SE425664B

SE425664B - ANALOGY PROCEDURE FOR PREPARATION OF 3 "-N-DEMETHYL-XK-62-2

Info

Publication number: SE425664B
Application number: SE7900842A
Authority: SE
Inventors: S Tomioka; Y Mori
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Kk
Priority date: 1974-11-09
Filing date: 1979-01-31
Publication date: 1982-10-25
Also published as: ZA757047B; SE7900842L; JPS573680B2; JPS5156429A

Description

(II) ..kännetecknat därav; att XK-62-2 med formeln f 'NHCH3 (I) nomä NH on I Cﬂà bringas att reagera med ett oxidationsmedel, varefter nämnda förening separeras från erhållen reaktíonsblandning. _ Utgångsföreningen i förfarandet enligt föreliggande uppfinning, dvs-föreningen I, är känd som antíbiotikum XK-62-2 som beskrives i den brittiska patentskriften 1 399 578. Förening I uppvisar två metylaminogrupper i 6'- resp 3"-ställning. Förening I utsättes enligt uppfinningen för reaktion med.ett oxidationsmedel under 10 15 7900842-'1 bildning av föreningen II. (II) ..characterized thereof; that XK-62-2 of the formula f 'NHCH 3 (I) nomo NH on I C ﬂ à is reacted with an oxidizing agent, after which said compound is separated from the resulting reaction mixture. The starting compound of the process of the present invention, i.e. compound I, is known as antibiotic XK-62-2 described in British Patent Specification 1 399 578. Compound I has two methylamino groups in the 6 'and 3 "positions, respectively. according to the invention for reaction with an oxidizing agent to form compound II.

Förening II, 3"-N-demetyl-XK-62-2 är en hittills okänd förening med liknande antibiotisk aktivitet som, men med mindre toxicitet än, XK-62-2 och är dänﬁw värdefull som antibiotikum. 3"-aminogruppen i förening II kan metyleras med en radioaktiv metylgrupp 1äCH3 under bildning av radioaktivt XK-62-2, som kan användas för undersökning av fördelningen av XK-62-2 i levande organismer och den metaboliska vandringen av XK-62-2, Vid demetylering av förening I till föreningen II användes företrädesvis milda reaktionsbetingelser eftersom 3“-N-metyl- gruppen har en tendens att avspjälkas lättare än 6'-N-metylgruppen.Compound II, 3 "-N-demethyl-XK-62-2 is a hitherto unknown compound with similar antibiotic activity as, but with less toxicity than, XK-62-2 and is then valuable as an antibiotic. The 3" amino group in compound II can be methylated with a radioactive methyl group 1aCH3 to form radioactive XK-62-2, which can be used to investigate the distribution of XK-62-2 in living organisms and the metabolic migration of XK-62-2. In demethylation of compound I to compound II, mild reaction conditions are preferably used because the 3 '-N-methyl group tends to be more readily cleaved than the 6'-N-methyl group.

När föreningen I utsättas för demetyleringsreaktionen enligt föreliggande uppfinning uppträder emellertid också bireaktioner.However, when compound I is subjected to the demethylation reaction of the present invention, side reactions also occur.

Det totala reaktionsförloppet kan belysas med följande reaktions- schema: ' ï$UÜ842-1 Förening I (XX-62-2) .x Iﬂeaktion I-, Reaktíon II _Föreníng IIII I¶ (6'-N-demety1~ 2A xx-62-2, gentamicin-Cla) NH2 Fërening II (3"-N-demetyl- _ IXK-62-2) 0 _ CH no _ 3_ " m: 03 CH3 _ Förening IV (6'-N, 3"-N-didemetyl- XK-62-2) _ 10 15 20 25 BO 35 H0 79 008 42-1 f~- a- -,i. 5 Den erhållna reaktionsblandningen innehåller vanligtvis förening II, III och IV även om förhållandet mellan föreningarna är varia- belt beroende på reaktionsbetingelserna. När reaktionsbetíngel- serna är milda är reaktionen I övervägande och därför är då ut- bytet av föreningen II tämligen högt. När reaktionsbetingelserna göres förhållandevis svårare ökas utbytet av förening III. Emel- lertid blir utbytet av förening IV högt och utbytet av förening III ganska lågt när mycket svåra reaktionsbetingelser användes.The overall course of the reaction can be illustrated by the following reaction scheme: Compound I (XX-62-2) .x I ﬂ Reaction I-, Reaction II _ Compound IIII I¶ (6'-N-demethyl1 ~ 2A xx-62 -2, gentamicin-Cla) NH2 Compound II (3 "-N-demethyl- _ IXK-62-2) 0 - CH no _ 3_" m: 03 CH3 _ Compound IV (6'-N, 3 "-N- didemethyl- XK-62-2) _ 10 15 20 25 BO 35 H0 79 008 42-1 f ~ - a- -, i. The resulting reaction mixture usually contains compounds II, III and IV although the ratio of the compounds is variable. When the reaction conditions are mild, the reaction I is predominant and therefore the yield of compound II is rather high.When the reaction conditions are made relatively more difficult, the yield of compound III is increased.However, the yield of compound IV is high and the yield of compound III quite low when very severe reaction conditions were used.

Föreningen III (gentamicin-Ia) beskrives i den amerikanska pa- tentskriften 3 091 572.Compound III (gentamicin-Ia) is described in U.S. Patent No. 3,091,572.

Allmänt genomföres demetyleringen enligt föreliggande uppfin- ning genom omsättning av utgângsföreningen med ett oxidatíonsmedel i ett inaktivt medium. En sådan reaktionsprocedur är konventionell inom denna teknik.In general, the demethylation of the present invention is carried out by reacting the starting compound with an oxidizing agent in an inert medium. Such a reaction procedure is conventional in the art.

De oxidationsmedel som användes vid förfarandet enligt före- liggande uppfinning innefattar de konventionella oxidationsmedel och L När- de föreningar som har en potentiell benägenhet till oxidation. mare bestämt kan tungmetallsalter, peroxider, halogener, halogensy- ror, kväveoxider, molekylärt syre, osv användas. Exempelvis kan de konventionella oxidationsmedlen användas, såsom permanganat, manga- nat, mangandioxid, kromsyraanydrid, bikromat, kromat, alkylkromat, -kromylklorid, selendioxid, kobolt-(III)-salter, cerium-(IV)-salter, kalíumhexacyanoferrat(III), koppar(II)oXid, blyoxid, kvicksilver- (II)oxid, blandningar av väteperoxid med ett eller flera reagens ut- valdablandjårn(II)-salter, järn(III)-salter, selendioxid, osmium- tetroxid, vanadater, volframsyra, kromsyra, blytetraacetat, klor, _ brom, jod, hypoklorater, klorater, hypobromater, bromater, perjoda- ter, dikväveoxid, kväveoxid, kvävedioxid, luft, osv. När moleky- lärt syre användes användes företrädesvis ädelmetaller, såsom pla- tina, nickel, palladium, rodíum, rutenium, rhenium, osv, som kata- lysator.The oxidizing agents used in the process of the present invention include the conventional oxidizing agents and L Nutrients which have a potential propensity to oxidize. more specifically, heavy metal salts, peroxides, halogens, halogen acids, nitrogen oxides, molecular oxygen, etc. can be used. For example, the conventional oxidizing agents can be used, such as permanganate, manganate, manganese dioxide, chromic anhydride, bichromate, chromate, alkyl chromate, chromyl chloride, selenium dioxide, cobalt (III) salts, cerium (IV) salts, potassium hexacyanoferrate (III), copper (II) oxide, lead oxide, mercury (II) oxide, mixtures of hydrogen peroxide with one or more reagents selected mixed iron (II) salts, iron (III) salts, selenium dioxide, osmium tetroxide, vanadates, tungstic acid, chromic acid , lead tetraacetate, chlorine, bromine, iodine, hypochlorates, chlorates, hypobromates, bromates, periodates, nitrous oxide, nitric oxide, nitrogen dioxide, air, etc. When molecular oxygen is used, precious metals such as platinum, nickel, palladium, rhodium, ruthenium, rhenium, etc. are preferably used as catalysts.

Fastän vart och ett av nämnda oxidationsmedel kan användas för genomförande av förfarandet enligt föreliggande uppfinning användes företrädesvis klor, brom, jod, kaliumhexacyanoferrat(III), permanga-1 nat och luft, och i synnerhet föredrages jod. des 0,5-15,0 mol av oxidationsmedlet per mol av utgångsföreningen.Although any of said oxidizing agents can be used to carry out the process of the present invention, chlorine, bromine, iodine, potassium hexacyanoferrate (III), permanganate and air are preferably used, and iodine is particularly preferred. 0.5-15.0 moles of the oxidizing agent per mole of the starting compound.

Om emellertid molekylärt syre eller luft användes som oxidations- medel blåses det genom reaktionsmediet under reaktionen i form av fina bubblor.However, if molecular oxygen or air is used as the oxidizing agent, it is blown through the reaction medium during the reaction in the form of fine bubbles.

Såsom lösningsmedel vid förfarandet enligt föreliggande upp- finning kan lösningsmedel användas som löser reaktanterna och ej 1 Konventionellt använ-H ez9ooa42~1i pe fö _10 _15 20, 25 30 35 H0 väsentlig grad reagerar med dessa. Exempelvis kan man använda vat-i sten enbart eller i blandnin med ett eller flera lösnin smedel som E 8 iutgöres av metanol, etanol, tetrahydrofuran, dimetylacetamid, dimet- t ylformamid, dioxan eller etylenglykoldimetyleter. se __ _ _ Utgângsföreningen löses i lösningsmedlet i en koncentration av_H,5-50 mmol. i_ i ewﬁeaktionen vid förfarandet enligt föreliggande uppfinning ge- nomföras i ett medium med ett pH Ü-12 beroende på typen av oxida- e Inställningen av pH uppnås genom tillsats Sådana syror eller baser skall utväl- itionsmedel_somaanvändes. av en lämplig syra eller bas. _jas bland sådana som ej nedbryter vare sig utgångsföreningarna el- ler de demetylerade produkterna och som ej heller nedsätter utan helst främjar oxidationsmedlets aktivitet. Sådana syror exemplifie- ras av oorganiska syror, såsom saltsyra och svavelsyra, och organis- ka_syror¿ såsom ättiksyra och myrsyra. Sådana baser exemplifieras av alkalimetallhydroxider, Jordalkalimetallhydroxider, alkalimetall- i karbonater,pjordalkalimetallkarbonater, alkalimetallalkoxider och. alkalimetall- och jordalkalimetallsalter av karboxylsyror.As solvents in the process of the present invention, solvents can be used which dissolve the reactants and do not substantially react with them. For example, aqueous rock alone or in admixture with one or more solvents such as E 8 may be methanol, ethanol, tetrahydrofuran, dimethylacetamide, dimethylformamide, dioxane or ethylene glycol dimethyl ether. see __ _ _ The starting compound is dissolved in the solvent in a concentration of_H, 5-50 mmol. The reaction in the process of the present invention is carried out in a medium having a pH Ü-12 depending on the type of oxide. The adjustment of the pH is achieved by the addition of such acids or bases. of a suitable acid or base. is among those which do not degrade either the starting compounds or the demethylated products and which do not degrade but rather promote the activity of the oxidizing agent. Such acids are exemplified by inorganic acids such as hydrochloric acid and sulfuric acid, and organic acids such as acetic acid and formic acid. Such bases are exemplified by alkali metal hydroxides, alkaline earth metal hydroxides, alkali metal in carbonates, alkaline earth metal carbonates, alkali metal alkoxides and. alkali metal and alkaline earth metal salts of carboxylic acids.

'Inställningen av pH kan genomföras antingen före begynnande reaktion eller under reaktionen.The pH adjustment can be performed either before the initial reaction or during the reaction.

'Reaktionen-i förfarandet enligt föreliggande uppfinning genom- ~ :tree via en temperatur ev från -ao till 1oo°c, företrädesvis o-7o°c, i 0,5-50_timmar. i I _ Z -De praktiska reaktionsbetingelserna skall utväljas med hänsyn tagen till den önskade produktens art, oxidationsmedlets art, osv, sålunda att högsta utbyte av önskvärd produkt uppnås och en icke_' önskvärd reaktion av-andra funktionella grupper undvikas, såsom hydr- oxigrupper och aminogrupper, i utgångsföreningen. Det är uppenbart att sådana reaktionsbetingelser kan utväljas av fackmannen.The reaction in the process of the present invention is carried out via a temperature possibly from -ao to 100 ° C, preferably 0-70 ° C, for 0.5-50 hours. The practical reaction conditions must be selected taking into account the nature of the desired product, the nature of the oxidizing agent, etc., so that the highest yield of the desired product is achieved and an undesirable reaction of other functional groups is avoided, such as hydroxy groups and amino groups, in the starting compound. It is obvious that such reaction conditions can be selected by the person skilled in the art.

Om exempelvis jod väljas såsom oxídationsmedel som är mest 'gynnsamt för reaktionen i förfarandet enligt föreliggande uppfin- ning rekommenderas för reaktion I mängder av 0,7-19,0 mol, företrä- desvis 2,0-6,0 mol,_jod per mol XK-62-2; en reaktionstemperatur av mellan -10 och 90°C¿ företrädesvis H0-60°C; en reaktionstid av 1-24 etimmarg företrädesvis 2-15 timmar. Vidare skall 0,5~6,0 mol, före- trädesvis 2,0-ü,O mol av en stark bas tillsättes eller 5,0-25,0 mol, företrädesvis 7,0-15,0 mol, av en svag bas med hänsyn till pH-in-" ställningen. g ' av Efter fullbordad reaktion genomföras utvinningen av produkten på konventionellt sätt. Exempelvis neutraliseras reaktionsblandningen 7900842~1 7 och koncentreras under reducerat tryck. Koncentratet föres genom en kolonn av katjonbytarharts, på sådant sätt att den icke reage- rade utgângsföreningen och reaktionsprodukterna adsorberas därpå.For example, if iodine is selected as the oxidizing agent most favorable to the reaction in the process of the present invention, it is recommended for reaction in amounts of 0.7-19.0 moles, preferably 2.0-6.0 moles, of iodine per mole. XK-62-2; a reaction temperature of between -10 and 90 ° C, preferably H0-60 ° C; a reaction time of 1-24 hour margin preferably 2-15 hours. Furthermore, 0.5 ~ 6.0 moles, preferably 2.0 -10.0 moles of a strong base should be added or 5.0-25.0 moles, preferably 7.0-15.0 moles, of a weak base. After completion of the reaction, the recovery of the product is carried out in a conventional manner. For example, the reaction mixture is neutralized and concentrated under reduced pressure. The concentrate is passed through a column of cation exchange resin, in such a way that the unreacted starting compound and the reaction products are then adsorbed.

Kölonnen tvättas med vatten och utsättas för en eluering med 2,0 N ut- 5 spådd ammoniak. Eluatet koncentreras och utsättes för konventionel- 'la isolerings- och reningsförfarenden, såsom kolonnkromatografi och tyngdlagskromatografi under användning av jonbytarhartser, silikagel, aluminiumoxid, cellulosa, osv.The column is washed with water and subjected to an elution with 2.0 N of diluted ammonia. The eluate is concentrated and subjected to conventional isolation and purification procedures, such as column chromatography and gravity chromatography using ion exchange resins, silica gel, alumina, cellulose, etc.

Följande tabell I visar den akuta toxiciteten (LD50) av före- 10 ningarna I, II, III och IV för möss.The following Table I shows the acute toxicity (LD50) of compounds I, II, III and IV to mice.

I Tabell I LD mg/ke 5° Förening I 93 Förening II 200 Förening III 88 Förening IV 138 Följande tabell II visar föreningarnas I, II, III och IV antibakteriella spektrum gentemot olika gramposítiva och gramnegaf tive bakterier, uttryckt genom minimal inhiberande koncentration (320) bestämd genom dubbelutspädningsmetoden vid pH 8,0.I Table I LD mg / ke 5 ° Compound I 93 Compound II 200 Compound III 88 Compound IV 138 The following Table II shows the antibacterial spectrum of compounds I, II, III and IV against various gram-positive and gram-negative bacteria, expressed by minimal inhibitory concentration (320 ) determined by the double dilution method at pH 8.0.

Tabell II , ' Minimal inhiberande koncentration (MIC /ug/ml/ stammar Förening I II III IV Pseudomonas aeruginosa BMH l 1,0U 2,08 0,52 0,26 stapnylccoccus aureus ATCC 6538 P 0,008 0,016 <0,oou <0,o0u Eacillus subtilis No. 10707 <0,00ü 0,008 <0,00U <0,00U Proteus vulgaris ATCC 6897 _ 0,065 0,13 0,033 0,033 Shigella sonnei 0,13 0,13 0,065 0,055 Salmonella typhosa ATCC 9992 0,033 0,065 0,016 0,033 Klebsiella pneumoniae ATCC 10031 0,016 0,033 0,008 <0,00H Escnericnia coli ATCC 25 0,065 0,13 0,033 0,016 Eschericnia coli 3,34 2,03 “»17 “,l Escherichia coli KY 3U8 l,0M 2,08 1,00 1,0U 15 '* tebeii 11 bildar zscnericnia C011 Ky 8327 och Ky 83u8 ade- nyltransferas respektive acetyltransferas intracellulërt. Den först- nämnda bakteríen inaktiverer kanamyciner och gentaniciner genom ade- nylering och den sistnämnda inaktiverar gentamiciner genom acetyle- ring. i 10”. 15 20 25 36 35 HO l "Amberlite - med 600 ml vatten, föres 2,0 N vattenhaltig ammoniak genom kolonnen. o7eoos42-1? - a _ s De med föreliggande förfarande framställda produkterna kan om 'iså önskas överföras till farmaceutiskt godtagbara icke-toxiska syra- additionssalter (aminsalter). Sådana icke-toxiska salter innefattar salter med oorganiska syror, såsom saltsyra, bromvätesyra, jodväte- syra, svavelsyra, fosforsyra, kolsyra, osv, och organiska syror, så- som ättiksyra, fumarsyra, äppelsyra, citronsyra, mandelsyra, vin- syra, askorbinsyra, ßsv. Framställning av syraadditionssalterna ut- i gör konventionell teknik.Table II, Minimum Inhibitory Concentration (MIC / ug / ml / strains Compound I II III IV Pseudomonas aeruginosa BMH 1 1.0U 2.08 0.52 0.26 staphylococcus aureus ATCC 6538 P 0.008 0.016 <0, oou <0, o0u Eacillus subtilis No. 10707 <0.00ü 0.008 <0.00U <0.00U Proteus vulgaris ATCC 6897 _ 0.065 0.13 0.033 0.033 Shigella sonnei 0.13 0.13 0.065 0.055 Salmonella typhosa ATCC 9992 0.033 0.065 0.016 0.033 Klebsiella pneumoniae ATCC 10031 0.016 0.033 0.008 <0.00H Escnericnia coli ATCC 25 0.065 0.13 0.033 0.016 Eschericnia coli 3.34 2.03 "» 17 ", l Escherichia coli KY 3U8 l, 0M 2.08 1.00 1.0U 15 '* tebeii 11 forms zscnericnia C011 Ky 8327 and Ky 83u8 adenyltransferase and acetyltransferase, respectively, intracellularly. The former bacterium inactivates kanamycins and gentanicins by adenylation and the latter inactivates gentamicins by acetylation. HO l "Amberlite - with 600 ml of water, pass 2,0 N aqueous ammonia through the column. O7eoos42-1? - a _ s Those with before The products prepared by the immediate process can, if desired, be converted into pharmaceutically acceptable non-toxic acid addition salts (amine salts). Such non-toxic salts include salts with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, carbonic acid, etc., and organic acids such as acetic acid, fumaric acid, malic acid, citric acid, mandelic acid, tartaric acid, ascorbic acid , ßsv. Preparation of the acid addition salts is a conventional technique.

Förfarandet enligt föreliggande uppfinning belyses närmare i .följande exempel. t Exemnel 1. (2,9 g (6,3 mmol) XK-62-2 och 9,ü g (69,l mmol) natrium- acetat-trihydrat löses i IHS ml vattenhaltig 50-procentig dimetyl- formamid. Till lösningen.sättes 7,3 3 (28,8 mmol) iod, och bland- ningen får reagera vid 55°C under omröring i 15 timmar. Därefter föres reaktionsblandningen genom en kolonn packad med 150 ml IRC-SO" (H+-form). Efter det att kolonnen har tvättats 250-ml fraktioner tillvaratages som är positiva vid färgreaktion_ med ninhydrin och dessa koncentreras under reducerat tryck varvid man erhåller 2,60 g av en svagt gulaktig återstod. DEU på detta sätt er.ållna återstoden utsättas för kolonnkrcmatografi under användning av 130 g kiselgel och ett lösningsmedel bestående av en blandning av isopropanol, kloroform och koncentrerad vattenhaltig ammoniak i vo-a lymförhållandet ü:ü:l." Eluatet tillvaratages i fraktioner på 13 ml.The process of the present invention is further illustrated in the following examples. Example 1. (2.9 g (6.3 mmol) of XK-62-2 and 9 .mu.g (69.1 mmol) of sodium acetate trihydrate are dissolved in 1HS ml of aqueous 50% dimethylformamide. 7.3 3 (28.8 mmol) of iodine are added, and the mixture is allowed to react at 55 ° C with stirring for 15 hours. Then the reaction mixture is passed through a column packed with 150 ml of IRC-SO 4 (H + form). After the column has been washed, 250 ml of fractions which are positive in the color reaction with ninhydrin are recovered and these are concentrated under reduced pressure to give 2.60 g of a pale yellowish residue, the residue thus obtained is subjected to column chromatography using of 130 g of silica gel and a solvent consisting of a mixture of isopropanol, chloroform and concentrated aqueous ammonia in the volume ratio ü: ü: l. "The eluate is collected in 13 ml fractions.

Fraktionerna nr 55-68 kombineras och koncentreras till torrhet un- der reducerat tryck. Såsom resultat erhålles H50 mg icke reagerad XK-62-2.' Fraktionerna nr 75-85 kombineras och koncentreras till dtcrrhet under reducerat tryck, varvid man uppnår 70_mg 6'-N-demetyl- -xx-6242 (förening ;II,~gen:amicin-ola). smälcpunxc 113-117°c.Fractions Nos. 55-68 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure. As a result, H50 mg of unreacted XK-62-2 is obtained. Fractions Nos. 75-85 are combined and concentrated to dryness under reduced pressure to give 70 mg of 6'-N-demethyl--xx-6242 (compound; II, gene: amicin-ola). melting point 113-117 ° C.

Specifik vridning: !47šu = +l7l¿l° (c = 0,98; vatten).Specific rotation:! 47šu = + l7l¿l ° (c = 0.98; water).

Infrarött absorptionsspektrum (Kšr, cm'l):r3700-3000, 29ü0,-1630, 1575. lhßo, 1380, lšho, 1286, 11u6, 1108, 1052, 1021, 957,82o.Infrared absorption spectrum (Kšr, cm'l): r3700-3000, 29ü0, -1630, 1575. lhßo, 1380, lšho, 1286, 11u6, 1108, 1052, 1021, 957,82o.

E-Iagnetislå kärnresonansspektrum (i 020): 5 (i ppm från DSS): 12,0 (BH, S), 2,53 (BH, S), 5,13 (IH, d, J=U,0 Hz),-5,23 (le, a, J=u,o Hz). 0 a " - Eiementaranalysz Beräknat för c19a39N5o7.n2o= c h8,81 H 8,8h N 14;9s Funnet t z 39,35 W 3,55 .1",77 t Frakticnerna nr 93-135 koncentreras under reducerat tryck, varvid man erhåller 1,38 g BÛ-N-demetyl-KK-62-2 (förening II). 10 15 20 25 30 35 H0 7900842~1 sme1cpunkt 105-115°c.E-Magnetic nuclear resonance spectrum (in 020): δ (in ppm from DSS): 12.0 (BH, S), 2.53 (BH, S), 5.13 (1H, d, J = U, 0 Hz) , -5.23 (le, a, J = u, o Hz). 0 a "- Elemental analysis Calculated for c19a39N5o7.n2o = c h8.81 H 8.8h N 14; 9s Found tz 39.35 W 3.55 .1", 77 t Fractions no. 93-135 are concentrated under reduced pressure, gives 1.38 g of BÛ-N-demethyl-KK-62-2 (compound II). 10 15 20 25 30 35 H0 7900842 ~ 1 mp 105-115 ° c.

Specifik vridning: áklša = +1ü8,5° (c = 0,097, vatten).Specific rotation: áklša = + 1ü8.5 ° (c = 0.097, water).

Infrarött absorptionsspektrum (KBr, cm_l): 3800-3000, QQHO, 16U0, 1570, 1365, 1379, 1350, 1284, l1ﬂ2, 1110, 1050, 1020, 955, 865, 810 (fig. 1).Infrared absorption spectrum (KBr, cm -1): 3800-3000, QQHO, 16U0, 1570, 1365, 1379, 1350, 1284, l1 l2, 1110, 1050, 1020, 955, 865, 810 (Fig. 1).

Magnetiskt kärnresonansspektrum (i metanol -du) 8(i ppm från TäS): 1,16 (za, S), 2,u3 (sn, S), 5,06 (ln, e, J=3,9 ne), 5,2o (IH, d, j=},8 Hz) (fig. 2).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum (in methanol -du) δ (in ppm from TäS): 1.16 (za, S), 2.03 (sn, S), 5.06 (ln, e, J = 3.9 ne), 5.2o (1H, d, j =}, 8 Hz) (Fig. 2).

Elementaranalys: Beräknat för clguærzsorﬁzo: c 118,81 H 8,84 N 114,98 Funnet : 09,36 8,65 lU,77 Fraktionerna nr 151-179 koncentreras till torrhet under redu- cerat tryck, varvid man erhåller 310 mg 6'-N-3"-N-didemetyl-XK-62-2 smälcpunkc 130-1uo°c, Specifik vridning: låíâg = +97,0° (c = 0,10, vatten).Elemental analysis: Calculated for crude acid ﬁ zo: c 118.81 H 8.84 N 114.98 Found: 09.36 8.65 IU, 77 Fractions Nos. 151-179 are concentrated to dryness under reduced pressure to give 310 mg of 6 '. -N-3 "-N-didemethyl-XK-62-2 melting point 130-1uo ° c, Specific rotation: low = + 97.0 ° (c = 0.10, water).

Infrarött absorptionsspektrum (KBr, cm'1): 3700-3000, 2950, 1630, 1570, 1n8o,1380¿ß33.129ﬁ.11“9, 1113, 1052, 1025, 958 (rig. 3).Infrared absorption spectrum (KBr, cm'1): 3700-3000, 2950, 1630, 1570, 1n8o, 1380¿ß33.129 ﬁ.11 „9, 1113, 1052, 1025, 958 (rig. 3).

Magnetiskt kärnresonansspektrun (i D20) 6(i ppm från DSS):i _ 1,18 (BH, S), 5,12 (IH, d, J=U,0 Hz), 5,29 (IH, d, J=5,9 Hz) (fig. Ä), Elenentaranalys: Beräknat för C18H37N507.H2O: C 37,67 H 8,67 N l5,UU Funnet : 47,54 8,39 15,23 Exemnel 2. H63 mg (1,0 mmol) XK-62-2 och 160 mg (U,0 mmol) natrium- hydroxid löses i 25 ml vattennaltig 50-procentig dimetylacetamid.Nuclear Magnetic Resonance Spectrum (in D 2 O) δ (in ppm from DSS): δ 1.18 (BH, S), 5.12 (1H, d, J = U, 0 Hz), 5.29 (1H, d, J = 5.9 Hz) (Fig. Ä), Elemental analysis: Calculated for C 18 H 37 N 5 O 7 .H 2 O: C 37.67 H 8.67 N 15, UU Found: 47.54 8.39 15.23 Example 2. H63 mg (1 , 0 mmol) XK-62-2 and 160 mg (0, 0 mmol) of sodium hydroxide are dissolved in 25 ml of aqueous 50% dimethylacetamide.

Till läsningen sättes 659 ng (2,0 mmol) kaliumhexacyanoferrat-(III), och blandningen får reagera vid 65°C under omröring i 15 timmar.To the reading is added 659 ng (2.0 mmol) of potassium hexacyanoferrate (III), and the mixture is allowed to react at 65 ° C with stirring for 15 hours.

Därpå fëres reaktionsblandningen genom en kolonn packad med 30 ml "ànberlite ®)IRC-50" (H*-form). Efter det att kolonnen har tvättats med 150 ml vatten, föres 2,0 N vattenhaltig ammoniak genom kolonnen.The reaction mixture is then passed through a column packed with 30 ml of "anberlite ®) IRC-50" (H * form). After washing the column with 150 ml of water, 2.0 N aqueous ammonia is passed through the column.

Fraktioner på omkring 70 ml tillvaratages som är positiva med avse- ende på färgreaktion med nínhydrin och dessa koncentreras under reducerat tryck varvid 430 mg av en svagt gulaktig återstod erhål- les. Den på detta sätt erhållna återstoden utsättes för kolonnkro- matografi under användning av kiselgel på samma sätt som i exempel 1. (förening IV).Fractions of about 70 ml are recovered which are positive for color reaction with ninhydrin and these are concentrated under reduced pressure to give 430 mg of a pale yellowish residue. The residue thus obtained is subjected to column chromatography using silica gel in the same manner as in Example 1. (Compound IV).

Som resultat erhålles 98 mg icke reagerad KK-62-2 een därefter 20 mg gentamicin-Cla (förening III , 210 mg 3"-ä-denetyl~XK-62-2 (fö- rening II) och 55 mg 6'-N-5"-X-didemetyl-KK-52-2 (förening IV).As a result, 98 mg of unreacted KK-62-2 is obtained, followed by 20 mg of gentamicin-Cla (Compound III, 210 mg of 3 "-adenethyl-XK-62-2 (Compound II) and 55 mg of 6'-N -5 "-X-didemethyl-KK-52-2 (compound IV).

Gentamicin Cla (förening III) smä1:punx:= 112-116°c vid lå 20 25 30 35 7900842-1 ' 10 Speoifik vridning: {u)å7 + l70,3° (ç=O,l, vatten)i Elenentaranalys: Beräknat för C19 C=ß8,8l5; H i' N H Funnet: C=U8,90 ; H=É, ox--4 3"-N-demetyl-XK-62-2 (förening II) Smältpunkt: 105-ll6°C i I I specifik vridning: {«}š7 + 1u6¿9° Elementaranalysz ' I ' ' Beräkna: för cl9H39N5o7-H20: g C=h8,8l%;iH=8,8ü%; N:14,98% _Funnet: C=Ä8,9lå; H=8,69%; N=lH,8l% 6*-N,3"-n-diaemeuyl-xx-62-2 (förening Iv) sme1ﬁpunx:=_129-138°c g - _ gSpecifik vridning: ﬁa}š6 + 98,10 (c=0,l, vatten) Elementaranalys: V Beräkna; får ci8H37N5o7-ego: C=ë7,67$; H=8,67â; N=15,hëß Funnecz c=ß7,61%; ë=8,81â; ä=i5,61% šxemnel.3. 232 mg (D¿5 mmol) IK-62-2 löses i 15 ml vatten och till lösningen sättas 293 mg nyberett platinasvart som i förväg aktive- rats med väte. Därefter genomföres reaktionen under UB timmer me- dan temperaturen hållas vid H0-SOOC och fina luftbubblor införes kraftigt i.reaktionsblandningen. Efter fullbordad reaktion avlägs- nas platinesvart genom filtrering och filtratet konoentreras under reducerat tryck varvid en återstod av 211 mg uppnås, Den på detta sätt erhållna återstoden utsätﬁes för kolonnkromatografi under an- vändning av kiselgel på samme sätt som i exempel 1. Som resultat utvinnes 85 mg icke reagerad XK-62-2 och därefter 17 mg gentamioin- -Cïá (förening III);-82 mg 3"-N-demeﬁyl-KK-62-2 (förening II) och 2H mg 6'-N-3'-N-didemetyl-KI-62-2 (förening IV).Gentamicin Cla (Compound III) melt1: punx: = 112-116 ° C at low 2000 30 35 7900842-1 '10 Specific rotation: {u) å7 + l70.3 ° (ç = 0.1, water) in Elenentar analysis : Calculated for C19 C = ß8.85; H i 'N H Found: C = U8.90; H = É, ox - 4 3 "-N-demethyl-XK-62-2 (compound II) Melting point: 105-116 ° C in II specific rotation: {«} š7 + 1u6¿9 ° Elemental analysis' I '' Calculate: for C 19 H 39 N 5 O 7 -H 2 O: g C = h 8,81%; 1H = 8,8ü%; N: 14,98% _Found: C = Ä 8,9l; H = 8,69%; N = 1H, 81% 6 * -N, 3 "-n-diamemyl-xx-62-2 (compound Iv) sme1 ﬁ punx: = _ 129-138 ° cg - _ gSpecific rotation: ﬁ a} š6 + 98.10 (c = 0.1, water) Elemental analysis : V Calculate; gets ci8H37N5o7-ego: C = ë7,67 $; H = 8.67â; N = 15, Funnecz c = ß7.61%; ë = 8.81â; ä = i5.61% šxemnel.3. 232 mg (D¿5 mmol) of IK-62-2 are dissolved in 15 ml of water and 293 mg of freshly prepared platinum black, previously activated with hydrogen, are added to the solution. Thereafter, the reaction is carried out under UB timber while the temperature is maintained at H 2 SO 4 and fine air bubbles are introduced strongly into the reaction mixture. After completion of the reaction, platinum black is removed by filtration and the filtrate is concentrated under reduced pressure to give a residue of 211 mg. The residue thus obtained is subjected to column chromatography using silica gel in the same manner as in Example 1. As a result, 85 mg unreacted XK-62-2 and then 17 mg gentamioine -C -N-didemethyl-KI-62-2 (compound IV).

Gentamicin Cla (förening III) smä1:punkt= 115-119°c .Gentamicin Cla (compound III) mp: point = 115-119 ° c.

Specifik vridning: {a}š6 + l70,0° (c = 0J,vattaü "Élementaranalys;.Specific rotation: {a} š6 + l70.0 ° (c = 0J, vattaü "Elemental analysis ;.

Beräknat för C193 _ G=U8,8l%; H=8 Funnet: C=Ä8,93; 39N5OT-H2O:_ ,s4;- n=1a,9sz H I =8,8l%; N=lü,69% 10 15 20 25 30 35 ~-- 7900842~1 3”-N-demetyl-XK-62-2 (förening II) smä1tpunk:= 107-118°c Specifik vridning:{a}š7 + 1h7,3° (c=0,l, vatten) Elementaranalys: Beräknat för Cl9H39N5O7-H20: C=h8,8l%; E=8,8ü%; N=14,98% Funnet: C=H9,01%; H=8,9l%; N=lH,73% 6'-N,3"-N-didemetyl-XX-62-2 (förening IV) smä1cpunkt= 131-1uo°c Specifik vridning:{u}š6 + 96,9° (c=0,l, vatten) Elementaranalys: Beräknat för Cl8H37N507°H20: c=H7,67%; H=8,67ß; N=15,uu% Funnet: C=U7,5l%; H=8,92%; N=l5,73% Exemnel U. 465 mg (1,0 mmol) XK-62-2 löses i 25 ml vatten, och till lösningen sättes 929 mg (5,9 mmol) kaliumpermanganat. Bland- ningen får reagera vid rumstemperatur i 17 timmar. Därefter föres reaktíonsblandningen genom en kolonn packad med 30 ml "Amberlite IRC-50" (E+). Efter det att kolonnen har tvåttats med 120 ml vat- ten föres 2,0 N vattenhaltig ammoniak genom kolonnen. Reaktioner på omkring 80 ml utvinnes aom är positiva vid färgreaktion med nin- hydrin och dessa koncentreras under reducerat tryck varvid H26 mg av en svagt gulaktig återstod erhålles. Den på detta sätt erhållna återstoden utsättas för kolonnkromatografi under användning av ki- selgel på samma sätt som i exempel 1. Som resultat erhålles 110 mg icke reagerad XK-62-2 och därefter erhålles 15 mg gentamicin-Cla (förening III), 135 mg.3"-N-demetyl-IK-62-2 (förening II) och 70 mg 6'-N-3"-N-didemetyl-XK-62-2 (förening IV).Calculated for C193 _ G = U8.81%; H = 8 Found: C = Ä8.93; 39N5OT-H2O: _, s4; - n = 1a, 9sz H I = 8.8l%; N = lü, 69% 10 15 20 25 30 35 ~ - 7900842 ~ 1 3 ”-N-demethyl-XK-62-2 (compound II) melting point: = 107-118 ° c Specific rotation: {a} š7 + 1h7.3 ° (c = 0.1, water) Elemental analysis: Calculated for C 19 H 39 N 5 O 7 -H 2 O: C = h 8.8%; E = 8.8ü%; N = 14.98% Found: C = H9.01%; H = 8.91%; N = 1H, 73% 6'-N, 3 "-N-didemethyl-XX-62-2 (compound IV) mp = 131-1uo ° c Specific rotation: {u} š6 + 96.9 ° (c = 0 , 11, water) Elemental analysis: Calculated for C 18 H 37 N 5 O 7 ° H 2 O: c = H7.67%; H = 8.67ß; N = 15, uu% Found: C = U7.51%; H = 8.92%; N = l5.73% Example U. Dissolve 465 mg (1.0 mmol) of XK-62-2 in 25 ml of water, and add to the solution 929 mg (5.9 mmol) of potassium permanganate, the mixture is allowed to react at room temperature for 17 hours. The reaction mixture is then passed through a column packed with 30 ml of Amberlite IRC-50 (E +). After washing the column with 120 ml of water, 2.0 N aqueous ammonia is passed through the column. Reactions of about 80 ml are recovered by are positive in the color reaction with ninhydrin and these are concentrated under reduced pressure to give H26 mg of a pale yellowish residue The residue thus obtained is subjected to column chromatography using silica gel in the same manner as in Example 1. 110 mg unreacted XK-62-2 and then obtained 15 mg gentamicin-Cla (Compound III), 135 mg.3 "-N-demethyl-IK-62-2 (Compound II) and 70 mg 6'-N-3" -N-didemethyl-XK-62-2 ( compound IV).

Gentamicin-Ola (förening III) smä1cpunxt= 111-116°c Specifik vridning: {a}â5_+ 173,l° (c=0,l, vatten) Elementaranalys: Beräknat för C H 93 O -H 0: 19 3 5 7 2 C=Ä8,8l%; E=8,8U%; N=lU,93% Funnet: C=U5,39%; H=8,43%; N=l5,0l% 3"-N-demetyl-xx-62-2 (förening II) smä1tpunxc= 105-117°c Specifík vridning: (a}âu + 1ü7,h° (c=0,096, vatten) _?9ÛÛ8§zf1HAg_ i Q _"¿u'__! Elementaranalys: g Beräknat för C193 9'507-H20: C=U8,8l%; H=8,8ﬂ%; N= 0,98% l Fuçnet= c=48,73%; H=8,59z; N=15,3oz 5f 6'-N,3"-diâemetyl-XK-62-2 (förening IV) n smä1rpunkt= 131-1u39c g Spedifik vridningzíclâ + 95,9° (c=O,l, vatten) Elementananalys: ' g açgàkngc för cl8H37N5o7-H20: 10 c=u7,67%; n=8,67z; n=15,qug \ ____¿ ___ Funnet: C=H7,8l%; H=8,9l%; N=l5¿23% _ _ Exempel 5. 4,67 g (10,0 mmcl) 3"-N-demetyl-XK-62-2 (förening II) 7 löses i 20 ml vakten. Till lösningen sättas 1,2 g (20,0 mmol) is- ättika. Efter 50 minuter sättes kall etanol till lösningen tills 15 utfällningen_är fullständíg{ Genom isolering av den erhållna vita i_fällningen genom filtrering erhålles diacetatet av 3"-N-demetyl- XK-62-2.Gentamicin-Ola (compound III) melting point = 111-116 ° C Specific rotation: {a} â5_ + 173.1 ° (c = 0.1, water) Elemental analysis: Calculated for CH 93 O -H 0: 19 3 5 7 2 C = δ 8.8%; E = 8.8U%; N = IU, 93% Found: C = U5.39%; H = 8.43%; N = 15.01% 3 "-N-demethyl-xx-62-2 (compound II) melting point = 105-117 ° c Specific rotation: (a} âu + 1ü7, h ° (c = 0.096, water) _? 9ÛÛ8§zf1HAg_ i Q _ "¿u '__! Elemental analysis: g Calculated for C193 9'507-H20: C = U8,8l%; H = 8,8 ﬂ%; N = 0,98% l Fuçnet = c = 48 , 73%; H = 8,59z; N = 15,3oz 5f 6'-N, 3 "-diamethyl-XK-62-2 (compound IV) n melting point = 131-1u39c g Specific rotation cycle + 95,9 ° ( c = 0.1, water) Elemental analysis: 'g açgàkngc for cl8H37N5o7-H20: 10 c = u7,67%; n = 8,67z; n = 15, qug \ ____ ¿___ Found: C = H7,8l%; H = 8.91%; N = 1.53% - Example 5. 4.67 g (10.0 mmol) of 3 "-N-demethyl-XK-62-2 (Compound II) is dissolved in 20 ml of the guard To the solution is added 1.2 g (20.0 mmol) of glacial acetic acid. After 50 minutes, cold ethanol is added to the solution until the precipitate is complete. By isolating the white precipitate obtained by filtration, the diacetate of 3 "-N-demethyl is obtained. XK-62-2.

,Elementeránalys: ., Elemental Analysis:.

Beräknat för c23Hu7N5o1¿ zon _ c=u8,49%; H=8,32%; N=12,29% Funnet:"C=Ä8,56%; H=8,35%; N=12,27%Calculated for c23Hu7N5o1¿ zone _ c = u8.49%; H = 8.32%; N = 12.29% Found: "C = Ä 8.56%; H = 8.35%; N = 12.27%

Claims

1. 79008 42-1 m. 13. Claim Analogous process for the preparation of 5 "-N-demethyl-XK-52-Z of the formula T-NHCH- J \ / 0 \ \ 'H w /, f NH 2 \ 0 ““ *> L / Ho2§, / “/ 7š \; // NH? (11) O § ^. Cu xo -, /“ / \\\ T '3 V os ¶ unz k ä nnetecknat därav, att XR 62-2 of the formula NHCH5 X- O \. Ïïz Nšz \ 0, / jr \ p /// \ _ HO 3 //, / ï; ~ LfCH3 O (I) is reacted with an oxidizing agent, after which said compound is separated from the eyhàllen reaction mixture.FURNISHED PUBLICATIONS: