SA08290425B1 - Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses - Google Patents
Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses Download PDFInfo
- Publication number
- SA08290425B1 SA08290425B1 SA08290425A SA08290425A SA08290425B1 SA 08290425 B1 SA08290425 B1 SA 08290425B1 SA 08290425 A SA08290425 A SA 08290425A SA 08290425 A SA08290425 A SA 08290425A SA 08290425 B1 SA08290425 B1 SA 08290425B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- polypeptide
- antigens
- sequence
- tuberculosis
- fusion
- Prior art date
Links
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title abstract description 114
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title abstract description 114
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title abstract description 113
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title abstract description 99
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title abstract description 98
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 title abstract description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 86
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 126
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 112
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 107
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 40
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 36
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 36
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 35
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 31
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 29
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 29
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 22
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 16
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 14
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 7
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 5
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 101710175886 Interferon gamma 1 Proteins 0.000 claims 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 71
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 50
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 12
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 8
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 73
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 65
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 34
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 32
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 31
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 30
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 28
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 26
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 25
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 18
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 18
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 18
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 17
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 16
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 16
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 15
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 10
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 10
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 10
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 7
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 7
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 6
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 5
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- -1 dextran sulfates Chemical class 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 3
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 3
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 3
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 3
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 101100224410 Solanum tuberosum DPEP gene Proteins 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 3
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 3
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 3
- 101150108812 proC gene Proteins 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 3
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 2
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091000085 chlorophyll binding Proteins 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N cysteic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CS(O)(=O)=O XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 2
- 208000032922 susceptibility to mycobacterium tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-(cyclohexylazaniumyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1CCCCC1 BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- MRTPISKDZDHEQI-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-(tert-butylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(C)(C)C MRTPISKDZDHEQI-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- NPDBDJFLKKQMCM-SCSAIBSYSA-N (2s)-2-amino-3,3-dimethylbutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)[C@H](N)C(O)=O NPDBDJFLKKQMCM-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-UHFFFAOYSA-N 1,25-Dihydroxy-vitamin D3' Natural products C1CCC2(C)C(C(CCCC(C)(C)O)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CC(O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 1H-imidazole Chemical compound C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxynonadecane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(C(O)=O)C(O)(C(O)=O)CC(O)=O HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- DWGWCWDDNTVOGF-UHFFFAOYSA-N Cl.Cl.Cl.Cl.Cl.Cl Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.Cl.Cl DWGWCWDDNTVOGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000581364 Clinitrachus argentatus Species 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004338 Dichlorodifluoromethane Substances 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N Gly-Cys-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC([O-])=O CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 101100321817 Human parvovirus B19 (strain HV) 7.5K gene Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 1
- 108020005210 Integrons Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000252067 Megalops atlanticus Species 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010003581 Ribulose-bisphosphate carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 208000026487 Triploidy Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 101100209759 Xenopus laevis vex1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229940040563 agaric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000001355 anti-mycobacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 238000011095 buffer preparation Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229960005084 calcitriol Drugs 0.000 description 1
- GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N calcitriol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019404 dichlorodifluoromethane Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000000799 fusogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003979 granulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003715 interstitial flow Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000250 methylamino group Chemical class [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000001634 microspectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000035409 positive regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000016412 positive regulation of cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000001814 protein method Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000004513 sizing Methods 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229940035289 tobi Drugs 0.000 description 1
- NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N tobramycin Chemical compound N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N NLVFBUXFDBBNBW-PBSUHMDJSA-N 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029284 trichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
- 101150069452 z gene Proteins 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
الملخص: يتعلق الاختراع الحالي ببروتينيات اندماج fusion proteins محتوية على اثنان على الأقل من مولدات ضد المتفطرة السلية mycobacterium tuberculosis antigens . بصفة خاصة ، يتعلق الاختراع بيروتينات اندماج ثنائية التي تحتوي على اثنان من مولدات ضد المتفطرة السلية المستقلة individual M. tuberculosis antigens وبروتينات اندماج ثلاثية tri- fusion proteins محتوية على ثلاثة من مولدات ضد المتفطرة السلية وبروتينات الاندماج الرباعية tetra-fusion proteins التي تحتوي على أربعة مولدات ضد المتفطرة السلية وبروتينات الاندماج الخماسية penta-fusion proteins التي تحتوي على خمسة مولدات ضد المتفطرة السلية M. tuberculosis antigens وطرق لاستعمالها في التشخيص وعلاج والوقاية من عدوي السل tuberculosis infection . شكل 1 .Abstract: The present invention relates to fusion proteins containing at least two mycobacterium tuberculosis antigens. In particular, the invention relates to binary fusion proteins containing two individual M. tuberculosis antigens, tri-fusion proteins containing three antigens against M. tuberculosis and tetra-fusion proteins containing four antigens against Mycobacterium tuberculosis and penta-fusion proteins that contain five antigens against M. tuberculosis antigens and methods for their use in the diagnosis, treatment and prevention of tuberculosis infection. Figure 1.
Description
-Y بروثينات اندماج مولدات ضد المتفطرة السلية واستعمالاتهاY-antigen fusion proteins against Mycobacterium tuberculosis and their uses
Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses الوصف الكامل خلفية الاختراع ان هذا الطلب عبارة عن طلب جزئي من الطلب رقم 5760784 والذي تم إيداعه في المملكةFusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses Full Description Background of the invention This application is a partial application of Application No. 5760784, which was filed in the Kingdom
Ce Yeo [ON / ١١ الموافق AYEYT / ٠١ /٠١ العربية السعودية بتاريخ ان هذا الطلب عبارة عن طلب جزئي من الطلب رقم 4 1760728* والذي تم إيداعه في المملكة © العربية السعودية بتاريخ ٠١ ٠ / 471 1ه الموافق ca Yeo [AY ١١ يتعلق الاختراع الحالي ببروتينات اندماج fusion proteins محتوية على US على الأقل من مولدات مضاد المتفطرة السلية mycobacterium tuberculosis antigens . بصفة خاصة يتعلق الاختراع بيروتيئيات اندماج ثنائية التي تحتوي على اثنان من مولدات ضد المتفطرة السلية المستقلة individual M. tuberculosis antigens وبروتينات اندماج ثلاثية tri- fusion proteins محتوية Ve على ثلاثة من مولدات ضد المتفطرة السلية وبروتينات الاندماج الرباعية tetra-fusion proteins التي تحتوي على أربعة مولدات ضد المتفطرة السلية وبروتينات الاندماج الخماسية penta-fusion proteins التي تحتوي على خمسة مولدات ضد المتفطرة السلية M. tuberculosis antigens وطرق لاستعمالها في التشخيص وعلاج والوقاية من عدوي السل ‘tuberculosis infection يعد السل tuberculosis مرض معد مزمن تسبيه العدوى بالمتفطرة السلية M. tuberculosis ويعد ٠ مرض رئيسي في البلدان النامية علاوة على انه مشكلة متنامية في مناطق متقدمة من العالم حيث يتم اكتشاف حوالي A مليون حالة جديدة كما يموت ؟ مليون كل عام على الرغم من ذلك قد تكون Yay ¢Ce Yeo [ON / 11 corresponding to AYEYT / 01 / 01 Saudi Arabia on date This application is a partial application of Application No. 4 1760728* which was filed in the Kingdom of Saudi Arabia © on 01 0 / 1 471 AH corresponding to ca Yeo [AY 11] The present invention relates to fusion proteins containing at least US of mycobacterium tuberculosis antigens. In particular the invention relates to binary fusion probiotics containing two independent M. tuberculosis antigens and tri- fusion proteins Ve containing three anti-M. tuberculosis antigens and tetra- fusion proteins fusion proteins, which contain four antigens against M. tuberculosis, and penta-fusion proteins, which contain five antigens against M. tuberculosis. tuberculosis antigens and methods for their use in the diagnosis, treatment and prevention of tuberculosis infection Tuberculosis is a chronic infectious disease caused by infection with Mycobacterium tuberculosis, M. tuberculosis It is 0 a major disease in developing countries, in addition to being a growing problem in developed regions of the world, where about A million new cases are discovered as it dies? million each year though that might be Yay ¢
١ = - العدوى غير عرضية asymptomatic لفترة زمنية كبيرة وعلى النحو الأكثر شيوعا يظهر المرض على هيئة التهاب حاد بالرثتين acute inflammation of the lungs » مما ينشأ عنه حمي fever وكحة غير مولده للبلغم nonproductive cough . اذا لم يعالج » فأن المشاكل الصحية الخطيرة والموت هو النتيجة النموذجية ٠ © عموما على الرغم من إمكانية السيطرة باستعمال علاج ممتد بالمضاد الحيوي | extended antibiotic therapy ؛ يعد هذا العلاج غير كاف لمنع انتشار المرض . من الممكن أن تكون الحالات المرضية الفردية المصابة غير عرضية ؛ إلا أنها ناقله بالعدوى ؛ لبعض الوقت ؛ أضف إلى ذلك ؛ على الرغم من الإذعان لنظام العلاج السائد حاسم ؛ من الصعب مراقبة سلوك المريض . بعض المرضي لا يكملون فترة العلاج ؛ الذي قد يؤدي إلى علاج غير فعال ineffective treatment ٠ وحدوث مقاومة للعقارالمستخدم . من أجل السيطرة على انتشار السل order to control the spread of tuberculosis » فأن التطعيم الفعال effective vaccination والتشخيص الفعال المبكر accurate early diagnosis للمرض يعد ذات أهمية قصوى . حاليا ؛ يعد التطعيم بالبكتريا الحية live bacteria من أكثر الطرق فعالية لحث المناعة الوقائية من أكثر المتفطرة شيوعا المستخدمة لهذا الغريض هي عصية كلاميت . Vo جورين Bacillus Calmette-Guerin (BCG) ¢ سلالة لا فرعية من Mbovis . على الرغم من أن الأمان الفعالية BCG مصدر جدل وخلاف في بعض البلدان ؛ مثل الولايات المتحدة الأمريكية ؛ التي لا تطعم العامة بهذا العامل . من الشائع أجراء تشخيص لمرض السل باستعمال اختيار للجلد ؛ الذي يتضمن تعريض الجلد الداخلي tuberculin PPD ( مشتق Hie من البروتين (protein-purified derivative . تنشأ عن استجابات خلية Antigen-specific 1 cell T responses result Yo النوعية Asal الضد تصلب يمكن قياسه measurable induration لدي موضع1 = - The infection is asymptomatic for a long period of time. In the most common way, the disease appears in the form of acute inflammation of the lungs, which results in fever and a nonproductive cough. If not treated, serious health problems and death are the typical outcome. ©0 Generally though this can be controlled with extended antibiotic therapy | extended antibiotic therapy; This treatment is not sufficient to prevent the spread of the disease. It is possible that individual disease states affected are asymptomatic; However, it is a carrier of infection; For some time ; add to that ; Although acquiescence to the prevailing treatment regimen is crucial; It is difficult to monitor the patient's behavior. Some patients do not complete the course of treatment; Which may lead to ineffective treatment 0 and the occurrence of resistance to the drug used. In order to control the spread of tuberculosis, effective vaccination and accurate early diagnosis of the disease is of paramount importance. currently ; Vaccination with live bacteria is one of the most effective methods of inducing protective immunity. The most common mycobacterium used for this purpose is Bacillus Clamite. Vo Guerin Bacillus Calmette-Guerin (BCG) ¢ A subspecies of Mbovis . Although the safety and effectiveness of BCG is a source of controversy and disagreement in some countries; such as USA; Which do not feed the public with this factor. It is common to make a diagnosis of tuberculosis using a skin pick; Which involves exposing the inner skin with tuberculin PPD (a protein-purified derivative of Hie). Antigen-specific 1 cell T responses result Yo Asal. Measurable stiffness measurable induration I have a position
د - الحقن بعد مرور حوالي 77-48 ساعة ؛ هذا يشير إلى التعرض لمولد الضد البكتيرية Mycobacterial antigens . على الرغم من ذلك فأن الحساسية والنوعية هي مشكلة مصاحبة لهذا الاختبار ؛ ليس هناك امكانية لتمييز الإفراد المطعمون ب BCG من الأفراد المصابين + في حين ظهرت الملتقمات الكبيرة أنها تعمل كمستجيبات محيطية لمناعة المتفطرة السلية principal effectors of M. tuberculosis © ؛ تعد خلايا T محثات سائدة لهذه المناعة . أن الدور الأساسي لخلايا 7 في الحماية ضد عدوي المتفطرة السلية يتم توضيحة بالحدوث المتكرر المتفطرة السلية في مرضي متلازمة نقص المناعة المكتسبة نتيجة لاستفاد خلايا 004+7 المصاحب لعدوي فيروس نقص المناعة البشرية human immunodeficiency virus (HIV) infection لقد أظهرت الخلايا 4+7 المتفاعلة البكترية أنها منتجات فعالة ل «ll (IFN-Y) gamma-interferon ٠ بدوره ٠» يظهر أنه يطلق تأثيرات بكتيرية مضادة للملتقمات الكبيرة في الفئران anti- mice mycobacterial effects of macrophages in mice في حين أن دور gamma-interferon في الإنسان أقل وضوحا , إلا أن الدرسات أطهرت أن : 03 1,25-dihydroxy-vitamin » سوا بمفردة أو في هيئة اتحاد كيميائي مع gamma-interferon أو عامل النخر الورمي- القا tumor necrosis factor-alpha ¢ ينشط الملتقمات البشرية لتثبيط جدوى المتفطرة السلية activates human macrophages to inhibit M ٠ . أضف إلى ذلك ؛ من المعروف أن 1770-7 تحت الملتقمات الكبيرة البشرية لتصنيع 1,25-dihydroxy-vitamin D3 + على نحو مماثل « أطهر interleukin-12 (IL- (12 أنه يلعب في حث المقاومة لعدوي المتفطرة السلية . لإجل مراجعة علم مناعة عدوي المتفطرة السلية Chan and Kaufmann aif + 1944 + السل Tuberculosis : التولد المرضي والوقاية والمكافحة « Bloom ( المحرر ) ؛ مطبعة ASM ؛ واشنطن ؛ مقاطعة كولومبيا ٠d - injection after about 77-48 hours have passed; This indicates exposure to Mycobacterial antigens. However, sensitivity and specificity are issues associated with this test; There is no possibility to distinguish individuals vaccinated with BCG from infected individuals + while macrophages appeared to act as peripheral effectors of immunity to Mycobacterium tuberculosis (principal effectors of M. tuberculosis©); T cells are dominant inducers of this immunity. The essential role of 7 cells in protection against Mycobacterium tuberculosis infection is illustrated by the frequent occurrence of Mycobacterium tuberculosis in patients with acquired immunodeficiency syndrome as a result of the utilization of 7+004 cells associated with human immunodeficiency virus (HIV) infection. 7+4 cells showed bacterial interactors that they are effective products of “ll (IFN-Y) gamma-interferon 0 in turn 0” appears to release anti-mycobacterial effects of macrophages in mice in mice While the role of gamma-interferon in humans is less clear, studies have shown that: 03 1,25-dihydroxy-vitamin » either alone or in the form of a chemical union with gamma-interferon or tumor necrosis factor-Q tumor necrosis factor-alpha ¢ activates human macrophages to inhibit M0 . add to that ; 1770-7 under human macrophages is known to synthesize 1,25-dihydroxy-vitamin D3 + similarly “pure interleukin-12 (IL-12) plays in inducing resistance to M. tuberculosis infection. For immunology review My infection, Mycobacterium tuberculosis, Chan and Kaufmann aif + 1944 + Tuberculosis: Pathogenesis, Prevention, and Control « Bloom (Editor); ASM Press; Washington; District of Columbia 0
بالتالي توجد حاجة لتطعيمات محسنة ¢ وطرق محسنة لتشخيص والوقاية من وعلاج مرض السل treating tuberculosis . الوصف العام للاختراع يتعلق الاختراع الحالي ببروتينات اندماج proteins 0 مولدات ضد المتفطرة السلية ٠ mycobacterium tuberculosis antigens © عموماً ٠ أنه يتعلق بمتعدد ببتيدات اندماج fusion polypeptides التي تحتوي على OL أو اكشر من مولدات ضد المتفطرة السلية ؛ متعدد نيكليوتيدات مشفرة polynucleotides encoding لهذه الببتيدات المتعددة polypeptides « و طرق لاستعمال polypeptides ومتعدد نيكليوتيدات polynucleotides في التشخيص والعلاج والوقاية من عدوي المتفطرة السلية ٠ treatment and prevention of M. tuberculosis infection ٠ يعتمد الاختراع الحالي ٠ جزئيا ؛ على اكتشاف المخترعون لمتعدد النيكليوتيدات polynucleotides polynucleotides التي تحتوي على عدد من اثنان إلى خمسة تسلسلات تشفير المتفطرةٍ السلية التي تنتج بروتينات اندماج ماشوية recombinant fusion proteins التي تحتفظ بتولد المناعة immunogenicity وتولد الضد antigenicity لهذه الأجزاء المستقلة . وصفت بروتينات الاندماج الموصوفة هنا في السياق كلا من استجابات الخلية 7 و خلية B ؛ وفقا لما تم وصفة بواسطة Yo تكائر خلية cell proliferation 1 « وإنتاج cytokine وانتاج جسم ٠ antibody alias علاوة على ذلك ؛ يستخدم بروتين اندماج fusion protein باعتباره جين مناعي immunogen مع مواد مساعدة في الجسم الحي adjuvants in vivo لإثارة SS من المناعة الموسطة بالخلية cell- Ae lially mediated الخلطية للمتفطرة السلية humoral immunity to M. tuberculosis . إضافة لذلك ؛ يتم عمل بروتين اندماج بواسطة تركيب اندماج ثم يستخدم في صياغة لفاح vaccine مع Yo مادة مساعدة adjuvant لكي تمنع حماية طويلة الأجل في حيوانات ضد تطور مرض السلTherefore, there is a need for improved vaccinations and improved methods for diagnosing, preventing and treating tuberculosis. GENERAL DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to fusion proteins 0 antigens against Mycobacterium tuberculosis 0 mycobacterium tuberculosis antigens © generally 0 It relates to fusion polypeptides containing OL or more of mycobacterium antigens tuberculosis; polynucleotides encoding these polypeptides and methods for using polypeptides and polynucleotides in diagnosis, treatment and prevention of mycobacterium tuberculosis treatment and prevention of M. tuberculosis infection The present invention depends 0 partly; The inventors discovered polynucleotides polynucleotides that contain a number of two to five coding sequences of Mycobacterium tuberculosis that produce recombinant fusion proteins that maintain immunogenicity and antigenicity of these independent compartments. The fusion proteins described here described in context both 7-cell and B-cell responses; According to what was described by Yo, cell proliferation 1, cytokine production, and antibody alias 0 production, moreover; A fusion protein is used as an immunogen with adjuvants in vivo to trigger SS of cell- Ae lially mediated humoral immunity to M. tuberculosis. In addition to that; A fusion protein is made by a fusion formulation and then used in the formulation of a vaccine with Yo adjuvant in order to prevent long-term protection in animals against the development of tuberculosis.
٠ 68 against the of tuberculosis يعد بروتين الاتدما fusion protein z جين =e اكثر فاعلية more effective immunogen من خليط من مكونات بروتين mixture of the two proteins منفرد الخاصة به . في نموذج محدد للاختراع ؛ قد تصاغ متعددة الببتيدات polypeptides للمتفطرة السلية المفصولة ٠ أو المنقاة باعتبارها تركيبات صيدلية خاصة بالإعطاء إلى شخص خاضع للاختبار في حالة منع و/أو المعالجة من العدوى بالمتفطرة السلية . قد يتم تعزيز المولدة المناعية لبروتين الاندماج بتضمين مادة مساعدة ٠ adjuvant في مظهر أخر للاختراع ؛ تستخدم متعدد نيكليوتيدات polynucleotides المفصولة أو المنقاة لإنتاج مولدات مضاد لمتعدد ببتيد اندماج مأشوب في أنابيب الاختبار recombinant fusion polypeptide antigens in vitro 0٠ . على نحو بديل ؛ قد يتم إعطاء متعدد النيكليوتيدات polynucleotides مباشراً إلى شخص خاضع للاختبار باعتبارها لقاحات vaccines DNA لإحداث قدرة على التعديل الجيني لمولد المضاد في الشخص الخاضع للاختبار ؛ و الحث التالي لذلك للاستجابة منيعة ضد المتفطرة السلية anti-M. tuberculosis immune response + كذلك يعد هدف للاختراع الحالي أن يتم استخدام متعددة الببتيدات polypeptides في معايرات في ١ أنابيب الاختبار بغرض كشف أجسام مضادة خلطية أو مناعة موسطة بالخلية ضد المتفطرة السلية لتشخيص العدوي أو مراقبة تقدم المرض . على نحو إضافي ؛ قد تستخدم متعددة الببتيدات باعتبارها عامل تشخيص في الجسم الحي في شكل اختبار للجلد عبر الأدمة . بديلا عن ذلك؛ قد يتم استخدام متعددة الببتيدات باعتبارها جينات مناعية لتوليد أجسام مضادة ضد المتفطرة السلية في حيوان غير بشري . يمكن استخدام الأجسام المضادة للكشف عن مولدات المضادة المستهدفة في Ye الجسم الحي وفي أنابيب الاختبار .0 68 against the of tuberculosis fusion protein z gene =e is more effective immunogen than a mixture of the two proteins alone. In a specific embodiment of the invention; The isolated or purified M. tuberculosis polypeptides may be formulated as pharmaceutical formulations for administration to a test subject in the event of prevention and/or treatment of M. tuberculosis infection. The immunogenicity of the fusion protein may be enhanced by the inclusion of adjuvant 0 in another embodiment of the invention; Separated or purified polynucleotides are used to produce recombinant fusion polypeptide antigens in vitro 00. alternatively Polynucleotides may be administered directly to a test subject as DNA vaccines to induce the ability to genetically modify the antigen in the test subject; Subsequent induction of an immune response against Mycobacterium tuberculosis anti-M. tuberculosis immune response + It is also an objective of the present invention to use polypeptides in titrations in 1 test tubes for the purpose of detecting humoral antibodies or cell-mediated immunity against Mycobacterium tuberculosis to diagnose infection or monitor disease progression. additionally; Polypeptides may be used as an in vivo diagnostic agent in the form of a transdermal skin test. alternatively; Polypeptides may be used as immunogens to generate antibodies against Mycobacterium tuberculosis in a non-human animal. The antibodies can be used to detect Ye target antigens in vivo and in test tubes.
= ل شرح مختصر للرسومات شكل ١ أو اب : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( برقم تعريف تسلسل : ١ ) وتسلسل حمض أميني amino acid sequence ( برقم تعريف تسلسل : 7 ) من SU - بروتين اندماج tri- paras Mtb2A ) Ra35-TbH9-Ral2 fusion protein ( شكل ؟ : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( برقم تعريف تسلسل : ؟ ) وتسلسل حمض أميني amino acid sequence ( برقم تعريف تسلسل : 4 ) من ثلاثي- بروتين اندماج tri-fusion MTI- protein 0117-4 ( 1105398 مصمم ) + شكل ؟ أ-”د : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( برقم تعريف تسلسل :0( وتسلسل حمض أميني amino acid sequence (برقم تعريف تسلسل : 3 ) من ثلاثي- بروتين اندماج tri- fusion protein 101563-38 KD-Tb38-1 ٠ + شكل ؛ أ-؛د : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل (Vr وتسلسل حمض أميني amino acid sequence (رقم تعريف التسلسل : 8 ) لبروتين اندماج fusion protein ثنائي 10119-1038-1 . شكل 5 أ-دي : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل: 9 ) وحمض Vo أميني ( رقم تعريف التسلسل )٠١ لبروتين اندماج fusion protein رباعي 38KD-Tb38-1-DPEP 0 ThRa3 ) مشار إليه اختصرا ب 1515-2 ) ٠ شكل ١أ و أب : تسلسل النيكلوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل : (VY وتسلسل الحمض الأميني (VY: amino acid sequence لبروتين اتدماج fusion protein خماسى Erd14-DPV-MSL-MTCC2 ) مشار إليه اختصارا ب (Mtb8sf .= For a brief explanation of the graphics, Figure 1 or above: a nucleotide sequence (with Sequence ID: 1) and an amino acid sequence (with Sequence ID: 7) of the SU - fusion protein tri- paras Mtb2A ) Ra35-TbH9-Ral2 fusion protein (form ?: nucleotide sequence (with sequence ID: ?) and an amino acid sequence (with sequence ID: 4) from tri- MTI- protein 0117-4 ( 1105398 designer ) tri-fusion fusion protein + form ?a-”d: nucleotide sequence (with sequence identification number: 0) and an amino acid sequence (with number: Sequence identification: 3) of the tri-fusion protein 101563-38 KD-Tb38-1 0 + form A-D: nucleotide sequence (Vr and sequence Amino acid sequence (SEQ ID: 8) of binary fusion protein 10119-1038-1. Figure 5a-d: nucleotide sequence (SEQ ID: 9) and Vo acid Amino (sequence identification number 01) of quaternary fusion protein 38KD-Tb38-1-DPEP 0 ThRa3 (abbreviated as 1515-2) 0 Figure 1a and ab: nucleotide sequence The nucleotide sequence (VY: amino acid sequence of the pentameric fusion protein Erd14-DPV-MSL-MTCC2) is abbreviated as Mtb8sf. .
دا شكل #أ-لاب : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل ١“ ) وتسلسل الحمض الأميني amino acid sequence ( رقم تعريف التسلسل : ؛١ ) لبروتين اندماج fusion protein رباعي FRD14-DPV-MTI-MSL (مشار إليه اختصارا ب mt646F شكل + أ-/ ب: تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل : ١٠5 ) © والحمض أ لأميني amino acid (رقم تعريف التسلسل : ٠١ ) لبروثين اندماج fusion protein رباعي DPV ~MTI-MSL-MTCC2 ( مشار إليه اختصارا ب 1405718 ) ٠ شكل 4أ-1ب : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم التعريف التسلسل: ١١7 ) وتسلسل الحمض ١ لأميني amino acid sequence ( رقم التعريف التسلسل : ١8 ) لبروتين اندماج fusion «نعاه:م ثلاثي DPV-MTLMSL ( مشار إليه اختصارا ب 1415318 ) ٠ ) ٠١9 رقم تعريف التسلسل: ( nucleotide sequence شكل ١٠!أ-١٠ب : تسلسل النيكليوتيد ٠ لبروتين ) ٠١0 : رقم تعريف التسلسل ( amino acid sequence لأميني ١ وتسلسل الحمض - ) 110617 اختصارا ب a) مشار ) TGHO-DPV-MTT الاندماج الثلاشثي ) 7١ : رقم تعريف التسلسل ( nucleotide sequence و ١١ب: تسلسل النيكليوتيد ١١ شكل لبروتين ) YY رقم تعريف التسلسل: ( amino acid sequence لأميني ١ وتسلسل الحمض ٠ ) 1415364 مشار إليه اختصارا ب ) Erdl4 —DPV-MTI الاندماج ١٠ (YY رقم تعريف التسلسل: ( nucleotide sequence شكل ؟١١!-7١ب: تسلسل النيكليوتيد لبروتين اندماج (YE رقم تعريف التسلسل: ( amino acid sequence وتسلسل الحمض الأميني ٠ ) 110598 ثائي 1119-8235 ) مشار إليه اختصارا ب fusion proteinThis is a #A-LAB motif: the nucleotide sequence (SEQ ID: 1”) and the amino acid sequence (SEQ ID: ;1) of the quaternary fusion protein FRD14 -DPV-MTI-MSL (mt646F form +a-/b: nucleotide sequence (SEQ ID: 105) © and an amino acid (SEQ ID: 105) © 01) of a quaternary fusion protein DPV ~MTI-MSL-MTCC2 (1405718) 0 Fig. 4a-1b : nucleotide sequence (SEQ ID: 117 ) and the 1 amino acid sequence (sequence identification number: 18) of a fusion protein “NAAH: DPV-MTLMSL (abbreviated as 1415318) 0) 019 no. Sequence identification: ( nucleotide sequence Fig. 10!a-10b : nucleotide sequence 0 of a protein ) 010 : Sequence identification number ( amino acid sequence of amino 1 and acid sequence - ) 110617 abbreviated as a (referred to) TGHO-DPV-MTT tripartite fusion (71: nucleotide sequence ID and 11b: nucleotide sequence 11 isoform of the protein (YY sequence ID: amino acid) amino 1 sequence and acid sequence 0 (1415364) Erdl4 —DPV-MTI fusion 10 (YY) sequence identification number: nucleotide sequence Figure 11?-71b: nucleotide sequence Fusion protein (YE sequence identification number: ( amino acid sequence 0 ) 110598 1119-8235) abbreviated as fusion protein
YayYay
_ !قا شكل “١أ- اب : تسلسل النيكليوتيد nucleotide sequence ( رقم تعريف التسلسل (Yor وتسلسل الحمض الأميني amino acid sequence ( رقم تعريف التسلسل : 76 ) لبروتين الاندماج الثنائي Ral2-DPPD ( مشار إليه اختصارا ب 111524 ) . شكل Seve : استجابات تكاثر خلية cell proliferation 7 لستة من الخاضعين للدراسة © موجبة الاختبار PPD عند الحث باثنان من بروتينات الاندماج و أجزائها المستقلة . شكل ١-١و : إنتاج 1777-7 لسنة من الخاضعين للاختبار + PPD عند الحث باثنان من بروتينات اندماج fusion proteins وأجزائها المستقلة . شكل ١١ أ-1١ب : تكاثر خلية cell proliferation 7 لفئران محصنة ببروتين اندماج fusion protein أو أجزائه المستقلة ومادة مساعدة ٠ adjuvant ا ٠ شكل ٠ : إنتاج IFN-Y لفئران محصنة ببروتين اندماج fusion protein أو أجزائه مستقلة ومادة مساعدة adjuvant . شكل YA : إنتاج 11-4 لفئران محصنة ببروتين اندماج fusion protein أو أجزائه المستقلة ومادة مساعدة ٠ adjuvant شكل 513-114 : تركيزات جسم antibody alias لامصال hi محصنة بيروتين اندماج وأجزائه المستقلة ومادة مساعدة ٠ adjuvant ٠١ شكل ١٠أ-. اج : نسبة الباقين على قيد الحياة من الخنازير الهندية بعد اختبار aerosol المتفطرة السلية . يتم صياغة بروتينات الاندماج SBASIC(20A) mth629A mt632 A أو SBAS2(20B) أو SBAST(20C) واستعماله كمواد مناعة في الخنازير الهندية قبل الاختبار بالبكتيريا immunogen the مجموعة مقارنة موجبة BCG تعد . in guinea pigs prior to challenge with bacteria ٠ positive control_!sa fig. It is abbreviated as 111524). of test subjects + PPD upon induction with two fusion proteins and their independent parts Figure 11a-11b: cell proliferation of 7 mice immunized with fusion protein or its independent parts and substance Adjuvant 0 A 0 Fig. 0: IFN-Y production in mice immunized with a fusion protein or its independent parts and an adjuvant YA Fig. 4-11 production in mice immunized with a fusion protein Fusion protein or its independent parts and adjuvant 0 Fig. 513-114 : Antibody alias concentrations of hi-immune serums Fusion protein, its independent parts and adjuvant 0 adjuvant 01 Figure 10a-. Surviving Indian pigs after an aerosol test of Mycobacterium tuberculosis. The fusion proteins SBASIC(20A) mth629A mt632 A or SBAS2(20B) or SBAST(20C) are formulated and used as immunogens in Indian pigs before testing with bacteria immunogen the BCG positive control group. . In guinea pigs prior to challenge bacteria with 0 positive control
YaveYave
— ١١ 1 إنتاج 1712-7 في خلايا Stimulation of proliferation حث تكائر : (YY) )و fy ) شكل . TBHO-Tb38-1 النوعية لمولد الضد 113119 بواسطة بروتين الاندماج 1 في خلايا IFN-Y وانتاج Stimulation of proliferation شكل 7؟أ-7؟ب : حث تكائر . 10119-1638-1 نوعية ل 1038-1 بواسطة بروتين الاندماج من T في خلايا IFN-y وانتاج Stimulation of proliferation شكل ؟؟أ-"ب: حث تكائر © و 1038-1 بواسطة بروتين 1611-9 antigens الواضح في السابق أنها تستجيب مولدات الضد . TBHO-Tb38-1 الاندماج treatment Jud المفيدة لعلاج والوقاية من مرض antigens يتعلق الاختراع الحالي بمولدات الضد polynucleotides ؛ متعدد النيكوتيدات المشفرة لموالدات الضد and prevention of tuberculosis ٠ للاختراع antigens وطرق خاصة باستعمالها . تعد مولدات الضد encoding such antigens للمتفطرة antigens لمولدات الضد 0 polypeptides الحالي عبارة عن متعدد ببتيدات اندماج على QU السلية ومتحولات منها . بدرجة أكثر نوعية ؛ مولدات ضد الاختراع الحالي تتضمن fusion للمتفطرة السلية التي يتم ادماجها في جزئ متعدد ببتيد اندماج polypeptides الأقل من اكبر . قد تتضمن مولدات الضد للاختراع الحالي ¢ بصورة إضافية ؛ polypeptide molecule © الخاصة بمولدات الضد أو لتحسين immunogenicity أجراء أخري مصممة لتعزيز تولد المناعة مولدات الضد هذه في مظاهر أخري ؛ مثل عزل مولدات الضد هذا عبر إضافة الصورة الممتدة من . لدي طرف مولد الضد histidine بقايا .أل tuberculosis specific antigens مولدات الضد النوعية للمتفطرة السلية -١ م— 11 1 production of 1712-7 in cells Stimulation of proliferation Induction of proliferation: (YY) and fy) fig. TBHO-Tb38-1 The specificity of antigen 113119 by fusion protein 1 in IFN-Y cells and the production of Stimulation of proliferation Figure 7?A-7?B: Induction of replication. 10119-1638-1 specificity of L 1038-1 by fusion protein of T in IFN-y cells and production Stimulation of proliferation form ??A-"B: induce recurrences © and 1038-1 By protein 1611-9 antigens previously shown to respond to antigens TBHO-Tb38-1 fusion treatment Jud useful for the treatment and prevention of antigens disease The present invention relates to polynucleotides antigens; polynucleotides encoding antigens Antigens and prevention of tuberculosis 0 According to the invention, antigens and special methods for their use. More specifically; antigens against the present invention include a fusion of Mycobacterium tuberculosis that is fused to a fusion polypeptide molecule of less than greater than 10. The antigens of the present invention may additionally include ¢; the polypeptide molecule© of the antigens or To improve immunogenicity, other procedures designed to enhance the immunogenicity of these antigens in other manifestations, such as isolation of these antigens by adding the extended form of . I have a histidine tip. Residues. The tuberculosis specific antigens. Specific antigens for Mycobacterium tuberculosis - 1 m.
-- ١١ أ حتى ١١ب ؛ ١ للاختراع الحالي عبارة عن صورة تمثيلية للأشكال antigens مولدات الضد + variants of those antigens ومتحولات لمولدات الضد homologues متضمنة متجانسات linker قد يتم تعديل مولدات المضاد هذه ؛ على سبيل المثال ؛ بإضافة تسلسلات ببتيد رابطة linker peptides كما هو موصوف أعلاه . يمكن إدخال الببتيدات الرابطة peptide sequences التي تجمع كل واحدة من بروتينات polypeptides هذه بين واحدة أو اكثر من متعددة الببتيدات © الاندماج الموجودة في الأشكال ١أ و “١ب . تكون مولدات مضاد أخري خاصة بالاختراع الحالي أ و ١١ب التي تم ترابطها بمولد مضاد معروف ١ عبارة عن مولدات مضاد موصوفة في الأشكال ) 7١7 : الموصوف مسبقا (برقم تعريف تسلسل 38KD المضاد alge من المتفطرة السلية ء مثل-- 11a through 11b; For example ; By adding linker peptide sequences as described above. Peptide sequences in which each of these polypeptides combines one or more of the fusion © fusion polypeptides found in Figures 1a and 1b can be inserted. Other antigens of the present invention a and 11b conjugated to a known antigen 1 are antigens described in Figures 717: previously described (with sequence identification number 38KD antigen alge of M. tuberculosis Like
VEAMYEA) الصفحات : ov . المناعة من العدوي ae ٠910894 « Andersen and Hansen) ض - ( Genband Accession No.M30046 + ٠ immunogenicity assays م - معايرات المولدة المناعية تتميز مولدات المضاد الموصوفة في السياق الحالي ؛ وبروتينات مولدة المناعة منها immunogenic ؛ بالقدرة على حث استجابة مولدة المناعة immunogenic portions thereofVEAMYEA) Pages: ov. Immunity from infection ae 0910894 «Andersen and Hansen] Genband Accession No.M30046 + 0 immunogenicity assays The antigens described in the present context are distinguished; immunogenic proteins are among them; with the ability to induce an immunogenic response in portions thereof
AS تتميز مولدات المضاد بالقدرة على حث ٠ على نحو أكثر تخصيصا . response و/ أو interferon-y أي إنتاج ) cytokine أو إنتاج / 5 Stimulation of proliferation ٠ و خلايا 1116 وخلايا 8و / أو ملتهمات الجراثيم الكبيرة المشتقة 7 Wa في ) interleukin-12 macrophages derived from an M. tuberculosis- من شخص ( ذو مناعة) للمتفطرة السلية سوف يعتمد أختيار نوعية الخلية الخاصة بالاستخدام في تقييم استجابة - immune individual interleukin- مولدة المناعة لمولدة المضاد على الاستجابة المرغوبة . على سبيل المثال ؛ يتم تقييم على النحو الأكثر سهولة باستخدام مستحضرات محتوية على خلايا 13 و / أو ملتهمات جراثيم 12 ٠AS antigens have the ability to induce 0 in a more specific way. response and/or interferon-y, i.e. cytokine production or 5 Stimulation of proliferation 0, 1116 cells, 8 cells, and/or 7 Wa macrophages derived from interleukin-12 macrophages An M. tuberculosis - from a person (immune) to Mycobacterium tuberculosis The choice of cell type to use in evaluating an immune individual interleukin response to an antigen will depend on the desired response. For example ; Most readily evaluated using preparations containing 13 cells and/or bacteriophages 12 0
- ١١7 يكون الشخص ذو المناعة للمتفطرة السلية هو الشخص الذي يدرك على . macrophages كبيرة ( أنه مقاوم لتطور مرض السل بمقتضي احتوائه بمقدار فعال من استجابة خلية 7 للمتفطرة السلية بمعني ؛ خالي بشكل جوهري من أعراض المرض ) . يتم تمييز هولاء الأشخاص بناءا على ) tuberculosis proteins استجابة إيجابية لاختبار الجلد داخل الأدمة بشكل قوي لبروتينيات السل مم قطر تصلب ) و غياب أي علامات أو أعراض لمرض ٠١ (أي ؛ ما تزيد عن حوالي (PPD © وخلايا 3 وملتهمات جراثيم كبيرة مشتقة من أشخاص NK السل . قد يتم تحضير خلايا 7 وخلايا . ذوي مناعة للمتفطرة السلية باستخدام طرق معروفة لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال بمعني ؛ خلايا دم أحادية النواة ( PBMCS على سبيل المثال ؛ قد يتم استخدام مستحضر من محيطية ) بدون فصل إضافي لخلايا المكون . عموما يمكن تحضير 7131405 ؛ على سبيل نيويورك ) . كذلك ٠ المثال؛ باستخدام الطرد المركزي للكثافة خلايا "710017 ” ( معامل وينفروب ٠ ٠ PBMCs قد تتم تنقية خلايا 7 للاستخدام في المعايرات الموصوفة في السياق الحالي مباشرا من- 117 A person who is immune to Mycobacterium tuberculosis is the person who is aware of . large macrophages (it is resistant to the development of tuberculosis by virtue of containing an effective amount of the 7-cell response to Mycobacterium tuberculosis, meaning; essentially free of symptoms of the disease). These subjects are distinguished based on tuberculosis proteins (strongly positive intradermal skin test response to tuberculosis proteins (mm diameter sclerosis) and absence of any signs or symptoms of disease 01 (i.e. more than about PPD©) and cells 3 and macrophages derived from NK-tuberculosis subjects.7 and 7 cells immunocompromised to Mycobacterium tuberculosis may be prepared using methods known to those of ordinary skill in the art, viz., blood mononuclear cells (PBMCS) for example A preparation may be used from peripheral cells (without additional separation of constituent cells. Generally 7131405; for example New York) can be prepared. Also 0 for example using density centrifugation of “710017” cells (Winfrop coefficient 0 0 PBMCs 7 cells may be purified for use in the titrations described in the present context directly from
TR dibs Sf phate lig aim Jail) jae T 4s a على نحو بديل ¢ قد يستخدم الفعالة بالنسبة لبروتينات متفطرة مستقلة . قد يتم تكوين نسائل خلية 7 هذه بواسطة ؛ على سبيل -١ من أفراد ذوي مناعة للمتفطرة السلية باستخدام بروتينات متفطرة لمدة PBMCs المثال ؛ زراعة محددة بالبروتين المتفطر ؛ مؤديا إلى خط مؤلف T ؛ أسابيع . ويسمح ذلك فقط بتمدد خلايا 5 فحسب من هذه الخلايا . بعد ذلك قد يتم تشكيل نسائل لهذه الخلايا ثم اختبارها بالبروتينات 1 المستقلة ؛ بطرق معروفة لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال ؛ بغرض تحديد نوعية خلية بشكل مضبوط بدرجة أكثر . على وجه العموم ؛ أن مولدات المضاد التي كانت ايجابية الاختبار و | أو interferon-y إنتاج ٠ أي ) cytokine في المعايرات الخاصة بتكائر و/ أو إنتاج 8و / أو ملتهمات الجراثيم Way NK التي أجريت باستخدام خلايا 1 وخلايا ) interleukin-12 ٠TR dibs Sf phate lig aim Jail) jae T 4s a Alternatively ¢ may be used for independent mycobacterial proteins. These 7 cell clones may be formed by; For example, 1- From individuals with immunity to Mycobacterium tuberculosis using mycobacterial proteins for example PBMCs; culture defined with mycobacterial protein; leading to a T line; weeks. This allows only 5 of these cells to expand. Then clones of these cells may be formed and then tested with independent proteins 1; in ways known to those of ordinary skill in the field; In order to determine the quality of a cell more precisely. in general; that the antigens that were tested positive and | Or interferon-y 0 cytokine production in assays of bacteriophages and/or production of 8 and/or phagocytes Way NK conducted using interleukin-1 cells and interleukin-12 0 cells.
١“ _ الكبيرة macrophages المشتقة من شخص ذو مناعة للمتفطرة السلية تدرك على انها مولدات لمناعة . قد يتم أجراء معايرات كهذه ؛ على سبيل المثال ؛ بالإجراءات التمثيلية الموصوفة أدناه . قد يتم تمييز أجزاء مولدة المناعة من مولدات المضاد المذكورة باستخدام معايرات مشابهة ء وقد يتم عرضها في نطاق متعددة الببتيدات polypeptides الموضحة في السياق الحالي . © يتم تقييم قدرة متعدد الببتيد ( على سبيل المثال ؛ مولد المضاد أو جزءٍ أو أشكال متغايرة أخر عنه بغرض حث تكائر Stimulation of proliferation )408 بواسطة تلامس الخلايا ( على سبيل Ja ؛ خلايا 7 و/أو خلايا (NK بالببتيد وقياس تكاثر الخلايا . على وجه العموم ؛ يتراوح مدى كمية متعدد البيتيد التي تعد كافية لتقييم حوالي ٠١ م خلايا من حوالي ٠١ نانوجرام / مل إلى حوالي ٠٠١ ميكروجرام/ مل وعلى نحو مفضل يقدر بحوالي على نحو نموذجي تجري حضانة ٠ متعدد الببتيد incubation of polypeptide مع الخلايا في درجة حرارة TV درجة مئوية لمدة تقدر بحوالي ستة أيام . تلي الحضانة بمتعدد الببتيد ٠» معايرة الخلايا للاستجابة التكاثرية ؛ التي قد يتم تقييمها بطرق معروفه لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال ؛ مثل خلايا كاشفة لنبضة تيميدين موسوم بالأشعة exposing cells to a pulse of radiolabeled thymidine و قياس اندماج الوسم في DNA خلوي measuring the incorporation of label into cellular DNA . عموما « Vo يتم إدراك متعدد الببتيد polypeptide الذي يؤدي إلى زيادة مقدرة بثلاثة إضعاف على الأقل في الخلفية المذكورة أعلاه عن التكاثر ( أي التكاثر الملحوظ بالنسبة للخلايا المزروعة بدون متعدد الببتيد (polypeptide لتكون قادرة على حث التكائر ٠ induce proliferation قد يتم تقييم قدرة peptide على حث إنتاج interferon-y و /أو interleukin-12 في الخلايا بواسطة تلامس LOA مع peptide ثم قياس مستوي interferon-y أو interleukin-12 المنتج بالخلايا- ٠٠ على وجه العموم ¢ Tobi مدي كمية 002م»م التي كافية لتقييم حوالي ٠١ خلية من حوالي ٠١1” _ macrophages derived from a person with immunity to Mycobacterium tuberculosis are recognized as immunogens. Such calibrations may be made; For example ; with the representative procedures described below. The immunogenic fragments of these antigens may be distinguished using similar assays and may be shown in the range of polypeptides described in the present context. © The ability of a polypeptide (eg antigen or other fragment or variants thereof) to induce Stimulation of proliferation (408) is assessed by cell contact (eg Ja7 cells and/or NK cells). In general, the range of polypeptide quantity considered sufficient to assess about 10 m cells ranges from about 10 ng/mL to about 100 µg/mL and preferably estimated at approx. Incubation of the polypeptide with the cells at TV temperature °C for an estimated period of about six days Followed by incubation with the polypeptide 0 titration of the cells for the proliferative response, which may be assessed by methods known to those with ordinary skill in This field, such as exposing cells to a pulse of radiolabeled thymidine, and measuring the incorporation of label into cellular DNA. A polypeptide that leads to an estimated increase of at least threefold in the aforementioned background than proliferation (i.e., the proliferation observed for cells cultured without the polypeptide to be able to induce proliferation) The ability of the peptide to induce proliferation may be evaluated. Production of interferon-y and/or interleukin-12 in cells by contacting LOA with a peptide and then measuring the level of interferon-y or interleukin-12 produced in cells - 00 overall ¢ Tobi range of 002 µm is sufficient to evaluate about 10 cells from about 10
— ١ ميكروجرام/ ٠١ ميكروجرام / مل وتكون على نحو مفضل حوالي ٠٠١ نانوجرام / مل إلى حوالي ؛ لكنه لا يحتاج لذلك ؛ على داعم صلد ¢ مثل خرزة أو كرية polypeptide مل . قد يتم تثبيت 1744174 دقيقة قابل للتحلل الحيوي ؛ مثل الموصوفة في براءة الاختراع الأمريكية رقم مع incubation of polypeptide و07581504 على نحو نموذجي تجري حضانة متعدد الببتيد incubation with درجة مئوية لمدة ستة أيام » تلي الحضانة مع الببتيد ١ الخلايا في درجة حرارة © أو واحدة أو اكثر ( interleukin-12 و/أو interferon-y معايرة الخلايا بالنسبة ل » polypeptide والذي قد يتم تقييمه بطرق معروفة » one or more subunits thereof من الوحدات الفرعية منه enzyme- لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال ¢ مثل معايرة سوربنت مناعي مرتبط بالأنزيم ؛ معايرة حيوية 11-12 P70 وحدة فرعية Alla أو في linked immunosorbent assay (ELISA) الذي يؤدي إلى إنتاج polypeptide مثل معايرة قياس تكاثر خلايا 1 . على وجه العموم « يعتبر Ve "٠١-5٠١ لكل مل مادة طافية مزروعة ) محتوية على interferon-y بيكوجرام على الأقل من ٠ الذي بحث على polypeptide يعتبر « interferon-y خلية 7 لكل مل) ذو قدرة على حث إنتاج ؛ و/أو على الأقل 11-12 770 subunit بيكوجرام / مل على الأقل من الوحدة الفرعية ٠١ إنتاج ملتهمات جراثيم كبيرة "٠١ لكل » 1112 240 subunit بيكوجرام / مل من الوحدة الفرعية ٠— 1 µg/10 µg/mL preferably about 100 ng/mL to about ; But he does not need that; On a rigid support ¢ such as a polypeptide bead or globule mL. 1,744,174 biodegradable minutes may be installed; As described in US Patent No. 07581504 with incubation of polypeptide 07581504 typically conducts polypeptide incubation with 1°C for six days »following incubation with 1% of cells at 1°C, 1°C, or more (interleukin-12 and/or interferon-y) titration of cells for "polypeptide which may be evaluated by known methods" one or more subunits thereof of its enzyme subunits - for those with normal skill in This domain ¢ as an enzyme-linked immunosorbent assay; a bioassay of 11-12 p70 Alla subunit or in a linked immunosorbent assay (ELISA) triggering polypeptide production as a cell proliferation assay1. In general, “Ve” 01-501 per ml culture supernatant (containing at least 0 pg of interferon-y on a polypeptide is considered “interferon-y 7 cells per ml) of Capable of inducing the production of; and/or at least 11-12 770 subunit pg/ml of at least subunit 01 production of macrophages "01 per" 1112 240 subunit pg/ml from subunit 0
IL- على انه قادر على حث إنتاج ) PBMC ”٠١* 3 (أو لكل BLA Jf macrophages ٠6 12 عموما ؛ تعد مولدات المضاد للمولد المناعي هي تلك مولدات المضاد التي تحث على التكاثر خلايا T و/أى 12-سصفله1161 ) في خلايا interferon-y بمعني ؛ إنتاج ( cytokine أو إنتاج / على الأقل 7 Yo المشتقة من حوالي macrophages كبيرة alia و/أو ملتهمات 3 Wa (NK أفراد ذوي مناعة للمتفطرة السلية . من بين مولدات المضاد ذات المولد المناعي ؛ قد يتم تمييز pe ٠ ذات الخصائص العلاجية الفائقة اعتمادا على مقدار الإستجابات polypeptides متعددة الببتيداتIL- is capable of inducing the production of (PBMC “01*3) or per BLA Jf macrophages 06 12 Generally; immunogenic antigens are those antigens that induce the proliferation of T cells and/or Ie 12-SSFLA 1161) in interferon-y cells, meaning; cytokine production or production of at least 7 Yo derived from about alia large macrophages and/or 3 Wa phages (NK) immune individuals to Mtb. Among immunogenic antigens; PE 0 with superior therapeutic properties may be distinguished depending on the amount of responses Polypeptides Polypeptides
he — في المعايرات المذكورة أعلاه واعتمادا على النسبة المئوية للأفراد الذين من أجلهم يتم ملاحظة الاستجابة . بالإضافة إلى ذلك ؛ سوف لا تحث مولدات المضاد المتميزة بخصائص علاجية قائقة superior therapeutic properties على التكاثر و / أو إنتاج cytokine أنابيب الاختبار في خلايا مشتقة من ما يزيد عن حوالي Yo 7 من الأفراد الذين ليسوا ذوي مناعة للمتفطرة السلية ؛ ٠ بذلك إزالة الاستجابات التي لا تؤدي على وجه التخصيص إلى خلايا مستجيبة للمتفطرة السلية . تتميز تلك مولدات المضاد التي تحث على استجابة بنسبة مثوية مرتفعة من مستحضرات خلية 1 ¢ خلية NK ؛ خلية 3 و / أو ملتهمات جراتيم كبيرة macrophages من أفراد ذوي مناعة للمتفطرة السلية ( بحدوث منخفض من الاستجابات في مستحضرات خلية من أشخاص آخرون ) بخصائص علاجية فائقة ٠ superior therapeutic properties ٠ كذلك قد يتم تمييز مولدات المضاد ذات الخصائص العلاجية الفائقة Antigens with superior lly therapeutic properties على قدرتها على التقليل من حدة العدوي بالمتفطرة السلية في حيوانات التجريبية experimental animals ¢ عندما تم إعطائها على هيئة لقاح vaccine يتم وصف مستحضرات لقاح مناسبة للاستخدام على حيوانات تجريبية experimental animals بالتفصيل فيما يلي . قد يتم تحديد الفعالية اعتمادا على قدرةٍ مولد المضاد بحيث يوفر على الأقل No حوالي 50 7 انخفاض في إعداد البكتريا و/أو على الأقل حوالي ٠ 7 نقص في نسبة الوفيات تالي للإصابة بالعدوى التجريبية . تتضمن حيوانات تجريبية experimental animals مناسبة الفئران mice وخنازير guinea pigs Lie والحيوانات الرئيسية ( رتبة من الثدييات ) ٠ ؟- فصل تسلسلات تشفير ٠ isolation of coding sequences يتعلق الاختراع الحالي أيضا بجزيئات حمض نووي nucleic acid molecules التي تشفر متعدد Ye ببتيدات اندماج fusion polypeptides للمتفطرة السلية . في نموذج محدد بطريقة المثال في مقطعhe — in the above calibrations and depending on the percentage of subjects for whom the response is observed. in addition to ; Antigens with superior therapeutic properties will not induce multiplication and/or cytokine production in test tubes in cells derived from no more than about Yo 7 individuals who are not immune to M. tuberculosis; 0 thereby removing responses that do not specifically result in Mtb-responsive cells. These response-inducing antigens are characterized by a high homozygous ratio of 1¢ NK cell preparations; 3-cell and/or macrophages from individuals with immunity to Mycobacterium tuberculosis (with a low incidence of responses in cell preparations from other subjects) with 0 superior therapeutic properties Antigens with therapeutic properties may also be distinguished Antigens with superior lly therapeutic properties on their ability to reduce the severity of infection with Mycobacterium tuberculosis in experimental animals ¢ When it was given in the form of a vaccine, vaccine preparations suitable for use on experimental animals are described. In detail below. Efficacy may be determined depending on the antigenic potential to provide at least a 7 50 reduction in bacterial population and/or at least 7 0 decrease in mortality following experimental infection. Suitable experimental animals include mice, guinea pigs, Lie and primates (order of mammals) 0?-0 isolation of coding sequences The present invention also relates to nucleic acid molecules acid molecules that encode multiple Ye fusion polypeptides of Mycobacterium tuberculosis. In a specific form in the manner of an example in a clip
١١ - - 1 ¢ أدناه ؛ يتم تشييد ثلاثة عشر تسلسلات تشفير اندماج للمتفطرة السلية . وفقا للاختراع الحالي ؛ يمكن استخدام أي تسلسل تيكلوتيد nucleotide sequence الذي يشفر تسلسل حمض أميني amino acid sequence لبروتين اندماج fusion protein بغرض تكوين جزيئات مأشوبة generate recombinant molecules التي توجه التعديل الجيني لتسلسل التشفير coding sequence . © من أجل تشكيل نسائل لتسلسلات تشفير بالطول تام clone full-length coding sequences أو أشكال متغيرة متجانسة لتوليد متعدد نيكلوتيدات اندماج homologous variants to generate the polynucleotides 119108 مسابير ) مجسات ) DNA موسوعة من أي جزء لتسلسلات النيكلوتيد nucleotide sequences أو مكملاتها التي تم الكشف عنها في السياق الحالي بغرض ترشيح dc gana مجينية screen a genomic أو cDNA مصنوعة من سلالات متعددة للمتفطرة السلية ٠ لتمييز تسلسل التشفير لكل مكون مستقل . كذلك قد يجري فصل تسلسلات التشفير بواسطة تفاعلات سلسلة بوليمراز polymerase chain reactions (PCR) باستخدام اثنان من تجمعات مادة اوليجونيكلوتيد بطانية منحلة oligonucleotide primer pools مصممة على قاعدة من تسلسلات تشفير coding sequences التي تم الكشف عنها في السياق الحالي . كذلك يتعلق الاختراع بفصل أو تنقية متعدد نيكلوتيدات لتسلسلات نيكوتيد purified polynucleotides complementary Yeo بأرقام تعريف تسلسل ١و "١و #وو او قو ١١و SY داو “١و 434 ١7و 77و pe YO توفير متعدد تيكلوتيد الذي يهجن polynucleotides that selectively hybridize إلى تسلسل من أرقام تعريف تسلسل ١ و ”و دو لاو 1و AVY ١١او5١او ١7و "7١و Yo أو تسلسلها المكتمل تحت ظروف JB صرامة ويشفر بروتين الذي يحتفظ بالمولدة المناعية لبروتينات الاندماج من أرقام تعريف التسلسل : ١و كو أو VT sh ٠ و4١ و ١و 18 و 40 77و 74و YT بطريقة المثال وليس الحصر ؛ تكون حالات11 - - 1 ¢ below; Thirteen fusion coding sequences of Mycobacterium tuberculosis are constructed. According to the present invention; Any nucleotide sequence that encodes an amino acid sequence of a fusion protein can be used to generate generate recombinant molecules that direct genetic modification of the coding sequence. © For the formation of clones of clone full-length coding sequences or homologous variants to generate the homologous variants to generate the polynucleotides 119108 probes (probes) encyclopedia of DNA from any part of the nucleotide sequences nucleotide sequences or their complements disclosed in the present context for the purpose of filtering a genomic dc gana Screen a genomic or cDNA made from multiple strains of M. tuberculosis 0 to characterize the coding sequence for each independent component. Separation of coding sequences may also be done by polymerase chain reactions (PCR) using two degenerate oligonucleotide primer pools designed on the basis of the coding sequences disclosed in the present context. The invention also relates to the separation or purification of polynucleotides of purified polynucleotides complementary Yeo sequences with sequence identification numbers 1, 1, #wu or gu 11, SY daw 1, 434 17, 77 and pe YO providing a polyteclotide polynucleotides that selectively hybridize to a sequence of sequence IDs 1, “F de Lao 1, AVY 11, 51, 17, 71” and Yo or their completed sequences under stringent JB conditions and encode a protein that retains immunogenicity of fusion proteins of sequence identification numbers: 1, ko or VT sh 0, 41, 1, 18, 40 77, 74, and YT by way of example but not limited to; be cases
- Y= ؛ أجراءات الجمعية ٠58٠ Shilo , Weinberg تمثيلية أقل صرامة كما يلي (أنظر أيضاً الصفحات 1797-7784 ) : تحضر : VA الاكاديمية الدولية . الولايات المتحدة الأمريكية العدد درجة مئوية في محلول متضمنا 4٠ لمدة 7 ساعات في درجة حرارة DNA مرشحات محتوية على- Y =; The Society's procedures, 0580 Shilo, Weinberg, representative, less stringent, are as follows (see also pp. 1797-7784): Attending: VA International Academy. United States of America Number of °C in solution containing 40 for 7 hours at temperature DNA containing filters
Tris-HCl Tris-HCl مليمول تريس -حمض هيدروكلوريك ٠٠ و 25907 و formamide / 6Tris-HCl Tris-HCl mmol Tris-HCl 00, 25907 and formamide / 6
Ficoll من ١-١ PVP من +.) EDTA مليمول من © 5(V.0 pH بتركيز هيدروجيني ( ©Ficoll of 1-1 PVP of EDTA + .) mmol of © 5(V.0 pH pH (©)
Asse denatured salmon لنظفة سلمون DNA ميكروجرام /مل من 5٠٠ من 858و 7 ١ و في نفس المحلول بالتعديلات التالية Hybridizations الصفحات الطبيعية . تجري عمليات التهجين ميكروجرام/مل من ٠٠١ و آر ء 7 388 و Ficoll 7 تلاط و ا..ء J v.nY يتم استخدام : وزن / حجم ) و مسبار ( 7٠١ dextran sulfates denatured salmon نظفة سلمون DNA بقاس ميك لا دورة لكل دقيقة . يجري تحضين المرشحات 2p labeled probe موسوم ٠ ساعة في ١-١8 لمدة hybridization mixture في خليط التهجين | Filters are incubated ساعة في درجة حرارة 00 درجة مئوية في ١ درجة مئوية وتغسل بعد ذلك لمدة عر ٠ درجة حرارة بتركز ( Tris-HCI مليمول من تريس-حمض هيدروكلوريك Yo محلول محتوي على 550 27 و ويتم استبدال محلول الغسل . SDS 7 ١١و 8078 و © مليمول من ( Vf pH هيدروجيني درجة مئوية . تنشف ٠١ بمحلول حديث الصنع ثم يتم تحضنة لمدة 50 إضافية في درجة حرارة 10 إذا كان ضروريا . autoradiography المرشحات حتى تجف ثم تعرض للتصوير بالإشعاع الذاتي درجة مئوية ويعاد تعريضها للفيلم . تعد TA تغسل المرشحات لمرة ثلاثة في درجة حرارة 10 إلى ٠ ظروف أخرى أقل صرامة التي قد تستخدم معروفة جيدا في هذا المجال ( على سبيل المثال ؛ كما من النوع employed for cross-species hybridizations هو مستخدم لعمليات التهجين المستعرض). ٠Asse denatured salmon of clean salmon DNA μg/ml of 500 of 858, 7 and 1 in the same solution with the following modifications Hybridizations natural pages. Hybridizations are carried out μg/ml of 001, R 7 388 and Ficoll 7 slurry and J v.nY. W/V (and probe) 701 dextran sulfates are used. denatured salmon clean salmon DNA measured by MEK no cycle per minute Filters are incubated 2p labeled probe labeled 0 hours in 1-18 hours for hybridization mixture | At a temperature of 00 ° C at 1 ° C, and then washed for a period of 0 °C with a concentration of (Tris-HCI mmol of Tris-HCl) a solution containing 27 550 F, and the solution is replaced Washing SDS 7 11, 8078 and © mmol Vf pH pH 10°C Dry with fresh solution then incubate for an additional 50 minutes at 10° if necessary. autoradiography Filters are allowed to dry and then autoradiated at °C and re-exposed to the film TA Filters are washed three times at 0 to 10 °C Other less stringent conditions that may be used are well known in the field (eg; as The type employed for cross-species hybridizations is used for cross-species hybridizations).
CA - في نموذج مفضل أخر ؛ يتم توفير متعدد نيكلوتيد polynucleotide الذي يهجن إلى تسلسل التشفير من أرقام تعريفات التسلسلات : ١و “و 50 7و 53 ١١و ١و 10 NUS ١ | و ؟؟ و Yo أو تسلسلها المكمل تحت ظروف عالية الصرامة ويشفر بروتين الذي يحتفظ بالمولدة المناعية لبروتينات الاندماج من أرقام تعريفات التسلسلات : 7و ؛و 7١و 4و ١٠و ١7 © و ١4 و 11 و ١18 و 7٠ و 77 و 4" و YT بطريقة المثال وليس التحديد ؛ تكون ظروف تمثيلية عالية الصرامة كما يلي يجري تهجين مسبق لمرشحات متضمنة DNA لمدة A ساعات لمدة ليلة في درجة حرارة 10 درجة مئوية في محلول منظم مؤلف من SSC * 6 و 5٠ مليمول من تريس-حمض هيدروكلوريك Tris-HCl (بتركيز هيدروجيني pH 7.9 ) و١ مليمول من EDTA و SPVP/ «oY 1101777 و 7+ 388و 5٠٠١ ميكروجرام/مل من DNA لنظفة ٠ سلمون Algae denatured salmon الصفات الطبيعية . تهجن مرشحات لمدة EA ساعة في درجة حرارة 15 درجة مئوية في خليط مهجن مسبقا محتوي على ٠٠١ ميكروجرام/مل من DNA لنطفة سلمون denatured salmon محولة الصفات الطبيعية و .3 ١٠١ x دورة لكل Ady من مسبار موسوم labeled probe -0 . يجري غسل المرشحات في درجة حرارة TV درجة مئوية لمدة ١ ساعة في محلول متضمنا 2X SSC 5 كت Ficoll Z ١ 3PVP و ).++ BSA Z . ويتبع ذلك بالغسل في ).4 x 880 في درجة حرارة ٠ درجة مئوية لمدة £0 دقيقة قبل التصوير بالإشعاع الذاتي autoradiography . تعد ظروف أخرى Ade الصرامة التي قد يتم استخدامها معروفة جيدا في المجال . كذلك في نموذج مفضل أخر ؛ يتم توفير متعدد نيكلوتيد polynucleotide الذي يهجن إلى تسلسل تشفير من أرقام تعريفات التسلسلات : ١و “و #ولاو 59 ١١و “١و *١و 7١و 1١و 7١ Y. و ؟؟ و Yo أو تسلسلها المكمل تحت ظروف متوسطة الصرامة ويشفر بروتين الذي يحتفظ بالمولدة المناعية لبروتينات الاندماج من ارقام تعريفات التسلسلات : 7 و 4 و أو 4و ١٠و ١١CA - in another preferred form; A polynucleotide that hybridizes to the coding sequence is provided by the sequence identification numbers: 1, 50 7, 53 11, 1, 10 NUS 1 | and ?? and Yo or its complementary sequence under highly stringent conditions and encodes a protein that maintains immunogenicity to fusion proteins Sequence ID numbers: 7, 71, 4, 10, 17©, 14, 11, 118, 70 and 77, 4" and YT by way of example and not by limitation; highly rigorous representative conditions are as follows. Filters containing DNA are pre-hybridized for 1 hour overnight at 10 °C in a buffer solution of SSC * 6, 50 mmol of Tris-HCl (pH 7.9), 1 mmol of EDTA, SPVP/ “oY 1101777, 7+388, 5001 μg/ ml of DNA of 0 clean Algae denatured salmon normal traits EA filters were hybridized for 1 hour at 15 °C in a pre-hybridized mixture containing 100 μg/ml DNA of salmon sperm denatured salmon from normal transduced salmon and 3.101 x cycles per Ady of a labeled probe -0. Filters washed at TV °C for 1 hour in a solution containing 2X SSC 5 ct Ficoll Z 1 3PVP and .++ BSA Z. This is followed by washing at .4 x 880 at 0°C for 0£0 min prior to autoradiography. . Other conditions Ade rigor in which it may be used are well known in the art. Also in another preferred model; A polynucleotide that hybridizes to a coding sequence is provided from the sequence identification numbers: 1, “, #59, 11, #1, 1*, 71, 11, 71 Y., and ?? and Yo or its complementary sequence under moderately stringent conditions and encodes a protein that maintains immunogenicity to fusion proteins Sequence identification numbers: 7, 4, 4, 10, and 11
YayYay
- ١١ تكون ظروف تمثيلية متوسطة الصرامة YT و ١7و 77 و 74و ١18 و ١1١ و ١ و كما يلي . تجري معالجة مسبقة لمرشحات Exemplary conditions of moderate stringency ساعات في درجة حرارة 85 درجة مثوية في محلول متضمنا ١ لمدة DNA محتوية على Filters ميكرو جرام /مل من ٠٠١ 508و Jo و 10608718 solution و محلول درنهارت 6X SSC محولة الصفات الطبيعية . تجري عملية التهجين في denatured salmon لنطفة سلمون DNA © -م32 labeled probe دورة لكل دقيقة من مسبار موسوم Vex ١. نفس المحلول ويتم استخدام لمدة hybridization mixture في خليط تهجين Filters are incubated تحتضن المرشحات . ٠١ دقيقة في "٠ ساعة في درجة حرارة 86 درجة مئوية وبعد ذلك تغسل مرتين لمدة 70-١ تنشف المرشحات حتى تجف SDS 70.١ و ١ x SCC درجة مئوية في محلول محتوي على تعد ظروف أخرى متوسطة الصرامة التي . autoradiography وتعرض للتصوير بالإشعاع الذاتي ٠ درجة VY قد يتم استخدامها معروفة جيداً في هذا المجال . يجري غسل المرشحات في درجة حرارة . 8057 +.) ”2و SSC ساعة واحدة في محلول متضمنا sad مثوية polypeptides encoded by the coding ؛- متعددة ببتيدات مشفرةٍ بواسطة تسلسلات تشفير /° ٠ sequences خاص بالاختراع الذي يشفر polynucleotide للاختراع ؛ قد يتم استخدام متعدد تيكلوتيد La, Ve أو أجزاء صغيرة منه أو مكافئات وظيفية منه بغرض توليد جزيئات fusion protein بروتين اتدماج مأشوبة التي توجه القدرة على التعديل الجيني لبروتين nucleic acid molecules حمض نووية الاندماج أو أجزاء صغيرة منه أو مكافئات وظيفية منه خلايا عائل مناسبة . قد يتم تغير منتجات كهذه ؛ بواسطة المعالجة polynucleotides متعدد ببتيد الاندماج المشفرة بواسطة متعدد نيكلوتيدات ٠ molecular manipulation of the coding sequence الجزيئية لتسلسل التشفير ٠- 11 Medium stringent representative conditions YT, 17, 77, 74, 118, 111, 1 and are as follows. Exemplary conditions of moderate stringency filters are pretreated for 1 hour at 85°C in a solution including 1 μg/ml DNA containing Filters 001 μg/mL of 001 508 Jo and 10608718 solution And Dernhart's solution 6X SSC, normalized. Hybridization of a denatured salmon with a DNA© M32 labeled probe takes place one cycle per minute from a Vex 1 labeled probe. The same solution is used for the duration of the hybridization mixture in a hybridization mixture. Filters are incubated. 10 minutes at 0” hours at 86°C and then washed twice for 1-70 minutes. The filters are dried to dryness of 70.1 SDS and 1 x SCC in a solution containing Other moderately stringent conditions that autoradiography and 0° VY autoradiography may be used are well known in the field. Filters are washed at 8057 + .) and SSC 2 hours in . solution comprising sad epitopes Polypeptides encoded by the coding;- polypeptides encoded by /°0 coding sequences of the invention encoding the polynucleotide of the invention; La, Ve polytecolides or small portions may be used of it or functional equivalents thereof for the purpose of generating recombinant fusion protein molecules that direct the ability to genetically modify fusion nucleic acid molecules, small parts thereof, or functional equivalents thereof in appropriate host cells. 0 molecular manipulation of the coding sequence 0 molecular manipulation of the coding sequence
نتيجة للانحلال الملازم للرموز الجينات «Due to the inherent degeneracy of the genetic code قد يتم استخدام تسلسلات DNA أخرى التي تشفر على نحو جوهري نفس التسلسلات أو تسلسل حمض أميني amino acid sequence مكافئ من الناحية الوظيفية ؛ في المجال العملي للاختراع من أجل التعديل الجيني لمتعددة ببتيدات اندماج . تتضمن تسلسلات DNA كهذه تلك التسلسلات 8 التي تعد قادرة على التهجين إلى تسلسلات capable of hybridizing to the coding all sequences أو مكملاتها المكتشفة their complements disclosed في السياق الحالي تحت ظطظروف على درجة منخفضة أو متوسطة أو عالية الصرامة الموصوفة في المقطع 0 /7 ؛ ونفس المصدر السابق . تتضمن تسلسلات نيكلوتيد متغيرةٍ التي قد تستخدم وفقا للاختراع أوجه حذف أو إضافات أو ٠ استبدالات لأجزاء نيكلوتيد مختلفة متبقية مؤدية إلى تسلسل الذي يشفر نفس هذه التسلسلات أو منتج جين مكافئ من الناحية الوظيفية . قد يحتوى منتج الجين نفسه على أوجه حذف أو إضافات أو استبدالات لأجزاء حمض أميني متبقية ؛ والتي تؤدي إلى تغير خامد بالتالي إنتاج epitope مولد المضاد المكافئ من الناحية الوظيفية - يمكن أن يتم عمل بدائل الحمض الأميني الواقية المذكورة على أساس التشابه في القطبية والشحنة Ve والذوبانية وخاصية طردٍ الماء وخاصية ألفة الماء و /أو الطبيعية الممرضة المزدوجة للمتخلفات الموجودة . تشتمل الأحماض الأمينية السلبية الشحنة ¢ على سبيل المثال ؛ على aspartic acid «glutamic acid وتشتمل الأحماض الأمينية إيجابية الشحنة positively charged amino acids على histidine 3 lysine وعستطاعتة )و تشتمل الأحماض الأمينية ذات المجموعات الرأسية القطبية الغير مشحونة التي يكون لها قيم ألفة للماء متشابهة ١ على الأتي : glycine tyrosine 5 ¢ threonine 5 + serine 5 « glutamine y « asparaginey ٠ ؛» وتشمل الأحعماضDue to the inherent degeneracy of the genetic code, other DNA sequences that encode substantially the same sequences or a functionally equivalent amino acid sequence may be used; In the practical field of the invention for the genetic modification of fusion polypeptides. Such DNA sequences include those8 that are capable of hybridizing to the coding all sequences or their complements disclosed in the present context under the described low, medium or high stringency conditions. in segment 0/7; Same as the previous source. Variable nucleotide sequences which may be used according to the invention include deletions, additions or substitutions of different remaining nucleotide segments leading to a sequence encoding the same sequences or a functionally equivalent gene product. The gene product itself may contain deletions, additions, or substitutions of remaining amino acid segments; which lead to a dormant change thus producing an epitope Functionally equivalent antigen The mentioned protective amino acid substitutions can be made on the basis of similarity in polarity, charge, Ve, solubility, water repellency, hydrophobicity and/or dual pathogenicity of the residues existing. The negatively charged ¢ amino acids include for example; contains aspartic acid “glutamic acid.” Positively charged amino acids include histidine 3 lysine and its potential (amino acids with uncharged polar head groups that have similar affinity values for water include 1 The following: glycine tyrosine 5 ¢ threonine 5 + serine 5 « glutamine y « asparagine 0 ; It includes acids
: - ١ على amino acids with nonpolar head groups الأمينية ذات المجموعات الراسية الغير قطبية + tryptophan ¢ alanine, valine, isoleucine, leucine, phenylalanine, proline, methionine يمكن أن يتم تصميم تسلسلات النيوكليوتيد للاختراع لتبديل تسلسل تشفير بروتين الإدماج لعديد من النهايات التي تشتمل ؛ على سبيل المثال لا الحصر ؛ على التبديلات التي تعمل على معالجة وتعديل المنتج الجيني . يمكن على سبيل المثال أن يتم إدخال عمليات تحول باستخدام أساليب © معروفة جيداً في المجال ؛ مثل التبدل الخلقي الموجه حسب المكان ؛ لإدخال أماكن حصر جديدة؛ والفوسفات 0100810171800 ... الخ glycosylation patterns لتبديل نماذج معالجة بالجليكوسيل : يمكن في نموذج بديل للاختراع أن يتم تصنيع تسلسل تشفير بروتين الإدماج بصفة كلية أو بصفة: - 1 on amino acids with nonpolar head groups + tryptophan ¢ alanine, valine, isoleucine, leucine, phenylalanine, proline, methionine The nucleotide sequences of the invention can be designed to alter the coding sequence of the incorporation protein for a polymer of the endings that include; For example but not limited to ; On the alterations that work to process and modify the genetic product. Transformations can, for example, be introduced using © methods well known in the art; such as place-oriented congenital change; To insert new enclosures;
Caruthers « جزئية ؛ باستخدام طرق كيميائية معروفة في المجال . أنظر ؛ على سبيل المثال ٠ غل « Crea and Horn مندجض ات . v ؛ ندوة أبحات الأحماض النووية VAAL 6 وآخرون ؛ رسالة 1980 « Matteucci and Caruthers 7 ) ٠١ ( 4 أبحاث الأحماض النووية ؛ أبحاث 1981 « Chow and Kempe 24: ١١ Tetrahedron Letter رباعي الهدرون الأحماض النووية 4 (17) : 7817-7809 . ويمكن في طريقة بديله أن يتم إنتاج متعدد الببتيد amino acid sequence نفسه باستخدام طرق كيميائية لتصنيع تسلسل حمض أميني polypeptide ٠ بصفة كلية أو جزئية . يمكن على سبيل المثال ؛ أن يتم تصنيع الببتيدات بأساليب طور صلب يتم ( ٠ كسرها من الراتنج ؛ وتنقيتها بواسطة عملية فصل كروماتوجرافي سائل تحضيرية عالية الأداءCaruthers « partial; using chemical methods known in the field. Look ; For example, 0 Gel “Crea and Horn are attached. v; VAAL 6 Nucleic Acid Research Symposium and others; 1980 “Matteucci and Caruthers 7 (01) 4 Nucleic Acid Research; Its alternative is that the amino acid sequence polypeptide itself be produced using chemical methods to synthesize the polypeptide 0 amino acid sequence in whole or in part.For example, peptides can be synthesized by solid phase methods (0 broken from the resin; purified). By a preparative high-performance liquid chromatography process
Proteins Structures ؛ تركيبات البروتينات والأساسيات الجزيئية 1487 ٠, Creighton « أنظر .) 1-5. صفحات ٠ وشركته » نيويورك WH. Freeman ٠ And Molecular Principles يمكن أن يتم تأكيد تركيب الببتيدات المتعددة التصنيعية بتحليل أو ترتيب حمض أميني ( على ٠Proteins Structures; Protein Structures and Molecular Basics 0 1487, Creighton « See .] 1-5. Pages 0 and his company » New York WH. Freeman 0 And Molecular Principles The structure of synthetic polypeptides can be confirmed by amino acid analysis or sequencing (on 0
١ - ل سبيل المثال ؛ أجراء التحلل ل Edman « أنظر Creighton ؛ ٠١87 ؛ تركيبات البروتينات والأساسيات الجزيئية « WH.1- For example; Edman's decomposition procedure » See Creighton; 0187; Protein structures and molecular basics « WH.
Freeman وشركته ٠ نيويورك صفحات (EAE يمكن بالإضافة إلى ذلك ؛ أن يتم تحول تسلسل تشفير بروتين الإدماج خارج أو داخل الجسم ؛ لتصنيع و/أو تدمير تسلسلات التحويل والبدء create and/or destroy translation, initiation, sand/or termination sequences © /أو من أماكن نيوكلياز حصر جديدة أو تدمير الأماكن الموجودة من قبل ؛ لتسهيل عملية التعديل خارج الجسم . يمكن أن يشتمل ؛ على سبيل المثال لا الحصر ؛ على التبدل الخلقي معروف في المجال » و يشتمل ؛ على سبيل المثال لا الحصر ؛ على التبدل الخلقي الكيميائي ٠ والتبدل الخلقي الخارجي الموجه للمكان Hutchinson, C.) وآخرين ¢ ٠74 « جريدة الكيمياء الأحيائية Yor : 18251 ) ؛ واستخدام روابط 1437 (Pharmacia) ¢ وما ٠ شابه ذلك ؛ ومن المهم اللاتؤدي المعالجة إلى تدمير عملية تكوين المناعة لببتيدات ١ لإدماج المتعددة -fusion polypeptides يمكن بالإضافة إلى ذلك أن يتم إدخال أحماض أمينية غير تقليدية nonclassical amino acids أو - نظائر حمض أميني كيميائي chemical amino acid analogs كبديل أو إضافة إلى التسلسل . Jos الأحماض الأمينية الغير تقليدية ؛ على سبيل المثال لا الحصر ؛ على D-isomers Ve للأحماض الأمينية مشتركة common amino acids : a-amino isobutyric acid, 4-aminobutyric acid, Abu, 2-amino butyric acid, y-Abu, €- Ahx, 6-amino hexanoic acid, Aib, 2-amino isobutyric acid, 3-amino propionic acid, ornithine, norleucine, norvaline, hydroxyproline, sarcosine, citrulline, cysteic acid, t- butylglycine, t-butylalanine, phenylglycine, cyclohexylalanine, B-alanine, fluoro-aminoFreeman et al., NY, 0 pages (EAE) In addition, the coding sequence for the incorporation protein can be transformed outside or inside the body to create and/or destroy translation, initiation, sand/or termination sequences © / or from new restriction nuclease sites or the destruction of pre-existing ones to facilitate the process of modification outside the body It may include, but is not limited to, congenital alteration known in the field »and includes, for example Hutchinson, C.) et al. (Hutchinson, C.) et al. ¢ 074 « Journal of Biochemistry Yor : 18251 ] ; use of 1437 (Pharmacia) ¢ links and the like; It is important that the treatment does not lead to the destruction of the immune formation process for 1 peptides to incorporate multiple -fusion polypeptides. In addition, nonclassical amino acids or chemical amino acid analogs can be introduced as an alternative or Add to the sequence. Jos non-traditional amino acids; For example but not limited to ; On the Ve D-isomers of common amino acids: a-amino isobutyric acid, 4-aminobutyric acid, Abu, 2-amino butyric acid, y-Abu, €- Ahx, 6- amino hexanoic acid, Aib, 2-amino isobutyric acid, 3-amino propionic acid, ornithine, norleucine, norvaline, hydroxyproline, sarcosine, citrulline, cysteic acid, t-butylglycine, t-butylalanine, phenylglycine, cyclohexylalanine, B -alanine, fluoro-amino
ET acids, designer amino acids such as B-methyl amino acids, Ca-methyl amino acids, ول methyl amino acids, ونظائر الحمض الأميني بصفة عامة . يمكن بالإضافة إلى ذلك أن يكون الحمض الأمين -D (dextrorotary) or بآ (levorotary) يتم في أحد النماذج الخاصة للاختراع توصيل تسلسلات التشفير لكل مستضد في بروتين الإدماج 0 الخاص بهم عن طريق رابطة amino- or carboxy-terminus عند طرف الامينو أو الكربوكسي بأي ترتيب . ويمكن في طريقة بديلة أن يتم استخدام تسلسل رابط الببتيد peptide linker ببتيد لفصل الببتيدات المتعددة المفردة التي تعمل على تكوين ببتيد إدماج متعدد بمسافة كافية للتأكد من أن كل من الببتيدات المتعددة قد تم طيه إلى تركيب ثنائي وثلاثي ؛ والذي يؤدي إلى زيادة كفاءته المستفده لمنع وعلاج الدرن . ويتم دمج تسلسل رابط الببتيد المذكور في بروتين الإدماج باستخدام ٠ أساليب قياسية معروفة جيداً في المجال. ويمكن أن يتم اختيار تسلسلات رابط الببتيد المناسبة وفقا عدم مقدرتهم على استيعاب (Y) قدرتهم على استيعاب عملية تأكيد مرنة ممتدة )١( للعوامل الاتية تركيب ثانوي يمكن أن يتفاعل مع عوامل تحديد مستضد وظيفية على الببتيدات المتعددة الأولى و تحديد alse الثانية ؛ )1( نقص المتخلفات الطاردة للماء أو المشحونة التي يمكن أن تتفاعل مع 017 المستضد الوظيفية للببتيدات المتعددة . تحتوي تسلسلات رابط الببتيد المفضلة على متخلفات Vo و Thr Jie ويمكن أن يتم أيضا استخدام أحماض أمينية قريبة متعادلة أخري . Ser و Asn و في تسلسل الرابط . تشتمل تسلسلات الحمض الاميني التي يمكن استخدامها كروابط ؛ على Ala التسلسلات التى تم الكشف عنها في ماراتيا وأخرين ؛ جين 460: 41-79 1185 ؛ وميرفيET acids, designer amino acids such as B-methyl amino acids, Ca-methyl amino acids, methyl amino acids, and amino acid analogues in general. The amino acid may additionally be D- (dextrorotary) or B (levorotary). In one particular embodiment of the invention, the coding sequences of each antigen are connected to their insertion protein 0 by means of an amino- or carboxy- bond. terminus at the amino or carboxy terminus, in any order. In an alternative method, a peptide linker peptide sequence can be used to separate the single polypeptides forming the poly-integration peptide by a sufficient distance to ensure that each of the polypeptides has been folded into a binary and triploid structure; Which leads to an increase in its beneficiary efficiency to prevent and treat tuberculosis. Said peptide-binding sequence is incorporated into the fusion protein using 0 standard methods well known in the art. The selection of appropriate peptide-binding sequences can be made according to their inability to internalize (Y) their ability to internalize an extended flexible confirmation process (1) for the following factors a secondary structure that can interact with functional antigen-determining factors on the first multiple peptides and specifying the second alse; (1) lack of hydrophobic or charged residues that can interact with 017 antigen-functional polypeptides. Preferred peptide-binding sequences contain Vo and Thr Jie residues and can also be Use of other near neutral amino acids Ser, Asn, and in the linker sequence Amino acid sequences that can be used as linkers include Ala sequences disclosed in Maratia et al. Gene 460:41-79 1185 and Murphy
CAVIY=AYOA : AY الولايات المتحدة الأمريكية « Proc. Natl وأخرين » العلوم الأكاديمية في . 5791176 وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 497087 وبراءة الاختراع الأمريكية رقم » ١1817 ٠CAVIY=AYOA : AY United States of America « Proc. Natl et al. » Academic Science in . 5791176 and US Patent No. 497087 and US Patent No. » 11817 0
١ ل ويمكن أن يكون طول تسلسل الرابط من ١ إلى حوالي ٠5٠ من الأحماض الأمينية . ولا تكون تسلسلات الببتيد مطلوبة عندما تكون الببتيدات المتعددة الأولى والثانية بدون مناطق 11-<حمض أميني طرفي غير أساسية non-essential N-terminal amino acid ؛ والتي يمكن استخدامها لفصل المناطق الوظيفية ومنع التداخل التجسمي . يمكن على سبيل المثال ؛ أن يتم توصيل المستضدات © في بروتين إدماج بواسطة رابط متعدد مرن flexible polylinker مثل Gly-Cys-Gly أو Ser - Gly—Gly—Gly -والتكرار من ١-؟ مرات ay) وآخرين ¢ :+43 Natp.Acad.Scipro « الولايات المتحدة الأمريكية ٠١٠١-٠١ AY ) . يتم في أحد النماذج إنتاج مثل هذا البروتين بالتعديل الجيني المأشوب لحمض نووي مشفر للبروتين . ويمكن عمل منتج الإدماج المذكور بربط تسلسلات الحمض النووي المناسبة المشفرة ٠ التسلسلات الحمض الأميني المطلوب ببعضها البعض بواسطة طرق معروفة في المجال + في إطار التشفير الصحيح ؛ وإجراء تعديل جيني للمنتج بواسطة طرق معروفة في المجال . ويمكن في طريقة بديلة أن يتم عمل Jie هذا البروتين بواسطة أساليب بروتين صناعية ؛ على سبيل المثال ؛ باستخدم أداة تصنيع ببتيد . يمكن Lad أن تتم إضافة تسلسلات تشفير لجزيئات أخري cytokine Jie أو مادة مساعدة adjuvant ٠ ¢ إلى نيوكليوتيد الإدماج المتعدد fusion polynucleotide . ٠ << إنتاج بروتينات الاتدماج production of fusion proteins حتى يتم إنتاج بروتين إدماج المتفطره السلية الخاص بالإختراع ؛ يتم إدخال تشفير تسلسل النيوكليوتيد للبروتين أو ما يعادله وظيفيا داخل ناقل تعديل جيني ء أي ؛ الناقل الذي يحتوي على العناصر الضرورية لنسخ وتحويل تسلسل التشفير المدخل . يمكن أن يتم استخدام خلايا العائل أو "٠١ خطوط الخلية المصابة أو المحولة مع عوامل نقل تعديل جيني مأشوب في عديد من الإغراض ٠ م1 l and the length of the linker sequence can be from 1 to about 050 amino acids. Peptide sequences are not required when the first and second polypeptides are without non-essential N-terminal amino acid regions; Which can be used to separate functional areas and prevent stereoscopic overlap. can for example; that the © antigens are delivered into a fusion protein by a flexible polylinker such as Gly-Cys-Gly or Ser - Gly—Gly—Gly - and repeats of 1-? times (ay) et al. ¢ Natp.Acad.Scipro: +43 « USA 0101-01 AY ) . In one embodiment, such a protein is produced by recombinant genetic modification of protein-coding DNA. Said integration product can be made by joining the appropriate DNA sequences encoded by 0 amino acid sequences of interest to each other by methods known in the + domain in the correct coding framework; Genetic modification of the product by methods known in the field. Alternatively, Jie could be made of this protein by synthetic protein methods; For example ; using a peptide maker. Lad coding sequences for other molecules (cytokine Jie or an adjuvant 0¢) can be added to the fusion polynucleotide. 0 << production of fusion proteins until the Mycobacterium tuberculosis fusion protein of the invention is produced; A nucleotide sequence coding for a protein or its functional equivalent is inserted within a genetic modification vector ie; The carrier that contains the elements necessary to transcribe and transform the input coding sequence. Host cells or “01” infected or transformed cell lines with recombinant gene-modifying transfer factors can be used for a variety of purposes 0 m
Yo _ ~ وتشتمل هذه abe على سبيل المثال لا الحصر ؛ على إنتاج واسع القياس من بروتين الإدماج يمكن أن يتم استخدام الطرق المعروفة جيدا لذوي الخبرة في المجال لبناء عوامل نقل تعديل جيني تحتوي على تسلسل تشفير ادماج وإشارات تحكم نسخية / تحويلية . وتشتمل هذه الطرق على © أساليب DNA مأشوب خارج الجسم ؛ وأساليب صناعية و تأشب Jab الجسم/تأشب خلقي ( أنظر على سبيل المثال ؛ الأساليب التي تم وصفها في Sambrook وآخرين ٠ 19434 ؛ كتيب المختبر النسخ الجزيني Molecular Cloning A Laboratory Manual « مختبر ميناء all البارد ؛ نيويورك » 5 Ausubel وآخرين ؛ 1949 المراسم الجارية في الأحياء الجزيئية ؛ زملاء النشر Greene والعلوم البينية ل Wiley » نيويورك ٠ ويمكن أيضا أن تكون RNA القادرة على تشفير ٠ متعدد (Afiy مصنعة كيميائيا polypeptide may also be chemically synthesized ( طبعة جيت 6+ + تصنيع الاوليجونيوكليوتيد Oligonucleoide Synthesis » دار نشر (Oxford «IRL . —V fo / ٠ نظم قدرة التعديل الجيني expression systems من الممكن الاستعانة بتنوع من نظم ناقل قدرةٍ التعديل الجيني للعائل لأحداث تعديل جيني لتسلسل تشفير بروتين اندماج fusion protein . تتضمن هذه النظم ؛ على سبيل JU وليس الحصر ؛ ٠ كائنات دقيقة Jie البكتريا ) Sia اشريكية قولونية ((B.Subtilis « 7 coli محول بواسطة ملتهمة البكتريا المأشوبة DNA recombinant bacteriophage أو plasmid DNA أو نواقل قدرة التعديل الجيني Cosmid DNA محتوية على تسلسل تشفير أو خميرة ( مثلا Saccharomycdes « (Pichia محولة بواسطة نواقل قدرة التعديل الجيني للخميرة الماشوية محتوية على تسلسل تشفير ؛ نظم خلية حشرية مصابة بنواقل قدرة التعديل الجيني لفيروس مأشوب ( مثلاً « baculovirus ( ٠ محتوية على تسلسل تشفير ؛ نظم خلية نباتية مصابة بنواقل تعديل القدرة الجينية المأشوبة ( مثلاً لYo _ ~ This abe includes, but is not limited to; Upon mass production of an integron protein, well-known methods can be used by those with experience in the art to construct gene-modifying transfer factors containing integrin coding sequences and transcriptional/translational control signals. These methods include ex vivo recombinant DNA methods; synthetic methods and Jab body/congenital recombination (see, for example; the methods described in Sambrook et al. 0 19434; Molecular Cloning A Laboratory Manual, “All Cold Harbor Lab; New York » 5 Ausubel et al.; 1949 Current Ceremonies in Molecular Biology; Greene Publishing Fellows and Wiley Intersciences » New York 0 RNA capable of encoding multiple 0 (Afiy) can also be synthesized Chemically Polypeptide may also be chemically synthesized Among the vector systems with the ability of the host's genetic modification to effect genetic modification of the coding sequence of a fusion protein These systems include, but are not limited to: Jie microorganisms Bacteria (Sia) Escherichia coli (B Subtilis “7 coli” transformed by a DNA recombinant bacteriophage, plasmid DNA, or cosmid DNA gene-editing capacity vectors containing a coding sequence or yeast (eg Saccharomycdes “(Pichia) transformed by capacity vectors genetic modification of brewer's yeast containing coding sequences; Insect cell systems infected with recombinant virus modifier vectors (eg “baculovirus” 0) containing a coding sequence; plant cell systems infected with recombinant virus modifier vectors (eg baculovirus)
( TMV « tobacco mosaic virus ؛ فيروس فسيفسائي التبغ Camv ,Canliflower mosaic virus transformed with recombinant أو محولة بواسطة نواقل تعديل القدرة الجينية لبلازميد المأشوب محتوية على تسلسل تشفير أو نظم خلية (Ti plasmid Sie ) plasmid expression vectors( TMV «tobacco mosaic virus ; Camv ,Canliflower mosaic virus transformed with recombinant or transformed by recombinant plasmid expression vectors containing coding sequences or cell systems (Ti plasmid Sie ) plasmid expression vectors
CHO « COS خلايا Mia) containing a coding sequence; or mammalian cell systems ثديية تنتوع عناصر تعديل القدرة الجينية من حيث شدتها ومواصفاتها. . ) 333 «293 » BHK «© من الممكن استخدام » 1051/76010+ system utilized المستعمل JU اعتمادا على نظام العائل أي عدد من عناصر النسخ والتحول الملائمة ؛ المتضمنة مثيرات أساسية وقابلة للحث ؛ في ناقل القدرة على التعديل الجيني. مثلاً ؛ عند الاستتساخ في النظم البكتيرية ؛ من الممكن استعمال ؛ مثير Ptrp-lac مثير مختلط ( 2, plac, ptrp, ptac ملتهمة البكتريا PL مثيرات قابلة للحث مثل وما شابه ؛ عندما يكون الاستنساخ في نظم (cytomegalovirus promoter فيروس مضخم للخلايا Vo من الممكن استعمال المثيرات مثل معزز متعدد الوجوه + 1096© cell systems حشرية LA ؛ عندما يكون الاستنساخ في نظم خلايا نبات ؛ من الممكن استعمال مثيرات مشتقة baculovirous heat من مجين ( مجموعة العوامل الوراثية) من الخلايا النباتية ( مثلاً ؛ مثيرات صدمة الحر أو RUBISCO small subunit المثير الخاصة بالوحدة الفرعية الصغيرة » shock promoters أو من ( chlorophyll تنه binding protein المثير الخاص بكلوروقيل بروتين ترابط الفا/بيتا Ye مثير بروتين طبقة الغطاء ٠ ( CaMV 355 RNA مثير Mia plant viruses فيروسات نباتية ؛ عند الاستتساخ في نظم الخلايا الثديية ؛ من الممكن استعمال ( coat protein promoter TMV : ( metallothionein promoter مثلا مثير ثيوتين معدني ) Adil) مثيرات مشتقة من مجين الخلايا adenovirus late مثلا مثير فيروس غدي متأخر ) mammalian viruses أو فيروسات ثديية عند توليد خطوط « ( vaccinia virus 7.5K promoter مثير فيروس جدري البقر ٠ promoter ٠CHO « COS cells (Mia) containing a coding sequence; or mammalian cell systems ) 333 «293 » BHK «©» 1051/76010+ system utilized JU depending on the host system any number of suitable transcription and transformation elements; including basic and inductive stimuli; In the carrier of the ability to modify genetics. For example; upon cloning in bacterial systems; it is possible to use; Ptrp-lac promoter Mixed promoter (2, plac, ptrp, ptac Phage PL Inducible triggers such as etc.; when cloning in cytomegalovirus promoter Vo systems is possible The use of stimuli such as a polyhedral enhancer + 1096© cell systems insect LA; when cloning in plant cell systems; it is possible to use stimuli derived baculovirous heat from a genome (group of genetic factors) of plant cells (eg; shock stimuli Free or RUBISCO small subunit » shock promoters or from chlorophyll binding protein alpha/beta Ye chlorophyll binding protein CaMV 355 RNA promoter Mia plant viruses Plant viruses When cloned in mammalian cell systems, it is possible to use coat protein promoter TMV (metallothionein promoter, for example Adil) promoters derived from the genome of adenovirus cells late, for example, the promoter of late adenovirus (mammalian viruses or mammalian viruses when generating lines) vaccinia virus 7.5K promoter cowpox virus 0 promoter 0
١7١7 الخلايا التي تحتوي على نسخ متعددة من تسلسل تشفير مولد الضد من الممكن استعمال نواقل . بواسم قابل للاختبار ملائم EBV و 5740 , BPV بقاعدة من للمتفطرة السلية . بالنسبة antigens لإجراء التعديل الجيني لمولدات الضد Ayal يفضل نظم1717 Cells that contain multiple copies of the antigen coding sequence can use vectors. With suitable testable markers, EBV and BPV, 5740, with a base of Mycobacterium tuberculosis. For antigens, to perform genetic modification of Ayal antigens, systems are preferred
Bacillus-Calmette-guerrin Jie للأعطا ء في الجسم الحي + من الممكن هندسة أنوا ع البكتريا للتعديل الجيني . متعدد بببتيد الاندماج للاختراع على سطح خليته . من الملاثم اختيار عدد من © مثل ٠. نواقل التعديل الجيني البكترية اعتمادا على الاستعمال لتحقيق غرض المنتجات المعدلة جينيا عندما يتم إنتاج كميات كبيرة من بروتين الاندماج لصياغة التركيبات الصيدلانية ¢ قد يكون من ٠ المرغوب فيه نواقل التي توجه التعديل الجيني بمستويات مرتفعة من منتجات بروتين الاندماج ويتم تنقيتها بسهولة . تتضمن هذه النواقل ؛ على سبيل المثال وليس الحصر ؛ ناقل التعديل جيني 7 ؛ مجلد EMBO J « YAY ) وآخرين Ruther ( pUR 278 E. coli للاشيريكية القولونية ٠ فيه من الممكن ربط تسلسل التشفير في الناقل في إطار مع منطقة التشفير 1867 بحيث (YYBacillus-Calmette-guerrin Jie for administration in vivo + it is possible to engineer species of bacteria for genetic modification. Integration polypeptide of the invention on its cell surface. It is recommended to choose a number of © e.g. 0. Bacterial gene editing vectors Depending on the use for the purpose of transgenic products when large quantities of fusion protein are produced for pharmaceutical formulation ¢ it may be desirable for vectors that direct gene modification with elevated levels of purified fusion protein products Easily . These vectors include; for example, and not as a limitation ; genetic modification vector 7; EMBO J “YAY) et al. Ruther (pUR 278 E. coli for Escherichia coli 0) in which it is possible to associate the coding sequence in the vector in frame with coding region 1867 such that (YY
PIN يتم إنتاج بروتين مهجن ¢ نواقل وما شابه . من الممكن كذلك استعمال 00727 لإجراء التعديل الجيني لمتعدد ببتيدات أجنبية على عموما تعد . glutathione S-transferase (GST) مع fusion proteins هيئة بروتينات اتدماج بروتينات الاندماج هذه قابلة للذويان ومن الممكن تنقيتها بسهولة من الخلايا المحللة بواسطة 12 متبوعا بالتخفيف في وجود جلوتاثتيون حر glutathione-agarose كريات «adsorption الامتزاز أو مواضع انشطار thrombin لكي تتضمن PGEX تصميم النواقل ais. free glutathione بحيث من الممكن تحرير متعدد ببتيد أندما ج منسوج موضوع الاختراع من شق Xa عامل protease .GST + protein purification البروتين ةيقنت-١/5 / © Y.PIN Hybrid protein ¢ vectors and the like are produced. It is also possible to use 00727 to perform genetic modification of foreign polypeptides, generally prepared. Glutathione S-transferase (GST) with fusion proteins as fusion proteins These fusion proteins are soluble and can be easily purified from cell lysates by 12 followed by dilution in the presence of free glutathione-agarose “adsorption” pellets. Adsorption or thrombin cleavage sites for PGEX vector design include ais. free glutathione so that it is possible to liberate a G-woven integrase polypeptide of the subject of the invention from the factor Xa protease GST + protein purification cleavage. Aqent-1/5 / © Y.
- ١8 بمجرد أن يتم التعديل الجيني لبروتين مأشوب ؛ حيث من الممكن التعرف عليه بواسطة المعايرات للمنتج ؛ متضمنا وسم physical or functional properties على أساس خواص ينزيقية ووظيفية ومعايرة مناعية gel electrophoresis فعال شعاعيا للمنتج متبوعا بالتحليل بواسطة استشراد هادمي إلى أخره. bioassays ومعايرات بيولوجية radioimmunoassay إشعاعية من الممكن عزله وتنقيتة بواسطة «encoded protein بمجرد أن يتم التعرف على البروتين المشفر © مثل الفصسل ( chromatography الطرق المعيارية المتضمنة الفصل الكروماتوجرافي التبادل high performance liquid chromatography الكروماتوجرافي ذو السائل عال الأداء sizing column والألفة والفصل الكروماتوجرافي العمودي الحجمي jon exchange الأيوني differential التذاوب التفاضيلي ¢ centrifugation الفرز بالطرد المركزي ¢ chromatography أخر لتنقية البروتينات . سوف standard technique ؛ أو بواسطة أسلوب تقني معياري solubility | ٠ ؛ الغير ألفة للماء net charge تعتمد الظروف الفعالة ؛ جزئيا على عوامل مثل الشحن الصافي إلى أخره ؛ وسوف تكون واضحة لهؤلاء ذوي hydrophilicity الألفة للماء + hydrophobic المهارة في هذا المجال . من الممكن تقييم الخواص الوظيفية باستعمال إي معايرة ملائمة مثل « T cell oroliferation خلية Stimulation of proliferation الترابط للجسم المضاد ¢ حث تكائر ؛ من المفضل Mall و 11.4 و 11-7 . بالنسبة للممارسة الاختراع 112 Jie cytokine حث أنتاج ٠5 من بروتينات أخري . من (hie على الأقل J Av fusion protein أن يكون كل بروتين اندماج على الأقل . بالنسبة للإعطاء في الجسم 7 9٠0 المفضل على نحو أكثر أن تكون البروتينات بتنقية . 7 46 الحي ؛ يفضل أن تكون البروتينات بتنقية أكبر من -uses of the fusion protein coding sequence م 1 استعمالات تسلسل تشفير بروتين الاندماج- 18 Once a recombinant protein has been genetically modified; Where it can be identified by the calibrations of the product; Including labeling of physical or functional properties based on chemical and functional properties and immunoassays Radioactive gel electrophoresis of the product followed by analysis by hemoelectrophoresis etc. Radioimmunoassay bioassays and radioimmunoassays It can be isolated and purified by «encoded protein» once the encoded protein is identified © as a class chromatography Standard methods including exchange chromatography high performance liquid chromatography sizing column, affinity and volumetric column chromatography jon ion exchange differential solubility ¢ centrifugation centrifugation ¢ chromatography other standard technique; The effective conditions will, in part, depend on factors such as net charge, etc., and will be obvious to those with hydrophilicity + hydrophobic skill in this field. Functional properties may be assessed using any appropriate calibration such as “T cell oroliferation”. Stimulation of proliferation Mall, 11.4, and 11-7 are preferred. With regard to practice, the invention, 112 Jie cytokine, stimulated the production of 05 other proteins. of (hie) at least J Av fusion protein each fusion protein at least. For in vivo administration 7 900 Preferably purified proteins. 7 46 Live; preferably proteins with greater purity than -uses of the fusion protein coding sequence
Ya _ - من الممكن استعمال تسلسل-تشفير بروتين الاندماج fusion protein coding sequence من Jal تشفير منتج بروتين للاستعمال على هيئة مولد مناعة لحث و/أو تعزيز الاستجابات المناعية للمتفطرة السلية . أضف إلى ذلك ؛ من الممكن كذلك ربط تسلسل التشفير بتسلسل تشفير جزيئي أخر cytokine Je أو مادة مساعدة adjuvant . من الممكن استعمال متعدد نيكلوتيدات polynucleotides © هذه في الجسم الحي باعتبارها لقاح DNA vaccine (براءة الاختراع الأمريكية أرقام 75 و 17/1147ه و 3١5 .لاه ) . في نموذج الاختراع هذا ؛ يقوم متعدد النيكلوتيد بتعديل بروتينية المشفر جينيا في مستقبل لأحداث حث مباشر لاستجابة مناعية + من الممكن حقن متعدد نيكليوتيد polynucleotide may be injected . إلى خاضع للدراسة غير مطعم لبدء استجابة مناعية لمنتجة المشفر ؛ أو إعطائه إلى خاضع للدراسة مصاب أو مطعم لتعزيز ٠ الاستجابة المناعية الثانوية secondary immune responses في نموذج مفضل ؛ يتضمن تركيب علاجي therapeutic composition تسلسل تشفير بروتين اندماج fusion protein أو أجزاء aie الذي يعد جزءٍ من ناقل التعديل الجيني . بصفة خاصة ¢ يحتوي متعدد النيكلوتيد هذا على مثير مرثبط من الناحية العملية بمنطقة التشفير ¢ ويكون المثير المذكور قابل للحث أو أساسي ؛ و ؛ اختياري ؛ نوعي للانسجة . في نموذج أخر ؛ يحتوي متعدد نيكليوتيد تسلسل تشفير مجانية بمناطق ٠ تثير تأشيب متجانس في موقع مرغوب في المجين ؛ وهكذا توفير تعديل جيني كرومازومي داخلي intrachromosomal expression لتسلسل التشفير ‘Koller and Smithies) coding sequence Proc.Ya_- The fusion protein coding sequence of Jal, encoding a protein product, can be used for use as an immunogen to induce and/or enhance immune responses to M. tuberculosis. add to that ; It is also possible to bind the coding sequence to another molecular coding sequence, a cytokine Je or an adjuvant. These © polynucleotides can be used in vivo as a DNA vaccine (US Patent Nos. 75, 1147/17H and 315 LA). In this embodiment of invention; A polynucleotide modifies the genetically encoded protein in a receptor for direct induction of an immune response + polynucleotide may be injected. to an uninoculated study subject to initiate an immune response to the encoder producer; or given to an infected or vaccinated study subject to enhance secondary immune responses in a preferred embodiment; A therapeutic composition includes the coding sequence of a fusion protein or parts of the aie that is part of the gene modification vector. In particular ¢ this polynucleotide contains a functionally inactivated motif in the coding region ¢ and said motif is inducible or constitutive; And ; my choice ; Kind of tissue. in another model; The polynucleotide contains a free coding sequence with 0 regions that trigger homologous recombination at a desired site in the genome; Thus providing an intrachromosomal expression modification of the 'Koller and Smithies' coding sequence Proc.
Natl.Natl.
Acad 4 « الولايات المتحدة الأمريكية ٠١144 817 0-/1 737 : AY ؛ نيتشر EYA-EYo : YiY . قد يكون إعطاء الحمض النووي nucleic acid داخل خاضع للدراسة سواء بطريقة مباشرة ؛ في تلك Ye. الحالة يتم تعريض الخاضع للدراسة للحمض النووي أو ناقل Jala للحمض النووي nucleic acid- carrying vector » أو بطريقة غير مباشرة ؛ في تلك الحالة ؛ يجري أولاً تحويل الخلايا بواسطة Yay ¢Acad 4 « USA 01144 817 0-/1 737 : AY ; Nature EYA-EYo: YiY . The administration of nucleic acid may be subject to study either directly; In that case, the subject is exposed to DNA or Jala's nucleic acid-carrying vector, or indirectly; in that case; Cells are first transformed by Yay ¢
ل الحمض النووي في أنبوب الاختبار 1:70 ؛ ثم غرسها في الخاضع للدراسة . أن هذين المدخلين المذكورين معروفين ؛ على التوالي , باعتبارهما تحويل جيني داخل الجسم أو خارج الجسم الحي Vivo or ex vivo gene transfer تتا في نموذج نوعي ؛ يعطي الحمض النووي مباشرة في الجسم الحي ؛ حيث يتم تعديله جينيا الإنتاج © منتج بروتين اندماج fusion protein مشفر . من الممكن أن يتم ذلك بواسطة أي عدد هائل من الطرق المعروفة في هذا المجال ؛ Se ؛ بواسطة بنائه باعتباره جزء من ناقل تعديل جيني للحمض النووي ملائم وإعطائه بحيث يصبح داخل الخلية Sia « بواسطة أحداث عدوي باستعمال ناقل ريتروفيرال attenuated retroviral أو فيروس أخر ناقص أو ضعيف other viral vector ) أنظر براءة الاختراع الأمريكية رقم 49480747 ) أو بواسطة حقن مباشر DNA direct injection ٠ مكشوف أو باستعمال قذف دقيق للجسيمات microparticle bombardment ) مثلاً ؛ بندقية جينات ٠ Dupont « Biolistic « gene gun أو التغليف بالشحوم coating with lipids 0 مستقبلات سطحية للخلايا cell-surface receptors أو عوامل Transfecting أو التغليف في الجسيمات الشحمية encapsulation in liposomes أو جسيمات دقيقة microparticles أو كبسولات دقيقة microcapsules ( براءة الاختراع الأمريكية أرقام 8407704 و 04677717 و 811364 و 87م 287 ) أو بإعطائه بالربط بببتيد linkage to a peptide الذي يكون معروف أنه بداخل النواة alas ls ¢ enter the nucleus بالربط بخاضع ترابطي لالتقام خلوي موسط بالمستقبلة administering it in linkage to a ligand subject to receptor-mediated endocytosis ( أنظر and Wu Sie 70 و؛ 17 ء جريدة الكيمياء البيولوجية ؛ 767 : 477-4474 ) الذي من الممكن استعماله لاستهداف أنوا ع خلية تقوم بنسخ نوعي للمستقبلات target cell types specifically expressing the receptors ٠٠ « إلى أخره . في نموذج أخر ٠ من الممكن تشكيل مركب ترابطي لحمض نووري nucleic acid-ligand complex can be formed فيها يتضمن المركبl DNA in test tube 1:70; Then implanted in the subject of the study. That these two entrances mentioned are known; respectively, as in vivo or ex vivo gene transfer in a qualitative model; gives DNA directly in vivo; Where it is genetically modified production © fusion protein encoded product. It can be done by any of the many methods known in the field; se; by its construction as part of an appropriate DNA genetic modification vector and delivery so that it becomes intracellular “Sia” by infection events with an attenuated retroviral or other incomplete or weakened viral vector (see US Patent No. 49480747) or by direct injection of exposed DNA or by using microparticle bombardment, for example; 0 Dupont « Biolistic » gene gun or coating with lipids 0 cell-surface receptors or Transfecting factors or encapsulation in liposomes or microparticles microcapsules (US Pat. Nos. 8407704, 04677717, 811364, 87E287) or by binding to a linkage to a peptide that is known to be alas ¢ enter the nucleus by binding to a ligand of a cellular endocytosis mediator administering it in linkage to a ligand subject to receptor-mediated endocytosis (see and Wu Sie 70 and 17 Journal of Biological Chemistry; 767: 477-4474) that can be used to target cell types that make specific transcripts of receptors. target cell types specifically expressing the receptors 00 “etc. In another embodiment 0 it is possible to form a nucleic acid-ligand complex can be formed in which the complex includes
١ - الترابطي ببتيد فيروسي مولد مغزلي لوقف الجسميات الغدية fusogenic viral peptide to disrupt endosomes ؛ مما يسمح للحمض النووي لتجنب انحلال جسمي حال . في مظهر أخر إضافي ؛ من الممكن استهداف الحمض النووي في الجسم الحي لأجل استيعاب وتعديل جيني نوعي للخلايا ٠ بواسطة استهداف مستقبلة نوعية ( أنظر ؛ مثلاً ٠ مطبوعات 007 أو VUE TIA [AY © ابريل 447 178/17 YY بتاريخ 1 ديسمبر ؛ 447 ء أو 10713/47 بتاريخ 77 نوفمبر 17 ؛ أو ؟1/ YEYAA بتاريخ vy يوليو ؛ 1997 أو 47 2 7077١ بتاريخ ٠4 اكتوبر ١4 ) . بديلاً عن ذلك ؛ من الممكن إدخال الحمض النووي خلويا أو ادماجة في DNA خلية عائل لأجل التعديل الجيني ٠ بواسطة تأشيب متجانس Koller and ( homologous recombination Proc.1- fusogenic viral peptide to disrupt endosomes; thus allowing the DNA to avoid autolysosomal decay. In another additional appearance; It is possible to target DNA in vivo for cell-specific internalization and genetic modification by targeting a specific receptor (see eg 0 Publication 007 or VUE TIA [AY © Apr 447 178/17 YY dated 1 Dec; 447 A or 10713/47 of 77 Nov 17; or ?1/YEYAA of vy July 1997 or 47 2 70771 of 04 Oct 14). alternatively; It is possible to introduce cellular DNA or to incorporate it into the DNA of a host cell for genetic modification by means of Koller and homologous recombination Proc.
Natl.Natl.
Aced.Aced.
Sci + 7+ Smithies ؛ الولايات المتحدة الأمريكية 07 : 4373-4477 Zijlstra « V+ وآخرين 2 anc VAS 77 : 74-475 ). في نموذج نوعي ؛ من الممكن استعمال ناقل فيروس مثل ناقل ريتوفيرال retroviral vector أنظر 7٠١7 « Meth Enzymol 41+ coals Miller : 41-041 ) يتم تعديل نواقل ريتروفيرال Retroviral vectors لحدف تسلسلات ريتروفيرال retroviral sequences التي تعد غير ضرورية لتعبئة مجين فيروسي packaging of the viral GENOME وتكامله في DNA خلية عائل . يتم نسخ Ve تسلسل تشفير اندماج ؛ الذي يسهل إعطاء الحمض النووي إلى متلقي . من الممكن ايجاد المزيد من التفاصيل عن نواقل تيرزوفيرال Retroviral vectors في 20 وآخرين ؛ ١1944 ؛ العلاج البيولوجي 7-71١ 4 Biotherapy ؛ التي تصف استعمال ناقل ريتروفيرال retroviral vector لإعطاء جين 14081 لخلايا جذعية مكونة للدم لصناعة خلايا جذعية أكثر مقاومة للعلاج الكيميائي . هناك مراجع أخرى توضح استعمال نواقل ريتروفيرال retroviral vector في العلادجي Ye. الجيني هي Clowes وآخرين 4 ؛ جريدة الاستقصاءات السريرية ؛ 47 : 181-144 Kiem وآخرين 84 ¢ . Salmons and Gunzberg « VEVY=1£1Y : AY Blood « Ya)Sci + 7 + Smithies; USA 07 : 4373-4477 Zijlstra « V+ et al 2 anc VAS 77 : 74-475 ). in a qualitative form; It is possible to use a viral vector such as a retroviral vector (see 7017 “Meth Enzymol 41+ coals Miller: 41-041) Retroviral vectors are modified to eliminate retroviral sequences that are not necessary for packaging a viral genome. packaging of the viral GENOME and its integration into the DNA of a host cell. Ve is transcribed into a fusion coding sequence; which facilitates the administration of DNA to a recipient. Further details of retroviral vectors can be found in 20 et al.; 11944; Biological Therapy 7-711 4 Biotherapy; which describes the use of a retroviral vector to administer gene 14081 to hematopoietic stem cells to make stem cells more resistant to chemotherapy. There are other references that explain the use of retroviral vectors in the genetic treatment of Ye. He, Clowes et al. 4; Journal of Clinical Investigations; 47 : 181-144, Kiem et al. 84 ¢. Salmons and Gunzberg « VEVY = 1£1Y : AY Blood « Ya)
vy _ ١5 ؛ العلاج الجيني gene therapy البشري Human Gene Therapy ¢ :71١-1او ٠ +, Grossman and Wilson + الآراء الحالية في عالم الجينات والتطور»؛ ؟ : ١١4-11١ 2 الفيروسات الغدية adenoviruses هي عبارة عن نواقل فيروسية viral vectors أخري من الممكن استعمالها في العلاج الجيني gene therapy ¢ تعد الفيروسات الغدية adenoviruses عبارة عن © نواقل جذابة attractive vehicles على وجه الخصوص لإعطا 6 جينات إلى الظهاريات التتفسية respiratory epithelia . من المعتاد أن تصيب الفيروسات الغدية adenoviruses الظهاريات التنفسية Cua respiratory epithelia قد تسبب مرض طفيف . أن الأهداف الأخرى لنظم الإعطاء بأساس فيروس غدية هي الكبد liver والجهاز العصبي المركزي central nervous system والخلايا البطانية cells 1101 والعضل muscle . لقد تم اقتراح فيروس مصاحب للغدة Adeno-associated virus (AAV) ٠ للاستعمال في تحويل جيني في الجسم الحي use in in vivo Walsh ) gene transfer وآخرين « 1947 . Soc.vy _ 15 ; human gene therapy Human Gene Therapy ¢: 711-1 or 0 +, Grossman and Wilson + Current Opinions in the World of Genes and Evolution”; ? : 114-111 2 Adenoviruses are other viral vectors that can be used in gene therapy ¢ Adenoviruses are particularly attractive vectors Specifically to pass on 6 genes to respiratory epithelia. Usually, adenoviruses infect the respiratory epithelia. Cua respiratory epithelia may cause mild illness. Other targets of adenovirus-based administration systems are liver, central nervous system, endothelial cells 1101, and muscle. Adeno-associated virus (AAV) 0 has been proposed for use in in vivo (Walsh) gene transfer (1947). Social.
Exp.Exp.
Biol.Biol.
Med عم ٠١١ كي 5-١ ينطوي مدخل أخر على تحويل تركيب ما إلى خلايا في مزرعة النسيج بواسطة هذه الطرق على electroporation iim أى lipofection أو 0 موسط بفسفات كالسيوم calcium phosphate mediated ٠ ؛ أو عدوي فيروسية viral infection . على نحو معتاد تتضمن طريقة التحويل تحويل واسم قابل للتحويل إلى خلايا . بعد ذلك يتم وضع الخلايا تحت الاختيار لعزل هذه الخلايا تلك التي تلتقط وتعدل جينيا الجين المحول . بعد ذلك يتم إعطاء الخلايا تلك التي خاضع للاختبار - في هذا النموذج » يتم إدخال الحمض النووي nucleic acid إلى خلية قبل الاعطاء في الجسم الحي ov. للخلية المأشوبة الناتجة in vive of the resulting recombinant cell من الممكن أجراء مثل هذاMed Am 011 K 5-1 Another entry involves converting a structure into cells in tissue culture by these methods on electroporation iim i.e. lipofection or 0 mediated with calcium phosphate mediated 0 ; Or my viral infection. Normally the conversion method includes convert and convertible name to cells. Then the cells are put under selection to isolate those cells that pick up and genetically modify the transgene. After that, the cells that are subject to the test are given - in this model, the nucleic acid is inserted into a cell before giving it in vivo (ov).
“+ الادخال بواسطة الطريقة المعروفة في هذا المجال»؛ متضمنة ؛ على سبيل المثال لا الحصر ؛ transfection أى electroportion أو الحقن الدقيق microinjection أو العدوي بناقل فيروسي أو ملتهمة بكتيرية infection with a viral or bacteriophage vector محتوية على تسلسلات الحمض النووي nucleic acid sequences ؛ اندماج الخلية cell fusion + تحويل جيني موسط بالكروموزم chromosome-mediated gene transfer © ¢ تحويل جيني موسط بخلية دقيقة microcell-mediated gene transfer ¢ أندماج 1 + إلى أخره . توجد أساليب تقنية هائلة معروفة في هذا المجال لإدخال جينات أجنبية في الخلايا foreign genes into cells ) أنظر Loeffler and Behr ٠ Sie « Cohen « TYA=294 : 27 meth Enzymol] 147 رآخرين « Meth.Enzymol » ٠337 :Y4 ١ pharmac.“+ input by the method known in the field”; included; For example but not limited to ; transfection i.e. electroportion or microinjection or infection with a viral or bacteriophage vector containing nucleic acid sequences; Cell fusion + chromosome-mediated gene transfer © ¢ microcell-mediated gene transfer ¢ fusion 1 + etc. There are great technical methods known in this field to introduce foreign genes into cells (see Loeffler and Behr 0 Sie « Cohen » TYA=294 : 27 meth Enzymol] 147 others « Meth.Enzymol » 0337 ,: Y4 1 pharmaceutical.
Ther « Y4A0 + Cline ¢T££—-TYA :YVV | 14000٠ ) و من الممكن استعمالها مع الاختراع الحالي . من الممكن كذلك استعمال متعدد نيكليوتيدات polynucleotides للاختراع في تشخيط مرض السل diagnosis of tuberculosis من أجل الكشف عن تسلسلات متعدد نيكليوتيد نوعية للمتفطرة السلية في أحد المرضي . من الممكن اتمام هذا الكشف ؛ مثلاً ¢ بواسطة عزل متعدد نيكليوتيدات polynucleotides من die بيولوجية biological sample يثم الحصول عليها من مريض يشتبه e في أنه مصاب بالبكتريا infected with the bacteria عند عزل متعدد النيكليوتيدات polynucleotides من عينة بيولوجية biological sample » سوف يتم السماح لينكليوتيد موسوم للاختراع ويعتبر مكمل لواحد أو اكثر من متعدد النيكليوتيدات polynucleotides بأن يتهجن إلى متعدد نيكليوتيدات polynucleotides في عينة بيولوجية باستعمال الأساليب التقنية لتهجين الحمض النووي المعروفة لهؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال . مثلاً ٠ من الممكن أجراء التهجينTher « Y4A0 + Cline ¢T££—-TYA : YVV | 140000 ) and may be used with the present invention. The polynucleotides of the invention may also be used in the diagnosis of tuberculosis in order to detect specific polynucleotide sequences of Mycobacterium tuberculosis in a patient. It is possible to complete this disclosure; For example ¢ by isolating polynucleotides from a biological sample die then obtained from a patient suspected of being infected with the bacteria e when isolating polynucleotides from a biological sample » A oligonucleotide tagged with the invention and which is complementary to one or more polynucleotides will be allowed to hybridize to polynucleotides in a biological sample using nucleic acid hybridization techniques known to those skilled in this art. For example, 0 is possible to cross
١ — - المذكور في محلول أو مع شريك تهجين hybridization partner على مادة مساعدة adjuvant صلدة y/o - الاستعمال العلاجية والوقائية لبروتين الاندماج therapeutic and prophylactic uses of the fusion protein . © .قد يتم صياغة بروتينات اندماج fusion proteins منثقاة أو منقاة جزئيا أو أجزاء منها باعتبارها لقاح vaccine تركيب علاجي therapeutic composition . قد يتضمن تركيب علاجي كهذا Julse مساعدة لتعزيز استجابات المناعة composition may include adjuvants to enhance response عصص:. بالإضافة لذلك ؛ قد يتم أيضاً تعليق هذه البروتينات في مستحلب زيت oil emulsion ليحدث إطلاق إبطأ للبروتينات في الكائن الحي عند الحقن cause a slower release of the proteins in vivo upon injection ٠ . قد يتم تحديد أفضل النسب لكل مكون في الصياغة بأساليب تقنية معروفة جيدا لهؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال . قد يستخدم أي مجموعة منوعة من العوامل المساعدة في لقاحات vaccines الاختراع الحالي بغرض تعزيز استجابة المناعة . تحتوي معظم العوامل المساعدة على مادة مصممة لحماية مولد المضاد من التقويض السريع ؛ aluminum hydroxide fie أو زيت معدني mineral oil و حافز Ve غير نوعي لاستجابة المناعة ؛ مثل شحم 7 ؛ الشهقة بورتادلا Bortadella pertussis أو المتفطرة السلية . تعد عوامل مساعدة متوفرة تجاريا وتتضمن ؛ على سبيل المثال ؛ المادة المساعدة Freund's Incomplete والمادة المساعدة Freund's Complete ( معامل ديفكو Difco Laboratories ( والمادة المساعدة ميرك 10 65 Merck ) Merck Adjuvant وشركاءه ؛ شركة محدودة ؛ Rahway ؛ ولاية نيوجيرس ) . تتضمن مواد مساعدة أخري الشب Other suitable adjuvants include alum ٠١ ؛ كريات دقيقة تتطل بالبكتريا biodegradable microspheres ¢1 — - mentioned in solution or with a hybridization partner on an adjuvant hardness y/o - therapeutic and prophylactic uses of the fusion protein. © Partially extruded or purified fusion proteins or portions thereof may be formulated as a vaccine therapeutic composition. A therapeutic combination such as this Julse may include adjuvants to enhance response. add to that ; These proteins may also be suspended in an oil emulsion to cause a slower release of the proteins in vivo upon injection 0 . The best proportions of each ingredient in the formulation may be determined by technical methods well known to those skilled in the art. Any variety of adjuvant agents may be used in vaccines of the present invention for the purpose of enhancing the immune response. Most cofactors contain a substance designed to protect the antigen from rapid catabolism; aluminum hydroxide fie or mineral oil and a non-specific Ve stimulus for the immune response; such as grease 7; Bortadella pertussis or Mycobacterium tuberculosis. Commercially available catalysts include; For example ; Freund's Incomplete Adjuvant and Freund's Complete Adjuvant (Difco Laboratories (Merck 10 65 Merck Adjuvant &Co.;LLC;Rahway; State of New Jersey). Other suitable adjuvants include alum 01; Biodegradable microspheres ¢
— Yo —— Yo —
Ling ) monophosphoryl lipid A, quil A, SBASIc 2 وآخرين ؛ ٠1337 ؛ اللقاحLing ) monophosphoryl lipid A, quil A, SBASIc 2 and others; 01337; the vaccine
. AL(OH)3 و SBAS7 و ( Y01V=101Y الصفحات : ١١ vaccine الاختراع الحالي ؛ فمن المفضل أن تحث المادة المساعدة استجابة المناعة vaccines في لقاحات تتضمن نظم مساعدة مناسبة ؛ على سبيل المثال ؛ اتحاد كيميائي من شحم . Th متضمنة أوجه 3-de-O-acylated monophosphoryl lipid A على نحو مفضل ؟ ٠» monophosphoryl lipid A 8 أن نظام معزز يشتمل على اتحاد كيميائي . aluminum salt معا مع ملح ألومنيوم (3D-MLP) ؛ على نحو خاص الاتحاد saponin derivative ومشتق صابونين monophosphoryl lipid من م والصابونين 0521 كما تم الكشف عنه في براءة الاختراع الدولية 3D-MLP الكيميائي من أو تركيب متفاعل جينيا بدرجة أقل حيث يتم كبت 0521 بالكوليسترول كما تم الكشف . ١ 6,. AL(OH)3, SBAS7, (Y01V=101Y) pages : 11 Vaccine The present invention; it is preferable that the adjuvant induces an immune response Vaccines in vaccines containing appropriate adjuvant regimens, eg; Chemical conjugation of a Th lipid including the faces of 3-de-O-acylated monophosphoryl lipid A preferably ? (3D-MLP); in particular the combination saponin derivative and the monophosphoryl lipid saponin derivative of M and saponins 0521 as disclosed in the international patent 3D-MLP chemical from or genetically reactive composition of Less, as 0521 is suppressed by cholesterol as detected
٠ عنه في براءة الاختراع dal 797349/97© . أوضحت التجارب السابقة تأثير مؤازر واضح للاتحادات الكيميائية 30-01 و 0821 في حث كلا من استجابات المناعة الخلوية من النوع الخلطي والنوع 1111 على نحو خاص يتم وصف صياغة مساعدة فعالية متضمنة 0521 و 3D- MLP و tocopherol في مستحلب زيت oil emulsion قابل للذوبان في الماء في براءة الاختراع الدولية 20[ IVT) وهي صياغة مفضلة .0 reported in patent dal 797349/97© . Previous experiments demonstrated a clear synergistic effect of the chemical conjugates 30-01 and 0821 in inducing both humoral and type 1111-specific cellular immune responses. An active adjuvant formulation comprising 0521, 3D-MLP and tocopherol in an oil emulsion is described. Oil emulsion is water soluble in International Patent 20 [IVT] and is a preferred formulation.
١٠ قد يتم إعطاء صياغات محتوية على مولد المضاد الخاص بالاختراع الحالي للشخص الخاضع للإختبار المعروف بذاته أو في شكل تركيب صيدلي أىر علاجي pharmaceutical or therapeutic composition قد تصنع تركيبات صيدلية محتوية على البروتينات بواسطة عمليات تقليدية من conventional mixing hla وإذابة dissolving أو تحبيب granulating أو بعمل جبات دواء ملبسة dragee-making أو بالسحق levigating أو بالاستحلاب emulsifying أو بتشكيل كبسولات أو10 Formulations containing the antigen of the present invention may be administered to the test subject known by itself or in the form of a pharmaceutical or therapeutic composition Pharmaceutical compositions containing proteins may be made by conventional processes of conventional mixing HLA dissolving, granulating, dragee-making, crushing, levigating, emulsifying, forming capsules, or
٠٠ التشكيل بالحصر أو بالتجفيف في حالة التجمد . قد يتم صياغة تركيبات صيدلية بطريقة تقليدية00 Forming by confinement or by drying in the case of freezing. Pharmaceutical formulations may be formulated in the traditional manner
0 #1 باستخدام واحدة أو اكثر من حوامل carriers أو مخفضات diluents أو سواغات excipients أو مواد مساعدة مقبولة فيسولوجيا التي تسهل معالجة متعددة الببتيدات polypeptides في المستحضرات التي يمكن استخدامها صيدلانيا . تكون صياغة دقيقة معتمدة على طريقة الإعطاء المختارة ٠ © بالنسبة للإعطاء الموضعي ؛ قد يتم صياغة البروتينات على هيئة محاليل 5011005 ؛ هلامات gels ؛ مراهم ointments ء كريمات creams ؛ مستعلقات suspensions » إلى أخره ؛ باعتبارها معروفة جيداً في هذا المجال . تتضمن صياغات جسمانية تلك الصياغات المصممة للإعطاء بالحقن ؛ على سبيل المثال بالحقن تحت الجلد “subcutaneous أو في الوريد intravenous أو في العضل intramuscular أو داخل الغمد intrathecal أو داخل البريتون intraperitoneal ؛ ٠ بالإضافة إلى تلك الصياغات المصممة للإعطاء عبر الأدمة transdermal أو عبر الغشاء المخاطي transmucosal أو بالفم oral أو الإعطاء الرئوي pulmonary administration . بالنسبة للحقن ؛ قد البروتينات في محاليل «aqueous solutions dsl على نحو مفضل في محاليل solutions منظمة متوافقة فيسولوجيا Jie محلول هانكس Hanks's solution أو محلول رينجير Ringer's solution أو محلول ملحي منظم فسيولوجيا physiological saline buffer قد يحتوي ٠ المحلول على عوامل صياغة formulatory agents مثل عوامل تعليق suspending ¢ استقرار كيميائي stabilizing و /أو عوامل تشتت dispersing agents . على نحو بديل ؛ قد تكون البروتينات في شكل مسحوق من أجل التركيب مع ناقل مناسب ؛ على سبيل المثال ماء معقم خالي من pyrogen « قبل الاستخدام . بالنسبة للإعطاء عبر الغشاء المخاطي؛ تستخدم عوامل إحتراق لكي تنفذ إلى الحاجز في الصياغة . عموما تعد عوامل الاختراق هذه معروفة في هذا المجال .0 #1 using one or more physiologically acceptable carriers, diluents, excipients, or adjuvants that facilitate processing of polypeptides into pharmaceutically usable formulations. The exact formulation depends on the method of administration chosen. © 0 for topical administration; Proteins may be formulated as solutions 5011005; gels; ointments – creams; suspensions » etc.; It is well known in this field. Somatic formulations include those formulations designed for parenteral administration; for example by subcutaneous, intravenous, intramuscular, intrathecal, or intraperitoneal injection; In addition to those formulations designed for transdermal, transmucosal, oral, or pulmonary administration. for injection; Proteins in “aqueous solutions dsl” preferably in physiologically compatible buffer solutions Jie Hanks' solution or Ringer's solution or physiological saline buffer may contain 0 The solution is based on formalizing agents such as suspending agents ¢ chemical stabilizing agents and/or dispersing agents. alternatively Proteins may be in powdered form for combination with a suitable carrier; For example, sterile water without pyrogen before use. For transmucosal administration; Combustion agents are used to penetrate the barrier in the formulation. Generally, these penetration factors are known in this field.
٠١7 _ بالنسبة للإعطاء عن طريق الفم ؛ يمكن أن يصاع تركيب بسهولة بواسطة تجميع البروتينات مع حوامل مقبولة صيدلانيا معروفة جيدا في المجال . أن حوامل كهذه تساعد البروتينات على أن تصاغ على هيئة أقرارص tablets ؛ حبات pills ¢ حبات دواء ملبسة dragees .؛ كبسولات capsules » سوائل «liquids هلامات gels « أنواع شراب syrups » أنوا ع ملاط slurries ؛ © مستعلقات suspensions وما شابه ؛ بالنسبة للابتلاع الفمي من قبل الشخص الخاضع للعلاج . بالنسبة للصياغات الفمية الصلدة مثل ؛ على سبيل المثال ؛ المساحيق powders والكبسولات capsules والأقراص tablets » تتضمن سوا غات excipients ملائمة مواد fillers sda مثل السكريات sugars « مثل mannitol sucrose 5 lactose و sorbitol ¢ مستحضرات cellulose مثل نشا الذرة ؛ نشا القمح ؛ Las الأرز ¢ Wis البطاطس « methyl « gum tragacanth 6 gelatin sodium carboxymethylcellulose « cellulose » hydroxypropylmethyl « cellulose ٠ و/أو polyvinylpyrrolidone (PVP) « عوامل تحبيب granulating agents وعوامل ربط binding agents . إذا كان مرغوباً ؛ قد يضاف عوامل تفتت ؛ polyvinylpyrrolidone Jie مترابط بالتقاطع أو agar أو alginic acid أو ملح منه sodium alginate Jie إذا كان مرغوبا ؛ قد يتم تغطية أشكال قياس الجرعات الصلدة بالسكر dosage forms may be sugar 0 أو قد يجري ١ تغليف معوي باستخدام أساليب تقنية معيارية enteric-coated using standard techniques + بالنسبة للمستحضرات السائلة الفمية liquid preparations لد:ه مثل ؛ على سبيل المثال ؛ المستعلقات suspensions و اكسيرات elixirs ومحاليل «solutions تتضمن حوامل carriers أو سواغات excipients أو مخففات ملائمة الماء glycols « diluents include water ؛ زيوت ؛ كحولات alcohols أخره . على نحو إضافي ؛ قد تضاف مكسبات نكهة ومواد حافظة preservatives ٠٠١ و عوامل تلوين coloring agents وما شابه بالنسبة للإعطاء الخدي ؛ قد تأخذ البروتينات شكل أقراص ؛ قريصات lozenges ؛ إلى أخره . مصاغة بطريقة تقليدية ٠ Yard017 _ for oral administration; Synthesis can be easily facilitated by aggregating the proteins with pharmaceutically acceptable carriers that are well known in the art. Such carriers help proteins to be formulated into tablets; pills ¢ dragees .; capsules liquids gels types of syrups types of slurries; © suspensions and the like; For oral ingestion by the person being treated. For hard oral formulations quot; For example ; Powders, capsules, and tablets » Sawa gat excipients include suitable SDA fillers such as sugars » such as mannitol sucrose 5 lactose and sorbitol ¢ Cellulose preparations such as starch Maize ; wheat starch; Las rice ¢ Wis potato « methyl » gum tragacanth 6 gelatin sodium carboxymethylcellulose « cellulose » hydroxypropylmethyl « cellulose 0 and/or polyvinylpyrrolidone (PVP) » granulating agents and binding agents agents. if desired; crumbling agents may be added; cross-linked polyvinylpyrrolidone Jie or agar or alginic acid or salt thereof sodium alginate Jie if desired; Solid dosing forms may be coated with sugar 0 or 1 may be enteric-coated using standard techniques + for liquid preparations such as: e.g.; For example ; Suspensions, elixirs, and solutions include carriers, excipients, or appropriate diluents. Glycols diluents include water; oils; Other alcohols. additionally; Flavorings, preservatives 001, coloring agents and the like may be added to oral administration; The proteins may take tablet form; lozenges; Etc . Crafted in the traditional 0 Yard
YA - - بالنسبة للإعطاء بواسطة الاستنشاق ؛ يتم تتداول البروتينات الخاصة بالاستخدام وفقا للاختراع الحالي على نحو ملائم في شكل رشاش ايروسول aerosol spray من عبوات مضغوطة sl pressurized packs في شكل مذرة nebulizer ؛ مع استخدام مادة دافعة مناسبة suitable propellant « على trichlorofluoromethane « dichlorodifluoromethane لاقملا Ju ©YA - - for administration by inhalation; The proteins for use according to the present invention are conveniently handled in the form of an aerosol spray from sl pressurized packs in the form of a nebulizer; With the use of a suitable propellant “on trichlorofluoromethane” dichlorodifluoromethane for © Ju
dichlorotetrafluorocthane © ؛ J اكسيد الكربون carbon dioxide أو غاز أخر مناسب . في حالة ايروسول مضغوط pressurized aerosol قد يتم تحديد وحدة قياس الجرعات بواسطة توفير صمام لتناول كمية مقاسة . قد يتم صياغة كبسولات ولفيفات cartridges من ء على سبيل المثال؛ 70 خاصة بالاستخدام في أداة استنشاق inhaler أو مزفار insufflator محتوية على خليط مسحوق من البروتينات وقاعدة مسحوق مناسبة مثل lactose أو النشا .dichlorotetrafluorocthane©; J Carbon dioxide or other suitable gas. In the case of pressurized aerosol, the dosing unit may be determined by providing a valve to take a measured amount. Cartridges and capsules may be formulated from, for example; 70 For use in an inhaler or insufflator containing a powdered mixture of proteins and a suitable powder base such as lactose or starch.
Jia vaginal أو مهبلية rectal كذلك قد تصاغ البروتينات في تركيبات للاستخدام عبر المستقيم ٠ ؛ على سبيل المثال ؛ محتوية على retention enemas أو حقنات حصر suppositories التحاميل أو cocoa butter مثل زبدة الكاكاو conventional suppository bases قواعد تحاميل تقليدية . أخرى glycerides جليسريدات قد تصاغ أيضا البروتينات باعتبارها مستحضر مخزن ٠ بالإضافة إلى الصياغات الموصوفة مسبقاJia vaginal or rectal The proteins may also be formulated into formulations for rectal use 0 ; For example ; Conventional suppository bases containing retention enemas or injections suppositories or cocoa butter such as conventional suppository bases. Other glycerides Proteins may also be formulated as a buffer preparation 0 in addition to previously described formulations
٠5 . قد يتم إعطاء صياغات طويلة المفعول كهذه بالغرس ( على سبيل المثال تجت الجلد subcutaneously أو في العضل intramuscular ( أو بالحقن داخل العضل muscle . هكذا ؛ على سبيل JU) ؛ قد تصاغ البروتينات باستخدام مواد بوليمرية polymeric أو غير ألفة للماء hydrophobic ) مثل على هيئة مستحلب في زيت مقبول emulsion in an acceptable oil ( أو راتينجات تبادل أيوني jon exchange resins ؛ أو على هيئة مشتقات ALE للذوبان على نحو05 . Such long-acting formulations may be administered by implantation (eg subcutaneously or intramuscularly (or by intramuscular injection, etc.; eg JU); proteins may be formulated using polymeric materials. or non-hydrophobic (such as emulsion in an acceptable oil) or jon exchange resins;
. ضئيل ؛ على سبيل المثال ؛ باعتبارها ملح قابل للذوبان على نحو ضئيل Ye,. insignificant For example ; As a slightly soluble salt Ye
قا على نحو بديل ؛ قد تستخدم نظم تداول صيدلية أخري . تعد جسيمات شحمية و مستحلبات أمثلة معروفة جيداً لنواقل التداول التي قد تستخدم مذيبات عضوية dimethylsulfoxide (Jie ime ؛ على الرغم من تكلفة السمية الكبيرة . كذلك قد يتم تشكيل كبسولات من بروتينات الاندماج في شكل كريات دقيقة microspheres ( أرقام براءات الاختراع في الولايات المتحدة 8407604 ؛ © اميه 43422 اهما هم 087 ) بالإضافة لذلك ؛ قد يتم تداول البروتينات باستخدام نظام إطلاق مدعم « Jia مواد قالب شبه منفذ من بوليمرات صلدة solid polymers محتوية على العامل العلاجي therapeutic أو عامل التلقيح vaccinating agent . لقد تم تركيب مواد إطلاق مدعمة عديدة وهي تعد معروفة جيدا لهؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال . قد تطلق كبسولات بإطلاق مدعمة ؛ اعتمادا على طبيعتها الكيميائية ؛ بروتينات لمدة أسابيع قليلة تصل إلى ما يزيد Ve عن ٠٠١ يوم . بناءا على الطبيعة الكيميائية والاستقرار البيولوجي للمفاعل ؛ قد يتم استخدام . . استراتيجيات إضافية لاستقرار البروتين . يعد تحديد كمية فعالة من بروتين الاندماج لحث الاستجابة ذات مناعة في الشخص الخاضع للعلاج مقبولا في نطاق إمكائيات هؤلاء ذوي المهارة في هذا المجال ؛ خاصا فيما يتعلق بالاكتشاف الموصوف بالتفصيل المتوفر في السياق الحالي . ٠ يمكن تقدير جرعة فعالية على نحو مبدئي في معايرات في أنابيب الاختبار . على سبيل المثال ؛ يمكن صياغة جرعة في نماذج حيوانية لإنجاز حث استجابة ذات مناعة بأساليب تقنية معروفة جيدا في هذا المجال . في استطاعة شخص ذوي مهارة عادية في هذا المجال أن يجعل الإعطاء للإنسان أقرب ما يكون إلى الفاعلية اعتمادا على البيانات الناتجة عن التجارب الحيوانية . قد يتم ضبط كمية قياس ٠ الجرعات والفاصل الزمني على نحو مستقل . على سبيل المثال ؛ عندما تستخدم باعتبارها لقاحalternatively said; Other pharmacy handling systems may be used. Liposomes and emulsions are well-known examples of circulating vectors that may use dimethylsulfoxide (Jie ime) organic solvents, despite the cost of significant toxicity. Capsids of fusion proteins may also be formed into microspheres (US patent numbers United 8407604; © Ameh 43422 Ehma Hm 087) In addition, proteins may be handled using a supported release system “Jia” semi-permeable template materials of solid polymers containing the therapeutic or vaccinating agent Numerous enhanced release agents have been formulated and are well known to those skilled in the art. Supported release capsules, depending on their chemical nature, may release proteins for a period of a few weeks up to Ve over 100 days. Chemical and biological stability of the reactor Additional strategies for protein stabilization may be used Determining an effective amount of a fusion protein to induce an immunogenic response in a subject is within the range of capabilities of those skilled in the art; particularly with regard to the discovery described in detail provided in the present context. An effective dose can be initially estimated in in-test tube titrations. For example ; A dose can be formulated in animal models to achieve the induction of an immune response by techniques that are well known in the field. A person of ordinary skill in this field can bring administration to humans as close to efficacy as possible based on data from animal experiments. The measuring quantity of 0 doses and the time interval may be set independently. For example ; when used as a vaccine
دم اا vaccine ¢ قد تعطي متعددة الببتيدات polypeptides و / أو متعددة النيكلوتيدات polynucleotides للاختراع الحالي في حوالي ١ إلى جرعات لمدة زمنية من VI) أسبوع . على نحو مفضل يثم | a.A blood vaccine ¢ may administer the polypeptides and/or polynucleotides of the present invention in approximately 1 to 1 doses for a period of 6 weeks. preferably motherless | a.
Uae جرعات ‘ بفواصل زمنية من حوالي 7 أشهر ؛ وقد تعطي لفاحات vaccines منشطة على نحو دوري بعذ ذلك . قد يعد بروتوكولات بديلة مناسبة للمرضي © المنفردين . تكون جرعة مناسبة ble عن كمية من متعدد الببتيد polypeptides أو DNA « عندما تعطي كما تم وصفه أعلاه ؛ تعد قادرة على إحداث استجابة منعية في مريض تم تحضنة كافية لحماية المريض من الإصابة بعدوي المتفطرة السلية لمدة 7-١ سنة على الأقل . بوجه عام jad كمية متعدد الببتيد polypeptides الموجود في deja واحدة ) أو المنتجة في موضع بواسطة أل DNA في جرعة واحدة ) بمدي يتراوح من حوالي ١ بيكوجرام إلى حوالي ٠٠١ ٠ مليجرام لكل كيلوجرام من العائل ؛ على نحو نموذجي من حوالي ٠١ بيكوجرام إلى حوالي ١ مليجرام وعلى نحو مفضل من حوالي ٠ بيكوجرام إلى حوالي ١ ميكروجرام . سوف يتنوع مدي الجرعة المناسبة بحسب حجم المريض ؛ لكنة نموذجيا سوف يكون بمدي من حوالي 00 مل إلى حوالي © مل .Uae doses ‘ at intervals of about 7 months; Vaccines may be given stimulant periodically after that. Alternative protocols may be appropriate for individual patients. An adequate dose is about the amount of polypeptides or DNA when given as described above; It is capable of inducing an immune response in an incubated patient sufficient to protect the patient from infection with Mycobacterium tuberculosis for at least 1-7 years. In general jad is the amount of polypeptides present in one deja (or produced at a site by DNA in a single dose) with a range from about 1 pg to about 0 001 mg per kg from the family; Typically from about 0 1 picgram to about 1 milligram and preferably from about 0 picgram to about 1 μg . The appropriate dose range will vary according to the size of the patient; Accents will typically range from about 00 mil to about © mil.
- الاستخدامات التشخيصية لبروتين الاندماج ٠ diagnostic uses of the fusion protein ١ تعد متعددة ببتيدات الاندماج للاختراع الحالي مفيدة في تشخيص عدوي السل في أنابيب الاختبار وفي الجسم الحي . يمكن معايرة قدرة متعدد الببتيد للاختراع الحالي من أجل حث AS Stimulation of proliferation خلية cell أو إنتاج cytokine بواسطة طرق تم الكشف عنها فيDiagnostic uses of the fusion protein 1 The fusion polypeptides of the present invention are useful in the diagnosis of tuberculosis infection in vitro and in vivo. The ability of the polypeptide of the present invention to induce AS Stimulation of cell proliferation or cytokine production can be calibrated by methods disclosed in
مقطع fo 7 + نفس المصدر السابق ٠.Section fo 7 + the same source as the previous 0.
—- ؟١—-? 1
في مظهر أخر يوفر الاختراع الحالي طرق الاستخدام واحدة أو اكثر من متعدد ببتيدات الاندماج لتشخيص مرض السل indicative of tuberculosis باستخدام اختبار الجلد في الجسم الحي skin test in vivo . كما هو مستخدم في السياق الحالي + يعد اختبار الجلد عبارة عن معايرة تجري مباشرة على بروتين الذي فيه يتم قياس تفاعل مفرط الحساسية من نوع متأخر ( Jie) (DTH © الانتفاخ swelling أو الاحمرار reddening أو التهاب الجلد (dermatitis تابعا للحقن عبر الأدمة بواحدة أو اكثر من polypeptides كما وصفت أعلاه . قد يجري هذا الحقن باستخدام أي جهاز مناسب كافي لتلامس متعدد الببتيد مع الخلايا الجلدية للمريض ؛ مثل ؛ على سبيل المثال ؛ محقنة tuberculin أو محقنة سعة ١ مل . على نحو مفضل ؛ يقاس التفاعل بعد مرور 4؛ ساعة علىIn another aspect, the present invention provides methods for the use of one or more fusion polypeptides for the diagnosis of tuberculosis, using an in vivo skin test. AS USED IN THE CURRENT CONTEXT + A skin test is a direct-on-protein titration in which a delayed-type (Jie) hypersensitivity reaction (DTH©) is measured Swelling, reddening, or dermatitis Subsequent to the transdermal injection of one or more polypeptides as described above This injection may be made using any suitable device sufficient to bring the polypeptide into contact with the skin cells of the patient, such as, for example, a tuberculin syringe or a 1 mL syringe Preferably, the reaction should be measured after 4 hours
الأقل من الحقن وعلى نحو اكثر تفضيلاً حوالي EA إلى VY ساعة بعد الحقن .Less than injection and more preferably about EA to VY 1 hour after injection.
٠ يعد التفاعل 10111 عبارة عن استجابة منيعة موسطة بالخلية ؛ التي تكون كبيرة في المريضي الذين تم تعريضهم مسبقا لاختبار مولد المضاد ( على سبيل المثال » جزء المولد المناعي من متعدد polypeptide Asad المستخدم ؛ أو متغير منه ) . قد يتم قياس الاستجابة بشكل مرئي ؛ باستخدام مسطرة . على وجه العموم ؛ تكون استجابة التي يزيد قطرها عن حوالي در ؛ سم ؛ على نحو مفضل يزيد قطرها عن حوالي ١سم ؛ استجابة إيجابية ؛ دالة على الإصابة بعدوي السل والتي قد0 Reaction 10111 is a cell mediated immune response; that are significant in patients who have previously been exposed to an antigen test (eg, the immunogenic portion of the polypeptide Asad used; or a variant thereof). Response may be measured visually; using a ruler. in general; be a response that exceeds the diameter of about DR; poison ; preferably more than about 1 cm in diameter; positive response; indicative of infection with tuberculosis, which may
٠ active disease تظهر أو لا تظهر باعتبارها مرض نشط ٠ الخاصة بالاختراع 0 polypeptides على نحو مفضل يتم صياغة متعددة ببتيدات الاندماج ؛ باعتبارها تركيبات صيدلية محتوية على متعدد skin fest الحالي ؛ للاستخدام في اختبار الجلد نموذجيا تحتوي تركيبات . physiologically acceptable carrier Lis) gush وحامل مقبول agin0 active disease appears or does not appear as an active disease 0 of the invention 0 polypeptides Preferably multiple fusion peptides are formulated; As multi-containing drugstore formulations, the current skin fest; For use in skin testing Typical formulations contain . physiologically acceptable carrier Lis) gush and acceptable carrier agin
كهذه على واحدة أو اكثر من متعددة البيتيدات المذكورة أعلاه بمدى كمية يتراوح من حوالي ١ ٠٠ ميكروجرام إلى حوالي ٠٠١ ميكزوجرام ؛ على نحو مفضل من حوالي ٠١ ميكروجرام إلى حواليsuch as these on one or more of the polypeptides mentioned above in a quantity range from about 1,000 micrograms to about 100 micrograms; preferably from about 10 micrograms to about
١ _ ٠ ميكروجرام بحجم 6.١ مل . على نحو مفضل ؛ يكون الحامل المستخدم في مثل هذه التركيبات الصيدلية عبارة محلول ملحي مع مواد حافظة ملائمة Tween lf 5 phenol Jia 4 . في مظهر أخر ؛ يوفر الاختراع الحالي طرق لاستخدام متعددة الببتيدات polypeptides من أجل © تشخيص مرض السل ٠ indicative of tuberculosis في هذا المظهر ؛ يتم توفير طرق للكشف عن عدوي المتفطرة السلية في عينة بيولوجية biological «sample باستخدام متعددة ببتيدات الاندماج بمفردها أو في شكل اتحاد كيميائي ٠ كما هو مستخدم في السياق الحالي ؛ تكون " عينة بيولوجية biological sample " عبارة عن أي die محتوية على جسم مضاد antibody التي تم الحصول عليها من مريض . على نحو مفضل pic Yo العينة الدم بكامل ؛ نواتج القشوع sputum ¢ مصل serum ¢ بلازما plasma » اللعاب saliva » السائل المخي الشوكي cerebrospinal fluid أو البول urine . على نحو أكثر تفضيلاً تكون العينة عبارة عن عينة دم أو مصل serum أو بلازما plasma تم الحصول عليها من مريض أو مصدر دم . يستخدم متعدد الببتيد polypeptide في معايرة ؛ كما هو موصوف أدناه ؛ لتحديد وجود أو غياب الأجسام المضادة لمتعدد الببتيد ( الببتيدات ) polypeptide(s) في عينة فيما يتعلق ٠ بقيمة قطع محدد مسبقا . يدل وجود أجسام مضادة كهذه على تحسس لمولدات المضاد المتفطرة التي تعد دالة على مرض السل ٠ indicative of tuberculosis في النماذج التي تستخدم اكثر من واحد من متعدد ببتيد الاندماج ؛ أن polypeptides المستخدمة على نحو مفضل تكون مكملة ( أي أن متعدد ببتيد مكون واحد سوف يقصد به الكشف عن العدوى في عينات حيث لا يتم الكشف عن العدوى بمتعدد ببتيد مكون another component jal ٠ (polypeptide ٠1 _ 0 microgram has a volume of 6.1 mL. preferred; The carrier used in such pharmaceutical formulations shall be saline solution with appropriate preservatives Tween lf 5 phenol Jia 4 . in another guise; The present invention provides methods for using polypeptides for the indicative diagnosis of tuberculosis in this manifestation; Methods for the detection of Mycobacterium tuberculosis infection in a biological sample using multiple fusion peptides alone or in the form of a chemical conjugate 0 as used in the present context are provided; A "biological sample" is any antibody-containing die obtained from a patient. preferably pic Yo Whole blood sample; Sputum products ¢ serum ¢ plasma » saliva » cerebrospinal fluid or urine. More preferably the sample is a sample of blood, serum, or plasma obtained from a patient or a blood source. A polypeptide is used in titration; as described below; Determines the presence or absence of antibodies to polypeptide(s) in a sample with respect to a predefined cut-off value of 0. The presence of such antibodies indicates sensitivity to Mycobacterium antigens that are indicative of tuberculosis in models using more than one fusion polypeptide; The polypeptides used are preferably complementary (ie, one component polypeptide will be intended to detect infection in samples where infection with another component jal 0 (polypeptide 0) would not be detected
_ )م عموما من أجل تقييم عينات المصل serum تم الحصول عليها من سلسلة مرضى معروفين بإصابتهم قد يتم تمييز متعددة الببتيدات polypeptides المكملة باستخدام كل متعدد ببتيد على نحو مستقل بعدوي المتفطرة السلية . بعد تحديد أي من عينات الاختبار موجبة ( كما وصف أدناه © باستخدام كل واحدا من متعدد ببتيد ؛ قد تصاغ اتحادات كيميائية من اثنان أو اكثر من متعدد ببتيدات الاندماج التي تعد قادرة على الكشف عن العدوي في معظم ؛ أو كل ؛ العينات المختبرة. تكون متعددة الببتيدات polypeptides كهذه مكملة . يكون ٠١-١١ 7 تقريبا من الأمصال من الأفراد المصابون بعدوي السل سالبة بالنسبة للأجسام المضادة لأي بروتين مفرد. لذلك قد يتم استخدام متعدد ببتيدات مكملة في شكل اتحاد كيميائي بغرض تحسين حساسية الاختبار ٠ التشخيصى Improve sensitivity of a diagnostic test + هناك مجموعة متنوعة من نسق المعايرة المعروفة لهؤلاء ذوي المهارة العادية في هذا المجال لاستخدام واحد أو اكثر من متعددة الببتيدات polypeptides من اجل الكشف عن الأجسام المضادة في عينة. أنظر ؛ على سبيل المثال + Harlow and Lane ؛ الأجسام المضادة :ثم ٠ Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory ؛ التي تم دمجها في السياق ٠ الحالي بالإشارة إليها ٠ في نموذج مفضل ؛ تتضمن معايرة استخدام متعدد ببتيد مثبت على داعم صلد للربط إلى ولإزالة الجسم المضاد من العينة . بعد ذلك قد يتم الكشف عن الجسم المضاد المربوط باستخدام مفاعل كشف الذي يحتوي على مجموعة مراسل . تتضمن مفاعلات كشف مناسب أجسام مضادة التي تربط إلى جسم مضاد antibody /متعدد ببتيد متعد التركيب ومتعدد ببتيد حر موسوم بمجموعة مراسل polypeptide complex and free polypeptide labeled with a reporter group Yo ( على سبيل المثال في معايرة شبه منافسة ) ._m) Generally, in order to evaluate serum samples obtained from a series of patients known to have infection, polypeptides complemented using each polypeptide may be independently distinguished for M. tuberculosis infection. After determining which of the test samples is positive (as described below©) using each of the polypeptides, chemical conjugates may be formulated of two or more fusion polypeptides that are capable of detecting infection in most or all of the tested samples. Such complementary polypeptides Approximately 7-11 01 of sera from individuals with tuberculosis infection are negative for antibodies to any single protein Therefore complementary polypeptides may be used in the form of a chemical conjugate in order to improve the sensitivity of the Improve 0 diagnostic test sensitivity of a diagnostic test There are a variety of assay formats known to those of ordinary skill in the art to use one or more polypeptides in order to detect antibodies in a sample. Antibodies: then 0 Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory , which has been incorporated into the present context 0 by reference to 0 in a preferred embodiment Including titration using a polypeptide immobilized on a rigid support to bind to and to remove antibody from the sample . The bound antibody may then be detected using a detection reactor that contains a reporter group. Suitable detection reactors include antibodies that bind to a polypeptide complex and free polypeptide labeled with a reporter group Yo (eg in a semi-competitive titration).
- ¢f . . الذي antibody بديلا عن ذلك ؛ من الممكن استعمال معايرة تنافسية ؛ فيها يتم وسم جسم مضاد يرتبط بمتعدد ببتيد بمجموعة مستقبل والسماح له بالربط بمولد ضد موقوف بعد حضانة مولد الضد مع العينة . أن الامتداد الذي ليه تقوم أجزاء العينة بتثبيط ربط الجسم المضاد الموسوم بمتعدد العينة مع Aled هو مؤشر على binding of the labeled antibody to the polypeptide ail .immobilized polypeptide متعدد الببتيد المثبت © solid material عبارة عن مادة صلدة solid support من الممكن أن تكون الدعامة الصلدة الضد . مثلاً ؛ قد تكون alge معروفة لذوي المهارة المعتادة في هذا المجال التي إليها يتم ربط nitrocellulose عبارة عن وعاء اختبار في لوح معايرة دقيق أو solid support الدعامة الصلدة أو غشاء ملائم أخر . بديلاً عن ذلك ؛ قد تكون الدعامة عبارة عن كرية أو قرص ؛ مثل زجاج أو متعدد ستيرين Jie plastic عصارته أو مادة لدنة latex أو لبن الشجر fiberglass زجاج ليفي ٠ من الممكن أن تكون الدعامة كذلك . polyvinylchloride أو متعدد فينيل كلوريد polystyrene- cf. . which antibody substitutes for it; It is possible to use competitive calibration; In it, an antibody that binds to a polypeptide with a receptor group is labeled and allowed to bind to a stopped antigen after incubating the antigen with the sample. That the extension for which parts of the sample inhibit the binding of the labeled antibody to the polypeptide ail is an indication of the binding of the labeled antibody to the polypeptide ail .immobilized polypeptide © solid material solid support The solid support can be the opposite. For example; ALGE may be known to those of usual skill in the art to which nitrocellulose is attached as a test vessel to a micrometer, solid support, or other suitable membrane. alternatively; The stent may be a sphere or a disk; Such as glass or polystyrene, Jie plastic with its juice, or latex, or tree milk, fiberglass, fiberglass 0. The support can also be. polyvinylchloride or polyvinyl chloride polystyrene
Jie « fiber optic sensor إحساس بصري ليفي lea أو magnetic particle جسيم مغنطيسي . 0784741 في براءة الاختراع الأمريكية رقم Mia » تلك الوسائل التي تم الكشف عنها باستعمال تنوع من الأساليب التنقية solid support بدعامة صلدة polypeptides من الممكن ربط " المعروفة لذوى المهارة في هذا المجال . في سياق الاختراع الحالي ؛ يشير المصطلح " مرتبطة ٠ covalent ؛ و ترابط اسهامي adsorption مثل الامتزاز ٠ إلى كلا من تجمع غير اسهامي الذي قد يكون عبارة عن ترابط مباشر بين مولد الضد و المجموعات الوظيفية ( attachment على الدعامة أو قد يكون ترابط بأي حال من عامل ربط عرضي antigen and functional groups على وعاء في لوح معايرة دقيقة أو adsorption يفضل الربط بالامتزاز ( cross-linking agent على غشاء . في هذه الحالات ؛ من الممكن تحقيق امتزاز بتلامس متعدد الببتيد ؛ في محلول YoJie « fiber optic sensor lea or magnetic particle. 0784741 in US Patent No. Mia » those means that have been disclosed by using a variety of purification methods “solid support polypeptides can be attached” known to those skilled in this field. In the context of the present invention The term "covalent 0" denotes And covalent bonding, adsorption, such as adsorption 0, to both non-covalent pools, which may be a direct bonding between the antigen and the functional groups (attachment to the support), or it may be a bonding in any way from an antigen. and functional groups on a vessel in a microtitration plate or adsorption preferably by adsorption cross-linking agent on a membrane. In these cases, it is possible to achieve a polypeptide contact adsorption in Yo solution
to _ — منظم oD ؛ مع الدعامة الصلدة solid support لمقدار ملاثم من الزمن . يتنوع زمن التلامس مع درجة الحرارة + إلا أنه من الناحية النموذجية » تتراوح درجة الحرارة بين حوالي ساعة واحدة ويوم واحد . عموما + بعد ثلامس وعاء لوح معايرة دقيقة دقيق contacting a well of a plastic (jal microtiter plate مثلا polystyrene أو (polyvinylchloride مع مقدار من متعدد الببتيد polypeptide © متراوح من حوالي ٠ نانوجرام إلى حوالي ١ ميكروجرام ؛ ويفضل حوالي ٠٠١ نانوجرام ؛ كافية لربط كمية ملائمة من مولد الضد ٠ antigen عموما من الممكن تحقيق ترابط اسهامي covalent attachment لمتعدد الببتيد بدعامة صلدة بواسطة أولاً تفاعل الدعامة مع مفاعل ثنائي وظيفي الذي سوف يتفاعل بدوره مع كلا من الدعامة ومجموعة وظيفية « (Jie مجموعة hydroxyl أو amino على متعدد الببتيد . Si ؛ من الممكن ٠ ربط متعدد الببتيد بالدعامات ذات تغليف بوليمري polymer coating 10011216 2ملائم باستعمال benzoquinone أو بواسطة تكثيف مجموعة aldehyde على الدعامة مع hydrogen 5 amine فعال على متعدد الببتيد ( أنظر مثلاً : Immunotechnology catalog and handbook, 1991,at A12-A13 6 في نماذج معينة؛ تكون المعايرة عبارة عن معايرة immunosorbent مرتبط بالأنزيم ( ELISA ) . من الممكن أجراء هذه Vo المعايرة Yl بواسطة تلامس مولد ضد متعدد ببتيد إندماج الذي من الممكن تثبيته على دعامة صلدة ؛ على نحو شائع على جدار لوح معايرة دقيق ؛ مع العينة ؛ بحيث يسمح للأجسام المضادة لمتعدد الببتيد داخل العينة للارتباط بمتعدد ببيتد مثبت . بعد ذلك يتم إزالة العينة الغير مرتبطة من متعدد الببتيد المثبت ويتم إضافة مفاعل كشف قادر على الارتباط بمركب معقد التركيب من جسم مضاد antibody مثبت ومتعدد الببتيد . بعد ذلك يتم تحديد مقدار مفاعل الكشف الذي يبقي مرتبطto _ — oD regulator; With solid support for a suitable amount of time. The contact time with +temperature varies, but typically »temperature ranges from about 1 hour to 1 day. Generally + after contacting a container with a micro titer plate contacting a well of a plastic (jal microtiter plate) for example polystyrene or (polyvinylchloride) with an amount of polypeptide © ranging from about 0 ng to about 1 microgram, preferably about 100 nanograms, sufficient to bind an appropriate amount of 0 antigen. Generally, covalent attachment of a polypeptide to a rigid support can be achieved by first reacting the support with a bifunctional reactor which will in turn react With both the support and a functional group “(Jie) a hydroxyl or amino group on the polypeptide. Si; it is possible to bind the polypeptide to supports with a suitable polymer coating 10011216 2 using benzoquinone or by condensation of the aldehyde group on the support with a hydrogen 5 amine active on the polypeptide (see eg Immunotechnology catalog and handbook, 1991, at A12-A13 6 In certain embodiments the titration is a titration of an enzyme-bound immunosorbent (ELISA) This Vo Yl assay can be performed by means of a fusion peptide-polypeptide antigen contact that can be fixed to a rigid support; Commonly on a precision calibrated board wall; with the sample; This allows the antibody to the polypeptide inside the sample to bind to the polypeptide stabilizer. Then the unbound sample is removed from the stabilized polypeptide and a detection reactor capable of binding to a complex complex of the stabilized polypeptide antibody is added. After that it is determined how much of the detection reactor remains bound
fn _ - بالدعامة الصلدة support 10 باستعمال طريقة مناسبة Jeo lial الكشف النوعي specific reagent 61601101 . على نحو نوعي بدرجة اكبر ؛ بمجرد أن يتم تثبيت متعدد الببتيد على الدعامة وفقا لما هو موصوف بعالية ؛ على نحو نموذجي يتم حصر مواضع ترابط البروتين المتبقي على الدعم . من © الممكن الاستعانة بأي عامل حصر ملائم معروف لذوي المهارة المعتادة في هذا المجال ؛ Jia زلال مصل بقري bovine serum albumin أو (٠١ Tween علامة تجارية) ( Sigma Chemical Co., (St.fn _ - on the rigid support 10 using an appropriate method Jeo lial specific reagent 61601101 . more qualitatively; Once the polypeptide has been fixed to the stent as described above; Typically, the remaining protein binding sites are confined to the support. From © any suitable limiting factor known to those of usual skill in the field may be used; Jia bovine serum albumin or (01 Tween trademark) ( Sigma Chemical Co., (St.
Louis, MO . بعد ذلك يتم حضانة متعدد الببتيد incubation of polypeptide المثبت مع العينة ؛ ويسمح للجسم المضاد للربط بمولد مضاد . من الممكن تخفيف ملائم ؛ مثل محلول ملحي منظم بالفسفات phosphate-buffered saline (PBS) قبل الحضانة . عموما ؛ يكون زمن التلامس Ye الملاثم عبارة عن الفترة الزمنية التي تكون كافية للكشف عن وجود جسم مضاد antibody داخل عينة مصابة بالمتفطرة السلية . من المفضل ان يكون زمن التلامس كاف لتحقيق مستوي ترابط يكون 790 على الأقل مما تحقق عند التوازن بين الجسم المضاد المرتبط والغير مرتبط . بأن ذوي المهارة أوائك سوف يتعرفون أن الزمن الضروري لتحقيق التوازن من الممكن تحديده بسهولة بواسطة معايرة مستوى الترابط الذي يحدث عبر فترةٍ من الزمن . في درجة حرارة الغرفة ؛ من الضروري أن VO يكون زمن الحضانة حوالي ٠ ؟ دقيقة. بعد ذلك من الممكن نزع العينة الغير مرتبط بغسل الدعامة الصلبة بمحلول منظم ملام ؛ مثل محتوي على ٠١ Tween #7 ١ ( علامة تجارية ) من الممكن بعد ذلك إضافة مفاعل كشف إلى الدعامة الصلدة solid support . أن مفاعل الكشف الملائم عن أي مركب يرتبط بمركب جسم مضاد antibody مثبت ومتعدد ببتيد ومن الممكن الكشف عنه بواسطة أي واحد من Yo عدد متنوع من الوسائل المعروفة لاولئك في هذا المجال . من المفضل أن يحتوي عامل الكشفLouis, MO. Then the incubation of the immobilized polypeptide with the sample; It allows the antibody to bind to an antigen. suitable dilution is possible; such as phosphate-buffered saline (PBS) before incubation. Generally ; The contact time (Ye) masked is the period of time that is sufficient to detect the presence of an antibody within a sample infected with Mycobacterium tuberculosis. It is preferable that the contact time be sufficient to achieve a binding level of at least 790 of what is achieved when equilibrium between the bound and unbound antibody. Those of you who are skilled will know that the time necessary to achieve equilibrium can be easily determined by calibrating the level of correlation that occurs over a period of time. at room temperature; It is necessary for VO to have an incubation time of about 0? minute. Afterwards the unbound sample may be removed by flushing the scleral support with a mild buffer solution; Such as containing 01 Tween #7 1 (trademark) It is then possible to add a detection reactor to the solid support. A suitable detection reactor for any compound bound to a stabilized polypeptide antibody complex can be detected by any one of a variety of means known to those in the field. Preferably contain detection factor
— ا على عامل ترابط ( Sie بروتين A أو بروتين lectin of G أو مولد ضد حر free antigen ( مقترنة بمجموعة reporter . تتضمن مجموعات reporter المفضلة انزيمات ( مثل horseradish ٠ ( peroxidase وركائز substrates وعوامل مشتركة cofactors ومثبطات inhibitors واصباغ dyes ونيكليوات أشعاعية radionuclides ومجموعات اشعاع ضوئي luminescent ومجموعات © تفلورية biotin fluorescent وجسيمات غروانية colloidal particles ¢ مثل ذهب وسيلينيوم غرواني pe. colloidal gold and selenium الممكن تحقيق تقارن لعامل الترابط بمجموعة reporter باستعمال الطرق المعيارية المعروفة لذوي المهارة المعتادة في هذا المجال . من الممكن كذلك شراء عوامل ترابط عامة متقارنة بتنوع من مجموعات reporters من العديد من مصادر تجارية ) (Zymed Laboratories, San Francisco, CA, and Pierce, Rockford.— a binding factor (Sie protein A, lectin of G protein, or free antigen) coupled to a reporter group. Preferred reporter groups include enzymes (such as horseradish 0) peroxidases, substrates, cofactors, inhibitors, dyes, radionuclides, fluorescent groups, biotin fluorescent groups, colloidal particles such as gold and colloidal selenium pe Colloidal gold and selenium It is possible to conjugate the binding agent to a reporter group using standard methods known to those of ordinary skill in this field. , San Francisco, CA, and Pierce, Rockford.
IL lia . ٠ بعد ذلك يتم حضانة مفاعل الكشف مع مركب جسم مضاد antibody مثبت و متعدد ببتيد لفترة زمنية كافية للكشف عن الجسم المضاد المرتبط . عموما من الممكن تحديد مقدار زمني كاف من تعليمات الجهة المصنعة أو بواسطة معايرة مستوي الترابط الذي يحدث على مدى فترة من الزمن . يتم بعد ذلك نزع مفاعل الكشف الغير مرتبط ويجري الكشف عن مفاعل الكشف Jag pall باستعمال مجموعة reporter . تعتمد الطريقة المستعملة للكشف عن مجموعة reporter على طبيعة مجموعة reporter ٠ . بالنسبة للمجموعات الفعالة إشعاعيا ؛ من الملائم بصفة عامة طرق تعداد الومضان أو طرق التصوير الإشعاع الذاتي . من الممكن استخدام طرق مطيافية مجهرية للكشف عن إصباغ ومجموعات إشعاع ضوثي أو مجموعات تفلورية fluorescent قد يتم الكشف عن Biotin باستخدام avidin المقترن بمجموعة مراسلة مختلفة ( على نحو شائع مجموعة ذات فعالية إشعاعية أو مجموعة fluorescent أو أنزيم ) قد يتم توجه عام الكشف عن ٠ مجموعات مراسلة الأنزيم بإضافة ركيزة substrate ( عموما لمدة محددة من الزمن generally forIllya. 0 After that, the detection reactor is incubated with an immobilized polypeptide-antibody complex for a period of time sufficient to detect the bound antibody. Generally it is possible to determine an adequate amount of time from the manufacturer's instructions or by calibrating the level of bonding that occurs over a period of time. The unrelated detection reactor is then removed and the detection reactor jag pall is detected using the reporter group. The method used to detect the reporter group depends on the nature of the reporter group 0 . For radioactive groups; Scintigraphy or autoradiography methods are generally appropriate. Microspectroscopy methods can be used to detect dye and photoactive groups or fluorescent groups Biotin may be detected using avidin conjugated to a different reporter group (commonly a radioactive group, a fluorescent group, or an enzyme) A general approach may be to detect 0 enzyme messenger groups by adding a substrate (generally for a specified period of time).
th - - (a specific period of time . متبوعا بالتحليل الطيفي أو بتحليل أخر لمنتجات التفاعل ٠ Spectroscopic or other analysis of the reaction products من أجل تحديد وجود أو غياب الأجسام المضادة للمتفطرة السلية في العينة ؛ عموما تجري مقارنة الإشارة المكتشفة من المجموعة المراسلة التي تبقي مرتبطة بالدعامة الصلدة solid support oo بالإشارة إلى Bla قيمة قطع محددة مسبقا . في أحد النماذج المفضلة ؛ تكون قيمة القطع عبارة عن إشارة بمعدل متوسط التي تم الحصول عليها عندما تم تحضين مولد المضاد المثبت مع عينات من مريض غير مصاب بالعدوى . على وجه العموم ؛ تعتبر عينة مولدة لإشارة ذات ثلاثة cin عيارية أعلى قيمة القطع المحددة مسبقا » إيجابية بالنسبة لمرض السل . في نموذج مفضل بديل ؛ يتم تحديد قيمة القطع باستخدام Receiver Operator Curve . وفقا لطريقة Sackett ٠ وأآخرين + ١ ¢ على الأدوية السريري Clinical Epidemiology : علم أساسي للدواء السريري ؛ Lite Brown وشركاء الصفحات ٠١١ و ٠١١7 . على نحو موجز ؛ في هذا النموذج ؛ قد يتم تحديد قيمة القطع من بقعة لأزواج من معدلات إيجابية حقيقة ( أي ¢ الحساسية (sensitivity ومعدلات إيجابية زائفة false positive rates ) نوعية ٠ ) التي تماثل كل واحدة من قيمة القلع المحتملة لنتيجة الاختبار التشخيصى . تكون قيمة القطع على البقعة الأقرب للزاوية اليسرى ve العلوية ( أي القيمة التي نتضمن المساحة الأكبر ) هي قيمة القطع الأكثر دقة ؛ وقد تعتبر عينة مولدة لإشارة تكون أعلى من قيمة القطع المحددة بهذه الطريقة إيجابية ٠ على نحو بديل ؛ قد تتغير قيمة القطع إلى اليسار بمحاذاة البقعة ؛ لتقليل المعدل الإيجابي الزائف false positive rate إلى الحد الأدنى Se لتقليل المعدل السالب الزائف false negative rate إلى الحد الأدنى . عموما ¢ تعتبر عينة مولدة لإشارة التي تكون أعلى من قيمة القطع المحددة بهذه الطريقة إيجابية لمرض ٠ السل tuberculosis . Yay ¢ |th - - (a specific period of time.), followed by spectral or other analysis of the reaction products 0 in order to determine the presence or absence of M. tuberculosis antibodies in the sample; generally the signal is compared detected from the reporter group that remains attached to the solid support oo with reference to Bla a predetermined cut-off value.In one of the preferred embodiments the cut-off value is an average rate signal obtained when the immobilized antigen was incubated with Samples from an uninfected patient In general, a sample generating a signal with three cin titres above the pre-determined cut-off value is considered positive for tuberculosis In a preferred alternative model, the cut-off value is determined using the Receiver Operator Curve according to the Sackett 0 et al + 1¢ on Clinical Epidemiology Lite Brown and Partners pages 011 and 0117 In summary, in this form, may be specified The cut-off value of a spot for pairs of true positive rates (ie sensitivity and false positive rates of quality 0) that each correspond to the potential extraction value of a diagnostic test result. The cut-off value on the spot closest to the upper left ve corner (that is, the value that includes the largest area) is the most accurate cut-off value; A sample generating a signal that is higher than the cut-off value determined in this way may be considered positive 0 alternatively; The cutoff value may change to the left along the spot; To minimize the false positive rate Se to minimize the false negative rate . Generally ¢ a signaling sample that is higher than the cut-off value determined in this way is considered positive for tuberculosis. Yay ¢ |
- ee ؛ تجري المعايرة في نسق تدفق سريع خلالي أو اختبار شرائح ؛ حيث أنه يتم Ala في نموذج ذو flow- في اختبار التدفق الخلالي . nitrocellulose Jie + تثبيت مولد الضد على غشاء immobilized ؛ ترتبط الأجسام المضاد داخل العينة بمتعدد الببتيد المثبت through test حيث تمر العينة خلال الغشاء . بعد ذلك يرتبط مفاعل كشف بتركيب الجسم المضاد polypeptide و متعدد الببتيد حيث يتدفق المحلول المحتوي على مفاعل الكشف خلال الغشاء . قد يجري بعد ذلك الكشف عن مفاعل الكشف المترابط كما وصف أعلاه. في نسق اختبار الشرائح ؛ يتم غمر طرف واحد من الغشاء الذي إليها يتم ربط متعدد الببتيد في محلول محتوي على العينة . ترحل . العينة بمحاذاة الغشاء خلال منطقة متضمنة مفاعل الكشف والى مساحة متعدد الببتيد المثبت يدل تركيز مفاعل الكشف في متعدد الببتيد على وجود الأجسام المضادة للمتفطرة السلية في العينة على نحو نموذجي » أن تركيز مفاعل الكشف في ذلك الموضع بشكل نموذج ؛ مثل خط ».الذي . ٠ يمكن قراءته بصريا. يدل عدم وجود نموذج كهذا على نتيجة سالبة . عموما ؛ يتم اختبار كمية متعدد الببتيد المثبت على الغشاء لكي يكون نموذج يمكن تمييزه بصريا عندما تحتوي العينة الحيوية ؛ كما تم ELISA على مستوى من الأجسام المضادة الذي سوف يكون كافيا لتوليد إشارة موجبة في * توضيحه أعلاه . على نحو مفضل ؛ تقدر كمية متعدد الببتيد المثبت على الغشاء من حوالي . نانوجرام 8٠ ميكروجرام ؛ وعلى نحو اكثر تفضيلاً من حوالي ١ نانوجرام إلى حوالي ٠ serum نقطة واحدة) من مصل Mie ( نموذجيا من الممكن أجراء هذه الاختبارات بكمية صغيرةٍ جداً ٠. أو دم المريض . يعد وصف الاختراع ثم تقديم الأمثلة كسبيل للشرح ولا تعد هذه الأمثلة محددة لمجاله للمتفطرة السلية تحتفظ بتوليد antigens wall مولدات fusion proteins مثال : بروتينات اندماج 4 المناعة للأجزاء المستقلة ٠-ee; Calibration takes place in a rapid flow interstitial or slide test format; Whereas, Ala is done in a flow-form in the interstitial flow test. nitrocellulose Jie + immobilized antigen on a membrane; The antibodies inside the sample bind to the through test as the sample passes through the membrane. Then, a detection reactor is attached to the polypeptide and polypeptide antibody composition, whereby the solution containing the detection reactor flows through the membrane. The correlated detection reactor may then be detected as described above. in slide test format; One end of the membrane to which the polypeptide is attached is immersed in the solution containing the sample. leave. The sample aligns with the membrane through the area containing the detection reactor and into the area of the polypeptide immobilizer The concentration of the detection reactor in the polypeptide typically indicates the presence of antibodies to Mycobacterium tuberculosis in the sample » The concentration of the detection reactor at that location is typically; Like a line. 0 is visually readable. The absence of such a model indicates a negative result. Generally ; The amount of membrane-mounted polypeptide is tested to be a visually distinguishable sample when the biosample contains; The ELISA was also done on a level of antibody that will be sufficient to generate a positive signal in * clarified above. preferred; The amount of membrane-bound polypeptides is estimated at approx. nanograms 80 micrograms; More preferably from about 1 ng to about 0 serum one drop (of Mie serum) typically these tests can be performed with a very small amount of 0.0 or a patient's blood. The description of the invention is then given examples As a way of explanation, these examples are not specific to its scope for Mycobacterium tuberculosis. It retains the generation of antigens wall generators of fusion proteins, example: fusion proteins 4 Immunostaining for independent parts 0
4ه 1 المواد والطرق المستخدمة materials and methods ١ / 7 تشكيل بروتينات الاتدماج construction of fusion proteins : يجري تعديل تسلسلات التشفير لمولدات الضد antigens المتفطرة السلية بواسطة PCR لأجل © تسهيل اندماجها وفيما بعد تعديل بروتين الاندماج جينيا يجري تكبير DNA باستعمال محلول منظم 717 بحجم ٠١ ميكرولتر ٠١ X و ؟ ميكرولتر . ٠١ مليمول dNTPs و ¥ ميكرولتر من كل المواد التمهيدية ل PCR بتركيز ٠١ ميكرومول و 2 AY ميكرولتر من ماء و١٠ ميكرولتر Plu (Stratagene, La Jolla, CA) DNA ads و ١ ميكرولتر من DNA بتركيز سواء Vie نانوجرام / ميكرولتر ( لمولد الضد 3 151828 ) أو ٠ 5 نانوجرام / ميكرولتر (مولدات الضد -١ antigens TH38 ٠ بوزن YA كيلو دالتون ) . بالنسبة algal الضد 161883 ؛ يجري النسخ في 54 درجة مئوية لمدة Y دقيقة .متبوعا + 6 دورة في 17 درجة مئوية لمدة ١١ ثانية و YY درجة مئوية لمدة ١ دقيقة وأخيراً ٠ بدرجة حرارة YY مئوية لمدة ؛ دقائق . بالنسبة لمولد الضد TA كيلو دالتون ؛ يجري النسخ في 97 درجة die لمدة ١ دقيقة ¢ متبوعا ب ٠ 5 دورة بدرجة حرارة Augie AT لمدة ٠ 5 ثائية و TA درجة مئوية لمدة 10 ثانية و VY درجة مئوية لمدة ؟ دقيقة واخيراً بواسطة VY درجة مئوية VO لمدة ؛ دقائق . بالنسبة لمولد الضد 1038-1 ؛ يجري النسخ في 94 درجة مئوية لمدة ؟ دقيقة ويتبع ذلك ٠١ دورات في 7 درجة مئوية لمدة ١١5 ثانية و TA درجة مئوية لمدة ١١ ثانية و١7 درجة مئوية sad 2ر١ دقيقة ؛ ٠ 5 دورة في 1 درجة مئوية لمدة ١١ ثائية ؛ TE درجة مئوية لمدة ٠ ثانية و VY درجة مئوية لمدة V0 واخيرا VY درجة مئوية لمدة ؛ دقائق . بعد الهضم Following digestion نيكلاز باطني restriction endonuclease حصر لإنتاج أطراف Yo متماسكة غير حادة ؛ يتم ربط نيكلوتيد متعدد نوعي لكل متعدد ببتيد اندماج fusion polypeptide4E1 Materials and methods 1 / 7 Construction of fusion proteins: The coding sequences of the Mtb antigens are modified by PCR in order to facilitate their fusion and later genetic modification of the fusion protein DNA is amplified using buffer solution 717 in a volume of 01 μl 01X and ? μl. 01 mmol dNTPs, ¥ μl of all 01 μmol PCR primers, 2 μl AY water, 10 μl Plu (Stratagene, La Jolla, CA) DNA ads, and 1 μl of DNA at a concentration of either Vie ng/μl (for antigen 3 151828) or 0 5 ng/μl (for TH38-1 antigens 0 kDa YA). for algal antibody 161883 ; Copying takes place at 54 °C for Y min. followed by +6 cycles at 17 °C for 11 sec, YY °C for 1 min and finally 0 at YY °C for ; minutes . for TA antigen kDa; Copying takes place at 97 degrees die for 1 min ¢ followed by 0 5 cycles of Augie AT for 0 5 sec, TA °C for 10 sec and VY °C for ? minutes and finally by VY °C VO for ; minutes . for antigen 1038-1; Replication takes place at 94 °C for a period of ? min followed by 01 cycles at 7°C for 115 seconds, TA°C for 11 seconds, 17°C sad 1.2 minutes; 0 5 cycles at 1°C for 11 seconds; TE is Celsius for 0 seconds, VY is Celsius for V0, and VY is Celsius for ; minutes . Following digestion Restriction endonuclease Restriction to produce cohesive blunt Yo ends; A specific polynucleotide is attached to each fusion polypeptide
١ه - في بلازميد التعديل الجيني ligated into an expression plasmid احتوي كل بلازميد ناتج على . تسلسلات تشفير لمولدات ضد مستقلة لكل متعدد ببتيد اندماج . لقد كانت نواقل التعديل الجيني PET-12b و 01771101 . يتم ربط تسلسلات التشفير الثلاثة لمولدات الضد antigens 2 وع7011 و Ra35 لأجل تشفير © بروتين اندماج fusion protein واحد ( رقم تعريف التسلسل : ١ و ؟ ) ( الشكلين ١ أو 7 ب). يتم كذلك ربط تسلسلات التشفير الثلاثة لمولدات الضد Erdl4 antigens و 077 و 1411 لأجل تشفير بروثين اندماج OL ( أرقام تعريف التسلسل : 7 و؟؛ ) ( شكل (FY يتم ربط تسلسلات التشفير الثلاثة لمولدات المضادة 1051883 و3860 و TH38-1 لتشفير بروتين اندماج fusion protein واحد (رقم تعريف التسلسل : © و ١ ) ( الأشكال ؟ أ-؟ د ) . يتم ربط اثنان من ٠ تسلسلات التشفير ThHg و 1038-1 لتشفير بروتين اندماج fusion protein ) أرقام تعريف التسلسل : 7 و (A (الأشكال (afte . يجري ربط تسلسلات التشفير الأربعة لمولدات الضد TbRa3 antigens 5 38120و 38-1 156و DPEP لتشفير بروتين اندماج fusion protein (أرقام تعريف التسلسل : ١١ و ١4 ) ( الشكلين أ و 7 ب ) . يجري ربط تسلسلات التشفير الأربعة الخاصة بمولدات ضد DPV و 1411 و MSL و MTCC2 لتشفير بروتين اندماج fusion aly protein Ve ( أرقام تعريف التسلسل : ١١7 و ١8 ) (الشكلين 4 أ و 4 ب) . يتم ربط تسلسلات التشفير الثلاثة الخاصة بمولدات الضد antigens 9 و PDV و MTI لتشفير بروتين اندماج fusion protein واحد ( أرقام تعريف التسلسل : 4 و ٠١ ) ( لأشكال °o أ-ه ي). يجري ربط تسلسلات التشفير الخمسة الخاصة بمولدات الضد antigens 14 1:0 و DPV 5 1411و MSL و 2 لتشفير بروتين اندماج ) ارقام تعريف التسلسل : ١١و ١١ ) ( الشكلين ١ أ و ١1ب ) . يتم ٠ ربط تسلسلات التشفير الأربعة الخاصة بمولدات الضد s DPV 5 Erdl4 antigens 1111و MSL لتشفير بروتين اندماج واحد ( أرقام تعريف التسلسل : 5 و "١ ( الشكلين ٠١ أ و1e - in the genetic modification plasmid ligated into an expression plasmid Each resulting plasmid contained a . Coding sequences of independent antigens for each fusion polypeptide. The gene editing vectors were PET-12b and 01771101. The three coding sequences of antigens 2, P7011, and Ra35 are ligated to encode a single fusion protein © (sequence identification number: 1 and ?) (Figs. 1 or 7b). The three coding sequences of Erdl4 antigens, 077 and 1411, are also ligated to encode the OL fusion protein (sequence ID numbers: 7 and ?; ) (Fig. FY). The three coding sequences of antigens 1051883, 3860 and . TH38-1 encoding one fusion protein (sequence ID: © and 1 ) (Figs. ?a-?d). Two of the 0 coding sequences ThHg and 1038-1 are ligated The four coding sequences of TbRa3 antigens 5 38120, 38-1 156, and DPEP are ligated to encode a fusion protein. protein (sequence identification numbers: 11 and 14) (Figs. A and 7B).The four coding sequences of antigens DPV, 1411, MSL and MTCC2 are ligated to encode a fusion protein. aly protein Ve (sequence identification numbers: 117 and 18) (Figs. 4a and 4b) The three coding sequences of antigens 9, PDV and MTI are ligated to encode a protein One fusion protein (Sequence ID numbers: 4 and 01) (for forms °o a-e-j). The five coding sequences of antigens antigens 14 1:0, DPV 5 1411, MSL, and 2 encoding a fusion protein (sequence identification numbers: 11 and 11) are ligated (Figs. 1a and 11b). The four coding sequences of the s DPV 5 Erdl4 antigens 1111 and MSL are ligated to encode a single fusion protein (sequence identification numbers: 5 and “1” (Figs. 01a and
_ ١ه ٠ ب ) . يجري ربط تسلسلات التشفير الثلاثة الخاصة بمولدات الضد sErd 14 antigens 7و 7 لتشفير بروتين اندماج واحد ( أرقام تعريف التسلسل : 7١ و (YY (الشكلين ١١ و ١١ ب ) . يتم ربط تسلسلات التشفير الاثنين الخاصتين بمولدات الضد antigens 10118 و لتشفير بروثين اندماج واحد ( ارقام تعريف التسلسل : ١7و JOYE الأشكال ١١أو © ١١ب ) . يجري ربط تسلسلات التشفير الاثنين الخاصتين بمولدات الضد Ral2 antigens و DPPD لأجل تشفير بروتين اندماج واحد ( ارقام تعريف التسلسل (Yi, ve: ( الشكلين PAY و؟اب ). يجري التعديل الجيني للبروتينات المأشوبة recombinant proteins were expressed في الاشريكية القولونية coli .7 باستعمال سنة بقايا من histidine لدي بروتين طرفي أميني amino-terminal portion ٠ باستعمال ناقل بلازميد PET-176 ( PET ) ونظام تعديل جيني بوليمراز polymerase WI « Novagen, Madison) T7RNA expression system ) ويتم استعمال سلالة اشريكية قولوينة (Novagen) BL21 ( DE3 ) PlysE £. coli للتعديل الجيني عال المستوي high level ٠ expression يجري تنقية بروتينات الاندماج المأشوبة recombinant (His-Tag) fusion proteins من المادة ٠ الطافية القابلة للذويان أو هيكل تضمين غير قابل للذوبان حجمة ٠٠ #مل من مزارع بتشغيله محرضة ب 1716 بواسطة الفصل الكروماتوجرافي chromatography الألف باستعمال : The one step QIAexpress Ni-NTA Agarose Matrix ( QIAGEN, Chatsworth,CA) في وجود .8M urea باختصار ؛ يضاف © 1 مل من مزرعة مشبعة خلال ليلة من 13121 محتوية على تركيب 11:1 في ٠ مل من وسط YT 25 المحتوي على 5٠ ميكروجرام / مل من YE ampicillin | ٠ ميكروجرام /مل من chloramphenicol والنمو في TY درجة مئوية مع الهز ٠_ 1e 0 b). The three coding sequences of sErd 14 antigens 7 and 7 are ligated to encode a single fusion protein (sequence identification numbers: 71 and YY (Figs. 11 and 11b). The two coding sequences are ligated of antigens 10118 and encoding a single fusion protein (sequence identification numbers: 17 and JOYE Figs 11 or ©11b). Sequence identification numbers (Yi, ve: (Figs. PAY and ?Ab). Recombinant proteins were expressed in Escherichia coli 7. Genetic modification is carried out using a residue year of histidine from a protein Amino-terminal portion 0 using a plasmid vector PET-176 (PET) and a polymerase gene modification system (WI « Novagen, Madison) T7RNA expression system) and an Escherichia coli strain (Novagen) was used BL21 ( DE3 ) PlysE £. coli for high level gene modification High level 0 expression Recombinant (His-Tag) fusion proteins are purified from 0 soluble supernatant or insoluble inclusion framework A volume of 00 #ml from cultures operated by 1716 agitator by 1000 chromatography using: The one step QIAexpress Ni-NTA Agarose Matrix (QIAGEN, Chatsworth, CA) in the presence of .8M urea in short; © 1 mL of a saturated culture overnight of 13121 containing an 11:1 composition is added to 0 mL of YT 25 medium containing 50 µg/mL of YE ampicillin | 0 µg/mL of chloramphenicol and grow at TY°C with 0 shaking
or _ — يتم حث المزارع البكتيرية bacterial cultures باستعمال ¥ مليمول من 1716 في مستوي كثافة بصرية 074 مقدارها JY + والنمو لمدة ؟ ساعات إضافية (00- ٠. إلى ٠١4 ) . تجمع الخلايا من Ja vv من مزارع التشغيلة بالفرز بالطرد المركزي centrifugation وإعادة التعليق resuspended في ٠ مل من محلول منظم رابط ١ ) binding buffer جزئ جرامي من sodium phosphate © وبتركيز هيدروجيني PH + و ٠ مليمول من 1115-1101 ؛ بتركيز هيدروجيني (A pH محتوي على ¥ مليمول من PMSF و ٠١ ميكروجرام / مل Leupeptin إضافة إلى قرص كامل من مثبط (Boehringer Mannheim) protease لكل Yo مل . يتم تحليل الاشريكية القولونية E.coli بواسطة ذوبان التجمد متبوعا بالمعالجة بالموجات الصوتية brief sonication بشكل مختصر ثم الدوران بمعدل ١١ كيلو دورة لكل دقيقة لمدة ٠ دقيقة لجعل أجسام ٠ التضمين على هيئة كرية pellet . تغسل أجسام التضمين ثلاث مرات في CHAPS 17 في ٠١ مليمول من 15-116 ) بتركيز هيدروجيني (A pH أن هذه الخطوة تقلل بشكل كبير تلوث 98 . يتم بصورة نهائية ذوبان هيكل التضمين في ٠ مل من محلول تريط منظم محتوي على A جزئ جرامي من اليوريا أو يضاف A جزئ جرامي من اليوريا مباشرة إلى المادة الطافية القابلة للذوبان . كانت بروتينات الاندماج الماشوبة ببقايا His—Tag عبارة عن تشغيلة مرتبط براتينج Vo اجاروز 1113178 ( © مل من 0 لكل 55٠ مل من مستويات الحث (inductions بواسطة الهز في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحد وتمرير المركب عبر عمود . يتم تمرير التدفق مرتين عبر نفس العمود ويغسل العمود ثلاث مرات بالاستعانة ب ٠ مل كل مرة من محلول غسل منظم ١ ) wash buffer جزئ جرامي من sodium phosphate و ٠ مليمول من «Tris —Hel بتركيز هيدروجيني pH 1.7 ) محتوي كذلك على A جزيئي جرامي من urea . تشطف بروتينات مرتبطة ٠ باستخدام ٠ مل من immidazole بتركيز Vou جزئ جرامي في محلول due منظم و * مل من الأجزاء المتجمعة . تجمع الأجزاء الذي يحتوي كل منها على بروتين اندماج fusion proteinor _ — bacterial cultures are induced with ¥ mmol of 1716 at an optical density level of 074 of JY + and grow for ? Additional hours (00- 0.014 to 0.014). Cells were collected from Ja vv from the batch cultures by centrifugation and resuspension in 0 ml of binding buffer 1 mol of sodium phosphate © at pH + and 0 mmol from 1115-1101; At a concentration (A pH) containing ¥ mmol of PMSF and 01 μg / ml of Leupeptin in addition to a full tablet of (Boehringer Mannheim) protease inhibitor per Yo ml. Escherichia coli is analyzed E.coli by freeze thawing followed by brief sonication briefly then spinning at 11 krpm for 0 min to make the inclusion bodies into pellet form. Three times in CHAPS 17 at 10 mmol of 15-116 (pH) A pH indicates that this step significantly reduces contamination of 98. The inclusion structure is finally dissolved in 0 mL of the containing buffer buffer on A mol of urea or A mol of urea was added directly to the soluble supernatant The fusion proteins recombinant with His—Tag residue were a batch bound to Vo agarose resin 1113178 (© ml from 0 For each 550 mL of inductions by shaking at room temperature for one hour and passing the compound through a column. The flow is passed twice through the same column and the column is washed three times with 0 mL each time of buffer wash solution. 1) wash buffer 1 mole of sodium phosphate and 0 mmol of “Tris-Hel” pH 1.7 containing also 1 mole of urea. 0 bound proteins were eluted with 0 mL of immidazole at Vou mM in due buffer and *mL of pooled fractions. An assembly of segments that each contains a fusion protein
© مأشوب ثم تجري ديلزة مقابل ٠١ مليمول من Tris Hol ( بتركيز هيدرجيني (A pH يرتبط مرةٍ واحد بالمادة المرصامة NI-NTA bound مرة واحدة والشطف eluted والديلزة dialyzed في ٠مليمول من 18-1101 ) بتركيز هيدروجيني (VA يتنوع نتاج البروتين المأشوب من TY ٠ مليجرام لكل لتر من المزرعة البكتيرية المحثة بنقاوة اكبر من aT AA معايرة البروتينات 0 المأشوبة من حيث التلوث بالاندوتوكسين باستعمال معايرة (BioWhittaker) Limulus وأظهرت البروتينات أنها تحتوي أقل من ٠ 10E.UImg /١ “- معايرة تكاثر خلية proliferation assay 1-0611 يتم اختبار متعدد ببتيدات الاندماج المنقاة من حيث المقدرة على حث تكاثر Stimulation of proliferation : الخلية 1 في مستحضرات خلية أحادية نووية محيطية peripheral blood mononuclear cell (PBMC) Ye . يتم زراعة PBMCs من المانحون المعروفون بأنهم موجوبون لأختبار الجلد PPD والتي اظهرت الخلايا T انها تتكاثر في استجابة ل PPD والبروتينات القابلة للذوبان الخام من المتفطرة السلية في 1640 RPMI مزودة بمصل بشري متجمع ٠١ 7و Ov ميكروجرام /مل من «gentamicin يضاف متعدد ببتيدات منقاة في حجم مماثل بتركيزات ٠.٠ إلى ٠ ميكروجرام /مل . بعد ستة أيام من الزراعة في ألواح ب 476 وعاء مستديرة القاعدة بحجم ٠٠١ VO ميكرولتر ويزال ٠٠ ميكرولتر من الوسط من كل وعاء لأجل تحديد مستويات TFN-y ؛ وفقا لما هو موصوف في السياق أدناه في مقطع 7 . يلي ذلك تعريض الألواح بالاستعانة ب ١ ميكروكوري/لكل وعاء من tritiated thymidine لمدة VA ساعة إضافية ؛ والتجميع وتحديد وامتصاص tritium باستعمال عداد تذيذبي غازي gas scintillation counter . يؤخذ في الاعتبار أن الأجزاء الضئيلة الناتجة عن التكاثر في كلاهما تتضاعف ثلاث أضعاف اكبر من التكاثر Ye الملحوظ في الخلايا المزروعة في الوسط بمفرده موجبة .© Recombinant, then dialyzeed with 01 mmol of Tris Hol (at a hydrogen concentration (A pH) bound once to the NI-NTA bound once and rinsed eluted and dialyzed at 0 mmol of -18 1101) at a pH concentration (VA) the recombinant protein yield varied from TY 0 mg per liter of the induced bacterial culture with greater purity than aT AA titration of the 0 recombinant proteins in terms of endotoxin contamination using (BioWhittaker) Limulus titration and showed Proteins it contains less than 0 10E.UImg / 1 “- proliferation assay 1-0611 The purified fusion polypeptides are tested for their ability to induce proliferation stimulation of cell 1 in Peripheral blood mononuclear cell (PBMC) Ye .PBMCs are cultured from donors known to be positive for PPD skin testing and in which T cells have been shown to proliferate in response to PPD and soluble proteins of crude Mycobacterium tuberculosis in RPMI 1640 supplied with pooled human serum 01 and 7 Ov µg/mL of “gentamicin” purified polypeptides were added in similar volume at concentrations of 0.0 to 0 µg/mL. After six days of cultivation in 476 round-bottomed plates with a volume of 100 μl VO, 00 μl of medium was removed from each vessel for determination of TFN-y levels; As described in the context below in Section 7. Then, the plates were exposed to 1 μC/per vessel of tritiated thymidine for an additional VA hour; Collection, determination and adsorption of tritium using a gas scintillation counter. It is taken into account that the tiny parts resulting from proliferation in both of them multiply three times greater than the proliferation (Ye) observed in cells cultured in the media alone positively.
: هه ١ / 1 / ؟ معايرة interferon-y في ظروف معقمة يتم إزالة الطحال من كل واحد من الفئران mice ويعد معلق من الخلايا الأحادية في 1 متبوعا بتحليل WDA الدم الحمراء . يتم وضع ٠٠١ ميكرولتر من الخلايا ) "٠١ xX خلية ) لكل وعاء في لوح دقيق المعايرة به 97 وعاء مسطحة القاعدة . يتم حث المزارع © بالاستعانة ببروتينات مأشوبة لمدة YE ساعتومعايرة المادة الطافية من Cus وجود ٠ interferon-y يتم تحليل مستويات interferon-y للمادة الطافية بواسطة SANDWich Elisa « باستعمال أزواج من الجسم المضاد والإجراءات المتاحة من فار مينجين . يتم إنتاج منحنيات معيارية باستعمال cytokine ات فئران مأشوبة ٠ يتم تغليف ألوا z ا ( ما يسمي بعملية Corning ( باستعمال ٠ ميكرولتر/للوعاء ( ١ ميكروجرام / مل ؛ في محلول تغليف من ١١ bicarbonate جزيني ٠ جرامي ٠ بتركيز هيدروجيني pH 5.7 ) من mAb ماسك لل cytokine ( مضاد ل interferon-y الفئران mice المستخلص من الجرذان PharMingen) » فئة رقم (18181D ؛ والحضانة لمدة ؛ ساعات في درجة حرارة الغرفة . تهز محتويات اللوح والحصر بعد ذلك باستعمال 0..5-0185 1 Tween و ٠5 ) BSA ZV ميكرولتر/ للوعاء ) لمدة ليلة في ؛ درجة مئوية والغسل لستة مرات في Tween 7 ١. ١-858 . تضاف المعايير ( interferon-y الفثران (mice وعينات مادة طافية I مخففة في BSA 7 +.) « Tween / «..0—PBS لمدة ساعتان في درجتحرارة الغرفة . تغسل الألواح كما هو بعالية ويلي ذلك التحضين لمدة ساعتان في درجة حرارة الغرفة مع ٠٠١ ميكرولتر/ وعا ¢ من Ab ثان biotin rat 7 mouse IFN-Y (فئة رقم PharMingen / 18112 D ) بمعدل تحفيف در + ميكروجرام/مل في Tween / + + 0-PBS و .+ 7 BSA بعد الغسل ؛ يتم حضانة الألوا ح مع ٠ ميكرولتر/وعاء من streptavidin-HRP (Zymed) بمعدل تخفيف ١ :: Huh 1 / 1 /? Interferon-y titration In sterile conditions the spleens are removed from each of the mice and a suspension of monocytes is prepared in 1 followed by analysis of red blood WDA. 100 μL of cells (“01” x X cells) per vessel are placed in a 97-well flat-bottom titration plate. © cultures are induced with recombinant proteins for YE hr and the supernatant titrated from Cus having 0 interferon-y levels of the supernatant are analyzed by a SANDWich Elisa “using antibody pairs and procedures available from PharMingen Standard curves are produced using cytokine 0 recombinant mice z colors are encapsulated a) The so-called Corning process (using 0 μl/pot (1 μg/mL; in a coating solution of 0 gram 11 mossy bicarbonate 0 pH 5.7) of mAb masking cytokine (anti-interferon-y mouse mice extracted from rats (PharMingen) » Class No. (18181D); incubation for two hours at room temperature. The contents of the plate and mat are shaken after that. Using 0..5-0185 1 Tween and (05 BSA ZV) μL/bowl) overnight at 1°C and washing for six times at Tween 7 1.1-858. Standards (interferon-y) are added. (mice and supernatant samples I diluted in BSA 7 +.) “Tween/..0—PBS for 2 hours at room temperature. Plates were washed as above and followed by incubation for 2 hours at room temperature with 100 μl/μl of Ab biotin rat 7 mouse IFN-Y (class no. PharMingen/18112 D) at dilution rate in + µg/mL in Tween / + 0-PBS and + 7 BSA after washing; Plates are incubated with 0 µL/well of streptavidin-HRP (Zymed) at a dilution rate of 1:
oY = — You في ٠-5 / د71 و ).+ BSA ZL في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة . تغسل الألواح مرة واحدة اخيرة . واستعمال ٠٠١ ميكرو/ للوعاء من الركيزة : TMB substrate tetramethylbenzidine, Kirkegaard and Perry, Gaithersburg, MD) - '3.3.5,5( للأظهار ويتوقف التفاعل بعد ظهور اللون ٠ بالاستعانة aS pas ,11:50 ؛ 56 ميكرولتر/ وعا ء . يجري © تحديد الامتصاص (OD) عند مستوي £04 نانومتر باستعمال 207٠ نانومتر كطول موجي مرجعي وتركيز عصنامان_بقيم باستعمال المنحني المعياري . + / 7-النتائج 7 -بروتينات اندماج ثلاثي tri-fusion proteins حاث للاستجابات المناعية يتم إدخال تسلسلات التشفير الثلاثة الخاصة بمولدات الضد antigens المتفطرة السلية في ناقل ٠ التعديل الجيني لإنتاج بروتين اندماج fusion protein . يجري إنتاج مولدات الضد antigens المشار lea) 18812 و 10119 و 12835 علي هيئة بروتين اندماج fusion protein مأشوب واحد ( الشكلين ١ أ و ١ ب ) يتم إنتاج كل من 17014 و DPV و 1411 على هيئة بروتين إنتاج ثان (YJ) . بطريقة الفة يتم تنقية بروتيني الاتدماج للاستعمال في معايرات انبوب الاختبار والجسم الحي . Ye يجري اختبار بروتيني الاندما z من حيث قدرتها على حث استجابات خلية T من ستة من الخاضعين للاختبار 277 عندما يتم قياس تكاثر الخلية 7 » كلا بروتني الاندماج أظهرا نمط مفاعليه مماثلة وكما هو الحال بالنسبة لأجزائها المستفلة ( الأشكال ١4-١4 و ) . يجري الحصول على نتيجة مماثلة عندما يتم قياس IFNy lil ( الأشكال Sie. (soo استجاب الخاضع للاختبار D160 لمولدات الضد antigens ع1511 و MTI على نحو مستقل .oY = — You in 0-5 / d71 f).+ BSA ZL at room temperature for 1 hour. The panels are washed one last time. And the use of 001 microns / container of the substrate: TMB substrate (tetramethylbenzidine, Kirkegaard and Perry, Gaithersburg, MD) - '3.3.5,5) for display, and the reaction stops after the appearance of color 0 with the help of aS pas 11. : 50;56 μl/reservoir Absorbance (OD) was determined at the £04 nm level using 2070 nm as the reference wavelength and Essanmann concentration_ values using the standard curve. fusion proteins induce immune responses The three coding sequences of the Mtb antigens are inserted into the gene-editing vector 0 to produce a fusion protein The indicated antigens (lea) 18812 and 10119 are produced and 12835 as one recombinant fusion protein (Figures 1a and 1b). Both 17014 and DPV and 1411 are produced as a second production protein (YJ). In an affinity way the fusion proteins are purified for use in in vitro and test tube calibrations. Ye fusion protein z is being tested for its ability to induce T cell responses from six of the 277 test subjects when cell proliferation is measured 7 » Both fusion proteins showed a similar pattern of reactivity and as is the case for their extracted parts (Fig. 14 -14 f). A similar result is obtained when IFNy lil (Fig. Sie. (soo) is measured. Subject D160 responded to p1511 and MTI antigens independently.
© ا كذلك استجاب الخاضع للاختبار 0160 لبروتينيات الاندماج التي تضمنت مولدات الضد antigens الثلاثة (الأشكال ؛ ١ب (ey على النقيض من ذلك لم يلاحظ استجابة خلية 7 من 12160 إلى مولدات ضد أخري على نحو منفردا . خاضع أخر للاختبار أخر ؛ 0201 لم يتفاعل مع مولدات ضد Erdl4 و 0517 أو© a Test subject 0160 also responded to fusion proteins that contained all three antigens (Figs. 1b ey). In contrast, cell 7 of 12160 was not observed to respond to other antigens individually. Other test subject Other 0201 did not interact with antigens against Erdl4 and 0517 or
MTT © على نحو منفرد ؛ لم يكن كذلك سريع الاستجابة لبروتين الاندماج محتوي على مولدات الضد antigens هذه . يجب ملاحظة انه عندما لم تكن استجابة الخلية 7 إلى الإجزاء المستقلة من بروتيني الاندماج قوية بدرجة خاصة ؛ فأن بروتينات الاندماج تحت الاستجابات التي تكون متساوية إلى أو أعلى من تلك المستحثة بواسطة مولدات الضد antigens المستقلة في معظم الحالات .MTT © individually; It was also not responsive to a fusion protein containing these antigens. It should be noted that when the 7 cell response to the independent fragments of the two fusion proteins was not particularly strong; The fusion proteins are subject to responses that are equal to or higher than those induced by independent antigens in most cases.
٠ يتم كذلك اختبار بروتين اندماج fusion protein ثلاثتي 12-16119-5م28 على هيئة مولد مناعة في الجسم الحي . في هذه التجارب » يتم حقن بروتين الاندماج إلى داخل وسادة القدم للفئثران لإغراض التحصين . كل مجموعة من ثلاثة OS استقبلت البروتين في صياغة Bale مساعدة adjuvant مختلفة : Ling ( SBAS2 + SBASIC وآخرين ؛ 1197 ؛ فاكسين ١١ : 517-17 )و 7 و ((1)011ه . بعد التحصين تحت الجلد مرتين بفاصل زمني0 The fusion protein Triglyceride 12-16119-5M28 is also being tested as an immunogen in vivo. In these experiments, the fusion protein is injected into the mouse pad for immunization purposes. Each of the three OS groups received the protein in a different adjuvant adjuvant Bale formulation: Ling (SBAS2 + SBASIC et al.; 1197; fax11:517-17) and 7(1)011e. After subcutaneous immunization twice at an interval
Vo ثلاثية أسابيع ؛ يتم التضيحة بالحيوانات بعد أسبوع واحد . ويتم جمع العقد اللمفاوية الخاصة بتلك الحيوانات للاإستعمال باعتبارها خلايا مستجيبة في معايرات تكائر خلية cell proliferation 1 و إنتاج cytokine +Vo three weeks; Animals are sacrificed after one week. The lymph nodes of these animals are collected for use as effector cells in assays of cell proliferation 1 and cytokine production.
بصرف النظر عن المادة المساعدة التي يتم استعمالها في التحصين ؛ يتم حث استجابات تكاثرRegardless of the adjuvant used in the immunization; Proliferative responses are induced
ض خلية T cell proliferation القوية ضد ع1511 ؛ عندما يتم استعماله كمولد ضد مستقل ( شكلStrong T cell proliferation against p1511; When used as a standalone antigen (Fig
١١ 0 ٠ أ ) . يتم حث استجابات أضعف ضد 2235 و 8812 ( المشكلين ١١ب و ١١ج ) . عندما11 0 0 a). Weaker responses are induced against 2235 and 8812 (Figs. 11b and 11c). when
_ oA باعتباره مولد مناعة ؛ يتم ملاحظة استجابة 2812 ~TbH9-Ra35 يتم استعمال بروتين الاندماج . مماثلة لتلك المضادة للأجزاء المستقلة استجابات SBAS2 و SBASIC انتجت المواد المساعدة «cytokine عندما يتم قياس إنتاج على الرغم من ذلك ؛ نتج عن اتحاد . (VA و 11.4 ( شكل (VY مماثل ( شكل interferon-y الاقوي والمستوي الأقل interferon-y استجابات aluminum hydroxide و SBAS7 كيميائي بين © الثلاثة . في ما يتعلق باستجابة الجسم المضاد البشري antigens لكل مولدات الضد IL-4 لإنتاج أن بروتين الاندماج قد سبب إثارةٍ كلا من الاستجابات و١5- 1١9 في الجسم الحي ؛ يظهر شكل . من المواد المساعدة الثلاثة UT و ,ه180 عندما يتم استعمال مع IgGl النوعية لمولد الضد أضف إلى ذلك ؛ يتم تحصين فئران 5781/6 باتحاد كيميائي من اثنان من تركيبات التعديل أو Ral2-ThH9-Ra35(Mth32A) الجيني كل منها يحتوي على تسلسلات التشفير ٠ أظهرت الحيوانات . DNA vaccines على هيئة لقاحات Erd14-DPV-MTI (Mth39A) . المحصنة وقاية ملحوظة ضد مرض السل عند اختبار المناعة الايروسولي التالي لبكتريا حية اعتمادا على هذه النتائج؛ يتم صناعة تركيب الاندماج من تسلسلات التشفير 1415328 و و منتجة المشفر المختبر في نموذج وقاية طويل الأجل من خنزير هندي . في هذه 039 مأشوب أحادي أو خليط fusion protein الدراسات ؛ يتم تحصين الخنازير الهندي ببروتين اندماج ٠5 ٠ adjuvant في صياغات محتوية على مادة مساعدة Mtb39A و Mth32A من بروتينات خليط_ oA as an immunogen; A response of 2812 ~TbH9-Ra35 fusion protein is used. Similar to those of independent antibody responses, SBAS2 and SBASIC produced adjuvant 'cytokine' when production was measured though; resulted from union. (VA) and 11.4 (VY-form is similar (strong interferon-y form and lower level interferon-y aluminum hydroxide and SBAS7 chemical responses among the three © in relation to the human antibody response Antigens for all IL-4 antigens to produce that fusion protein elicited both F15-119 responses in vivo; a figure is shown of the three adjuvants UT and H180 when induced Use with antigen-specific IgGl In addition, mice 5781/6 are immunized with a chemical conjugate of two constructs of the modification or Ral2-ThH9-Ra35(Mth32A) gene each containing coding sequences0 Immunized animals with DNA vaccines in the form of Erd14-DPV-MTI (Mth39A) vaccines showed significant protection against tuberculosis upon aerosol immunoassay following live bacteria. and coproducer tested in a long-term prophylaxis model of a boar.In these mono- or mixed 039 recombinant fusion protein studies, boar grafts are immunized with the 050 adjuvant fusion protein in formulations containing the Mtb39A adjuvant. and Mth32A are mixture proteins
SBAS2 أو SBASIC ج أن الخنازير الهندية المحصنة ببروتين اندماج 7١ أ- ٠ يظهر الشكل كانت أفضل وقاية ضد الإصابة بمرض السل عند أجراء اختبار مناعة تالٍ ؛ بالمقارنة بالحيوانات في خليط في نفس صياغة المادة المساعدة .وفرت antigens من مولدات الضد Ol المحصنة . _بروتينات الاندماج في صياغة 53852 اكبر وقاية على الإطلاق في الحيوانات ٠SBAS2 or SBASICc showed that Indian pigs immunized with fusion protein 71a-0 (Figure shown) had the best protection against infection with tuberculosis at a subsequent immunoassay; Compared to animals in a mixture in the same adjuvant formulation, the antigens provided by the immunized Ol antigens. _ Fusion proteins in formulation 53852 largest protection ever in animals 0
_ 5ه - هكذا من الممكن استعمال بروتينات الاندماج من مولدات ضد المتفطرة السلية mycobacterium tuberculosis antigens المتنوعة باعتبارها مولدات مناعة اكثر فعالية في صياغات اللقاح vaccine عن خلائط مكونات مستقلة . [x J "- بروتين اندماج ثناني متضمنة استجابات مناعية bi-fusion protein induced immune responses | . يتم انتاج بروتين اندماج fusion protein ثنائي محتوى على مولدات ضد TbH-9 و Tb38-1 بدون تسلسل مفصلي بواسطة طرق مأشوبة . يجري التحقيق من قدرة بروتين الاندماج 10381 9 لحث تكاثر Stimulation of proliferation خلية 1 cell وانثاج interferon-y . يجري الاستعانة ب PBMC من ثلاث متبرعين : أحد المتبرعين تم إظهار من قبل بأنه يستجيب لمولد Ve الضد 16119 ولكن ليس إلى مولد الضد Tb38-1 ) متبرع ١١١ ( ‘ أظهر al استجابة لمولد الضد 7038-1 ولكن لم يظهر استجابة لمولد الضد 15119 ) متبرع 184 ) أظهر متبوع أخر استجابة لكلا مولدي الضد (متبرع (Ye) تشرح نتيجة هذه الدراسات الفاعلية الوظيفية لكلا مولدي الضد في بروتين الاندماج ( الأشكال ١7أو١ابو '١7أو sary '7١أو'١ب). Yo 1 /3/1-بروتين اندماج رباعي متفاعل بأمصال مريض السل . يتم إنتاج بروثين fusion protein z Loi) محتوي على مولد الضد TbRa3 و 3810و 1538-1 و DPEP بواسطة الطرق المأشوبة recombinant methods + يتم اختبار فاعلية بروتين الاندماج tetra-fusion protein = هذا باعتباره 7-2 بامصال من بروتينات مصابة بالمتفطرة السلية_ 5e - Thus, it is possible to use fusion proteins from various mycobacterium tuberculosis antigens as more effective immunogens in vaccine formulations than mixtures of independent components. [x J "- bi-fusion protein induced immune responses | bi-fusion protein containing antigens TbH-9 and Tb38-1 is produced. Without detailed sequencing by recombinant methods The ability of the fusion protein 10381 9 to induce 1-cell proliferation and interferon-y fusion is investigated The PBMC is being used from three donors: one of the donors was shown accepted that it responded to Ve antigen 16119 but not to antigen Tb38-1 (donor 111) ' al showed a response to antigen 7038-1 but did not show a response to antigen 15119 (donor 184) showed another follower Response to both antigens (Ye donor) The result of these studies explains the functional activity of both antigens in the fusion protein (Figs. 17, 1apo' 17, sary '71, or 1b). Tetra-reactive sera of tuberculosis patients, fusion protein z Loi) containing antigen TbRa3, 3810, 1538-1 and DPEP are produced by recombinant methods + the effectiveness of tetra-fusion protein is tested = this as 2-7 sera from infected M. tuberculosis proteins
1١ اا بواسطة 2115/8 . تشرح نتائج الدراسات هذه (جدول 1( أن كل مولدات الضد antigens الأربعة تعمل على نحو مستقل في بروتين الاندماج . سوف يقدر شخص ما ذو مهارة في هذا المجال انه من الممكن تغيير مولدات الضد antigens المستقلة في كل بروتين اندماج ومن المتوقع ان الفعالية المقارنة توفر ذلك لكل واحد من عوامل © تحديد المستضد الذي يظل متاح من الناحية الوظيفية . أضف إلى ذلك ؛ من الممكن استعمال الصور المبتورة من البروتينات المحتوية على عوامل تحديد المستضد الفعالة في هيكل بروتينات الاندماج ٠ construction of fusion proteins أن الاختراع الحالي غير محدود بمجال النماذج التمثلية والتي يكون الغرض منها توضيح مظاهر فردية للاختراع » تعد أي تسلسلات نسائل أو nucleotide أو حمض أميني amino acid التي ٠ تكون متماثلة وظيفيا داخل مجال الاختراع . في الواقع سوف تصبح التعديلات المتنوعة للاختراع علاوة على تلك الموصوفة هنا في السياق واضحة لذوي المهارة في هذا المجال من الوصف السابق والرسومات المرفقة . أن الغرض من هذه التعديلات تقع في مجال عناصر الحماية المرفقة . من المفهوم أن كل الأحجام الأزواج القاعدية المفترضة للنيكليوتيدات nucleotides تقريبية ويتم استعمالها لعمليات الوصف + ay Vo إدماج كل المطبوعات المذكور هنا في السياق بالإشارة إليها بالكامل . جدول ١ فعالية بروتين الاندماج 0-2 مصابة بمرض السل الأمصال المعتادة تاعلية 1158© ١. الحلة| 10# |لحا] 79# | الحالة | هوية YA | TbRa | Tb38-1 | DPEP 40 | 4 | 0045 المصل 3 كيلو 0 دالتون Kd + | - | جا - | مج اك | + | اق | 28 SR IT11 AA by 8/2115 . The results of these studies (Table 1) explain that all four antigens act independently in the fusion protein. Someone skilled in this field will appreciate that it is possible to change the independent antigens in each fusion protein and it is expected that The comparative effectiveness provides that for each of the antigen-determining factors © that remain functionally available In addition, it is possible to use truncated forms of proteins containing active antigen-determining factors in the construction of fusion proteins that the present invention is not limited to the scope of representative models whose purpose is to illustrate individual aspects of the invention » Any clone, nucleotide or amino acid sequences which are functionally the same are within the scope of the invention. Described herein in context is evident to those skilled in this field from the foregoing description and accompanying drawings.The purpose of these modifications lies within the scope of the attached claims.It is understood that all assumed base pair sizes of nucleotides are approximate and are used for descriptions + ay Vo Integrate all publications mentioned herein into context by referring to them in full. Table 1 Fusion Protein Efficiency 0-2 Patient with tuberculosis The usual serology above © 1158 1. Al-Hilla | #10 | Status | YA ID | TbRa | Tb38-1 | DPEP 40 | 4 | 0045 Serum 3 Kilo 0 Daltons Kd + | - | Ja - | Mag Ak | + | aq | 28 SR IT
—- ١1١ _ Bla] TB [eso ا + [evs | + | + | + | + | - [ 8931100 TB :ءا [eee + | + ذا + Te To sow] TB [NAS ا + [VR + | + دا | + | - + -ا + حا | 04 TB [YA] + [Yeve + | + ee | - 9004] TB [ea] + | ج | - | جد الال | + 107004] TB [Ave | + ا | + | جد - | + ا 92004] TB اتا | + [vse + Tow | اج Te | اا | 9704 TB [Neve جد + لقا | + | - + 118004] TB امنا + | vere + جا + د | - | - 2304ل 18 (Vee | + [veva | + | + | + اج ا جد ا ل +جدا + | + لقا + | 18 7504ل - 274004 TB vA Ls [vv + | - جا | - | + 220004 18 [Ver] + لاقت Tw | - جا - دا 2820041 18 :تا | + [ave + [ow oe 28004) TB ل دا + ا | + [oe | - ااا 308004] TB [v.v.Al + [ves حال + | د | د جد 404ل [ TB haw + قر + To اا جا 317004] 18 Nov) x PAY اجا جا ee 312004] 18 JhNes] + Teer + To ee اا | 380004 TB JNA] - Teeny |e oe oe astooal TB | ا - اهل ny Fo ee | امج 478004 | TB OME - Tea ا + Toe es 410004 | TB معدا + vy [we | - | - اجا غلان ا + ا .| 18 04لله ل | + | oe Te 421004] TB} vev | + [veer 0+ | - Te | - | +د 28004 TB [ev - قا ا fo | - | د - | - | + 4647| pl | Se] - | كحي [oo اا ا 44688 ah ا - ااا ae اا ا ا دا—- 111 _ Bla] TB [eso a + [evs | + | + | + | + | - [ 8931100 TB : A [eee + | + The + Te To sow] TB [NAS A + [VR + | + da | + | - + -a + ha | 04 TB [YA] + [Yeve + | +ee | - 9004] TB [ea] + | C | - | grandfather | +107004] TB [Ave | + a | + | find - | + a 92004] TB ATA | + [vse + Tow | Aj Te | aaa | 9704 TB [Neve Grandpa + Laqa | + | - + 118004] TB safe + | vere + ga + d | - | - 2304l 18 (Vee | + [veva | + | + | + vv + | - vv + | + lq + | 18 7504l - 274004 TB vA Ls [vv + | - ga | - | + 220004 18 [Ver] + met Tw | - ga - da 2820041 18 : ta | + [ave + [ow oe 28004) TB for da + a | + [oe| - 308004] TB [v.v.Al + [ves hal + | d | D JED 404 L [ TB haw + To ee 317004] 18 Nov) x PAY Aga ee 312004 18 JhNes + Teer + To ee aa | 380004 TB JNA] - Teeny |e oe oe astooal TB | A - Ahl ny Fo ee | MG 478004 | TB OME - Tea A + Toe es 410004 | TB set + vy [we | - | - Aja Glan A + A .| 18 04 God for | + | oe Te 421004] TB} v | + [veer 0+ | - Te | - | +d 28004 TB [ev - qa a fo | - | d - | - | +4647| pl | Se] - | khi [oo aa aa 44688 ah aa - aa ae aa aa aa
AGS | al] YEA] -د [ye ooAGS | al] YEA] -D [ye oo
A6S0| قلا أطبيصض - FLX | - دا | 0A6S0| Qala Atbeed - FLX | - Da | 0
AGL] ell "© [To | اا To ااا 4692| all one] - [Av oo ا ee ل Len [CL ال له الم a الا - pee | - ا | حا احا 4695 ah cave l - hed | - اذ | ا اا د 696 طبض ت7١ TY Te كد | | |[ الممتاصط اAGL] ell "© [To | | ha ha 4695 ah cave l - hed |
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SA08290425A SA08290425B1 (en) | 2005-11-12 | 2005-11-12 | Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SA08290425A SA08290425B1 (en) | 2005-11-12 | 2005-11-12 | Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SA08290425B1 true SA08290425B1 (en) | 2012-05-16 |
Family
ID=58231249
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SA08290425A SA08290425B1 (en) | 2005-11-12 | 2005-11-12 | Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SA (1) | SA08290425B1 (en) |
-
2005
- 2005-11-12 SA SA08290425A patent/SA08290425B1/en unknown
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2326598C (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis antigens and their uses | |
US7335369B2 (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis antigens and their uses | |
JP4516616B2 (en) | MYCOBACTERIUMUMBERBERCULOSIS antigen fusion protein and use thereof | |
JP4764445B2 (en) | Compounds for immunotherapy and diagnosis of tuberculosis and methods of their use | |
ES2262595T3 (en) | COMPOUNDS AND METHODS FOR IMMUNOTHERAPY AND DIAGNOSIS OF TUBERCULOSIS. | |
US8143386B2 (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis antigens and their uses | |
CA2405247A1 (en) | Tuberculosis antigens and methods of use thereof | |
US6465633B1 (en) | Compositions and methods of their use in the treatment, prevention and diagnosis of tuberculosis | |
SA08290425B1 (en) | Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses | |
SA08290426B1 (en) | Fusion Proteins of Mycobacterium Tuberculosis Antigens and Their Uses | |
ZA200005505B (en) | Fusion proteins of mycobacterium tuberculosis and their uses. |