SE527299C2

SE527299C2 - Molecularly imprinted material for use e.g. as a template in hierarchical imprinting to generate surface confined sites for larger peptides and proteins, and in drug discovery, comprises use of a solid phase synthesis product

Info

Publication number: SE527299C2
Application number: SE0202477A
Authority: SE
Inventors: Boerje Sellergren; Maria Magdalena Titirici; Andrew J Hall
Original assignee: Mip Technologies Ab
Priority date: 2002-08-16
Filing date: 2002-08-16
Publication date: 2006-02-07
Also published as: SE0202477D0; SE0202477L

Abstract

A molecularly imprinted material prepared using a solid phase synthesis product as a template.

Description

25 30 35 EG" -1 2 9 9 2 en mindre peptid som motsvarar en unik aminosyrasekvens hos ett målprotein som mall for att generera ett ställe som sedan selektivt kan binda den större målmoleky- len. Detta kräver att stället är associerat till den tillgängliga ytan hos större porer, som kan härbärgera det större proteinet. Denna uppfinning hänför sig till använd- ning av obearbetade produkter, som erhålles som ett resultat av fastfassyntes som porösa gjutformar och molekylära mallar vid hierarkisk avtrycksteknik (fig. 1). T ex kan eﬂer fastfassyntesen av en peptid som motsvarar ett särskilt proteinepitop, kan den obearbetade supportbundna peptiden fungera som epitopmallar for att skapa yt- bundna ställen for större peptider och proteiner. Ett krav vid detta angreppssätt är att peptiden syntetiseras på ett engångsstöd, vilket kan baseras på kiseldioxid, någon i annan inorganisk oxid, en löslig eller nedbrytbar linjär eller krosslänkad polymer el- ler någon modiﬁerad form av sådana material. I stället for modifierad kiseldioxid, kan gjutformen också tillverkas av kontrollerat porglas (CPG), vilket tillåter direkt användning av de syntetiserade produkterna, som blivit resultatet av att fastfas- DNA eller oligonukleotidsyntes används som mallar. Sålunda kan oligonukleotid- modiferad CPG användas for att skapa material med affinitet for samma oligonuk- leotider, eller DNA eller RNA innehållande sekvenser, som motsvarar mallen. Alla dessa möjligheter avbildas i ﬁg. 1. EC "-1 2 9 9 2 a smaller peptide corresponding to a unique amino acid sequence of a target protein as a template to generate a site which can then selectively bind the larger target molecule. This requires the site to be associated with the available surface This invention relates to the use of crude products obtained as a result of solid phase synthesis as porous molds and molecular templates in hierarchical imprinting techniques (Fig. 1). of a peptide corresponding to a particular protein epitope, the crude support-bound peptide can act as epitope templates to create surface-bound sites for larger peptides and proteins. in other inorganic oxide, a soluble or degradable linear or crosslinked polymer or any modified form of such materials. instead of modified silica, the mold can also be made of controlled pore glass (CPG), which allows the direct use of the synthesized products, which have resulted from the use of solid phase DNA or oligonucleotide synthesis as templates. Thus, oligonucleotide-modified CPG can be used to create materials with affinity for the same oligonucleotides, or DNA or RNA containing sequences corresponding to the template. All these possibilities are depicted in ﬁ g. 1.

Uppﬁnnin gen kommer nu att beskrivas mera i detalj med hänvisning till ett antal icke begränsande exempel: Uppﬁnningen hänfor sig till ett material innehållande ytbundna bindnings- ställen for oli gomerer eller polymerer, en metod for dess framställning och använd- ning av nämnda material i t ex kromatograﬁ, for separering, i kemiska sensorer, vid läkemedelsframtagning, vid anrikning av selektiva prov, vid molekylär identifiering som fastfas i kapillärer eller i katalysatorer. Exempel på hur uppfinningen tillämpas vid syntes av peptidselektivt material i olika former redovisas nedan: Materialet förbereds genom att forst syntetisera en peptidepitop på ytan av ett engångsstöd vilket kan vara porös kiseldioxid såsom visas i ﬁg. 2. Den immobilise- rade peptiden används sedan som mall for skapande av ett hierarkiskt avtryckstek- nikframställt material (Figur 3). Här bringas forst ytan hos den immobiliserade pep- tiden i kontakt med monomerblandningen som används för att skapa avtrycken.The invention will now be described in more detail with reference to a number of non-limiting examples: The invention relates to a material containing surface-bound bonding sites for oligomers or polymers, a method for its preparation and use of said materials in eg chromatography , for separation, in chemical sensors, in drug production, in the enrichment of selective samples, in molecular identification as solid phase in capillaries or in catalysts. Examples of how the invention is applied in the synthesis of peptide-selective material in various forms are reported below: The material is prepared by first synthesizing a peptide epitope on the surface of a disposable support which may be porous silica as shown in ﬁ g. 2. The immobilized peptide is then used as a template for creating a hierarchical imprinted material (Figure 3). Here, the surface of the immobilized peptide is first brought into contact with the monomer mixture used to create the imprints.

T ex är det möjligt att ställa i ordning polymerema, som använder monomerer så- som de, som baseras på styren/divinylbenzen, methakrylater, akrylater, akrylamider eller kombinationer av dessa monomerer. Efter polymerisation tas stödet (eller gjut- formen) bort (genom upplösning eller nedbrytning) och peptidmallen isoleras för återanvändning. Polymeren kan sedan användas for återbindning av peptidmallen eller en större peptid eller ett större protein som innehåller mallens aminosyrase- kvenser. 10 15 20 25 30 35 ln I J -a b) \() xD va: :rn U) Exempel l: Syntes av peptidepitopen.For example, it is possible to prepare the polymers which use monomers such as those based on styrene / divinylbenzene, methacrylates, acrylates, acrylamides or combinations of these monomers. After polymerization, the support (or mold) is removed (by dissolution or degradation) and the peptide template is isolated for reuse. The polymer can then be used to reconnect the peptide template or a larger peptide or protein containing the amino acid sequences of the template. 10 15 20 25 30 35 ln I J -a b) \ () xD va:: rn U) Example 1: Synthesis of the peptide epitope.

Med användande av amineprepyflkiseldioxid med en medelporsterlek på 11.5 nm som är ett allmänt stödmaterial, syntetiserades peptider med användande av standard Merriﬁeldkemiteknik. Sålunda kopplades i första steget BOC-Gly-OH via DCC katalyserad aminobindningsforrnering. Efter deprotektion, kopplades FMOC- Phe-OH för att erhålla den N-skyddade eller, efter deprotektion, fria dipeptider kopplade via dess karboxyterminal till stödytan. Varje mellanprodukt kontrollerades med hjälp av kol- och kvävemikroanalys, infrarödspektroskopi och fluorescensmik- roskopi (tabell 1). Ur ändringar i kol- och kväveinnehåll, i förhållande till utgångs- materialet, kunde areadensiteten (DS) för de kopplade ligandema uppskattas till- sammans med det åtföljande kopplingsutfallet. Förutsatt en maximal areadensitet på 8 umol/mz, ockuperar APS ca 50 % av de tillgängliga bindningsställena, vilket är i överensstämmelse med resultat som rapporterats i litteraturen. Kopplingen av BOC- Gly-OH visades sig kvantitativt och åtföljdes av förekomsten av starkt kärmeteck- nande amidband i IR-spektrat. Följande steg visade sig inträffa med högt utbyte och kunde vid sidan av de amidkännetecknande banden i lR-spektrat, följas visuellt med hjälp av ﬂuorescensmikroskopi. Sålunda åtföljdes koppling av F MOC-Phe-OH av stark partikelﬂuorscens vilken försvann helt och hållet när man gjorde aktuell struk- tur oskyddad igen. Areadensiteten hos de kopplade slutprodukterna befanns vara inom området 1-2 umol/mz.Using amine prepyperic silica with an average porcelain size of 11.5 nm which is a general support material, peptides were synthesized using standard Merri fire chemistry techniques. Thus, in the first step, BOC-Gly-OH was coupled via DCC catalyzed amino bond formation. After deprotection, FMOC-Phe-OH was coupled to obtain the N-protected or, after deprotection, free dipeptides coupled via its carboxy terminal to the support surface. Each intermediate was checked by carbon and nitrogen microanalysis, infrared spectroscopy and fluorescence microscopy (Table 1). From changes in carbon and nitrogen content, in relation to the starting material, the area density (DS) of the linked ligands could be estimated together with the accompanying coupling outcome. Assuming a maximum area density of 8 μmol / mz, APS occupies approximately 50% of the available binding sites, which is consistent with results reported in the literature. The coupling of BOC-Gly-OH was shown quantitatively and was accompanied by the presence of strongly nucleating amide bands in the IR spectrum. The following steps were found to occur in high yield and, in addition to the amide-characteristic bands in the IR spectra, could be followed visually by means of fluorescence microscopy. Thus, coupling of F MOC-Phe-OH by strong particle ﬂ uorscence was accompanied, which disappeared completely when the current structure was made unprotected again. The air density of the coupled end products was found to be in the range of 1-2 μmol / m 2.

Exempel 2: Syntes av det peptidavtrycksteknikframställda materialet.Example 2: Synthesis of the peptide imprint technique prepared material.

Efter mallsyntesen fylldes porerna hos den immobiliserade aminosyran eller peptidmallen med en blandning av MAA, EDMA och azoinitiator (AIBN) (ﬂg. 3).After template synthesis, the pores of the immobilized amino acid or peptide template were filled with a mixture of MAA, EDMA and azo initiator (AIBN) (ﬂ g. 3).

Denna blandning härdades därefter termiskt vid 60°C. Upplösning av kiseldioxid- formen genom behandling med en lösning av NH4HF2 (aq) resulterade i organiska polymerpärlor med en storlek och morfologi som speglar dem hos den ursprungliga kiseldioxidgjutformen (ﬁg. 4, tabell l). I tillägg till detta borde de immobiliserade aminosyrorna och peptiderna lämna efter sig ytavtryck som leder till önskad kvar- hållning av mallpeptiden när materialet utvärderades som stationär fas vid kromato- graﬁ. Graden av bortförande av kiseldioxid och peptidmall avslöjades genom ele- mentaranalys av den slutliga polymerprodukten. Sålunda antydde kol- och kvävein- nehållet att mer än 95 % av mallen avlägsnades vid ﬂuoridbehandling.This mixture was then thermally cured at 60 ° C. Dissolution of the silica form by treatment with a solution of NH 4 HF 2 (aq) resulted in organic polymer beads of a size and morphology reflecting those of the original silica mold (ﬁ g. 4, Table 1). In addition to this, the immobilized amino acids and peptides should leave behind surface imprints that lead to the desired retention of the template peptide when the material was evaluated as a stationary phase in chromatography ﬁ. The degree of removal of silica and peptide template was revealed by elemental analysis of the final polymer product. Thus, the carbon and nitrogen content indicated that more than 95% of the template was removed during chloride treatment.

Exempel 3: Användning av de peptidselektiva faserna såsom kromatograﬁskt stationära faser.Example 3: Use of the peptide-selective phases as chromatographic stationary phases.

Polymerema utvärderades därefter som stationära faser vid kromatograﬁ. Vi fokuserade på de dipeptidavtrycksteknikﬁamställda materialen. Såsom ses i ﬁg. SA, kvarhålles FMOC-Phe-Gly-OH ca två gånger starkare på P (FMOC-Phe-Gly-Si) än 25 i 'I f o <1 ro »o ~.o 4 på P (FMOC-Phe-Si) och ca 15 gånger starkare än på P (BOC-Gly-Si).The polymers were then evaluated as stationary phases by chromatography. We focused on the dipeptide imprint technology ﬁ employed materials. As seen in ﬁ g. SA, FMOC-Phe-Gly-OH is retained about twice as strongly on P (FMOC-Phe-Gly-Si) than 25 in 'I fo <1 ro »o ~ .o 4 on P (FMOC-Phe-Si) and about 15 times stronger than on P (BOC-Gly-Si).

Kvarhállandeuppﬁlrandet i vâtskemässig mobilfas är avgörande för användningen av dessa faser vid biologiska prov. Vi tillförde sålunda vatten till den mobila fasen (buﬁïrad med 1 % HOAc) i steg på 5 % och jämﬁirde kvarhållandet av olika peptider på dipeptidavtryckstekriíkﬁamstållda material (PGMOC-Phe-Gly-Si och P(H-Phe-Gly-Si) med användning av det glycinavlryckﬁarnstållda materialet (P(BOC-Gly-Si och P (H-Gly-Si) som kontroller. Med 5 % vatten (Figur SB och SC) ses en uttalad sclektivitet för peptider som innehåller det avtrycksﬁamstållda dípeptidmotivet. Detta innefattade också stone peptider som innehöll H-Phe-Gly motivet som N-tennínal. Sålunda kvarhålles H-Phe-Gly-Gly-Phe-OH på liknande sätt vid H-Phe-Gly-NH; med en kvarhållningsfalctor, k°, av ungefär 6 på P(FMOC- Phe-Gly-Si). Också den större 17 aminosyror långa oligopeptid nociceptin som innehöll Phe-Gly som aininoterrninal kvarhölls selektivt på PGI-Phe-Gly-Si).The retention training in the liquid mobile phase is crucial for the use of these phases in biological tests. Thus, we added water to the mobile phase (buffered with 1% HOAc) in 5% increments and compared the retention of various peptides on dipeptide imprinted materials (PGMOC-Phe-Gly-Si and P (H-Phe-Gly-Si) using of the glycine imprinted material (P (BOC-Gly-Si and P (H-Gly-Si) as controls. With 5% water (Figure SB and SC)) a pronounced selectivity is seen for peptides containing the imprinted dipeptide motif. This also included stone peptides containing the H-Phe-Gly motif as N-tenninal, thus H-Phe-Gly-Gly-Phe-OH is similarly retained at H-Phe-Gly-NH; P (FMOC-Phe-Gly-Si). Also the larger 17 amino acid oligopeptide nociceptin containing Phe-Gly as amino terminus was selectively retained on PGI-Phe-Gly-Si).

Ytterligare starka bevis för närvaron av peptidurskilj ande bindningsställen tillhandahålls av kvarhållningsupptöiandet hos dipeptiden H-Gly-Phe-OH med den inversa amínosyrasekvensen. I motsats till de andra dipeptiderna kvarhållæ detta starkast på material avtrycksteknikbehandlade med det närmaste komplementet som användes vid denna studie, nämligen H-Gly-Si och BOC-Gly-Sí.Additional strong evidence for the presence of peptide-secreting binding sites is provided by the retention thawing of the dipeptide H-Gly-Phe-OH with the inverse amino acid sequence. In contrast to the other dipeptides, this is most strongly retained on impression technology-treated materials with the closest complement used in this study, namely H-Gly-Si and BOC-Gly-Si.

REFERENSER G. Wulff, Angew. Chem., Int. Ed Engl. 34 (1995) 1812-32.REFERENCES G. Wulff, Angew. Chem., Int. Ed Engl. 34 (1995) 1812-32.

B. Sellergren (Bd.), Techniques and instrumentation in analytícal chemistry, Vol. 23, Elsevier Science B.V., Amsterdam 2001. [1] [2] [3] L.I. Andersson, J. Chromatogr., B: Biomed Scí. Appl. 745 (2000) 3-13. [4] K. Hanpt, K. Mosbaeh, Chem. Rev. 100 (2000) 2495-2504. [5] B Sellergren, Angew. Chem. Int. Ed. 39 (2000) 1031-1037. [6] B. Sellergren, KJ. Shea, .I. Chromatogr. 635 (1993) 31. [7] E. Yilmax, K. Haupt, K. Mosbach, Angew. Chem, Int. Ed 39 (2000) 2115- 2118. [8] M.M. Titirici, AJ. Hall, B Sellergren, Chem. Maier, I 4 (2002) 21-23. [9] B.R. Hart, KJ . Shea, .I Am. Chem. Soc. 123 (2001) 2072-2073. B. Sellergren (Bd.), Techniques and instrumentation in analytical chemistry, Vol. 23, Elsevier Science B.V., Amsterdam 2001. [1] [2] [3] L.I. Andersson, J. Chromatogr., B: Biomed Scí. Appl. 745 (2000) 3-13. [4] K. Hanpt, K. Mosbaeh, Chem. Reef. 100 (2000) 2495-2504. [5] B Sellergren, Angew. Chem. Int. Oath. 39 (2000) 1031-1037. [6] B. Sellergren, KJ. Shea, .I. Chromatogr. 635 (1993) 31. [7] E. Yilmax, K. Haupt, K. Mosbach, Angew. Chem, Int. Ed 39 (2000) 2115- 2118. [8] M.M. Titirici, AJ. Hall, B Sellergren, Chem. Maier, I 4 (2002) 21-23. [9] B.R. Hart, KJ. Shea, .I Am. Chem. Soc. 123 (2001) 2072-2073.

[10] A. Rachkov, N. Minoura, Biochim. Bíophys. Acta 1544 (2001) 255-266.[10] A. Rachkov, N. Minoura, Biochim. Biophys. Acta 1544 (2001) 255-266.

SE 0202477-6 2005-11-17 E27 299 E' .ø Tabell 1. Karakterisering av de modiﬁerade kiseldioxidpartiklarria och de avtrycksteknik- framställda polymerpärlorna genom mikroanalys och kvävesorptionisoterrner.SE 0202477-6 2005-11-17 E27 299 E '.ø Table 1. Characterization of the modified silica particulate matter and the impression technology-produced polymer beads by microanalysis and nitrogen sorption isotherms.

Kiseldioxidmall Avtryckspolymerb Mallnamn % C AC % N AN DS” % C % N S° V°p d°p (°/<>) (°/°) (limvl/m 2) (HQ/g) (mL/g) (Hm) AC AN AFS-Si 4.28 4.11 1.65 1.65 3.85 4.00 - - ~ - ' BOC-Gly-Si 17.04 1 1.49 3.28 1.63 4.88 4.00 53.2 0.20 132 0.24 4.0 H-Gly-Si 6.24 0.69 2.21 0.56 0.84 1.17 51.5 0.24 145 0.41 7.4 FMOC-Phe-Gly-Si 16.44 10.25 2.93 0.72 1.17 1.81 59.3 0.26 166 0.27 4.5 H-Phe-Gly-Si 11.91 5.67 2.97 0.76 1.63 1.69 58.5 0.39 204 0.58 5.4 FMOC-Phe-Si 16.02 10.47 1.78 0.13 1.20 0.27 56.3 0.23 149 0.58 7.4 H-Phe-Si 9.94 4.39 1.91 0.26 1.23 0.54 55.3 0.15 200 0.53 8.2 FMOC-Phe/Si - - - - - - 56.7 0.80 205 0.37 5.1 Kiseldioxidrnallarna och de avtrycksbebehandlade polymerema togs fram såsom beskrivs i bildtexterna till ﬁg. l och 2. Innan koppling av aminosyrorna så slutkappades de fria si- lanolgrupperna genom reaktion med hexametyldisilazan. Detta resulterade i ett korrigerat kolinnehåll på 5,55 %. FMOC-Phe/Si togs fram med användande av APS-Si som en por- mall och FMOC-Phe-OH upplöst i monomerblandningen innan porema fylldes. Det molä- ra förhållandet mall/MAA/EDMA var härvid 1/4/20. (a) Beräkningen av areadensitet (DS) av irnmobiliserad ligand baserades på förändringen i kol-(AC) eller kväve-(ANﬁnnehåll i förhållande till föregående steg. Som ett exempel för AN: DS=mN(MNS), där mn: AN% (lO0-AN%Mw/MN), Mw=mokulärvikten hos den kopp- lade liganden, MN=kvävevikt per mol av kopplad ligand och S=ytarea hos kiseldioxidstö- de: (s=3 so mZ/g). (b) Polyrnerer, som erhölls efter upplösning av kiseldioxidmallen. Polymerernas elementar- sammansättning bör jämföras med sammansättningen hos en referenspolymer, som ställts iordning i frånvaro av kiseldioxidmallen (C:59.9; N:0.l). Infrarödspektra visade inga top- par som kunde tillskrivas kvarvarande kiseldioxid och var i övrigt lika dem hos bulkmate- rialet. (c) Resultat erhållna från kvävesorptionsisoterrner. S=ytarea beräknad med hjälp av BET- modellen, Vp=totalvolym porer med diameter mindre än 109 nm i enlighet med Gurvitch och dp= medelpordiametern i enlighet med MJH-modellen.Silica template Imprint polymerb Template name% C AC% N AN DS ”% C% NS ° V ° pd ° p (° / <>) (° / °) (limvl / m 2) (HQ / g) (mL / g) (Hm ) AC AN AFS-Si 4.28 4.11 1.65 1.65 3.85 4.00 - - ~ - 'BOC-Gly-Si 17.04 1 1.49 3.28 1.63 4.88 4.00 53.2 0.20 132 0.24 4.0 H-Gly-Si 6.24 0.69 2.21 0.56 0.84 1.17 51.5 0.24 145 0.41 7.4 FMOC-Phe-Gly-Si 16.44 10.25 2.93 0.72 1.17 1.81 59.3 0.26 166 0.27 4.5 H-Phe-Gly-Si 11.91 5.67 2.97 0.76 1.63 1.69 58.5 0.39 204 0.58 5.4 FMOC-Phe-Si 16.02 10.47 1.78 0.13 1.20 0.27 56.3 0.23 149 0.58 7.4 H-Phe-Si 9.94 4.39 1.91 0.26 1.23 0.54 55.3 0.15 200 0.53 8.2 FMOC-Phe / Si - - - - - - 56.7 0.80 205 0.37 5.1. 1 and 2. Before coupling the amino acids, the free silanol groups were finally cut off by reaction with hexamethyldisilazane. This resulted in a corrected carbon content of 5.55%. FMOC-Phe / Si was prepared using APS-Si as a pore template and FMOC-Phe-OH dissolved in the monomer mixture before the pores were filled. The molar ratio MA / MAA / EDMA was 1/4/20. (a) The calculation of the area density (DS) of immobilized ligand was based on the change in carbon (AC) or nitrogen (AN content) compared to the previous step. As an example for AN: DS = mN (MNS), where mn: AN% (10 -O% Mw / MN), Mw = the molecular weight of the coupled ligand, MN = nitrogen weight per mole of coupled ligand and S = surface area of silica support: (s = 3 so mZ / g). (b) Polymers obtained after dissolution of the silica template The elemental composition of the polymers should be compared with the composition of a reference polymer prepared in the absence of the silica template (C: 59.9; N: 0.l) Infrared spectra showed no peaks attributable to silica and were otherwise similar to those of the bulk material. (c) Results obtained from nitrogen sorption isotherms. in accordance with the MJH model.

Claims

1. 20 25 30 40 45 E07 090 uL / l .. / h: REQUIREMENT I - Molecular printed material obtainable by the method comprising the steps of: (a) providing one or ﬂ your selected amino acids and a selected surface modified disposable aid, (b) coupling an amino acid to the surface of said support, (c) synthesizing a peptide, which may include FMOC-Phe-Gly-Si, H-Phe-Gly-Si, FMOC-Phe-Si, BOC-Gly-Si, H-Gly -Si, FMOC-Phe-Gly-OH, FMOC-Phe-OH, BOC-Phe-OH, H-Phe-pNA, H-Phe-O-Me, H-Phe-OtBu, BOC-Gly-OH, H -Phe- Gly-NHz, H-Phe-Gly-Gly-Phe-OH, FMOC-Phe-OH and H-Gly-Phe-OH on the surface of said support to give a support surface-coupled peptide, (d) or synthesize a oligosaccharide on the surface of said support, to provide a support surface coupled oligosaccharide, (e) providing the selected monomer mixture intended to form the molecular imprint material after polymerization, (f) contacting the monomer mixture with the support surface coupled peptide, or the oligosaccharide, (g) initiating polymerization and / or cross-coupling reaction (s) with or without the aid of cows switching substances, heat or ultraviolet energy, (h) removing the support-coupled peptide or oligosaccharide and the support by dissolution or degradation method, (i) obtaining the printed material. .

A molecularly imprinted material according to claim 1, wherein the peptide corresponds to a protein epitope. .

A molecularly imprinted material according to claim 1 or 2, wherein the surface-modified disposable support is a silane-modified silica (silica) or controlled pore glass (CPG). .

Molecular imprinted material according to any one of claims 1-3, wherein the monomer mixture contains monomers selected from the group consisting of styrene / divinylbenzene, methacrylates, acrylates, acrylamides and combinations thereof. .

A process for producing a molecularly imprinted material, characterized in that: (a) providing one or ﬂ your selected amino acids and a selected surface-modified disposable support, (b) coupling an amino acid to the surface of said support, (c) synthesizing a peptide, which may include FMOC-Phe-Gly-Si, H-Phe-Gly-Si, FMOC-Phe-Si, BOC-Gly-Si, H-Gly-Si, FMOC-Phe-Gly-OH, FMOC-Phe-OH, BOC-Phe-OH, H-Phe-pNA, H-Phe-O-Me, H-Phe-OtBu, BOC-Gly-OH, H-Phe-Gly-NHz, H-Phe-Gly-Gly-Phe- OH, FMOC-Phe-OH and H-Gly-Phe-OH on the surface of said support to provide a support surface-coupled peptide, (d) or oxygenate an oligosaccharide support surface-coupled oligosaccharide, (e) provide selected monomer mixture intended to form the molecular weight material after polymerization, (t) contacting the monomer mixture with the support-coupled peptide, or oligosaccharide, (g) initiating polymerization and / or cross-linking reaction (s) with or without cross-coupling agents, heat or ultraviolet energy , (h) ta remove the support-coupled peptide or oligosaccharide and the support by dissolution or degradation method, (i) obtain the imprinted material. .

The method of claim 5, wherein the peptide corresponds to a protein epitope. .

A method according to claim Seller 6, wherein the surface-modified disposable support is a silane-modified silica (silica) or controlled pore glass (CPG). .

A process according to any one of claims 5-8, wherein the monomer mixture contains monomers selected from the group consisting of styrene / divinylbenzene, methacrylates, acrylates, acrylamides and combinations thereof. .

Use of molecularly imprinted material according to any one of claims 1-4, as an affinity phase for the separation of biological macromolecules, which include peptides, proteins or oligosaccharides or polysaccharides, and other types of peptide receptors prepared by imprinting techniques.

Chromatographic stationary phases comprising molecularly imprinted material according to any one of claims 1-4.

The chromatographic stationary phases of claim 10, wherein the peptides are selected from F MOC-Phe-Gly-Si, H-Phe-Gly-Si, FMOC-Phe-Si, BOC-Gly-Si, H-Gly-Si, FMOC-Phe-Gly-OH, FMOC-Phe-OH, BOC-Phe-OH, H-Phe-pNA, H-Phe-O-Me, H-Phe-OtBu, BOC-Gly-OH, H-Phe- Gly-NHZ, H-Phe-Gly-Gly-Phe-OH, FMOC-Phe-OH, and H-Gly-Phe-OH. 0202477-6