SK286070B6 - Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 - Google Patents
Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 Download PDFInfo
- Publication number
- SK286070B6 SK286070B6 SK1045-2002A SK10452002A SK286070B6 SK 286070 B6 SK286070 B6 SK 286070B6 SK 10452002 A SK10452002 A SK 10452002A SK 286070 B6 SK286070 B6 SK 286070B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- dextran
- sucrose
- ccm
- strain
- leuconostoc mesenteroides
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Vynález sa týka kmeňa Leuconostoc mesenteroides L127P uloženého v Českej zbierke mikroorganizmov v Brne pod číslom CCM 4948, ktorý produkuje dextrán v množstve 5,3 g/100 ml fermentačnej pôdy za 20 hodín kultivácie v produkčnom stupni pri 20 až 24 °C a miešania v médiu s 15 až 20 % (m/m) sacharózou.The invention relates to the strain Leuconostoc mesenteroides L127P deposited at the Czech Collection of Microorganisms in Brno under number CCM 4948, which produces dextran in an amount of 5.3 g / 100 ml of fermentation broth during 20 hours of cultivation in a production step at 20-24 ° C and mixing in medium with 15 to 20% (w / w) sucrose.
Kyslou hydrolýzou natívneho dextránu je možné získať dextrány s molekulovou hmotnosťou 1 000 až 500 000. Najväčší význam majú tzv. klinické dextrány s molekulovou hmotnosťou 40 000 až 70 000 používané v zdravotníctve ako náhrada krvnej plazmy.By acid hydrolysis of native dextran, dextrans having a molecular weight of 1,000 to 500,000 can be obtained. clinical dextranes with a molecular weight of 40,000 to 70,000 used in the medical field to replace blood plasma.
Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION
Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 je za určitých kultivačných podmienok producentom dextránu. Dextrán j e vysokomolekulárny polysacharid tvorený z glukózových j ednotiek vzniknutých z molekúl sacharózy katalytickým účinkom extracelulámeho enzýmu dextransacharázy, ktorú do prostredia syntetizuje samotný producent dextránu Leuconostoc mesenteroides CCM 4948. Zrážaním natívneho dextránu etylalkoholom, kyslou hydrolýzou s kyselinou chlorovodíkovou, úprave pH a frakcionáciou hydrolyzátu s etylalkoholom sa získajú frakcie s molekulovou hmotnosťou 1 000 až 500 000.Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 is a dextran producer under certain culture conditions. Dextran is a high molecular weight polysaccharide formed from glucose units formed from sucrose molecules by the catalytic action of the extracellular dextran saccharase enzyme, synthesized into the environment by the dextran producer Leuconostoc mesenteroides CCM 4948, precipitating the native dextran with ethyl alcohol, by hydrolysis with ethyl alcohol, the fractions having a molecular weight of 1,000 to 500,000 are obtained.
Výhodou kultivácie s kmeňom Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 je, že nie je potrebné extracelulámy enzým dextransacharázu z tohto kmeňa najskôr izolovať a potom do procesu kontinuálne pridávať, ako je to uvedené v európskom patente EP 0 087 404 a japonskom patente 06090604. Výhodou kultivácie je, že fermentačný proces prebieha bez kontinuálneho prídavku roztoku sacharózy.The advantage of cultivating with the strain Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 is that there is no need to first isolate the extracellular enzyme dextransaccharase from this strain and then continuously add it to the process, as disclosed in European patent EP 0 087 404 and Japanese patent 06090604. the fermentation process takes place without the continuous addition of sucrose solution.
Taxonómiu bakteriálnych kmeňov druhu Leuconostoc opisuje Garvie so spoluautormi (Intemational Joumal of Systematic Bacteriology, 118 - 119, 1983). Je založená na kritériu homológie v zmysle deoxyribonukleovej kyseliny (DNK). Baktérie, klasifikované ako Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc dextranicum a Leuconostoc cremoris, majú vysoký stupeň homológie vzhľadom na ich DNK, i keď majú rozdielne fenotypy. Podľa tejto taxonómie sú teda tieto baktérie poddruhy Leuconostoc mesenteroides a sú nazývané Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides, Leuconostoc mesenteroides ssp. dextranicum a Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris.The taxonomy of bacterial strains of Leuconostoc is described by Garvie et al. (Intemational Joumal of Systematic Bacteriology, 118-119, 1983). It is based on the homology criterion in terms of deoxyribonucleic acid (DNA). Bacteria, classified as Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc dextranicum and Leuconostoc cremoris, have a high degree of homology with respect to their DNA, although they have different phenotypes. According to this taxonomy, these bacteria are therefore subspecies of Leuconostoc mesenteroides and are called Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides, Leuconostoc mesenteroides ssp. dextranicum and Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris.
Kmeň Leuconostoc mesenteroides ATCC 10803 (NRRL B-512) je producentom dextransacharázy, ktorá má schopnosť syntetizovať dextrán na priemyselné a medicínske účely (D. Kim a John F. Robyt, Enzýme Mcrobiol. Technol., Vol. 16, 659 - 664,august 1994). Leuconostoc mesenteroides B-1355 produkuje dva extracelulárne glukánsacharázy, ktoré so sacharózy syntetizujú frakcie L-dextránu a frakcie S-dextránu. Frakcia L-dextránu má štruktúru veľmi podobnú dextránu vyprodukovaného kmeňom B-512(F). S-frakcia, zvaná „alteman“, má glukózové jednotky spájané a-l,6 a a-l,3 väzbami. Absencia a-l,6 väzieb v hlavnom reťazci a vyššie zastúpenie a-l,3 väzieb robí alteman rezistentným k endodextranázovej hydrolýze a dodáva mu iné typické vlastnosti (je vysoko rozpustný, nízkokalorický, môže sa využiť v potravinárstve, v chemickom priemysle pri výrobe gúm, gélov, vo farmaceutickom priemysle pri výrobe liekov).Leuconostoc mesenteroides ATCC 10803 (NRRL B-512) is a dextran saccharase producer that has the ability to synthesize dextran for industrial and medical purposes (D. Kim and John F. Robyt, Enzyme Mcrobiol. Technol., Vol. 16, 659-664, August) 1994). Leuconostoc mesenteroides B-1355 produces two extracellular glucan sucrases that synthesize L-dextran and S-dextran fractions with sucrose. The L-dextran fraction has a structure very similar to the dextran produced by the B-512 (F) strain. The S-fraction, called "alteman", has glucose units linked by α-1,6 and α-1,3 bonds. The absence of α1,6 linkages in the backbone and a higher proportion of α1,3 linkages makes alteman resistant to endodextranase hydrolysis and gives it other typical properties (it is highly soluble, low calorie, can be used in the food, chemical industry in the manufacture of gums, gels, pharmaceutical industry in the manufacture of medicines).
A. Lópes-Munguía so spoluautormi uvádzajú (Enzýme Microb. Technol., Vol. 15, 77 - 85, january 1993), že kmene Leuconostoc mesenteroides NRRL B-742, B-1299, B-1498, B-1501, B-l 149, B-1355 produkujú dva rôzne typy polymérov.A. Löpes-Munguía et al. (Enzyme Microb. Technol., Vol. 15, 77-85, January 1993) report that Leuconostoc mesenteroides strains NRRL B-742, B-1299, B-1498, B-1501, Bl 149 , B-1355 produce two different types of polymers.
V súčasnosti je biosyntéza dextránu ako náhrady krvnej plazmy objasnená v patente (U. S. Patent 5 229 277) s použitím zmesovej kultúry baktérie Leuconostoc mesenteroides ATCC 10830 a kvasinky Lipomyces starkeyi ATCC 74054 v sacharózovom médiu. Kultivačné podmienky a vedenie fermentácie sú podmienené nárokmi oboch kmeňov, Leuconostoc mesenteroides ATCC 10830 ako producenta dextránu a Lipomyces starkeyi ATCC 74054 ako producenta dextranázy. Dĺžka fermentácie pri 28 až 30 °C je viac ako 48 hodín. Molekulová hmotnosť vyprodukovaného dextránového polyméru dosahuje hodnoty od 40 000 do 100 000.Currently, dextran biosynthesis as a blood plasma substitute is disclosed in U.S. Pat. No. 5,229,277 using a mixed culture of Leuconostoc mesenteroides ATCC 10830 and yeast Lipomyces starkeyi ATCC 74054 in sucrose medium. Culture conditions and fermentation conduction are contingent upon the claims of both Leuconostoc mesenteroides ATCC 10830 as dextran producer and Lipomyces starkeyi ATCC 74054 as dextranase producer. The fermentation time at 28-30 ° C is more than 48 hours. The molecular weight of the dextran polymer produced is between 40,000 and 100,000.
Výhodou kmeňa Leuconostoc mesenteroides CCM 4948, na ktorý sa vzťahuje patentový nárok, je, že je súčasne vlastným producentom enzýmu a nie je potrebné do procesu zahrnúť ďalší kmeň ako producenta enzýmu, čím je vedenie fermentačného procesu a udržiavanie kultivačných podmienok jednoduchšie, než je uvedené v patente 5 229 277. Ďalej predpokladáme, že energetické nároky spojené s udržiavaním teploty 28 až 30 °C môžu byť vyššie než pri fermentácii pri 20 až 24 °C. Naopak nevýhodou pri fermentácii kmeňa Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 je, že sa v inokulačnom stupni využíva médium s 10 až 15 % sacharózou, čo navyšuje výrobné náklady.The advantage of the claimed patent Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 is that it is also the own enzyme producer and there is no need to include another strain as an enzyme producer in the process, making the fermentation process and maintaining the cultivation conditions easier than stated in It is further assumed that the energy requirements associated with maintaining a temperature of 28 to 30 ° C may be higher than that of fermentation at 20 to 24 ° C. On the other hand, a disadvantage in the fermentation of the strain Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 is that in the inoculation stage a medium with 10-15% sucrose is used, which increases the production costs.
Výhodou kmeňa Leuconostoc mesenteroides CCM 4948, na ktorý sa vzťahuje patentový nárok, je, že dĺžka fermentácie inokulačného a produkčného stupňa, počas ktorej bakteriálna kultúra dosiahne maximum svojej produkcie, je 20 hodín.An advantage of the claimed Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 is that the fermentation length of the inoculation and production stage during which the bacterial culture reaches its maximum production is 20 hours.
Proces výroby klinického dextránu s molekulovou hmotnosťou od 3 000 do 60 000 ajeho izolácie objasňuje aj európsky patent EP 0 087 404 A2 z roku 1983. Producentom je kmeň Leuconostoc, navyšuje NRRL B-512, ktorý produkuje dextrán v 10 až 50 % sacharózovom médiu, s obsahom kvasničného extraktu, rastových faktorov, anorganických solí a stopových prvkov v rôznych koncentráciách. Kultivačná teplota na tvorbu enzýmu sa udržuje v rozsahu od 23 do 30 °C, bez alebo za slabého miešania, pH sa udržuje okolo 5,8. Pre producenta sa upravuje počiatočné pH od 6,2 do 7,0. Samotná syntéza dextránu prebieha pri 23 °C v rozsahu pH od 4,8 do 6,0, v sacharózovom médiu, pričom 80 až 95 % sacharózy skonvertuje na dextrán. Počas fermentácie sa do produkčnej pôdy kontinuálne pridáva roztok vyprodukovaného enzýmu rýchlosťou 125 ml/hod a sterilná 22 % sacharóza rýchlosťou 250 ml/hod. Teoretický predpoklad tvorby dextránu je, že z 1 g sacharózy sa vyprodukuje 0,47 g dextránu. Výhodou kultivácie s kmeňom Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 je, že nie je potrebné extracelulámy enzým dextránsacharázu z tohto kmeňa najskôr izolovať a potom do procesu kontinuálne pridávať ako je to uvedené v európskom patente EP 0 087 404 a japonskom patente 06090604. Výhodou kultivácie je, že fermentačný proces prebieha bez kontinuálneho prídavku roztoku sacharózy. Teoretický predpoklad tvorby dextránu v médiu so 15 až 20 % sacharózou pri maximálnej produkciiThe process of producing clinical dextran with a molecular weight of 3,000 to 60,000 and its isolation is also explained by the European patent EP 0 087 404 A2 of 1983. Produced by the Leuconostoc strain, increasing NRRL B-512, which produces dextran in 10 to 50% sucrose medium, containing yeast extract, growth factors, inorganic salts and trace elements in various concentrations. The culture temperature for the formation of the enzyme is maintained in the range of 23 to 30 ° C, with or without agitation, maintaining the pH around 5.8. For the producer, the initial pH is adjusted from 6.2 to 7.0. The dextran synthesis itself takes place at 23 ° C in a pH range of 4.8 to 6.0, in sucrose medium, with 80 to 95% of the sucrose being converted to dextran. During fermentation, a solution of the produced enzyme is continuously added to the production broth at a rate of 125 ml / h and sterile 22% sucrose at a rate of 250 ml / h. The theoretical assumption of dextran formation is that from 1 g of sucrose 0.47 g of dextran is produced. The advantage of cultivating with the strain Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 is that there is no need to first isolate the extracellular enzyme dextran sucrose from this strain and then continuously add it to the process as described in European patent EP 0 087 404 and Japanese patent 06090604. the process is carried out without the continuous addition of sucrose solution. Theoretical assumption of dextran formation in 15-20% sucrose medium at maximum production
5.3 g/100 ml je, že z 1 g sacharózy sa vyprodukuje 0,33 g dextránu.5.3 g / 100 ml is that from 1 g of sucrose 0.33 g of dextran is produced.
Japonský patent 06090604 objasňuje prípravu klinického dextránu s molekulovou hmotnosťou od 4 000 do 100 000 v sacharózovom roztoku s dextránovým prekurzorom a v prítomnosti enzýmu dextránsyntázy.Japanese Patent 06090604 discloses the preparation of clinical dextran with a molecular weight of 4,000 to 100,000 in a sucrose solution with a dextran precursor and in the presence of the enzyme dextran synthase.
Výhodou kmeňa Leuconostoc mesenteroides CCM 4948, na ktorý sa vzťahuje patentový nárok, je, že produkcia dextránu prebieha aj bez prítomnosti prekurzora vo fermentačnej pôde.An advantage of the claimed patent Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 is that dextran production takes place even in the absence of a precursor in the fermentation broth.
Z ďalších kmeňov, ktoré využívajú produkciu dextránsacharázy a dextránu pre potravinársky priemysel (U. S. Patent 6 004 800) sú Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris CNCM 1-1692 a CNCM 1-1693, ako aditívum v práškovej forme pri výrobe jogurtov, mliečnych nápojov a zmrzlín. Rovnako kmeň Leuconostoc produkuje v prítomnosti sacharózy extracelulámy enzým dextránsacharázu, ktorý vylučuje do kultivačného média, pomocou ktorého syntetizuje dextrán zo sacharózy(US 6 004 800B). Podobné využitie má aj kmeň Leuconostoc dextranicum NRRL B - 18132 (U. S. Patent 4 855 149) a Leuconostoc dextranicum NRRL B-18242 (U. S. Patent 4 933 191). Príprava dextránu kmeňmi Leuconostoc mesenteroides M209 a M898, ktoré sú súčasne producentmi enzýmu dextránsacharázy, je opísaná v JP8173178 A.Of the other strains that utilize dextran sucrase and dextran production for the food industry (U.S. Patent 6,004,800), Leuconostoc mesenteroides ssp. cremoris CNCM 1-1692 and CNCM 1-1693, as an additive in powder form in the manufacture of yoghurts, dairy drinks and ice creams. Likewise, the Leuconostoc strain produces, in the presence of sucrose, the extracellular enzyme dextran sucrose, which it secretes into the culture medium by which it synthesizes dextran from sucrose (US 6,004,800B). Similar uses have Leuconostoc dextranicum NRRL B-18132 (U.S. Patent 4,855,149) and Leuconostoc dextranicum NRRL B-18242 (U.S. Patent 4,933,191). The preparation of dextran by Leuconostoc mesenteroides M209 and M898, which simultaneously produce dextran sucrose enzyme, is described in JP8173178 A.
Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION
Vynález sa týka kmeňa Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 (interné označenie L127P, pôvodné označenie NRRL B-512), ktorý bol získaný z Instytut Przemyslu Fermentacyjnego, Varšava (IPF) v roku 1957. Následne bol kmeň oživený na výrobnom závode VZ 133 Biotika, a. s. Technikami propagácie vypracovanými na VZ 133, viacnásobnou selekciou cez sacharózovú pôdu, rozsevom na sacharózový agar a vypichnutím kolónii do živného média sa získal kmeň Leuconostoc mesenteroides CCM 4948.The invention relates to the strain Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 (internal designation L127P, former designation NRRL B-512), which was obtained from Instytut Przemyslu Fermentacyjnego, Warsaw (IPF) in 1957. Subsequently, the strain was revived at VZ 133 Biotika, a. with. Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 strain was obtained by propagation techniques developed on VZ 133, multiple selection through sucrose broth, sowing on sucrose agar, and peeling the colony into the nutrient medium.
Kmeň Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 sa vyznačuje tým, že v 15 až 20 % sacharózovej pôde produkuje dextrán v koncentrácii 5,3 g/100 ml fermentačnej pôdy za 20 hodín kultivácie pri 20 až 24 °C za miešania 100 až 200 otáčok/min.The strain Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 is characterized in that it produces dextran in a concentration of 5.3 g / 100 ml of fermentation broth in 20 to 20% sucrose broth during 20 hours of cultivation at 20 to 24 ° C with stirring at 100 to 200 rpm.
Kmeň Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 sa ďalej vyznačuje tým, že pri krátkodobom uchovávaní v komplexnej pečienkovej pôde pri 2 až 5 °C dosahuje stabilné prežívanie počas 4 mesiacov z hodnoty 3,5.108 na 1,5.108 mikroorganizmov/ml komplexnej pečienkovej pôdy bez straty produkčnej schopnosti. Rovnako stabilné je prežívanie kmeňa v komplexnej pečienkovej pôde s chloridom vápenatým z hodnoty 3,9.108 na 1,4.108 mikroorganizmov/ml komplexnej pečienkovej pôdy a produkciouThe strain Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 is further characterized by the fact that it has a stable survival for 4 months from 3.5.10 8 to 1.5.10 8 microorganisms / ml of complex liver soil without losing production when stored briefly in a complex liver at 2 to 5 ° C. skills. Equally stable is the survival of the strain in a complex liver soil with calcium chloride from 3.9.10 8 to 1.4.10 8 microorganisms / ml of complex liver soil and production
5.4 g/100 ml fermentačnej pôdy.5.4 g / 100 ml of fermentation broth.
Kmeň Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 sa ďalej vyznačuje tým, že pri dlhodobom uchovávaní v mrazničke pri -80 °C dosahuje počet prežívajúcich mikroorganizmov 3,0.108 mikroorganizmov/ml ochranného média glycerínu a 1,2.108 mikroorganizmov/ml komplexnej pečienkovej pôdy bez ochranného média.The strain Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 is further characterized in that, when stored in the freezer at -80 ° C for a long time, the number of surviving microorganisms is 3.0.10 8 microorganisms / ml glycerin preservative medium and 1.2.10 8 microorganisms / ml complex liver medium without preservative medium.
Postup oživenia uskladnenej kultúry je opísaný v nasledovnej schéme:The procedure for reviving the stored culture is described in the following scheme:
CCM4948 (LK, kryokonzerva)CCM4948 (LK, cryopreservation)
1. pasáž na 10 % sacharózovej pôde (ŠA) kultivácia 24 až 48 hod., t = 20 až 24 °C1st passage on 10% sucrose medium (SA) cultivation for 24 to 48 hours, t = 20 to 24 ° C
2. pasáž na 10 % sacharózovej pôde (SA), kultivácia 24 až 48 hod., t = 20 až 24 °C2nd passage on 10% sucrose medium (SA), cultivation for 24 to 48 hours, t = 20 to 24 ° C
II
3. pasáž v KPP, kultivácia 24 až 48 hod., t = 20 až 24 °C3rd pass in KPP, cultivation 24 to 48 hours, t = 20 to 24 ° C
I uskladnenie v chladničke pri t = 2 až 5 °CI stored in a refrigerator at t = 2 to 5 ° C
Vysvetlivky:Explanation:
LK- lyofilizovaná konzerva PM - Petriho misky ŠA - šikmý agar KPP - komplexná pečienková pôdaLK- lyophilized canned PM - Petri dishes SA - sloping agar KPP - complex roast soil
Opis kmeňa: Kmeň Leuconostoc mesenteroides CCM 4948Tribe description: Tribe Leuconostoc mesenteroides CCM 4948
Morfológia:morphology:
- guľaté až oválne grampozitívne koky veľkosti 0,1-1,2 μιη, vyskytujúce sa tiež v retiazkach,- round to oval gram-positive cocci of size 0,1-1,2 μιη, also occurring in chains,
- nepohyblivé,- immovable,
- fakultatívny anaerób,- facultative anaerobes,
- na sacharózovom agare tvorí žltobiele, guľaté a vypuklé, lesklé, hladké kolónie,- forms on the sucrose agar yellow-white, round and convex, glossy, smooth colonies,
- pri nátere vytvára bohatý polotekutý sliz s hladkým povrchom,- produces a rich, semi-liquid slime with a smooth surface,
- v tekutej sacharózovej pôde dochádza k zoslizovateniu pôdy a k tvorbe plynu,- soil liquidation and gas generation occur in liquid sucrose soils,
- skvasuje sacharózu, pričom počas fermentácie dochádza okrem tvorby hlavného produktu dextránu i k tvorbe vedľajších metabolitov fruktózy, mannózy, kys. octovej, kys. mliečnej, etanolu a CO2,- fermentes sucrose, while during the fermentation, besides the formation of the main dextran product, the metabolites of fructose, mannose, acid are formed. acetic acid. milk, ethanol and CO 2 ,
- vyfermentovaná pôda obsahujúca dextrán, je tekutejšia, ľahšie rozpustná vo vode než pôda vyfermentovaná kmeňom Leuconostoc mesenteroides CCM 4947.- the fermented soil containing dextran is more fluid, more readily soluble in water than the soil fermented with Leuconostoc mesenteroides CCM 4947.
Kultivačné médiá:Culture media:
Inokulačná pôda: sacharóza 100 g; kvasničný autolyzát 1 g; CaCO3 0,5 g; NaNH4HPO4.4 H2O 3 g; KH2PO4 1 g: MgSO4.7 H2O 0,1 g; MnSO4. H2O 0,01 g, FeCl3.6 H2O 0,01 g; KC1 0,1 g do 1 000 ml pitnej vody, upraviť pH 7 až 7,2.Seed: sucrose 100 g; yeast autolysate 1 g; CaCO 3 0.5 g; NaNH 4 HPO 4 .4 H 2 O 3 g; KH 2 PO 4 1 g: MgSO 4 .7 H 2 O 0.1 g; MnSO 4 . H 2 O 0.01 g, FeCl 3 .6 H 2 O 0.01 g; KCl 0.1 g to 1000 ml drinking water, adjust pH 7 to 7.2.
Produkčná pôda: sacharóza 160 g; kvasničný autolyzát 1 g; CaCO3 0,5 g; NaNH4HPO4 . 4 H2O 3 g; KH2PO4 1 g; MgSO4.7 H2O 0,1 g; MnSO4. H2O 0,01 g; FeCl,.6 H,0 0,01 g; KC1 0,1 g do 1 000 ml pitnej vody, upraviť pH 7 až 7,2.Production soil: sucrose 160 g; yeast autolysate 1 g; CaCO 3 0.5 g; NaNH 4 HPO 4 . 4 H 2 O 3 g; KH 2 PO 4 1 g; MgSO 4 .7H 2 O 0.1 g; MnSO 4 . H 2 O 0.01 g; FeCl, 6H, 0 0.01 g; KCl 0.1 g to 1000 ml drinking water, adjust pH 7 to 7.2.
Sacharózový agar: sacharóza 100 g; kvasničný extrakt 0,5 g; NaNH4HPO4.4 H2O 3 g; KH2PO4 1 g: MgSO4.7 H,0 0,1 g; MnSO4 . H2O 0,01 g; KC1 0,1 g ; NaCl 0,1 g; (NH4)6Mo7O24 4 H,0 0,05 g; agar 25 g do 1 000 ml destilovanej vody, upraviť pH 7,2 až 7,5.Sucrose agar: sucrose 100 g; yeast extract 0.5 g; NaNH 4 HPO 4 .4 H 2 O 3 g; KH 2 PO 4 1 g: MgSO 4 .7H, 0 0.1 g; MnSO 4 . H 2 O 0.01 g; KCl 0.1 g; NaCl 0.1 g; (NH 4 ) 6 Mo 7 O 24 4 H, 0 0.05 g; agar 25 g to 1000 ml distilled water, adjust pH 7.2 to 7.5.
Komplexná pečienková pôda: sušená pečienková pôda 35,0 g; sacharóza 5,0 g do 1 000 ml destilovanej vody, upraviť pH 6,7 až 7,1.Complex roast soil: dried roast soil 35.0 g; Sucrose 5.0 g to 1000 ml distilled water, adjust pH 6.7 to 7.1.
Príklady uskutočnenia vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Príklad 1Example 1
Z kultúry Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 uskladnenej v chladničke v komplexnej pečienkovej pôde (ďalej KPP) sa preočkuje 0,1 až 0,5 ml za sterilných podmienok do novej KPP a kultivuje sa 24 až 48 hodín pri 20 až 24 °C. Kultúra v tekutej pôde vytvára zákal až usadeninu. Z tejto pôdy sa preočkuje 0,3 až 0,5ml na 10 % (m/m) sacharózový šikmý agar v Endovej skúmavke a kultivuje sa 24 až 48 hodín pri 20 až 24 °C. Narastená kultúra vytvára na šikmom agare polotekutý, hladký sliz, ktorý sa zmyje 5 ml fyziologického roztoku. Suspenzia sa preleje do 10 až 15 % (m/m) sacharózovej inokulačnej pôdy s plnením 50 až 70 % v Erlenmayerových bankách a kultivuje sa 20 hodín pri 20 až 24 °C za miešania 100 až 200 otáčok/min. Narastené inokulum 2 až 10 % (m/m) sa preočkuje do 15 až 20 % sacharózovej produkčnej pôdy s plnením 50 až 75 % v Erlenmayerových bankách a kultivuje sa ďalších 20 hodín pri 20 až 24 °C za miešania 100 až 200 ot./min.From a culture of Leuconostoc mesenteroides CCM 4948 stored in a refrigerator in a complex liver medium (KPP), 0.1 to 0.5 ml is inoculated under sterile conditions into a new KPP and cultured for 24 to 48 hours at 20 to 24 ° C. Culture in liquid soil creates turbidity or sediment. 0.3 to 0.5 ml of 10% (w / w) sucrose sloping agar in an End tube is inoculated from this broth and cultured for 24 to 48 hours at 20 to 24 ° C. The grown culture forms a semi-liquid, smooth slime on slanted agar, which is washed away with 5 ml of saline. The suspension is poured into 10-15% (w / w) sucrose seed broth with a 50-70% load in Erlenmeyer flasks and cultured for 20 hours at 20-24 ° C with stirring at 100-200 rpm. The grown 2 to 10% (w / w) inoculum is inoculated into 15 to 20% sucrose production medium with a 50 to 75% load in Erlenmeyer flasks and cultured for an additional 20 hours at 20 to 24 ° C with stirring at 100 to 200 rpm. min.
Maximálna produkcia dextránu za miešania je 5,3 g/100 ml fermcntačnej pôdy.The maximum production of dextran with stirring is 5.3 g / 100 ml fermentation broth.
Priemyselná využiteľnosťIndustrial usability
Kmeň mikroorganizmu Ĺeuconostoc mesenteroides CCM 4948, ktorý je predmetom vynálezu, je možné využívať na prípravu natívneho dextránu, z ktorého je možné pripraviť dextrány s molekulovou hmotnosťou 1 000 až 500 000.The strain of microorganism Ĺeuconostoc mesenteroides CCM 4948 of the present invention can be used to prepare native dextran from which dextrans having a molecular weight of 1,000 to 500,000 can be prepared.
Kmeň mikroorganizmu Ĺeuconostoc mesenteroides CCM 4948, ktorý je predmetom vynálezu, je možné využívať pri priemyselnej výrobe klinických dextránov s molekulovou hmotnosťou 40 000 až 70 000, pričom jeho produkčná schopnosť pri 20 hodinovej kultivácii pri 20 až 24 °C v 15 až 20 % (m/m) sacharózovej fermentačnej podeje 5,3 g/100 ml fermentačnej pôdy.The strain of the microorganism Ĺeuconostoc mesenteroides CCM 4948 of the present invention can be used in the industrial production of clinical dextranes having a molecular weight of 40,000 to 70,000 and its production capacity for 20 hours at 20-24 ° C at 15-20% (m) / m) sucrose fermentation broth 5.3 g / 100 ml fermentation broth.
Klinický dextrán sa využíva v lekárstve na prípravu infúzneho roztoku s fyzikálno-chemickými vlastnosťami krvnej plazmy, vhodného na prevenciu liečenia šoku, prudkého krvácania, popálenín a má špecifický účinok na cirkuláciu krvi vo vlásočniciach.Clinical dextran is used in medicine for the preparation of a solution for infusion with physicochemical properties of blood plasma, suitable for the prevention of treatment of shock, severe bleeding, burns and has a specific effect on blood circulation in hairpins.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SK1045-2002A SK286070B6 (en) | 2002-07-15 | 2002-07-15 | Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SK1045-2002A SK286070B6 (en) | 2002-07-15 | 2002-07-15 | Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK10452002A3 SK10452002A3 (en) | 2004-02-03 |
| SK286070B6 true SK286070B6 (en) | 2008-02-05 |
Family
ID=31944999
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1045-2002A SK286070B6 (en) | 2002-07-15 | 2002-07-15 | Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SK (1) | SK286070B6 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013017330A1 (en) * | 2011-08-01 | 2013-02-07 | S.P.C.M. Sa | New method for manufacture of dextran, dextran solution obtained, and uses |
-
2002
- 2002-07-15 SK SK1045-2002A patent/SK286070B6/en not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013017330A1 (en) * | 2011-08-01 | 2013-02-07 | S.P.C.M. Sa | New method for manufacture of dextran, dextran solution obtained, and uses |
| FR2978773A1 (en) * | 2011-08-01 | 2013-02-08 | Snf Sas | NOVEL DEXTRAN MANUFACTURING METHOD, DEXTRAN SOLUTION OBTAINED AND USES |
| AU2012292332B2 (en) * | 2011-08-01 | 2015-04-23 | S.P.C.M. Sa | New method for manufacture of dextran, dextran solution obtained, and uses |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK10452002A3 (en) | 2004-02-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bhat et al. | Advances in xanthan gum production, modifications and its applications | |
| CN103409480B (en) | Method for producing Pulullans with different molecular weights | |
| da Silva et al. | Xanthan: biotechnological production and applications | |
| CN102492757A (en) | Method for improving taste quality of stevioside by using beta-cyclodextrin glucosyltransferase | |
| CN101215592A (en) | Fermentation method for producing pullulan polysaccharide | |
| CN104388496B (en) | Method for producing N-acetylglucosamine by degrading chitin with enzyme method | |
| Kambourova et al. | Exopolysaccharides from prokaryotic microorganisms—promising sources for white biotechnology processes | |
| Murad et al. | Production of xanthan gum from nontraditional substrates with perspective of the unique properties and wide industrial applications | |
| CN110195051A (en) | A method of it is fermented using marine bacteria and produces alginate lyase | |
| JPS5953834B2 (en) | Bifidobacterium growth promoter | |
| CN102690762B (en) | Method for producing L-alanine by bioconverting L-aspartic acid by free cell process | |
| CN102533607B (en) | Strain capable of producing beta-galactosidase and method for producing galactooligosaccharides by using beta-galactosidase | |
| JP4307259B2 (en) | Method for producing inulin | |
| SK286070B6 (en) | Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4948 | |
| JP5818915B2 (en) | Method for producing cyclic lipopeptide compound | |
| US5130249A (en) | Galactomannan polysaccharide producing organism | |
| CN104450827A (en) | Method for improving yield of pulullan biosynthesized by resting cells of aureobasidium pullulans | |
| JP4251449B2 (en) | Process for producing mannitol and homopolysaccharide | |
| KR100458151B1 (en) | Microorganism producing fructosyl transferase and method for producing fructooligosaccharides and neofructooligosaccharides using the same | |
| FI110518B (en) | Levan sucrose enzyme, process for its preparation, microorganisms producing it and compositions containing it | |
| JP2000093162A (en) | Culture of sporogenous lactic acid bacterium | |
| SK286073B6 (en) | Leuconostoc mesenteroides strain CCM 4947 | |
| JP3058600B2 (en) | Method for producing neofructooligosaccharide | |
| Rashidi et al. | Employment of liquid pineapple waste for the production of xanthan gum using xanthomonas campestris ATCC 13951 | |
| JPH0124121B2 (en) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20140715 |