SU1027616A1

SU1027616A1 - Structurally anormal hemoglobin determination method

Info

Publication number: SU1027616A1
Application number: SU813319264A
Authority: SU
Inventors: Надир Худавердиевич Мехтиев; Кямал Мамедович Мовсум-Заде; Эльхан Мамед Оглы Расулов; Таира Аламшах Кызы Аскерова
Original assignee: Научный Центр Биологических Исследований Ан Азсср
Priority date: 1981-11-26
Filing date: 1981-11-26
Publication date: 1983-07-07

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРУКТУРЙО-АНОМАЛЬНЫХ ГЕМОГЛОБИ1ЮВ путем получени гемолизата эритроцитов с последующим его изоэлектрофокусированием в полиакриламидно-амфолиновом геле при 10&deg;С, фиксацией гемоглобиновых фракций денатурирующими агентами , отличающийс тем, 4TOf с Целью повышени точности способа, гемолизат разбавл ют до содержани гемоглобина 1,9-2,2 г % и изофокусируют его при напр жении 300-350 В, силе тока 25-30 мА, а фиксацию гемоглобиновых фракций провод т водным раствором денатурирующих агентов.METHOD OF DEFINITION; STRUCTURE 9-2.2 g% and isofocusing it at a voltage of 300-350 V, current of 25-30 mA, and fixation of the hemoglobin fractions is carried out with an aqueous solution of denaturing agents.

Description

Изобретение относится к е>иохимии и молекулярной биологии, конкретно к способам выявления структурно-ано мальных гемоглобинов и может быть использовано в медицине, в частности гематологии.The invention relates to e> chemistry and molecular biology, specifically to methods for detecting structurally abnormal hemoglobins and can be used in medicine, in particular hematology.

Известен способ определения структурно-аномальных гемоглобинов путем получения гемолизата эритроцитов с последующим его иэоэлектрофокусированием в пол.иакриламидно-амфолиновом геле при 10°С, фиксацией гемоглобиновых фракций денатурирующими агентами [1 ].A known method for the determination of structurally abnormal hemoglobins by obtaining erythrocyte hemolysate with its subsequent electroeffocusing in a half acrylamide-ampholine gel at 10 ° C, fixing hemoglobin fractions with denaturing agents [1].

Недостатками известного способа является невозможность идентификации нестабильных с т ру к т у р н о -а н ома л 7> ных гемоглобинов ввиду неполного·разделения гемоглобиновых фракций.The disadvantages of this method is the impossibility of identifying unstable hemoglobins due to incomplete separation of hemoglobin fractions.

Введение в гемолизат раствора цианистого калия вызывает слияние промежуточного Mett-гемоглобина с основной Фракцией гемоглобина. Кроме того, цианистый калий является сильно ядовитым реактивом.The introduction of a solution of potassium cyanide into the hemolysate causes the fusion of the intermediate Mett-hemoglobin with the main hemoglobin fraction. In addition, potassium cyanide is a highly toxic reagent.

Разделение гемолизата при 1600 В с силой тока 50 мА вызывает разложение нестабильного структурно-аномального гемоглобина и искажает картину спектра гемоглобиновых фракций.The separation of the hemolysate at 1600 V with a current of 50 mA causes decomposition of the unstable structurally abnormal hemoglobin and distorts the spectrum of the hemoglobin fractions.

Использование в фиксирующем растворе метилового спирта может оказывать отрицательное воздействие на экспериментатора при популяционных исследованиях (200 анализов в день) ввиду его токсичности.The use of methyl alcohol in the fixing solution can have a negative effect on the experimenter in population studies (200 tests per day) due to its toxicity.

Цель изобретения - повышение точности способа.The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения структурно-аномальных гемоглобинов путем получения гемолизата эритроцитов с последующим его иэоэлектрофокусированием в полиакриламидно-амфолиновом геле при 10°, фиксацией гемоглобинсЕЫ.х фракций денатурирующими агентами, при котором гемолизат разбавляют до содержания гемоглобина 1,9-2,2 г % и изофокусируют его при напряжении 300-350 В, силе тока 2530 мА, а фиксацию гемоглобиновых фракций проводят водным раствором денатурирующих агентов.This goal is achieved by the fact that according to the method for determining structurally abnormal hemoglobins by obtaining erythrocyte hemolysate with subsequent electroelectric focusing in a polyacrylamide-ampholine gel at 10 °, fixation of hemoglobin EC fractions with denaturing agents, in which the hemolysate is diluted to 1,9-2 hemoglobin , 2 g% and isofocus it at a voltage of 300-350 V, a current of 2530 mA, and the fixation of hemoglobin fractions is carried out with an aqueous solution of denaturing agents.

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

Из 0,1 мл цельной крови эритроциты отделяют центрифугированием, дважды Промывают раствором NaCS (8,5 г/л), гемолизируют добавлением 1:5 объема четыреххлористого углерода. Гемолизаты готовят разбавлением эритроцитной массы дистиллированной водой до содержания гемоглобина 1,9-2,2%.From 0.1 ml of whole blood, red blood cells are separated by centrifugation, washed twice with NaCS solution (8.5 g / l), hemolysed by adding 1: 5 volume of carbon tetrachloride. Hemolysates are prepared by diluting the red blood cell mass with distilled water to a hemoglobin content of 1.9-2.2%.

Разбавленный гемолизат 25 мкл наносят на полиакриламидно-амфолиновый гель с pH 3,5-9,5.Diluted hemolysate 25 μl is applied to a polyacrylamide-ampholine gel with a pH of 3.5-9.5.

Разделение гемоглобиновых фракций проводят при 320 В, используя силу тока 28 мА, анодным раствором 0,1 М ортофосфорной кислоты и катодным 0,1. М едкого натра при 10 С,The separation of hemoglobin fractions is carried out at 320 V, using a current of 28 mA, an anodic solution of 0.1 M phosphoric acid and cathodic 0.1. M caustic soda at 10 C,

Гелевую пластину после разделения фиксируют раствором 57,7 г трихлоруксусной кислоты и 17,25 г сульфосалициловой кислоты в 500 мл дистиллированной воды в течение 15 мин, затем гель высушивают и покрывают пластмассовой пластинкой для хранения .After separation, the gel plate is fixed with a solution of 57.7 g of trichloroacetic acid and 17.25 g of sulfosalicylic acid in 500 ml of distilled water for 15 minutes, then the gel is dried and covered with a plastic storage plate.

Пример 1. Обследуемый Алиев Ахмед (48 лет) был обследован на носительство структурно-аномального гемоглобина. У обследуемого было взято 0,1 мл крови из пальца, приготовлен гемолизат (2,0 г%) и проведено изоэлектрофокусирование при 300 у, 28 та.Example 1. The examined Aliyev Ahmed (48 years old) was examined for the carriage of structurally abnormal hemoglobin. A 0.1 ml blood from a finger was taken from a subject, a hemolysate (2.0 g%) was prepared, and isoelectric focusing was performed at 300 g, 28 t.

Выявлен аномальныйAbnormal detected

Прим нестабильный.структурногемоглобин.Note unstable. Structural hemoglobin.

ер 2. Обследуемая Алиева Фарах (18 лет) - дочь Алиева Ахмеда также была обследована на носительство структурно-аномального гемоглобина, У обследуемой было взято 0,1 мл крови из пальца, приготовлен гемолиэат (2,1 г%) и проведено изоэлектрофокусирование при 320 у, 25 ма, На изоэлектрофореграмме выявлен структурно-аномальный гемоглобин и его мет/форма в виде двух полос, Пример 3. Обследуемый Алиев Керим (8 лет) - сын Алиева Ахмеда - обследован на носительство структурно-аномального гемоглобина . предлагаемым способом.er 2. Examined Aliyeva Farah (18 years old) - Aliyev’s daughter Ahmed was also examined for carriage of structurally abnormal hemoglobin. 0.1 ml of blood was taken from the examined woman, hemolieate was prepared (2.1 g%) and isoelectric focusing was performed at 320 y, 25 ma, Structurally abnormal hemoglobin and its met / form in the form of two bands were detected on an isoelectrophoregram, Example 3. The examined Aliyev Kerim (8 years old) - the son of Aliyev Ahmed - was examined for the carriage of structurally abnormal hemoglobin. the proposed method.

При осуществлении предлагаемого способа· на изоэлектрофорограмме выявлен структурно-аномальный гемоI глобин.In the implementation of the proposed method · structural is anomalous hemoI globin detected on an isoelectrophoregram.

Таким образом, предлагаемый способ, позволит улучшить качество разделения гемоглобиновых фракций и выявить нестабильные формы структурно-ано.мальных гемоглобинов, что дает возможность получить достоверную информацию о молекулярных нарушениях белковой части гемоглобина.Thus, the proposed method will improve the quality of separation of hemoglobin fractions and identify unstable forms of structurally anomalous hemoglobins, which makes it possible to obtain reliable information about the molecular disorders of the protein part of hemoglobin.

СОствавитель И. ЕмельяненкоCo-owner I. Emelianenko

Claims

METHOD FOR DETERMINING STRUCTURAL-ANOMAL HEMOGLOBINS by obtaining erythrocyte hemolysate followed by isoelectric focusing in a polyacrylamide-ampholine gel at 10 ° C, fixing hemoglobin fractions with denaturing agents, which differs in that the hemoglobin is used to increase the accuracy -2.2 g% and isofocus it at a voltage of 300-350 V, current strength of 25-30 mA, and the fixation of hemoglobin fractions is carried out with an aqueous solution of denaturing agents. _about

SS ω s>