SE411563B

SE411563B - PROCEDURE FOR PREPARING CELLULOSAMASSA BY TREATMENT WITH MICRO-ORGANISMS

Info

Publication number: SE411563B
Application number: SE7714687A
Authority: SE
Inventors: K-E Eriksson; T Nilsson; P Ander; B Goodell; B Henningsson
Original assignee: Svenska Traeforskningsinst; Skogshogskolan
Priority date: 1977-12-22
Filing date: 1977-12-22
Publication date: 1980-01-14
Also published as: SE7714687L

Description

20 25 30 35 U0 7714687-6 nedbryter lignin, och enzymer, som nedbryter cellulosa och andra kolhydrater i veden. Nedbrytníngen av ligninet är i och för sig önskvärd, men när dessa organismer utvecklar sig fritt i en flishög eller liknande nedbryter de även cellulosan, vilket givetvis icke är önskvärt. . 20 25 30 35 U0 7714687-6 degrades lignin, and enzymes, which degrade cellulose and other carbohydrates in the wood. The degradation of the lignin is in itself desirable, but when these organisms develop freely in a pile of chips or the like, they also degrade the cellulose, which is of course not desirable. .

Huvudsyftet med föreliggande uppfinniqär att påverka vitrötasvampar och andra mikroorganismer med förmåga att producera ligninnedbrytande organismer så, att de specifikt löser ut lignin ur ved och lämnar cellulosan och företrädesvis även andra kolhydrater väsentligen oangripna. Denna påverkan innebär att man styr mikroorganismernas nedbrytning av veden i önskad riktning genom att använda speciella tillsatser, såsom närmare beskrives i det följande. En möjlighet ligger i att tillsätta specifika cellulasinhibítorer.The main object of the present invention is to affect white rot fungi and other microorganisms capable of producing lignin-degrading organisms so that they specifically release lignin from wood and leave the cellulose and preferably also other carbohydrates substantially unaffected. This effect means that the decomposition of the wood by the microorganisms is controlled in the desired direction by using special additives, as described in more detail below. One possibility is to add specific cellulase inhibitors.

Generellt innebär uppfinningen, att cellulosa- och ligninhaltigt utgångsmaterial, såsom ved, behandlas med en organism, som har förmåga att bilda ligninnedbrytande enzymer, under sådana betingelser, att en väsentlig nedbrytning av ligninet utan väsentlig påverkan av cellulosan sker.In general, the invention means that cellulosic and lignin-containing starting materials, such as wood, are treated with an organism capable of forming lignin-degrading enzymes, under such conditions that a substantial degradation of the lignin takes place without a significant effect on the cellulose.

Uppfinningen består i att behandla utgångsmate- rialet med en organism, som producerar både ligninnedbrytande och cellulosanedbrytande enzymer, under tillsats av ämnen, som styr nedbrytningen så, att huvudsakligen ligninet nedbryts. De till- satsämnen som ifrågakommer är huvudsakligen sockerarter och kväve- föreningar samt kombinationer därav. Som exempel på sockerarter kan nämnas glykos, arabinos, cellobios, xylos, maltos (t.ex. i form av maltextrakt), mannos, sackaros, fruktos m.fl., och som exempel på kväveföreningar kan nämnas oorganíska kväveföreningar, såsom ammoniumsalter och nítrater, samt organiska kvüveföreningav, såsom aminosyror (särskilt asparagin) och kaseinhydrolysat.The invention consists in treating the starting material with an organism which produces both lignin-degrading and cellulose-degrading enzymes, with the addition of substances which control the degradation so that mainly the lignin is degraded. The additives in question are mainly sugars and nitrogen compounds and combinations thereof. Examples of sugars are glucose, arabinose, cellobiosis, xylose, maltose (eg in the form of malt extract), mannose, sucrose, fructose, etc., and as examples of nitrogen compounds may be mentioned inorganic nitrogen compounds, such as ammonium salts and nitrates. , and organic nitrogen compounds, such as amino acids (especially asparagine) and casein hydrolysates.

Organismer, som kan ifrågakomma vid genomförande av en sådan behandling, är t.ex. Sporotrichum pulverulentum (Chrysosposium lignorum), Peniophora gigantea, Trametes cinnabarina, Peniophora sanguinea, Phellinus ísabellinus, Trametes pini, "apel- sinröta", Asterodon ferruginosus, Peniophora gigantea, Pholiota mutabilis, Polyporus resinosus, Polyporus abietinus, Polyporus hirsutus, Polyporus rutilans, Polyporus versicolor, Polyporus zonatus, Pycnoporus cinnabarinus, Pycnoporus sanguineus, Stereum gausapatum, Stereum hirsutum, Phlebia radiata, och i synnerhet en nyupptäckt stam av Peniophora, vilken här betecknas stam P-B1. 10 15 20 25 30 35 H0 771lr687-6 Denna svamp tillhör Peniophoraqcremea-gruppen och kan karakteriseras på följande sätt: mycel hyalint med enstaka slöjor och tämligen rikligt med klamydosporer, tillväxthastighet 28 mm/dag maltagar vid den optimala temperaturen + SSOC; optimal tillväxt vid pH 5; halofob; god tillväxt på mannos, cellobios och glykos; mindre till- växt på xylos och arabinos; galaktos utnyttjas praktiskt taget inte alls.Organisms that may be involved in the implementation of such treatment are e.g. Sporotrichum pulverulentum (Chrysosposium lignorum), Peniophora gigantea, Trametes cinnabarina, Peniophora sanguinea, Phellinus ísabellinus, Trametes pini, "apel- sinröta", Asterodon ferruginosus, Peniophora gigantea, Pholioyporus abinosis, Pholioyporus ababilis, versicolor, Polyporus zonatus, Pycnoporus cinnabarinus, Pycnoporus sanguineus, Stereum gausapatum, Stereum hirsutum, Phlebia radiata, and in particular a newly discovered strain of Peniophora, which here is referred to as strain P-B1. 10 15 20 25 30 35 H0 771lr687-6 This fungus belongs to the Peniophoraqcremea group and can be characterized as follows: mycelial hyaline with occasional veils and quite abundant chlamydospores, growth rate 28 mm / day malting at the optimum temperature + SSOC; optimal growth at pH 5; halophobic; good growth on mannose, cellobiosis and glucose; less growth on xylose and arabinose; galactose is practically not used at all.

Tillsatsämnena har generellt den verkan, att de bringar mikroorganismen att ändra sin aktivitet, så att dess cellu- losanedbrytande aktivitet blir mindre framträdande, medan den lignin- nedbrytande aktiviteten i stort sett blir bestående.The additives generally have the effect of causing the microorganism to change its activity, so that its cellulose-degrading activity becomes less prominent, while the lignin-degrading activity becomes largely permanent.

Det är vidare möjligt att utgå från en organism, som producerar både lignin- och cellulosanedbrytande enzymer, under tillsats av specifika inhibitorer, som hämmar de cellulosanedbrytande enzymernas verkan. Undersökningar av cellulosans och ligninets mikrobiella nedbrytning och de däri deltagande enzymmekanismerna har visat, att däri medverkar ett enzym (oxidoreduktas), som redu- cerar kinoner framställda genom enzymet lackas oxidation av fenoler.It is further possible to start from an organism which produces both lignin and cellulose degrading enzymes, with the addition of specific inhibitors, which inhibit the action of the cellulose degrading enzymes. Studies of the microbial degradation of cellulose and lignin and the enzyme mechanisms involved in them have shown that an enzyme (oxidoreductase) is involved, which reduces quinones produced by the enzyme by oxidizing phenols.

För att detta enzym skall fungera, behöver det kinoner och cellobios, varvid de förra reduceras till fenoler, den senare oxideras till cellobionolakton. Denna verkar inhibitoriskt på det s.k. C1-enzymet, som är viktigt vid cellulosans nedbrytning. En ännu mera potent inhíbitor är glukonolakton, som bildas av speciellt enzym, som spjälkar cellobionolaktonen i glukos och glukonolakton. Denna är inhibitorisk inte bara för C1-enzymet, utan även för B-glykosidas, som också deltar i cellulosans nedbrytning. På grundval av dessa upptäckter ligger det inom möjligheternas ram att framställa ometa- boliserbara specifika inhibitorer, som reagerar med C1-enzymet så att cellulosanedbrytningen stoppas. Likartade inhibitorer kan användas för att stoppa nedbrytningen av xylan och mannan.For this enzyme to work, it needs quinones and cellobiosis, the former being reduced to phenols, the latter being oxidized to cellobionolactone. This has an inhibitory effect on the so-called The C1 enzyme, which is important in the breakdown of cellulose. An even more potent inhibitor is gluconolactone, which is formed by a special enzyme that cleaves the cellobionolactone into glucose and gluconolactone. This is inhibitory not only for the C1 enzyme, but also for B-glycosidase, which also participates in the degradation of cellulose. On the basis of these discoveries, it is within the scope of the possibilities to produce intolerable specific inhibitors, which react with the C1 enzyme so that the cellulose degradation is stopped. Similar inhibitors can be used to stop the degradation of xylan and mannan.

Lämpliga organismer för användning i denna ut- föringsform är Polyporus adustus, Sporotrichum pulverulentum så- väl som de som uppräknats.Suitable organisms for use in this embodiment are Polyporus adustus, Sporotrichum pulverulentum as well as those listed.

Behandlingen med mikroorganismen enligt uppfin- ningen kan ske genom att utgångsmaterialet, t.ex. ved i form av flis, ympas med en uppslamning av sporer av ifrågavarande organism i ett medium, som innehåller för mikroorganismens utveckling er- forderliga näringsämnen och i förekommande fall tillsatsämnen (in- hibitorer) för reglering av mikroorganismens verksamhet. Exempel- vis kan en flisstack besprutas med en sådan uppslamning. Materialet 10 15 20 25 30 35 HO '7714687-6 4 får därefter ligga under erforderlig tid för att väsentlig nedbryt- ning av ligninet utan väsentlig påverkan av cellulosan skall äga rum. Denna tid kan beroende på mikroorganismens art och de yttre betingelserna, t.ex. lufttemperaturen vid lagring av stacken utom- hus, variera från exempelvis en vecka till en månad eller några månader. Eventuellt kan materialet värmas åtminstone under de in- ledande skedena av organismens utveckling för att påskynda be- handlingen, men i regel upprätthåller organismen själv en lämplig temperatur, t.ex. 30 - SOOC, exempelvis i en flisstack. Eventuellt kan det också vara lämpligt att sörja för omblandning och/eller luftning av materialet för att säkerställa en jämn nedbrytning av hela satsen.The treatment with the microorganism according to the invention can take place by the starting material, e.g. wood in the form of wood chips, inoculated with a slurry of spores of the organism in question in a medium which contains nutrients necessary for the development of the micro-organism and, where appropriate, additives (inhibitors) for regulating the activity of the micro-organism. For example, a chip stack can be sprayed with such a slurry. The material 10 15 20 25 30 35 HO '7714687-6 4 must then be left for the required time for significant degradation of the lignin without significant effect on the cellulose to take place. This time may, depending on the nature of the microorganism and the external conditions, e.g. the air temperature when storing the stack outdoors, varies from, for example, a week to a month or a few months. Possibly the material can be heated at least during the initial stages of the organism's development to accelerate the treatment, but as a rule the organism itself maintains a suitable temperature, e.g. 30 - SOOC, for example in a chip stack. It may also be appropriate to provide mixing and / or aeration of the material to ensure even decomposition of the entire batch.

Med "väsentlig nedbrytning av ligninet" avses att åtminstone ca 20 %, företrädesvis ca 50 %, helst ca 75 % av utgångs- materialets lignininnehâll bör vara nedbrutet. Vad cellulosainne- hållet beträffar, bör högst 25 % därav, helst högst 10 % därav vara nedbrutet för att ett ekonomiskt tillfredsställande massaut- byte skall erhållas. I _ Det kan även vara önskvärt att före ympningen med den önskade mikroorganismen behandla utgångsmaterialet så, att eventuellt närvarande icke önskvärda cellulosanedbrytande orga- nismer förstörs.By "substantial degradation of the lignin" is meant that at least about 20%, preferably about 50%, most preferably about 75% of the lignin content of the starting material should be degraded. As far as the cellulose content is concerned, a maximum of 25% thereof, preferably a maximum of 10% thereof, should be degraded in order to obtain an economically satisfactory pulp yield. It may also be desirable to treat the starting material prior to inoculation with the desired microorganism so that any undesirable cellulosic degrading organisms present are destroyed.

Det efter behandlingen av vedflis med mikroorganismen erhållna materialet är till sin beskaffenhet jämförligt med halv- kemisk massa. Det kan underkastas fortsatt uppslutning med kemiska metoder, såsom sulfat-, sulfit- eller syrgaskokning, varvid givetvis koktiden för samma slutliga utbyte blir kortare än vid kokning av vedflis, för framställning av massa med i huvudsak samma egenskaper som vanlig kemisk massa och användbar för samma ändamål. Den kan också efter mekanisk defibrering användas såsom för de ändamål för vilka man vanligen använder halvkemisk massa eller slipmassa. 7 Även om förfarandet enligt uppfinningen i första hand syftar till att framställa en produkt, som är användbar som pappersmassa och liknande, kan det även få användning i andra sammanhang. Sålunda kan kreaturfoder framställas genom behandling av utgångsmaterial, t.ex. halm, bagass, som har för stor halt lignin' för att utgöra ett lämpligt foder, med mikroorganismer enligt upp- finningen för minskning av ligninandelen. I Uppfinningen belyses av nedanstående utförings- exempel. 10 15 20 25 7714687-6 Exempel 1 . _ Till 100 ml Erlenmeyerkolvar med 15 g vermikulit (skamol) sattes 30 ml av en 2,5 % maltextraktlösning. Tallsplint- klotsar eller gransplintklotsar (20 X 20 X 10 mm) lades i eller ovanpå vermikulítlagret. Därefter autoklaverades kolven och ymp- ades med en mycelsuspension av Peníophora cremea stam P-B1. Kolven inkuberades i rumstemperatur under den tid som anges i tabell I.The material obtained after the treatment of wood chips with the microorganism is comparable in nature to semi-chemical pulp. It can be subjected to further digestion by chemical methods, such as sulphate, sulphite or oxygen boiling, whereby of course the cooking time for the same final yield will be shorter than when cooking wood chips, for producing pulp with essentially the same properties as ordinary chemical pulp and useful for the same purpose. It can also be used after mechanical defibration as for the purposes for which semi-chemical pulp or abrasive pulp is usually used. Although the process according to the invention is primarily aimed at producing a product which is useful as pulp and the like, it may also be used in other contexts. Thus, animal feed can be prepared by treating starting materials, e.g. straw, bagasse, which has too high a content of lignin 'to constitute a suitable feed, with microorganisms according to the invention for reducing the lignin content. The invention is illustrated by the following embodiments. Example 15 1. To 100 ml Erlenmeyer flasks with 15 g of vermiculite (skamol) was added 30 ml of a 2.5% malt extract solution. Pine block blocks or spruce block blocks (20 X 20 X 10 mm) were placed in or on top of the vermiculite layer. The flask was then autoclaved and inoculated with a mycelial suspension of Peníophora cremea strain P-B1. The flask was incubated at room temperature for the time indicated in Table I.

Exempel 2 Till en 100 ml Erlenmeyerkolv med 10 g vermikulit sattes 20 ml närlösning bestående av glukos, salter och vitaminer.Example 2 To a 100 ml Erlenmeyer flask with 10 g of vermiculite was added 20 ml of a proximal solution consisting of glucose, salts and vitamins.

Efter autoklavering ympades med en mycelsuspension av Peniophora cremea stam P-B1. Efter utväxt av svampmycel lades sterila björk- klorsar (10 X 10 X 10 mm) i eller ovanpå vermikulitlagret. I Exempel 3 Utfördes enligt exempel 1 men kolvarna ympades med en Trametes-stam även kallad "apelsinrötan, orange rot". šššLﬂaàLï Granflis av normal kvalitet för tillverkning av massa fylldes i 5 1 glaskolvar. En 1 %'asparagin1ösning hälldes över flisen upp till kolvhalsen. Efter någon minut avhälldes överskott av lösningen. Kolvarna autoklaverades och ympades med en mycelsuspension av Peníophora cremea stam P-B1.After autoclaving, a mycelial suspension of Peniophora cremea strain P-B1 was inoculated. After outgrowth of fungal mycelium, sterile birch bark (10 X 10 X 10 mm) was placed in or on top of the vermiculite layer. In Example 3 It was performed according to Example 1 but the flasks were inoculated with a Trametes strain also called "orange rot, orange root". šššL ﬂ aàLï Firewood chips of normal quality for the production of pulp were filled into 5 1 glass flasks. A 1% asparagine solution was poured over the chips up to the piston neck. After a few minutes, excess solution was poured off. The flasks were autoclaved and inoculated with a mycelial suspension of Peníophora cremea strain P-B1.

I varje exempel utfördes bestämningar av halterna lignin, cellulosa och xylan på prov av utgångsmaterialet före be- handlingen med svampen. Efter den i tabell I angivna inkubationstiden skildes det kvarvarande fasta vedmaterialet från vätskan och mot- svarande bestämningar gjordes, varpå förlusten av lignin, cellu- losa och xylan beräknades i viktprocent av den ursprungliga mäng- den.In each example, determinations of the levels of lignin, cellulose and xylan were performed on samples of the starting material before the treatment with the fungus. After the incubation period given in Table I, the remaining solid wood material was separated from the liquid and corresponding determinations were made, after which the loss of lignin, cellulose and xylan was calculated as a percentage by weight of the original amount.

H ﬁﬂwßmä :må eßm I N b .I O: Cﬂnﬂw MQEQLHU .MQOÃQOHEÜQ .I mvmﬁnﬂmﬂmmm | .__ E. 3 3 åñﬁm små mwpwsmna m i N 3 Û om vñwﬁm 0% N 6. .à ¶ .._ mm 3 :P6 Ei smak . _ 3 o å i 3 33 mwewnu mnonmoqwm f 7 ao _ _ E: 3; 7333 6 33 pwsdäü då 53 v? . h: Pwﬂ-nﬁßmﬁ IMWOH PWUHQÜM. IQßM lmGOﬂu.H ﬁﬂ wßmä: må eßm I N b .I O: C ﬂ n ﬂ w MQEQLHU .MQOÃQOHEÜQ .I mvm ﬁ n ﬂ m ﬂ mmm | .__ E. 3 3 åñ ﬁ m small mwpwsmna m i N 3 Û about vñw ﬁ m 0% N 6. .à ¶ .._ mm 3: P6 Ei taste. _ 3 o å i 3 33 mwewnu mnonmoqwm f 7 ao _ _ E: 3; 7333 6 33 pwsdäü then 53 v? . h: Pw ﬂ- n ﬁ ßm ﬁ IMWOH PWUHQÜM. IQßM lmGO ﬂ u.

HMII lﬂﬂﬂäx IÜHHÜO IGHCMMÄ IPVÉH> ...NÅSMCH WMHMUU> .EmﬂCwNWQO HOQENXW nl ¶ 10 15 20 25 30 35 771/4687-6 Resultaten visar, att de använda svamparna för- mår att selektivt nedbryta lignin i ved med endast ringa påverkan av cellulosa och xylan.HMII l ﬂﬂﬂ äx IÜHHÜO IGHCMMÄ IPVÉH> ... NÅSMCH WMHMUU> .Em ﬂ CwNWQO HOQENXW nl ¶ 10 15 20 25 30 35 771 / 4687-6 The results show that the fungi used are able to selectively degrade lignin in wood by cellulose with only ring. and xylan.

Det kvarvarande vedmaterialet i exemplen hade i stort sett samma beskaffenhet som halvkemisk massa framställd av flis.The remaining wood material in the examples had essentially the same nature as semi-chemical pulp made from wood chips.

V Exempel 5 Björkklotsar behandlades i Erlenmeyerkolvar med vermikulit och tillsats av maltextraktlösníng med olika naturliga svampar (vildtyper) på i exempel 1 angivet sätt. Resultaten åter- ges i följande tabell. Med "TVM" avses total viktminskning, med "LF" ligninförlust och med "CF" cellulosaförlust.Example 5 Birch blocks were treated in Erlenmeyer flasks with vermiculite and addition of malt extract solution with various natural fungi (wild types) in the manner indicated in Example 1. The results are given in the following table. By "TVM" is meant total weight loss, by "LF" lignin loss and by "CF" cellulose loss.

Tabell II §ggm2 §g§m ïig (mån) Iyﬂ (%) LE (%) QE (%) Hyphoderma praeteris- SP152-1 2 16,5 61,5 0 simum Stereum sanguínol- 104-D-1-2 H 12,8 36,3 3,6 entum Hirschioporus BPH-1 2 8,9 26,6 3,2 abietinus Oidentifierad BP12-1 2 10,4 39,7 0,9 " BP9-1 2 9,3 21,8 0 Lentinus edodes CBS 226.51 1,5 6,7 32,0 1,0 Oidentifierad L18-27 2 9,1 33,8 0,5 " L19-8 2 13,8 UH,8 0 " L10-15 2 8,8 32,2 0 " L10-28 2 6,2 30,H 0 " L22-75 2 8,3 3H,6 1,2 " PG2~10 2 7,8 32,1 0 " PGH-5 2 10,2 35,0 1,7 Poria cinerascens 70217 2 18,8 6H,1 2,1 " 70236 2 17,2 59,1 o Oidentifierad PG1-5 2 19,9 56,1 2,2 Exemgel 6 På samma sätt som i exempel“5 gjordes försök med björkklotsar under användning av svamparna Phlebia radíata L12-41 och Pycnoporus cinnabarinus A-360, varvid 1,0 % maltextrakt (MALT) eller 0,25 % ammoniumdivätefosfat (ANN) tillsattes. Följande resultat erhölls. Med "MF" avses mannanförlust. 7714687-6% Ph. radiata P. cinnab *rvM LP i i 3,3 6,8 3,6 9,7 7,o1s,o Tabell III | Tíllsats Tid åâﬂ AMM 28 AMM 28 AMM H9 MALT 3Û_ 'a,u1u,s Q E 60 k? :MIG u o v Fr] IQ (JJ G - I” « w Ö -\ 3 OJ v u 07 æ (A)Table II §ggm2 §g§m ïig (Mon) Iy ﬂ (%) LE (%) QE (%) Hyphoderma praeteris- SP152-1 2 16,5 61.5 0 simum Stereum sanguínol- 104-D-1-2 H 12.8 36.3 3.6 entum Hirschioporus BPH-1 2 8.9 26.6 3.2 abietinus Unidentified BP12-1 2 10.4 39.7 0.9 "BP9-1 2 9.3 21.8 0 Lentinus edodes CBS 226.51 1.5 6.7 32.0 1.0 Unidentified L18-27 2 9.1 33.8 0.5 "L19-8 2 13.8 UH, 8 0" L10-15 2 8, 8 32.2 0 "L10-28 2 6.2 30, H 0" L22-75 2 8.3 3H, 6 1.2 "PG2 ~ 10 2 7.8 32.1 0" PGH-5 2 10, 2 35.0 1.7 Poria cinerase 70217 2 18.8 6H, 1 2.1 "70236 2 17.2 59.1 o Unidentified PG1-5 2 19.9 56.1 2.2 Example gel 6 In the same way as In Example 5, experiments were made with birch blocks using the fungi Phlebia radíata L12-41 and Pycnoporus cinnabarinus A-360, with 1.0% malt extract (MALT) or 0.25% ammonium dihydrogen phosphate (ANN) being added. The following results were obtained. By "MF" is meant loss of man. 7714687-6% Ph. radiata P. cinnab * rvM LP i i 3.3 6.8 3.6 9.7 7, o1s, o Table III | Tíllsats Tid åâ 28 AMM 28 AMM 28 AMM H9 MALT 3Û_ 'a, u1u, s Q E 60 k? : MIG u o v Fr] IQ (JJ G - I ”« w Ö - \ 3 OJ v u 07 æ (A)

Claims

77111687-6 9 PATENT REQUIREMENTS

A process for producing cellulosic pulp from a lignin- and cellulose-containing starting material, in particular wood, wherein the starting material is treated with an organism capable of forming lignin-degrading and cellulose-degrading enzymes, characterized in that the treatment is carried out with the addition of sugars and carbohydrates, such as malt extract, maltose, glucose, arabinose, cellobiose, xylose, sucrose or fructose, or nitrogen compounds such as ammonium salts, nitrates, asparagine or casein hydrolyzate.

2. A method according to claim 1, characterized in that the starting material is treated with a PB-1 called newly discovered strain of Peniophora cremea.

Process according to Claim 1 or 2, characterized in that the treatment is carried out at such a temperature and for such a time that 20-75% of the starting material is lignin and less than 25% of the cellulose of the starting material is decomposed.

A method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the product obtained is subjected to treatment by mechanical or chemical means to release the fibers. MENTIONED PUBLICATIONS: