наличии в этой сыворотке постинфекционных антител они вступают в соединение с известным антигеном, содержащимс  в инфицированной культуре клеток, а образуюпхийс  комплекс «антиген-антитело вы вл етс  антивидовой люминесцирующей сывороткой, придающей антигеносодержащим клетка.м зеленое свечение,  вл ющеес  специфическим. По отсутствии специфического свечени  определ ют поствакцинальные антитела. В результате проведенной апробации способа установлено, что сыворотки животных, болеющих  щуром в острой стадии, айтивны в реакции иммунофлюоресценции в разведени х 1:16-64, сыворотки животных-реконвалесцентов активны в разведени х 1:16- 2048 и более, сыворотки же животных, привитых одно- и двукратно ипактивированной МОНО-, би- и трехвалентной вакциной, в этой реакции оказались неактивными, т.е. они не давали специфической люминесценции с известным антигено.м, что свидетельствует об отсутствии в них постинфекционных антител . Предлагаемый способ дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител к вирусу  щура позвол ет с высокой 34

степенью достоверности вы вл ть болеющих технологичностью, быстротой получени  дии переболевших  щуром животных среди агностического результата и высокой провакцийированной попул ции, отличаетс  изводительностью.

1069817

Claims (1)

1. СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ПОСТИНФЕКЦИОННЫХ И. ПОСТВАКЦИНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЯЩУРА, включающий постановку серологической реакции с испытуемой сывороткой, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности способа,в качестве серологической реакции используют непрямую реакцию иммунофлюоресценции, испытуемую сыворотку берут в разведениях 1:16—2048, причем· , постинфекционные антитела определяют по наличию специфического свечения, а поствакциональные — по его отсутствию.

   >