SE454358B - WAY TO MONITOR FERMENTATION EASY USE OF THE KIT IN CONTROL OF FERMENTATION CONDITIONS - Google Patents

WAY TO MONITOR FERMENTATION EASY USE OF THE KIT IN CONTROL OF FERMENTATION CONDITIONS

Info

Publication number
SE454358B
SE454358B SE8603312A SE8603312A SE454358B SE 454358 B SE454358 B SE 454358B SE 8603312 A SE8603312 A SE 8603312A SE 8603312 A SE8603312 A SE 8603312A SE 454358 B SE454358 B SE 454358B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
sample stream
fermentation
particles
product
pump
Prior art date
Application number
SE8603312A
Other languages
Swedish (sv)
Other versions
SE8603312L (en
SE8603312D0 (en
Inventor
S B Svenson
Original Assignee
Trion Forskning & Utveckling
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Publication of SE8603312D0 publication Critical patent/SE8603312D0/en
Priority to SE8603312A priority Critical patent/SE454358B/en
Application filed by Trion Forskning & Utveckling filed Critical Trion Forskning & Utveckling
Priority to JP62504915A priority patent/JPH01503407A/en
Priority to AU78057/87A priority patent/AU7805787A/en
Priority to PCT/SE1987/000343 priority patent/WO1988000978A1/en
Priority to EP87905299A priority patent/EP0316350A1/en
Priority to IL83417A priority patent/IL83417A0/en
Publication of SE8603312L publication Critical patent/SE8603312L/en
Priority to DK150788A priority patent/DK150788A/en
Priority to NO881354A priority patent/NO881354D0/en
Priority to KR1019880700354A priority patent/KR880701779A/en
Publication of SE454358B publication Critical patent/SE454358B/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/06—Quantitative determination
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses

Description

15 20 25 30 35 454 358 2 Sättet att övervaka fermentering i en fermente- ringsbuljong enligt uppfinningen karaktäriseras av att det totala antalet partiklar i ett prov från en fermenteringsbuljong bestämmes medelst en anordning som ger ett värde för optisk densitet, vilket värde är ett mått pá det totala antalet partiklar som är närvarande, att provet blandas med ett överskott av märkta specifika antikroppar som är riktade mot en produkt, vilken väljes frán den grupp som består av ett inokulum, en önskad fermenteringsprodukt och en viktig kontaminant, att antalet partiklar, vilka be- står av produkt som är bunden till den märkta specifika antikroppen, bestämmes med hjälp av den använda markören och jämföres med det bestämda, totala antalet partiklar, och att denna jämförelse indikerar om några partiklar som kontaminerar fermenteringen är närvarande i fermen- teringsbuljongen. ' De produkter som kan övervakas med sättet enligt uppfinningen kan indelas i tre huvudkategorier, näm- ligen celler, t ex det använda inokulumet, extracel- lulära fermenteringsprodukter och intracellulära fer- menteringsprodukter (till exempel när rekombinant DNA-teknik används och den önskade fermenteringspro- dukten uttrycks inom bakteriecellen). The method of monitoring fermentation in a fermentation broth according to the invention is characterized in that the total number of particles in a sample from a fermentation broth is determined by means of a device which gives a value for optical density, which value is a measure of the total number of particles present, that the sample is mixed with an excess of labeled specific antibodies directed against a product selected from the group consisting of an inoculum, a desired fermentation product and an important contaminant, that the number of particles which are - stands for product bound to the labeled specific antibody, determined using the marker used and compared with the determined, total number of particles, and that this comparison indicates if any particles contaminating the fermentation are present in the fermentation broth. The products that can be monitored by the method of the invention can be divided into three main categories, namely cells, for example the inoculum used, extracellular fermentation products and intracellular fermentation products (for example when recombinant DNA technology is used and the desired fermentation process). the product is expressed within the bacterial cell).

När den produkt som övervakas är en cell, är den specifika antikropp som används riktad mot cellens ytantigener.When the product being monitored is a cell, the specific antibody used is directed against the surface antigens of the cell.

När den produkt som övervakas är en intracellulär fermenteringsprodukt används en detergent eller kemi- kalie för att slå sönder cellen för att frigöra produk- ten innan märkt specifik antikropp riktad mot produkten tillsättes.When the product being monitored is an intracellular fermentation product, a detergent or chemical is used to disrupt the cell to release the product before the labeled specific antibody directed against the product is added.

Den viktiga kontaminanten kan vara viktig exem- pelvis beroende på att den är förväntad, vanligt före- kommande och/eller dess närvaro är acceptabel endast upptill en viss koncentration. 10 15 20 25 30 35 454 358 3 Märkning av den specifika antikropp som används utföres i enlighet med kända förfaranden och den använda markören kan vara en enzymmarkör, radioaktiv isotop eller fluorescensmarkör av de typer som redan använ- des på immunoanalysområdet.The important contaminant may be important, for example, because it is expected, common and / or its presence is acceptable only up to a certain concentration. Labeling of the specific antibody used is performed according to known methods and the marker used may be an enzyme marker, radioactive isotope or fluorescence marker of the types already used in the field of immunoassay.

Kort beskrivning av ritningen Ritningen är en schematisk framställning av element i en kontinuerlig övervakningslinje som användes i föredragna utföringsformer av uppfinningen.Brief Description of the Drawing The drawing is a schematic representation of elements in a continuous monitoring line used in preferred embodiments of the invention.

Detaljerad beskrivning av ritningen Ritningen omfattar följande element: En fermenteringstank l, ett första filter 2, en andra pump 3, en första mixing coil 4 eller 5, en första anordning som ger ett värde för optisk densi- tet 6, en andra reservoar 7, en tredje pump 8, en andra mixing coil 9, en fjärde reservoar 10, en femte pump ll, en fjärde mixing coil 12, en fjärde pump 13, en ventil 14, en FACS eller en flödescytofluorimeter 15, en första reservoar l6, en första pump 17, ett andra filter 18, en andra anordning som ger ett värde för optisk densitet 19, en tredje reservoar 20, en fjärde pump 21 och en tredje mixing coil 22.Detailed description of the drawing The drawing comprises the following elements: A fermentation tank 1, a first filter 2, a second pump 3, a first mixing coil 4 or 5, a first device which gives a value for optical density 6, a second reservoir 7, a third pump 8, a second mixing coil 9, a fourth reservoir 10, a fifth pump II, a fourth mixing coil 12, a fourth pump 13, a valve 14, a FACS or a flow cytofluorimeter 15, a first reservoir 16, a first pump 17, a second filter 18, a second device which provides a value for optical density 19, a third reservoir 20, a fourth pump 21 and a third mixing coil 22.

Detaljerad beskrivning av uppfinningen Sättet att övervaka fermentering i en fermente- ringsbuljong kan, enligt en utföringsform av uppfin- ningen, utföras vid olika tidpunkter under fermen- teringen på det sätt som nedan anges.Detailed description of the invention The method of monitoring fermentation in a fermentation broth can, according to an embodiment of the invention, be carried out at different times during the fermentation in the manner set out below.

Ett prov från fermenteringsbuljongen taget fràn ett eller flera ställen i en fermenteringstank fil- treras eventuellt genom ett filter som har en lämplig porstorlek i överensstämmelse med storleken pá de partiklar som består av den produkt som skall över- vakas. Det totala antalet partiklar i provet bestäm- mes medelst en anordning som ger ett värde för optisk densitet, såsom en UV-spektrofotometer, vilket värde är ett mått på det totala antalet partiklar som är 10 15 20 25 30 35 454 358 4 närvarande i provet. Därefter sättes märkt specifik antikropp riktad mot produkten som skall övervakas i överskott till provet, och antalet partiklar som består av produkt som är bunden till märkt specifikt antikropp bestämmes med hjälp av den använda markören.A sample of the fermentation broth taken from one or more places in a fermentation tank may be filtered through a filter having a suitable pore size in accordance with the size of the particles consisting of the product to be monitored. The total number of particles in the sample is determined by means of a device which gives a value for optical density, such as a UV spectrophotometer, which value is a measure of the total number of particles present in the sample. . Then, labeled specific antibody is directed against the product to be monitored in excess of the sample, and the number of particles consisting of product bound to labeled specific antibody is determined using the marker used.

Hur detta utföres beskrives nedan i anslutning till en föredragen utföringsform av uppfinningen.How this is done is described below in connection with a preferred embodiment of the invention.

Det bestämda antalet partiklar som omfattar pro- dukten, vilken övervakas, jämföres nu med det bestämda antalet partiklar i provet. Denna jämförelse indike- rar om nàgra partiklar som kontaminerar fermenteringen är närvarande i provet och sàledes i fermenteringsbul- jongen.The determined number of particles comprising the product, which is monitored, is now compared with the determined number of particles in the sample. This comparison indicates whether any particles contaminating the fermentation are present in the sample and thus in the fermentation broth.

Fermenteringen kan således övervakas genom studium av flera resultat fràn den ovan angivna jämförelsen tagna vid olika tidpunkter under fermenteringen.The fermentation can thus be monitored by studying several results from the above comparison taken at different times during the fermentation.

Produkterna som kan övervakas med sättet enligt uppfinningen kan indelas i tre huvudkategorier, näm- ligen celler, t ex det använda inokulumet, extracel- lulära fermenteringsprodukter och intracellulära fer- menteringsprodukter (till exempel när rekombinant DNA-teknik används och den önskade fermenteringspro- dukten uttrycks inom bakteriecellen).The products that can be monitored by the method of the invention can be divided into three main categories, namely cells, eg the inoculum used, extracellular fermentation products and intracellular fermentation products (for example when recombinant DNA technology is used and the desired fermentation product is expressed within the bacterial cell).

När produkten som övervakas är en cell, är den specifika antikropp som användes riktad mot cellens ytantigener.When the product being monitored is a cell, the specific antibody used is directed against the surface antigens of the cell.

När produkten som övervakas är en intracellulära fermenteringsprodukt, används en detergent eller kemi- kalie för att söndra cellen för att frigöra produk- ten innan märkt specifik antikropp riktad mot produkten tillsättes.When the product being monitored is an intracellular fermentation product, a detergent or chemical is used to dissociate the cell to release the product before the labeled specific antibody directed against the product is added.

Märkning av den specifika antikropp som används utföres i enlighet med kända förfaranden och den markör som används kan vara en enzymmarkör, radioaktiv isotop eller fluorescensmarkör av en typ som redan används på immunoanalysomrâdet. 1 10 15 20 25 30 35 454 358 S En föredragen utföringsform av uppfinningen omfat- tar ett sätt att övervaka fermentering i en fermente- ringsbuljong utfört kontinuerligt på följande sätt.Labeling of the specific antibody used is performed according to known methods and the marker used may be an enzyme marker, radioactive isotope or fluorescence marker of a type already used in the field of immunoassay. 1 10 15 20 25 30 35 454 358 S A preferred embodiment of the invention comprises a method of monitoring fermentation in a fermentation broth performed continuously in the following manner.

Fermenteringen i fermenteringsbuljongen utföres i någon konventionell fermenteringstank l, under lämp- liga betingelser.The fermentation in the fermentation broth is carried out in any conventional fermentation tank 1, under suitable conditions.

Kontinuerlig provtagning från ett eller flera ställen i fermenteringstanken (1) utföres, och prov- strömmen bringas eventuellt att passera genom ett första filter (2) som har en lämplig porstorlek (vilken kan varieras i enlighet med storleken på de partiklar som man önskar skall passera) medelst en andra pump (3), vilken pumpar i övervakningslinjens riktning.Continuous sampling from one or more places in the fermentation tank (1) is performed, and the sample stream is optionally passed through a first filter (2) having a suitable pore size (which can be varied according to the size of the particles to be passed). ) by means of a second pump (3), which pumps in the direction of the monitoring line.

Provströmmen bringas eventuellt att passera genom en första mixing coil, vilken är arrangerad före (4) eller efter (5) den andra pumpen (3). Provströmmen bringas sedan att passera genom en första anordning (6) som ger ett värde för optisk densitet (till exempel UV-spektrofotometer). Värdet användes för bestämning av mängden spädmedel som krävs för att ge ett konstant antal partiklar i provströmmen. Spädmedel sättes till provströmmen från en andra reservoar (7) medelst en tredje pump (8) i en mängd som bestämts av värdet för optisk densitet. Denna mängd kan bestämmas medelst en dator, på basen av värdet för optisk densitet, och styrning av den tredje pumpen (8) kan utföras med signaler från datorn.The sample stream is optionally passed through a first mixing coil, which is arranged before (4) or after (5) the second pump (3). The sample stream is then passed through a first device (6) which gives a value for optical density (for example UV spectrophotometer). The value is used to determine the amount of diluent required to give a constant number of particles in the sample stream. Diluent is added to the sample stream from a second reservoir (7) by means of a third pump (8) in an amount determined by the value of optical density. This amount can be determined by a computer, on the basis of the value for optical density, and control of the third pump (8) can be performed with signals from the computer.

Den spädda provströmmen bringas att passera genom en andra mixing coil (9) och en vätska, vilken inne- håller märkt specifikt antikropp riktad mot en produkt, som väljes fràn den grupp som består av ett inokulum, en önskad fermenteringsprodukt och en viktig konta- minant, sättes i överskott (baserat på det bestämda, konstanta antalet partiklar som är närvarande i ström- men) till den spädda provströmmen från en fjärde re- servoar (10) medelst en femte pump (ll). Denna tillsätt- ning av märkt specifikt antikropp till provströmmen 10 15 20 25 30 35 454 358 6 kan styras medelst en dator med hjälp av värdet för det totala antalet partiklar som är närvarande, varvid datorn styr den femte pumpen (ll) som pumpar en lämplig mängd av vätskan, vilken innehåller märkt specifikt antikropp, till provströmmen. Provströmmen bringas sedan att passera genom en andra mixing och fördröj- ningscoil (12), där produkten som övervakas interagerar med den specifika märkta antikroppen, och eftersom den senare är närvarande i ett överskott, kommer alla partiklar av produkten som övervakas att bindas till märkt antikropp.The diluted sample stream is passed through a second mixing coil (9) and a liquid containing labeled specific antibody directed to a product selected from the group consisting of an inoculum, a desired fermentation product and an important contaminant. , is added in excess (based on the determined, constant number of particles present in the stream) to the diluted sample stream from a fourth reservoir (10) by means of a fifth pump (II). This addition of labeled specific antibody to the sample stream can be controlled by a computer using the value of the total number of particles present, the computer controlling the fifth pump (II) which pumps a suitable amount of the liquid, which contains labeled specific antibody, to the sample stream. The sample stream is then passed through a second mixing and delay coil (12), where the product being monitored interacts with the specific labeled antibody, and since the latter is present in excess, all particles of the product being monitored will bind to labeled antibody. .

Provströmmen leds vidare till en fjärde pump (13) som upprätthåller ett konstant tryck i övervak- ningslinjen, och om trycket överskrides kasseras en lämplig mängd av provet genom en ventil (14), som aktiveras vid ett tryck i övervakningslinjen som över- skrider ett förinställt värde. Återigen kan upprätt- hàllandet av det konstanta trycket i övervaknings- linjen åstadkommas medelst en dator som styr den fjärde pumpen (13) och ventilen (14).The sample stream is passed to a fourth pump (13) which maintains a constant pressure in the monitoring line, and if the pressure is exceeded, an appropriate amount of the sample is discarded through a valve (14) which is activated at a pressure in the monitoring line which exceeds a preset value. Again, the maintenance of the constant pressure in the monitoring line can be achieved by means of a computer which controls the fourth pump (13) and the valve (14).

Provströmmen som kommer ut från den fjärde pumpen (l3).har således ett konstant antal partiklar per tidsenhet, och med hjälp av den markör som används kan antalet partiklar, vilka omfattar produkten som övervakas, per tidsenhet bestämmas och jämföras med det bestämda konstanta antalet partiklar som är när- varnade. Denna jämförelse indikerar om några partiklar som kontaminerar fermenteríngen är närvarande i prov- strömmen och följaktligen i fermenteringsbuljongen.The sample stream coming out of the fourth pump (13) thus has a constant number of particles per unit time, and with the aid of the marker used the number of particles comprising the product being monitored can be determined per unit time and compared with the determined constant number of particles. who are alert. This comparison indicates whether any particles contaminating the fermentation are present in the sample stream and consequently in the fermentation broth.

Sedan kan åtgärder för att styra fermenteringen vid- tagas, till exempel att avbryta, frysa eller behandla fermenteringsbuljongen på lämpligt sätt.Measures can then be taken to control the fermentation, for example to interrupt, freeze or treat the fermentation broth in an appropriate manner.

Bestämningen av antalet partiklar, vilka omfattar produkten som övervakas, kan utföras på flera kända sätt, beroende pà den markör som används. 10 15 20 25 30 35 454 358 7 Om den markör som används är en radioaktiv iso- top analyseras provströmmen, vilken innehåller både en fri märkt specifik antikropp och en produktbunden märkt specifikt antikropp, beträffande fri eller bunden märkt antikropp genom att ett prov från provströmmen underkastas kromatografisk separation eller, före- trädesvis, genom att provströmmen kontinuerligt under- kastas kromatografisk separation. Därefter bestämmes antingen mängden separerad fri märkt antikropp eller dess bundna motsvarighet medelst en anordning som ger ett radioaktivitetsvärde (vilket är ett màtt på antalet partiklar som omfattar markören).The determination of the number of particles, which comprise the product being monitored, can be performed in several known ways, depending on the marker used. If the marker used is a radioactive isotope, the sample stream, which contains both a free labeled specific antibody and a product-bound labeled specific antibody, is analyzed for free or bound labeled antibody by taking a sample from the sample stream. is subjected to chromatographic separation or, preferably, by continuously subjecting the sample stream to chromatographic separation. Thereafter, either the amount of separated free labeled antibody or its bound equivalent is determined by a device which gives a radioactivity value (which is a measure of the number of particles comprising the marker).

Om den markör som används är ett enzym analy- seras ett prov från provströmmen, vilken innehåller både en fri märkt specifik antikropp och en produktbun- den märkt specifikt antikropp, beträffande fri eller bunden märkt antikropp genom till exempel enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).If the marker used is an enzyme, a sample from the sample stream, which contains both a free labeled specific antibody and a product-bound labeled specific antibody, is analyzed for free or bound labeled antibody by, for example, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).

Om den markör som används är en fluorescerande substans, vilket föredrages, då analyseras ett prov av provströmmen, vilken innehåller både en fri märkt specifik antikropp och en produktbunden märkt specifikt antikrcpp, beträffande fri eller bunden märkt antikropp, till exempel medelst ett fluorescens-mikroskop eller kontinuerligt medelst en "fluorescence activated cell sorter" (FACS).If the marker used is a preferred fluorescent substance, then a sample of the sample stream is analyzed, which contains both a free labeled specific antibody and a product bound labeled specific antibody, for free or bound labeled antibody, for example by means of a fluorescence microscope or continuously by means of a "fluorescence activated cell sorter" (FACS).

I den mest föredragna utföringsformen av uppfin- ningen används en fluorescence activated cell sorter (FACS) för kontinuerlig övervakning av provströmmen på följande sätt.In the most preferred embodiment of the invention, a fluorescence activated cell sorter (FACS) is used for continuous monitoring of the sample stream in the following manner.

Provströmmen frán den fjärde pumpen (13), som nu har ett känt totalantal partiklar närvarande per tidsenhet, matas, vid ett konstant tryck, till en FACS (15). FACS har en spets som bildar droppar, nu vid en konstant hastighet, vilka droppar får passerar 10 15 20 25 30 35 454 558 8 genom en laserstràle, och ljusemissionen från varje partikel som passerar laserstràlen registreras vid en vinkel av till exempel 90° i förhållande till la- serstrålen, och ljusspridningen från samma partikel registreras vid en annan vinkel av till exempel l50° i förhållande till laserstrálen, varvid denna ljus- spridning ger en uppskattning av storleken.pà den partikel som mätes.The sample stream from the fourth pump (13), which now has a known total number of particles present per unit time, is fed, at a constant pressure, to a FACS (15). FACS has a tip which forms droplets, now at a constant speed, which droplets are allowed to pass through a laser beam, and the light emission from each particle which passes the laser beam is recorded at an angle of, for example, 90 ° in relation to to the laser beam, and the light scattering from the same particle is registered at a different angle of, for example, 150 ° in relation to the laser beam, this light scattering giving an estimate of the size of the particle being measured.

Provströmmen från fermenteringsbuljongen kan nu övervakas kontinuerligt frân ett fönster pá FACS, där de registrerade värdena sorteras så att partiklarnas relativa storlek (abskissa) versus den relativa gra- den av fluorescens (ordinatan) plottas i ett koordi- natsystem.The sample stream from the fermentation broth can now be monitored continuously from a window on the FACS, where the recorded values are sorted so that the relative size of the particles (abscissa) versus the relative degree of fluorescence (ordinate) is plotted in a coordinate system.

Sålunda kan framskridandet av fermenteringen övervakas kontinuerligt genom att följa utvecklingen av produkten som övervakas på skärmen. Produkten som övervakas ses sålunda pà ett ställe på skärmen i enlig- het med dess storlek och sådana kontaminanter som inte är fluorescerande ses i närheten av abskissan i enlighet med deras storlek.Thus, the progress of the fermentation can be monitored continuously by following the development of the product being monitored on the screen. The product being monitored is thus seen in one place on the screen according to its size, and non-fluorescent contaminants are seen in the vicinity of the abscissa according to their size.

Signaler från FACS kan överföras till en dator som kan ge varningssignaler eller signaler som styr fermenteringsbetingelserna.Signals from FACS can be transmitted to a computer that can provide warning signals or signals that control the fermentation conditions.

Eventuellt kan referenspartiklar som har en fluore- scensmarkör av samma eller annan typ som den som an- vänds för den specifika antikroppen införlivas i ovan angivna övervakningslinje. Referenspartiklarna kan matas från en första reservoar (16) medelst en första pump (17) till provströmmen i övervakningslinjen nå- gonstans före den fjärde pumpen (13), företrädesvis efter det första filtret (2) och före den första mixing coilen (4 eller 5).Optionally, reference particles having a fluorescence marker of the same or different type as that used for the specific antibody may be incorporated into the above monitoring line. The reference particles can be fed from a first reservoir (16) by means of a first pump (17) to the sample stream in the monitoring line somewhere before the fourth pump (13), preferably after the first filter (2) and before the first mixing coil (4 or 5). ).

Referenspartiklarnas storlek väljes så att den skiljer sig från storleken på de partiklar, vilka består av produkten som övervakas och som är bunden 10 15 20 25 30 35 454 358 9 till den märkta specifika antikroppen. Sålunda kan referenspartiklarna ses på ett speciellt ställe på FACS-skärmen. Om referenspartiklarna rör sig från sitt speciella ställe då är det något fel i övervak- ningslinjen, till exempel kan tryckefi ha fallit.The size of the reference particles is selected so that it differs from the size of the particles which consist of the product being monitored and which are bound to the labeled specific antibody. Thus, the reference particles can be seen in a special place on the FACS screen. If the reference particles move from their special place then there is something wrong in the monitoring line, for example the pressure fi may have dropped.

När produkten som övervakas är en cell, till exempel inokulum, kan provströmmen från fermenterings- tanken (1) bringas att passera direkt till den första anordningen som ger ett värde för optisk densitet (6) medelst den andra pumpen (3), eventuellt genom den första mixing coilen (4 eller 5). Ett spädmedel från den andra reservoaren (7) kan eller behöver inte sättas till provströmmen (8) medelst den tredje pumpen.When the product being monitored is a cell, for example inoculum, the sample stream from the fermentation tank (1) can be passed directly to the first device which gives an optical density value (6) by means of the second pump (3), possibly through the first mixing coil (4 or 5). A diluent from the second reservoir (7) may or may not be added to the sample stream (8) by the third pump.

Om inget spädmedel tillsättes då kan mängden celler som produceras i fermenteringsbuljongen övervakas medelst FACS och den optimala tidpunkten för skördning kan bestämmas. I När produkten som skall övervakas är en extra- cellulär fermenteringsprodukt då kan provströmmen frán fermenteringstanken (1) först bringas att passera genom det första filtret (2) för att utesluta exempelvis celler från provströmmen. _ När produkten som övervakas är en intracellulär fermenteringsprodukt då bringas provströmmen att passera medelst den andra pumpen (3), eventuellt genom det första filtret (2) och/eller den första mixing coilen (4 eller 5), till den första anordningen som ger ett värde för optisk densitet (6), och från den andra reservoaren (7) tillsättes en detergent eller kemikalie medelst den tredje pumpen (8) till provströmmen, vilken sedan bringas att passera genom den andra mixing coilen (9) där söndring av celler sker. Sedan bringas strömmen eventuellt att passera genom ett lämpligt andra filter (18) för att rena provströmmen fràn cell debris och därefter bestämmes det totala antalet partiklar som är närvarande i provströmmen medelst en andra anordning som ger ett värde för optisk densitet (19), vilket 10 15 20 25 30 35 454 358 10 värde används för bestämning av mängden märkt specifik antikropp som skall sättas till strömmen från den fjärde reservoaren (10) medelst den femte pumpen (ll).If no diluent is added then the amount of cells produced in the fermentation broth can be monitored by FACS and the optimal time for harvesting can be determined. When the product to be monitored is an extracellular fermentation product, the sample stream from the fermentation tank (1) can first be passed through the first filter (2) to exclude, for example, cells from the sample stream. When the product being monitored is an intracellular fermentation product then the sample stream is passed through the second pump (3), optionally through the first filter (2) and / or the first mixing coil (4 or 5), to the first device which provides a value for optical density (6), and from the second reservoir (7) a detergent or chemical is added by means of the third pump (8) to the sample stream, which is then passed through the second mixing coil (9) where cell division takes place. Then, the current is optionally passed through a suitable second filter (18) to purify the sample stream from the cell debris and then the total number of particles present in the sample stream is determined by a second device which gives a value for optical density (19), which 15 20 25 30 35 454 358 10 value is used to determine the amount of labeled specific antibody to be added to the stream from the fourth reservoir (10) by the fifth pump (II).

Om partikelstorleken på produkten som är bunden till den märkta specifika antikroppen är ofördelaktigt liten för FACS-sortering av partiklarna kan den ovan beskrivna övervakningslinjen kompletteras med en ytter- ligare tredje reservoar (20) som innehåller partiklar med specifika antikroppar riktade mot produkten som övervakas, en fjärde pump (21) som pumpar partiklarna till provströmmen vid ett ställe som är före eller efter det ställe där tillsättningen av märkta specifika antikroppar utföres, i vilket fall även en ytterli- gare, tredje mixing coil (22) lägges in i övervaknings- linjen mellan ställena för tillsättning av partik- lar med specifika antikroppar respektive märkt specifik antikropp.If the particle size of the product bound to the labeled specific antibody is disadvantageously small for FACS sorting of the particles, the monitoring line described above can be supplemented with an additional third reservoir (20) containing particles with specific antibodies directed to the product being monitored, a fourth pump (21) which pumps the particles to the sample stream at a place which is before or after the place where the addition of labeled specific antibodies is carried out, in which case an additional, third mixing coil (22) is also inserted in the monitoring line between the sites for the addition of particles with specific antibodies and labeled specific antibodies.

Hela övervakningslinjen kan automatiseras med hjälp av datorer, och signaler från FACS kan styra fermenteringsbetingelserna.The entire monitoring line can be automated using computers, and signals from FACS can control the fermentation conditions.

Vid lämpligt utnyttjande av sättet enligt upp- finningen kan fermentering i en fermenteringsbuljong övervakas kontinuerligt från inokuleringen till slutet.With appropriate use of the method according to the invention, fermentation in a fermentation broth can be monitored continuously from the inoculation to the end.

I Först övervakas uppstartningen av fermenteringen genom att följa inokulumets utveckling och genom att kontrollera att fermenteringsbuljongen är fri fràn kontaminanter. Sedan övervakas fermenteringen med hänsyn till den önskade fermenteringsprodukten för att kontrollera att fermenteringsbuljongen är fri från kontaminanter. Av och till utföres ingen spädning av provströmmen och därigenom kan mängden produkt som produceras följas i syfte att bestämma den optimala tidpunkten för skördning.First, the start-up of the fermentation is monitored by monitoring the development of the inoculum and by checking that the fermentation broth is free of contaminants. The fermentation is then monitored for the desired fermentation product to verify that the fermentation broth is free of contaminants. Occasionally, no dilution of the sample stream is performed and thereby the amount of product produced can be monitored in order to determine the optimal time for harvesting.

Sättet att övervaka fermentering enligt uppfin- ningen kan fördelaktigt utnyttjas för övervakning 10 15 20 25 30 454 358 ll av flera produkter samtidigt, vilka produkter väljes från den grupp som består av inokula, önskade fer- menteringsprodukter och viktiga kontaminanter, med hjälp av en FACS, så länge som de skiljer sig ifråga om partikelstorlek och/eller fluorescens. Antikrop- par riktade mot nâgra viktiga, förväntade och/eller vanligt förekommande kontaminanter, ger (tillsammans om kunskapen om deras storlek) inte endast en varnings- signal att en kontaminant är närvarande, utan också en tidig identifiering och bestämning av koncentra- tionen av denna kontaminant(er) som sedan kan jäm- föras med existerande rekommendationer etc för att avbryta, frysa eller behandla fermenteringsbuljongen på lämpligt sätt. 7 När fermenteringsövervakning enligt föreliggande uppfinning utföres medelst en FACS, kan en okänd konta- minant som upptäckes återvinnas i ett renat tillstànd separat från den odlade organismen, vilket således möjliggör snabb testning av möjliga sätt att få situa- tionen under kontroll.The method of monitoring fermentation according to the invention can be advantageously used for monitoring 10 15 20 25 30 454 358 ll of several products simultaneously, which products are selected from the group consisting of inocula, desired fermentation products and important contaminants, by means of a FACS , as long as they differ in particle size and / or fluorescence. Antibodies directed against some important, expected and / or common contaminants give (together with the knowledge of their size) not only a warning signal that a contaminant is present, but also an early identification and determination of its concentration. contaminant (s) which can then be compared with existing recommendations, etc. to interrupt, freeze or treat the fermentation broth in an appropriate manner. When fermentation monitoring according to the present invention is performed by means of a FACS, an unknown contaminant that is detected can be recovered in a purified state separate from the cultured organism, thus enabling rapid testing of possible ways to get the situation under control.

Det är således uppenbart för en expert att sättet enligt uppfinningen kan användas för kontroll av renheten av ett inokulum före det sättes till fermenterings- buljongen, med hjälp av märkta specifika antikroppar riktade mot inokulumet och företrädesvis med hjälp av en FACS, vilket är en utföringsform som ligger inom uppfinningens skyddsomfáng.Thus, it is obvious to an expert that the method of the invention can be used to check the purity of an inoculum before it is added to the fermentation broth, by means of labeled specific antibodies directed against the inoculum and preferably by means of a FACS, which is an embodiment which is within the scope of the invention.

Claims (10)

10 15 20 25 30 35 454 358 12 å PATENTKRAV w)10 15 20 25 30 35 454 358 12 å PATENT REQUIREMENT w) 1. l. Sätt att övervaka fermentering i en fermen- teringsbuljong, k ä n n e t e c k n a t därav, att det totala antalet partiklar i ett prov från fermen- teringsbuljongen bestämmes medelst en anordning som ger ett värde för optisk densitet, vilket värde är ett mått pà det totala antalet partiklar som är när- varande, att provet blandas med ett överskott av märkta specifika antikroppar riktade mot en produkt, vilken väljes frán den grupp som består av utvalda celler i ett inokulum, en önskad fermenteringsprodukt och en viktig kontaminant, att antalet partiklar som består av ovan valda produkt som är bunden till den märkta specifika antikroppen bestämmes med hjälp av den markör som används och jämföres med det bestämda totala antalet partiklar, och att denna jämförelse indikerar om nâgra partiklar som kontaminerar fermenteringen är närvarande i fermenteringsbuljongen.1. A method of monitoring fermentation in a fermentation broth, characterized in that the total number of particles in a sample from the fermentation broth is determined by means of a device giving a value for optical density, which value is a measure of the the total number of particles present, that the sample is mixed with an excess of labeled specific antibodies directed against a product, which is selected from the group consisting of selected cells in an inoculum, a desired fermentation product and an important contaminant, that the number of particles consists of the above-selected product bound to the labeled specific antibody is determined by the marker used and compared with the determined total number of particles, and that this comparison indicates whether any particles contaminating the fermentation are present in the fermentation broth. 2. Sätt enligt kravet 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att det totala antalet partiklar i provet från fermenteringsbuljongen bestämmes medelst en UV-spek- trofotometer.2. A method according to claim 1, characterized in that the total number of particles in the sample from the fermentation broth is determined by means of a UV spectrophotometer. 3. Sätt enligt kravet l eller 2, k ä n n e - t e c k n a t därav, att den markör som används är en enzymmarkör och att bestämningen av antalet partiklar som består av ovan valda produkt som är bunden till den märkta specifika antikroppen utföres genom enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).3. A method according to claim 1 or 2, characterized in that the marker used is an enzyme marker and that the determination of the number of particles consisting of the above-selected product bound to the labeled specific antibody is performed by enzyme linked immunosorbent assay. (ELISA). 4. Sätt enligt kravet 1 eller 2, k ä n n e t e c k - n a t därav, att den markör som används är en radio- aktiv isotop, och att bestämningen av antalet partik- lar som består av ovan valda produkt som är bunden till den märkta specifika antikroppen åstadkommes genom att provet underkastas kromatografisk separation och att mängden separerad fri märkt antikropp, eller 10 15 20 25 30 35 454 358 13 dess bundna motsvarighet, bestämmes medelst en anordning som ger ett radioaktivitetsvärde.4. A method according to claim 1 or 2, characterized in that the marker used is a radioactive isotope, and that the determination of the number of particles consisting of the above-selected product bound to the labeled specific antibody is obtained by subjecting the sample to chromatographic separation and that the amount of separated free labeled antibody, or its bound equivalent, is determined by means of a device which gives a radioactivity value. 5. Sätt enligt kravet l eller 2, k ä n n e - t e c k n a t en fluorescerande substans, och att bestämningen av därav, att markören som används är antalet partiklar, som består av ovan valda produkt som är bunden till den märkta specifika antikroppen, utföres medelst ett fluorescensmíkroskåp, en flödes- cytofluorimeter eller en fluorescence activated cell- -sorter (FACS).5. A method according to claim 1 or 2, characterized in that a fluorescent substance, and the determination thereof, that the marker used is the number of particles, consisting of the above-selected product bound to the labeled specific antibody, is performed by a fluorescence microscope, a flow cytofluorimeter or a fluorescence activated cell (FACS) species. 6. Sätt enligt kravet 1 eller 2, vilket utförs pá ett kontinuerligt sätt, k ä n n e t e c k n a t därav, att den markör som används är en fluoresceran- de substans, och att kontinuerlig provtagning av fer- menteringsbuljongen utföres från ett eller flera ställen i en fermenteringstank (1), att denna provström eventuellt bringas att passera genom ett lämpligt första filter (2), att referenspartiklar med en fluorescensmarkör eventuellt sättes till provströmmen från en första reservoar (16) medelst en första pump (17), att provströmmen bringas att passera genom en första mixing coil (4, 5) medelst en andra pump (3) varvid den första coilen (4, 5) är arrangerad före (4) eller efter (5) den andra pumpen (3), att provströmmen därefter bringas att passera genom en första anordning (6) som ger ett värde för optisk densitet, vilket värde är ett mått på det totala antalet partiklar som är närvarande i provströmmen och vilket värde användes för bestämning av mängden spädmedel, detergent eller kemikalie som skall sättas till provströmmen, att den bestämda mängden av spädmedel, detergent eller kemikalie sättes till provströmmen från en andra reservoar (7) medelst en tredje pump (8), 10 15 20 25 30 35 454 358 14 att provströmmen bringas att passera genom en andra mixing coil (9), att provströmmen eventuellt bringas att passera genom ett lämpligt andra filter (18), att provströmmen eventuellt bringas att passera genom en andra anordning (19) som ger ett värde för optisk densitet, vilket värde är ett mått pá det totala antalet partiklar som är närvarande i provströmmen, att partiklar med specifika antikroppar riktade mot en produkt, vilken produkt väljes från den grupp som består av utvalda celler i ett inokulum, en önskad fermenteringsprodukt och en viktig kontaminant, even- tuellt sättes till provströmmen från en tredje reservoar (20) medelst en fjärde pump (21), att provströmmen eventuellt bringas att passera genom en tredje mixing coil (22), att ett överskott av märkta specifika antikroppar riktade mot en produkt, vilken väljes från den grupp som består av utvalda celler i ett inokulum, en önskad fermenteringsprodukt och en viktig kontaminant, sättes till provström-men fràn en fjärde reservoar (10) medelst en femte pump (ll), att provströmmen därefter bringas att passera genom en fjärde mixing och fördröjningscoil (12), att provströmmen bringas att passera genom en fjärde pump (13), vilken upprätthåller ett konstant tryck i övervakningslinjen med hjälp av en ventil (14), vilken kasserar en del av provströmmen vid ett tryck som överskrider ett förinställt värde, att provströmmen som släpps ut från den fjärde pumpen (13) leds till en fluorescence activated cell sorter (FACS) (15), vilken sorterar partiklarna som är närvarande i provströmmen i enlighet med relativ partikelstorlek och relativ grad av fluorescens, och att provströmmen från fermenteringsbuljongen sålunda kontinuerligt övervakas medelst FACS (15). 01 10 15 20 25 454 358 15A method according to claim 1 or 2, which is carried out in a continuous manner, characterized in that the marker used is a fluorescent substance, and that continuous sampling of the fermentation broth is carried out from one or more places in a fermentation tank. (1), that this sample stream is optionally passed through a suitable first filter (2), that reference particles with a fluorescence marker are optionally added to the sample stream from a first reservoir (16) by means of a first pump (17), that the sample stream is passed through a first mixing coil (4, 5) by means of a second pump (3), the first coil (4, 5) being arranged before (4) or after (5) the second pump (3), that the sample stream is then passed through a first device (6) which gives a value for optical density, which value is a measure of the total number of particles present in the sample stream and which value is used for determining the amount of diluent, detergent or chemical to be added to the sample stream, that the determined amount of diluent, detergent or chemical be added to the sample stream from a second reservoir (7) by means of a third pump (8), that the sample stream be passed through a second mixing coil (9), that the sample stream is optionally passed through a suitable second filter (18), that the sample stream is optionally passed through a second device (19) which gives a value for optical density, which value is a measure of the total number of particles present in the sample stream, that particles with specific antibodies directed against a product, which product is selected from the group consisting of selected cells in an inoculum, a desired fermentation product and an important contaminant, are optionally added to the sample stream from a third reservoir (20) by means of a fourth pump (21), that the sample stream is optionally passed through a third mixing coil (22), that an excess of labeled specific antibodies directed against a product selected from the group consisting of selected cells in an inoculum, a desired fermentation product and an important contaminant are added to the sample stream from a fourth reservoir (10) by means of a fifth pump (II), that the sample stream is then passed through a fourth mixing and delay coil (12), the sample stream being passed through a fourth pump (13), which maintains a constant pressure in the monitoring line by means of a valve (14), which discards part of the sample stream at a pressure exceeding a preset value, the sample stream discharged from the fourth pump (13) is passed to a fluorescence activated cell sorter (FACS) (15), which sorts the particles present in the sample stream according to relative particle size and relative degree of fluorescence, and that the sample stream from the fermentation broth is thus continuously monitored by FACS (15). 01 10 15 20 25 454 358 15 7. Sätt enligt kravet 6, k ä n n e t e c k n a t därav, att styrningen av övervakningslinjen är dator- -assisterad.7. A method according to claim 6, characterized in that the control of the monitoring line is computer-assisted. 8. Sätt enligt kravet 6 eller 7, k ä n n e t e c k - n a t därav, att flera produkter, som väljes från den grupp som består av utvalda celler i inokula, önskade fermenteringsprodukter och viktiga kontami- nanter, övervakas samtidigt.8. A method according to claim 6 or 7, characterized in that several products, selected from the group consisting of selected cells in the inocula, desired fermentation products and important contaminants, are monitored simultaneously. 9. Användning av sättet att övervaka fermentering i en fermenteringsbuljong enligt något av de föregående kraven för styrning av fermenteringsbetingelserna.Use of the method of monitoring fermentation in a fermentation broth according to any one of the preceding claims for controlling the fermentation conditions. 10. Användning av ett sätt att övervaka fermen- tering i en fermenteringsbuljong enligt kravet 6, 7 eller 8, för kontinuerlig styrning av fermenterings- betingelserna.Use of a method of monitoring fermentation in a fermentation broth according to claim 6, 7 or 8, for continuous control of the fermentation conditions.
SE8603312A 1986-08-05 1986-08-05 WAY TO MONITOR FERMENTATION EASY USE OF THE KIT IN CONTROL OF FERMENTATION CONDITIONS SE454358B (en)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8603312A SE454358B (en) 1986-08-05 1986-08-05 WAY TO MONITOR FERMENTATION EASY USE OF THE KIT IN CONTROL OF FERMENTATION CONDITIONS
JP62504915A JPH01503407A (en) 1986-08-05 1987-07-24 How to monitor fermentation
AU78057/87A AU7805787A (en) 1986-08-05 1987-07-24 Method of monitoring fermentation
PCT/SE1987/000343 WO1988000978A1 (en) 1986-08-05 1987-07-24 Method of monitoring fermentation
EP87905299A EP0316350A1 (en) 1986-08-05 1987-07-24 Method of monitoring fermentation
IL83417A IL83417A0 (en) 1986-08-05 1987-08-03 Method of monitoring fermentation
DK150788A DK150788A (en) 1986-08-05 1988-03-18 PROCEDURE FOR GOVERNANCE MANAGEMENT
NO881354A NO881354D0 (en) 1986-08-05 1988-03-25 PROCEDURE FOR MONITORING OF FERMENTATION.
KR1019880700354A KR880701779A (en) 1986-08-05 1988-04-02 Fermentation monitoring method

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8603312A SE454358B (en) 1986-08-05 1986-08-05 WAY TO MONITOR FERMENTATION EASY USE OF THE KIT IN CONTROL OF FERMENTATION CONDITIONS

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8603312D0 SE8603312D0 (en) 1986-08-05
SE8603312L SE8603312L (en) 1988-02-06
SE454358B true SE454358B (en) 1988-04-25

Family

ID=20365213

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8603312A SE454358B (en) 1986-08-05 1986-08-05 WAY TO MONITOR FERMENTATION EASY USE OF THE KIT IN CONTROL OF FERMENTATION CONDITIONS

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP0316350A1 (en)
JP (1) JPH01503407A (en)
KR (1) KR880701779A (en)
AU (1) AU7805787A (en)
DK (1) DK150788A (en)
IL (1) IL83417A0 (en)
SE (1) SE454358B (en)
WO (1) WO1988000978A1 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK96989D0 (en) * 1989-02-28 1989-02-28 Faxe Kalkbrud Aktieselskabet PROCEDURE FOR MONITORING BIOLOGICAL PROCESSES

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1284500A (en) * 1970-04-01 1972-08-09 Vnii Biosinteza Belkovykh Vesc Device for automatic control of the process of biosynthesis of micro-organisms
US4510244A (en) * 1980-04-17 1985-04-09 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University Cell labeling with antigen-coupled microspheres
GB2097144A (en) * 1981-03-23 1982-10-27 Tno New method for identifying algae in water samples and apparatus for use in that method

Also Published As

Publication number Publication date
EP0316350A1 (en) 1989-05-24
KR880701779A (en) 1988-11-05
WO1988000978A1 (en) 1988-02-11
DK150788A (en) 1988-04-25
JPH01503407A (en) 1989-11-16
DK150788D0 (en) 1988-03-18
AU7805787A (en) 1988-02-24
SE8603312L (en) 1988-02-06
SE8603312D0 (en) 1986-08-05
IL83417A0 (en) 1988-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6336496B2 (en) Apparatus, system, method and computer readable medium for acoustic flow cytometry
EP0132064B1 (en) Method for elimination of interference of selected cell populations in analytic cytology
Riedy et al. Use of a photolabeling technique to identify nonviable cells in fixed homologous or heterologous cell populations
EP2602608B1 (en) Analysis and sorting of biological cells in flow
US8992754B2 (en) Method and apparatus for the characterizing and counting particles, in particular, biological particles
US5948686A (en) Method for performing blood cell counts
JP2013513109A5 (en)
EP0193356A2 (en) Method for analysis of subpopulations of blood cells
US9420148B2 (en) High-throughput single-cell imaging, sorting, and isolation
CA2264389A1 (en) A micro flow system for particle separation and analysis
US20100015601A1 (en) Biological confirmation and detection system
CA2258603A1 (en) Method and apparatus for performing automated analysis
JP2005538727A (en) Method and apparatus for classifying particles
DE102007021387A1 (en) Detection device for the detection of biological microparticles such as bacteria, viruses, spores, pollen or biological toxins, and detection methods
MX2013001750A (en) Microfluidic cell separation in the assay of blood.
CN111527395A (en) Flow cytometry detection method for lymphocytes in immune cells
WO2007131507A2 (en) Methods for flow cytometry analyses of cells without lysing subpopulations
WO2008036083A1 (en) Microfluidic flow cytometer and applications of same
SE454358B (en) WAY TO MONITOR FERMENTATION EASY USE OF THE KIT IN CONTROL OF FERMENTATION CONDITIONS
US20140246624A1 (en) Monochromatic dot ensembles
CN110312926B (en) Method for analyzing a plurality of droplets and selecting specific droplets therefrom and related device
US20090203023A1 (en) Concentrating Microorganisms in Aqueous Solution Prior to Selective Staining and Detection
US20220107258A1 (en) Method and apparatus to search for, find, collect and confirm the presence of ptentially dangerous airborne particles such as COVID-19 VIRUS
US3627495A (en) Decantation fitting
CN215103219U (en) Cell sorter

Legal Events

Date Code Title Description
NUG Patent has lapsed

Ref document number: 8603312-3

Effective date: 19920306

Format of ref document f/p: F