SK377992A3 - Bivalent immunogenes and method of their preparation - Google Patents
Bivalent immunogenes and method of their preparation Download PDFInfo
- Publication number
- SK377992A3 SK377992A3 SK3779-92A SK377992A SK377992A3 SK 377992 A3 SK377992 A3 SK 377992A3 SK 377992 A SK377992 A SK 377992A SK 377992 A3 SK377992 A3 SK 377992A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- bacterial
- glycoproteins
- proteosomes
- immunogens
- bivalent
- Prior art date
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Vynález sa týka bivalentných imunogénov účinných proti onemocneniam vyvolávaným vírusmi z čelade Orthomyxoviridae alebo Paramyxoviridae na jednej strane a gram-negatívnymi baktériami alebo spirochétou Borrelia Burgdorferi (Lymská choroba) na strane druhej, ako aj spôsobu ich prípravy.The invention relates to bivalent immunogens active against diseases caused by viruses from the family Orthomyxoviridae or Paramyxoviridae on the one hand and gram-negative bacteria or spirochete Borrelia Burgdorferi (Lyme disease) on the other, as well as a process for their preparation.
Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Pre účely profylaktickej vakcinácie proti chrípke sa v súčasnosti používajú vakcíny pozostávajúce z čiastočne očisteného a formaldehydom usmrteného vírusu. Ich nevýhodou je nízky stupeň čistoty preparátov, denaturácia obalového glykoproteinu ncuraininidázy - zodpovedného za navodenie povrchovej slizničnej imunity formaldehydom a prítomnost glykolipidov vírusového obalu v preparáte. Tieto skutočnosti znamenajú možnost zvýšenej frekvencie postvakcinačných reakcií, nižšiu imunogénnost preparátov, ako aj možnost vyvolania autoimúnnych procesov glykolipidmi v organizme.For prophylactic influenza vaccines, vaccines consisting of partially purified and formaldehyde-killed virus are currently used. Their disadvantage is the low degree of purity of the preparations, denaturation of the envelope glycoprotein ncuraininidase - responsible for inducing surface mucosal immunity by formaldehyde, and the presence of glycolipids of the viral envelope in the preparation. This means the possibility of an increased frequency of post-vaccination reactions, a lower immunogenicity of the preparations, as well as the possibility of inducing autoimmune processes by glycolipids in the body.
Podlá doterajších výsledkov na rôznych zvieracích druhoch sa predpokladá, že prítomnost protilátok proti osp A /outcr súriace protein A/spirochéty Borrelia Burgdorferi v organizme pred vlastnou nákazou dokáže zabránit vyvinutiu sa Lymskej chroby; v priebehu už raz rozvinutého chronického ochorenia tvoriace sa protilátky už takej ochrany nie sú schopné (Edelman, Vaccine, 9, 531,/1991/).According to the present results on various animal species, it is believed that the presence of antibodies against osp A / outcr fever protein A / Borrelia Burgdorferi spirochete in the body prior to infection can prevent the development of Lyme disease; in the course of already developed chronic disease, antibody-forming antibodies are no longer capable of protection (Edelman, Vaccine, 9, 531, (1991)).
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Uvedené nevýhody vakcín pozostávajúcich z celých usmrtených patogénov (vírusov alebo baktérií) odstraňujú bivalentné imunogény, proti chrípke a Lymskej chorobe, či iným bakteriálnym alebo paramyxovírusovým chorobám podlá vynálezu, zložené z natívnych a iba imunorelevantných polypeptidov. Podstata vynálezu spočíva v tom, že imunogény pozostávajúce napr. z glykoproteinov vírusu chrípky a to hemaglutinínu a neuraminidázy s molekulovou hmotnostou 76 resp. 65 kDa, ktoré sú viazané svojimi C- resp. N-koncami s bakteriálnymi proteozómami. Priestorová orientácia vírusových glykoproteínov v preparáte je rovnaká ako vo vírusových časticiach - viriónoch, čo umožňuje prezentáciu ich epitopov imunokompetentným bunkám organizmu. Takto pripravené imunogény sú preparáty s vysokou čistotou a neobsahujú nežiadúce vírusové alebo bakteriálne látky (okrem už spomenutých glykolipidov vírusu ani napr. lipopolysacharidy /LPS/ baktérií, a podobne).These disadvantages of vaccines consisting of whole killed pathogens (viruses or bacteria) eliminate bivalent immunogens against influenza and Lyme disease, or other bacterial or paramyxovirus diseases of the invention, consisting of native and only immunorelevant polypeptides. The principle of the invention is that immunogens consisting e.g. from the influenza virus glycoproteins hemagglutinin and neuraminidase with a molecular weight of 76, respectively. 65 kDa, which are bound by their C- and C- respectively. N-termini with bacterial proteosomes. The spatial orientation of the viral glycoproteins in the preparation is the same as in virion particles - virions, which allows the presentation of their epitopes to immunocompetent cells of the organism. The immunogens thus prepared are preparations of high purity and do not contain unwanted viral or bacterial substances (except for the aforementioned virus glycolipids or e.g. lipopolysaccharides / LPS / bacteria, and the like).
Bivalentné imunogény proti chrípke a Lymskej chorobe alebo onemocneniam vyvolávaným paramyxovírusmi či gram-negatívnymi baktériami je možné pripravit spôsobom podía vynálezu a to tak, že sa zmes glykoproteínov napr. vírusu chrípky - hemaglutinínu /HA/ a neuraminidázy /NA/ a bakteriálnych proteozomov dialyzuje 4 až 7 dní oproti fyziologickému roztoku pri pH prostredia klesajúcom od 8,0 do 7,2 pri použití najskôr tris/hydroxymetyl/metylamoniumchloridu, následne zmesi primárneho a sekundárneho fosforečnanu sodného na pufrovanie. Ďalšie odstránenie detergentu, ktorý sa použije na izoláciu vírusových glykoproteínov ako aj bakteriálnych proteozomov sa dosiahne opakovanou filtráciou na membráne v miešacej komôrke a dopĺňaním sterilným fyziologickým roztokom pufrovaným na pH 7,2, úplné odstránenie detergentu a iných látok sa urobí gélovou chromatografiou . na kolóne granulovanej agarózy. Získané preparáty bivalentných imunogénov, obsahujúcich navzájom zviazané molekuly obalových glykoproteínov vírusu chrípky a proteozomov baktérií sa vysušia, s výhodou .lyofilizáciou. Skladujú sa vo vákuovo zatavených sklenených ampulkách po pridaní hydroxidu hlinitého ako adjuvans.Bivalent immunogens against influenza and Lyme disease or diseases induced by paramyxoviruses or gram-negative bacteria can be prepared by the method of the invention by mixing a mixture of glycoproteins e.g. influenza virus - haemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) and bacterial proteosomes dialyzed for 4 to 7 days against saline at pH 8.0 to 7.2 using first tris / hydroxymethyl / methylammonium chloride, followed by a mixture of primary and secondary phosphate sodium for buffering. Further removal of detergent, which is used to isolate both viral glycoproteins and bacterial proteosomes, is achieved by repeated filtration on the membrane in a mixing chamber and replenishment with sterile saline buffered to pH 7.2, complete removal of detergent and other substances by gel chromatography. on a granular agarose column. The resulting preparations of bivalent immunogens containing bound molecules of the influenza virus envelope glycoproteins and the proteosomes of the bacteria are dried, preferably by lyophilization. They are stored in vacuum sealed glass ampoules after addition of aluminum hydroxide as adjuvant.
Takto pripravené preparáty sú vysoko imunogénne pri aplikácii či už s adjuvantom alebo bez neho.The preparations thus prepared are highly immunogenic when administered with or without an adjuvant.
Molekuly vírusových a bakteriálnych polypeptidov prítomné vo výslednom preparáte vykazujú maximálny stupeň čistoty, čo zaručuje minimalizáciu nežiadúcich postvakcinačných reakcií organizmu na očkovaciu látku. V prípade vírusových glykoproteínov rui jedná o ich trojnásobnú purifikáciu, teda v rámci purifikácie vírusu, následne pri izolácii glykoproteínov obalu a nakoniec pri purifikácii komplexovaného materiálu gélovou chromatografiou. Gélovou chromatografiou sa odstránia napr. vysoko- a nízkomolekulárnc látky bakteriálneho pôvodu, ako útržky cytoplazmatických cylindrov q. Burgdorferi a podobne.The viral and bacterial polypeptide molecules present in the resulting preparation exhibit a maximum degree of purity, which ensures that undesirable post-vaccination reactions of the organism to the vaccine are minimized. In the case of viral glycoproteins, this is a triple purification, that is to say in the purification of the virus, subsequently in the isolation of the envelope glycoproteins, and finally in the purification of the complexed material by gel chromatography. Gel chromatography removes e.g. high and low molecular weight substances of bacterial origin, such as fragments of cytoplasmic cylinders q. Burgdorferi and the like.
V ďalšom texte sa používajú nasledovné doteraz neuvedené skratky: TBS - tris/hydroxymetyl/metylamóniumchloridom pufrovaný fyziologický roztok; PBS - zmesou primárneho a sekundárneho fosforečnanu sodného pufrovaný fyziologický roztok; EDTA - etyléndiamíntetraacetát-dvojsodná soí; PAGE - polyakrylamidová gélová elektroforéza.The following abbreviations are used below: TBS - tris / hydroxymethyl / methylammonium chloride buffered saline; PBS - a mixture of primary and secondary sodium phosphate buffered saline; EDTA - ethylenediaminetetraacetate disodium salt; PAGE - polyacrylamide gel electrophoresis.
Príklady uskutočnenia vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Príklad 1Example 1
Izolácia glykoproteínov vírusu chrípky a paramyxovírusovIsolation of influenza virus and paramyxovirus glycoproteins
Vírus sa pomnoží na chorionalantoickej membráne kuracieho • embrya a purifikuje sa z alentoickej tekutiny diferenciálnou centrifigáciou a následnou elektroforézou v gradiente hustoty sacharózy (Rosenbergová a spol., Acta Virologica, 25, 7B, 1981). Očiste ný vírus sa v kocentrácii 300/ug bielkoviny per ml opracuje po dobu 1 hodiny pri 36 - 38 °C detergentom - N -dodecyl-N,N-dimetylglycin (Empigen BB) v koncentrácii 1 % a navrství sa v objeme po 1 ml na 3 - 15% gradienty hustoty sacharózy o objeme 4 ml a obsahujúce 0,5% detergentu. Centrifuguje sa 4,5 hodiny pri 45 000 ót./min. a 4 °C v rotore SW 55.Ti centrifúgy L-8. Polypeptid M sedimentuje minimálne a ostáva v objeme tekutiny približne ako pred centrifugáciou, glykoproteiny obalu vírusu sa nachádzajú na rozhraní hornej a dolnej polovice objemu centrifugačnej skúmavky a nukleokapsid vírusu sedimentuje do úsadku pod stĺpec gradientu hustoty sacharózy. Obsah vírusových polypeptidov v jednotlivých frakciách sa určí pomocou PAGE. Frakcie obsahujúce glykoproteiny vírusu sa spoja a po stanovení koncentrácie bielkoviny sa buďto skladujú v zmrazenom stave pri -18 °C alebo sa bezprostredne po ich izolácii použijú na komplexovanie s bakteriálnymi proteozomamiThe virus is propagated on the chick embryo chorionalantoic membrane and purified from alentoic fluid by differential centrifugation and subsequent sucrose density gradient electrophoresis (Rosenberg et al., Acta Virologica, 25, 7B, 1981). The purified virus is treated for 1 hour at 36-38 ° C with a detergent-N-dodecyl-N, N-dimethylglycine (Empigen BB) at a concentration of 1% at a concentration of 300 µg protein per ml and layered in a volume of 1 ml. to 3-15% sucrose density gradients of 4 ml and containing 0.5% detergent. Centrifuge for 4.5 hours at 45,000 rpm. and 4 ° C in the SW 55.Ti rotor of the L-8 centrifuge. Polypeptide M sediments minimally and remains in the volume of liquid approximately as before centrifugation, the viral envelope glycoproteins are at the interface between the upper and lower half of the centrifuge tube volume, and the virus nucleocapsid sedimentes into the sediment below the sucrose density gradient column. The content of viral polypeptides in each fraction is determined by PAGE. Fractions containing virus glycoproteins are pooled and either stored frozen at -18 ° C after protein concentration determination or used for complexing with bacterial proteosomes immediately after isolation.
Rovnakým spôsobom sa izolujú aj glykoproteiny paramyxovírusovParamyxovirus glycoproteins are isolated in the same manner
Príklad 2Example 2
Príprava bakteriálnych proteozómov zo spirochéty B. BurgdorferiPreparation of bacterial proteosomes from B. Burgdorferi spirochete
Spirochéty sa suspendujú v TBS pH 7,4 obsahujúcom 10 mM EDTA v koncentrácii bielkoviny 1-2 mg per ml a opracujú sa detergentomSpirochetes are suspended in TBS pH 7.4 containing 10 mM EDTA at a protein concentration of 1-2 mg per ml and treated with a detergent.
Empigen BB za rovnakých podmienok ako v prípade vírusu (príklad 1) Bielkoviny spirochéty sa zrážajú pridaním kryštalického síranu amónneho v množstve 5 g per 10 ml tekutiny. Po rozpustení soli sa suspenzia skladuje za občasného pretrepania 1 hodinu pri 4 °C a precipitát sa získa centrifugáciou. Úsadok sa vytvorí vo forme blanky plávajúcej nad tekutinou, nakolko osp A a osp B spirochéty sú lipoproteiny s nízkou hustotou. Blanka sa oddelí od tekutiny a rozpustí sa v T BS-EDTA s 1%-ným obsahom detergentu. Opakuje sa zrážanie síranom amónnym a úsadok sa po tretí raz rozpustí a zráža. Posledný úsadok sa po rozpustení vyčíri najprv pri 3 000 g po dobu 10 minút a následne pri 18 000 g počas rovnakej doby. Vyčírený supernatant sa navrství v objeme 1 ml na 4 ml 5-20% gradientu hustoty sacharózy obsahujúceho 0,3% detergentu a centrifuguje sa po dobu 3 hodín pri 36 0Ό0 ot./min. a 4 °C v rotore SW-50.1 centri fúgy L-8. Proteozomálny materiál spirochéty sa na konci centrifugácie nachádza v horných 40-45% objemu centrifugačnej skúmavky. Alikvotné objemy jednotlivých frakcií sa analyzujú PAGE na obsah polypeptidov. Frakcie obsahujúce proteozómy sa spoja a po stanovení koncentrácie bielkovín sa budto skladujú v zmrazenom stave pri -18 °C, alebo.sa bezprostredne po ich príprave použijú na komplexovanie s vírusovými obalovými glykoproteinmiEmpigen BB under the same conditions as the virus (Example 1) Spirochete proteins are precipitated by the addition of crystalline ammonium sulfate in an amount of 5 g per 10 ml of liquid. After dissolution of the salt, the suspension is stored with occasional shaking for 1 hour at 4 ° C and the precipitate obtained by centrifugation. The deposition is formed in the form of a blank floating over the fluid, since osp A and osp B spirochetes are low density lipoproteins. The blank is separated from the liquid and dissolved in T BS-EDTA with 1% detergent content. The precipitation is repeated with ammonium sulfate and the residue is dissolved and precipitated a third time. The final deposit, after dissolution, first clarifies at 3000 g for 10 minutes and then at 18 000 g for the same time. The clarified supernatant is layered in a volume of 1 ml per 4 ml of a 5-20% sucrose density gradient containing 0.3% detergent and centrifuged for 3 hours at 36-0.0 rpm. and 4 ° C in the SW-50.1 rotor of the L-8 fusion center. The proteosomal spirochete material is located in the upper 40-45% of the centrifuge tube volume at the end of centrifugation. Aliquots of individual fractions are analyzed by PAGE for polypeptide content. Proteosome-containing fractions are pooled and either stored frozen at -18 ° C after determination of protein concentration or used for complexing with viral envelope glycoproteins immediately after preparation.
Príklad 3Example 3
Príprava bivalentných imunogénovPreparation of bivalent immunogens
Glykoproteíny vírusu chrípky sa v prítomnosti 1% Empigen BB zmiešajú s protezómami gram-negatívnych baktérií vo váhavom pomere bielkovín 1 : 1, alebo s proteozómami spirochéty B. Burgdorferi v pomere 1 : 1,5. Zmesi sa dialyzujú pri 4 °C po dobu 4-7 dní, najmä spočiatku s častými výmenami dialyzačného pufru. Sprvu sa po užije TBS-EDTA pH 8,0 neskôr PBS pH 7,2. Ďalšie odstránenie detergentu z materiálu sa dosiahne trojnásobnou ultrafiltráciou na membráne XM-300 v miešacej komôrke. Materiál sa skoncentruje do koncentrácie bielkovín okolo 2 mg per ml a aplikuje sa na kolonu Seph rose 6 B; na 1 ml vzorky sa vystačí približne s kolónou o c''jeme 26-30 ml. Gélová chromatografia sa robí s použitím PBS pH 7,2. Ak sú v materiáli prítomné útržky tzv. cytoplazmatických cylindrov spirochéty, ich materiál eluuje vo vrchole v oblasti tzv. void volume /V / kolóny. Za týmto vrcholom začína elúcia vírus-bakteriálnych komplexov a tesne pred celkovým objemom kolóny /volume total, V*/ eluujú v symetrickom vrchole zvyšky detergentu. Molekulová hmotnost zodpovedajúca elučnému objemu /V / detergentu, teda okolo 70 kDa, svedčí o jeho prítomnosti v roztoku v micelárnej forme. Súčasná prítomnost vírusových a bakteriálnych polypeptidov v jednotlivých frakciách získaných v priebehu gélovej chromatografie sa opät určí za pomoci PAGE.Influenza virus glycoproteins are mixed with proteasomes of gram-negative bacteria in a hesitant 1: 1 protein ratio or with B. Burgdorferi spirochete proteosomes 1: 1.5 in the presence of 1% Empigen BB. The mixtures are dialyzed at 4 ° C for 4-7 days, especially initially with frequent dialysis buffer changes. First, TBS-EDTA pH 8.0 was used, followed by PBS pH 7.2. Further removal of detergent from the material is achieved by triple ultrafiltration on an XM-300 membrane in a mixing chamber. The material is concentrated to a protein concentration of about 2 mg per ml and applied to a Seph rose 6 B column; For a 1 ml sample, approximately a 26-30 ml column is sufficient. Gel chromatography is performed using PBS pH 7.2. If there are fragments of so-called material in the material. cytoplasmic cylinders of spirochete; void volume / V / columns. Beyond this peak, the elution of virus-bacterial complexes begins, and just before the total column volume (V *), detergent residues elute at the symmetrical peak. The molecular weight corresponding to the elution volume (V) of the detergent, i.e. about 70 kDa, indicates its presence in solution in micellar form. The simultaneous presence of viral and bacterial polypeptides in the individual fractions obtained during gel chromatography is again determined by PAGE.
Frakcie obsahujúce takto pripravený preparát bivalentného imunogénu sa spoja a lyofilizujú sa tak, že sa v jednej ampulke nachádza 20/ug bielkoviny komplexov vírusových glykoproteinov s proteozómami gram-negatívnych baktérií, alebo 25/ug bielkoviny komplexov vírusových glykoproteinov s proteozómami spirochéty B. Burgdorferi. Do každej ampulky sa pred lyofilizáciou pridá po 20 mg hydroxidu hlinitého. Po lyofilizácii sa ampulky zastavujú za vákua a skladujú sa pri -18 °C.xResuspenzia sa robí bezprostredne pred aplikáciou pretrepaním obsahu ampulky v 1 ml sterilného PBS pH 7,2. Tak sa získa desat očkovacích dávok o objeme 0,1 ml obsahujúcich l^ug bielkoviny vírusových glykoproteinov, 1/ug bielkoviny proteozómov gram-negatívnych baktérií,slebo 1,5/ug bielkoviny proteozomov spirochéty a nakoniec 2 mg hydroxidu hlinitého .Fractions containing the bivalent immunogen preparation thus prepared are pooled and lyophilized such that 20 µg of protein of the complex of viral glycoproteins with gram-negative bacterial proteosomes or 25 µg of the protein of complexes of viral glycoproteins with the proteosome of spirochete B are contained in one vial. 20 mg of aluminum hydroxide is added to each vial prior to lyophilization. After lyophilization, the vials are stopped under vacuum and stored at -18 ° C. x Resuspension is made immediately before application by shaking the contents of the vial in 1 ml of sterile PBS pH 7.2. Ten vaccine doses of 0.1 ml containing 1 [mu] g of viral glycoprotein protein, 1 [mu] g of proteosome protein of gram-negative bacteria, and preferably 1.5 [mu] g of protein spirochete protein and finally 2 mg of aluminum hydroxide are thus obtained.
Obalové glykoproteiny vírusu chrípky sa v dvojtýždňovom intervale podali subkutánne dospelým bielym myšiam buď vo forme bivalentného imunogénu s proteozómami B. Burgdorferi (HANA-PBB), alebo formaldehydom usmrteného purifikovaného vírusu (FV). Preparáty sa podali buď spolu s hydroxidom hlinitým (Al), alebo bez neho. Dávky vyjadrené hmotnostou bielkoviny podaných vírusových glykoproteinov boli:Influenza virus envelope glycoproteins were administered subcutaneously to adult white mice, either as a bivalent immunogen with the B. Burgdorferi proteosomes (HANA-PBB) or formaldehyde-killed purified virus (FV), at 2-week intervals. The preparations were administered either with or without aluminum hydroxide (Al). Protein weights of administered viral glycoproteins were:
= 1,0/Ug HANA-PBB; 2= idem-Al; 3= 100 ng HANA-PBB; 4= idem-Al; 5= 1,0/ug FV ; 6= idem-Al; 7= 100 ng FV ; 8= idem-Al;= 1.0 / µg HANA-PBB; 2 = idem-A1; 3 = 100 ng HANA-PBB; 4 = idem-A1; Δ = 1.0 µg FV; 6 = idem-A1; 7 = 100 ng FV; 8 = idem-A1;
V sérach očkovaných myší získaných za dva týždne po druhej dávke sa našli hemaglutinačne-inhibičné protilátky proti vírusu chrípky v recipročných titroch:In the sera of vaccinated mice obtained two weeks after the second dose, hemagglutination-inhibiting antibodies against influenza virus were found in reciprocal titers:
1= 512; 2= 2.048; 3= 256; 4= 2.04B; 5= 256; 6= 512; 7= 64 a 8= 12B.1 = 512; 2 = 2.048; 3 = 256; 4 = 2.04B; Δ = 256; Δ = 512; 7 = 64 and 8 = 12B.
Vírus-neutralizačné protilátky v tých istých sárach vykazovali recipročné titre:Virus-neutralizing antibodies in the same sera showed reciprocal titers:
1= 128; 2 = 1.024; 3= 32; 4= 512; 5= 32; 6= 128; 7= 8 a 8= 16.1 = 128; = 1.024; 3 = 32; 4 = 512; 5 = 32; 6 = 128; 7 = 8 and 8 = 16.
Protekčný test sa robil vyvolaním tzv. toxickej pneumónie podaním masívnej dávky cca 10? ID^g živého vírusu instilovaného intranazálne očkovaným myšiam. Z píúc myší sa za 48 hodín po challenge izoloval vírus v infekčných titroch vyjadrených per ml 10¾ pľúcnej suspenzie:The protection test was performed by inducing so-called " toxic pneumonia by administering a massive dose of about 10? ID µg of live virus instilled in intranasally vaccinated mice. 48 hours after challenge, virus was isolated from the lungs of mice in infectious titers expressed per ml of a 10¾ lung suspension:
l=103; 2= <10°; 3= 105; 4= <10°; 5= 105; 6= 103; 7= 107; 8= 106 ;l = 10 3 ; 2 = <10 °; 3 = 10 5 ; 4 = <10 °; 5 = 10 5 ; 6 = 10 3 ; 7 = 10 7 ; 8 = 10 6 ;
u kontrolných neočkovaných myší sa našiel titer 108 ID^/ml plúcnej suspenzie.control unvaccinated mice were found to have a titer of 10 8 ID / ml lung suspension.
Makroskopický vzhlad pľúcnych lalokov očkovaných myší za 48 hodín po vyvolaní toxickej pneumónie bol nasledovný:The macroscopic appearance of the lung lobes of vaccinated mice 48 hours after induction of toxic pneumonia was as follows:
1) plúca normálnej veľkosti, ružovej farby, v peritracheálnych oblastiach menšie červené edematózne ložiská; 2) celkové mierne edematózne (špongiovité) zväčšenie pľúcnych lalokov, bez lokálnych ložísk, plúca sú ružovej farby; 3) celkovo edematózne zväčšené špongiovité plúcne laloky našedlej farby, so stredne veľkými červenými lokálnymi edematóznymi ložiskami; 4) našedlé, špongiovito zväčšené plúcne laloky s velkými červenými edematóznymi ložiskami;1) lungs of normal size, pink color, in the peritracheal regions smaller red edematous lesions; 2) general slight edematous (spongy) enlargement of the lung lobes, without local lesions, the lungs are pink in color; 3) generally edematous enlarged spongy lobes of a gray color, with medium-sized red local edematous lesions; 4) greyish, sponge-enlarged lung with large red edematous lesions;
5) tmavofialové edematózne ložiská po celej ploche povrchu pľúcnych lalokov; 6) špongiovito zväčšené plúcne laloky s rozsiahlymi tmavofialovými lokálnymi edematóznymi ložiskami; 7) plúcne laloky šedej farby pokryté po celom povrchu tmavofialovými edematóznymi ložiskami; 8) šedoružové plúcne laloky s rozsiahlymi tmavofialovými edematóznymi ložiskami. U kontrolných neočkovaných myší sa našli retrahované plúcne laloky s červenými edematóznymi ložiskami s prevahou v peritracheálnych oblastiach.5) dark violet edematous lesions over the entire surface area of the lung lobes; 6) sponge-enlarged lung lobes with extensive dark violet local edematous lesions; 7) gray lung lobes covered over the entire surface with dark violet edematous lesions; 8) gray-pink lung lobes with extensive dark violet edematous lesions. In control unvaccinated mice, retracted lung lobes with red edematous lesions predominating in the peritracheal regions were found.
Rozsev vírusu chrípky v píúcnom tkanive myší očkovaných FV zodpovedá inaktivácii neuraminidázy vírusu formaldehydom a tým zabráneniu tvorby povrchových slizničných IgA protilátok.The detection of influenza virus in the lung tissue of FV-vaccinated mice corresponds to the inactivation of the virus neuraminidase by formaldehyde, thereby preventing the formation of superficial mucosal IgA antibodies.
Pri sledovaní pretrvávania hemaglutinačno-inhibičných protilátok v organizme myší sme po dvoch mesiacoch po druhej očkovacej dávke našli zhodné, resp. o skúmavku nižšie titre ako u sér získaných za dva týždne po druhej očkovacej dávke.In observing the persistence of hemagglutinating-inhibiting antibodies in the organism of mice, we found two resp. a tube of lower titers than the sera obtained two weeks after the second vaccine dose.
Glykoproteiny vírusu chrípky komplexované s protcozonami Ncisse ria meningitidis vyvolávali u myší tvorbu protilátok v rovnakých titroch ako tomu bolo v prípade ich komplexov s proteozómami Borrelia Burgdorferi. Proteozómy B. Burgdorferi vnášajú do komplexovaných preparátov porovnatelné adjuvanticitné, teda B-bunkovo mitogenicitné a T-helper bunkové aktivity, aké sa predpokladajú u proteozómov Neisseria meningitidis (Lowell a spol. J.exp. Med., 167, 658, 1988). V protekčnom teste sa u očkovaných myší nedarilo kultivovat živé B .Burgdorferi z ich slezín a močových mechúrov, kým u kontrolných neočkovaných zvierat sa taká kultivácia darila.Influenza virus glycoproteins complexed with Ncisse ria meningitidis protcosones elicited antibodies in mice at the same titers as they did with their Borrelia Burgdorferi proteosome complexes. B. Burgdorferi proteosomes impart comparable adjuvantic, i.e., B-cell mitogenic and T-helper cell activities to complexed preparations, as predicted for Neisseria meningitidis proteosomes (Lowell et al., J. Exp. Med., 167, 658, 1988). In the protection test, vaccinated mice failed to cultivate live B. burgdorferi from their spleens and bladders, whereas in control unvaccinated animals such culture was successful.
Stupeň čistoty preparátov komplexovaných z glykoproteinov vírusu chrípky a proteozómov B. Burgdorferi sa overil metodou Western blotting. Séra myší získané za dva týždne po druhej očkovacej dávke obsahovali protilátky iba proti glykoproteinom vírusu chrípky (HA, HA1, HA2, NA) a proti polypeptidom osp A a čiastočne osp B spirochéty. Prostredníctvom navodenia protilátok proti osp A dáva preparát obsahujúci proteozómy B. Burgdorferi komplexované s vírusovými obalovými polypeptidmi predpoklady ochrany organizmu oproti rozvinutiu sa Lymskej choroby (Edelman, Vaccine, 1991, viď hore).The degree of purity of the preparations complexed from influenza virus glycoproteins and B. burgdorferi proteosomes was verified by Western blotting. The sera of mice obtained two weeks after the second vaccination dose contained antibodies only against influenza virus glycoproteins (HA, HA1, HA2, NA) and against osp A and partially osp B spirochete polypeptides. By inducing antibodies against osp A, a preparation containing the B. burgdorferi proteosomes complexed with viral envelope polypeptides provides the preconditions for protecting the organism against the development of Lyme disease (Edelman, Vaccine, 1991, supra).
Všetky uvedené sledovania dokumentujú potentnost komplexovaných preparátov v porovnaní s inými typmi chemovakcín.All these investigations document the potency of complexed preparations compared to other types of chemovaccines.
Priemyselná využiteínostIndustrial usability
Vynález je možné využit v oblasti biochémie a imunológie.The invention can be used in the field of biochemistry and immunology.
Claims (3)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CS377992 | 1992-12-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK377992A3 true SK377992A3 (en) | 1995-03-08 |
SK279209B6 SK279209B6 (en) | 1998-08-05 |
Family
ID=27770592
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK3779-92A SK279209B6 (en) | 1992-12-21 | 1992-12-21 | Bivalent immunogens and method of preparation thereof |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SK (1) | SK279209B6 (en) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1419784A3 (en) * | 2000-02-15 | 2004-08-25 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Proteosome vaccines against toxins, allergy and cancer |
WO2001060402A2 (en) * | 2000-02-15 | 2001-08-23 | Intellivax International Inc. | Proteosome influenza vaccine |
-
1992
- 1992-12-21 SK SK3779-92A patent/SK279209B6/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SK279209B6 (en) | 1998-08-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210228709A1 (en) | Coronavirus vaccine formulations | |
US11993634B2 (en) | Recombinant varicella-zoster virus (VZV) vaccine | |
CN103028113B (en) | Vaccine | |
Wiktor et al. | Antigenic properties of rabies virus components | |
US4522809A (en) | Process for obtaining lipid envelope virus sub-units, notably antigens for use as vaccines, the products obtained and their applications | |
Silva et al. | Effects of hydrostatic pressure on a membrane-enveloped virus: high immunogenicity of the pressure-inactivated virus | |
US20140004145A1 (en) | Purification of virus like particles | |
CA1244766A (en) | Herpes simplex virus subunit vaccine | |
CN1238696A (en) | Vaccines | |
NZ205925A (en) | Immunogenic complex containing antigenic peptides and proteins with hydrophobic regions and a glycoside | |
WO2021154812A1 (en) | Coronavirus vaccine formulations | |
Oxford et al. | Immunological and physicochemical studies of influenza matrix (M) polypeptides | |
KR101290475B1 (en) | Virosome particles comprising antigens from influenza virus and hepatitis B virus | |
CA1214103A (en) | Lectin-containing anti-viral vaccines for domestic animals and method of preparation | |
SK377992A3 (en) | Bivalent immunogenes and method of their preparation | |
TW202308685A (en) | Coronavirus and influenza compositions and methods for using them | |
CN115192703A (en) | Herpes zoster vaccine and application thereof | |
US20060171955A1 (en) | Process for increasing rsv surface glycoprotein yields using a mutant strain of rsv | |
CN116983403B (en) | Immune composition product for preventing or treating varicella-zoster virus related diseases and preparation method thereof | |
JP7317796B2 (en) | Methods and compositions for treating respiratory diseases | |
CN117126253B (en) | HSV immunogenic recombinant protein, preparation method and application thereof, and vaccine prepared by using same | |
Berezin et al. | Isolation and studies of myxovirus glycoproteins | |
WO2024164014A2 (en) | Rsv f vaccine formulations | |
WO1992002250A1 (en) | Cross-reactive influenza a immunization | |
CN118453522A (en) | Recombinant novel coronavirus attenuated live vaccine freeze-dried preparation and preparation method thereof |