SA00210285B1 - الوقاية من مرض نشواني الأصل amyloidogenic disease ومعالجته - Google Patents
الوقاية من مرض نشواني الأصل amyloidogenic disease ومعالجته Download PDFInfo
- Publication number
- SA00210285B1 SA00210285B1 SA00210285A SA00210285A SA00210285B1 SA 00210285 B1 SA00210285 B1 SA 00210285B1 SA 00210285 A SA00210285 A SA 00210285A SA 00210285 A SA00210285 A SA 00210285A SA 00210285 B1 SA00210285 B1 SA 00210285B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- antibody
- antibodies
- peptide
- amyloid
- cells
- Prior art date
Links
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 46
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 43
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title abstract description 117
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title abstract description 8
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 title description 11
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 title description 11
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 title description 7
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims abstract description 102
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 claims abstract description 52
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 245
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 111
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims description 76
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 69
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 60
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 48
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 44
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 27
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 23
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 18
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 10
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 claims description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 claims description 3
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 122
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 abstract description 55
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 40
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 abstract description 11
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 abstract description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 135
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 128
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 124
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 109
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 104
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 99
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 94
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 92
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 88
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 88
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 75
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 75
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 75
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 71
- 230000004044 response Effects 0.000 description 66
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 65
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 64
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 63
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 62
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 62
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 59
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 53
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 51
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 48
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 47
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 42
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 42
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 39
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 38
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 37
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 37
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 33
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 33
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 32
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 30
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 29
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 29
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 27
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 25
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 25
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 101000831205 Danio rerio Dynein axonemal assembly factor 11 Proteins 0.000 description 23
- 102100024282 Dynein axonemal assembly factor 11 Human genes 0.000 description 23
- 241001559542 Hippocampus hippocampus Species 0.000 description 23
- 101000831210 Homo sapiens Dynein axonemal assembly factor 11 Proteins 0.000 description 23
- 239000000306 component Substances 0.000 description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 23
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 23
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 23
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 23
- 239000000463 material Substances 0.000 description 23
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 23
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 22
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 22
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 22
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 20
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 19
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 17
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 17
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 15
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 14
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 14
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 14
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 14
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 14
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 14
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 13
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 12
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 12
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 12
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 description 11
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 11
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 11
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 11
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 11
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 10
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 10
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 10
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 10
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 10
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 10
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 9
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 9
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 description 9
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 9
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 9
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 9
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 9
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 description 9
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 9
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 9
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 9
- 241001247203 Syngnathidae Species 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 8
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 8
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 8
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 8
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 7
- 108010045517 Serum Amyloid P-Component Proteins 0.000 description 7
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 7
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- -1 ctyr Chemical compound 0.000 description 7
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000013461 design Methods 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 7
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 7
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 7
- 101150065508 salA gene Proteins 0.000 description 7
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 7
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 7
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 6
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 6
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 206010018341 Gliosis Diseases 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 6
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 6
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 6
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 6
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 6
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 6
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 6
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 6
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 6
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 6
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 6
- 241000272478 Aquila Species 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 5
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 241001103596 Lelia Species 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 108050006783 Synuclein Proteins 0.000 description 5
- 102000019355 Synuclein Human genes 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 5
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 5
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 5
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 5
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 4
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 4
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000001947 dentate gyrus Anatomy 0.000 description 4
- 235000019820 disodium diphosphate Nutrition 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000007387 gliosis Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 4
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 4
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 3
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 3
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- 206010044688 Trisomy 21 Diseases 0.000 description 3
- 241000710959 Venezuelan equine encephalitis virus Species 0.000 description 3
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 125000004057 biotinyl group Chemical group [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 3
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 3
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 3
- 208000027061 mild cognitive impairment Diseases 0.000 description 3
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 230000007171 neuropathology Effects 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 3
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 3
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- QMXCRMQIVATQMR-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-pyridin-2-ylsulfanylpropanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSC1=CC=CC=N1 QMXCRMQIVATQMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HONKEGXLWUDTCF-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-2-methyl-4-phosphonobutanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@](N)(C)CCP(O)(O)=O HONKEGXLWUDTCF-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FBKFDSUZBVDZIX-FFGDOFBPSA-N (4s)-4-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-acetamido-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-2-methylpropanoyl]amino]-3-[4-(phosphonomethyl)phenyl]propanoyl]amino]-3-(6-chloro-1h-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-[[1-[[(2s)-1-amino-4-meth Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NC(C)(C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(CP(O)(O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=C(Cl)C=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NC1(CC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(C)=O)C1=CC=CC=C1 FBKFDSUZBVDZIX-FFGDOFBPSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- GBBVHDGKDQAEOT-UHFFFAOYSA-N 1,7-dioxaspiro[5.5]undecane Chemical compound O1CCCCC11OCCCC1 GBBVHDGKDQAEOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 2
- 241001103582 Aelia Species 0.000 description 2
- 241001136792 Alle Species 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 2
- 101100028791 Caenorhabditis elegans pbs-5 gene Proteins 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 101000823051 Homo sapiens Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 2
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 2
- 102100039564 Leukosialin Human genes 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100021794 Microtubule-associated protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N Nitroglycerin Chemical compound [O-][N+](=O)OCC(O[N+]([O-])=O)CO[N+]([O-])=O SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019944 Olestra Nutrition 0.000 description 2
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 2
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 2
- 108010050254 Presenilins Proteins 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 102100039663 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase F Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 2
- 101150107869 Sarg gene Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N almurtide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CO[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@@H](NC(C)=O)C=O NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N 0.000 description 2
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 2
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 208000037875 astrocytosis Diseases 0.000 description 2
- 230000007341 astrogliosis Effects 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 2
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000005786 degenerative changes Effects 0.000 description 2
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 2
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 2
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 2
- 102000046783 human APP Human genes 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 2
- 238000013388 immunohistochemistry analysis Methods 0.000 description 2
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 210000001872 metatarsal bone Anatomy 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N mifamurtide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 2
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 230000002314 neuroinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 2
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 2
- 210000004179 neuropil Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 2
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 2
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 2
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 238000011820 transgenic animal model Methods 0.000 description 2
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000003905 vulva Anatomy 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- OOGFPFWTORZYAN-RSLQBAFYSA-N (2S)-4-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC1C[C@H](NC1)C(=O)O.OC1C[C@H](NC1)C(=O)O OOGFPFWTORZYAN-RSLQBAFYSA-N 0.000 description 1
- WDVIDPRACNGFPP-QWRGUYRKSA-N (2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O WDVIDPRACNGFPP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NGEZPLCPKXKLQQ-VOTSOKGWSA-N (e)-4-(3-methoxyphenyl)but-3-en-2-one Chemical compound COC1=CC=CC(\C=C\C(C)=O)=C1 NGEZPLCPKXKLQQ-VOTSOKGWSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 3,3'-diaminobenzidine Chemical compound C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUSNPFGLKGCWGN-UHFFFAOYSA-N 3-[4-(3-aminopropyl)piperazin-1-yl]propan-1-amine Chemical compound NCCCN1CCN(CCCN)CC1 XUSNPFGLKGCWGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- DWHCYDWXLJOFFO-UHFFFAOYSA-N 4-(5-phenylthiophen-2-yl)aniline Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(C=2C=CC=CC=2)S1 DWHCYDWXLJOFFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQILVUYCDHSGEU-UHFFFAOYSA-N 4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexane-1-carboxylic acid Chemical compound C1CC(C(=O)O)CCC1CN1C(=O)C=CC1=O LQILVUYCDHSGEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCNQUWLLXZZZAC-UHFFFAOYSA-N 4-cyano-1-(2,4-dichlorophenyl)-5-(4-methoxyphenyl)-n-piperidin-1-ylpyrazole-3-carboxamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=C(C#N)C(C(=O)NN2CCCCC2)=NN1C1=CC=C(Cl)C=C1Cl MCNQUWLLXZZZAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOJKKJKETHYEAC-UHFFFAOYSA-N 6-Maleimidocaproic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O WOJKKJKETHYEAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSFODEXXVBBYOC-UHFFFAOYSA-N 8-[4-(dimethylamino)butan-2-ylamino]quinolin-6-ol Chemical compound C1=CN=C2C(NC(CCN(C)C)C)=CC(O)=CC2=C1 BSFODEXXVBBYOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150085078 APA2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001415073 Adela Species 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZSOICJZJSRWNHX-ACZMJKKPSA-N Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](C)[NH3+] ZSOICJZJSRWNHX-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- ZKEHTYWGPMMGBC-XUXIUFHCSA-N Ala-Leu-Leu-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZKEHTYWGPMMGBC-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100034112 Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 229910000497 Amalgam Inorganic materials 0.000 description 1
- 101100408068 Amanita phalloides PHA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 108010060159 Apolipoprotein E4 Proteins 0.000 description 1
- 238000006677 Appel reaction Methods 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 101100435018 Arabidopsis thaliana APA3 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 1
- 101100298998 Caenorhabditis elegans pbs-3 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100033620 Calponin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 1
- 102000001327 Chemokine CCL5 Human genes 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 244000260524 Chrysanthemum balsamita Species 0.000 description 1
- 235000005633 Chrysanthemum balsamita Nutrition 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000759568 Corixa Species 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 244000303965 Cyamopsis psoralioides Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- AEFLONBTGZFSGQ-GSVOUGTGSA-N D-isoglutamine Chemical compound NC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O AEFLONBTGZFSGQ-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101100289061 Drosophila melanogaster lili gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000709744 Enterobacterio phage MS2 Species 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000666 Fowlpox Diseases 0.000 description 1
- 108010001517 Galectin 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100039558 Galectin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- OYRVWOGRRQDEQH-MLVLNPCWSA-N Gln-Tyr-Ile-Lys-Ala-Asn-Ser-Lys-Phe-Ile-Gly-Ile-Thr-Glu-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O)C(C)CC)C1=CC=CC=C1 OYRVWOGRRQDEQH-MLVLNPCWSA-N 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Polymers OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101100268553 Homo sapiens APP gene Proteins 0.000 description 1
- 101000799143 Homo sapiens Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal Proteins 0.000 description 1
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001039157 Homo sapiens Leucine-rich repeat-containing protein 25 Proteins 0.000 description 1
- 101001090454 Homo sapiens Lysosomal amino acid transporter 1 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000616438 Homo sapiens Microtubule-associated protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000609219 Homo sapiens Polyadenylate-binding protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000815628 Homo sapiens Regulatory-associated protein of mTOR Proteins 0.000 description 1
- 101000652747 Homo sapiens Target of rapamycin complex 2 subunit MAPKAP1 Proteins 0.000 description 1
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 description 1
- 101000648491 Homo sapiens Transportin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241001313288 Labia Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040695 Leucine-rich repeat-containing protein 25 Human genes 0.000 description 1
- 108010013709 Leukocyte Common Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010005832 Leukosialin Proteins 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 102100034797 Lysosomal amino acid transporter 1 homolog Human genes 0.000 description 1
- 108010048188 MS2 polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 108010030317 Macrophage-1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001442495 Mantophasmatodea Species 0.000 description 1
- 241000252067 Megalops atlanticus Species 0.000 description 1
- 101710093519 Microtubule-associated protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 229930182756 Milliamine Natural products 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 240000002769 Morchella esculenta Species 0.000 description 1
- 235000002779 Morchella esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 101100066433 Mus musculus Fcgr3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100128278 Mus musculus Lins1 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000007265 Myrrhis odorata Nutrition 0.000 description 1
- JJIHLJJYMXLCOY-BYPYZUCNSA-N N-acetyl-L-serine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JJIHLJJYMXLCOY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108700015872 N-acetyl-nor-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010049175 N-substituted Glycines Proteins 0.000 description 1
- 101800000597 N-terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000108 N-terminal peptide Human genes 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 229910021586 Nickel(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N O-phosphoryl-L-serine Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283201 Odobenidae Species 0.000 description 1
- 241000353355 Oreosoma atlanticum Species 0.000 description 1
- 101150006573 PAN1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 240000004760 Pimpinella anisum Species 0.000 description 1
- 235000012550 Pimpinella anisum Nutrition 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 244000236580 Psidium pyriferum Species 0.000 description 1
- 235000013929 Psidium pyriferum Nutrition 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 1
- 244000097202 Rathbunia alamosensis Species 0.000 description 1
- 235000009776 Rathbunia alamosensis Nutrition 0.000 description 1
- 101000836455 Rattus norvegicus Aldo-keto reductase family 1 member B1 Proteins 0.000 description 1
- 101000809448 Rattus norvegicus Amphiregulin Proteins 0.000 description 1
- 101000928257 Rattus norvegicus NADPH:adrenodoxin oxidoreductase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- WINXNKPZLFISPD-UHFFFAOYSA-M Saccharin sodium Chemical compound [Na+].C1=CC=C2C(=O)[N-]S(=O)(=O)C2=C1 WINXNKPZLFISPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000219287 Saponaria Species 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 102100023105 Sialin Human genes 0.000 description 1
- 101710105284 Sialin Proteins 0.000 description 1
- 241000543375 Sideroxylon Species 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 102100028748 Transportin-1 Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 235000012545 Vaccinium macrocarpon Nutrition 0.000 description 1
- 244000291414 Vaccinium oxycoccus Species 0.000 description 1
- 235000002118 Vaccinium oxycoccus Nutrition 0.000 description 1
- 208000000260 Warts Diseases 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- VTLYZTRDIRBJDH-BVRVJCKWSA-N [(1S,4S,5S,6R,9S,10R,12R,14R)-7-(acetyloxymethyl)-5,6-dihydroxy-3,11,11,14-tetramethyl-15-oxo-4-tetracyclo[7.5.1.01,5.010,12]pentadeca-2,7-dienyl] 2-[[2-[[2-(dimethylamino)benzoyl]amino]-3-hydroxybenzoyl]amino]benzoate Chemical compound C[C@@H]1C[C@@H]2[C@H]([C@@H]3C=C(COC(C)=O)[C@@H](O)[C@]4(O)[C@@H](OC(=O)c5ccccc5NC(=O)c5cccc(O)c5NC(=O)c5ccccc5N(C)C)C(C)=C[C@@]14C3=O)C2(C)C VTLYZTRDIRBJDH-BVRVJCKWSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 210000001642 activated microglia Anatomy 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 108010013985 adhesion receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000019997 adhesion receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000000848 angular dependent Auger electron spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 101150031224 app gene Proteins 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 235000013524 arak Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical group 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 108010030694 avidin-horseradish peroxidase complex Proteins 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 208000013404 behavioral symptom Diseases 0.000 description 1
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049706 benzodiazepine Drugs 0.000 description 1
- 150000001557 benzodiazepines Chemical group 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 1
- 230000001886 ciliary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 235000004634 cranberry Nutrition 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229950006137 dexfosfoserine Drugs 0.000 description 1
- 229920003045 dextran sodium sulfate Polymers 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 210000005110 dorsal hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229940096118 ella Drugs 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001353 entorhinal cortex Anatomy 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002409 epiglottis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000010228 ex vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 230000003619 fibrillary effect Effects 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical group 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 208000014617 hemorrhoid Diseases 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 150000002391 heterocyclic compounds Chemical group 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003118 histopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004124 hock Anatomy 0.000 description 1
- 230000001632 homeopathic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000055461 human PABPC4 Human genes 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N hydrofluoric acid Substances F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N lidocaine hydrochloride monohydrate Chemical compound O.[Cl-].CC[NH+](CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000000938 luteal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002794 lymphocyte assay Methods 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008906 neuronal response Effects 0.000 description 1
- 230000007121 neuropathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L nickel dichloride Chemical compound Cl[Ni]Cl QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NCYVXEGFNDZQCU-UHFFFAOYSA-N nikethamide Chemical group CCN(CC)C(=O)C1=CC=CN=C1 NCYVXEGFNDZQCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001871 perforant pathway Anatomy 0.000 description 1
- 208000008494 pericarditis Diseases 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 108010018131 polypeptide 48 Proteins 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical group 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 208000015476 pseudohypoaldosteronism type 1 Diseases 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 210000003314 quadriceps muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 235000008001 rakum palm Nutrition 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 238000011268 retreatment Methods 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000009758 senescence Effects 0.000 description 1
- 230000008786 sensory perception of smell Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000002603 single-photon emission computed tomography Methods 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- FIGCISKOGMXHSJ-UHFFFAOYSA-N sodium diazide Chemical compound [N-]=[N+]=[N-].[Na]N=[N+]=[N-] FIGCISKOGMXHSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000541 tocopherol-rich extract Substances 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000014599 transmission of virus Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOLLAFOLCSJHRE-ZHAKMVSLSA-N ulipristal acetate Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C@@H]1C2=C3CCC(=O)C=C3CC[C@H]2[C@H](CC[C@]2(OC(C)=O)C(C)=O)[C@]2(C)C1 OOLLAFOLCSJHRE-ZHAKMVSLSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 230000001515 vagal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
الملخص: يتعلق الاختراع بتزويد عوامل agentsوطرق محسنة لمعالجة treatment أمراض diseases مقترنة برواسب نشوانية amyloid deposits من Aβ في دماغ brain مريض. وتقتضي طرق من هذا القبيل إعطاء عوامل تحث استجابة مناعية مفيدة beneficial immunogenic response ضد الراسب النشواني. وتعتبر الطرق مفيدة للوقاية مز مرض الزهيمر Alzheimer's disease ومعالجته. وتشمل العوامل المفضلة شدفات عند الطرف النتروجيني -N terminal fragments من Aβ وأجسام مضادة antibodies مرتبطة بها.
Description
Y
ومعالجته amyloidogenic disease الوقاية من مرض نشواني الأصل الوصف الكامل خلفية الاختراع progressive disease مرض متقدم (AD) Alzheimer's disease يعتبر مرض الزهيمر في Selkoe 116ه9. انظر بشكل عام ما جاء عن سيلكو dementia يؤدي إلى العته الشيخوخي ومعاونيه Hardy ص 405-5408 (1937م)؛ وما جاء عن هاردي OT المجلد TINS مجلة J في مجلة Selkoe م في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 7/1306364؟ ؛ وما جاء عن سيلكو
Duff عن دن ela المجلد ؟ مص 597-578 84 ام)؛ وما «Neuropathol. Exp. Neurol. عن غيمز ela وما ؛)م١990( EVVEVT ص VY المجلد (Nature ومعاونيه في مجلة ومجمل القول؛ ينقسم ٠ ص 577 )0 5م( (YVY المجلد «Nature ومعاونيه في مجلة 5 تظهر في الشيخوخة (20 سنة أو أكثر) Cus date onset المرض إلى فئتين: بداية متأخرة
Yo أي بين esenile period قبل فترة الشيخوخة Lola تتطور Cua cearly onset وبداية مبكرة في نوعي المرض نفسها لكن تميل الشذوذ pathology سنة. وتكون الأعراض المرضية ١و في عمر مبكر. ويتميز المرض fan وأوسع انتشارآ في حالات Bad لتكون أكثر abnormalities senile plaques لويحات شيخوخة <brain بنوعين على الأقل من الآفات 585 في الدماغ
وتعقدات لييفية عصبية neurofibrillary tangles وتكون لويحات الشيخوخة عبارة عن مناطق شبكات عصبية لبادية غير منظمة BY disorganized neuropil عن 150 ميكرومتر (nm) micrometer متقاطعة مع رواسب نشوانية خارج الخلية extracellular amyloid deposits
عند المركز المرثي visible عن طريق تحليل ميكروسكوبي microscopic analysis لمقاطع من
0 النسيج الدماغي tissue 0ن. وتكون التعقدات اللييفية العصبية عبارة عن رواسب داخل الخلية intracellular deposits لبروتين تاو مقترن بأنبوب 3:82( microtubule associated tau protein
يتكون من خيطين filaments ملتويين حول بعضهما البعض في صورة أزواج .pairs
ويعتبر الببتيد peptide المسمى AB أو ببتيد 8 النشواني B-amyloid peptide المكون
الأساسي للويحات ٠ وببتيد AB هو شدفة داخلية internal fragment بها من 79 إلى ؟؛ حمضاً
٠١ أمينياً amino acids لمصدر بروتيني precursor protein يسمى مصدر بروتين نشواني ٠. (APP) amyloid precursor protein وارتبطت عدة طفرات mutations في البروتين APP بوجود
مرض الزهيمر. انظرء؛ على سبيل المثال ما sla عن غوت Goate ومعاونيه في مجلة © _المجلد 749 Vet a ) 91 ١م (من valine? 7 Yo إلى أيزولوسين
(isoleucine ؛ وما جاء عن كارتير هارلان Chartier Harlan ومعاونيه في Nature Asa المجلد
(TOY Vo ص 844 (1999م) (من فالين” '" valine’? إلى غليسين ¢(glycine وما جاء عن موريل Murrell ومعاونيه في مجلة (Science المجلد 4 ص AY ) 1951م (من valine”? "(pla
إلى فنيل ألانين (phenylalanine ؛ وما جاء عن مولان Mullan ومعاونيه في مجلة «Nature Genet. المجلد ١ ص Yio ) 7م) (طفرة مزدوجة double mutation تغير
ليزين*** “ثم وزورر|-مثونين + * methionine™ إلى أسباراجين**" jam shasparagine®™ **
(leucine™ - ٠ ويعتقد بأن طفرات_ من هذا القبيل cand مرض الزهيمر عن طريق المعالجة المتزايدة والمتعاقبة ل APP إلى AB وبصفة خاصة معالجة APP إلى مقادير متزايدة من الشكل الطويل long form ل AB (أي؛ 81-2 و81-43). ويعتقد بأن طفرات في Clim «is sal genes مثل جينات البريسينيلين «PS2 9 PSI «presenilin genes تؤثر بشكل غير مباشر على معالجة APP لإنتاج مقادير متزايدة من الشكل الطويل ل Ap (انظر ما جاء عن هاردي
¢ 7 في مجلة تينز (TINS20 المجلد Ve ص ١54 (99597٠م)). وتشير هذه الملاحظات إلى أن AB خاصة الشكل الطويل منه؛ يعتبر عنصرا Lae لمرض الزهيمر. وتقترح براءة الاختراع الأوروبية باسم ماك مايكل McMichael رقم 71,511 إعطاء جرعات مداواة مثيلة homeopathic dosages (أقل من أو مساوية ل TY ملغم/يوم ((mg/day) milligram/day ° من AB لمرضى مصابين ب- AD مسبقاً. ويتوقع؛ حتى للحد الأعلى لهذه الجرعة بأن يتولد في إنسان human نموذجي به نحو © لترات liters من البلازما plasma تركيزآ mY concentration عن ؟ بيكوغرام/مل picogram/milliliter (ل0اءم). ويكون التركيز الطبيعي normal concentration ل AB في بلازما الإتسان Sale المدى من ٠5 ٠ إلى ٠ بيكوغرام/مل (انظر ما جاء عن سوبرت Seubert ومعاونيه في مجلة (Nature المجلد Fed. ص 72-75 )43 )2( ولأن الجرعة المقترحة في براءة الاختراع الأوروبية رقم )07,00 بالكاد تغير مستوى AB level الدائر داخلي المنشاً endogenous circulating AB ولأن براءة الاختراع الأوروبية رقم 077,51١ لا توصي باستخدام مادة مساعدة adjuvant بصفتها منبه مناعي (immunostimulant فإنه يبدو أنه من المستبعد الحصول على أي فائدة علاجية .therapeutic benefit Vo وعلى النقيض من ذلك؛ يوجه الاختراع الراهن نحو معالجة؛ من جملة معالجات أخرى؛ لمرض الزهيمر وأمراض أخرى Al sii الأصل عن طريق إعطاء شدفات من AB أو جسم مضاد antibody لمغيرات خاصية cpitopes معينة ضمن AB إلى مريض في ظروف تولد استجابة مناعية immune response مفيدة في المريض ٠ وبناءا على ذلك؛ يفي الاختراع بحاجة طويلة العهد لأنظمة علاجية therapeutic regimes للوقاية من أو تحسين الأمراض Y. العصبية (A neuropathology بعض المرضىء الضعف الإدراكي cognitive impairment المقترن بمرض الزهيمر. ويتعلق هذا الطلب بنشرة براءة الاختراع الدولية رقم 19/77946؛ المودعة في Fo ads 998١م؛ براءة الاختراع الأمريكية رقم 0/0597,746؛ المودعة في 7 ديسمبرء 15١م؛ وبراءة الاختراع الأمريكية برقم متسلسل 10/085,9970؛ المودعة في 7 Wind AR
4١م وبراءة الاختراع الأمريكية برقم متسلسل 09/701,170؛ المودعة في 7١ نوفمبرء 334 م؛ وذكر كل منها في هذا البيان بكامل محتواها للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض. الوصف العام للاختراع في أحد الأوجه؛ يزود الاختراع طرق للوقاية من أو معالجة مرض مقترن برواسب ٠ نشوانية ل 8 في دماغ مريض. وتشمل أمراض من هذا القبيل مرض الزهيمر؛ متلازمة داون Down's syndrome والضعف الإدراكي. وقد يحدث المرض الأخير بوجود أو عدم وجود خصائص أخرى لمرض نشواني الأصل. وتقتضي بعض طرق الاختراع إعطاء جرعة effective dosage AL a3 من جسم مضاد يرتبط (Shy متخصص specifically بمكون component لراسب نشواني إلى المريض. وتعتبر طرق من هذا القبيل مفيدة بصفةٍ خاصة ٠ للوقاية من أو معالجة مرض الزهيمر في مرضى من البشر. وتقتضي بعض الطرق إعطاء جرعة فعَّالة من جسم مضاد يرتبط ب AB وتقتضي بعض الطرق إعطاء جرعة AL ad من جسم مضاد يرتبط بشكلٍ متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات residues من ٠0-١ ل LAB وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بشكل متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من 1-١ ل AB وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بشكل متخصص Ne بمغير خاصية ضمن الشقات من 5-١ ل AB وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد JK متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من 72-١ ل AB وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بشكل متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من VY 8م. وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد JOG متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من 3-١ ل APR وفي pan الطرقء يرتبط الجسم المضاد (JK متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من ص ١-؛ ل AB وفي بعض (Gok يرتبط الجسم المضاد بمغير خاصية يشتمل على شق حر عند الطرف النتروجيني free N-terminal residue ل قم. وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بمغير خاصية ضمن الشقات من ٠١-١ ل AB حيث يمثل الشق ١ و/أو الشق ١ من AB حمض الأسبارتيك aspartic acid وفي am الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بشكلٍ متخصص بببتيد AB دون الارتباط بمصدر البروتين النشواني (APP) كامل الطول. وفي بعض Yo الطرق؛ يكون النمط الإسوي isotype للجسم المضاد هو 1501 بشري 1601 .human
:+ وفي بعض الطرقء يرتبط الجسم المضاد براسب نشواني في المريض ويحث استجابة تنقية clearing response ضد الراسب النشواني ٠ فعلى سبيل المثال؛ قد تحدث استجابة تنقية من هذا القبيل عن طريق الالتهام الذي تتوسطه مستقبلة .Fc receptor mediated phagocytosis Fc ويمكن تطبيق الطرق على كل من المرضى الذين لا تظهر عليهم أعراض المرض asymptomatic patients ° وأولئك الذين تظهر عليهم أعراض المرض ٠ وقد يكون الجسم المضاد المستخدم في هذه الطرق عبارة عن جسم مضاد بشري؛ معدل ليصلح استخدامه في البشر 40+ خيمري chimeric أو غير بشري nonhuman وقد يكون وحيد النسيلة monoclonal أو متعدد النسائل polyclonal وفي بعض الطرق؛ يحضر الجسم المضاد من إنسان ممدّع (AB Ahm immunized وقد يكون هذا الإنسان هو المريض الذي ينبغي معالجته بالجسم ٠١ المضاد. وفي بعض ٠ Gohl يعطى الجسم المضاد مسع مادة i Lda صيدلية pharmaceutical carrier في صورة تركيب صيدلي pharmaceutical composition وفي بعض الطرق؛ يعطى الجسم المضاد بجرعة تتراوح من 0.0001 إلى ٠٠١ ملغم/كقم (mg/kg) milligramvkilogram ويفضل أن تبلغ ١ ملغم/كغم من وزن الجسم body weight على ١ الأقل. وفي بعض الطرق؛ يعطى الجسم المضاد على عدة جرعات لفترة زمنية طويلة» على سبيل المثال لا تقل عن ستة أشهر . وفي بعض الطرق؛ يعطى الجسم المضاد في صورة تركيب ذو إطلاق طويل الأمد sustained release composition وقد يعطى الجسم المضادء على سبيل المثال؛ داخل البريتون 00600817 عن طريق الفم corally تحت الجلد ¢subcutaneously داخل الجمجمة cintracranially في العضل cintramuscularly موضيياً ctopically Y. داخل الأنف intranasally في الوريد .intravenously وفي بعض_الطرق؛ يعطى_ الجسم Lad بإعطاء papal متعدد نوكليوتيد polynucleotide يحمل شيفرة encoding سلسلة جسم مضاد antibody chain واحدة على الأقل. ويعبر عن متعدد النوكليوتيد لإنتاج سلسلة الجسم المضاد في المريض. واختيارياء يحمل متعدد النوكليوتيد شيفرة السلاسل الثقيلة و الخفيفة heavy and light chains للجسم المضاد. ويعبر عن vasa
لا متعدد النوكليوتيد لإنتاج السلاسل الثقيلة والخفيفة في المريض. وفي بعض الطرق؛ يراقب المريض لتحديد مستوى الجسم المضاد المعطى في دمه blood وفي Aas آخر؛ يزود الاختراع طرق للوقاية من أو معالجة مرض مقترن برواسب نشوانية من (BAB دماغ مريض. فعلى سبيل المثال؛ يمكن استخدام الطرق لمعالجة مرض ٠ الزهيمر أو متلازمة داون أو الضعف الإدراكي. وتقتضي طرق من هذا القبيل إعطاء شدفات من 8ه أو نظائر analogs منه تحدث استجابة مناعية ضد مغيرات خاصية معينة في AB وتقتضي بعض الطرق إعطاء لمريض Aad dc ja من متعدد ببتيد polypeptide يشتمل على جزء segment عند الطرف النتروجيني يحتوي على الشقات من 5-١ ل AR على JR حيث يكون الشق الأول ل AB هو الشق عند الطرف النتروجيني لمتعدد cal) حيث يخلو ٠ > متعدد الببتيد من الجزء عند الطرف الكربوكسيلي C-terminal ل AB وتقتضي بعض الطرق إعطاء لمريض جرعة فعغَّالة من متعدد ببتيد يشتمل على جزء عند الطرف النتروجيني ل fas <A الجزء عند الشق من 7-١ ل AB وينتهي عند الشقات من ١١-١7 ل AB وتقتضي بعض الطرق إعطاء لمريض جرعة فغّالة من عامل agent يحث استجابة مناعية ضد جزء عند الطرف النتروجيني ل AB ويبدأ الجزء عند الشقات ل 7-١ ل 8م وينتهي Vo عند الشقات من ١١-١ ل AR بدون حث استجابة مناعية ضد مغير الخاصية ضمن الشقات من 4-1١١ من APA3 وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يرتبط الجزء عند الطرف النتروجيني ل AB بمتعدد ببتيد مغاير heterologus polypeptide عند طرفه الكربوكسيلي. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يرتبط الجزء عند الطرف النتروجيني ل 8م بمتعدد ببتيد مغاير عند طرفه Ys النتروجيني. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يرتبط الجزء عند الطرف النتروجيني ل AB بمتعدد ببتيد مغاير أول وثاني عند طرفيه النتروجيني والكربوكسيلي. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يرتبط الجزء عند الطرف النتروجيني ل 8م بمتعدد ببتيد مغاير عند طرفه النتروجيني؛ وبنسخة إضافية من الجزء عند الطرف النتروجيني واحدة على الأقل عند طرفه الكربوكسيلي. وفي بعض الطرق المذكورة del يستجيب متعدد الببتيد المغاير وبالتالي vo خلية-8 3-11 ضد الجزء عند الطرف النتروجيني. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛
A
يشتمل متعدد الببتيد كذلك على نسخة إضافية من الجزء عند الطرف النتروجيني واحدة على الأقل. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يشتمل متعدد الببتيدء من الطرف النتروجيني إلى على عدة نسخ إضافية من AB الطرف الكربوكسيلي؛ على الجزء عند الطرف النتروجيني ل الجزء عند الطرف النتروجيني؛ وعلى جزء الأحماض الأمينية المغايرة. وفي بعض الطرق وفي بعض الطرق ABLT م المذكورة أعلاه؛ يتكون الجزء عند الطرف النتروجيني من
AB 37 المذكورة أعلاه؛ يتكون الجزء عند الطرف النتروجيني من الشدفة من الأحماض الأمينية الخمسة عند الطرف dan (Gohl وفي بعض ٠١ تشتمل الشدفة على ما لا يزيد عن (Gohl الكربوكسيلي على الأقل في 8843. وفي بعض وعادة ما تعطى الشدفات بمقدار LAP (contiguous amino acids أحماض أمينية متجاورة ميكروغرام لكل جرعة لكل مريض. ٠١ .يزيد عن ٠ مساعدة تعزز الاستجابة المناعية ضد ببتيد ale وفي بعض الطرقء تعطى الشدفة مع في صورة تركيب be ترتيب أو gl المساعدة والشدفة sald else) ويمكن AP وقد تكون المادة المساعدة؛ على سبيل المثال؛ عبارة عن هيدروكسيد الألومتيوم composition تجارية) idle) MPL ستتعنصداة» phosphate الألومنيوم Cling caluminum hydroxide فرويند المساعدة غير sale أو (Stimulon™ تجارية) Ade) (ستيميولون 059-21 0017“ ١٠ .incomplete Freund’s adjuvant الكاملة تشتمل على pharmaceutical compositions ويزود الاختراع كذلك تراكيب صيدلية
AB أو عوامل أخرى تحدث استجابة مناعية ضد نفس مغيرات الخاصية ل AB شدفات من كما وصف أعلاه؛ وعلى مادة مساعدة. ويزود الاختراع كذلك تراكيب صيدلية تشتمل على أي حاملة مقبولة صيدليا. sole .من الأجسام المضادة الموصوفة أعلاه وعلى © مضاد لتحديد فعاليته في awa screening ؛ يزود الاختراع طرق لغربلة Alaa وفي مرض الزهيمر). (Jad سبيل Je) علاج مرض يقترن برواسب 8م في دماغ مريض يشتمل على خمسة afin وتقتضي طرق من هذا القبيل تلامس الجسم المضاد مع متعدد عند الشقات بين fag AB أحماض أمينية متجاورة على الأقل لجزء عند الطرف النتروجيني ل ومن AB على أن يخلو متعدد الببتيد من الجزء عند الطرف الكربوكسيلي ل AB و ل ١ Yo vaq
ثم؛ يحدد الشخص ارتباط الجسم المضاد بمتعدد الببتيد JS متخصص أم لاء ويشير الربط المتخصص إلى أن للجسم المضاد فعالية في معالجة المرض. وفي وجه آخر؛ يزود الاختراع Goda لغربلة جسم مضاد لتحديد فعاليته في تنقية وحدة إحيائية مقترنة بمولد مضاد biological entity 2011860-2550012160. وتقتضي طرق من هذا القبيل ° دمج الوحدة الإحيائية المقترنة بمولد المضاد والجسم المضاد وخلايا ملتهمة تحمل مستقبلات Fc في وسط -medium ومن شم يراقب مقدار الوحدة الإحيائية المقترنة بمولد المضاد المتبقية في الوسط. ويشير الانخفاض في مقدار الوحدة الإحيائية المقترنة بمولد المضاد إلى أن للجسم المضاد فعالية في تنقية الوحدة الإحيائية المقترنة بمولد المضاد ٠. ويمكن تزويد مولد المضاد في صورة Aue نسيجية tissue sample أو في صورة معزولة Jed isolated form سبيل المثالء ٠ > يمكن تزويد مولد المضاد في صورة عينة نسيجية من دماغ مريض مصاب بمرض الزهيمر أو حيوان تديي las mammal animal بمرض الزهيمر. وتشمل عينات نسيجية أخرى يمكن اختبار أجسام مضادة لها لتحديد فعاليتها في تتقية عينات نسيجية سرطانية Clue cancerous tissue samples نسيجية مصابة بعدوى فيروسية virally infected tissue samples عينات نسيجية تشتمل على Wa التهابية «inflammatory cells yo نموات خلوية شاذة غير خبيثة nonmalignant abnormal cell growths أو عينات نسيجية تشتمل على مادة أساس شاذة خارج الخلية .abnormal extracellular matrix وفي Aas آخرء يزود الاختراع Gok للكشف عن راسب نشواني في مريض. وتقتضي طرق من هذا القبيل إعطاء لمريض جسم مضاد يرتبط بشكل متخصص بمغير خاصية ضمن الأحماض الأمينية من ٠١-١ ل AB والكشف عن وجود الجسم المضاد في ye دماخ المريض. وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بمغير خاصية ضمن الشقات من 4 - ٠ ل AB وفي بعض الطرق؛ يكون الجسم المضاد موسوماً labelled بوسم بارامغنطيسي paramagnetic label ويكشف عنه عن طريق التصوير الإشعاعي المقطعي للرنين المغنطيسي النووي .nuclear magnetic resonance tomography ويزود الاختراع كذلك أطقم تشخيصية diagnostic kits ملائمة للاستخدام في الطرق vo المذكورة أعلاه. ويشتمل طقم من هذا القبيل على جسم مضاد يرتبط JS متخصص بمغير vasa
0" خاصية يحتوي على الشقات من ٠١-١ ل 8م. وتحمل بعض الأطقم بطاقة تصف استخدام الجسم المضاد للتشخيص في الجسم الحي vivo 0: أو مراقبة مرض الزهيمر. شرح مختصر للرسوم الشكل ١ : يبين عيار titer جسم مضاد بعد حقن فئران محولة جينياً transgenic mice ب ABL42 5 الشكل ١ : يبين حيمل نشواني amyloid burden في حصان البحن -hippocampus وحددت النسبة المثوية لمساحة المنطقة الحصينية hippocampal region التي تشغلها لويحات نشوانية؛ المحددة بالتفاعلية reactivity مع الجسم المضاد وحيد النسيلة 3D6 المتخصص ب (AB عن طريق تحليل صوري كمي بمساعدة ٠١ الكمبيوتر computer-assisted quantitative image analysis لأقسام من الدماغ متفاعلة .immunoreacted brain sections Lelie وتبين_القيم للفثران المنفردة مصنفة لكل مجموعة معالجة. ويشير الخط الأفقي horizontal line لكل مجموعة إلى القيمة المتوسطة للتوزيع. الشكل ؟ : يبين سغل التهابي عصبي neuritic dystrophy في حصان البحر. وحددت yo النسبة المئوية لمساحة المنطقة الحصينية التي تشغلها محاور عصبية سغلية cdystrophic neurites المحددة بتفاعليتها مع الجسم المضاد وحيد النسيلة 815 البشري المتخصص ب APP عن طريق تحليل صوري كمي بمساعدة الكمبيوتر لأقسام من الدماغ متفاعلة Lelie وتبين القيم للفثران المنفردة للمجموعة المعالجة ب AN1792 والمجموعة الضابطة control group المعالجة ١ ب PBS ويشير الخط الأفقي لكل مجموعة إلى القيمة المتوسطة للتوزيع. الشكل : يبين تكاثر الخلايا النجمية astrocytosis في قشرة عضلة الطحال الخلفية .retrosplenial cortex وحددت النسبة المئوية لمساحة المنطقة القشرية cortical region التي تشغلها خلايا نجمية astrocytes تحتوي على البروتين الحمضي dull الدبقي (GFAP) glial fibrillary acidic protein عن طريق Yo تحليل صوري كمي بمساعدة الكمبيوتر لأقسام من الدماغ متفاعلة مناعياً.
١ وتبين القيم للفثران المنفردة مصنفة لكل مجموعة معالجة ويشار إلى قيم المجموعة المتوسطة بخطوط أفقية. لعيارات الأجسام المضادة ل geometric mean المتوسط الهندسي af يبين : o الشكل بشمان جرعات من 101792 يحتوي immunization بعد التمتيع 2881-2 dogs See Feo أو ٠6١ FFA) YAY على قارف كرت 5 . (ng) microgram استجابة جسم مضاد للتمنيع ب 8211792. ويعبر عن kinetics الشكل > : يبين حركيات العيارات في صورة متوسط هندسي للقيم للحيوانات الستة في كل مجموعة. cortical amyloid burden الشكل 7 : يبين تحليل صوري كمي للحمل النشواتي القشري .AN1792 5 PBS في الفثران المعالجة ب ١ يبين تحليل صوري كمي لحمل اللويحات العصبية الالتهابية في الفئران : A الشكل .AN1792 5 PBS المعالجة ب الشكل 1 : يبين تحليل صوري كمي للنسبة المئوية لقشرة عضلة الطحال الخلفية التي .AN1792 3 PBS يشغلها تكاثر الخلايا النجمية في الفئران المعالجة ب في lymphocyte proliferation assay معايرة تشعب الخلايا الليمفاوية Cpu : ٠١ الشكل Vo (اللوحة العلوية) أو ANI792 خلايا الطحال من المجموعة المعالجة ب (اللوحة السفلية). PBS المجموعة المعالجة ب الكلية في القشرة. ويبين رسم بياني لتشتت المخططات AB يبين مستويات : ١١ الشكل APP أو AB من derivatives الجانبية ل 8م المنفردة في فئران ممنعة بمشتقات مدمجة مع مادة فرويند المساعدة. 7 يبين تحديد حمل نشواني في القشرة عن طريق تحليل صوري كمي : VY الشكل AB بببتيد Ay tie لفئران ممنعة بمواد Lelie لأقسام من الدماغ متفاعلة
AB و8813-28؛ وكتل «AB1-12 وهي 01-5م؛ AP peptide conjugates (AB1-40) AN15285 (AP1-42) AN1792 كامل الطضول AB aggregates
PBS والمجموعة الضابطة المعالجة ب vo
VY
لمجموعات AP يبين المتوسط الهندسي لعيارات جسم مضاد متخصص ب : ١١ الشكل مدمجة مع مادة فرويند المساعدة. APP أو AP فثران ممنعة بمشتقات من لمجموعات AB يبين المتوسط الهندسي لعيارات جسم مضاد متخصص ب : ١6 الشكل معالج بالبلميتويل (nie أو (AN1792 ممنعة ب guinea pigs من خنازير هندية منه؛ مدمجاً مع مواد مساعدة مختلفة. palmitoylated derivative ° شهراً VY يبلغ عمرها PDAPP في القشرة لفثران AB (أ-ه) : يبين مستويات vo الشكل أو 111528 مع مواد مساعدة مختلفة. AN1792 معالجة ب متعدد النتسائل. AB يبين متوسط العيارات في فئران معالجة بجسم مضاد ل : ١٠١ الشكل وحيد النسيلة AB يبين متوسط العيارات في فئران معالجة بجسم مضاد ل : ١١ الشكل . 5 ٠١ يبين متوسط العيارات في فئران معالجة بجسم مضاد ل 8م وحيد النسيلة : YA الشكل .2 استجابة عند الطرف النتروجيني epitope map يبين خريطة مغير الخاصية : ya الشكل 5؛ اختبرت أمصال من poll (As .restricted N-terminal response مقيدة بواسطة معايرة استشرابية مناعية cynomolgus monkeys قردة سينومولغس yo لسلسلة من (ELISA) enzyme linked immunosorbent assay مرتبطة بالأنزيم تشمل سياق )49-١ وحدات متداخلة من ببتيدات (سياقات التمييز أرقام: ٠ استجابة مقيدة عند الطرف F10920M الكامل. ويبين رقم الحيوان 2
Cus (4 (سياق_التمييز رقم: DAEFRHDSGY النتتروجيني تمثيلية للببتيد لببتيد 001792 حيث استخدم كمولد ٠١-١ أ يشمل الأحماض الأمينية من .immunizing antigen Kian مضاد يبين خريطة مغير الخاصية: استجابة عند الطرف النتروجيني غير مقيدة : ٠١ الشكل اختبرت أمصال من 0 asl (4s .non-restricted N-terminal response وحدات متداخلة من ٠١ لسلسلة من ELISA سينومولغس بواسطة 338 الكامل. ويبين AN1792 ببتيدات (سياقات التمييز أرقام: ١-١؛) تشمل سياق Yo
VY
رقم الحيوان 7109757 استجابة عند الطرف النتروجيني غير مقيدة تمثيلية. وتظهر تفاعلية ضد ببتيدين عند الطرف النتروجيني وببتيد واحد عند الطرف (سياق_التمييز _رقم: 4( حيث يشمل DAEFRHDSGY الكربوكسيلي للببتيد
LAN1T792 للببتيد ٠١-١ الأحماض الأمينية من تعريفات عندما «afin أن سياقي "substantial identity يقصد بالمصطلح "تطابق بصفة جوهرية باستخدام أوزان فجوات BESTFIT أو GAP عن طريق البرامج Mie يتحاذيان بصورة مثالية؛ على “٠ يتطابقان بنسبة 716 على الأقل» ويفضل 7860 أو default gap weights فرضية سبيل المثال؛ تطابق السياق بنسبة 799 أو Je) الأقل؛ والأفضل 795 على الأقل أو أكثر ٠ أعلى). ويفضل أن تختلف مواقع الشقات غير المتطابقة عن طريق إبدالات محفوظة للأحماض .conservative amino acid substitutions لأمينية J تقارن reference sequence سياق مرجعي sale ولمقارنة السياقاتء يكون أحد السياقات وعند استخدام خوارزمية مقارنة السياقات test sequences به سياقات اختبارية يتم إدخال بيانات السياقات الاختبارية والسياقات المرجعية csequence comparison algorithm Vo حسب الحاجة؛ وتعين subsequence وتعين إحداثيات سياق ثانوي computer إلى كمبيوتر ومن ثم تحسيب .560600© algorithm program parameters وسائط برنامج خوارزمي للسياقات خوارزمية مقارنة السياق النسبة المئوية لتطابق السياقات للسياق (السياقات) الاختباري بالنسبة
Af إلى السياق المرجعيء بالاعتماد على وسائط البرنامج على سبيل المثال». عن طريق خوارزمية do all ويمكن إجراء محاذاة مثلى للسياقات Y. في مجلة Smith & Waterman لسميث و ووترمان local homology algorithm التمائل الموضعي عن طريق خوارزمية المحاذاة »)م١1948١( GAY ص oF المجلد Adv. Appl Math. في Needleman & Wunsch مان وونش Jail homology alignment algorithm المماقلة (1970م)؛ عن طريق طريقة البحث عن EEF ص fA المجلد 7 Mol Biol مجلة
Ve
التشابه search for similarity methode لبيرسن وليبمان Pearson & Lipman في مجلة Ao Aad Proc.
Nat'l Acad.
Sci.
USA ص 7444 (pV IM) عن طريق تطبيقات computerized implementations grabs لهذه الخوارزميات «FASTA 1 «GAP) TFASTA 3 في وسكونسن جينيتكس سوفت وير باكيج «Wisconsin Genetics Software Package 0 شركة جينيتكس كمبيوتر جروب Genetics Computer Group ¢ في OVO سيانس درايف Science Drive ¢575 مدينة ماديسون 24801500؛ ولاية وسكونسن (WI أو عن طريق المعاينة المرئية visual inspection (انظر عموماً ما ela عن أوسوبل Ausubel ومعاونيه في المرجع سابق الذكر). وأحد أمثلة خوارزمية ملائمة لتحديد النسبة المئوية للتطابق وتشابه السياقات خوارزمية (BLAST الموصوفة في مجلة oJ Mol Biol. باسم ألتشول Altschul ومعاونيه؛ ٠ المجلد 715 ص 07؛-0٠47 (19950م). وتكون البرامجيات Software التي تجري تحليل 17 متوفرة بشكل عام عن طريق المركز الوطني للمعلومات التقنية الإحيائية ٠. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) National Center for Biotechnology Information وقد تستخدم Bale وسائط برنامج فرضية لإجراء مقارنة السياقات؛ بالرغم من أنه يمكن استخدام الوسائط المصنوعة على طلب الزبون parameters 0/0 أيضاً. وبالنسبة لسياقات الأحماض . الأمينية؛ يُستخدِم برنامج BLASTP program BLASTP _كقيم Apap طول كلمة aly (W) wordlength « وتوقع (E) expectation يبلغ ٠١ ومصفوفة تحزيز BLOSUM62 hi) BLOSUMS62 scoring matrix ما جاء عن هينيكوف وهينيكوف Henikoff & Henikoff في
مجلة (Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA المجلد Ad ص ٠١51٠6 (1849 لم). وتصنف الأحماض الأمينية لأغراض تصنيف إبدالات الأحماض الأمينية على أنها © محفوظة أو غير محفوظة على النحو التالي: المجموعة (I) (سلاسل جانبية كارهة للماء (hydrophobic side chains نورلوسين cnorleucine مثيونين اع؛ ألاتنين 1ه؛ فالين val لوسين »ها أيزولوسين tile المجموعة )0( (سلاسل جانبية أليفة للماء متعادلة (neutral hydrophilic side chains : سيستثين ccys سيرين ©5؛ ثريونين #«ة؛ المجموعة (II) (سلاسل جانبية حمضية (acidic side chains حمض الأسبرتيك casp حمض الغلوتاميك tglu Yo المجموعة (Iv) (سلاسل جانبية قاعدية (basic side chains : أسباراجين casn غلوتامين cgln vasa vo (شقات تؤثر على توجيه السلسلة (V) المجموعة targ أرجينين dys لايزين chis هستيدين (سلاسل جانبية (VI) والمجموعة pro برولين gly حمض غليسين : (chain orientation وتشمل الإبدالات phe فنيل ألانين ctyr تيروزين erp تربتوفان : (aromatic side chains عطرية وتُشكّل الإبدالات غير class المحفوظة إبدالات بين الأحماض الأمينية في نفس الصنف المحفوظة الاستعاضة عن عضو من أحد هذه الأصناف بعضو آخر. ٠ العوامل العلاجية وفقاً للاختراع نقية بصفةٍ جوهرية من مادة ملوثة Sale وتكون 6 حوالي Ze تبلغ purity غير مرغوبة. ويعني هذا أن للعامل درجة نقاوة contaminant بصفة جوهرية من free على الأقل؛ بالإضافة إلى أنها خالية (wiw) weight/weight وزن/وزن ومواد ملوثة. وتبلغ درجة نقاوة العوامل في بعض interfering proteins بروتينات متداخلة والأفضل 790 أو حوالي 795 وزن/وزن على JW وزن/وزن على IA الأحيان حوالي - ٠ تبلغ homogeneous peptides الأقل. إلا أنه يمكن الحصول على ببتيدات متجانسة بروتين_تقليدية AGE hi Jail JB درجة_نقاوتها 759 وزن/وزن على . 011760110021 protein purification techniques لا تقل affinity بين أي وجودين ألفة specific binding ويقصد بالارتباط المتخصص وتفضل قيم ألفة تزيد عن MY لكل تركيز جزيئي "٠١ أو ءا٠١ Be .اك Be مد عن لكل تركيز جزيئي. ٠ "immunoglobulin أو "غلوبلين مناعي "antibody ويستخدم المصطلح "جسم مضاد تتنافس الشدفات مع dale 5 والشدفات المرتبطة منها. intact ليشمل الأجسام المضادة السليمة في ذلك Lay الجسم المضاد السليم الذي اشتقت منه لترتبط بشكلٍ متخصص بشدفات مولد مضاد dlight chains Fab Fab السلاسل الخفيفة separate heavy chains منفصلة ald أ سلاسل (حمض نووي DNA ويتم إنتاج الشدفات عن طريق تقنيات Fv «Fab 2 أو recombinant DNA techniques مأشوب (deoxyribonucleic acid ريبوزي منزوع الأكسجين للغلوبلينات المناعية السليمة. enzymatic or chemical separation بالفصل الإنزيمي أو الكيميائي كذلك سلسلة غلوبلين مناعي واحدة أو أكثر تقترن antibody ويشمل المصطلح "جسم مضاد بء أو يعبر عنها في صورة؛ بروتينات اندماجية chemically conjugated كيميائياً Yo vad
١ fusion proteins مع بروتينات أخرى. ويشمل المصطلح "جسم مضاد "antibody كذلك جسم مضاد ثنائي التخصص bispecific antibody ويعتبر الجسم المضاد (HD التخصص أو ثنائي المجموعة الوظيفية bifunctional جسم مضاد هجين صناعي artificial hybrid antibody يحتوي على زوجين مختلفين من سلاسل تقيلة/خفيفة وموقعي ارتباط مختلفين. ويمكن إنتاج الأجسام ١ المضادة ثنائية التخصص باستخدام عدة طرق تشمل دمج خلايا ورمية هجينية hybridomas أو bls شدفات Fab’ انظرء_ على ela Lo JG daw عن سونغسيفيلاي ولاتشمان Songsivilai & Lachmann في مجلة «Clin. Exp. Immunol. المجلد VA ص ١-١9 ٠6 ) ١م ؛ وما جاء عن كوستيلني Kostelny ومعاونيه في مجلة oJ Immunol. المجلد NEA ص ٠٠67-١٠47 (14437م). ٠١ ويشير APP, APP”! (APPT على الترتيب؛ إلى متعددات ببتيد طويلة long ذات شقات مكونة من 745 VV VO) حمض أميني تحمل شيفرة جين APP gene APP البشري. انظر ما ela عن كانغ Kang ومعاونيه في مجلة Namre المجلد 7756؛ ص YVY (149١م)؛ وما ela عن بونتي Ponte ومعاونيه في (Nature Alaa المجلد 77١ ص 575 ¢(a) AA) وما جاء عن كيتاغوتشي Kitaguchi ومعاونيه في مجلة (Nature المجلد 77١ ص (APP) وتخصص للأحماض الأمينية في المصدر_ البروتيني النشواني (a) AA) © Vo
Jie وتشير مصطلحات -APP770 isoform APP770 لسياق الشكل الإسوي Gy البشري أرقاماً -١ FAY يحتوي على شقات بها من AR و843م إلى ببتيد AB42 احتف <AP40 9ه حمض أميني. ؛-١و EY) د احا ويشير المصطلح "مولد مضاد "antigen إلى وحدة يرتبط بها الجسم المضاد بشكلٍ - متخصص. ويشير المصطلح "مغير خاصية "epitope أو محدد مولد مضاد "antigenic determinant إلى موقع على مولد مضاد تستجيب له خلايا B و/أو and/or Teells 1 WA 3. ويمكن تشكيل مغيرات خاصية خلايا 8 من أحماض أمينية متجاورة أو أحماض أمينية غير متجاورة توضع بجانب بعضها عن طريق طي ثلاثي tertiary folding للبروتين. ويحافظ عادةٌ على مغيرات »> الخاصية المتشكلة من الأحماض الأمينية المتجاورة عند تعرضها لمذيبات مفسدة
VY
Ly denaturing solvents 3885 مغيرات الخاصية المتشكلة من الطي الثلاثي dle عند المعالجة بمذيبات مفسدة. وعادةً ما يشتمل مغير خاصية على ثلاثة أحماض أمينية على JY Bale أكثرء أو © أو ٠١-8 أحماض أمينية على الأقل في شكل حيزي فريد unique spatial conformation وتتضمن طرق تحديد الشكل الحيزي لمغيرات الخاصية؛ على ° سبيل المثال؛ ale البلورات بالأشعة السينية x-ray crystallography والرنين المغتطيسي النووي 3( البعدين .2-dimensional nuclear magnetic resonance انظرء على سبيل المثال؛ ما جاء في كتاب بعنوان Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology للمحرر غلين إي. موريس. (Glenn E. Morris المجلد 265 )997 (a) ويمكن تمييز الأجسام المضادة التي تميز نفس مغير الخاصية في معايرة مناعية بسيطة simple immunoassay تبين قابلية أحد الأجسام ١ المضادة على إعاقة ارتباط جسم مضاد آخر بمولد مضاد مستهدف target antigen وتميز خلايا T مغيرات خاصية متصلة continuous مكونة من حوالي تسعة أحماض أمينية لخلايا CDS cells CDS أو حوالي 159-١١ حمض أميني لخلايا 004 cells 004. ويمكن تمييز خلايا 7 التي po مغير الخاصية عن طريق معايرات في أنابيب الاختبار in vitro assays تقيس التشعب المعتمد على مولد المضاد «antigen-dependent proliferation كما حدد Vo بدمج 4 -ثميدين عدنن”«رط-11 عن طريق T WA مبرمجة primed T cells استجابة لمغير خاصية (انظر ما جاء عن بورك Burke ومعاونيه في مجلة Inf Dis. 7 المجلد Ye ص ١11-9٠ (94ام))؛ بالقتل المعتمد على alge المضاد antigen-dependent killing (معايرة WA 7 اللمفاوية السامة للخلايا «cytotoxic 1 lymphocyte assay انظر ما جاء عن تيغز Tigges ومعاونيه في مجلة of Immunol. المجلد Vou ص )74٠-7401 أ أو بإفراز السيتوكين .cytokine secretion ويعني المصطلح استجابة response "مولدة للمناعة "immunological أو 'مناعية "immune تطور استجابة خلطية مفيدة (يسببها جسم مضاد) و/أو خلوية (تسبيها خلايا 7 متخصصة بمولد مضاد أو منتجات إفرازاتها) موجهة ضد ببتيد نشوائي في مريض يتلقى العلاج. (Sarg أن تكون استجابة من هذا القبيل استجابة ALT a8 تحث عن طريق إعطاء vo مولد مناعة أو استجابة سلبية تحث بإعطاء جسم مضاد أو خلايا T المبرمجة. وتظهر vaq
VA
MHC الاستجابة المناعية الخلوية بتمثيل مغيرات خاصية متعددة الببتيد بالاقتران مع جزيئات 008 dul wT من الصنف 1 أو الصنف 17 لتنشضيط خلايا 7 معززة 004 و/أو خلايا «monocytes متخصصة بمولد مضاد. وقد تتضمن الاستجابة كذلك تنشيط خلايا أحادية النواة محبة للقاعدة LMA (NK cells خلايا 18 4 طبيعية (macrophages ملتهمة كبيرة LIA خلايا الدبق العصبي الدقيق astrocytes خلايا نجمية dendritic cells خلايا متفرعة <basophils أو مكونات أخرى من المناعة eosinophils سهلة الاصطباغ بالأيوزين LA ¢microglia وله الخلقية. ويمكن تحديد وجود استجابة مناعية تسببها خلية عن طريق معايرات تشعب
Burke عن بورك ela لمفاوية سامة) (انظر ما T (خلايا CTL (خلايا 7 0047) أو معايرات في المرجع سابق الذكر؛ وما جاء عن تيجز 118888؛ في المرجع سابق الذكر). ويمكن تمييز مناعة عن algal المشاركات النسبية للاستجابات الخلطية والخلوية للتأثير الوقائي أو العلاجي جينياً ممنع وقياس Silda طريق عزل أجسام مضادة وخلايا 7 بشكل منفصل من حيوان التأثير الوقائي أو العلاجي في حيوان ثان. قادراً "immunogen أو "مولد للمناعة "immunogenic agent ويكون "عامل مولد للمناعة مساعدة. Bale على حث استجابة مناعية ضد نفسه عند إعطائه إلى ثدييء ويجوز بالاقتران مع إلى متعدد نوكليوتيد "naked polynucleotide نوكليوتيد مكشوف Janta’ ويشير المصطلح 81ل1ه011. وتكون متعددات النوكليوتيد المكشوفة materials غير متراكب مع مواد غروائنية .plasmid vector منسلة في ناقل بلازميد Glal إلى مركب عندما يعطى بالاقتران مع مولد "adjuvant ويشير المصطلح 'مادة مساعدة مضاد يعمل على زيادة الاستجابة المناعية للمولد المضاد؛ ولكنه لا يولد استجابة مناعية للمولد المضاد عندما يعطى لوحده. وقد تزيد المواد المساعدة من الاستجابة المناعية بعدة آليات تشمل © وتنبيه خلايا ملتهمة كبيرة. T و/أو B تجديد خلايا لمفاوية؛ تنبيه خلايا إنسان وحيوانات ثديية أخرى تتلقى معالجة وقائية "patient ويتضمن المصطلح "مريض أو دوائية. وحدات disaggregated or monomeric AB غير متكتل أو مونمري AB ويقصد بمصطلح مونمري في إذابة ببتيد AB وتتمثل إحدى طرق تحضير LAB للذوبان ومونمرية من ALE بيتيد ve v44
مجفد في DMSO نقي مع التعرض للأمواج فوق الصوتية. ويفصل المحلول الناتج بالطرد المركزي centrifuge لإزالة أي جسيمات عديمة الذوبان. ويكون AB المتكتل عبارة عن مزيج من الأوليغمرات oligomers حيث ترتبط الوحدات المونمرية مع بعضها بروابط غير إسهامية التكافؤ .noncovalent bonds ِ ويحدد التنافس بين الأجسام المضادة عن طريق معايرة حيث يثبط غلوبلين مناعي تحت المعايرة الربط المتخنصص لجسم مضاد مرجعي reference antibody بمولد مضاد مشترك؛ مثل 8م. وتبين عدة أنواع من معايرات الربط التنافسي على سبيل المثال معايرة المناعة الإشعاعية المباشرة أو غير المباشرة ذات shall الصلب solid phase direct or indirect radioimmunoassay (RIA) معايرة المناعة الإنزيمية المباشرة أو غير المباشرة ذات الطور ye الصلب ¢solid phase direct or indirect enzyme immunoassay (EIA) المعايرة التنافسية الطبقية sandwich competition assay (انظر ما جاء عن ستاهلي Stahli ومعاونيه في مجلة alae Methods in Enzymology 9 ص 47 77-7 ¢(a) AAT) معايرة BIA للبيوتين-أفيدين المباشرة ذات الطور الصلب solid phase direct biotin-avidin EIA (انظر ما جاء عن كيركلاند 40 ومعاونيه في مجلة «J.
Immunol. مجلد YY ص AAT) EVAN E لم))؛ ب المعايرة الموسومة المباشرة ذات الطور الصلب ¢solid phase direct labeled assay المعايرة الطبقية الموسومة المباشرة ذات الطور الصلب solid phase direct labeled sandwich assay hi) ما ela عن هارلو Harlow و لآن Lane في "Antibodies, A Laboratory Manual’ مطبعة كولد سبرنج هاربور برس a AN) Cold Spring Harbor Press ١م( ؛ معايرة RIA الموسومة المباشرة ذات الطور الصلب solid phase direct label RIA باستخدام الوسم ب 1125 (انظر ما :1 جاء عن موريل Morel ومعاونيه في مجلة Molec.
Immunol. مجلد «Yo العدد )1(¢ ص (a AAA) ١9-١7 معايرة EIA ل بيوتين-أفيدين المباشرة ذات الطور الصلب solid phase direct biotin-avidin EIA (انظر ما جاء عن تشوينج Cheung ومعاونيه في مجلة Virology مجلد 0767© ص 07-845 )+29 ¢((pV و معايرة RIA الموسومة المباشرة direct labeled RIA (انظر ما جاء عن مولدينهاور Moldenhauer ومعاونيه في مجلة FY alas Scand.
J.
Immunol. vo ص dale 5 (4149+) AY=VY يتضمن معايرة من هذا
Y. القبيل استخدام مولد مضاد منقى مرتبط بسطح صلب أو خلايا تحمل أي من الغلوبلين المناعي
Ly fa) الذي خضع للمعايرة غير الموسومة والغلوبلين المناعي المرجعي الموسوم. ويقاس التنافسي بتحديد مقدار الوسم المرتبط بالسطح الصلب أو الخلايا في وجود الغلوبلين المناعي يوجد الغلوبلين المناعي الذي خضع للمعايرة بمقدار فائض. Sale 5 الذي خضع للمعايرة. وتشمل الأجسام المضادة المميزة بالمعايرة التنافسية (الأجسام المضادة التنافسية) أجسام مضادة © ترتبط بنفس مغير الخاصية بصفتها الجسم المضاد المرجعي وأجسام مضادة ترتبط بمغير خاصية مجاور يكون قريبا بشكل كاف بمغير الخاصية المرتبط بالجسم المضاد المرجعي لحدوث الإعاقة الفراغية. وعادة؛ عندما يتواجد الجسم المضاد التنافسي بمقدار فائض فإنه يثبط على الأقل. ve أو 75٠ الربط المتخنصص لجسم مضاد مرجعي بمولد مضاد مشترك بنسبة وقد تشمل تراكيب أو طرق "تحتوي" على عنصر واحد أو أكثر من العناصر المذكورة ١
AB عناصر أخرى لم تذكر بصفة خاصة. فعلى سبيل المثال يتضمن تركيب يشتمل على ببتيد بصفته مكون لسياق متعدد ببتيد أكبر. AB معزول وببتيد AB كل من ببتيد الوصف التفصيل المفهوم العام 1 متكتل مع AB تتميز عدة ظروف وأمراض نشوانية الأصل بوجود رواسب من ببتيد Ve عديمة الذوبان في دماغ المريض. وتشمل أمراض من هذا القبيل مرض الزهيمرء AS متلازمة داون والضعف الإدراكي. ويعتبر المرض الأخير أحد أعراض مرض الزهيمر لأي من المرضين. فعلى سبيل المثال؛ AT ومتلازمة داون لكنه قد لا يبدي خصائص أو فقدان الذاكرة المقترن بالعمر mild cognitive impairment يحدث الضعف الإدراكي المعتدل في بعض المرضى الذين لم يتطور فيهم مرض الزهيمر أو الذين age-associated memory loss لن يتطور فيهم مرض الزهيمر الكامل مطلقا. ويمكن أن يعرف الضعف الإدراكي المعتدل كما
Ade وفقاً لما اتفق Mini-Mental State Exam وفقآ لمعايرة الحالة العقلية المصغرة Ja 8 وتتميز أمراض من هذا القبيل بكتل من 8م لها بنية ألواح مطوية من نوع وتوصف .Congo Red dye وأنها مصبوغة بصبغة أحمر الكونغو B-pleated sheet structure الطريقة الأساسية للوقاية من أو معالجة مرض الزهيمر أو أمراض نشوانية الأصل أخرى ve
١ بتوليد استجابة مولده للمناعة إلى مكون الراسب النشواني في مريض في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 99/797444 (مذكورة في هذا البيان للإحالة إليها كمرجع). ويكرر الطلب الراهن 0 ويؤكد على فعالية الطريقة الأساسية. بيد أن الطلب الراهن يوجه بصفةٍ أساسية إلى مواد جزئي J وطرق محسنة. وفرضت هذه التحسينات أن يضع المخترعون الحاليون Aelia حيث ينبغي أن توجه الاستجابة المولده للمناعة ضدها. AB مغيرات خاصية مفضلة ضمن ٠ إلى عوامل وطرق لها فعالية كبيرة؛ احتمالية AP ويؤدي تمييز مغيرات خاصية مفضلة ضمن منخفضة نحو التأثيرات الجانبية؛ و/أو سهولة كبيرة في التصنيع؛ التركيب والإعطاء. عوامل علاجية .] قد تكون الاستجابة المناعية فعالة عندما يعطى المولد المناعي لحث أجسام مضادة تتفاعل مع 8م في مريضء أو قد تكون سلبية؛ عندما يعطى جسم مضاد حيث يرتبط بحد ذاته مريض. (BAR مع تحث استجابة مناعية فعّالة Jal ge .١ تحث عوامل علاجية استجابة مولدة للمناعة توجه بشكل متخصص نحو مغيرات بحد ذاته وأجزاء منه. AR وتشمل العوامل المفضلة ببتيد JAB خاصية معينة ضمن ببتيدات
AB ويمكن كذلك استخدام مغيرات من هذه الأجزاء ونظائر ومركبات محاكية من ببتيد ve
AB أجسام مضادة لمغيرات الخاصية المفضلة من ببتيد ge Wald الطبيعي تحث و/أو تتفاعل بببتيد 8 النشواني أو ببتيد 4م (انظر ما جاء في براءة Lad يعرف AB ويعتبر في Wong و ونج Glenner عن جلينر ela الاختراع الأمريكية رقم 4,177,879؛ وما ببتيد به من ؛))م١٠944( ١١7١ ص VY مجلد Biochem. Biophys. Res. Commun.ilas --40*-؛ حمضآ أمينياً والذي يعتبر المكون الأساسي للويحات مميزة لمرض الزهيمر. وينتج ©
B and y secretases أطول بإنزيمين يطلق عليهما سكريتاز م رو APP بمعالجة بروتين AB وتحدث .))م١99597( ١54 ص Ve في مجلة 1115؛ مجلد Hardy عن هاردي ela (انظر ما 7 مقترنة بمرض الزهيمر بقرب موقع سكريتاز 8 أو APP معروفة في mutations طفرات قريباً من موقع فصم 7٠١ فعلى سبيل المثال؛ يكون الموقع LAB 8؛ أو ضمن «7 secretase قريبة من IVY AV. وتكون المواقع AR عند معالجته ل APP ل yesecretase y سكريتاز yo
YY
عن طريق تفاعلها مع AD ويعتقد بأن الطفرات تسبب Bosecretase 8 سكريتاز pad موقع لزيادة مقدار شكل الحمض الأميني 7/47؛ ل AR تفاعلات الفصم التي عن طريقها يتشكل الناتج. AB خاصية غير اعتيادية في أنه يمكن أن يثبت وينشط كل من عمليات AB ويمتلك ٠ متعاقبة متكاملة متبادلة وتقليدية. وبصفة خاصة؛ يرتبط ب Clq وأخيراً ب -C3bi ويسهل هذا الاقتران الارتباط بخلايا ملتهمة كبيرة مما يؤدي إلى تنشيط خلايا 8. وبالإضافة إلى ذلك؛ Jay :0305 بشكل إضافي ومن ثم يرتبط ب 682 على خلايا 3 بكيفية معتمدة على خلايا T مما يؤدي إلى زيادة تبلغ ٠٠ في فعالية هذه الخلايا. وتتسبب هذه الآلية بجعل 8ه يولد استجابة مناعية بمقدار يزيد عن تلك المتولدة من المولدات المضادة الأخرى. ve ول 8م أشكال متعددة موجودة في الطبيعة. ويشار إلى الأشكال البشرية من AB ب 9ه AB42 (AB4L (AB40 و LAP43 وتوضح سياقات هذه الببتيدات وعلاقتها بالمصدر APP في الشكل١؛ انظر ما ela عن هاردي Hardy ومعاونيه في مجلة (TINS مجلد «Ve ص ١١/١0 (9997١م). فعلى سبيل المثال؛ يكون ل 0842م السياق التالي: H2N-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe- Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val- Vo .)47 (سياق تميز رقم: Te-Ala-OH وتختلف 41د 840و AB39 عن 8842 بحذف دلاخ ¢Ala-Ile و Ala-Tle-Val على الترتيب من الطرف الكربوني . ويختلف 8843 عن 8842 بوجود شق ثريونين dic threonine الطرف الكربوني. Y. وتكون الشدفات المولدة للمناعة ل مم مفيدة بالنسبة لجزيء سليم في طرق الاختراع الراهن لعدة أسباب. أولاً؛ لأن مغيرات خاصية معينة ضمن AB تحث فقط استجابة مولدة للمناعة مفيدة لمعالجة مرض الزهيمر؛ حيث تزود جرعة متساوية لكتلة من شدفة تحتوي على مغيرات خاصية من هذا القبيل تركيزاً جزيئياً من مغيرات الخاصية المولدة للمناعة المفيدة LS مما ستزوده جرعة من AB سليم. (Lili تولد شدفات من AB مولدة للمناعة معينة استجابة APP مولدة للمناعة ضد رواسب نشوانية بدون توليد استجابة مولدة للمناعة كبيرة ضد بروتين vo
حيث يشتق منه BIG LAB يعتبر تصنيع شدفات من AB أبسط من تصنيع AB سليم نظرآ لحجمها الأقصر. ورابعاء لاتتكتل شدفات من AB بنفس الكيفية التي يتكتل بها AB السليم مما
يسهل تحضير التراكيب الصيدلية وطرق إعطائها. ويكون لبعض الشدفات المولدة للمناعة من AP سياق يتكون من ٠١ 2 8# FY أو Laas ٠ 5 أمينياً متجاوراً على الأقل من ببتيد طبيعي. وتحتوي بعض الشدفات المولدة للمناعة على ما لا يزيد عن VA QV © أو ؟ شقات متجاورة من LAR وتفضل أجزاء من منتصف الطرف التتروجيني ل AR وتشمل شدفات مولدة dcliall مفضلة 1-5ةوّيى 1-6قى <AB1-10 1-7 83-7؛ 81-3 و LABIA فعلى سبيل المثال يشير الرمز 81-5 إلى جزء يشتمل على الشقات من 5-١ ل Ap ويفتقر إلى شقات أخرى ل AR وبصفة خاصة تفضل ٠ أجزاء تبدأ عند الشقات 7-١ ل AR وتنتهي عند الشقات 11-١7 ل AR ويمكن كذلك استخدام شدفات 881-12 لكنها مفضلة بدرجةٍ أقل. وفي بعض (Gok تكون الشدفة عبارة عن شدفة غير 881-10 عند الطرف النتروجيني. وتشتمل أجزاء أخرى مفضلة بدرجةٍ أقل <AB13-28 817-28ه» <AB25-35 «AB1-28 2835-40 و LAB35-42 وتتطلب هذه الشدفات فحص لقياس فعاليتها في التنقية أو منع الرواسب النشوانية كما وصف في الأمثلة قبل الاستخدام. ١ وتستخدم Glad تفتقر إلى حمض أميني عند الطرف الكربوني واحد على الأقل أو في بعض الأحيان © أو ٠١ أحماض أمينية عند الطرف الكربوني في أشكال AB الموجودة في الطبيعة في بعض الطرق. فعلى سبيل (JO) تشتمل شدفة تفتقر إلى خمسة أحماض أمينية من الطرف الكربوني ل 8843 على أول YA حمض أميني من الطرف النتروجيني ل AB وقد تستخدم كذلك مكونات أخرى للويحات نشوانية؛ على سبيل المثال. سينيوكيلين y esynuclein وشدفات
Ye مغيرة للخاصية منه لحث استجابة مولدة للمنتاعة. وما لم يشار إلى غير ذلك؛ يشتمل AB عند ذكره على سياقات الحمض الأميني البشري الطبيعي المشار إليه أعلاه بالإضافة إلى نظائر analogs تشمل نظائر أليلية allelic وجزيئات ومتغيرات مستحثة Sale 5 .0060168 and induced variants تختلف النظائر عن الببتيدات الموجودة في الطبيعة في موقع واحد؛ موقعين أو بضعة مواقع؛ وغالباً بفضل بدائل »> مقاومة dale spall تظهر النظائر تطابق سياق بنسبة ZA أو 790 على الأقل مع ببتيدات
AR
طبيعية. وتشتمل بعض النظائر كذلك على أحماض أمينية غير طبيعية أو تعديلات لأحماض أمينية عند الطرف النتروجيني أو الكربوني Nor © terminal amino acids في موقع واحدء موقعين أو بضعة مواقع. فعلى سبيل (Se (JB استخدام حمض أيزو- أسبارتيسك iso-aspartic acid عوضاً عن شق حمض الأسبارتيك الطبيعي natural aspartic acid عند الموقع ١ > و/أو ١ ل Ap وتشمل Bd أحماض أمينية غير طبيعية أحماض 7-أمينو (D-Aminoacids أحماض أمينية تحمل بديلين عند الموقعين «a, a-disubstituted amino acids a so أحماض 7<-ألكيل أمينو (N-alkyl amino acids حمض لاكتيك lactic acid 4 -هيدروكسي برولين 4-hydroxyproline (-كربوكسي غلوتامات ¢y-carboxyglutamate رحلل1111-ثلاتي مثيل لايزين «y-N,N,N-trimethyllysine (-17- أسيتيل لايزين «y-N-acetyllysine 0- Ye فوسفوسيرين «O-phosphoserine 177-أسيتيل سيرين (N-acetylserine 11-فورميل مثيونين (N-formylmethionine ١-مثيل هستيدين 3-methylhistidine *©-هيدروكسي لايزين «S-hydroxylysine 11-0 مثيل أرجينين «@-N-methylarginine وحمض أيزو أسبارتيك acid #ن2:1م1806. ويمكن فحص الشدفات والنظائر لتحديد الفعالية الوقائية أو العلاجية في نماذج حيوان محول transgenic animal models Lia بالمقارنة مع ضوابط je controls معالجة أو Vo ضوابط معالجة إرضائية placebo controls كما هو موصوف أدتاه. ويمكن تخليق AB شدفاته ونظائره عن طريق تخليق ببتيد في طور صلب solid phase peptide synthesis أو تعبير مأشوب recombinant expression أو يمكن الحصول عليه من مصادر طبيعية. وتتوفر مواد تخليق الببتيد التلقائية automatic peptide synthesizers تجارياً من مصادر تزويد متعددة (Jie شركة أبلايد بيوسيستيمز Applied Biosystems مدينة © فوسترء ولاية كاليفورنيا. ويمكن أن يكون التعبير المأشوب في بكتيريا chacteria مثل الخلايا الإشريكية القولونية coli .2؛ الخميرة «yeast خلايا الحشرات insect cells أو خلايا التدييات .mammalian cells ولقد وصفت إجراءات التعبير المأشوب من قبل سامبروك Sambrook ومعاونيه في كتاب بعنوان Molecular Cloning: A Laboratory Manual (مطبعة سي.إس.اتش.بي. برس «C.SHP. Press نيويورك؛ الطبعة الثانية؛ ji Ty (x) TAY كذلك ve بعض أشكال ببتيد AB تجارياً (على سبيل Jl) من شركة أميريكان ببتيدز كومباني vas vo
إنك <American Peptides Company, Inc.. مدينة سونيفال» ولاية كاليفورنيا وشركة كاليفورنيا
ببتيدز ريسرتش» إنك..106 California Peptide Research, ¢ مدينة ناباء ولاية كاليفورنيا). وتشتمل العوامل العلاجية كذلك على متعددات ببتيد أطول تشتمل؛ على سبيل JA على شدفة فعّالة من ببتيد 8م بالإضافة إلى أحماض أمينية أخرى. فعلى سبيل (Jal 5 تشتمل العوامل المفضلة على بروتينات اندماجية fusion proteins تشتمل على جزء من AB مدمج مع سياق حمض أميني مغاير يحث استجابة خلايا T المعززة ضد سياق حمض أميني مغاير ومن ثم استجابة Bada ضد الجزء AB ويمكن فحص متعددات ببتيد من هذا Jl) لتحديد الفعالية الوقائية أو العلاجية في نماذج حيوانية بالمقارنة مع ضوابط غير معالجة أو ضوابط معالجة إرضائية كما سيوصف أدناه. ويمكن إعطاء الببتيد (AR نظيره أو الشدفة الفعسّالة A أو متعدد ببتيد AT في صورة مقترنة أو في صورة مركبات متعددة أو في صورة مفككة. وتشتمل العوامل العلاجية كذلك على مركبات متعددة من عوامل مولدة للمناعة
مونمرية. ووفقا لطريقة أخرى؛ يمكن أن يقدم ببتيد مولد للمناعة؛ مثل شدفة من (AB بواسطة فيروس أو بكتيريا كجزء من تركيب مولد المناعة. ويدمج حمض نووي nucleic acid يحمل شيفرة الببتيد المولد للمناعة في مجين genome أو جسيم سطحي episome للفيروس أو البكتيريا. ويجوز أن يدمج الحمض النووي بكيفية تكفل التعبير عن الببتيد المولد للمناعة في صورة بروتين مفرز secreted protein أو في صورة بروتين اندماجي ذي بروتين سطحي خارجي outer surface protein لفيروس أو بروتين غشائي انتقالي transmembrane لبكتيريا Cus يعرض الببتيد. وينبغي أن تكون الفيروسات أو البكتيريا المستخدمة في طرق من هذا القبيل 7 غير ممرضة أو موهنة. وتشتمل الفيروسات الملاثمة على فيروس غدي cadenovirus فيروس الحلا البسيط (HSV) herpes simplex virus فيروس التهاب الدماغ الخليلي الفنزويلي «Venezuelan equine encephalitis virus وفيروسات A alpha viruses Lali 5( فيروس التهاب الفم الحويصلي «vesicular stomatitis virus وفيروسات عصوية rhabdo viruses أخرى» وجدري vaccinia ll وجدري الطيور fowl pox وتشمل البكتيريا الملائمة السسلموثلا salmonella Yo وشيغلا shigella ويعتبر اندماج ببتيد مولد للمناعة مع HBsAg ل LDL HBV بصفة خاصة. vad v1
وتشتمل العوامل العلاجية كذلك على ببتيدات ومركبات أخرى ليس بالضرورة أن يكون لها سياق حمض أميني مميز مشابه ل 8م لكن بالرغم من ذلك تعمل كمركبات محاكية ل AB وتحث استجابة مناعية مشابهة. فعلى سبيل (JB يمكن فحص أي ببتيدات وبروتينات تشكل صفائح مطوية من نوع 8 sheets ل8-01:216 لتحديد ملاءمتها. ويمكن كذلك استخدام أجسام ° مضادة لأنماط ذاتية مضادة لأجسام مضادة وحيدة النسيلة monoclonal antibodies ل AB أو ببتيدات نشوانية الأصل أخرى. وتحاكي هذه الأجسام المضادة لأنماط ذاتية المولد المضاد وتولد استجابة مناعية ضده (انظر ما جاء في كتاب بعنوان Jaa) Essential Immunology رويت Roit شركة بلاك ويل سياتتيفك ببليكيشنز Blackwell Scientific Publications مدينة «all gl الطبعة السادسة)؛ ص .)١8١ وينبغي أن تحث عوامل غير ببتيدات AB استجابة ٠ - مولدة للمناعة ضد واحد أو أكثر من الأجزاء المفضلة ل 8م المذكورة أعلاه (على سبيل المثال من ٠١-١ ١-لاء ١-؟ و (VF ويفضل أن تحث عوامل من هذا القبيل استجابة مولدة للمناعة توجه بشكل متخصص نحو أحد هذه الأجزاء بدون أن توجه نحو أجزاء أخرى
ل Ap ويمكن AIX فحص مكتبات عشوائية libraries صمعدة«_من_ببتيدات peptides أو ve مركبات أخرى yaad ملاءمتها gla) Say suitability مكتبات توليفية combinatorial libraries لأنواع عديدة من المركبات التي يمكن تخليقها synthesized بطريقة تدريجية step-by-step fashion وتشتمل مركبات Ge هذا القبيل على متعددات ببتيد CUS je polypeptides محاكية تتشكل بالثني عند الموقع م beta-tum mimetics ومتعددات polysaccharides Sud) وشحوم فوسفورية phospholipids وهرمونات hormones أ وبروستاغالااتدينات prostaglandins وستيرويدات steroids ومركبات عطرية aromatic compounds ومركبات حلقية مخلطة heterocyclic compounds ومركبات بنزو ثنائي أزبين benzodiazepines ومركبات غليسين تحمل Sn عند الموقع N قصيرة السلسلة oligomeric N-substituted glycines ومركبات كربامات قصيرة السلسلة .oligocarbamates ويمكن تشكيل مكتبات توليفية كبيرة من المركبات Gy لطريقة المكتبات التخليقية المحمولة Yo شفرتها encoded synthetic libraries (ESL) method (ESL) الموصوفة في ما جاء عن أفيماكس vag vv
cAffymax 3 585 براءة الاختراع الدولية رقم 5/1776508؛ Ley جاء عن أفيماكس Affymax في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم (AF) جامعة كولومبيا «Columbia University في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 94/085051؛ ودستور الأدوية 10020068 في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 95/708557 وما جاء عن سكريبس Scripps ٠ في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 90/705647 (أدمجت كل منها في هذا البيان للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض). ويمكن إنتاج مكتبات ببتيدات كذلك عن طريق طرق كشف ملتهمة phage display methods انظر على سبيل المثال ما ela عن ديفيلين Devlin في
نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 41/18346. وتفحص المكتبات التوليفية والمركبات الأخرى أولا لتحديد ملاءمتها عن طريق ٠ تحديد قدرتها على الارتباط بأجسام مضادة أو LOA لمفاوية B) أو (T معروفة بأنها متخصصة ب AB أو ببتيدات نشوائية الأصل amyloidogenic peptides أخرى. فعلى سبيل «Jal يمكن إجراء عمليات فحص ابتدائية initial screens باستخدام أي Jad متعددة النسافل polyclonal sera أو جسم مضاد وحيد النسيلة monoclonal antibody ل AB أو شدفة منه. ومن ثم تفحص المركبات لتحديد ارتباطها بمغير خاصية متخصسص specific epitope ضمن AP ve (على سبيل Fm) ءال-١ 1١-١ Jaa ١-؛ء )507 #-7). ويمكن اختبار المركبات باتباع نفس الإجراءات الموصوفة لتحديد نوعيات مغير الخاصية للجسم المضاد epitope specificities 007ط00ة. ومن ثم تحلل المركبات المميزة عن طريق عمليات فحص من هذا القبيل بشكل إضافي تحدد قدرتها على حث الأجسام المضادة أو خلايا لمفاوية فعالة reactive lymphocytes ل AB أو أجزاء منها. فعلى سبيل المثال؛ يمكن اختبار عدة محاليل Ye مخففة dilutions من مصل على الواح معايرة دقيقة microtiter plates طليت مسبقاً precoated ب AB أو شدفة منه ويمكن إجراء اختبار ELISA (معايرة اشرابية مناعية مرتبطة بانزيم) القياسي لاختبار أجسام مضادة فعالة ضد AB أو شدفات منه. ومن ثم تختبر الفعالية efficacy الوقائية prophylactic والعلاجية therapeutic للمركبات في حيوانات محولة Lia transgenic animals كانت عرضة لمرض نشواني الأصل amyloidogenic disease مسبقآء كما Yo سيوصف في الأمثلة. وتشتمل حيوانات من هذا القبيل؛ على سبيل (Jha) على فئران تحمل
YA
ومعاونيه» في Games الموصوفة من قبل غيمس APP من ١/١١7 عند الموقع mutation طفرة مثل تلك الموصوفة من APP من TV [TV 0 المرجع سابق الذكر وفئران تحمل طفرة سويدية 5,117,487 ومعاوتيه في براءة الاختراع الأمريكية رقم McConlogue قبل ماك كونلوغ ¢ م١ 341 ) 14 ص 7١75 المجلد Science وهسياو 0 ومعاونيه في مجلة 4 المجلد «Proc. Natl. Acad. Sci. USA ومعاونيه في مجلة Staufenbiel وستوفنبيل ° ومعاوتيه في مجلة Sturchler-Pierrat وستروشلر -بيرات (AAV) ١717-17 7/97 ص وبورشلت ¢(aY 49Y) 747-1777 المجلد 8% ص Proc. Natl. Acad. Sci. USA ص 145-474 (157١م)). ويمكن ٠4 ومعاونيه في مجلة 7:00 المجلد Borchelt potential agents analogs استخدام طريقة الفحص ذاتها على عوامل فعالة أخرى مناظرة الموصوفة أعلاه. AR أطول تشتمل على شدفات ل peptides وببتيدات AB ال ٠
Agents Inducing Passive Immune تحث استجابة مناعية سلبية Jal ge ."
Response تشتمل العوامل العلاجية therapeutic agents وفقآً للاختراع كذلك على أجسام مضادة ترتبط بشكل متخصص ب AP أو مكون آخر للويحات نشضوانية amyloid plaques Vo ويمكن أن تكون أجسام مضادة من هذا القبيل وحيدة النسيلة monoclonal أو متعددة التسائل polyclonal وترتبط بعض أجسام مضادة من هذا القبيل بشكل متخصسص بالشكل المتكتل aggregated form من AB دون الارتباط بالشكل المفكك dissociated form وبعضها يرتبط بشكل متخصص بالشكل المفكك دون أن يرتبط بالشكل المتكتل وبعضها يرتبط بالشكلين المتكتل والمفكك. ويرتبط بعض من أجسام مضادة من هذا القبيل بالشكل القصير من AB © الموجود في الطبيعة (أي» AB39 أو 8840 أو (ABA بدون الارتباط بالشكل الطويل من AB الموجود في الطبيعة (أي؛ 8842 و (AB43 وترتبط بعض الأجسام المضادة بالشكل الطويل بدون الارتباط بالشكل القصير. وترتبط بعض الأجسام المضادة ب AB بدون الارتباط بالبروتين المصدري النشواني كامل الطول amyloid precursor protein 1011-1671 Sale يكون للأجسام المضادة المستخدمة في الطرق العلاجية منطقة ثابتة سليمة intact constant region Yo أو مقدار كاف من المنطقة الثابتة constant region لتتفاعل مع مستقبلة v44
Ya نظرآ لامتلاكه human isotype 1:01 IgGl ويفضل النمط المتمائل البشري Fe receptor Fe على 181 receptor FeRI Alii wal human isotypes أعلى ألفة من الأنماط المتماثلة البشرية ثشائية التخصسص Fab ويمكن كذلك استخدام أجزاء phagocytic cells المتلهمة LIA ay) وللذراع AB حيث لأحد أذرع الجسم المضاد تخصص ب bispecific Fab fragments بألفة ارتباط تزيد عن أو AB وترتبط بعض الأجسام المضادة ب Fo م تخصص بمستقبلة لكل تركيز جزيئي. "٠١ أو ٠١ ٠١ ٠١ 7٠١ تساوي نحو على أعداد مخلطة polyclonal sera تحتوي الأمصال متعددة النسائل Bale من الأجسام المضادة المرتبطة بمغيرات خاصية متعددة على امتداد طول mixed populations قد تكون الأمصال متعددة النسائل متخصصة بجزء خاصة ل 8م مثل 81-10م. cad بيد LAB وترتبط الأجسام المضادة وحيدة النسيلة بمغير خاصية متخصص ضمن 88 قد يكون مغير ٠ .nonconformational أو غير بنيوي conformational خاصية بنيوي lel ya) ويمكن اختبار الفعالية الوقائية والعلاجية للأجسام المضادة باستخدام transgenic animal model procedures Laisa الاختبارات على التموذج الحيواني المحول الموصوفة في الأمثلة. وترتبط الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المفضلة بمغير خاصية ضمن الطبيعي AB أن يرمز لشق الطرف النيتروجيني الأول ل Je) AB ل ٠١-١ الشقات من ae وترتبط بعض الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المفضلة بمغير خاصية ضمن .)١ بالرقم .٠٠-* من dud أحماض أمينية من )07 ويرتبط بعضها بمغير خاصية ضمن أحماض
FY وترتبط بعض الأجسام المضادة المفضلة بمغيرات خاصية ضمن أحماض أمينية من أو 7-لا. وترتبط بعض الأجسام المضادة المفضلة بمغير خاصية يبدأ عند ال-١ ء1-١ of) وتشمل أجسام مضادة مفضلة JAP ل ١١-١7 الشقات من ١-؟ وينتهي عند الشقات من > بدرجة أقل تلك التي ترتبط بمغيرات خاصية ضمن الشقات من 1ف مرج ماح ويوصى بفحص أجسام مضادة من هذا القبيل لتحديد AB ل 10-٠١ 7ه أو ءاءح٠ فعاليتها في نموذج فأري موصوف في الأمثلة قبل الاستخدام. فعلى سبيل المثال؛ لقد وجد أنه مح YET AY ٠ ترتبط أجسام مضادة معينة بمغيرات خاصية ضمن شقات تفتقر إلى الفعالية. وفي بعض الطرق تستخدم أجسام مضادة وحيدة النسيلة متعددة EY-FY و ve vasa v. لها تخصص ارتباط بمغيرات خاصية مختلفة. وقد تعطى أجسام مضادة من هذا القبيل على
AB التعاقب أو في نفس الوقت. ويمكن كذلك استخدام أجسام مضادة لمكونات نشوانية غير فعلى سبيل المثال؛ يمكن توجيه أجسام مضادة نحو سينيوكلين بروتيني مرافق للمكون النشواني .amyloid associated protein synuclein
AB من Jie يذكر أن جسم مضاد مرتبط بمغير خاصية ضمن شقات معينة؛ Lexie على سبيل المثال؛ فإن هذا يعني أن الجسم المضاد يرتبط بشكل متخصص بمتعدد ببتيد 5-١ في هذا المثال). وليس من الضروري أن يتلامس 0m) AB يحتوي على الشقات المعينة (أي؛ وليس من الضروري أن يؤثر 0m) AR جسم مضاد من هذا القبيل مع كل شق ضمن الشقات على ألفة الارتباط ABL-S كل حمض أميني مفرد ضمن deletion أو حذف substitution (Ja) لجسم مضاد epitope specificity بدرجةٍ كبيرة. ويمكن تحديد تخصص مغير الخاصية ١ حيث تعرض phage display library على سبيل المثال؛ بتشكيل مكتبة عرض ملتهمة antibody ومن ثم تختار مكتبة عرض المتلهمة لأعضاء (AP أعضاء مختلفة سياقات جزئية مختلفة من dale متخصص بجسم مضاد تحت الاختبار. وتعزل عائلة من السياقات. (Kio ترتبط وأطوال مختلفة common core sequence تحتوي عائلة من هذا القبيل على سياق لبي مشترك بأعداد مختلفة. ويميز السياق اللبي القصير الذي يبين flanking sequences من سياقات مجائحة Vo ارتباط متخصص بالجسم المضاد؛ مغير خاصية مرتبط عن طريق الجسم المضاد. ويمكن كذلك اختبار الأجسام المضادة لتحديد تخصصها بمغير خاصية في معايرة تنافسية
Jal مع جسم مضاد قد حدد تخصصه بمغير الخاصية له. فعلى سبيل competition assay مع نفس مغير AP ترتبط الأجسام المضادة التي تتنافس مع الجسم المضاد 306 للارتباط ب .ه-١ من AP أي ضمن الشقات 3D6 الخاصية أو مغير خاصية مشابه كما هو الحال مع © وبالمثل؛ ترتبط الأجسام المضادة التي تتنافس مع الجسم المضاد 1005 مع نفس مغير الخاصية ويعتبر فحص أجسام مضادة لتحديد IF من AR أو مغير خاصية مشابه؛ أي ضمن الشقات فعلى سبيل therapeutic efficacy تخصص مغير الخاصية متنبئٌ مفيد عن الفعالية العلاجية
V=) المثال. من المحتمل أن يكون جسم مضاد حدد ليرتبط بمغير خاصية ضمن الشقات من .Alzheimer's disease للوقاية من ومعالجة مرض الزهيمر YU 28 AB ل Yo vasa
A
وللأجسام المضادة وحيدة النسيلة أو متعددة النسائل التي ترتبط بشكل متخصص بجزء مفضل ل 8م بدون الارتباط مع مناطق أخرى ل 8م عدد من المزايا مقارنة بالأجسام سليم AB المضادة وحيدة النسيلة التي ترتبط بمناطق أخرى أو أمصال متعددة النسائل ل تحتوي equal mass dosages يتعلق بالجرعات ذات المقادير المتساوية Lad أولك .intact AB جرعات من أجسام مضادة ترتبط بشكل متخصص بأجزاء مفضلة على جرعة جزيئية كبيرة 0 يمكن أن تحث «Lil amyloid plaques في تنقية لويحات نشوانية Aad من أجسام مضادة ضد clearing response أجسام مضادة ترتبط بشكل متخصص بأجزاء مفضلة استجابة تنقية سليم APP بدون حث استجابة تنقية ضد متعدد ببتيد ل amyloid deposits رواسب نشوائنية side effects مما يؤدي إلى تقليل احتمالية التأثيرات intact APP polypeptide للغلوبلينات المناعية dale خصائص i ٠١ els للجسم المضاد basic antibody structural unit تعرف الوحدة الأساسية البنيوية من زوجين tetramer وتتألف كل بنية رباعية subunits تشتمل على أربع وحدات ثائوية sa) واحدة "i aed’ متمائلين من سلاسل متعدد ببتيد ويحتوي كل زوج على سلسلة كيلودالتون). ويحتوي جزء الأمين 7+-© ٠ واحدة (نحو TLE كيلودالتون) وسلسلة Yo تتكون من variable region من كل سلسلة على منطقة متغيرة amino-terminal portion الطرفي Vo أو أكثر من الأحماض الأمينية مسؤولة بصفةٍ أساسية عن تمييز ٠٠١ إلى ٠٠١ نحو carboxy-terminal portion ويحدد جزء الكربوكسي الطرفي .2018©0 recognition المولد المضاد مسؤولة بصفة أساسية عن وظيفة المؤثر constant region من كل سلسلة منطقة ثابتة -effector function وتصنف .Jambda أو لمدا kappa إما بصفتها كابا light chains سلاسل خفيفة Cilia g Y. أو ابسيلون delta دلتا calpha Wl anu ميو (gamma بصفتها جاما heavy chains ALE السلاسل JgA IgM IgG بالصورة antibody's isotype وتحدد النمط المتمائل للجسم المضاد epsilon و 185 على الترتيب. وضمن السلاسل الخفيفة والثقيلة ترتبط المنتطقتين المتغيرة والثابتة 0 حمض أميني أو أكثر على أن تشتمل السلسلة ١١ تتكون من نحو AT عن طريق المنطقة
GUS أحماض أمينية أو أكثر. (انظر عموما؛ ٠١ الثقيلة كذلك على منطقة "7 تتكون من نحو ve
بعنوان Fundamental Immunology باسم دبليو ٠ بول (Paul, W. الطبعة الثانية؛ مطبعة رافين «Raven نيويورك»؛ 989 ١م)؛ الفصل السابع؛ (حيث دمج في هذا البيان بكامل محتواه للإحالة إليه كمرجع لجميع الأغراض). وتشكل المناطق المتغيرة variable regions لكل زوج من السلاسل الخفيفة والثقيلة موقع ارتباط الجسم المضاد tly antibody binding site على ذلك ؛ للجسم المضاد السليم intact antibody موقعي ارتباط باستثناء الأجسام المضادة ثنائية المجموعة الوظيفية bifunctional أو ثنائية التخصص 0 يكون موقعي الارتباط متماثلين. وتبدي كل السلاسل نفس البنية العامة للمناطق الهيكلية المحفوظة نسبيآً relatively conserved framework regions (FR) (FR) المتصلة عن طريق المناطق الثلاثة المتغيرة بشكل مفرط hypervariable regions تسمى كذلك Ve مناطق تحديد الكمال complementarity determining regions أو .CDRs وتتحاذى CDRs من السلسلتين لكل زوج عن طريق المناطق الهيكلية framework regions مما (Fas الارتباط بمغير الخاصية المتخنصص epitope ©06015. وتشتمل كل من السلاسل الخفيفة والثقيلة من الطرف النيتروجيني N-terminal إلى الطرف الكربوكسيلي C-terminal على الميادين (FRI CDR3 <FR3 «CDR2 FR2 «CDRI و .FR4 وكان تخصص الأحماض الأمينية لكل Vo ميدان Lag للتعريفات التي Lada كابات Kabat في كتاب بعنوان Sequences of Proteins of Immunological Interest (شركة ناشيونال انستيتيوت أف هيلث National Institutes of Health بيؤئيسدا Bethesda ولاية مارياند؛ AAY لم و9951 ١م)؛ أو ما جاء عن كوثا Chothia وليسك Lesk في مجلة of Mol Biol. المجلد 197 ص 17-401 AV) 8٠م)؛ وما sla عن كوثيا Chothia ومعاونيه في مجلة (Nature المجلد FEY Ap) AAR) AAY-AVA a x. ii إنتاج أجسام مضادة غير بشرية Nonhuman Antibodies يمكن إنتاج أجسام مضادة وحيدة النسيلة غير شرية monoclonal antibodies مصقصن-«ه» على سبيل المثال من فأر «murine ختزير هندي guinea pig حيوان رئيسي 01106 أرتب rabbit أو جرذ rat عن طريق immunizing aia ve الحيوان باستخدام AB على سبيل المثال. ويشتمل متعدد الببتيد الأطول على 08م أو شدفة vad
مناعية AP — immunogenic fragment أو أجسام مضادة للنمط الذاتي anti-idiotypic antibodies ضد جسم مضاد LAR انظر ما جاء عن هارلو Harlow ولان Lane في كتساب بعنوان cdntibodies _دليل مرشد للمختبرات «CSHP) نيويورك؛ AAA ١م) (دمج في هذا البيان للإحالة إليه كمرجع لجميع الأغراض). ويمكن الحصول على Ase مناعي immunogen من هذا القبيل 0 ل .recombinant expression ويمكن إعطاء A gall المناعي جوازاً وهو ملتحم 0 أو بطريقة أخرى متراكب مع بروتين حامل carrier protein كما سيوصف أدناه. ويمكن إعطاء المولد المناعي مع مادة مساعدة adjuvant جوازاً. ويمكن استخدام عدة أنواع من المواد المساعدة كما سيوصف أدناه. ويفضل استخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة Complete Freund’s adjuvant ye ثم المادة المساعدة غير الكاملة لتمنيع حيوانات المختبر Bale 5 .laboratory animals تمستخدم ail Jf أو خنازير هندية لتحضير أجسام مضادة متعددة النسائل. وعادةٌ تستخدم فئران لتحضير أجسام مضادة وحيدة النسيلة. وتفحص أجسام مضادة لتحديد الارتباط المتخصسص ل AB وبشكل إضافي تفحص الأجسام المضادة جوازاً لتحديد الارتباط بالمنطقة المتخصصة specific region ل -AB ويمكن إجراء الفحص الأخير بتحديد إرتباط جسم مضاد بطوافر Vo حذف deletion mutants لببتيد AR وتحديد أي من طوافر الحذف مرتبطة بالجبسم المضاد. ويمكن تقييم الارتباط عن طريق بقعة ويسترن Western blot أو ELISA على سجبيل المثال. وتحدد الشدفة الصغرى التي تبين الارتباط المتخصص بالجسم المضاد مغير الخاصية للجبسم المضاد Yas من ذلك؛ يمكن تحديد تخصص مغير الخاصية عن طريق معايرة تنافسية Cua competition assay يتنافس الجسم المضاد المرجعي reference antibody والجسم المضاد ٠ اللاختبار test ليرتبط ب AP وإذا تنافس الجسم المضاد المرجعي أو الجسم المضاد للاختبار فإنهما يرتبطان بنفس مغير الخاصية أو بمغيرات الخاصية بصورةٍ قريبة بشكل CHS ليتداخل ارتباط أحد الأجسام المضادة مع ارتباط الجسم المضاد الأخير. ويتمثل النمط المتمائل المفضل لأجسام مضادة من هذا القبيل في نمط متمائل فأري من 18028 أو نمط متمائل مكافيء في جزيئات species أخرى. ويعتبر النمط المتماثل الفأري 84 مكافئاً للنمط المتمائل البشري JgGl1 Yo ve humanized ومعذلة في صورة بشرية chimeric أجسام مضادة خيمرية iii يكون للأجسام المضاة الخيمرية والمعدلة في صورة بشرية نفس تخصص الارتباط ونفس الألفة أو تخصص ارتباط وألفة متشابهين كما هو في فأر أو جسم مضاد غير بشري لتشكيل جسم مضاد خيمري أو معذل في starting material آخر يزود المادة الأولية nonhuman صورة بشرية. وتعتبر الأجسام المضادة الخيمرية تلك الأجسام المضادة التي شكلت فيها 0 الخفيفة والثقيلة عادة عن طريق الهندسة الوراثية chain genes جينات السلسلة من أجزاء جين غلوبلين مناعي تنتمي لجزيئات مختلفة. فعلى سبيل «genetic engineering للجينات المأخوذة من جسم مضاد وحيد النسيلة (V) variable المثال» قد ترتبط أجزاء المتغير
IgGl مثل human constant (C) (C) بأجزاء الثابت لبشري mouse monoclonal antibody فأري على ذلك يكون الجسم المضاد الخيمري Teli IgGl ويفضل النمط المتمائل البشري IgG4 و ٠ يتكون من 7 أو ميدان الارتباط بالمولد hybrid protein النموذجي عبارة عن بروتين هجين من جسم مضاد فأري و © أو ميدان المؤثر من جسم مضاد antigen-binding domain المضاد بشري. وتحتوي الأجسام المضادة المعدلة في صورة بشرية على شقات هيكلية لمنطقة متغيرة من جسم مضاد بشري بصفةٍ جوهرية (يسمى جسم مضاد variable region framework residues Vo مسن complementarity determining regions ومناطق تحديد الكمال (acceptor antibody متقبل la بصفةٍ جوهرية (يسمى غلوبلين مناعي mousc-antibody جسم مضاد فأري انظر ما جاء عن كوين 8 ومعاونيه في مجلة . (donor immunoglobulin ونشرة براءة (a) AA AY ٠١-٠ Y4 ص «AT المجلد «Proc. Natl. Acad. Sci. USA وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 9,197,707 وبراءة ٠ /١7851 الاختراع الدولية رقم xe وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 9,988,084 وبراءة 0,197,76١ الاختراع الأمريكية رقم في براءة الاختراع Winter وما جاء عن وينتر 9,970.0٠ الاختراع الأمريكية رقم الأمريكية رقم 5,778,074 (دمجت في هذا البيان بكامل محتواها للإحالة إليها كمرجع لجميع كذلك إن وجدت؛ من constant region(s) وتتكون المنطقة (المناطق) الثابتة ٠ الأغراض) غلوبلين مناعي بشري بصفةٍ جوهرية أو بشكل كامل. وعادة تختار الميادين المتغيرة ve
Yo من أجسام مضادة بشرية تبدي سياقاتها الهيكلية human variable domains البشرية من تطابق السياق مع ميادين المنطقة المتغيرة الفأارية Ale ا:500060درجة 458 ويمكن أن تشتق الشقات الهيكلية في .CDRs من حيث تشتق murine variable region domains المتطقة المتغيرة للسلسلة الثقيلة والخفيفة من نفس سياقات الجسم المضاد البشري أو من سياقات مختلفة. وقد تكون سياقات الجسم المضاد البشري human antibody sequences ° عبارة عن سياقات للأجسام المضادة البشرية الموجودة في الطبيعة أو قد تكون سياقات قانونية ومعاونيه Carter عن كارتر sla لأجسام مضادة بشرية عديدة. انظر ما consensus sequences في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 97/77307. وتختار أحماض أمينية معينة من الشقات اعتمادآ على تأثيرها الممكن على بنية substitution الهيكلية للمنطقة المتغيرة البشرية للاستبدال الارتباط بالمولد المضاد «©©. ويمكن البحث عن تأثيرات Ss CDR conformation CDR Ve ممكنة من هذا القبيل بتشكيل واختبار خصائص الأحماض الأمينية عند مواقع معينة أو لأحماض أمينية خاصة. mutagenesis بالملاحظة الأولية لتأثيرات الاستبدال أو توليد الطفرات فعلى سبيل المثال؛ عندما يختلف حمض أميني بين شق هيكلي لمنطقة متغيرة فأارية استخدام الحمض الأميني الهيكلي Bale وشق هيكلي لمنطقة متغيرة بشرية مختارة ينبغي عوضاً عن الحمض الأميني الهيكلي mouse antibody المكافئ من الجسم المضاد الفأري Vo : عندما يتوقع على نحو معقول أن الحمض الأميني human framework amino acid البشري المضادء A gall مع noncovalently يرتبط مباشرةٌ بشكل غير إسهامي التكافؤ )١( «CDR region CDR مجاور لمنطقة )7( أنجستروم ١ (على سبيل المثال ضمن نحو CDR يتفاعل بطريقةٍ أخرى مع منطقة (7) أو (CDR ».من منطقة ./1-1711 interface VL-VH يشارك في السطح البيني (¢) وتتمثل أحماض أمينية أخرى مرشحة للإبدال في أحماض أمينية هيكلية بشرية متقبلة تعتبر غير اعتيادية للغلوبلين المناعي البشري عند acceptor human framework amino acids ذلك الموقع. وقد تستخدم أحماض أمينية من الموقع المكافئ للجسم المضاد المانح الفأري من المواقع المكافئة للغلوبلينات المناعية البشرية الأكثر نموذجية mouse donor antibody ~~ Ye vaa
Lage عن هذه الأحماض الأمينية. وتتمتل أحماض أمينية أخرى مرشحة للإبدال في أحماض أمينية هيكلية بشرية متقبلة تعتبر غير اعتيادية للغلوبلين المناعي البشري عند ذلك الموقع. Bale تبدي هياكل المنطقة المتغيرة variable region frameworks للغلوبلينات المناعية المعدلة بالصورة بشرية humanized immunoglobulins تطابق سياق بنسبة 7788 على الأقل لسياق ° هيكل المنطقة المتغيرة البشرية human variable region framework sequence أو لسياق قانوني من هذه السياقات. Liv أجسام مضادة بشرية: تزود أجسام مضادة بشرية Human antibodies against AB AB ua باستخدام تشكيلة من التقنيات الموصوفة أدناه. وتختار بعض الأجسام المضادة البشرية عن طريق تجارب Ve ارتباط تنافسية competitive binding experiments أو بطريقة «sal ليكون لها نفس تخصص مغير الخاصية كما في الجسم المضاد الفأري الخاص مثل أحد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة a الموصوفة في المثال (XT) ويمكن كذلك فحص الأجسام المضادة البشرية لتحديد تخصص مغير الخاصية الخاص باستخدام فقط شدفة من AB بصفتها المولد المناعي immunogen و/أو بفحصض أجسام مضادة ضد مجموعة من طوافر الحذف deletion mutants yo ل AR ويفضل أن يكون للأجسام المضادة البشرية isotype specificity human IgGl تخصص نمط متمائل بشري IgGl )١( منهجية WA تريوما :Trioma Methodology لقد وصفت الطريقة الأساسية وشريك التحام الخلايا التنمونجي SPAZ-4 exemplary cell fusion partner ليستخدم في الطريقة الراهنفة من قبل أوستبيرغ 068008 ومعاونيه في مجلة Hybridoma المجلد oY ص 77-799 (1987م)؛ ولقد ذكرت براءة الاختراع الأمريكية رقم 4,175,174 باسم أوستبيرغ Oestberg وبراءة الاختراع الأمريكية رقم £176,111 باسم انغليمان Engloman ومعاونيه (وأدمج كل منها في هذا البيان بالكامل للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض). وتسمى خطوط الخلية التي تنتتج الجسم المضاد antibody-producing cell lines والناتجة من هذه الطريقة خلايا تريوما f 13 triomas ve الأنها ناتجة من ثلاث خلايا خليتين بشريتين وخلية فأرية واحدة. وبشكل ابتدائي» يلتمم
بي خط ورم نضاعي فأري mouse myeloma line بخلايا ليمفاوية بشرية من نوع8 human B-lymphocyte للحصول على خلية هجينة غيرية لا تقوم بإنتاج الجسم المضاد cnon-antibody-producing xenogeneic hybrid cell مثل خط خلية SPAZ-4 cell line SPAZ-4 الموصوف من قبل أوستبيرغ 06058 في المرجع سابق الذكر. ومن ثم تلتحم xenogeneic cell A pel adsl) ° بالخلية الليمفاوية البشضرية الممنعة من نوع B immunized human B-lymphocyte للحصول على خط als تريوما تنتتج جسم مضاد .antibody-producing trioma cell line ولقد وجد أن خلايا تريوما 700 جسم مضاد أكثر Lol من الخلايا الهجينة الاعتيادية ordinary hybridomas الناتجة من الخلايا البشرية .human cells وتنتج الخلايا اللمفاوية الممنعة من نوع 3 من الدم blood الطحال «spleen العقد x اللمفاوية lymph nodes أو نخاع العظم bone marrow من gle بشري .human donor وإذا كاتنت أجسام مضادة ضد مولد مضاد متخصص أو مغير خاصية متخصص مرغوبة؛ يفضل استخدام ذلك المولد المضاد أو مغير الخاصية منه للتمنيع. وقد يجرى التمنيع في الجسم الحي in vivo أو في أنبوب الاختبار vitro «:. وفيما يتعلق بالتمنيع في الجسم الحي؛ تعزل WIA Bile 18 من بشر ممنع ب 8م أو شدفة منه أو متعدد ببتيد أكبر يحتوي على 8م أو شدفة منه أو جسم ٠ - مضاد للنمط المتمائل anti-idiotypic antibody لجسم مضاد ل AB وفي بعض الطرق؛ تعزل خلايا 8 من نفس المريض الذي يتلقى في النهاية العلاج بالجسم المضاد. وفيما يتعلق بالتمنيع في أنبوب الاختبار ؛ تعرض خلايا B اللمفاوية Bale إلى مولد مضاد لمدة تتراوح من ١7 إلى VE يوم في أوساط مثل RPMI-1640 (انظر ما جاء عن انغليمان Engleman في المرجع سابق الذكر) مكمل باستخدام بلازما بشر human plasma تركيزه N+ 9 وتلتحم الخلايا اللمفاوية الممنعة من نوع B بخلية هجينة غيرتّة مثل SPAZ-4 باستخدام طرق معروفة جيدآ. فعلى سبيل المثال ؛ تعالج الخلايا باستخدام متعدد إثيلين غليكول polyethylene glycol يتراوح تركيزه من 2-40 7/5 وبوزن جزيئي يتراوح من 45200-1٠٠١0 عند نحو الم لمدة تتراوح من نحو ٠١-© دقائق. وتفصل الخلايا من مزيج الالتحام fusion mixture وتتكائر في أوساط ذات انتقائية نحو الخلايا الهجينة المرغوبة hybrids (على Yo سبيل المثال HAT أو (AH وتميز النسائل التي تفرز أجسام مضادة ذات تخصص ارتباط
YA
خلايا تريوما لتحديد مقدرتها على الارتباط culture medium مطلوب بمعايرة وسط مستنبت ب 5ه أو شدفة منه. وتنسل خلايا تريوما التي تنتج أجسام مضادة بشرية ذات التخصسص limiting dilution technique جزئياً 410 باستخدام تقنية التخفيف المحدّد Shad المنشود وتنمو في أنبوب الاختبار في وسط مستنبت. ومن ثم تختبر خطوط خلية تريوما لتحديد قدرتها على الارتباط ب 8م أو شدفة منه. ٠ ومع أن خلايا تريوما ثابتة وراثياً إلا أنها لا تنتج أجسام مضادة بمستويات مرتفعة بتنسيل جينات الجسم المضاد من خلية expression levels جدآً. ويمكن زيادة مستويات التعبير واحد أو أكثر وتحويله إلى خطوط خلية ثديية expression vectors تريوما إلى ناقل تعبير قياسية. yeast أو خيميرية bacterial أو بكتيرية mammalian
Transgenic Non-Human (ia حيوانات ثديية غير بشرية محولة (Y) ye -Mammals من حيوانات ثديية غير بشرية محولة جينياً AP يمكن إنتاج أجسام مضادة بشرية ضد تحمل شيفرة جزء transgenes تحتوي على جينات محولة non-human transgenic mammals الغلوبلين المناعي البشري. وعادةٌ يثبط موضع الغلوبلين المناعي Tocus على الأقل من موضع من هذا القبيل من الناحية transgenic Lia ثديية محولة Gl sad endogenous داخلي المنشأ ve الوظيفية. ويفضل أن يشتمل جزء موضع الغلوبلين المناعي البشري على سياقات لم يعاد جينات الغلوبلين inactivation apf ترتيبها لمكونات السلسلة الثقيلة والخفيفة. ويمكن تحقيق وإدخال جينات الغلوبلين المناعي endogenous immunoglobulin genes المناعي داخلية المنشأ أو targeted homologous recombination عن طريق تأشب مستهدف مماتل Lindl خارجية ©8ا. وتكون الحيوانات الثديية المحولة جينيآ chromosomes YAC بإدخال كروموسومات > © الناتجة من هذه العملية قادرة على إعادة ترتيب سياقات مكون الغلوبلين المناعي وظيفيا والتعبير عن مجموعة الأجسام المضادة للأنماط المتماثلة المختلفة التي تحمل شفرتها جينات غلوبلين مناعي بشري بدون التعبير عن جينات غلوبلين مناعي داخلية المنشأً. ووصف إنتاج على سبيل المثالء (Jd وخواص الحيوانات الثديية التي لها هذه الخواص بتفصيل من لونبيرغ 100068 ومعاونيه في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 37/177797 (1447م)؛ ve ل ve خط لخرف (O,AVE, YA (0, AVY, TAY وبراءت الاختراع الأمريكية أرقام (0,0M4,AY0 م جام ترف تارم تترف (0,11), VT كارف 4 ب اثلارف
Nature ام)»؛ ومجلة 654 ١٠67-4 V La) EA المجلد Nature ومجلة 0 AT في Kucherlapati المجلد ذا ص آي )1 149( وما جاء عن كوتشير لاباتي Biotechnology (199م)؛ (حيث دمج كل منها بكامل محتواها 91/٠747 نشرة براءة الاختراع الدولية رقم ٠ للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض) . وتعتبر الفثران المحولة جينياً ملائمة بصفة خاصة. بتمنيع حيوان ثديي غير بشري محول جينياً كما وصسف AP وتنتج الأجسام المضادة ضد أو AB في المرجع سابق الذكر ¢ باستخدام Kucherlapati أو كوتشير لاباتي Lonberg لونبرغ B جزء منه. وتحضر أجسام مضادة وحيدة النسيلة عن طريق؛ على سبيل المثال؛ التحام خلايا ملائمة myeloma cell lines ورم نخاعي ada من حيوانات تديية من هذا القبيل بخطوط ve ويمكن -conventional Kohler-Milstein technology -ملستين التقليدية Hla باستخدام تقنية كو كذلك تزويد أجسام مضادة متعددة النسائل بشرية في صورة مصل 2 من بشر ممنع بعامل ويمكن كذلك تركيز أجسام مضادة متعددة التسائل من هذا immunogenic agent مولد للمناعة
Jia أو ببتيد نشواني آخر AB باستخدام affinity purification القبيل جوازاً عن طريق تنقية ألفية مادة مفاعلة للألفة. Ne :Phage Display Methods طرق عرض ملتهمة (7) في فحص مكتبة AB وتتمثل طريقة أخرى للحصول على أجسام مضادة بشرية ل من خلايا (deoxy ribonucleic acid (حمض ريبي نووي منقوص الأكسجين DNA library DNA «Science ومعاونيه في مجلة Huse بشرية وفقآً للبروتوكول العام المذكور من قبل هوسي 3 وكما وصف لمنهجية خلايا تريوماء يمكن (pV AAR) ١781-١729 المجلد 7 ص © شدفات؛ متعددات ببتيد كبيرة CAB الحصول على خلايا 8 من هذا القبيل من إنسان ممنع ب ويحصل .200-0100016 antibodies تحتوي على 8م أو شدفات أو أجسام مضادة للنمط الذاتي على خلايا 8 من هذا القبيل من مريض يتلقى في النهاية العلاج بالجسم المضاد. وتختار سياقات تحمل شيفرة أجسام مضادة Jud أو جزء منه. ومن ثم AB أجسام مضادة مرتبطة ب هذا القبيل (أو أجزاء مرتبطة) وتضخم. ويصبح البروتوكول الموصوف من قبل هوسي 0a ve
Huse أكثر فعالية عند التأشب باستخدام تقنية عرض ملتهمة. انظر؛ على سبيل المثال؛ ما جاء عن دوير Dower ومعاونيه في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 97/17799١ وماك كافيرتي MoCafferty ومعاونيه في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 97/01٠041 والبراءات الأمريكية أرقسام YA /الاخرف الادكرا لاخرف الامترط قارف 47 1 ATV, 0( الى FFTs ١ 0,070 (حيث دمج كل منها بكامل محتواها للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض). وفي هذه Guhl ؛ تنتج مكتبات ملتهمة Cua libraries تعرض الأعضاء members أجسام مضادة مختلفة على سطوحها الخارجية. Bale تعرض الأجسام المضادة في صورة شدفات Fv أو Fab وتختار أجسام مضادة تعرض خلايا ملتهمة بتخصص منشود بزيادة الألفة لببتيد
8ه أو شدفة منه.
Gays ١ لشكل آخر لطريقة عرض الملتهمة؛ يمكن إنتاج أجسام مضادة بشضرية لها تخصص ارتباط للجسم المضاد الفأاري المختار. انظر ما جاء عن وينتر Winter في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 47/70991. وفي هذه الطريقة؛ تستخدم المنطقة المتغيرة من السلسلة Ala al أو الخفيفة للجسم المضاد الفأري المختار بصفتها مادة أولية starting material وإذا اختيرت؛ على سبيل المثال » المنطقة المتغيرة من السلسلة الخفيفة بصفتها المادة الأولية؛
JZ Sam ve المكتبة الملتهمة بحيث تعرض الأعضاء نفس المنطقة المتغيرة من السلسلة الخفيفة light chain variable region (أي المادة الأولية (A ومنطقة متغيرة من سلسلة ثقيلة heavy chain variable region مختلفة. ويحصل على المناطق المتغيرة من السلسة ALE AY من مكتبة مناطق متغيرة بشرية معادة الترتيب (ae rearranged سلسلة ALAS وتختار ملتهمة تبدي ارتباط متخصص قوي ل AB (على سبيل المثال *٠١ لكل تركيز جزيئي على الأقل ويفضل
٠١ لكل تركيز جزيئي على الأقل). ومن ثم تعمل المنطقة المتغيرة البشرية من السلسلة
الثقيلة من هذه الملتهمة بصفتها مادة أولية لتشكيل مكتبة ملتهمة أخرى. وفي هذه المكتبة؛
تعرض كل خلية ملتهمة نفس المنطقة المتغيرة من السلسلة الثقيلة (أي المنطقة المميزة من
مكتبة العرض display library الأولى) ومنطقة متغيرة من سلسلة خفيفة مختلفة. ويحصل على
المناطق المتغيرة من السلسلة الخفيفة من مكتبة لمناطق متغيرة بشرية معادة الترتيسب من
ve سلسلة خفيفة. ومرة أخرى تختار ملتهمة تبدي ارتباط متخصص قوي ل AB وتعرض هذه
الملتهمة المناطق المتغيرة من الأجسام المضادة ل AB البشرية بشكل كامل. وعادةٌ يكون للأجسام المضادة نفس تخصص مغير الخاصية أو تخصص مغير خاصية مشابه مثل المادة الأولية الفأرية. (5). اختيار المنطقة الثابتة:
يمكن ربط المناطق المتغيرة من السلسلة الثقيلة والخفيفة للأجسام المضادة الخيمرية أو المعدلة في صورة بشرية أو البشرية التي يمكن أن ترتبط بجزء على الأقل من المنطقة الثابتة البشرية. ويعتمد اختيارالمنطقة الثابتة جزئياً إن كان المكمل المعتمد على الجسم المضاد antibody-dependent complement و /أو السمية التي تحدثها الخلايا cellular mediated toxicity مرغوبة. فعلى سبيل (Jal يكون للنمطين المتماظين IgGl و 1503 A led مكملة
complement activity Ve ولا يكون ذلك للنمطين المتماثلين 1802 و 1804. ويمكن أن يؤثر اختيار النمط المتمائل كذلك على مرور الجسم المضاد إلى الدماغ brain ويفضل النمط المتماثل البشري IgGl وقد تكون المناطق الثابتة من السلسلة الخفيفة lambda laa} أو كابا kappa ويمكن التعبير عن الأجسام المضادة في صورة وحدات رباعية تحتوي على سلسلتين خفيفتين وسلسلتين شقيلتين» في صورة سلاسل ثقيلة وخفيفة منفصلة مثل «Fab 1207)80(2 و Fv أو ve في صورة أجسام مضادة ذات سلسلة مفردة حيث ترتبط ميادين متغيرة من السلسلة Ale AN والخفيفة من خلال مباعد spacer )1( التعبير عن الأجسام المضادة المأشوبة: تنتج عادة الأجسام المضادة الخيميرية والمعدلة في صورة بشرية والبشرية عن طريق تعبير مأشوب. وعادةً تشتمل وحدات متعددة نوويتيد مأشوبة على سياق تعبير ضابط expression control sequence Ye يرتبط بشكل ممكن إجراؤه بسياقات التشسفير لسلاسل الجسم lad بما في ذلك مناطق معززة promoter regions مقترنة طبيعياً naturally-associated أو مغايرة. ويفضل أن تكون سياقات التعبير الضابطة عبارة عن أنظمة معززة سوية النواة eukaryotic promoter systems في نواقل قادرة على تحويل أو تخميج الخلايا العائلة سوية النواة eukaryotic host cells خمجاً تحويلياً. وبمجرد دمج الناقل في العائل المناسبء daisy العائل في
و ظروف ملائمة للتعبير عن سياقات نوكليوتيد بمستوى عالٍ Tax وجمع وتنقية الأجسام المضادة المتفاعلة تفاعلا تبادلياً .crossreacting dale تتضاعف نواقل التعبير هذه في الكائنات الحية العائلة في صورة جسيمات سطحية episomes أو في صورة جزء مكمل مسن DNA الصبغي العافل .host chromosomal DNA ° وعادة تحتوي نواقل التعبير على واسمات اختيار «selection markers على سبيل (JB مقاومة ضد أمبيسيلين ampicillin-resistance أو مقاومة ضد الهيغروميسين hygromycin-resistance لإتاحة الكشف عن هذه الخلايا المحولة باستخدام سياقات DNA المرغوبة. وتعتبر الأشريكية القولونية Mile E.coli بدائي النواة prokaryotic مفيدة بصفة خاصة ٠ التنسيل سياقات ال Gy DNA للاختراع الراهن. وتعتبر الأحياء الدقيقة microbes مثل الخميرة yeast 3044 كذلك للتعبير. وتعتبر الفطريات السكرية Jilesaccharomyces خميرة مفضل على أن تحتوي النواقل الملائمة على سياقات تعبير ضابطة ومصدر للتضاعف replication وسياقات انتهاء termination sequences وما شابه aus الرغبة. وتشمل المعززات promoters النموذجية ١-فوسفو غليسيرات كيناز 3-phosphoglycerate kinase وانزيمات ia Vo للسكر glycolytic enzymes أخرى. وتشمل معززات الخميرة القابلة للحث cinducible من بين معززات أخرى؛ معززات من ديهيدروجيناز كحولي calcohol dehydrogenase سيتوكروم متمائل ع © isocytochrome وانزيمات مسؤولة عن استخدام المالتوز maltose والغلاكتوز .galactose وتعتبر الخلايا الثديية العائل المفضل للتعبير عن أجزاء نوكليوتيدية تحمل © شيفرة غلوبلينات مناعية أو أجزاء منها. انظر ما جاء عن ويناكر Winnacker في كتاب From Genes to Clones (من شركة في سي اتش ببليشرز «VCH Publishers نيويورك؛ 7 ١م). ولقد طور عدد من خطوط خلية عائلة ملائمة قادرة على إفراز بروتينات مغايرة سليمة intact heterologous proteins في التقنية؛ وتشمل خطوط خلية «CHO cell lines CHO خطوط خلية various COS cell lines COS مختلفة وخلاايا HeLa cells HeLa وخلايا L cells vo .1 وخطوط خلية ورم نخاعي. ويفضل أن تكون الخلايا غير بشرية. وقد تشتمل نواقل
LY
التعبير لهذه الخلايا على سياقات تعبير ضابطة مثل مصدر التضاعف؛ معزز ومحرّض an enhancer (انظر ما ela عن كوين Queen ومعاونيه في (Immunol. Rev. daa المجلد A ص £9 (1987م))؛ ومواقع معالجة معلومات ضرورية مثتل مواقع ارتباط الريبوسوم ribosome binding sites ومواقع وصل ال RNA splice sites RNA ومواقع متعددة الأدينيلات polyadenylation sites ° وسياقات إنهاء استتنساخية .transcriptional terminator sequences وتتمثل سياقات التعبير الضابطة المفضلة في معززات مشتقة من جينات داخلية المنشأ endogenous genes وفيروسات ضخمة خلوية cytomegalovirus و 5740 وفيروسات غدية adenovirus وفيروسات الورم الحليمي البقري bovine papillomavirus وما شابه ذلك. انظر ما (YAY) ١١495 ص VEN المجلد oJ Immunol. ومعاونيه في مجلة Co من كو ela وبدلاً من ذلك؛ قد تدمج سياقات تشفير الجسم المضاد في جينات محولة لإدخالها في ye لحيوان محول جينياً ومن ثم التعبير عنها في حليب الحيوان المحول جينيا genome مجين OF EEA (OVEN, A0V البراءات الأمريكية أرقام (Jud Jue على ha) وتشمل الجينات المحولة الملائمة سياقات تشفير للسلاسل الخفيفة و/أو L(0,A£9,39Y جين متخصص بغدة_ثديية Oe اللقيلة في ربط يمكن إجراؤه مع معزز ومحرض .beta lactoglobulin أو بيتا لاكتو غلوبلين casein مثل كازيين mammary gland Vo المعنية إلى الخلايا العائلة DNA التي تحتوي على أجزاء vectors النواقل Jan وقد فعلى cellular host اعتماداً على نوع العائل الخلوي Tam باستخدام طرق معروفة host cells للخلايا Gh gat خمجاً calcium chloride تخميج كلوريد الكالسيوم dale سبيل المثال؛ يستخدم في حين يمكن استخدام المعالجة بفوسفات الكالسيوم prokaryotic cells بدائية النواة 110060000 خمج تحويلي شحمي celectroporation تشكيل المسام كهربائياً calcium phosphate Ye لعوائل خلوية viral-based transfection أو خمج تحويلي أساسه فيروس biolistics بيولستكس اندماج cpolybrene استخدام متعدد برين dnd WA أخرى. وتشمل طرق أخرى لتحويل تشكيل المسام كهربائياً cliposomes الجسيمات الشحمية protoplast fusion الخلايا غير النوعية
Sambrook عن سامبروك ela (انظر عموماً ما microinjection والحقن الدقيق celectroporation يمكن حقن bia ومعاونيه؛ في المرجع سابق الذكر). وبالنسبة لإنتاج حيوانات محولة |»
الجينات المحولة Laas Lun دقيقاً في الخلايا البيضاء المخصبة fertilized oocytes أو يمكن دمجها في مجين genome الخلايا الجذعية الجنينية cembryonic stem cells وتنقل أنوية nuclei WIS من هذا القبيل إلى الخلايا البيضاء de 5 ya النواة .enucleated oocytes وبمجرد التعبير عن الأجسام المضادة؛ يمكن تنقيتها وفقاً لإجراءات ° قياسية standard procedures في التقنية بما في ذلك التنقية بالاستشراب Jn عالي الأداء high performance liquid chromatography (HPLC) الاستشراب العمودي ccolumn chromatography الرحلان الكهربائي gel electrophoresis Shell وما شابه ذلك (انظر عموماً ما جاء عن سكوبس Scopes في Protein Purification US (سبرينجر -فير لاج «Springer-Verlag نيويورك New York 67 ام). =F ١ بروتينات حاملة Carrier Proteins تحتوي بعض العوامل المستخدمة لحث استجابة مناعية immune response على مغيسر الخاصية epitope المناسب لحث استجابة مناعية immune response ضد رواسب نشوائية amyloid deposits لكنها ضعيفة جدآً لتكوين استجابة مولدة للمناعة immunogenic وفي هذه AA يمكن ربط A ge مناعة peptide immunogen (sie بمادة حاملة ملائمة للمساعدة في Vo إظهار استجابة مناعية. وتشمل المواد الحاملة الملائمة JY) مصل «serum albumins هيموسيانين رخو لسد المسام keyhole limpet hemocyanin جزيثشات غلوبلين مناعي «immunoglobulin molecules غلويلين درقي «thyroglobulin زلال البيض covalbumin ذوفان الكزاز tetanus toxoid أو ذوفان من بكتيريا ممرضة «sal pathogenic bacteria مثل دفتيريا diphtheria الأشريكية القولونية coli .ل أو الكوليرا «cholera أو إتش. بيلوري pylori 77 Y. مشتقة تكسين موهن toxin derivative 21002160. وتشتمل المواد الحاملة الأخرى على مغيرات خاصية خلايا T ترتبط بأليلات MHC alleles متعددة؛ على سبيل JB لا يقل عن INO من كل من الأليلات MHC alleles البشرية. وتعرف مواد حاملة من هذا القبيل في بعض الأحيان في التقنية بصفتها "مغيرات خاصية خلايا T الشاملة "universal T-cell epitopes وتشتمل أمثلة لمغيرات الخاصية لخلايا 7 الشاملة على ما يلي: vasa
$0 انفلسونزا هيماغلوتينين :Hemagluttinin ورمويفتا PKYVKQNTLKLAT (سياق التمييز رقم: 47) PADRE (الشقات الشائعة مطبوعة بحروف ثخينة) AKXVAAWTLKAAA (سياق التمييز رقم: 44) © ملاريا 5©: EKKIAKMEKASSVFNV مغير خاصية ل T3 (سياق التمييز رقم: £0( مولد مضاد سطحي لاتهاب الكبد 38 HBsAg.
FFLLTRILTI ‘hepatitis B surface antigen (سياق التمييز رقم: £7( بروتين الصدمة الحرارية Heat Shock Protein 119 مور كط DQSIGDLIAEAMDKVGNEG (سياق التمييز رقم: (£V ٠ > باشيلي كلميتي-جوارين QVHFQPLPPAVVKL :bacille Calmette-Guerin (سياق التمييز رقم: EA ( ذوفان الكزاز: QYIKANSKFIGITEL TTasorsas (سياق التمييز رقم: £9( ذوفان الكزاز: FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE TTosmse (سياق التمييز رقم: ٠ ©( KQINMWQEVGKAMYA :HIV gp120 T1 (سياق التمييز رقم: )5١ yo وتشمل مواد حاملة أخرى لتنبيه أو تعزيز استجابة مناعية تشمل سيتوكينات cytokines مثل «IL-1 ببتيدات IL-1 a peptides و B املا «GM-CSF ¢IL-10 ¢yINF «IL-2 ومركبات كيموكين chemokines مثل Bs MIP1 a 11101و .RANTES ويمكن كذلك ربط عوامل مولدة للمناعة بببتيدات peptides تعزز الانتقال عبر الأنسجة كما وصسف في بحث أوماهوني O'Mahony في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 97/777117 ونشرة براءة الاختراع الدولية x. رقم 47/176114 ويمكن ربط العوامل المولدة للمناعة بمواد حاملة عن طريق الربط التقاطعي الكيميائي chemical crosslinking وتشتمل تقنيات ربط مولد مناعي بمادة حاملة بما في ذلك تشكيل Ath dy, كبريتيد disulfide باستخدام 17-سكسينيميديل-؟-(7-بيريديل-شيو) بروبيونات N-succinimidyl-3-(2-pyridyl-thio) propionate (SPDP) Yo و -(11-ماليميدو مثيل) هكسان حلقي-
succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1- كربوكسيلات سكس_يتيميديل -١
carboxylate (SMCC) (إذا افتقر الببتيد peptide لمجموعة سلفدريل ¢sulfhydryl group فإنه يمكن تزويدها عن طريق إضافة شق سيستثين (cysteine وتشكل هذه المواد reagents Ale lial
رابطة ثنائي كبريتيد disulfide linkage بين بعضها البعض وشقات ببتيد سيستثين
peptide cysteine ° على أحد البروتينات ورابطة أميد amide من خلال إبسيلون-أمينو e-amino على لايزين dysine مجموعات أمينو طلقة free amino أخرى في أحماض أمينية
amino acids أخرى. وتوصف مجموعة مختلفة من عوامل تشكيل رابطة Al كبريتيد [disulfide أميد amide من هذا القبيل في مجلة Rev. .8م المجلد VY ص (pV AAY) YAS
وتشكل عوامل اقتران ثنائية المجموعة الوظيفة bifunctional coupling agents أخرى من ثيوإيثر
Yu thioether ٠١ من رابطة ثنائي كبريتيد disulfide ويتوفر العديد من عوامل تشكيل رابطة ثيو- إيثر thioether هذه تجارياً وتشتمل على استرات متفاعلة من حمض ١+-ماليميدو كبرويك
aaa «esters of 6-maleimidocaproic acid ؟-برومو أسيتيك «2-bromoacetic acid حمض "-يودو أسيتيك 2-iodoacetic acid وحمض -(13-ماليميدو -مثيل) هكسان حلقي-١- كربوكيليك .4-(N-maleimido-methyl)cyclohexane-1-carboxylic acid ويمكن تشيط
vo مجموعات الكربوكسيل carboxyl groups عن طريق ربطها مع سكسيتيميد succinimide أو حمض )= هيدروكسيل-7-نترو -؛ -كبريتونيك 1-hydroxyl-2-nitro-4-sulfonic acid أو ملح
.sodium salt الصوديوم
ويمكن التعبير عن ببتيدات peptides مولدة للمناعة في صورة بروتينات اندماجية
fusion proteins مع مواد حاملة (أي؛ ببتيدات مغايرة -(heterologous peptides ويمكن ربط
Y. الببتيد peptide المولد للمناعة عند طرفه الأمينسي amino terminus أو طرفه الكربوكسيلي «carboxyl terminus أو كليهما بمادة حاملة. وبشكل اختياري؛ يمكن أن توجد مجموعات متكررة متعددة من الببتيد A sal peptide للمناعة في البروتين الاندماجي. وبشكل اختياري؛
يمكن ربط الببتيد Al gall peptide للمناعة بنسخ متعددة من الببتيد peptide المغاير؛ على سبيل
المثال عند الطظرف النتروجيني terminus آ< والكربوني terminus © من الببتيد peptide وتحث
vo بعض ببتيدات dala peptides على استجابة T WA المعززة ضد الببتيد peptide الحامل.
vasa tv للمناعة a gall peptide ضد الببتيد B المعززة المستحثة بدروها استجابة خلايا T وتحث خلايا الحامل. peptide المرتبط بالببتيد وتشتمل بعض العوامل وفقآ للاختراع على بروتين اندماجي حيث ترتبط شدفة الطضرف حامل. وفي peptide بببتيد C-terminus عند طرفه الكربوني AB من N-terminal النتروجيني شق AB عوامل من هذا القبيل» يشكل شق الطرف النتروجيني 11-0001 من الجزء من ٠ من البروتين الاتدماجي. ووفقآً لذلك؛ تعتبر بروتينات اندماجية N-terminal الطرف النتروجيني من هذا القبيل فعالة في حث أجسام مضادة ترتبط بمغير خاصية يتطلب أن يكون شق الطرف في صورة طلقة. وتشتمل بعض عوامل الاختراع على عدة AB من N-terminal النتروجيني مرتبطة عند الطرف AB من N-terminal مجموعات متكررة من جزء الطرف النتروجيني الحامل. ويندمج جزء الطرف peptide بنسخة واحدة أو أكثر من الببتيد C-terminus الكربوني ٠١ في بروتينات اندماجية في بعض الأحيان من هذا القبيل تبدأ AB من N-terminal النتروجيني AB1-5 ¢AB1-4 (ABL-3 (ABL-7 في بعض الأحيان عند 2881-3 وتنتهي عند 87-11م. ويعتبر مفضلة. وتشتمل بعض البروتينات AB من N-terminal شدفة طرف نتروجيني AB3-7 و مختلفة ترادفياً. فعلى سبيل المثال AB من N-terminal الاندماجية على أجزاء طرف نتروجيني مغاير. peptide ثم ببتيد ABL-3 قد يشتمل بروتين اندماجي على 2801-7 ثم Vo من N-terminal وفي بعض بروتينات الاندماجية؛ يلتحم جزء عند الطرف النتروجيني حامل مغاير. ويمكن استخدام نفس peptide بببتيد N-terminal عند طرفها النتروجيني AB كما هو الحال في العمليات AB من N-terminal التشكيلة من الأجزاء عند الطرف النتروجيني لعصنس»-. وتشتمل بعض البروتينات الاندماجية fusions الاندماجية عند الطرف الكربوني من الجزء عند الطرف N-terminal مغاير مرتبط بالطرف النتروجيني peptide ain على © الذي يرتبط بدوره بأجزاء عند الطرف النتروجيني (AB من Neterminal النتروجيني ترادفياً. AB إضافية واحدة أو أكثر من N-terminal وتبين بعض أمثلة البروتينات الاندماجية الملائمة لتستخدم في الاختراع أدناه. وتشتمل مرتبطة بمغيرات خاصية ذوفان الكزاز AB بعض من البروتينات الاندماجية هذه أجزاء من كما وصف في براءة الاختراع الأمريكية رقم 0,195,017 وبراءة الاختراع الأوروبية رقم vo
EA
7,81 وبراءة الاختراع الأوروبية رقم 797,747 . وتشتمل بعض بروتينات الاندماجية على أجزاء من AB مرتبطة بببتيدات peptides حاملة موصوفة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 0,77 . وتعتبر بعض من الببتيدات peptides المغايرة مغيرات خاصية لخلايا 1 شاملة. وفي بعض الطرق؛ يعتبر عامل الإعطاء ببساطة بروتين اندماجية مفرد مع جزء 48 م مرتبط بجزء مغايرة في شكل خطي. وفي بعض الطرق؛ يكون Jalal عبارة عن مركب متعدد multimer من بروتينات اندماجية ممثلة بالصيغة "” حيث » يمثقل عددا صحيحاً يتراوح من ١ إلى ©. ويفضل أن يساوي ١ ٠ أو oF والأفضل أن يساوي .١ وعندما *«<؟؛ يحتوي المركب المتعدد على أربعة بروتينات اندماجية مرتبطة بشكل مفضل يشار إليه ب 4م« (انظر براءة الاختراع الأمريكية رقم 2,1٠ ). ويوضع تحت حروف > مغيرات الخاصية خط. ويبين الشكل 14/804 lial حيث تنتج البنيات المتفرعة branched structures عن طريق تخليق الببثيد Yl peptide عند كل من الطرف النتروجينسي terminal 17 وأمينات السلسلة الجانبية side chain amines من اللايزين Lysine واعتمادآ على عدد المرات التي يندمج Led اللايزين lysine في السياق ويسمح له بالتفرع؛ ستنتج البنية الناتجة أطراف نيتروجينية م N termini متعددة. وفي هذا المثال؛ تنتج أربعة أطراف نيتروجينية N termini متمائلة على اللب الذي يحتوي على اللايزين lysine المتفرع. ويعزز تعدد من هذا القبيل استجابة خلايا B القريبة بدرجةٍ كبيرة. KGG rT. <> — ببتيد KA سح بيتيد KGG اس AN90S49 yo (1-7 8/ذوفان )3 844-87٠ في شكل :(MAP4
£9 DAEFRHDQYIKANSKFIGITEL (سياق التمييز رقم: (OF CB 5Y/AB 1-7( 0 الكزاز 427-447 في شكل (MAP DAEFRHDFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE (سياق (CARER BUSTA 2 (1-7 8م/ذوفان الكزاز 4-870 84+ 477-447 في شكل خطي): Glu) DAEFRHDQYIKANSKFIGITELFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE التمييز رقم: (OF OY 5YAB 3-9( 6 الكزاز 4-87٠ 84 في شكل (MAPA EFRHDSGQYIKANSKFIGITEL 0٠ (سياق التمييز رقم: °°( الببتيد peptide الموصوف في براءة الاختراع الأمريكية رقم 5,771,157 (كلها في شكل خطي): AN90562 )1-7 8يبتيد AKXVAAWTLKAAADAEFRHD =(peptide (سياق التمييز Yo رقم :556 ( 1-7x3) AN90543 قح أيبتيد (peptide DAEFRHDDAEFRHDDAEFRHDAKXVAAWTLKAAA (سياق التمييز رقم: (OY أ بحروف ثخينة سوداء) AKXVAAWTLKAAA-DAEFRHD-DAEFRHD-DAEFRHED (سياق التمييز رقم: (oA DAEFRHD-AKXVAAWTLKAAA (سياق التمييز رقم: 54) DAEFRHD-ISQAVHAAHAEINEAGR (سياق التمييز (Vad FRHDSGY-ISQAVHAAHAEINEAGR (سياق التمييز رقم: )0( EFRHDSG-ISQAVHAAHAEINEAGR Yo (سياق التمييز رقم: 17)
(OF (سياق التمييز رقم: PKYVKQNTLKLAT-DAEFRHD-DAEFRHD-DAEFRHD )764 (سياق التمييز رقم: DAEFRHD-PKYVKQNTLKLAT-DAEFRHD (0 (سياق التمييز رقم: DAEFRHD-DAEFRHD-DAEFRHD-PKYVKQNTLKLAT )67 (سياق التمييز رقم: DAEFRHD-DAEFRHD-PKYVKQNTLKLAT
DAEFRHD-PKYVKQNTLKLAT-EKKIAKMEKASSVENV. (سياق التمييز QYIKANSKFIGITEL-FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-DAEFRHED (Tv: رقم DAEFRHD-DAEFRHD-DAEFRHD-QYIKANSKFIGITEL- (VA (سياق التمييز رقم: NNFTVSFWLRVPKVSASHLE التمييز Gl) DAEFRHD-QYIKANSKFIGITELCFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE \ (4 رقم: (سياق DAEFRHD-QYIKANSKFIGITELCFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-DAEFRHD (Ve التمييز رقم: |ّ على راتنج يحمل فرعين (oY (سياق التمييز رقم: DAEFRHD-QYIKANSKFIGITEL : 0
TT Lys-Gly-Cys يبتيدد > (بروتين اندماجي من (VY : (سياق التمييز رقم EQVTINVGGAISQAVHAAHAEINEAGR (MAP-4 في شكل Synuclein سينيوكلين 7 ويمكن استخدام نفس البروتينات الحاملة أو بروتينات حاملة مشابهة ونفس طرق الربط ليستخدم AB أو طرق ربط مشابهة لتوليد مولدات مناعة لتستخدم في توليد أجسام مضادة ل أو شدفة منها AB يمكن إعطاء (Jil فعلى سبيل passive immunization في التمنيع السلبي أجسام مضادة وحيدة z WY laboratory animal مرتبطة بمادة حاملة إلى حيوان مخبري -AB ل monoclonal antibodies النسيلة Yo
© ؛ - حمض نووي يحمل شيفرة عوامل علاجية Nucleic Acid Encoding Therapeutic Agents يمكن كذلك حث استجابات مناعية ضد رواسب نشوائية بإعطاء أحماض نووية تحمل شيفرة أجزاء من ببتيد AB peptide وشدفات منهاء مولدات مناعة ببتيدية peptide أخرى أو م أجسام مضادة وسلاسل مكوناتها المستخدمة للتمنيع السلبي. وقد تكون أحماض نووية من هذا القبيل DNA أو RNA وعادة يرتبط جزء حمض نووي يحمل شيفرة مولد المناعة بعناصر منظمة ‘regulatory elements مثل معزز enhancer ومحض(ضض promoter مما يتيح التعبير عن جزء DNA في الخلايا المستهدفة المرغوبة في مريض . وللتعبير في LMA الدم ¢blood cells ما هو مرغوب لحث استجابة مناعية؛ تكون العناصر المعززة والمحضضة من جينات غلوبلين مناعي من سلسلة خفيفة أو شقيلة أو المعزز والمحضض المبكر الوسيطي الرئيسي OMY ملائمة لتوجيه التعبير Ge 4 -expression »+ تنسل العناصر المنظمة المرتبطة وسياقات التشفير coding sequences في ناقل vector وبالنسبة لإعطاء أجسام مضادة مزدوجة السلسلة ¢double-chain antibodies قد تتسل السلسلتان في نفس النواقل أو في نواقل منفصلة. ويتوفر عدد من أنظمة نقل فيروسية بما في ذلك أنظمة فيروسية ارتجاعية retroviral systems Vo (انظرء على سبيل المثال» ما جاء عن Lawrie Sod وتومين Tumin في مجلة «Cur.
Opin.
Gener.
Develop المجلد ص FY ٠١-١١7 144( ؛ نواقل فيروسية مقترنة بغدة adenoviral vectors (انظرء على سيبيل المثال؛ ما جاء عن بيت Bett ومعاونيه» في مجلة 7701 / المجلد WY ص 841١ )139%( ؛ نواقل فيروسية غدية مقترنة adeno-associated virus vectors (انظرء على سبيل ela l_ 4. Jad عن زو Zhou + - ومعاوتيه في مجلة Exp Med 7 المجلد 4 ص YATY ( 64 م))؛ نواقل فيروسية من عائلة الجدري pox family تشتمل على فيروسات جدري vaccinia virus yl) وفيروسات جدري الطيور avian pox viruses ونواقل فيروسية من جنس فيروس ألفا Jia 5 alpha virus genus تلك المشتقة من فيروسات سيندبيز Sindbis Viruses وسيمليكي فوريست Semliki Forest Viruses (انظر le سبيل المثال» ما ela عن دوبنسكي Dubensky vo ومعاونيه في مجلة J Viros المجلد av. 11-008 )1 4 م))؛ فيروسات إالتهاب oY (انظر براءة الاختراع الأمريكية Venezuelan equine encephalitis virus (JY فينزو Lal) الدماغ مثلاً فيروس إلتهاب القسم الحويصلي crhabdoviruses رقم 2,17 )؛ فيروسات عصوية (انظر نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 7ح 12/7 ( وفيروسات vesicular stomatitis virus ومعاوتيه؛ في مجلة Ohe — عن ela (انظر ما papillomaviruses الورم الحليمي
Woo 4م)؛ وما جاء عن وو 0) Y¥¥=¥Yo المجلد 3 ص Human Gene Therapy °
Xiao shu] ومعاونيه في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 44/177174 وما جاء عن 77١-7١7١ المجلد 74 ص «Nucleic Acids. Res. في مجلة Brandsma وبراندسما ام)). 7 ) يحمل شيفرة مولد مناعة؛ أو ناقل يحتوي على نفس المولد DNA ويمكن تغليف وتوصف شحوم 05 ملائمة ونظائر متعلقة بها في liposomes المناعي في جسيمات شحمية ٠١ لتر تارف ار 1ر8 و 0,Y A, براءات الاختراع الأمريكية أرقام تا يحمل شيفرة مولد مناعة في مواد حاملة DNA ويمكن كذلك امتزاز نواقل و .0, YAY, YAO جسيمية أو الاقتران بهاء وتشتمل أمثلتها على بوليمرات متعدد مثيل ميشاكريلات ومركبات متعدد (لاكتيد- polylactides ومتعددات اللاكتيد polymethyl methacrylate polymers ما جاء عن مكجي (Ja) انظرء على سبيل -poly(lactide-co-glycolides) غليكوليد إسهامي) Vo . (a ١١" ) J. Micro Encap. ومعاونيه في McGee naked مكشضوف DNA أو gene therapy vectors ويمكن تصريف نواقل معالجة جينية بإعطائها إلى مريض منفرد؛ وعادةٌ بإعطائها بصورة نظامية in vivo داخل الجسم الحي أو داخل البريتون intravenous (على سبيل المثال» داخل الوريد systemic administration أو في intradermal أو المعدة 885012 أو في الأدمة nasal أو عن طريق الأنف intraperitoneal 7 أو بالتسسريب داخل الجمجمة subdermal عن طريق الجلد intramuscular العضل براءة الاختراع (Jad Ju أو بالإعطاء الموضعي (انظرء على (intracranial infusion الأمريكية رقم 1 ). ويمكن أن تشتمل نواقل من هذا القبيل على عوامل تسهيل (انتظطر براءة الاختراع الأمريكية رقم bupivacine بيوبيفاسين Jia facilitating agents انظر ما جاء Lgene gun باستخدام مسدس جينات DNA ويمكن كذلك إعطاء . (e,04v,av. Yo vag oY الذي يحمل DNA في المرجع سابق الذكر. ويرسب Brandsma وبراندسما Xiao عن اكسياو وتسرع «microscopic metal beads شيفرة مولد مناعة على سطح خرزات فلزية مجهرية أو غاز هيليوم 81001 wave عن طريق موجة صدمية microprojectiles المقذوفات الدقيقة ممدّدء وخرق الأنسجة إلى عمق يصل إلى طبقات خلايا متعددة. فعلى سبيل helium gas (علامة تجارية) لتصريف الجين التي تصنع من قبل شركة Accel™ المثال؛ تكون أداة أسيل ٠ من Vg مدينة ميدلتون» ولاية وسكونسن ملائمة للاستخدام. cAgacetus, Inc. أجاستوس إنك. على DNA المكشوف المرور عبر الجلد إلى مجرى الدم بسهولة بتبقيع DNA ذلك يمكن ل (انظر ما جاء في mechanical أو ميكانيكي chemical irritation الجلد باستخدام تهيج كيميائي
نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 35/.57827).
y ووفقا لطريقة أخرى يمكن تصريف نواقل تحمل شيفرة مولدات مناعة إلى خلايا خارج الجسم الحي WIA Jie tex vivo مزروعة خارج جسم مريض مستقل (على سبيل (JU خلايا لمفاوية lymphocytes ومواد مزالة من نضخاع العظم bal a bone marrow aspirates وخزعات نسيجية (tissue biopsy أو خلايا جذعية مكونة للدم مانحة شاملة universal donor hematopoietic stem cells ثم sale) غرس الخلايا reimplantation في
Vo المريض» sale بعد اختيار خلايا احتوثت على الناقل.
1 فحص أجسام مضادة لتحديد فعالية التنقية Screening Antibodies for Clearing Activity
يزود الاختراع طرق لفحص جسم مضاد لتحديد فعاليته في تنقية راسب نشواني أو أي مولد مضاد antigen آخر أو وحدة إحيائية مقترنة حيث يكون من المرغوب وجود فعالية التتقية. ولإجراء الفحص لتحديد الفعالية ضد راسب نشواني؛ تتلامس عينة نسيجية مأخوذة
أ من دماغ مريض مصاب بمرض الزهيمر Alzheimer's أو من نموذج حيواني له خصائص
مرض الزهيمر مع خلايا ملتهمة phagocytic cells تحمل مستقبلة Jie «Fe خلايا غرائية عصبية دقيقة cmicroglial cells والجسم المضاد الموضوع تحت الاختبار في وسط أنبوب الاختبار vin vitro ويمكن أن تستنبت الخلايا الملتهمة بصفة أساسية أو خط (WA مثا BV-2 «C8-B4 أو 1110-1. وفي بعض الطرق»؛ تدمج المكونات على شريحة مجهر microscope slide
wells لتشهيل المراقبة المجهرية. وفي بعض الطرق؛ يتم إجراء عدة تفاعلات في عيون ve
vas ot وفي أشكال من هذا القبيل؛ يمكن مراقبة emicrotiter dish متوازية في صحن معايرة دقيقة شريحة مجهرية مصغرة منفصلة في عيون منفصلة؛ أو يمكن استخدام شكل كشضف غير ويفضل؛ إجراء عدة قياسات لتحديد مقدار الراسب AB عن BLISA مجهري؛ مثل كشف deli من قيمة أساسية قبل حدوث feds النتشواني في مزيج تفاعل في أنبوب الاختبار؛ وقيمة اختبار واحدة أو أكثر أثناء التفاعل. ويمكن الكشف عن المولد المضاد بالصبغ» على 5 أو أي مكون fluorescently labelled موسوم فلورياً AR باستخدام جسم مضاد ل (JU سبيل وقد يكون الجسم المضاد المستخدم للصبغ نفس الجسم . 40 plaques للويحات نشوانية المضاد الذي اختبر لتحديد فعالية التنقية وقد لا يكون. ويشير الانخفاض بالنسبة إلى القيمة أن للجسم المضاد الموضوع تحت الاختبار فعالية af ga) الأساسية أثناء تفاعل الرواسب تقية. وقد تكون أجسام مضادة من هذا القبيل مفيدة في الوقاية من أو معالجة مرض الزهيمر + أو أمراض نشوائية الأصل أخرى. وقد تستخدم طرق مناظرة لفحص أجسام مضادة لتحديد فعاليتها في تنقية أنواع أخرى ضد وحدة إحيائية dan من الوحدات الإحيائية. ويمكن استخدام المعايرة للكشف عن فعالية يكون للوحدة الإحيائية دورآ في مرض الإنسان أو الحيوان dale فعلية أو أي نوع منها. ب إلى حدٍ ما. ويمكن تزويد الوحدة الإحيائية في صورة عينة نسيجية أو في صورة معزولة. وإذا زود في صورة عينة نسيجية؛ يفضل أن تكون العينة النسيجية غير مثبتة لإتاحة منفدا
Sl سريعا لمكونات العينة النسيجية ولتجنب اضطراب بنية المكونات المترتبة عن وتشمل أمثلة العينات النسيجية التي يمكن اختبارها في هذه المعايرة أنسجة سرطائية أنسجة تحتوي على أورام حميدة ¢precancerous tissue أنسجة قبل السرطان » 681206170115 tissue أنسجة مصابة بأحياء دقيقة ممرضة cmoles أو الشامات 5 Adal مثل benign growths Y. بخلايا إلتهابية tissue infiltrated مرتشحة da ‘pathogenic microorganisms tissue bearing pathological أنسجة تحمل قوالب مرضية بين الخلإيا ¢inflammatory cells «(fibrinous pericarditis التهاب التأمور الليفيني (Jad) (على سبيل matrices between cells وأنسجة ذات ندبة tissue bearing aberrant antigens أنسجة تحمل مولدات مضادة زائفة مولدات (AB وتشمل أمثلة الوحدات الإحيائية المعزولة التي يمكن استخدامها scar tissue Yo
مضادة فيروسية أو فيروسات؛ مركبات بروتيوغليكان proteoglycans مولدات مضادة لأحياء دقيقة ممرضة أخرى؛ مولدات مضادة ورمية tumor antigens وجزيئثات التصساق adhesion molecules ويمكن الحصول على مولدات مضادة من هذا القبيل من مصادر طبيعية؛ تعبير مأشوب recombinant expression أو تخليق كيميائي من بين طرق أخرى. م وتلامس العينة النسيجية أو الوحدة الإحيائية المعزولة مع خلايا ملتهمة تحمل مستقبلات Fo مثل الخلايا البيضاء وحيدة النواة أو الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة microglial cells وجسم مضاد ينبغي اختباره في وسط. ويمكن توجيه الجسم المضاد نحو الوحدة الإحيائية الموضوعة تحت الاختبار أو نحو مولد مضاد مقترن بالوحدة. Gag للحالة الأخيرة؛ يتبتي اختبار الجسم المضاد سواء التهم الوحدة الإحيائية من قبل المولد المضاد بشكل بديل. وعادة؛ ٠١ ومع أنه غير ضروري؛ يتلامس الجسم المضاد والوحدة الإحيائية (وفي بعض الأحيان مع مولد مضاد مقترن) مع بعضهما البعض قبل إضافة الخلايا الملتهمة. ومن ثم يراقب تركيز الوحدة الإحيائية و/أو المولد المضاد المقترن؛ إن cans المتبقي في الوسط. ويشير الانخفاض في مقدار أو تركيز المولد المضاد أو الوحدة الإحيائية المقترنة في الوسط إلى أن للجسم المضاد استجابة تنقية ضد المولد المضاد و/أو الوحدة الإحيائية المقترنة بالاقتران مع الخلايا VE على سبيل المثال hil) الملتهمة Vo
Patients Amenable To Treatment ضون للمعالجة pos مرضى 7 يشتمل المرضى المتعرضون للمعالجة أفراد معرضين لخطر الإصابة بالمرض لكن لا تظهر عليهم الأعراض» بالإضافة إلى مرضى تظهر عليهم أعراض حالية. وفي Alla مرض الزهيمرء يكون أي شخص Los معرض فليا لخطر المعاناة من مرض الزهيمر إذا عاش + فترة طويلة. وبناءً على ذلك؛ يمكن تطبيق الطرق الراهنة Lalas على عدد إجمالي من السكان دون احتمالية تعرض المريض الخاضع للعلاج إلى أي خطورة. وتعتبر الطرق الراهنة مفيدة بصفة خاصة لأفراد معرضين وراثياً لخطر الإصابة بمرض الزهيمر المعروف. ويشمل أفراد من هذا القبيل أولئك الذين لهم أقارب عانوا من هذا المرض» وأولئك الذين تحدد خطورة إصابتهم بتحليل واسمات جينية أو كيميائية إحيائية. وتشمل الواسمات الجينية Yo المعرضة لخطر الإصابة بمرض الزهيمر طفرات في جين APP وبصفة خاصة طفرات عند vaq on الموقع ١١ والموقعين 17 و +7١ المشار إليهما بطفرات هاردي Hardy mutations وطفرات سويدية Swedish mutations على الترتيب (انظر ما ela عن هاردي Hardy في TINS dla في المرجع سابق الذكر) . وتكون الواسمات الأخرى المعرضة للخطر عبارة عن طفرات في جينات ما قبل الشيخوخة «PS2 (PSI «presenilin genes و <ApoE4 تاريخ العائلة ° ل (AD فرط كوليسترول الدم hypercholesterolemia أو التصلب العصيدي -atherosclerosis ويمكن تمييز الأفراد الذين يعانون حالياً من مرض الزهيمر من عته مميز characteristic dementia بالإضافة إلى وجود العوامل الخطرة الموصوفة أعلاه. وبالإضافة إلى ذلك؛ يتوفر عدد من الاختبارات التشخيصية لتمييز أفراد مصابين ب AD وتشتمل هذه الاختبارات على قياس مستويات CSF tau و 8842. ويدل ارتفاع tau وانخفاض مستويات ١ 2 على وجود AD ويمكن تشخيص الأفراد المصابين بمرض الزهيمر كذلك عن طريق معايير ADRDA كما سيتم مناقشته في جزء الأمثلة. وفي المرضى الذين لا تظهر عليهم أعراض المرض؛ يمكن بدء المعالجة عند أي عمر (على سبيل المثال 7٠١0700٠١ سنة) . غير أنه ليس من الضروري Bale بدء المعالجة إلى أن يصل عمر المريض إلى 6 ٠ أو Ve سنة. وتستزم المعالجة bale عدة جرعات خلال فترة من الزمن. ويمكن مراقبة المعالجة باختبار جسم مضاد أو استجابات فعالة لخلايا T أو خلايا 8 للعامل العلاجي (على سبيل المثال؛ ببتيد (AB peptide مع الزمن. وفي Als ضعف الاستجابة فإنه يوصى بأخذ جرعة معززة. وفي حالة مرض متلازمة داون Down's syndrome المحتملة؛ (Say بدء المعالجة قبل الولادة عن طريق إعطاء عامل علاجي إلى الأم أو بعد الولادة بفترة قصيرة.
Treatment Regimes أنظمة المعالجة v Y. في التطبيقات الوقائية؛ تعطى تراكيب صيدلية أو أدوية لمريض عرضة Mal بمرض الزهيمر أو لخطر الإصابة به بطريقة أخرى بمقدار كاف لإزالة أو تقليل خطر الإصابة أو حدتهاء أو لتأخير بداية المرض Lay في ذلك الأعراض الكيميائية الإحيائية و/أو النسيجية و/أو السلوكية للمرض ومضاعفات المرض والأنماط الظاهرية المرضية الوسيطية Yo التي تظهر أثناء تطور المرض. وفي التطبيقات العلاجية؛ تعطى تراكيب أو أدوية إلى ov مريض يشتبه بإصابته بالمرض أو يتوقع أو يعاني من مرض من هذا القبيل مسبقا بمقدار الإحيائية و/أو النسيجية Abas) أعراض المرض (J) على Bia كاف لعلاج؛ أو كبح و/أو السلوكية)؛ بما في ذلك مضاعفاته والأنماط الظاهرية المرضية الوسيطية أثتاء تطور المرض. وفي بعض الطرق؛ يقلل أو يزيل عامل الضعف الإدراكي العضلي
myocognitive impairment ° في مرضى لم تتطور فيهم خصائص مرض الزهيمر. ويعرف
مقدار كاف لتحقيق المعالجة العلاجية بأنه جرعة فعّالة Ladle أو صيدلياً. وفي كل من النظم الوقائية والعلاجية؛ تعطى Sale عوامل بجرعات متعددة إلى أن يحصل على استجابة مناعية كافية. 5 dale تراقب الاستجابة المناعية وتعطى جرعات بصورة متكررة في حالة بدء الاضمحلال التدريجي للاستجابة المناعية.
١ وتتفاوت الجرعات الفعّالة من التراكيب Gy للاختراع الراهن المعطاة لمعالجة الحالات الموصوفة أعلاه اعتماداً على عدة عوامل مختلفة عديدة بما في ذلك طرق الإعطاء والموقع المستهدف والحالة الفسيولوجية للمريض وسواء كان المريض إنسان أو حيوان والأدوية الأخرى المعطاة وسواء كانت المعالجة وقائية أو علاجية. وعادة يكون المريض إنسان oS يمكن معالجة ثدييات غير بشرية بما في ذلك ثدييات محولة جينياً. وينبغي معايرة
جرعات المعالجة لاستمثال السلامة والفعالية. ويعتمد مقدار المولد المناعي فيما إذا أعطيست كذلك المادة المساعدة adjuvant مع الحاجة إلى جرعات أعلى في غياب المادة المساعدة. ويتفاوت مقدار المولد المناعي المعطى أحياناً من ١ إلى ميكروغرام لكل مريض وعادةٌ يتراوح من © إلى ٠ ميكروغرام لكل حقنة تعطى للإنسان . وتستخدم أحياناً جرعة أكبر
تتراوح من ١ إلى ¥ مغم لكل حقنة. ويستخدم عادةً حوالي دا 7٠١ .© أو ٠٠١
Sl لكل حقنة بشرية. ويعتمد مقدار المولد المناعي كذلك على النسبة Ags ey. المناعة إلى كتلة مولد المناعة ككل. Alga لمغير الخاصية المولد للمناعة ضمن 5 ratio ميكرومول من مغير الخاصية المولد TTY إلى ' ٠١ يستخدم مقدار يتراوح من dale للمناعة لكل ميكروغرام من مولد المناعة. ويمكن أن يختلف توقيت الحقن بشكل كبير من مرة واحدة في اليوم إلى مرة واحدة في السنة إلى مرة واحدة في العقد. وفي أي يوم تعطى
Yo فيه جرعة من مولد المناعة؛ تكون الجرعة أعلى من ١ ميكروغرام/مريض وعادةً oA المساعدة كنلك؛ sal all ميكروغرام/إمريض إذا أعطيت ٠١ أعلى من
Ala ميكروغرام/مريض في ٠٠١ أعلى من Bale ميكروغرام/مريض ٠١ وتزيد عن ٠ عدم وجود المادة المساعدة. ويتكون نظام نموذجي من تمنيع ثم حقن معزز لفترة تبلغ شهر. ويستلزم VY أسابيع. ويتكون نظام آخر من تمنيع ثم حقن معزز بعد شهر وشهرين و نظام آخر حقن كل شهرين مدى الحياة. وبدلا من ذلك. قد تعطى الحقن المعززة على أساس ٠ غير منتظم كما حدد عن طريق مراقبة الاستجابة المناعية. ٠٠٠001 وبالنسبة للتمنيع السلبي باستخدام جسم مضاد تتراوح الجرعة من حوالي إلى © ملغم/كغم من وزن الجسم العائل. فلي سبيل ١.0٠ ملغم/كغم؛ عادةٌ من ٠٠١ إلى ملغم/كغم من وزن الجسم. ٠١ ملغم/كغم من وزن الجسم أو ١ المثال قد تبلغ الجرعة ويتطلب نظام معالجة نموذجي إعطاء جرعة مرة واحدة كل أسبوعين أو مرة واحدة شهرياً ١ أو مرة واحدة كل ؟ إلى 1 شهور. وفي بعض الطرق؛ يعطى جسيمين مضادين وحيدي النسيلة أو أكثر بتخصص ارتباط مختلف في نفس الوقت حيث في هذه الحالة تقع جرعة sac معطاة من كل جسم مضاد ضمن الأمداء المشار إليها. وعادةً يعطى الجسم المضاد مرات. وقد تكون الفترات بين الجرعات المفردة أسبوعياً؛ شهرياً أو سنوياً. وقد تكون في المريض. AR الفترات منتظمة كما حددت بقياس مستويات الدم للجسم المضاد ل Vo وفي بعض الطرق؛ تضبط الجبرعة لتحقيق تركيز بلازما في الجسم المضاد ميكروغرام/مل وفي بعض الطرق ٠ إلى ١ من zs plasma antibody concentration إلى 080 ميكروغرام/مل. وبدلا من ذلك؛ قد يعطى الجسم المضاد في Yo يتراوح من صورة تركيب ثابت الإطلاق حيث في هذه الحالة يتطلب الإعطاء على فترات قصيرة. ويتفاوت مقدار الجرعة وتكرار إعطائها على عمر النصف للجسم المضاد في المريض. Ye تظهر الأجسام المضادة البشرية أطول عمر نصف ثم تأتي الأجسام المضادة المعدلة (La gac chimeric antibodies والأجسام المضادة الخيمرية humanized antibodies في صورة بشرية وقد يتفاوت إعطاء الجرعة وتكرارها nonhuman antibodies والأجسام المضادة غير البشرية منخفضة de ja اعتماداً على كون المعالجة وقائية أو علاجية. ففي التطبيقات الوقائية؛ تعطى تسببا على فترات غير منتظمة نسبيا لفترة زمنية طويلة. ويستمر بعض المرضى في تلقي +
المعالجة بقية حياتهم. وفي التطبيقات العلاجية؛ تتطلب في بعض الأحيان جرعة مرتفعة نسبياً على فترات قصيرة نسبياً حتى ينخفض أو ينتهي تطور المرض ويفضل حتى يظهر المرضى
Gas جزئياً أو LK لأعراض المرض. ومن ثم قد يعطى المريض نظام وقائياً. وتتراوح جرعات أحماض نووية تحمل شيفرة مولدات مناعة من حوالي ٠ o نانوغرام إلى ١ غم أو ٠٠١ نانوغرام إلى ٠٠١ ملغم أو ١ ميكروغرام إلى ٠١ مغم أو من ٠0 إلى Yeo ميكروغرام من DNA لكل مريض. وتتراوح جرعات نواقل فيروسية
معدية من ٠١ إلى ٠٠١ جسيم فيروسي/جرعة أو أكثر.
ويمكن إعطاء عوامل لحث استجابة مناعية عن طريق لا معوي parenteral موضعياء في cyl عن طريق الفم؛ تحت الجلدء في الشريان cintraarterial داخل الجمجمة ٠١ 1 داخل البريتون» داخل الأنف؛ أو في العضل للمعالجة الوقائية و/أو العلاجية. وتتمثل الطريقة النموذجية بشكل أكبر لإعطاء عامل مولد للمناعة في إعطاء تحت الجلد بالرغم من أن الطرق الأخرى قد تكون فعّالة بشكل مماثل. وتتمثل الطريقة التالية الأكثر Lalas في الحقن في العضل. ويجرى هذا النوع من الحقن على الأغلب في عضلات الذراع arm muscles أو القدم leg وفي بعض الطرق؛ تحقن العوامل مباشرة في نسيج معين
ب تراكمت فيه الرواسب؛ على سبيل المثال» حقن داخل الجمجمة. ويفضل الحقن في العضل على التسريب في الوريد لإعطاء الجسم المضاد. وفي بعض الطرق؛ تحقن أجسام مضادة علاجية معينة مباشرة في الجمجمة. وفي بعض الطرق؛ تعطى أجسام مضادة في صورة تركيب ثابت الإطلاق sustained release composition أو أداة مثل أداة ميديباد Medipad™ (علامة تجارية).
Y. ويجوز إعطاء عوامل Gy للاختراع في توليفة مع عوامل أخرى تكون Ald جزئياً على الأقل في معالجة مرض نشواني الأصل .amyloidogenic disease وفي حالة مرض الزهيمر ومتلازمة داون» حيث تظهر رواسب نشوائية في الدماغ؛ يمكن إعطاء عوامل الاختراع كذلك بالاقتران مع عوامل أخرى تزيد مرور عوامل الاختراع عبر الحاجز الدموي الدماغي -blood-brain barrier
وتعطى عوامل مولدة للمناعة وفقاً للاختراع؛ مثل الببتيدات peptides في بعض
الأحيان في توليفة مع مادة مساعدة. ويمكن استخدام تشكيلة من مواد مساعدة في توليفة مع
ببتيد (AB Jie peptide لإظهار استجابة مناعية. وتزيد المواد المساعدة المفضلة استجابة
داخلية ضد مولد مناعة دون التسبب في تغيرات بنيوية في مولد المناعة تؤثر على الشسكل
° النوعي للاستجابة. وتشتمل المواد المساعدة المفضلة على هيدروكسيد الألومنيوم
(7) الشسب ودهمن aluminum phosphate وفوسفات الألومنيوم aluminum hydroxide
أحادي الفوسفوريل يحتوي على شق أسيل منزوع الأكسجين عند الموقع ”
De-O-acylated monophosphoryl lipid A 3 متوفر بالعلامة التجارية MPL™ (انظر ما جاء في
براءة الاختراع البريطائية رقم 77071١ مزود من شركةريبي إميونوكيم
٠١ ريسيرتش إنك (RIBI ImmunoChem Research Inc. ٠ هاملتون «Hamilton مونتانا
«Montana و هي OY جزء من كوريكسا (Corixa . والاسم التجاري ستميولين كيو
إس- Stimulon™ YY QS-21 هو اسم لغليكوسيد ثلاثي تربين triterpene glycoside أو
صابونين saponin معزول من قشرة شجرة كولاجا-صابوناريا مولينا
Quillaja Saponaria Molina tree موجودة في أمريكا الجنوبية South America (انظطر ما
ela Vo عن كنسيل Kensil ومعاوتنيه في مجلة Vaccine Design في مقالة بعنوان
The Subunit and Adjuvant Approach (إصدار بويل Powell ونيومان (Newman بلينوم بريس
«Plenum Press نيويورك (New York 490 ٠١م)؛ وبراءة الاختراع الأمريكية رقم
,e0V,0¢, ( ‘ (أكويلا بيوفارماس_يتيكالز 108025 «Aquila فرامينام
«Framingham ماساشوستس) . وتكون المواد المساعدة الأخرى عبارة عن مستحلبات زيت في
«(peanut oil السوداني Js all أو زيت squalene (مثل سكوالين oil in water emulsions ماء T.
وبشكل اختياري في توليفة مع منبهات مناعة؛ مثل دهن )1( أحادي الفوسفوريل
Lai) monophosphoryl lipid A ما جاء عن ستوتي Stoute ومعاونيه في مجلة
Engl J Med 37 المجلد FY ص 91-45 (9917٠م)). ويعتبر CpG مادة مساعدة
أخرى (نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 18/40109). Yay من ذلك؛ يمكن اقتران AB
sala Yo مساعدة. غير أن اقتران من هذا القبيل لا ينبغي أن يغير بنية AB للتأثير على طبيعة vaa
الاستجابة المناعية كذلك. ويمكن إعطاء مادة مساعدة في صورة مكون من تركيب علادجي مع عامل فعّال أو يمكن إعطاؤها في صورة منفصلة قبل أو في وقت متزامن أو بعد إعطاء
العامل العلاجي. وتعتبر أملاح الألومنيوم aluminum salts (الشب (alum تنوعاً مفضل من المواد ° المساعدة؛ (Fle هيدروكسيد الالومنيوم caluminum hydroxide فوسفات الألومنيوم caluminum phosphate كبريتات الألومنيوم aluminum sulfate ويمكن استخدام مواد مساعدة من هذا القبيل مع أو بدون عوامل تنبيه مناعية متخصصة مثل MPL أو 3-DMP أو 0521 أو أحماض أمينية amino acids بوليمرية أو مونمرية مثل حمض متعدد الغلوتاميك polyglutamic acid أو متعدد لايزين ع50زالزاهم. وتعتبر تراكيب مستحلبة من زيت في ماء Leg ١ آخرآ من المواد المساعدة. ويمكن استخدام مواد مساعدة من هذا القبيل مع أو بدون عوامل تتبيه مناعية متخصصة أخرى مثل ببتيدات موراميل muramyl peptides (على سبيل المثال؛ 77-أسيتيل موراميل-1-ثريونيل- (7- أيسزو غلوتامين N-acetylmuramyl-L-threonyl- «D-isoglutamine (thre-MDP) 77-أسيتيل-تورمور اميل-.1-الانيل-7-أيزو غلوتامين «N-acetyl-normuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine (nor-MDP) 7-أسيتيل موراميل-.1- ألانيل-- ae ©-أيزوغلوتامينيل-1-ألانين-7-(١*-؟؟ ثنائي بالميتويل--غليسيرو -7-هيدروكسي فوسفوريلوكسي)-إثيل أمين N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-2-(1'- J—o WN «2'dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyphosphoryloxy)-ethylamine (MTP-PE) غلوكسامينيل-7<-أسيتيل ميوراميل-1-1/-1-أيسزوغلو -1-و1/-شائفشسي بالميتوكسي بروبيل أميد N-acetylglucsaminyl-N-acetylmuramyl-L-Al-D-isoglu-L- Ala-dipalmitoxy propylamide (DTP-DPP) Y. فيراميد theramide™ (علامة تجارية) « أو مكونات أخرى لجدار خلية بكتيرية. وتشتمل مستحلبات من زيت في ماء )1( 14559 (انظر نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 4477 40/1)؛ يحتوي على 720 سكوالين squalene 70,6 توين tween 80 ٠ 0,+/ سبان عدم 85 span (يحتوي بشكل اختياري على مقادير مختلفة من (MTP-PE مشكلة في جسيمات دون مجهرية submicron particles باستخدام مميع مجهري Jie microfluidizer Yo المميع المجهري من نموذج 7 (مزود من شركة ميكروفلويدكس vaa
Aide cmicrofluidizer نيوتن Newton مساشوستس)؛ (ب) SAF يحتوي على 7٠١ سكوالين ١.4 squalene توين Av 80 هع و £0 بوليمر L121 معاق ببلورنيك pluronic-blocked polymer L121 و cthr-MDP إما يميع مجهرياً إلى مستحلب دون مجهري أو يدوم لإنتاج مستحلب ذي حجم جسيمي أكبرء و (ج) نظام مادة مساعدة ° من ريبي (علامة تجارية) adjuvant system (RAS) “17طن؛ (مزود من شركة ريبيء ميونوكيم (Ribi ImmunoChem مدينة هاميلتون «Hamilton مونتانا) يحتوي على 7/7 سكوالين «squalene 7 توين tween 80 Av ومكون Jaa خلية بكتيرية واحد أو أكثر من مجموعة تشتمل على دهن )7( أحادي الفوسفوريل «monophosphoryllipid A (MPL) تر يهالوز ثنائي ميكو لات «trehalose dimycolate (TDM) هيكل جدار خلية cell wall skeleton ¢(CWS) Ve ويفضل CWS +MPL (بالاسم التجاري ديتوكس Detox™ (علامة تجارية)). وتعتبر مادة صابونين saponin المساعدة نوعاً مفضلا THAT من المواد المساعدة» مثل ستيميولون “107 (علامة تجارية) ( 021»؛ من شركة أكويلا ¢Aquil مدينة فرامينام «Framingham ولاية مساشوستس) أو جسيمات متولدة منه مثل 1500148 (متراكبات تتبيه مناعة (immunostimulating complexes و ISCOMATRIX وتشتمل مواد مساعدة أخرى على مادة Vo فرويند المساعدة الكاملة Freund's Adjuvant (CFA) ومادة فرويند المساعدة غير الكاملة Incomplete Freund's Adjuvant (IFA) وتشمل مواد مساعدة أخرى مركبات سيتوكين cytokines مثل مركبات انترلوكين ¢1L-2 ¢1L-1) interleukins و 11-12)» عامل تتبيه مستعمرة ملتهمة كبيرة macrophage colony stimulating factor (M-CSF) وعامل نخر
ورمي -tumor necrosis factor (TNF) Y. ويمكن إعطاء مادة مساعدة مع مولد مناعة في صورة تركيب منفردء أو يمكن إعطاؤه قبل أو Lidl Jia مع أو بعد إعطاء مولد المناعة. ويمكن تعبئة وتزويد مولد المناعة والمادة المساعدة في نفس القارورة vial أو (Say تعبئتهما في قوارير منفصلة ومزجهما قبل الاستخدام. ويعبأ مولد المناعة والمادة المساعدة Bale مع وضع بطاقة تشير إلى التطبيق العلاجي المرغوب. وفي Alla تعبئة مولد المناعة والمادة المساعدة بشكل متفصسل؛ تشمل Yo التعبئة Sale تعليمات للمزج قبل الاستخدام. ويعتمد اختيار مادة مساعدة و/أو مادة حاملة على
vas
21> ثبات التركيبة المولدة للمناعة التي تحتوي على المادة المساعدة؛ وطريقة الإعطاء ومواعيد إعطاء الجرعات وفعالية المادة المساعدة لأنواع ينبغي تلقيحهاء وفي البشر؛ تعتبر مادة مساعدة مقبولة صيدلياً واحدة من تلك المواد الموافق عليها أو المستحسن إعطاؤها للبشر عن طريق أجسام منظمة وثيقة الصلة. فعلى سبيل المثال؛ لا تعتبر مادة فرويند المساعدة الكاملة Complete Freund's Adjuvant ° ملائمة للإعطاء البشري ٠. ويفضل استخدام الشب صستاة» MPL و .QS-21 وبشكل اختياري؛ تستخدم مادتين مساعدتين مختلفتين أو أكثر في نفس الوقت. وتشتمل التوليفات المفضلة على شب alum مع .4101 شب alum مع 05-21 MPL مع QS-21 وشب alum و 05-21 و MPL معاً. ويمكن كذلك استخدام مادة فرويند المساعدة غير الكاملة (انظر ما ela عن شانج Chang ومعاونيه في مجلة <ddvanced Drug Delivery Reviews ٠١ المجلد FY ص (AV VIA) ١87-177 وبشكل اختياري. في توليفة مع أي من أملاح شب calum 90521؛ و MPL وكل التوليفات متنها. وغالباً تعطى العوامل Gay للاختراع في صورة تراكيب صيدلية تشتمل على عامل علاجي (Jad أي مجموعة متنوعة من مكونات مقبولة صيدلياً أخرى. انظر ما جاء في Remington's Pharmaceutical Science (الطبعة ١٠9 إصدار شركة ماك ببلشنج كومباني <Mack Publishing Company Vo مدينة استون Easton ولاية بنسلفانيا (Pennsylvania 17850 ١م . ويعتمد الشكل المفضل على طريقة الإعطاء المرغوبة والتطبيق العلاجي. ويمكن أن يشتمل التركيب كذلك؛ بالاعتماد على التركيب المرغوب؛ على مواد حاملة أو مواد مخففة مقبولة صيدلياً وغير سامة؛ والتي عرّف بأنها مواد ناقلة تستخدم Bale لتشسكيل تراكيب صيدلية تعطى للحيوان أو الإنسان. وتختار المادة المخففة بحيث لا تؤثر على الفعالية الإحيائية 2 للتوليفة. وتشتمل أمثلة مواد مخففة من هذا القبيل ماء مقطر distilled water ومحلول ملحي منظم بفوسفات فسيولوجي ¢phosphate-buffered saline محاليل رينجنر «Ringer's solutions ومحلول دكستروز cdextrose solution ومحلول هانك Hank's solution وبالإضافة إلى ذلكء يمكن أن يشتمل التركيب أو المستحضر الصيدلي كذلك على مواد حاملة أو مواد مساعدة أو مثبتات غير سامة وغير علاجية ولا تولد مناعة أخرى وما أشبه.
ويمكن كذلك أن تشتمل التراكيب الصيدلية على جزينات ضخمة يجرى لتتأيض بشكل day 2 مثل البروتينات ومتعددات السكريد polysaccharides مثل خيتوسان «chitosan وأحماض متعدد اللاكتيك ¢polylactic acids أحماض متعدد الغليكوليك polyglycolic acids وبوليمرات إسهامية Je) سفاروز يحتوي على مجموعة وظيفية من للاتكس latex functionalized sepharose (TM) ° (علامة تجارية) « أجاروز cagarose سليلوز cellulose وما أشبه)؛ أحماض أمينية amino acids بوليمرية. بوليمرات إسهامية من أحماض أمينية amino acid copolymers ومركبات دهنية متكتلة lipid aggregates (مثل قطرات الزيت oil droplets أو الجسيمات الشحمية (liposomes . وبالإضافة إلى ذلك؛ قد تعمل هذه المواد حاملة بصفتها عوامل تنبيه مناعية immunostimulating agents (أي مواد مساعدة). Ve وللإعطاء عن طريق غير معوي؛ يمكن إعطاء العوامل Wy الاختراع في صورة جرعات قابلة للحقن من محلول أو معلق من مادة في مخفف مقبول فسيولوجيا مع مادة حاملة صيدلية يمكن أن يكون سائل معقم sterile liquid مثل زيوت مائية cwater oils أو محلول ملحي أو غليسيرول «glycerol أو إيثانول ethanol وبالإضافة إلى ذلك؛ يمكن أن تتواجد مواد مساعدة؛ مثل عوامل ترطيب cwetting agents استحلاب cemulsifying مواد خافضة للتوتر surfactants hdl yo مواد منظمة da jal الحموضة pH buffering substances وما أشبه في التراكيب. ومن المكونات الأخرى للتراكيب الصيدلية مكونات من مصدر بترولي (petroleum حيواني؛ أو نباتي أو من مصدر تخليقي؛ على سبيل المثال؛ زيت الفول السوداني؛ وزيت فول الصويا soybean oil وزيت معدني .mineral oil وعمومآء تعتبر مركبات الغليكول glycols مثل بروبيلين غليكول propylene glycol أو متعدد إثيلين غليكول polyethylene glycol Ye مواد حاملة سائلة مفضلة؛ وبصفة خاصة للمحاليل القابلة للحقن. ويمكن إعطاء الأجسام المضادة في صورة حقن مختزن أو مستحضر غرز قد يشكل بكيفية تتيح إطلاق ثابت للمقوم الفعال active ingredient ويشتمل تركيب نموذجي على جسم مضاد وحيد النسيلة بتركيز © ملغم/مل؛ مشكل في محلول مائي منظم لدرجة الحموضة يتكون من [-هستيدين L-histidine تركيزه ٠ © ملي HI» و ©1180 تركيزه ٠5١ ملي جزيئي» ضبطت vo درجة حموضته إلى ١ باستخدام HCL
+ Bole ما تحضر تراكيب في صورة مواد ALB للحقن cnjectables إما في صورة محاليل solutions أو معلقات suspensions سائلة؛ ويمكن كذلك تحضير أشكال صلبة ملائمة لتذاب, أو تعلق في مواد ناقلة سائلة liquid vehicles قبل الحقن. ويمكن كذلك استحلاب أو تغليف المستحضر في جسيمات شحمية liposomes أو جسيمات دقيقة micro particles مثل ° متعدد لاكتيد ,polylactide متعدد جليكوليد ,polyglycolide أو بوليمر إسهامي copolymer للحصول على تأثير معزز للمادة المساعدة, كما وصف أعلاه (انظر ما جاء عن لانجر :© , في مجلة (Science المجلد ١749 ص ١5977 (19950م)؛ وما ela عن هائز Hanes في مجلة Advanced Drug Delivery Reviews المجلد «YA ص ٠ م١ 14 V) ١١-947 ويمكن إعطاء العوامل Gy للاختراع الراهن في صورة حقنة مختزنة depot injection أو مستحضر ٠١ غرز implant preparation حيث يمكن تشكيله بكيفية تتيح إطلاق ثابت أو نابض للمقوم الفغال. وتشتمل تراكيب إضافية ملائمة لطرق إعطاء أخرى على تراكيب تعطى عن طريق الفم oral الأنف intranasal والرئة pulmonary تحاميل suppositories وتراكيب تعطى خلال الأدمة. Vo وبالنسبة للتحاميل؛ تشتمل المواد الرابطة binders والحاملة carriers على سبيل المثالء على مركبات غليكول متعدد الألكيلين polyalkylene glycols أو مركبات ثلاني غفليسيريد Striglycerides ويمكن تشكيل تحاميل من هذا القبيل من مخاليط تحتوي على المقوم الفغال بنسبة تتراوح من 70,0 إلى Ye ويفضل من 7١ إلى 77 وتشتمل التراكيب المعطاة عن طريق all على سواغات 5م»»»؛ مثل أصناف صيدلية من مانيتول mannitol لاكتوز lactose Ye نشا starch وستيارات المغنيسيوم magnesium stearate سكرين الصوديوم ,sodium saccharine سليلوز cellulose وكربونات المغنيسيوم .magnesium carbonate وتكون هذه التراكيب في صورة محاليل, معلقات, أقراص tablets أو حبوب pills أو كبسولات capsules تراكيب أو مساحيق powders ثابتة الإطلاق وتحتوي على المقوم الفغّال بتسبة تتراوح من 7٠١ إلى 795, ويفضل من 775 إلى SY vaa
ويمكن أن يؤدي الاستخدام الموضعي إلى التوزيع عبر الأدمة transdermal أو داخل الأدمة intradermal ويمكن تسهيل الإعطاء الموضعي عن طريق الإعطاء الإسهامي للعامل مع توكسين كوليرا cholera toxin أو مشتقات أزيلت سميتها detoxified derivatives أو وحدات جزئية منه أو مركبات توكسين بكتيرية bacterial toxins أخرى مشابهة (انطر ما ela عن ° غلين Glenn ومعاونيه في مجلة Narre المجلد YAY ص A) +8١ 14 ١م . ويمكن تحقيق إعطاء إسهامي باستخدام المكونات في صورة خليط أو في صورة جزيئات مرتبطة linked molecules يحصل عليها عن طريق الربط الكيميائي التقاطعي chemical crosslinking أو التعبير عنها في صورة بروتين التحام -fusion protein Ya من ذلك, يمكن توزيع الجرعة عبر الأدمة باستخدام ممر skin path sata أو Ve باستخدام جسيمات انتقالية transferosomes (انظر ما جاء عن بول Paul ومعاونيه في مجلة J Immunol ليل Yo Madd ص 7574-787١ )° 4 ١م ؛ وما جاء عن سفك Ceve ومعاونيه في Biophys.
Acta daa المجلد VTA ص A) 7١-7٠١٠ 99 م)). .vI طرق التشخيص Methods of Diagnosis يقدم الاختراع Gok للكشف عن استجابة مناعية immune response ضد ببتيد AB AB peptide في مريض يعاني من مرض الزهيمر أو عرضة للإصابة به. وتعتبر الطرق مفيدة بصفة خاصة لمراقبة سير المعالجة المعطاة للمريض. ويمكن استخدام الطرق لمراقبة كل من المعالجة الدوائية therapeutic treatment في مرضى تظهر عليهم الأعراض symptomatic patients والمعالجة الوقائية prophylactic treatment في مرضى لا تظهر عليهم الأعراض asymptomatic patients وتعتبر الطرق مفيدة لمراقبة كل من التمتنيع الفعال active immunization Y. (على سبيل المثال جسم مضاد antibody ينتج استجابة لإعطاء المولد المناعي (immunogen والتمنيع السلبي sic) passive immunization سبيل المثال قياس مستوى الجسم المضاد المعطى). LY التمنيع الفعال تستلزم بعض الطرق تحديد قيمة أساسية لاستجابة مناعية في مريض قبل إعطائه ve جرعة من عامل, ومقارنة هذه القيمة مع قيمة أخرى للاستجابة المناعية بعد المعالجة. وتشير vy
زيادة كبيرة (أي أعلى من الحد النموذجي للخطأ التجريبي في قياسات متكررة لنفس العينة؛ يعبر عنها في صورة انحراف معياري واحد one standard deviation عن متوسط mean هذه القياسات) في قيمة الاستجابة المناعية إلى نتيجة معالجة إيجابية (أي أن إعطاء العامل قد تحقق أو ازدادت الاستجابة المناعية). وإذا لم تتغير Aad الاستجابة المناعية بشكل كبير؛ أو تناقصت؛ يشار إلى نتيجة معالجة سلبية. وعموماً؛ يتوقع أن يبدي المرضى الخاضعون إلى سير معالجة ابتدائي باستخدام عامل مولد للمناعة immunogenic agent زيادة في الاستجابة المناعية بجرعات متعاقبة, حيث تصل فعلياً إلى قيمة مستقرة. وعادةٌ؛ يستمر إعطاء عامل أثناء زيادة الاستجابة المناعية. ويشير الوصول إلى القيمة المستقرة إلى أنه بالإمكان إيقاف
المعالجة أو تقليل الجرعة أو تواتر المعالجة.
١ وفي طرق Al 5( تقاس dad ضابطة control value (أي؛ متوسط وانحراف معياري) لاستجابة مناعية لمجموعة ضابطة من السكان. وعادة لا يتلقى الأفراد في المجموعة الضابطة من السكان Base alle ومن ثم تقارن قيم الاستجابة المناعية المقاسة في مريض بعد أن أعطي عامل علاجي مع القيمة الضابطة. وتشير الزيادة الكبيرة مقارنة مع القيمة الضابطة (على سبيل المثال؛ أعلى من انحراف معياري واحد عن المتوسط) إلى نتيجة
> معالجة إيجابية. ويشير الافتقار إلى زيادة كبيرة أو نقصان كبير إلى نتيجة معالجة سلبية. وعادةٌ يستمر إعطاء العامل أثناء زيادة الاستجابة المناعية بالنسبة إلى القيمة الضابطة. وكما ذكر مسبقآء يشير الوصول إلى القيمة المستقرة بالنسبة إلى القيم الضابطة أنه بالإمكان إيقاف المعالجة أو تخفيض الجرعة أو تواتر المعالجة.
وفي طرق أخرى؛ تحدد قيمة ضابطة لاستجابة مناعية Je) سبيل المثال؛ متوسط
9 وانحرف معياري) من مجموعة ضابطة من السكان لأفراد خضعوا للعلاج بعامل علاجي ووصلت استجاباتهم المناعية إلى قيمة مستقرة استجابة للمعالجة. وتقارن قيم مقاسة للاستجابة المناعية في مريض مع القيمة الضابطة. وإذا لم يكن المستوى المقاس في مريض مختلف بدرجةٍ كبيرة Jo) سبيل المثال؛ أكثر من انحراف معياري واحد) عن القيمة الضابطة, فإنه يمكن إيقاف المعالجة. وإذا كان المستوى في المريض أقل من القيمة الضابطة بدرجة كبيرة,
TA
فإن ذلك يبرر استمرار إعطاء العامل. وإذا استمر المستوى في المريض أقل من القيمة باستخدام مادة مساعدة مختلفة. (Jd الضابطة؛ فإنه يوصى بتغيير نظام المعالجة على سبيل وفي طرق أخرى, تراقب استجابة المريض المناعية الذي لا يتلقى المعالجة حالياً لكنه خضع لسير معالجة مسبقة لتحديد فيما إذا كان هنالك حاجة للعودة إلى المعالجة. ويمكن مقارنة قيمة الاستجابة المناعية المقاسة في المريض مع قيمة الاستجابة المناعية التي حصل ٠ عليها مسبقآً في مريض بعد فترة معالجة مسبقة. ويشير الانخفاض الكبير بالنسبة إلى أعلى من الحد النموذجي للخطأً في القياسات المتكررة لنفس القيمة) (sl) القياسات السابقة من ذلك, يمكن مقارنة القيمة المقاسة في مريض مع Yay إلى إمكانية إعادة تلك المعالجة. قيمة ضابطة (المتوسط بالإضافة إلى الانحراف المعياري) محددة في عدد من مرضى بعد من ذلك, يمكن مقارنة القيمة المقاسة في مريض مع قيمة Yau التعرض لفترة معالجة معينة. ١ أو في عدد gana) تظهر عليهم أعراض aly Wildy ضابطة في عدد من مرضى معالجين في خصائص المرض. وفي كل هذه الحالات؛ lad من مرضى معالجين دوائياً وأظهروا يشير الانخفاض الكبير بالنسبة إلى المستويات الضابطة (أي يزيد عن انحراف معياري) إلى ضرورة إعادة المعالجة في المريض. blood المأخوذة للتحليل عبارة عن دم tissue sample وعادةٌ تكون العينة النسيجية Vo من cerebrospinal fluid أو مائع مخي شوكي mucous مخاط serum مصل splasma بادزما AB المريض. وتحلل العينة للاستدلال على الاستجابة المناعية لأي شكل من أشكال ببتيد على سبيل المثال؛ casas ويمكن تحديد الاستجابة المناعية من .2 sale 5 AB peptide وتوصف طرق AB peptide AB أجسام مضادة أو خلايا 7 ترتبط بشكل متخصص بببتيد ووصفت طرق A Balle ja للكشف عن أجسام مضادة متخصصة ب 8م في ELISA 7 تقدم (انظر التعريفات). وفي بعض الطرق, تحدد Leg المتفاعلة T للكشف عن خلايا أعلاه. IIT كما وصف في الجزء clearing assay الاستجابة المناعية باستخدام معايرة تنقية وفي هذه الطرق, تلامس العينة النسيجية المأخوذة من مريض خاضع للاختبار مع وخلايا بلعمية (PDAPP (على سبيل المثال, من فأر amyloid deposits رواسب نشوانية للراسب النشواني. A SOU ومن ثم تراقب التنقية Fe تحمل مستقبلات phagocytic cells Yo vaq
ويشير وجود ومدى استجابة التنقية إلى وجود ومستوى الأجسام المضادة الفعالة ضد 8 نقي في العينة النسيجية للمريض الخاضع للاختبار. ". التمنيع السلبي Passive Immunization a gac تكون إجراءات مراقبة التمنيع السلبي Blas لمراقبة التمتيع Jud م الموصوفة أعلاه. بيد أن مخطط الجسم المضاد بعد التمنيع السلبي يبدي Bale ذروة مباشرة في تركيز الجسم المضاد يتبعها انحلال أسي .exponential decay وبدون إعطاء جرعة إضافية؛ يقترب الانحلال من مستويات المعالجة المسبقة ضمن فترة تتراوح من أيام إلى أشهر اعتماداآً على العمر النصفي للجسم المضاد المعطى. فعلى سبيل (JB يكون عمر Call لبعض الأجسام المضادة البشرية في حدود Yo يوماً.
٠١ وفي بعض الطرق؛ يجرى قياس أساسي لجسم مضاد ل AB في المريض قبل الإعطاء؛ ويجرى قياس ثان بعد ذلك مباشرةٌ لتحديد المستوى الذروي للجسم المضاد peak antibody level وتجرى قياسات أخرىء واحدة أو أكثر على فترات لمراقبة انحلال مستويات الجسم المضاد. وإذا انخفض مستوى الجسم المضاد إلى قيمة أساسية أو إلى نسبة مئوية محددة le لقيمة أساسية تقل عن الذروة (مثل Jon 776 أو ١٠7)»؛ تعطى جرعة
ve إضافية من الجسم المضاد. وفي بعض الطرق؛ تقارن الذروة أو المستويات المقاسة اللاحقة الأقل خلفية مع المستويات المرجعية المحددة Gane لوضع نظام معالجة وقائية أو علاجية مفيدة في مرضى آخرين. وإذا كان مستوى الجسم المضاد المقاس أقل بدرجةٍ كبيرة من المستوى المرجعي (على سبيل المثال؛ أقل من المتوسط ناقص انحراف معياري واحد للقيمة المرجعية في عدد من المرضى المستفيدين من المعالجة) يوصى بإعطاء جرعة إضافية من
ى الجسم المضاد. ¥. طقوم تشخيصية Diagnostic Kits
يزود الاختراع كذلك طقومآً تشخيصية لإجراء الطرق التشخيصية الموصوفة أعلاه. fale ما تحتوي تلك الطقوم على عامل يرتبط بشكل متخصص بأجسام مضادة ل AB ويحتوي الطقم كذلك على وسم Label وللكشف عن الأجسام المضادة ل AB يكون الوسم
‘labelled anti-idiotypic antibodies عادةٌ في صورة أجسام مضادة موسومة للأتماط الذاتية vo
وللكشف عن الأجسام المضادة؛ قد يزود العامل المرتبط Base بطور صلب, مثل جدران wells صحن عياري دقيق dish ©0110001. وعادة تحتوي الطقوم كذلك على وسم يزود تعليمات عن استخدام الطقم . وقد يشتمل الوسم كذلك على مخطط أو مستويات أخرى متعلقة بنظام مناظر للوسم المقاس باستخدام مستويات الأجسام المضادة ل AB ويشير المصطلح وسم إلى أي مادة
م مكتوبة أو مسجلة مرتبطة ب أو بطريقة أخرى مصاحبة لطقم عند أي زمن أثناء تصنيعهاء نقلهاء بيعها أو استخدامها. فعلى سبيل المثال؛ يشتمل المصطلح وسم على وريقات وكراسات إعلان «advertising leaflets and brochures مواد تغليف packaging materials تعليمات instructions كاسيتات سمعية أو مرئية caudio or video cassettes أقراص كمبيوتر computer discs بالإضافة إلى كتابة مطبوعة مباشرةً على الطقوم.
١ ويزود الاختراع كذلك طقومآ تشخيصية لإجراء تصوير 102808 في الجسم الحي. وتحتوي fale تلك الطقوم على جسم مضاد مرتبط بمغير خاصية epitope ل ,AB ويفضل ضمن الشقات من ١ إلى .٠١ ويفضل أن يوسم الجسم المضاد أو أن توجد مادة مفاعلة لوسم ثانوي في الطقم . ويفضل أن يوسم الطقم بتعليمات لإجراء معايرة تصوير في الجسم الحي. 1. تصوير في الجسم الحي
ب يزود الاختراع Bk لتصوير رواسب نشوائية في الجسم الحي في مريض. وتعتبر طرق من هذا القبيل مفيدة لتشخيص أو تعزيز تشخيص مرض الزهيمر, أو العرضة للإصابة به. فعلى سبيل (Jl يمكن تطبيق الطرق على مريض يظهر أعراض العته dementia وإذا احتوى المريض على رواسب نشوانية غير سوية؛ فإنه من المحتمل أن يعاني المريض من مرض الزهيمر. ويمكن كذلك تطبيق الطرق على مرضى لا تظهر عليهم أعراض المرض.
٠ - ويشير وجود رواسب نشوانية غير سوية إلى عرضة الإصابة بأعراض المرض في المستقبل. وتعتبر الطرق كذلك مفيدة لمراقبة تطور المرض و/أو الاستجابة إليه لمعالجة مرضى قد تم تشخيص مرض الزهيمر فيهم مسبقاً.
وتجرى الطرق بإعطاء مادة مفاعلة؛ Jie جسم مضادء يرتبط ب AB للمريض؛ ومن
ثم الكشف عن Jalal بعد ارتباطه. وتتمثل الأجسام المضادة المفضلة في الأجسام المضادة
ve المرتبطة برواسب 8ه في مريض بدون الارتباط بمتعدد ببتيد AB polypeptide APP كامل
الطول. وتعتبر أجسام مضادة مرتبطة بمغير خاصية ل AB ضمن أحماض أمينية amino acids من ١ إلى ٠١ مفضلة بصفة خاصة. وفي طرق أخرى, يرتبط الجسم المضاد بمغير خاصية ضمن أحماض أمينية amino acids من 7 إلى ٠١ ل AB وعادةٌ ترتبط أجسام مضادة من هذا القبيل بدون أن تحث استجابة تنقية جوهرية. وفي طرق cs Jal يرتبط الجسم 0 المضاد بمغير خاصية ضمن الأحماض الأمينية acids دنه من ١ إلى ال AB وترتبط الأجسام المضادة هذه fale وتحث استجابة تنقية ل 8م. بيد أنه يمكن تفادي استجابة التنقية باستخدام أجزاء من الجسم المضاد تفتقر إلى منطقة ثابتة كاملة Jie full length constant region J skal مناطق Fab وفي بعض الطرق؛ قد يعمل نفس الجسم المضاد بصفته مادة مفاعلة معالجة ومادة مفاعلة تشخيصية. وعموماً, لا تبدي أجسام مضادة ٠ مرتبطة بمغيرات خاصية عند الطرف الكربوني للشق ٠١ من AB إشارة قوية مقارنة بالإشارة التي تبديها أجسام مضادة مرتبطة بمغيرات خاصية ضمن الشقات من ١ إلى ١٠؛ نظرآً لأن مغيرات الخاصية عند الطرف الكربوني لا يمكن الوصول إليها بشكل محتمل في رواسب
نشوانية. Ga yy لذلك؛ تعتبر أجسام مضادة من هذا القبيل مفضلة بدرجةٍ أقل. : ويمكن إعطاء مواد مفاعلة تشخيصية عن طريق حقن في الوريد intravenous injection Vo إلى جسم المريض, أو مباشرة في الدماغ عن طريق حقن Jala الجمجمة intracranial injection أو بعمل فتحة من خلال الجمجمة. وينبغي أن تكون جرعة المادة المفاعلة ضمن نفس الأمداء كما هو الحال في طرق المعالجة. fale توسم المادة المفاعلة؛ مع أنه في بعض الطرقء لا توسم المادة المفاعلة الأولية التي لها ألفة AB affinity ويستخدم عامل وسم ثانوي لربط المادة المفاعلة الأولية. ويعتمد اختيار الوسم على طريقة الكشف. فعلى سبيل JA يكون 7 وسم مفلور fluorescent label ملائماً للكشف الضوئي optical detection ويعتبر استخدام واسمات بارا مغناطيسية Le Bl paramagnetic labels للكشف بالتصوير الإشعاعي المقطعي tomographic detection بدون تدخل جراحي . ويمكن كذلك الكشف عن واسمات مشعة
.SPECT أو PET باستخدام طريقة radioactive labels ويجرى التشخيص بمقارنة عدد, حجم و/أو شدة بقعة موسومة بالمقارنة مع قيم أساسية مناظرة. ويمكن أن تمثل القيم الأساسية المستويات المتوسطة في عدد من أفراد غير مصابين vo
بالمرض. ويمكن كذلك أن تمثل القيم الأساسية مستويات سابقة محددة في نفس المريض. فعلى سبيل المثال؛ يمكن تحديد القيم الأساسية في مريض قبل بدء المعالجة؛ ثم تقارن القيم المقاسة مع القيم الأساسية. ويشير الانخفاض في القيم بالنسبة إلى الإشارات الأساسية إلى استجابة إيجابية للمعالجة. ٠ الأمثقلة 1. الفعالية الوقائية ل AP ضد AD تصف هذه الأمثلة إعطاء ببتيد 8842 AB42 peptide إلى J محولة جيتنيا transgenic mice تعبر بشكل مفرط عن APP بطفرة عند الموقع 7٠١7 لمم مط) تجعلها ميالة لإظهار أمراض عصبية تشبه مرض الز هيمر Alzheimer's-like neuropathology بشكلٍ Ve تمهيدي. ووصف إنتاج هذه الفثران وخصائصها (فئران ela Lad (PDAPP عن جيمز Games ومعاونيه في مجلة Nature في المرجع سابق الذكر. وبدأت هذه الحيوانات؛ في صورة زيجوت مغاير cheterozygote بترسيب AB عند الأشهر الستة الأولى من العمر. وأظهرت هذه of yl مستويات لترسيب AB تكافئ تلك المستويات التي تلاحظ في مرض الزهيمر عندما بلغت من العمر خمسة عشر شهراً. وحقنت فئران PDAPP ب AB, متكتل أو بمحلول ملحي Vo منظم بالفوسفات -phosphate buffered saline وقد اختير AB, متكتل بسبب مقدرته على حث أجسام مضادة ضد مغيرات خواص متعددة ل AB أ. الطرق ١ مصدر الفئران قسمت فئثران إناث مغايرة النسيلة PDAPP عددها Ye بشكل عشوائي إلى المجموعات التالية: ٠١ فئران حقنت ب ,8م متكتل (مات أحدهم عند النقل)؛ © فثران حقنت بمحلول منظم بالفوسفات (035)/مادة مساعدة أو PBS و ٠١ فئران ضابطة لم تحقن. وحقنت خمسة فئران بببتيدات peptides مشتقة من سياق بروتيني نشواني مصلي (sap) sequence of serum amyloid protein . ". تحضير مولدات مناعة vy ملغم من 8842 (من شركة يو إس ببتيدز إنك Youll تحضير ,8م متكتل: ١ في 4 مل من الماء وأكمل الحجم إلى (lot 142-12 ١7-4 لوت كيه -؟ «US Peptides Inc dll أضعاف. ودوّم هذا المحلول وحضن طوال ٠١ تركيزه PBS ملم من ٠١,١ مل بإضافة غير مستخدم في صورة AB م, حيث يكتل الببتيد عند هذه الظروف. وخزن أي TY عند 7م إلى وقت الحقن التالي. ١<- عند dry lyophilized powder م مسحوق مجفد جاف تحضير محاليل الحقن ." ميكروغرام من 8842 متكتل في 785 لكل فأر بنسبة ٠٠١ لكل محلول حقن؛ استحلب إلى أن بلغ (CFA) Complete Freund's adjuvant باستخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة ١ من مولد المناعة Jal ميكرولتر للتمنيع الأول, ثم زيد نفس for الحجم النهائي للمستحلب خلال أسبوعين. (IFA) Incomplete Freund's adjuvant في مادة فرويند المساعدة غير الكاملة Ve على فترات شهرية. وأجريت التمنيعات اللاحقة على TFA وأعطيت جرعتان إضافيتان في وأعطيت محاليل الحقن داخل البريتون PBS ميكرولتر من ٠٠0٠0 فترات شهرية في . (ip.) intraperitoneally باتباع نفس الطريقة وحقنت الفئران بمزيج من PBS وحضرت محاليل حقن من بمقدار بلغ 50860 ميكرولتر لكل فأر, أو 90860 ميكرولتر من ٠:١ مساعدة بنسبة 30LPBS . ١ بإتباع نفس الطريقة باستخدام جرعة SAP حضرت محاليل الحقن من (Bully. li JS) PBS ميكروغرام لكل محلول حقن. ٠٠١ بلغت تحضير Titration of Mouse Bleeds ؛. معايرة فار ينزف
Immunohistochemistry وكيمياء الأنسجة المناعية Tissue Preparation أنسجة توصف الطرق المذكورة أعلاه فيما يلي في الطرق والمواد العامة. Ye ب. النتائج أو محلول ملحي SAP peptides SAP متكتل, ببتيدات AB42 ب PDAPP حقنت فئران كضوابط موجبة غير PDAPP وتركت كذلك مجموعة من فئران phosphate منظم بالفوسفات 4842 وروقبت عيارات الفثران بالنسبة إلى مقدار .010[60160, positive controls محقونة المتكتل كل شهر من الزيادة الرابعة إلى أن أصبح عمر الفثران سنة واحدة. وذبحت الفثران ve yas
ل عندما أصبح عمرها ١“ شهراً. وعند كل النقاط الزمنية المختبرة؛ شكلت ثمانية فثران من الفئران التسع المحقونة ب 8842 متكتل عيار جسم مضاد عال, يبقى بتركيز عال, خلال سلسلة من عمليات الحقن (عيارات تزيد عن .)٠٠٠٠١/١ وللفأر التاسع عيار منخفض, ولكن يمكن قياسه حيث بلغ ٠٠١ تقريباً (انظر الشكل ١؛ الجدول .)١ وللفثران المحقونة م ب SAPP عيارات تتراوح من ٠٠٠١:١ إلى Fave) لمولد المناعة هذا مع تجاوز فأر واحد فقط عيار من .٠٠٠٠٠٠:١ وعويرت الفئران المعالجة ب PBS ضد 8842م متكتل عند الشهر السادس, العاشر والثاني عشر. وعند التخفيف بنسبة ٠٠١/١ لم تتجاوز الفئثران المعالجة ب PBS عندما عويرت ضد 8842 متكتل إلا ؛ أضعاف النقطة المرجعية عند نقطة بيانات واحدة, ومن ناحية أخرى كانت أقل بأربع أضعاف النقطة المرجعية لكل النقاط الزمنية (انظر الجدول .)١ وكانت الاستجابة المتخصصة ب SAP مهملة عند النقاط الزمنية هذه لكل العيارات التي تقل عن ا
ولم تكشف سبعة فئران من الفئران التسع في المجموعة المعالجة ب 881-42 متكتل عن وجود مادة نشوانية في دماغها. وعلى النقيض من ذلك؛ تحتوي أنسجة الدماغ من فثران Vo في المجموعات المعالجة ب SAP و PBS على عدة رواسب نشوانية في حصان البحر hippocampus بالإضافة إلى القشرات الأمامية والمطوقة. وكان أسلوب الترسيب مماثلا لأسلوب الترسيب في الضوابط غير المعالجة, مع وجود مميز لمناطق تحتية حساسة vulnerable subregions مثل الطبقة الجزيئية الخارجية outer molecular layer لتلفيفة مسننة حصينية -hippocampal dentate gyrus ويمتلك أحد الفثران من المجموعة المحقونة © ب 8142م حملا Gil pd منخفضاً بدرجة كبيرة, محصور بحصان البحر. وميزت لويحة
معزولة plaque 15012160 في فأر معالج ب AB1-42 آخر . وأثبتت التحاليل الصورية الكمية quantitative image analyses للحمل التشواني في حصان البحر انخفاضاً مفاجئاً حدث في الحيوانات المعالجة ب (AN1792) 8842 (انظر الشكل "). وكانت القيم المتوسطة للحمل النشواني للمجموعة PBS (77,77), وللمجموعة الضابطة ve غير المعالجة )7¥,70( أكبر بشكل ملحوظ من تلك القيم للحيوانات الممئئعة ب AN1792 vo وعلى النقيض من ذلك؛ كانت القيمة المتوسطة للمجموعة (v0 e0 =p 7 (صفر وقد احتوى نسيج دماغي من الفئران .70,VE (SAPP) SAP peptides SAP بببتيدات dated أحادي 3D6 عديدة ظهرت مع جسم مضاد AB الضابطة غير المعالجة على رواسب نشوانية في حصان البحر, (mAb) AB-specific monoclonal antibody النسيلة متخصسص ب 8م
Jai Jaa gl وقد .retrosplenial cortex بالإضافة إلى وجودها في قشرة عضلة الطحال الخلفية وبالإضافة .)١ (انظر الشكل PBS أو SAPP لترسب نشواني كذلك في فئران ممنعة ب Blea إلى ذلك؛ لوحظ في المجموعات الثلاثة الأخيرة هذه وجود مميز لمناطق تحتية حساسة من الطبقة الجزيئية الخارجية للتلفيفة المسننة الحصينية في كل Jie (AD بشكل تقليدي في § Ladd من المجموعات الثلاثة هذه. خالية كذلك من اللويحات عصبية AB وكانت الأدمغة التي لا تحتوي على رواسب ١ البشري APP مع الجسم المضاد PDAPP (J yi التي تشاهد عادة في neuritic plaques الالتهاب وغير PBS و SAP وتحتوي كل الأدمغة من المجموعات المتبقية (الفثران المحقونة ب .5 غير PDAPP المحقونة) على لويحات عصبية الالتهاب عديدة مماثلة لتلك الموجودة في الفثران
JAN1792 المعالجة. ووجد عدد قليل من لويحات عصبية الالتهاب في فأر واحد معالج ب في فأر ثان معالج dystrophic neurites ب ووجدت مجموعة منفردة من محاور عصبية سغلية ب 8201792. وتوضح التحاليل الصورية لحصان البحرء المبين في الشكل © الإزالة الفعلية بالمقارنة مع (7 jbo = (المتوسط AN1792 للمحاور العصبية السغلية في فئران معالجة ب (+0000 =p (المتوسط 7ت PBS حيوانات تلقت في الالتهاب astrocytosis characteristic ولم توجد كذلك خاصية تكثر الخلايا النجمية في أدمغة المجموعة المحقونة plaque-associated inflammation المقثترن بلويحة +. في المجموعات الأخرى على خلايا نجمية تحتوي A ب 8142م. واحتوت الأدمغة من وصبغت AR المقترن بلويحات gliosis بوفرة وعلى شكل عناقيد مماثلة للدباق GFAP على بشكل مضاد باستخدام ثيوفلافين إس GFAP مجموعة جزئية من الشرائح المتفاعلة مع
GFAP وتقترن الخلايا النجمية التي تحتوي على LAB لتحديد موضع رواسب Thioflavin § وغير المعالجة. ولم يوجد اقتران من هذا PBS و SAP بلويحات 8ه في الضوابط المحقونة ب ve yA القبيل في الفئران المعالجة ب 881-42 والتي تخلو من اللويحات, في حين ميز أدتى دباق مقترن باللويحات في أحد الفئران المعالجة ب 151792م. وأثبتت التحاليل الصورية, المبينة في الشكل ؛ لقشرة عضلة الطحال الخلفية أن للفثران المعالجة 7٠,597+ بقيمة متوسطة بلغت Tous الاتخفاض في تكثر الخلايا النجمية كان
SAP peptides SAP متوسطة تزيد عن 77 لمجموعات ممنعة بببتيدات af ب 2201792 مقابل © (+r VY =p) أو غير معالجة PBS أو ب تشير إلى PBS ولم توجد دلالة من مجموعة جزئية لفثران محقونة ب 881-42 و من الصنف 17 مقرونة بلويحات في الفئران المحقونة ب MHC تفاعلية مناعية لجزيئات
Ap متعلقة ب inflammatory response 81-2م, وهذا يتوافق مع الافتقار إلى استجابة التهابية متخصص بجسم مضاد وحيد النسيلة mAb وتفاعلت أقسام من أدمغة الفئران كذلك مع ٠١
MAC-1 ويعتبر .cell surface protein وهو بروتين على سطح الخلايا , MAC-1 متخصص ب مغاير (SLE ذات مستقبلات التصاق خلوي توجد في صورة مركب Alle عضو (CDI11b) ويتواجد متراكب من 0116© و 0018 على خلايا أحادية النواة .CDIS مع heterodimer وخلايا قاتلة neutrophils وخلايا متعادلة بيضاء macrophages وخلايا ملتهمة كبيرة monocytes ومن المحتمل أن تكون (Simard وسيمارد Mak (انظر ما جاء عن ماك natural killer طبيعية 1s يعتمد microglia الخلايا المتفاعلة مع 1080-1 الكامنة في الدماغ عبارة عن غراء عصبي دقيق
MAC-1 مع 1-©10/8. وكان وسم Lelia على شكل نمط ظاهري متماثئل في الأقسام المتفاعلة مقارنة بالمجموعة الضابطة AN1792 المقترن باللويحات أقل من أدمغة فئران معالجة ب وكانت هذه النتيجة متوافقة مع الافتقار إلى استجابة التهابية مستحثة ب PBS المحقونة ب
AB Y. ج. النتيجة reactive neuronal changes والتغيرات العصبية المتفاعلة AB ض يشير الافتقار إلى لويحات في أدمغة الفئران المحقونة ب 881-42 إلى أنه لم يحدث gliotic changes والتغيرات الغرائية
Sia في أدمغتها, ولم تظهر العواقب المرضية, Tan ترسب نشواني أو حدث ترسب بشكل قليل المعالجبة PDAPP ومرض التهاب الأعصاب. وأظهرت الفئران gliosis مرض الدباق Yo
لالا ب 8142م افتقاراً مماثلاً للمرض بصفة أساسية كفئران ضابطة غير محولة جينياً. sls على ذلك يعتبر الحقن ب 881-42 فغَّالاً بدرجة كبيرة في منع ترسب أو تنقية AB البشري من أنسجة الدماغ, وإزالة التغيرات الخلوية العصبية والتنكسية الالتهابية اللاحقة. وهكذاء يكون لإعطاء ببتيد AB peptide AB فائدة وقائية وعلاجية في AD aie ٠ 17. دراسة الاستجابة للجرعة متعت مجموعات من فثئران وبستر سويسرية Swiss Webster إناث, عمرها خمسة أسابيع =N) +7 لكل مجموعة) بإعطاء Fe يل ار لل لاا رار ره أو CY ميكروغرام من AB مشكل في IFA/CFA داخل البريتون. وأعطيت ثلاث جرعات على فترة أسبوعين واتبعت بجرعة رابعة بعد Hed واحد. واستحلبت الجرعة الأولى باستخدام CFA ا واستحلبت الجرعات المتبقية باستخدام TFA ونزفت الحيوانات لمدة ؛-7 أيام بعد كل تمنيع بدأ بعد الجرعة الثانية لقياس عيارات الجسم المضاد. ونزفت الحيوانات من مجموعة جزئية من المجموعات الثلاثة؛ التي منعت باستخدام ,١١ ,أو 060 ميكروغرام من المولد المضاد, بشكلٍ إضافي على فترات شهرية تقريباً لمدة أربعة أشهر بعد التمنيع الرابع لمراقبة انخفاض استجابة الجسم المضاد عبر مدى من جرعات من تراكيب مولدة للمناعة. وتلقت هذه ١ الحيوانات تمنيعاً خامساً نهائياً عند الشهر السابع بعد بدء الدراسة. وذبحت بعد أسبوع لقياس استجابات الأجسام المضادة ل AN1792 ولإجراء تحاليل سمومية -toxicological analyses ولوحظ تضاؤل الاستجابة للجرعة من 060 إلى VV ميكروغرام بدون استجابة عند أقل جرعتين. وبلغ متوسط عيارات الأجسام المضادة نحو ٠٠٠١١:١ بعد * جرعات ونحو ٠٠٠١ بعد ؛ جرعات من Age مضاد بمقدار تراوح من ١١ إلى Yer ميكروغرام Y. (انظر الشكل #). وارتفعت عيارات الأجسام المضادة بشكل مفاجئ لكل المجموعات ولكن حدثت زيادة للمجموعة التي تلقت أقل جرعة بعد التمنيع الثالث تراوحت من * إلى Yo ضعف. ومن ثم أمكن تحديد الاستجابات المخفضة للجسم المضاد حتى للحيوانات التي تلقت جرعة بلغت ١,4 ميكروغرام. وللمجموعتين اللتين تلقت كل منهما جرعة بلغت VV LY ve ميكروغرام عيارات متساوية بقيمة 01475 بلغت نحو ٠٠٠١ وتجمعت أعلى أربع جرعات مع
YA
قيمة ل GMTs بلغت نحو Youur باستثناء المجموعة التي تلقت جرعة بلغت ؟؟ ميكروغرام مع قيمة أقل ل GMT بلغت Fees وبعد التمنيع الرابع؛ كانت زيادة العيار معتدلة لمعظم المجموعات. وتراوحت الاستجابة الواضحة للجرعة في المجموعات التي تلقت جرعات منخفضة من المولد المضاد تراوحت من ١,٠4 ميكروغرام إلى ١١ ميكروغرام من م جسم مضاد غير قابل للكشف لحيوانات تلقت جرعة بلغت ١,14 ميكروغرام إلى قيمة ل ٠٠٠١ Cals GMT لحيوانات تلقت de ja بلغت ١١ ميكروغرام. وتجمعت العيارات للمجموعات التي تلقت أعلى أربع جرعات تراوحت من ١١ إلى Yoo ميكروغرام مع بعضها البعض مرةً أخرى. وهكذا؛ اعتمد عيار الجسم المضاد على جرعة المولد المضاد عبر مدى واسع من ١.4 إلى 7080 ميكروغرام بعد إجراء تمنيعين. وفي التمنيع الثالث؛ كانت العيارات ٠ الأعلى أربع جرعات متساوية وبقيت عند مستوى مستقر بعد تمنيع إضافي. وبعد شهر واحد من التمنيع الرابع؛ كانت العيارات أعلى بضعفين إلى ثلاثة أضعاف في المجموعة الممنعة التي تلقت جرعة بلغت ٠٠١ ميكروغرام من تلك المقاسة من دم سحب لمدة خمسة أيام بعد andl (انظر الشكل L(V وتبين من هذه الملاحظة أن استجابة الجسم المضاد المنبهة للذاكرة القصوى peak anamnestic antibody response حدثت بعد أكثر من © أيام بعد التمنيع. ولوحظت زيادة معتدلة بشكل أكبر (Zo cial) عند الفترة الزمنية هذه في المجموعة التي تلقت جرعة بلغت YY ميكروغرام. وفي المجموعة التي تلقت جرعة بلغت Yoo ميكروغرام لمدة شهرين بعد الجرعة الأخيرة؛ انخفضت قيم 014175 بدرجة كبيرة بنسبة بلغت نحو 770. وبعد شهر aT كان الانخفاض أقل حدة فقد كان بنسبة بلغت 7459 (للمجموعة التي تلقت جرعة بلغت ٠٠١ ميكروغرام) وبنسبة بلغت نحو 7٠4 للمجموعة التي © تلقت جرعة بلغت TY و١١ ميكروغرام. وهكذا تبين بأن معدل الاتخفاض في عيارات الأجسام المضادة الدائرة بعد وقف التمنيع كان ثنائي الطور biphasic مع انخفاض حاد في الشهر الأول بعد الاستجابة القصوى ثم انخفاض بمعدل أكثر اعتدالاً. وكانت عيارات الأجسام المضادة وحركيات الاستجابة لفئران وبستر السويسرية Swiss Webster هذه مماثلة لتلك العيارات والحركيات للفئران الصغيرة المحولة جينياً PDAPP AR va
مغايرة الزيجوت والممنعة بأسلوب مماثل. وعادة Bla الجرعات الفعالة في حث استجابة
مناعية في بشر الجرعات الفعالة في الفثران.
1. فحص الفعالية العلاجية ضد AD الناتج
أجريت هذه المعايرة لفحص عوامل مولدة للمناعة immunogenic agents لقياس فعاليتها
So وقف أو عكس خواص الأمراض العصبية ل AD في حيوانات مسنة. وبدأت التمنيحات
باستخدام AB طويل يحتوي على (AN1792) amino acid Gis Laas £Y عند نقطة زمنية
عندما توجد لويحات نشوانية في أدمغة الفثران PDAPP مسبقا.
وخلال الفترة الزمنية المستخدمة في هذه الدراسة؛ تظهر فئران PDAPP غير معالجة
عددآً من التغيرات الانحلالية العصبية neurodegenerative changes تشابه تلك الموجودة في AD ١ (انظر ما جاء عن جيمز Games ومعاونيه؛ في المرجع سابق الذكرء؛ وما ela عن
4 المجالد «Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA ومعاوتيه في مجلة Johnson-Wood جونسن-وود
ص 1000-1000 (1947)). ويقترن ترسب 88 على لويحات نشوانية باستجابة خلوية
عصبية انتكاسية degenerative neuronal response تتكون من محاور عصبية منحرفة
aberrant axonal وعناصر متفرعة dendritic elements تسمى محاور عصبية سغلية. وتسمى vo الرواسب النشوانية المحيطة بالمحاور العصبية السغلية وتحتوي عليها لويحات عصبية
الالتهاب. وفي كل من الفتئران المصابة ب AD و PDAPP تكون المحاور العصبية السغلية
التي لها بنية كروية مميزة distinctive globular structure متفاعلة Lelia مع لوح من أجسام
مضادة يميز APP ومكونات هيكلية خلوية cytoskeletal وتظهر تغيرات انتكاسية خلوية تحتية
.ultrastructural level معقدة عند المستوى البنيوي الفوقي subcellular degenerative changes وتأخذ هذه الخصائص بعين الاعتبار قياسات تشكل لويحة عصبية الالتهاب في أدمغة فثران x.
PDAPP وثيقة الصلة بالمرض وانتقائية ويمكن إعادتها. ويمكن رؤية المكون الخلوي العصبي
السغلي للويحات عصبية الالتهاب في PDAPP بسهولة باستخدام جسم مضاد متخصسص ب
APP بشري (جسم مضاد وحيد النسيلة 885), ويمكن قياسه Ase عن طريق التحليل
الصوري بمساعدة الكمبيوتر. وبناءً على ذلك؛ بالإضافة إلى قياس تأثيرات AN1792 على ve تشكل لويحات نشوانية؛ روقبت تأثيرات هذه المعالجة على نمو سغل عصبي الالتهاب.
A
وتعتبر الخلايا النجمية والغراء العصبي الدقيق خلايا غير عصبية تستجيب ل وتعكس وغراء عصبي دقيق GFAP درجة الإصابة العصبية. وعادة تلاحظ خلايا نجمية تحتوي على على sly ويزيد نشاطها بازدياد شدة المرض. (AD (AT من الصنف MHC يحتوي على ذلك روقبت كذلك زيادة تكثر الخلايا النجمية المتفاعلة وتشكل الدباق الدقيق في فئران معالجة م0 ب .AN1792 أ. المواد والطرق قسم 48 فأرآ من فئران PDAPP إناث مغايرة الزيجوت, عمرها تراوح من ١١ إلى شهرا dual a عليها من شارلز ريفر Charles River بشكل عشوائي إلى مجموعتين: ؛؟ فأر ينبغي تمنيعها ب ٠٠١ ميكروغرام من AN1792 و4 7 فأر ينبغي تمنيعها ب (PBS ٠ ا واقترن كل منها بمادة فرويند المساعدة Freund's adjuvant وقسمت المجموعات الممنعة ب 2 و PBS مرة أخرى عندما أصبح عمرها ١١ شهرآً تقريباً. وعندما أصبح عمرها ١١ Ted قتل نصف كل من مجموعتي الحيوانات المعالجة ب AN1792 و2385 +=n) )5 4 على الترتيب) Lesa; SN Gy ji واستمر الباقي من المجموعتين بتلقي جرعات المناعة إلى أن أصبح عمرها VA شهراً (ه<ة و VY على الترتيب). ومات A حيوانات (خمسة ممنتعة ب ٠ 2211792 وثلاثة ممنعة (PBS أثناء الدراسة. وبالإضافة إلى الحيوانات الممنعة؛ فقد استخدمت PDAPP (Ji غير معالجة أعمارها سنة واحدة )٠١<:( و ١١ شهراً (د<١٠) و )٠١<#( Tog VA للمقارنة في المعايرات الإشرابية المناعية المرتبطة بإنزيم (ELISAs) enzyme-linked immunosorbent assays لقياس مستويات AB و APP في الدماغ؛ وأدمجت الحيوانات التي عمرها سنة واحدة كذلك في التحاليل الكيميائية النسيجية المناعية. Y. والطريقة المستخدمة هي كما في المثال ١ ما لم يذكر خلاف ذلك. واستخدمت ببتيدات يو أس لوت US Peptides Tot 12 VY وببتيدات من كاليفورنيا لوت ME0339 California Peptides lot ME0339 ل AN1792 لتحضير المولد المضاد لست تمنيعات تعطى قبل أن تبلغ of Jill عمر V0 شهراً. واستخدمت ببتيدات من كاليفورنيا لوتز 1480339 و 1180439 California Peptides lots ME0339 and ME0439 للتمنيعات الإضافية COA) التي تعطى للفئران vo بين عمر ١١ و VA شهراً.
لم ولإجراء التمنيع؛ استحلب ٠٠١ ميكروغرام من 4311792 في ٠٠١ ميكرولتر من أو PBS لوحده بنسبة ٠:١ (حجم:حجم) باستخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة (CFA) أو مادة فرويند المساعدة غير الكاملة (IFA) أو 285 في حجم نهائي بلغ fer ميكرولتر. وأعطيت جرعة التمنيع الأولى مع CFA بصفتها مادة مساعدة؛ وأعطيت الجرعات الأربعة م اللاحقة مع FA وأعطيت الجرعات الأربعة النهائية مع PBS وحده بدون إضافة مادة مساعدة. وأعطيت كل جرعات التمنيع التسعة خلال فترة زمنية بلغت ١7 أشهر بحيث أعطيت الجرعات الثلاثة الأولى لمدة أسبوعين ثم أعطيت الحقن المتبقية لمدة أربعة أسابيع. وتلقت المجموعة المعالجة لمدة ؛ أشهر, والتي قتلت عندما أصبح عمرها 10 شهرا Taga) SN التمنيعات الست الأولى فقط. ٠١ ب. النتائج ١ تأثيرات المعالجة ب AN1792 على الحمل النشواني تبين نتائج المعالجة ب AN1792 على الحمل النشواني القشري المحدد بالتحليل الصوري الكمي في الشكل 7. وكانت القيمة المتوسطة للحمل النشواني القشري 700748 في مجموعة من PDAPP (J i عمرها Ted VY غير معالجة؛ وهي قيمة تمثل حمل اللويحة في ve فئران عند بدء الدراسة. وعند VA شهراً؛ زاد الحمل النشواني بمقدار ١١ ضعف إلى 4,87 / في فئران معالجة ب PBS في حين كان للفئران المعالجة ب AN1792 حملا نشوانياً منخفضاً بدرجةٍ كبيرة بلغ 70,01 فقط, وعلى الخصوص أقل من ذلك للفئران غير المعالجة التي بلغ عمرها VY شهراً ومجموعتي الفئران المعالجتين ب PBS التي بلغت أعمارها ١# و VA شهراً. وقد انخفض الحمل النشواني بدرجة كبيرة في حيوانات تلقت AN1792 عند V0 شهرا ٠» (انخفاض بنسبة 17 =p 07..) و ١8 شهرا (انخفاض بنسبة تزيد عن 754 محا ...). sale يبدأ الترسب i sal القشفري في فئشران PDAPP في القشرات الأمامية وقشرات عضلة الطحال الخلفية (RSC) ويمتد في الاتجاه البطني الجانبي Jad ventral-lateral direction القشرات الصدغية temporal cortices والقشرات
AY
Jala الأنف (EC) entorhinal cortices وقد وجد مقدار قليل من المادة النشوانية في EC أو لم يوجد أي مقدار منها في JAN التي عمرها cf gd ١١ وهو العمر التقريبي الذي أعطي عنده 2 أولا. وبعد ؛ أشهر من المعالجة ب CAN1792 انخفض الترسب النشواني في RSC بدرجة كبيرة, وأزيل وجود الراسب النشواني المتزايد في EC بشكل IS عن طريق المعالجة م ب LANIT792 وبينت الملاحظة الأخيرة أن 2241792 يوقف تزايد المادة النشوائية الذي يغزو RSC القشرات الصدغية والبطنية؛ بالإضافة إلى وقف أو يمكن عكس الترسب في sale وتوضح التأثيرات العميقة للمعالجة ب AN1792 على تشكل حمل نشواني قشري في PDAPP J il بشكل إضافي عن طريق المجموعة التي عمرها VA شهراً, والتي عولجت لمدة ١ أشهر. وكان هنالك عدم وجود كلي تقريباً للمادة النشوانية القشرية في الفأر المعالج ١ ب ,AN1792 مع افتقار كلي للويحات المنتشرة, بالإضافة إلى اتخفاض في الرواسب المدمجة. ". تغيرات خلوية وشكلية مقترنة بالمعالجبة ب AN1792 AN1792 Treatment-associated Cellular and Morphological changes وجد عدد من الخلايا التي تحتوي على AB-positive cells AB في مناطق الدماغ Jag ale وبشكل amyloid deposits dul gli التي تحتوي عادة على رواسب brain regions Jaa ALI extracellular cortical amyloid plaques وجدت لويحات نشوانية قشرية خارج الخلية Vo وتبين أن معظم التفاعلية المناعية LAN1792 أو لم توجد نهائياً في عدة أدمغة لحيوانات تلقت أو أجسام lobular soma Araya موجودة في خلايا ذات أجسام AB ل immunoreactivity متكتلة clumped soma كبيرة. وفيما يتعلق بالنمط الظاهري؛ كانت هذه الخلايا متشابهة مع الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة microglia المنشطة أو الخلايا أحادية النواة monocytes ligands ربيطات ¥ 143 antibodies المنشطة. واعتبرت فعالة مناعياً مع أجسام مضادة Y. من MHC عنها خلايا أحادية النواة وخلايا غرائية عصبية دقيقة منشطة (جزيثات ws ‘blood vessels الصنف 7 و 00115) وكانت عادة مقترنة بجدار أو تجويف أوعية الدم
MHC وأجسام مضادة متخصصة ب AB وأظهرت مقارنة أجزاء مجاورة تقريباً موسومة ب أنه قد ميزت أنماط مماثلة لهذه الخلايا عن طريق MHC II-specific antibodies Y من الصنف أن الخلايا التي AN1792 صنفي الأجسام المضادة. وأظهر فحص مفصل لأدمغة معالجة ب vo va4q
AY
محصورة بجوار المادة النشضوائية MHC H-positive cells ¥ من الصنف MHC تحتوي على المحددة المتبقية في هذه الحيوانات. وفي الظروف الثابتة المستخدمة؛ لم تكن الخلايا فعالة «CD45RA) B أر خلايا (CD3e «CD3) T مع أجسام مضادة تميز ربيطات خلايا Lelia (6045)؛ ولكنها leukocyte common antigen مشترك لخلايا بيضاء alias Al ga أو (CD4SRB يتفاعل بشكل (CD43) leukosialin كانت فعالة مع جسم مضاد يميز سيالين الخلايا البيضاء ٠ تبادلي مع خلايا أحادية النواة. ولم توجد خلايا من هذا القبيل في أي من الفئران المعالجة ب .PBS بشكل ثابت في heavy amyloid deposition ترسب نشواني شديد PDAPP فئران ii hippocampal للتلفيفة المسننة الحصينية outer molecular layer الطبقة الجزيئية الخارجية وهي «perforant pathway مميزآ في المسار المتقوب Und ويشكل الترسب dentate gyrus ٠١ ويمائل المظهر المميز AD على لويحات نشوانية في sole تحتوي subregion منطقة تحتية غير PDAPP في فثران (ue ذلك المظهر المميز PBS لهذه الرواسب في الفئران المعالجة ب diffuse and compacted المعالجة. ويتكون الترسب النشواني من لويحات منتشسرة ومدمجة هذا النمط على Jae وعلى النقيض من ذلك؛ continuous band في شريط متواصل 65 ولم يعد الترسب النشواني LANTT92 نحو شديد جدآً في عدد من أدمغة فئران معالجة ب ١ كلياً. banded pattern الحصيني يحتوي على مادة نشوانية منتشرة؛ ومزق النمط الشريطي غير اعتيادية متفاعلة مع أجسام punctate structures من ذلك؛ وجد عدد من بنيات مثقبة Yau, amyloid- وقد تبين أن العديد منها عبارة عن خلايا تحتوي على مادة نشوانية AB مضادة ل .containing cells من الصنف ¥ بجوار المادة MHC ولوحظت عادةٌ الخلايا التي تحتوي على جزيئات 7 وكان نمط اقتران الخلايا التي LANT792 خارج الخلايا في الحيوانات المعالجة ب dl جدآ في أدمغة عديدة مأخوذة من فئران معالجة ب Slee مع المادة النشوانية AB تحتوي على هذه بالقرب من المادة الشوانية monocytic cells وقيد توزيع الخلايا أحادية النواة .2 وكشفت AR في مناطق دماغية أخرى خالية من لويحات LIS المترسبة وكان غير موجود
AL
من MHC عن أجزاء موسومة ب confocal microscopy الدراسة المجهرية متحدة البؤر اللويحة موجودة ضمن العديد من الخلايا أحادية النواة. Bale أن AB الصنف ؟ وب لأجزاء موسومة ب quantitative image analysis وكشف التحليل الصوري الكمي
RSC عن الميل نحو تفاعلية مناعية متزايدة في ١ من الصنف MAC من الصنف ؟ و MHC التي PBS م وحصان البحر للفئران المعالجة ب 8211792 بالمقارنة مع المجموعة المعالجة ب نالت أهمية بقياس تفاعلية 1482-1 في حصان البحر. للمادة active, cell-mediated clearance وتشير هذه النتائج إلى تنقية فعالة تسببها الخلايا plaque-bearing brain الموجودة في المناطق الدماغية التي تحتوي على لويحات Af sil regions
ELISA المقادير المحددة عن طريق AR على مستويات AN1792 تأثيرات .” ١ 3.AN1792 Effects on APB Levels: ELISA Determinations
Cortical Levels المستويات القشرية 0 الكلي AB لمقدار median level غير معالجة؛ بلغ المستوى المتوسط PDAPP في فئران وقد زاد إلى cnanogram/gram (ng/g) ناتوغرام/غرام ٠6٠١ شهراً ١١ في القشرة عند عمر
VA وعند عمر .)١ شهراً (انظر الجدول ١١ نانوغرام/غرام عندما أصبح عمرها ٠ أضعاف أثناء الفترة ٠١ شهراً؛ بلغت القيمة 77068 نانوغرام/غرام» وهي زيادة بما يزيد عن على مقدار كلي من 8م بلغ PBS الزمنية لسير التجربة. واحتوت الحيوانات المعالجة ب نانوغرام/غرام عندما أصبح ١90٠06 شهرآً وقد زاد إلى ١١ نانوغرام/غرام عند عمر 5 على AN1792 شهرا. وعلى النقيض من ذلك؛ فقد احتوت الحيوانات المعالجة ب VA عمرها نانوغرام/غرام) بالمقارنة مع ٠٠٠١( شهراً ١5 أقل بنسبة 7481 عند عمر AB من JS مقدار x. ولوحظ انخفاض كبير (مج01٠500٠) في .PBS-immunized group PBS المجموعة الممنعة ب عندما قورنت المجموعات Ted VA jee نانوغرام/غرام) عند ©٠٠١( مقدار م.م الكلي هذا وجود؛ بطريقة أخرى؛ JT ay oY (انظر الجدول PBS 5 AN1792 المعالجة ب وحصل على نتائج مماثلة عندما قورنت المستويات القشرية ل (AB في AVY انخفاض بنسبة 842م؛ وبالتحديد احتواء المجموعة المعالجة ب 8211792 على 8842 بمقدار أقل بكثير» ولكن vo
As في هذه الحالة كبيرة عند الشهر PBS 5 AN1792 كانت )8 35( بين المجموعات المعالجة ب .)١ والشهر الثامن عشر (م-<٠0.000؛ انظر الجدول (v0 £7p) الخامس عشر (نانوغرام/غرام) في القشرة AB الجدول ؟: مستويات متوسطة ل
AN1792 حيوانات معالجة ب PBS حيوانات غير معالجة حيوانات معالجة ب )م AB42 يلكلا 8 (n) 842 8د الكلي )«( 842 ASH AR | العمصر )١( م ٠٠٠ ١" (0 ( "VY. 1 6 .لال Alen ( ٠( كم AY + Vo (1) لني.:*ع *roX.. (VY) "6 در ال ال YYYLL VA
EY Y=p *
Cyeaa =p rE °
Hippocampal Levels المستويات الحصينية (<) غير معالجة؛ كانت المستويات الحصينيسة المتوسطة PDAPP في فكران نانوغرام/إغرام ١٠٠٠٠١ شهراً VY الكلي عند عمر AB لمقدار median hippocampal levels 80٠٠٠ شهراً وزادت كذلك إلى ١# نانوغرام/غرام عند عمر ©٠٠٠١ وزادت إلى (انظر الجدول ©) . وبالمثل؛ أظهرت الفثئران الممنعة Ted VA تانوغرام/غرام عند عمر ٠
Vo بلغت 560800 نانوغرام/غرام و 15080860 نانوغرام/غرام عند عمر Lad PBS ب AN1792 AN1792 شهراً على الترتيب. وأظطهرت الحيوانات الممنعة ب VA شهرآً و وبصفة خاصة 19000 تنانوغرام/إغرام AB مقداراً كليا أقل من immunized animals شهراً على الترتيب. وكانت قيمة YA شهراً و ١5 نانوغرام/غرام عند عمر 0٠٠٠١و شهرآً أقل بكثير من تلك القيمة المجموعة VA عند عمر AN1792 المجموعة المعالجة ب ١ نفس النمط من AB42 (م-0.0005؛ انظر الجدول “) . وأعطى قياس PBS المعالجة ب النتائج؛ وبالتحديد كانت المستويات في المجموعة المعالجة ب 8211792 أقل بكثير من تلك 51000 نانوغرام/إغرام مقابل 7900٠0( PBS المستويات في المجموعة المعالجة ب شهرا (انظر VA نانوغرام/غرام على الترتيب؛ م-0.007) وقيمت عندما قيست عند عمر .)" الجدول - ٠
لم الجدول “: مستويات متوسطة ل AR (نانوغرام/غرام) في حصان A حيوانات غير معالجة حيوانات معالجة ب PBS حيوانات معالجة ب AN1792 العمر | 8 الكلي | 842 (n) 8ه الكلي | 0842م | () 8 الكلي 2م (n) )٠١( ٠ Yoo... VY YYY.
Yio. (3) Yyov. ٠٠١ )٠١( 66 ovo.
Vo )+( *oud. (VY) ov). Totes (V4) TEY.
AAs VA انلحم () ve Yeo =p * vee YY=p ** ° )==( المستويات المخيخية Cerebellar Levels في فثئران PDAPP غير معالجة عمرها ١١ شهرآء كان المستوى المتوسط المخيخي median cerebellar level لمقدار AB الكلي ١5 نانوغرام/غرام (انظر الجدول ؛) . وعند عمر ٠ شهرآء زاد هذا المستوى المتوسط إلى YA نانوغرام/غرام وارتفع إلى Yo نانوغرام/غرام عند عمر Ted ١8 وأظهرت الحيوانات المعالجة ب PBS قيم AB كلية متوسطة بلغت YY نانوغرام/غرام عند عمر V0 شهراً و 47 نانوغرام/غرام عند عمر YA شهراً. ووجد أن للحيوانات المعالجة ب 28011792 GIST ate من AB بلغ YY نانوغرام/غرام عند عمر Vo LST loins [ye من AB أقل بشكل كبير (oye Y=p) عند عمر VA شهرا Yo) نانوغرام/غرام) من المجموعة المعالجة ب PBS المقابلة (انظر الجدول 4) . الجدول ؛: مستويات متوسطة ل AR (نانوغرام/غرام) في المخيخ حيوانات غير معالجة حيوانات معالجة ب PBS حيوانات معالجة ب AN1792 AB 0 GUAR ed الكلي (m) 8ه الكلي (n) VY 1 )0( (V+) YH), (2) YA (+) Yv,v Vo *Y ELA (OY) £Y,) (+) Yo, VA )3( ov YA=p * Vo vaq
AY
APP مستويات de AN1792 ؛. تأشثيرات المعالجة ب
Effects of AN1792 Treatment on APP Levels full-length APP molecule كامل الطول APP والجزيء APP-ot يحتوي كل جزيء أو جزء منه وبذلك من المحتمل أن يدمجا عن طريق تولد استجابة مناعية AB على كل سياق ل©2271792-421601. 5 5 8 للدراسات التي أجريت حتى immune response AN1792 موجهة ب 5 كما حدثت زيادة في الأمراض العصبية APP لوحظت زيادة طفيفة في مستويات oY) وفي القشرة؛ لم تتغيسر مستويات الجبزيء .PDAPP في الفأر neuropathology انخفقض APP-a (كامل الطول) بصفة أساسية بالمعالجة باستثناء أن APP «-<طم/الجزيء مقابل المجموعة AN1792 ب A allel شهراً في المجموعة YA بنسبة 719 عند عمر
Ted YA jee عند AN1792 للمجموعة المعالجة ب APP قيم alias ولم PBS المعالجة ب Ve شهراً والمجموعات ١5 و ١" بشكل كبير عن تلك القيم للمجموعات غير المعالجة عند عمر ضمن الأمداء التي APP a شهراً. وفي كل الحالات بقيت ١١ عند عمر PBS المعالجة ب
PDAPP توجد عادة في فثران تأثيرات المعالجة ب 801792 على الانتكاس العصبي والمرض الغرائي العصبي Lo
Effects of AN1792 Treatment on Neurodegenerative and Gliotic Pathology ١ بشكل كبير في القشرة neuritic plaque انخفض حمل اللويحات عصبية الالتهاب
PBS بالمقارنة مع المجموعة المعالجة ب AN1792 لفئثران معالجة ب frontal cortex الأمامية (نسبة الانخفاض Hed VA و )٠,١7<م /AE (نسبة الانخفاض بلغت Tied Vo عند عمر وقد ازدادت القيمة المتوسطة لحمل اللويحات [A [انظر الشكل (+, 0) =p بلغت 755؛ عند عمر يتراوح PBS عصبية الالتهاب من 70,77 إلى 70,49 في المجموعة المعالجة ب © شهراً. وهذا يتناقض مع الإنتاج المنخفض بدرجة كبيرة للويحات عصبية VA و ١١ بين مع قيم متوسطة لحمل لويحات عصبية الالتهاب (AN1792 الالتهاب في المجموعة المعالجة ب على Ted VA و ١9 تتراوح بين 750,06 و 70,77 في المجموعات التي عمرها بين الترتيب.
AA
وانخفض تكثر Tas محتملة AN1792 ب immunizations وقد ظهر أن التمنيعات عند AN1792 للفئران المعالجة ب RSC المتفاعلة بدرجة كبيرة في astrocytosis الخلايا النجمية 70% شهراً (انخفاض بنسبة ١١5 عند العمرين PBS مقارنتها بالمجموعة المعالجة ب الشكل 3( وقد زادت pla) (v0 YASp شهرا (انخفاض بنسبة 779؛ YA و (+, 0) Vp بين PBS القيم المتوسطة للنسبة المئوية لتكثر الخلايا النجمية في المجموعة المعالجة ب ٠ على كبح AN1792 وعملت المعالجة ب .78,7١ شهراً من 77,؛7 إلى VA و ١١ العمرين زيادة تكثر الخلايا النجمية عند كلا العمرين إلى 71,89 و 77,7 على الترتيب. وهذا يقترح clearance process بعملية التنقية neuropil عدم تلف الشبكة العصبية اللبادية
Antibody Responses استجابات الأجسام المضادة JY heterozygous PDAPP mice مغايرة الزيجوت PDAPP تلقت فئران (ode وكما وصف ١ migrogram (ug) ميكروغرام ٠٠١ سلسلة من © تمنيعات بمقدار (YE=N) Ted ١١ عمرها وأعطيت الجرعات Freund's adjuvant مستحلب باستخدام مادة فرويند المساعدة AN1792 من أسبوعاء VY 5A 4؛ oY على فترات أسبوعية عند صفر؛ intraperitoneally البريتون Jala وكمادة .٠١ لوحده (بدون مادة فرويند المساعدة) عند الأسبوع PBS وأعطيت ستة تمنيعات ب a jac متوافقة Lia تلقت مجموعة مناظرة من فئران محولة negative control ضابطة سلبية مستحلب باستخدام نفس المواد PBS تمنيعات من 24 age-matched transgenic mice ؛؟ شهراً المساعدة وأعطيت بنفس المواعيد. ونزفت الحيوانات خلال ثلاثة إلى سبعة أيام بعد كل تمنيع .51158 عن طريق AN1792 بدأ بعد الجرعة الثانية. وقيست استجابات الجسم المضاد ل للحيوانات الممنعة ب Geometric mean titers (GMT) وبلغ المتوسط الهندسي للعيارات والثالثة والأخيرة (السادسة) Aull تقريباآً بعد الجرعات ©080١ و 206 1100 2 ٠ على الترتيب. ولم يقس أي جسم مضاد متخصص ب 8م في حيوانات ضابطة بعد التمنيع السادس. YE 07١0 بتلقيها تمنيعات عند os jal وعولج نصف الحيوانات تقريباً لمدة ثلاثة أشهر لوحده بدون مادة فرويند PBS تقريباً. وأعطيت كل من هذه الجرعات في ناقل te gud YY و خلال الفقرة Wl mean antibody titers المساعدة. وبقي متوسط عيارات الأجسام المضادة #٠
كم الزمنية هذه. وفي الحقيقة؛ فقد ظهر أن عيارات الأجسام المضادة بقيت ثابتة من النزيف الرابع إلى الثامن مقابل فترة زمنية شملت الحقنة الخامسة إلى التاسعة. ولتحديد Lad إذا اقترنت الأجسام المضادة المتخصصة ب 8م كذلك والناتجة عن طريق التمنيع والمكشوفة في أمصال الفئران المعالجة ب AN1792 مع المادة التنشوانية © المترسبة في الدماغ؛ تفاعلت مجموعة جزئية من أجزاء الفثران المعالجة ب AN1792 و PBS مع جسم مضاد متخصص ب IgG فأري. وبخلاف المجموعة المعالجة ب (PBS فقد غلفت لويحات AB أدمغة الفثران المعالجة ب AN1792 ب 150 داخلي المنشا .endogenous IgG وقد لوحظ هذا الفرق بين المجموعتين في كل من المجموعتين عند عمر 510 VA شهراً. ومما يلفت الانتباه بصفة خاصة الافتقار إلى الوسم في المجموعة المعالجة ب PBS بالرغم من ٠ وجود حمل مادة نشوانية كبير في هذه الفئكران. وتبين هذه النتائج أن التمنيع ببروتين AB تخليقي synthetic AB protein يولد أجساماً مضادة تميز وترتبط في الجسم الحي ب BAB اللويحات النشوانية. .V استجابات مناعية تسببها الخلايا Cellular-Mediated Immune Responses أزبلت طحالات spleens من 4 فئران PDAPP ممنعة ب AN1792 و ١١ فأر PDAPP ١ ممنعة ب PBS تبلغ من العمر ١8 شهرآ لمدة 7 أيام بعد التمنيع التاسع. وعزلت خلايا طحالية splenocytes وزرعت لمدة VY ساعة في وجود APA2 (ABAD أو 8840-1 (بروتين ذو ترتيب معكوس ٠ (reverse order protein ويعمل مسبب الانقسام الفتيلي mitogen وهو Con كضابط إيجابي positive control وحصل على الاستجابات المتلى باستخدام بروتين بتركيز يزيد عن ١ ميكرو جزيئي. وتشعبت الخلايا من كل الحيوانات التسع المعالجة ب AN1792 استجابة © ا لبروتين 801-40 أو 801-42 مع مستويات متساوية لدمج البروتينين (انظر الشكل ١٠؛ اللوحة العلوية). ولم تكن هنالك استجابة للبروتين العكسي 8840-1. ولم تستجيب الخلايا من الحيوانات الضابطة لأي من بروتينات AB (انظر الشكل ٠١ اللوحة السفلية). ج. النتيجة تبين نتائج هذه الدراسة أن التمنيع ب AN1792 لفثران ABS PDAPP رواسب نشوائية amyloid deposits Yo يبطئ ويمنع الترسب النشواني المتزايد ويعيق التغيرات المرضية العصبية a. بصفة أساسية AN1792 مسنتة. وتوقف التمنيعات ب PDAPP (J) J المتعاقبة في دماغ وهكذاء يكون amyloidosis تزايد المادة النشوانية في بنيات تخضع عادة للداء النشواني
AD فائدة علاجية في معالجة AB لإعطاء ببتيد
Screen Of AB Fragments Ap فحص شدفات .7 بتسع مناطق Ted ١١-9 وعمرها تراوح من ٠٠١ عددها PDAPP معت فثئران 5 ينقل الاستجابة الفعالة. epitopes لتحديد أي من مغيرات الخاصية AR و APP مختلفة من مناعة ضابط داخل البريتون كما al gay التسع المختلفة immunogens وحقنت مولدات المناعة بشري AB من ببتيد conjugates وصف أعلاه. وتشمل مولدات المناعة أربعة مركبات اقترانية مضاد لفأر ومأخوذ من خراف IgG وجميعها تقترن ب ؛٠-١ 1-١7 (YASYY (VY) وهي أحماض أمينية من 140-097 لمتعدد ببتيد toystine link عن طريق رابطة سيستثئين ٠
APA42 5 و 2825-35 بشري متكتل aggregated human AB 1-40 بشري متكتل AB1-40 «APP بصفتهما PBS واستخدم 8842م المتكتل و aggregated rodent 8842 من حيوان قارض متكتل ضابطين إيجابي وسلبي؛ على الترتيب. واستخدمت عشر فتران لكل مجموعة معالجة. عند نهاية الأربعة أشهر من Loa; DU وروقبت العيارات كما ذكر أعلاه وقتلت الفئران بعد toxicology والسموميات AR ومستويات histochemistry الحقن. وحددت كيمياء الأنسجة Vo القتل. Materials and Methods أ . مواد وطرق
Preparation of Immunogens تحضير مولدات المناعة ١ حضرت أربعة مركبات اقترانية coupled AB peptides مقترنة AB تحضير ببتيدات amino acid (شقات الأحماض الأمينية human AP peptide conjugates بشرية AB من ببتيدات Yo منها مقترن ب 150 مضاد لفأر ومأخوذ JS (£Y=FY و YA=YY (VY) اف residues باستخدام مادة مفاعلة AB من خراف) بالاقتران من خلال سيستثين صناعي مضاف إلى الببتيد
AB من كبريتو -21405. وأجري تخليق مشتقات الببتيد crosslinking reagent للارتباط التقاطعي باستخدام سياقات الأحماض الأمينية النهائية التالية. وفي كل حالة؛ يحدد موقع شق السيستئثين an المولج بوضع خط تحته. ولمشتقة الببتيد 8813-28 كذلك شقي غليسين مضافين قبل السيستئين كما هو مبين. carboxyl terminal cysteine ذي الطرف الكربوكسيلي glycine (VY (سياق التمييز رقم: NH,-DAEFRHDSGYEVC ~COOH 881-12 ببتيد (VY (سياق التمييز رقم: NH,-DAEFRC COOH 81-5 ببتيد حمض أمينو -هبتانويك--2-,1111 (سياق -GLMVGGVVIA COOH AB3342 م ببتيد (VE التمييز رقم: : (سياق التمييز رقم Ac-NH- HHQKLVFFAEDVGSNK GGC-COOH AB13-28 ببتيد (vo ملغم من 180 مضاد لفأر ٠١ وصنام«ه»؛ ذيلز reaction وللتحضير لتفاعل الاقتران
Jackson ImmunoResearch ومأخوذ من خراف (من جاكسون إ(ميونوريسيرتش لابوراتوريز Ve ملي جزيئي من محلول منظم من بورات الصوديوم ٠١ طوال الليل ضد (Laboratories
Sha Zl ومن ثم ركز الجسم المضاد AC درجة حموضتة sodium borate buffer باستخدام أنبوب أميكون ستتريبريب milliliter (ml) Je ¥ إلى حجم dialyzed antibody [1-(-ماليميدو EMCS- ملغم من كبريتو ٠ ومن ثم أذيب -Amicon Centriprep tube (من شركة موليكيولار [[N (y-maleimidocuproyloxy) succinimide] كبرويلوكسي) سكسينيميد Vo .deionized water مل من ماء منزوع الأيونات ١ في (Molecular Sciences Co. . سيانسز؛ كو نقطة نقطة مع التقليب ل EMCS- gu pS وأضيف مقدار فائض جزيئي بلغ £0 ضعف من المضاد لفأر والمأخوذ من خراف ومن ثم قلب المحلول لمدة عشرة دقائق إضافية. ونقي 06 المضاد لفأر والمأخوذ من الخراف المنشط واستبدل المحلول المنظم بإمراره فوق عمود 0
Pierce مل (عمود من نوع بيرس بريستو كولوم ٠١ سعته gel filtration column ترشيح هلامي | © جزيثي ١,١ وعودل باستخدام (Pierce Chemicals من شركة بيرس كيميكالز Presto Column درجة حموضته 71,8. وجمعت الأجزاء التي تحتوي EDTA و © ملي جزيئي من NaPO, من عند طول موجة بلغت 780 نانومتر absorbance على الأجسام المضادة والمميزة بالامتصاص بصفته OD مجم لكل ١,4 وخففت إلى تركيز بلغ ١ملغم/مل تقريباً باستخدام nanometer (nm)
Cana ؛٠ «مناعدت»». وأذيب المقدار الفائض الجزيئي الذي يعادل coefficient معامل إخماد Yo ay باستثناء (A ملي جزيئي ودرجة حموضته ٠١ مل من ,11050 تركيزه 5١ (BAR من ببتيد مل ٠١ ومن ثم خفف إلى DMSO ملغم من ببتيد 4833-42 أولا في 55 مل من ٠١ إذابة ملي جزيئي. وأضيف كل محلول من المحاليل ٠١ باستخدام محلول منظم ب ,110050 تركيزه مل من 150 المنشط المضاد لفأر والمأخوذ من خراف ورج عند درجة ٠١ الببتيدية إلى يقل عن Aled حرارة الغرفة لمدة ؛ ساعات. وركزت المركبات الاقترانية الناتجة إلى حجم ٠
PBS ثم ديلزت باستخدام Amicon Centriprep tube مل باستخدام أنبوب أميكون سنتريبريب ٠ ومررت المركبات الاقترانية من .8»8 peptide لاستبدال المحلول المنظم وإزالة الببتيد الطلق للتعقيم 0.22 pm-pore size filters ميكرومتر +, TY خلال مرشحات بلغ حجم مسامها ملغم وخزنت مجمدة عند -١٠م. وحددت ١ ثم قسمت إلى أجزاء وزن كل منها sterilization
Pierce (من شركة بيرس كيميكالز BCA التراكيز للمركبات الاقترانية باستخدام اختبار بروتين oy. conjugation باستخدام 0 مأخوذ من حصان للمنحنى القياسي. ووثق الاقتران (Chemicals بزيادة الوزن الجزيئي للببتيدات المقترنة بالنسبة إلى الببتيدات ل 180 المنشط المضاد لفأر
ABLS والمأخوذ من الخراف. وكان المركب الاقتراني المضاد لفأر والمأخوذ من خراف عبارة عن تجمع من مركبين اقترانيين وكان البقية من مستحضر مفرد.
Preparation of aggregated Ap peptides متكتتة AP تحضير ببتيدات ." Vo في Peptides Inc من شركة ببتيدز إنك. (AN1528) 5460-١ أذيبت الببتيدات البشرية (8101792؛ من شركة ببتيدز إنك. 47-١ الببتيدات البشرية ((ME0541 كاليفورنياء دفعة
Yo-Yo الببتيدات البشرية ((ME0439 ودفعة ME0339 في كاليفورنياء لوت Peptides Inc في كاليفورنيا؛ دفعة Peptides Inc من حيوان قارض (من شركة ببتيدز إنك. 47-١ وببتيدات إذابة جديدة لتحضير كل مجموعة من جرعات الحقن من مساحيق مجفدة )3 58 7 ملغم من الببتيد إلى Yo أضيف og yall خزنت مجففة عند -٠7”م. ولهذا lyophilized powders منزوع الأيونات ودوّم المزيج لإنتاج محلول أو معلق منتظم نسبياً. ومن ele مل من 4 الببتيدات الأربع» كان 271528 الببتيد الوحيد القابل للذوبان في هذه المرحلة. ومن ثم أضيف تركيزه ضعف PBS) أضعاف ٠١ ميكرولتر من 285 تركيزه ٠٠١ جزء صغير بلغ حجمه ٠١٠ تركيزه sodium phosphate جزيئي وفوسفات صوديوم ١,19 يتكون من: 11:01 تركيزه Yo ay حيث عند هذه المرحلة بدأ 2001528 بالترسب. ودوّم المعلق (V,0 جزيئي؛ درجة حموضته د.م لاستخدامه في اليوم التالي. YY مرة أخرى وحضن طوال الليل عند يحمل شيفرة expression plasmid تحضير بروتين 2*6م: شكّل بلازميد تعبير من سياق دليلي ذي طرف Su fusion protein 6!؛ وهو عبارة عن بروتين اندماج حمض أميني مأخوذ من ملتهمة جراثيم ٠٠١ نيتروجيني من بوليمراز 1458-2 يحتوي على ٠ ومتبوع 100-amino acid bacteriophage MS-2 polymerase N-terminal leader sequence
Oltersdorf كما وصف أولترسدورف (BAPP) APP ل 190-04Y بالأحماض الأمينية المجلد 716 ص 4497-4497 (1990م). وخمّح oJ. Biol. Chem ومعاونوه في مجلة عن البروتين بعد حث Tae E.coli البلازميد خمجاً تحويلياً في الاشريكية القولونية جزيئي ونقي 86م جزئيا عن A تركيزها urea وحللت البكتيريا في يوريا promoter المعزز ٠ طريق رحلان كهربائي هلامي تحضيري لمتعدد أكريل أميد باستخدام كبريتات دوديسيل بواسطة تنشيف pBx6 وميزت الأجزاء التي تحتوي على preparative SDS PAGE الصوديوم rabbit مأخوذ من أرنب pBx6 باستخدام جسم مضاد متعدد النسائل ضد Western blot وسترن Amicon أميكون سنتريبريب ail وجمعت وركزث باستخدام anti-pBx6 polyclonal antibody
SDS PAGE وتراوحت نقاوة المستحضر المقذّرة ب (PBS وديلزت باستخدام Centriprep tube Vo تقريباً. 7٠١ من © إلى Coomassie Blue stained SDS PAGE مبقع بصبغة أزرق كوماسييه
Results and Discussion ب. النتائج والتوضيح
Study Design تصميم الدراسة .١ محولة جينياً مغايرة الزيجبوت PDAPP فأر ذكور وإناث من فئران ٠٠١ حصل على من شارلز ريفر Ted ١١ يتراوح عمرها من 9 إلى heterozygous PDAPP transgenic عنص +٠ وصنفت y Taconic Laboratory وتاكونيك لابوراتوري ©9165 River Laboratory لابوراتوري ممزوجة مع مادة APP أو AB الفثران إلى عشرة مجموعات لتمنيعها بمناطق مختلقة من الجنس والعمر والنسل ومصدر الحيوانات ضمن dee Dad فرويند المساعدة. ووزعث الحيوانات مشتقة من AB المجموعات عن كثب قدر الإمكان. وتشتمل مولدات المناعة على أربعة ببتيدات و 47-77 ويقترن كل منها ب 160 المضاد 18-٠“ Y=) 00) السياق البشري؛ vo at (AN1528) البشرية 4 ٠-١ ببتيدات GS AR لفأر والمأخوذ من خراف؛ أربعة ببتيدات من حيوان 47-١ البشرية؛ وببتيدات Yo-Yo ببتيدات ((AN1792) ببتيدات ١-7؛ البشرية
APP يحتوي على شقات أحماض أمينية pBx6 قارض؛ ومتعدد ببتيد اندماجي»؛ يرمز إليه ب ممزوج مع مادة مساعدة بصفتها مادة PBS ومنتعت مجموعة عاشرة ب 140-04Y من ضابطة. ©
PBS ميكرولتر من Yoo ميكروغرام من كل ببتيد 8.8 في ٠٠١ ولكل تمنيم؛ استحلب لوحده PBS أو PBS في نفس الحجم من pBx6 لبروتين APP ميكروجم من مشتقة ٠٠١ أو Complete 1760170105 adjuvant (CFA) (حجم تحجم) مع مادة فرويند المساعدة الكاملة 1:١ بنسبة ميكرولتر للتمنيع الأول؛ واتبع بتعزيز باستخدام نفس المقدار من 0٠0 في حجم نهائي من
Incomplete Freund’s adjuvant (IFA) مولد المناعة في مادة فرويند المساعدة غير الكاملة Ve للجرعة الأخيرة. وأعطيت جرعات التمنيع داخل البريتون PBS للجرعات الأربعة اللاحقة مع بموعد مرة كل أسبوعين للجرعات الثلاثة الأولى ثم شهرياً. ونزفت الحيوانات لمدة أربعة إلى سبعة أيام بعد كل تمنيع بدأ بعد الجرعة الثانية لقياس عيارات الجسم المضاد. وقتلت الحيوانات بعد أسبوع واحد تقريباً من الجرعة النهائية. Lam قتلاً AP and APP Levels in the Brain في الدماغ APP § AB مستويات ." vo أزيلت APP المختلفة أو بمشتقة AB بعد حوالي أربعة شهور من التمنيع بببتيدات كرة ual وحضر أحد .saline-perfused animals الأدمغة من حيوانات أشبعت بمحلول ملحي
DAY واستخدم النصف immunohistochemical analysis الدماغ لتحليل كيمياء الأنسجة المناعي ولقياس تراكيز الأشكال المختلفة من بيتا ببتيد LAPP و AB من كرة الدماغ لقياس مستويات شرح <amyloid precursor protein ومصدر بروتين نشواني beta amyloid peptide نشواني 7 من مناطق حصان البحر والمناطق homogenates نصف كرة الدماغ وحضرت جناسات تركيزه © جزيتي . وخففت هذه الجناسات وقيس guanidine القشرية والمخيخية في غوانيدين بالمقارنة مع مجموعة من محاليل مخففة من ببتيد 48 أو APP مستوى المادة النشوانية .51158 قياسي ذي تراكيز معروفة من نسق APP
وكان التركيز المتوسط ل 8م الكلي للمجموعة الضابطة الممنعة ب PBS أعلى بمقدار 4 ضعف في حصان البحر منه في القشرة (بلغت القيمة المتوسطة YEA نانوغرام/غرام في نسيج حصان البحر بالمقارنة مع £YY) نانوغرام/غرام للقشرة). وكان المستوى المتوسط في المخيخ للمجموعة الضابطة )6 YY نانوغرام/غرام في الأنسجة) أقل بحوالي ٠٠٠١
oo ضعف منه في حصان البحر. وتعتبر هذه المستويات مماثلة لتلك المستويات المذكورة مسبقاً لفثران PDAPP المحولة Lins مغايرة الزيجوت ولها نفس العمر (انظر ما جاء عن بحت جونسون-وودز Johnson-Woods ومعاونيه؛ ٠9491 المرجع سابق الذكر).
وبالنسبة للقشرة؛ تمتلك Ae gene جزئية من المجموعات المعالجة مستويات AIS متوسطة من AB و 881-42 تختلف بشكل كبير عن تلك المستويات للمجموعة
٠ الضابطة (م < (reo وقد تلقت تلك الحيوانات 8201792 أو المركب الاقتراني الببتيدي 81-2 من حيوان قارض أو ALLS كما هو مبين في الشكل .١١ وانخفضت المستويات المتوسطة من 8م الكلي بنسبة yo 774 و 71١ على الترتيب؛ بالمقارنة مع المجموعة الضابطة للمجموعات المعالجة هذه. ولم توجد علاقات مميزة بين عيارات الأجسام المضادة
المتخصصة ب AB ومستويات 8ه في المنطقة القشرية من الدماغ لأي من المجموعات.
Vo وفي حصان البحر؛ لم يكن الانخفاض المتوسط في 8ه الكلي المقترن بالمعالجة ب 2 (انخفاض بنسبة 45ت (+0tY=p كبيراً مثل ذلك الانخفاض الملاحظ في القشرة (انخفاض بنسبة (vse YV=p /Vo . غير أن قيمة الانخفاض كانت أكبر بكثير في حصان البحر منها في القشرة؛ فقد بلغ الانخفاض الكلي ١١١87 نانوغرام/غرام من الأنسجة في حصان البحر مقابل 7١١7١ نانوغرام/غرام من الأنسجة في القشرة. ولمجموعات الحيوانات
© التي تلقت 81-42 أو 81-5 من حيوان قارض؛ انخفضت مستويات AB الكلية المتوسطة بنسبة 776 و 7771 على الترتيب. غير أنه بتحديد أحجام المجموعات الصغيرة والتغير الكبير في مستويات البيتيد النشوانية من حيوان لحيوان في المجموعتين؛ لم تكن هذه الانخفاضات كبيرة. وعند قياس مستويات 881-42 في حصان البحرء لم تصل أي من الانخفاضات المستحثة بالمعالجة إلى مقدار ملحوظ. وبناءً على ذلك؛ بسبب حمل AB الأصغر في القشرة؛
ve تكون التغيرات في هذه المنطقة عبارة عن مؤشر أكثر دقة لتأثيرات المعالجة. وتكون a1 في القشرة مماثلة؛ ولكن ليست مطابقة؛ ELISA المقاسة باختبار Ap التغيرات في مستويات للنتائج من تحليل كيمياء الأنسجة المناعي (انظر الوصف أدناه). بأدنى حد AD كذلك في المخيخ» وهي منطقة تتأثر عادة ب ISH AR وقد قيس
AB المتوسطة لأي من المجموعات الممنعة بببتيدات AB ممكن. ولم يختلف أي من تراكيز عن تلك التراكيز للمجموعة الضابطة في هذه المنطقة من الدماغ. APP المخظفة أو مشتقة ٠ لا تتأثر AB من non-pathological levels وتشير هذه النتيجة إلى أن مستويات غير ممرضة بالمعالجة. في القشرة والمخيخ من فئران معالجة ELISA كذلك باختبار APP وحدد تركيز ويميز الأول المشار إليه ب APP 3S 55 وضابطة. واستخدم اختباران مختلفان لتحديد (AB الذي قسسّم في سياق APP هو الشكل المفرز من »( APP-x ماطف كل من ٠ في حين يميز الثاني >*-07م فقط. وعلى النقيض من (APP من (FL) والأشكال كاملة الطول المقترن بالمعالجة في مجموعة جزئية من المجموعات المعالجة؛ لم تتغير AB الاتخفاض في في كل المجموعات المعالجة بالمقارنة مع الحيوانات الضابطة. وتشير هذه APP مستويات وبالأحرى فإن تأثير المعالجة متخصص APP لا تستنفد AB النتائج إلى أن التمنيعات بببتيدات ب قزم ve و 881-42 الكلية بشكل كبير في القشسرة AB ومجمل القول؛ انخفضت مستويات أو المركب الاقتراني 881-42 أو 4881-5 من حيوان قارض. وفي AN1792 بالمعالجة ب حصان البحرء انخفض 8م الكلي بشكل كبير فقط بالمعالجة باستخدام 2. ولم تلاحظ أي في المناطق الحصينية أو القشرية APP أو AB تغيرات أخرى مقترنة بالمعالجة في مستويات أو المخيخية. >
Histochemical Analyses تحليل كيمياء الأنسجة ." حضرت أدمغة من مجموعة جزئية من ست مجموعات لتحليل كيمياء الأنسجة حيث منتعت ثلاث مجموعات بمركبات اقترانية dimmunohistochemical analysis المتناعي كامل الطول AB JS وهي 881-5؛ 481-12 و 8813-28؛ ومنتعت مجموعتان AB لببتيد وتبين النتائج للتحليل PBS والمجموعة الضابطة المعالجة ب AN1528 وهي 2 و Yo
الصوري image analyses للحمل النشواني في أجزاء الدماغ من هذه المجموعات في Jal NY ووجدت انخفاضات كبيرة في الحمل النشواني في المناطق القشرية لثلاث مجموعات من المجموعات المعالجة مقابل الحيوانات الضابطة. ولقد لوحظ الانخفاض الأكبر في الحمل النشواني في المجموعة التي تلقت ANT792 حيث انخفضت القيمة المتوسطة بنسبة ZAY ° (م- 6601 . ولوحظت انخفاضات كبيرة كذلك لتلك الحيوانات المعالجبة ب AN1528 (انخفاض بنسبة 7408 م<# 00 )٠. والمركب الاقتراني الببتيدي 81-5 (انخفاض بنسبة SAY Y=p 0+( : وتختلف النتائج التي حصل عليها بتحديد مقدار AB أو AB142 الكلي باختبار ELISA والحمل النشواني بالتحليل الصوري إلى حد ما. وللمعالجة ب 8181528 تأثير كبير على ١ مستوى الحمل النشواني القشري cortical amyloid burden عند قياسه بالتحليل الصوري الكمي وليس له تأثير على تركيز AR الكلي في نفس المنطقة عند قياسه باختبار 851158. ومن المحتمل أن يكون الفرق بين هاتين النتيجتين بسبب مواصفات الاختبارين. فالتحليل الصوري لا يقيس إلا AB عديم الذوبان المتكتل في اللويحات. وعلى النقيض من ذلك؛ يقيس اختبار ELISA كل أشكال AB القابلة للذوبان وعديمة الذوبان؛ المونومرية والمتكتلة. وبما أنه يعتقد | أن الاعتلال المرضي يقترن بالشكل عديم الذوبان من AB المقترن باللويحات insoluble «plaque-associated form فإنه قد يكون لتقنية التحليل الصوري دقة أكبر لكشف تأئثيرات المعالجة. غير أنه نظراً لأن اختبار 21158 يعتبر اختبارا أكثر سرعة وأسهل فهو مفيد fis لأغراض الفحص -screening purposes وعلاوةٌ على ذلك فقد يظهر أن الانخفاض في AB المقترن بالمعالجة أكبر من الانخفاض في AB الكلي المقترن باللويحات. AB-specific antibodies AB ولتحديد فيما إذا تفاعلت الأجسام المضادة المتخصصة ب Y. في الحيوانات المعالجة مع المادة النشوانية المترسبة immunization والناتجة عن طريق التمنيع تفاعلت مجموعة جزئية لأجزاء من الحيوانات المعالجبة «deposited brain amyloid في الدماغ والفثران الضابطة مع جسم مضاد متخصص ب 150 فأري. وبخلاف المجموعة المعالجة ب
Laid داخلي IgG ب Ap-containing plaques AB طليت اللويحات التي تحتوي على (PBS yo لحيوانات ممنعة بالمركبات الاقترانية من ببتيد AB وهي 881-5؛ 281-12 و 8813-28؛ وكتل
AA
ولم تحلل الأدمغة المأخوذة من حيوانات ممنعة LANT528 كاملة الطول وهي 2 و 8 بهذا الاختبار. pBx6 المعروف ب APP الأخرى أو ببتيد AB باستخدام ببتيدات
Measurement of Antibody Titers قياس عيارات الأجسام المضادة .¥ نزفت الفئران لمدة تراوحت أربعة إلى سبعة أيام بعد كل تمنيع بدأ بعد التمنيع الثاني م بحيث كان عدد مرات النزف الكلية خمس مرات. وقيست عيارات الأجسام المضادة في الطبقي ELISA باختبار AB1-42-binding antibody 881-42 صورة جسم مضاد مرتبط ب مطلية ب plastic multi-well plates باستخدام ألواح متعددة العيون لدائنية sandwich ELISA peak ظهرت عيارات الأجسام المضادة الذروية ٠7 812م. وكما هو مبين في الشكل immunogenic formulations بعد الجرعة الرابعة للتركيبات المولدة للمناعة antibody titers :411792 الأربعة هذه التي أظهرت العيارات الأعلى للأجسام المضادة المتخصصة ب > (AATYY الذروية: GMT الذروية: 14747) و 2211528 (قيمة GMT (قيمة 2 المركب الاقتراني 881-12 (قيمة 7 الذروية: 77173؛) و 88142 من حيوان قارض (قيمة وانخفضت العيارات لهذه المجموعات إلى حد ما بعد الجرعتين (V+ VAT الذروية: 27 حصل على القيمة الذروية (Aaa الخامسة والسادسة. وبالنسبة لمولدات المناعة الخمس لللعيارات بعد الجرعة الخامسة أو السادسة وكانت هذه العيارات ذات قيمة أقل بكثير من تلك ١
GMT القيم للمجموعات الأربعة التي لها أعلى عيارات: المركب الاقتراني 8801-5 (قيمة (قيمة 7 الذروية: 9485١)؛ المركب الاقتراني 8013-8 (قيمة pBx6 الذروية: 27 77)؛ (قيمة 7 الذروية: 1548)»؛ و AB33- 42 المركب الاقتراني ((VYAY الذروية: 7 وقيست عيارات الأجسام المضادة كذلك ضد الببتيدات (YYo الذروية: GMT (قيمة AB25-35 الطبقي لمجموعة جزئية ELISA باستخدام نفس تصميم اختبار homologous peptides المناظرة Ye ‘AP25-35 <ABI13-28 01-5 — هذه المجموعات Cia” ie من مولدات المناعة؛ وقد من حيوان قارض. وكانت هذه العيارات مماثلة تقريباً لتلك المقاسة ضد AB1-42 أو 833-72 المناعة 881-42 المأخوذ من حيوان قارض حيث كانت عيارات الأجسام A se 0812م باستثناء المضادة ضد مولد المناعة المناظر في هذه الحالة أعلى بمقدار ضعفين تقريباً. ولا يكون مقدار a9 عيار الجسم المضاد المتخصص ب 8771792 للحيوانات المنفردة أو القيم المتوسطة القشرة. AB للمجموعات المعالجة مرتبطا بالفعالية المقاسة كانخفاض في مقدار
Lymphoproliferative Responses ؛. استجابات تشعبية لمفاوية باستخدام AB-dependent lymphoproliferation AB قيس التشعب اللمفاوي المعتمد على حصدت بعد أسبوع واحد تقريباً بعد التمنيع السسادس الأخير. spleen cells م خلايا طحالية لكل عين لمدة © أيام في وجود 881-40 عند ٠١ بتركيز Bt واستنبتت الخلايا المحصودة تركيز بلغ © ميكروجزيثي للتنبيه ©500001810. واستتبتت كذلك خلايا من مجموعة جزئية
APA0- reverse peptide من سبع مجموعات من المجموعات العشرة في وجود الببتيد العكسي
PHA 1 إضافية باستخدام مسبب انقسام فتيلي للخاديا WIA وكضابط إيجابي؛ استنبتت .1 وكضابط سلبي استنبتت الخلايا بدون إضافة ببتيد. - ولم PHA من معظم الحيوانات استجابة ل lymphocytes وتشعبت الخلايا اللمفاوية توجد هنالك استجابات ملحوظة للببتيد العكسي 840-1. وتشعبت الخلايا المأخوذة من من حيوان قارض و 881-42 CAN1792 المتكتلة الكبيرة و AB الحيوانات الممنعة بببتيدات .411792 بشدة عند تنبيهها ب 881-40 مع أعلى تعداد لكل دقيقة في حيوانات تلقت 98 481-12 وتشعبت خلايا أحد الحيوانات في كل من المجموعات الممنعة بالمركب الاقتراني yo dana و 2825-35 استجابة ل 881-40ي. ولا تحتوي المجموعات AB13-28 المركب الاقتراني على PBS أو pBx6 التي تلقت المركب الاقتراني 801-5؛ المركب الاقتراني 8332م لبروتين هذه النتائج في edb. AB-stimulated response AB حيوانات تظهر استجابة منبهة ل الجدول 5) أدناه.
Vou
+ الجدول *مولد Aelia المركب الاقتراني .| أحماض أمينية AB الحيوانات المستجيبةV/ sia © نعم الصنف AB1-5يرقم نعم الصنف A ١7 4/1 V1 نعم الصنف AB13-28 ١ a/) © ١١ الصنف AB25-35٠١/رفص ٠١ نعم الصنف AB33-42 ABl-40 | الصنف 0 م/م | يماقم الصنف EY 1/4 | 281-42 العكسي الصنف 7؛ AA A sina pBx6 | وتبين هذه النتائج أن 8241792 و ANIS28 ينبهان استجابات قوية LAAT 1 ومن المحتمل faa من النمط الظاهري +004. ولا يعتبر عدم وجود استجابة خلايا T المتخنصصة ب 8م في حيوانات ممنعة ب 8815 مدهشاً Tk لأن مغيرات الخاصية الببتيدية المميزة م عن طريق WA 0047 تحتوي عادة على نحو lid Laan ١١ مع أن ببتيدات أقصر قد تؤدي وظيفتها في بعض الأحيان بفعالية أقل. وبناءا على ذلك من المحتمل أن تكمن معظم مغيرات الخاصية لخلايا 7 المعززة للببتيدات الاقترانية الأربع في الشريك الاقتراني ل IgG وليس في المنطقة AB وتدعم هذه الفرضية بمدى التأثير المنخفض faa للاستجابات التشعبية proliferative responses للحيوانات في كل مجموعة من المجموعات المعالجة هذه. وبما أن ٠١ المركب الاقتراني 01-5 كان فعالاً عند انخفاض كبير في مستوى 8م في الدماغ» في عدم وجود واضح لخلايا T متخصصة ب AB يبدو أن المؤثر الرئيسي للاستجابة المناعية
المستحثة عن طريق التمنيع بهذا الببتيد عبارة عن جسم مضاد. وقد يكون الافتقار إلى خلايا-7 واستجابة الجسم المضاد المنخفضة من الببتيد الاندماجي pBx6 الذي يشتمل على الأحماض الأمينية APP من 140-047 بما في ذلك كل Vo شقات AR بسبب توليد المناعة immunogenicity الضعيف للمستحضر الخاص هذا. ومن
٠١١ المحتمل أن يكون توليد المناعة الضعيف لكتل 8825-35 بسبب كون الببتيد صغيراً جدا ليحتوي على نحو ملائم على مغير الخاصية الجيد لخلايا 7 للمساعدة في حث استجابة الجسم من المحتمل أن يكون مولداآً ccarrier protein المضاد. وإذا اقترن هذا الببتيد ببروتين حامل للمناعة بشكل أكبر.
Preparation of Polyclonal Awl تحضير أجسام مضادة متعددة النسائل لوقاية . °
Antibodies for Passive Protection بالإضافة إلى مادة AB ميكروغم من ٠٠١ فأر غير محول جينياً ب ١١5 متع من الفثران pall عند عمر بلغ ؛-© أشهر. وجمع Lom) SE مساعدة من 178/م05؛ وقتلت الممنعة. وفصل 180 من مكونات الدم الأخرى. ويمكن تنقية الجسم المضاد المتخصص بمولد وحصل على .affinity chromatography المناعة بشكل جزئي عن طريق الاستشراب الألفوي ١ ملغم من الجسم المضاد المتخصص بمولد المناعة ٠-١, مقدار متوسط تراوح من حوالي ملغم. ١7١-٠٠١ لكل فأرء حيث تراوح المقدار الكلي من
Passive Immunization with Antibodies to AB AB تمنيع سلبي بأجسام مضادة ل LVI ملغم في v0 يتراوح عمرها من 9-7 أشهر PDAPP حقنت مجموعات من فثئران أو أجسام مضادة وحيدة النسيلة متخصصة ضد AB من جسم مضاد متعدد النسائل ضد 2385 ١٠ كما هو مبين أدناه. ونقيت كل مستحضرات الأجسام المضادة لتحتوي على مستويات AP ويمكن تحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد شدفة endotoxin منخفضة من الذوفان و فحص hybridomas في فأر وتحضير أشكال هجينة AB بحقن الشدفة أو الشكل الأطول من المرغوبة بدون الارتباط AB الأشكال الهجينة لجسم مضاد يرتبط بشكل متخصص بشدفة -AB أخرى من nonoverlapping fragments بشدفات غير متداخلة +٠
Voy
Vd ا wae | يمصمه ame | ae
EE
I ال - wwe | ame مضاد ل 0842 البشري | مشاد ل 8802 المتكل_| ts وحقنت الفثران داخل البريتون حيث لزم الأمر خلال فترة زمنية بلغت ؛ أشهر محدد ٠٠٠١/١ يزيد عن ELISA للمحافظة على تركيز جسم مضاد دائر مقاس بواسطة عيار ل 8842 أو مولد مناعة آخر. وروقبت العيارات كما وصف أعلاه ELISA بواسطة إجراء عند نهاية الست شهور من الحقن. وأجري تحليل لكيمياء الأنسجة Lam, م وقتلت الفئران قتلاً بعد القتل. واستخدمت عشرة فئران لكل toxicology والسمية AB _مستويات chistochemistry و XI في المثالين passive immunization مجموعة. وتوصف دراسات إضافية للتمنيع السلبي أدناه. 1 مقارنة مواد مساعدة مختلفة .1 و oil-in water emulsion مستحلب زيت في ماء alum شب «CFA يقارن هذا المثال Ve لتحديد قدرتها على تنبيه استجابة مناعية. MPL أ. المواد والطرق تصميم الدراسة .١ عمرها Hartly الإناث من سلالة هارتلي guina pigs من الخنازير الهندية ٠٠١ صنفت AN1792 إلى عشرة مجموعات لتمنيعها ب Elm Hill ستة أسابيع» حصل عليها من إلم هيل ve منه مدمجة مع مواد مساعدة مختلفة. وتلقت سبع palmitoylated derivative أو مشتقة بالميتويلية ب) PBS ميكروغرام ما لم يذكر غير ذلك) مدمج مع أ) YY) ANI792 مجموعات حقن من ه) «squalene سكوالين (+ «MPL (—= «Freund's adjuvant مادة فرويند المساعدة بجرعة منخفضة؛ أو ز شب «سلة بجبسرعة alum و شب «squalene /سكوالين 1
ل عالية ( Yoo ميكروغرام من (AN1792 وتلقت مجموعتان حقن من مشتقة بالميتويلية palmitoylated derivative من (p02 5ST) AN1792 مدمجة مع أ) PBS أو ب) سكوالين squalene وتلقت المجموعة العاشرة الأخيرة PBS لوحده بدون مولد المضاد أو مادة مساعدة إضافية. وللمجموعة التي تلقت مادة فرويند المساعدة (Freund's adjuvant استحلبت emulsified م الجرعة الأولى باستخدام CFA والجرعات الأربعة المتبقية باستخدام FA وتم إعطاء مولد المضاد بجرعة مقدارها FY ميكروغرام إلى كافة المجموعات باستثناء المجموعة التي تلقت جرعة عالية من الشب alum وهي المجموعة التي أعطيت Tov ميكروغرام من 11792ل4. وأعطيت الحقن Jala البريتون ل IFA[CFA وداخل العضل في العضلة رباعية الرؤوس للأطراف الخلفية hind limb quadriceps عند الجهتين اليمنى واليسرى بالتبادل لكل المجموعات ٠ - الأخرى. وأعطيت الجرعات الثلاثة الأولى بمعدل جرعة واحدة كل أسبوعين ثم أعطيت جرعتين بمعدل جرعة واحدة شهرياً. وسحب الدم بعد مرور ستة إلى سبعة أيام من كل تمنيع؛ Told من الجرعة الثانية؛ لقياس عيارات الأجسام المضادة. ". تحضير مولدات المناعة أضيف ¥ ملغم من 842 (من شركة كاليفورنيا ببتيدز «California peptids الدفعة م« | (MEO339 إلى 0,9 مل من ماء منزوع الأيونات water 061001280» ودوم vortexed المزيج لتشكيل معلق suspension منتظم نسبياً. وأضيف جزء صغير بلغ ٠٠١ ميكرولتر من PBS تركيزه ٠١ أضعاف PBS) تركيزه ضعف واحد؛ 18801 تركيزه 0,19 جزيثي؛ فوسفات الصوديوم sodium phosphate تركيزه )++ sux درجة حموضة تبلغ 5,). ودوم المعلق مرة أخرى وحضن 10 طوال الليل عند لالم لاستخدامه في اليوم التالسي. وخزن 7 81-2 غير المستخدم مع مادة مجففة desiccant مثل مسحوق lyophilized powder Maa عند a Ye- وحضرت مشتقة بالميتويلية palmitoylated derivative من AN1792 بقرن coupling أنهيدريد بالميتيك anhydride 16» مذاباً في ثنائي مثيل فورماميد «dimethyl formamide بالشق الطرفي الأميني ل 0792م قبل إزالة الببتيد الناشئ من الراتتج بالمعالجة باستخدام Yo حمض هيدروفلوريك -hydrofluoric acid
Vet
Complete Freund's ولتحضير تركيبة الجرعات من مادة فرويتد المساعدة الكاملة ميكرولتر ٠٠١ ميكروغرام من 8111792 في FF استحلب «(Y (المجموعة (CFA) adjuvant في حجم نهائي بلغ 500 ميكرولتر للتمنيع الأول. CFA (حجم:حجم) مع 1:١ بنسبة PBS من ومن أجل التمنيعات اللاحقة؛ استحلب مولد المضاد بطريقة مماثلة مع مادة فرويند المساعدة -(IFA) Incomplete Freund's adjuvant غير الكاملة ° أضيف مسحوق مجفد (من (A ولتحضير تركيبة الجرعات من .1001 للمجموعتين © و هاملتون ¢.Ribi ImmunoChem Research Inc. شركة ريبي إميونوكيم ريسيرش « إنك. تركيزه 70,7 إلى aqueous triethylamine إلى ثلاثي إثيل أمين ماي (MT مونتانا «Hamilton +5 ملغم/مل ودوم المزيج. وسخن المزيج إلى درجة حرارة تراوحت من ١ تركيز نهائي بلغ منتظم ومعتم قليلاً. واستخدم micells ثائية لإنتاج معلق من المذيلات ١ لام لمدة ٠ إلى ١ محلول حديث التحضير لكل مجموعة من مجموعات الحقن. ومن أجل كل جرعة حقن في ٠٠ PBS ميكروغرام من 2311792 في 1,0 ميكرولتر من YY المجموعة 0( خلط ميكرولتر من 285 في أنبوب من بوروسليكات ١١7 ميكرولتر) و 00) MPL ميكروغرام من مباشرة قبل الاستخدام. borosilicate في AN1792 ولتحضير تركيبة الجرعات من مستحلب زيت في ماء منخفض؛ أضيف Vo
Span A® تركيزه 74,0 وسبان Tween 80 A+ تركيزه 78 توين squalene إلى سكوالين 5 ميكروغرام YW للوصول إلى تركيز جرعة مفردة نهائي مقداره PBS تركيزه 70,5 في 5 واستحلب المزيج بإمراره خلال أداة تحمل (TV ميكرولتر (المجموعة Yoo من 4111792 في مرة إلى أن ٠١ إلى ١9 من twochambered hand-held device باليد تحتوي على حجيرتين standard latex bead أصبح قطر قطيرات المستحلب مساو تقريباآً لقطر خرزة لثية قياسية Y. وكان المعلق الناتج microscope ميكرومتر عند مشاهدتها تحت المجهر ١ يبلغ قطرها واستخدم مستحلب حديث التحضير لكل .0021650©04 milky white براقا لونه أبيض حليبي في ثلاثي إثيل أمين MPL أضيف eA مجموعة من مجموعات الحقن. ومن أجل المجموعة ميكروغرام لكل جرعة إلى السكوالين ٠ عند تركيز بلغ 7١,7 تركيزه triethylamine
Aa Sell للاستحلاب كما ذكر أعلاه. وبالنسبة detergent mixture والمزيج المنظف squalene Yo yoo “NH- ميكروغرام لكل جرعة من YY أضيف ٠ (v (المجموعة palmitoyl derivative البالميتويلة 80 ودوم المزيج. ومن ثم أضيف توين squalene إلى سكوالين palmitoyl بالميتويل 81-2 للوصول إلى تركيز PBS مع التدويم. وأضيف هذا المزيج إلى Span 85 48 وسبان Tween 0 يلغ Span 85 88 سبان ٠ /..,0 بلغ Tween 80 Av بلغ م ؛ توين squalene نهائي للسكوالين واستحلب المزيج كما ذكر أعلاه. 7١,9
AN1792 (المجموعتان 4 و ١٠)؛ أضيف alum ولتحضير تركيبة الجرعات من الشب (aluminum hydroxide gel (هلام هيدروكسيد الألومنيوم Alhydrogel في 5 إلى ألهيدروجل للوصول إلى تراكيز (NY نيويورك Westbury (من شركة أكيوريت 468+ وستبوري dle de ja) ميكروغرام ٠٠ (جرعة منخفضة؛ المجموعة 3( أو ples Se TT بلغت You في حجم جرعة نهائي بلغ alum لكل © ملغم من الشب AN1792 من )٠١ المجموعة ٠١ ميكرولتر. ومزج المعلق بشكل معتدل لمدة ؛ ساعات عند درجة حرارة الغرفة. قياس عيارات الأجسام المضادة LY من التمنيع الثاني Tell نزفت الخنازير الهندية بعد ستة إلى سبعة أيام من التمنيع بحيث كان عدد مرات النزف الكلي أربع مرات. وقيست عيارات الأجسام المضادة مقابل كما وصف تحت عنوان المواد والطرق العامة. ELISA بواسطة 2 Vo ؛. تحضير الأنسجة بإعطائها «0©. وجمع Lam) SI قتلت كافة الخنازير الهندية le gud VE بعد حوالي
Joan) وأزيلت الأدمغة وشرّحت ثلاث مناطق دماغية cerebrospinal 2010 مائع مخي شوكي واستخدمت لقياس تركيز بروتين (cerebellum والمخيخ cortex والقشرة hippocampus البحر الكلي بواسطة م21158. AB Y. ب. النتائج استجابات الأجسام المضادة ١ المواد المساعدة المختلفة عند قياسها في potency كان هنالك مدى واسع في فعالية عندما VE صورة استجابة الجسم المضاد ل 2 بعد التمنيع. وكما هو مبين في الشكل لم يتم الكشف عن أي جسم مضاد بعد جرعتي أو ثلاثة جرعات PBS في 2 shel ve
تمنيع وتم الكشف عن استجابات يمكن إهمالها بعد إعطاء الجرعتين الرابعة والخامسة مع متوسط هندسي للعيارات (GMTs) geometric mean titers بلغ حوالي *©؛ فقط. ومستحلب الزيت في الماء حث عيارات معتدلة بعد de jal) الثالثة Liga (Yoo = GMT) عليها بعد الجرعة الرابعة (Y+) = GMT) وانخفضت مع الجرعة الأخيرة GMT) = 4 2). وكان هنالك oo استجابة واضحة لجرعة مولد المضاد ل 2 مرتبط بالشب ae alum كون المقدار ٠٠0 ميكروغرام أكثر fads للمناعة عند كل التقاط الزمتية points عدن من المقدار ؟؟ ميكروغرام. وعند ذروة الاستجابة الجسم المضاد؛ بعد التمنيع الرابع؛ كان الفرق بين الجرعتين 747 مع قيمتي GMTs بلغتا حوالي TY) ١19460 ميكروغرام) و7400 Veo) ميكروغرام) . وكانت استجابة الجسم المضاد ل TT ميكروغرام من AN1792 مع MPL مماثلة ٠ جداآ لتلك المتولدة باستخدام جرعة أعلى بعشرة أضعاف تقريباً من المولد المضاد For) ميكروغرام) المرتبط بالشب ««د1اة. وأدت إضافة MPL إلى مستحلب الزيت في الماء إلى تخفيض فعالية التركيبات بالنسبة إلى فعاليته مع MPL بصفته المادة المساعدة الوحيدة بمقدار كبير يصل إلى ٠. No وكانت المشتقة البالميتويلية palmitoylated derivative من AN1792 غير مولدة للمناعة بشكل كامل عند إعطائها في 0158 وأعطت عيارات معتدلة عند وجودها في ye مستحلب الزيت في الماء مع قيمتي VE Gal GMT و Veo للنزيفين الثالث والرابع. ونتجت أعلى عيارات للأجسام المضادة باستخدام مادة فرويند المساعدة Freund's adjuvant مع قيمة 1 ذروية بلغت حوالي AV ee وهي قيمة أكبر ب linia ٠0 تقريباً من قيم GMT للتركيبين الأكثر فعالية اللاحقين» MPL وجرعة عالية من 111792م/الشب صدلة. وأكثر المواد المساعدة الواعدة المعرفة في هذه الدراسة هي MPL والشب alum ومن Yo بينهماء يعتبر MPL هو المفضل لأنه يتطلب جرعة من مولد المضاد تقل ب ٠١ أضعاف لتوليد نفس استجابة الجسم المضاد كما حصل عليها باستخدام الشب alum ويمكن زيادة الاستجابة بزيادة جرعة مولد المضاد و/أو المادة المساعدة وباستمثال مواعيد التمنيع. وكان مستحلب الزيت في الماء عبارة عن مادة مساعدة ضعيفة Tan ل AN1792 وإضافة مستحلب الزيت في الماء إلى مادة MPL المساعدة قللت فعالية المادة المساعدة الفعلية ل MPL لوحده. Yo
و ". مستويات م.م في الدماغ عند الأسبوع VE تقريبآ خدرت الخنازير الهندية بشدة وسحب المائع Ad) الشوكي (CSF) واستأصلت الأدمغة من الحيوانات في de sane فرعية من المجموعات؛ تلك الممنعة باستخدام مادة فرويند المساعدة Freund's adjuvant (المجموعة 7)؛ MPL (المجموعة 5)؛ الشب م alum بجرعة عالية بلغت ٠١ ميكروغرام من 2211792 (المجموعة )٠١ والمجموعة الضابطة الممنعة ب PBS (المجموعة L(V ولقياس مستوى الببتيد AB شرح نصف كرة الدماغ hemisphere وحضرت جناسات homogenates من مناطق من حصان البحر؛ القشسرة والمخيخ في جوانيدين guanidine تركيزه © جزيئي. وخففت هذه الجناسات وحددت كمياتها بالمقارنة مع مجموعة محاليل مخففة لبروتين قياسي AB بتراكيز معروفة في أحد أشكال ٠١ 21158. وكانت مستويات بروتين AB في حصان البحرء القشرة والمخيخ متمائلة جدا لكل المجموعات الأربعة بالرغم من المدى الواسع لاستجابات الأجسام المضادة ل AB الناتجة عن هذه اللقاحات. وقيست مستويات AB المتوسطة فبلغت حوالي YO نانوغرام/غرام من النسيج في حصان البحرء YY نانوغرام/غرام في القشرة و7١ نانوغرام/غرام في المخيخ. وبناءً على ذلك؛ فإن وجود عيار مرتفع من الجسم المضاد الدائر بالنسبة ل AB لثلاثة أشهر LB في - بعض من هذه الحيوانات لم يغير مستويات 8م الكلية في أدمغتها. وكانت مستويات AB في CSF متماثلة Lila أيضاً بين المجموعات. ويشير انعدام التأثير الكبير للتمنيع ب AN1792 على 8 داخلي endogenous Lidl) إلى أن الاستجابة المناعية مركزة على JIC مرضية pathological formations من -AB 1. الاستجابة المناعية gal )3 مساعدة مختلفة في الفئران 7 استخدمت fi وبستر سويسرية Swiss Webster mice إناث عمرها ستة أسابيع لهذه الدراسة بحيث استخدم ١7-٠١ حيوان لكل مجموعة. وأعطيت جرعات التمنيع في الأيام صفرء؛ YA OVE 10 90 و ٠١١ تحت الجلد بحجم جرعة بلغ ٠٠١9 ميكرولتر. واستخدم بصفته المحلول المنظم لدرجة الحموضة buffer لكافة التركيبات. ونزفت الحيوانات بعد سبعة أيام من كل تمنيع ابتداء من الجرعة الثانية لتحليل عيارات الأجسام المضادة بواسطة (ELISA Yo ونظام المعالجة treatment regime لكل مجموعة ملخص في الجدول 7.
٠ ١7 الجدول ميكروغرا | vee Loan | dese لأ [wl oe الل | 792اله ا vel الا اد | sey | 88 ام AN1792 alum 05-1+شب
ملاحظات:
أ عدد الفئران في كل de gana عند بدء التجربة.
7 لوحظت المواد المساعدة. كان المحلول المنظم لدرجة الحموضة المستخدمة لكافة هذه التراكيب
° عبارة عن 088. وبالنسبة للمجموعة a 1A تضاف مادة مساعدة ولا مولد مضاد.
٠ق
A للأجسام المضادة ل 8842 في كل مجموعة مبينة في الجدول ELISA وعيارات أدناه. A الجدول ا | لاا ا [oar | .نه | va [eka] ow لل [ew ove [ve |v oo ا eT vn [vere [vies [en | اا |v [ver [ov [era [von | ows |e [ver [eve [ew [we | هدم |e
Ce [veer [wo en [wx [he [a [ew [ee |W |v ve [ve Te we [Ce a
Cr | er [vee [ar | ve [a ov ew [en [a | عا [rv ee [va [ve |e ow vw ay [vw [ven | ow | ١ oe Te Tew Tew ow orn [wa [ee [ee en owe [ven ee [oe |e on [vee [vee [on | جما ow ee Tove [we oe | ال « eon | ney | مقت Jveoee | mae fo] [eer] YER | ايد حيث AA 50 ويبين الجدول أن أعلى قيمة للعيارات حصل عليها كانت للمجموعات 4؛ ميكروغرام من .1101 و 5٠ (MPL ميكروغرام من ١١9 كانت المواد المساعدة عبارة عن °
MPL مع QS21
١٠ الفعالية العلاجية لمواد مساعدة مختلفة IX باستخدام مجموعة من Lisa محّولة PDAPP أجريت دراسة للفعالية العلاجية في فئران المواد المساعدة الملائمة للاستخدام في البشر لتحديد قدرتها على تقوية الاستجابات المناعية ل في الدماغ عن طريق المناعة. amyloid deposits وحث التخلص من الرواسب النشوانية AB محئولة جينياً؛ تراوحت PDAPP ذكور وإناث من فئران Jl ١8١ وتم الحصول على -Charles River Laboratories شهرء من شارلز ريفر لابوراتوريز Ao أعمارها من 7,59 إلى إلى 7 حيوان لتمنع ب ١١5 وصنفت الفئران إلى تسع مجموعات يحتوي كل منها على مخلوط مع مواد مساعدة مختلفة. ووزعت الحيوانات في المجموعات ANIS28 أو 2 و 0521؛ MPL calum فقا للجنس؛ العمر والنسل قدر الإمكان. وتشمل المواد المساعدة الشب
Freund's adjuvant مع كلا مولدي المضاد؛ ومادة فرويند المساعدة Ua glia يكون كل منها Ve مشكل في محلول AN1792 فقط. ومنتعت مجموعة إضافية ب AN1792 مخلوطة مع (FA) بدون مادة preservative thimerosal منظم لدرجة الحموضة مع المادة الحافظة ثيمروسال 5 .negative control لوحده كضابط سلبي PBS مساعدة. ومنّعت المجموعة التاسعة ب المتكتلة على النحو التالي: أذيب الببتيد 881-40 البضري AB وحضرت ببتيدات كاليفورنيا «Napa نابا » California Peptides Inc. من شركة كاليفورنيا ببتيدز إنك. «AN1528) vo من شركة كاليفورنيا ببتيدز إنك. AN1792) والببتيد 801-42 البشري (ME0S41 الدفعة «CA الدفعة 1080439)؛ قبل تحضير كل مجموعة من جرعات الحقن (California Peptides Inc. مباشرة؛ من مساحيق مجفدة تم تخزينها مجففة عند -١7م. ولهذا الغرض؛ أضيف ؟ ملغم من ودوم المزيج لإنتاج محلول أو deionized water مل من ماء منزوع الأيونات ٠9 الببتيد إلى ومن -AN1792 للذوبان في هذه الخطوة؛ على خلاف SLB 8111528 معلق منتظم نسبياً. وكان Y. تركيزه ضعف PBS) أضعاف ٠١ مركز PBS ميكرولتر من ٠ ثم أضيف جزء صغير بلغ ٠١١ تركيزه sodium phosphate جزيئي وفوسفات صوديوم ١,19 تركيزه NaCl يتكون من وعند هذه المرحلة بدأ 2211528 بالترسب. ودومت المعلقات (V,0 جزيئي؛ درجة الحموضة مرة أخرى وحضنت طوال الليل عند 77م لاستخدامها في اليوم التالي.
VA
AB و 0( أضيف الببتيد ١ (المجموعتان alum ولتحضير تركيبة الجرعات من الشب aqueous (محلول هلام هيدروكسيد الألومنيوم المائي Alhydrogel في 5 إلى ألهيدروجل كليفتون (Sargeant, 106. من شركة سارجينت؛ إنك. «AY تركيزه hydroxide gel aluminum
AB ميكروغرام من الببتيد ٠٠١ للوصول إلى تراكيز مقدارها (NI ولاية نيوجيرسي «Clifton أضعاف إلى أن بلغ حجم الجرعة ٠١ تركيزه PBS ملغم من الشب ««اه. وأضيف ١ م الكل تركيزه ضعف. ومن ثم مزج المعلق برفق لمدة ؛ ساعات PBS ميكرولتر في 7٠٠ النهائي تقريبا عند درجة حرارة الغرفة قبل الحقن. (المجموعتان ؟ و 1( أضيف مسحوق مجفد MPL ولتحضير تركيبة الجرعات من هاملتون «.Ribi ImmunoChem Research, Inc. (من شركة ريبي إميونوكيم ريسيرش؛ إنك. إلى محلول ثلاثي إثيل أمين مائي (67039-E0896B الدفعة ¢MT ولاية مونتانا «Hamilton ٠ ملغم/مل ودؤئم المزيج ١ بحيث بلغ التركيز النهائي / ١.7 تركيزه aqueous triethylamine ثانية لإنتتاج Ye لمدة a Ve إلى TO الناتج. وسخن المزيج إلى درجة حرارة تراوحت من معلق منتظم ومعتم قليلاً من المذيلات. وخزن المحلول عند ؛ م. ومن أجل كل مجموعة من
PBS ميكروغرام من الببتيد لكل جرعة في 00 ميكرولتر من ٠٠١ جرعات الحقن؛ مزج ميكرولتر من 785 لكل جرعة في ٠٠١ ميكروغرام من .1001 لكل جرعة )00 ميكرولتر) و No مباشرة قبل الاستخدام. borosilicate أنبوب من بوروسليكات ولتحضير تركيبة الجرعات من 0921 (المجموعتان ؟ و 7)؛ أضيف مسحوق مجفد الدفعة (MA ولاية مساشوستس Framingham فرامينجهام <Aquila (من شركة أكويلا ١ بحيث بلغ التركيز النهائي LY درجة الحموضة تتراوح من 6.6 إلى PBS إلى (A7018R أجل مجموعة من جرعات asa Yom ملغم/مل ودوم المزيج الناتج. وخزن المحلول عند x.
Yo PBS ميكرولتر من 5٠ ميكروغرام من الببتيد لكل جرعة في ٠٠١ مزج cial) ميكرولتر من 7185 لكل 1 YO و PBS ميكرولتر من YO ميكروغرام من 9521 لكل جرعة في مباشرة قبل الاستخدام. borosilicate جرعة في أنبوب من بوروسليكات (المجموعة Freund's adjuvant ولتحضير تركيبة الجرعات من مادة فرويند المساعدة
Vi) بنسبة PBS ميكرولتقر من ٠٠١ ميكروغرام من 8111792 في ٠٠١ ؛)؛ استحلب Yo v44
(حجم:حجم) باستخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة (CFA) Complete Freund's adjuvant في
حجم نهائي بلغ ٠ ميكرولتر للتمنيع الأول. ومن أجل التمنيعات اللاحقة؛ استحلب مولد المضاد بطريقة مماثلة باستخدام مادة فرويند المساعدة غير Incomplete Freund's A LSJ ٠ (IFA) adjuvant ومن أجل التركيبات التي تحتوي على المادة المساعدة الشب MPL calum أو
oo 05-21 مزج ٠ ميكروغرام لكل جرعة من 28211792 أو 2101528 مع ١ ملغم من الشب alum لكل de ja أو 5٠ ميكروغرام من .1001 لكل جرعة أو YO ميكروغرام من 05-21 لكل جرعة في حجم نهائي بلغ ٠ ميكرولتر من PBS وأعطيت عن طريق التطعيم تحث الجلد
في الظهر بين العظم الكتفي shoulder blades وبالنسبة للمجموعة التي تلقت FA استحلب
٠ ميكروغرام من 2101792 بنسبة 1:١ (حجم:حجم) باستخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة
(CFA) Complete Freund's adjuvant ٠ في حجم نهائي بلغ ميكروائر وأعطيت داخل البريتون من أجل التمنيع الأول؛ أما الجرعات الخمسة اللاحقة فاتبعت بجرعة معززة من نفس المقدار من مولد المناعة في مادة فرويند المساعدة غير الكاملة Incomplete Freund's adjuvant (IFA) وبالنسبة للمجموعة التي تلقت 8211792 بدون مادة مساعدة؛ مزج ٠١ ميكروغرام من
2 مع © ميكروغرام من ثيمروسال thimerosal في حجم نهائي بلغ 00 ميكرولتر من
ve 88 وأعطيت الجرعة تحت الجلد. وتلقت المجموعة التاسعة الضابطة Yoo ميكرولتر فقط من PBS وأعطيت الجرعة تحت الجلد. وأعطيت جرعات التمنيع كل أسبوعين Sle all الثلاثة الأولى ثم شهرياً في الأيام صفرء AC OT (YA (VT و .١١ ونزفت الحيوانات بعد
اليوم السادس إلى السابع من كل تمنيع ابتداءً من الجرعة الثانية لقياس عيارات الأجسام المضادة. وقتلت الحيوانات قتلاً Lamy بعد أسبوع واحد Lui من إعطاء الجرعة النهائية.
9 وقيست معدلات الإنتاج outcomes بواسطة معايرة ELISA لقياس مستويات AB و APP في الدماغ وبتقييم كيمياء الأنسجة المناعي للكشف عن وجود لويحات نشوائية في أجزاء الدماغ. وبالإضافة إلى ذلك؛ حددت عيارات الأجسام المضادة المتخصصة ب AB والتشعب المعتمد
على AB واستجابات السيتوكين cytokine
ويبين الجدول 9 أن Jef قيم لعيارات الأجسام المضادة ل 881-42 ظهرت باستخدام
CFA vo و 211792 وهي العيارات التي بلغت القيم الذروية بعد التمنيع الرابع GMT) الذروي:
٠١7
)؟) ثم انخفضت بنسبة 709 بعد التمنيع السادس الأخير. وكان متوسط العيارات الذروي peak mean titer الذي ظهر باستخدام MPL مع GMT) AN1792 الذروي: (YAAY أقل من ذلك الناتج باستخدام CFA بنسبة 7767 كما أنه تم الوصول a) مبكراً في برنامج التمنيع؛ بعد جرعات؛ وتبعه انخفاض وصل إلى AVA من القيمة الذروية بعد التمتنيع م السادس. وكان متوسط العيارات الذروي الناتج باستخدام QS-21 مع :GMT) AN1792 )2( أقل بحوالي © أضعاف من ذلك الناتج باستخدام MPL وبالإضافة إلى ذلك؛ كانت حركيات الاستجابة أبطاء حيث لزم إجراء تمنيع إضافي للوصول إلى الاستجابة الذروية. وكانت العيارات الناتجة عن استخدام AN1792 المرتبط بشب alum أكبر Gas من تلك الناتجة عن استخدام 08-21 وكانت حركيات الاستجابة أكثر سرعة. وبالنسبة ل AN1792 الذي تم ye تصريفه في 5 مع ثيمروسال thimerosal كان تواتر frequency وحجم العيارات أكبر بدرجة ضئيلة من تلك الناتجة ل PBS لوحده. وكانت العيارات الذروية الناتجة باستخدام MPL و GMT) AN1528 الذروي: 3 )٠٠١ أقل من تلك الناتجة باستخدام ANT792 بحوالي 6 أضعاف. وكان 2211528 المرتبط بشب alum ضعيف التوليد للمناعة وذي عيارات منخفضة ظهرت عند بعض الحيوانات فقط. ولم تلاحظ أي استجابات للأجسام المضادة في الحيوانات الضابطة
Vo الممنعة ب PBS لوحده.
كلا اع الجدول 6 ١ (NYY) ١ (YY) ١ )١/( AN1792 | بحر ARVARN! 176١ /MPL ا ١١7 16 4 7 الال بحل yoy ححا I (YAY £) (YAY) ARVARY) ARYARY! (Y/Y) AN1792 | (hehe) | (ee) ANIT2 | | مارم | مام | (ene) anise | مغلم Cem Lem Lem Lop) )٠١/١( )١( ١ (MY) ١ (MY) (Yv/ye) AN1528 | ض evn | on |e) ANISZS | | ورم | omy | قيبررسال Ov) | OY) | OV | OY) | (sie) | thimerosal Ooi) | (Vid) |] |(صتراء)] Ooi) | Of) ملاحظات: ' المتوسط الهندسي لعيارات الأجسام المضادة مقاسة مقابل 881-42 7 عدد المستجيبين لكل مجموعة
ا ونتائج تأثير المعالجة ب AN1792 أو 81211528 باستخدام مواد مساعدة مختلفة؛ أو ثيمروسال thimerosal على الحمل النشواني القشري cortical amyloid burden في فئران عمرها ٠ شهراً والمحددة بواسطة ELISA مبينة في الشكل 0). وفي فئران PDAPP الضابطة المعالجة ب PBS كان المستوى المتوسط ل AR الكلي في القشرة بعد ١١ شهرا ١8٠١7 ٠ نانوغرام/غرام. ولوحظت مستويات منخفضة جديرة SUL من AB في الفئران المعالجة ب 2 مع ذىا/فعل 2 مع شب AN1792 ‘alum مع MPL و0521 مع .AN1792 وبلغ الانخفاض dad ذات دلالة v,00 > p) statistical significance abl as) ( فقط عند استخدام AN1792 مع IFA/CFA إلا أن فعّالية التمنيع في خفض مستويات LS (AP هو مبين في المثالين 1 و17 زادت بشكل جوهري في الفئران التي عمرها ١١ شهرآً و VA شهراً. ٠ وبالتالي؛ يتوقع أن تبلغ التراكيب من AN1792 مع شب AN1792 calum مع MPL و AN1792 مع05-21 على الأقل قيم ذات دلالات إحصائية في معالجة الفئران الأكبر عمراً. وبشكل مغايرء أظهر 2 مع المادة الحافظة ثيمروسال thimerosal مستوى متوسط من AB يمائل Gp i ذلك المستوى في الفئران المعالجة ب PBS وتم الحصول على نتائج مماثلة عند مقارنة مستويات 8842 في القشرة. وبلغ المستوى المتوسط ل 8842 في المجموعات المعالجة ب Vo 5 الضابطة VIVE نانوغرام/غرام. ولوحظت مستويات متوسطة منخفضة جديرة SAIL بلغت VIE 5 170 1149 fF في الفثران المعالجة ب AN1792 مع AN1792 (IFA[CFA مع شب calum 2211792 مع AN1792 5 MPL مع 05-21 على الترتيب؛ مع بلوغ الانخفاض قيمة ذات دلالة إحصائية =p) 0+ ,+( للمجموعة المعالجة ب AN1792 مع JFA[CFA وبلغ المستوى المتوسط في الفثران المعالجة ب AN1792 مع ثيمروسال ١١٠9 thimerosal © نانوغرام/غرام من ABA2 وأجريت دراسة إضافية للفعالية العلاجية للمادة المساعدة/مولد المناعة في فئران PDAPP المحولة Gua مغايرة الزيجوت ذكور وإناث تراوح عمرها من 9 إلى ٠١,*# شهرً. وبلغت مدة الدراسة YO أسبوعاً باستخدام 40-749 حيوان لكل مجموعة معالجة؛ وبناءً على ذلك تراوحت أعمار الحيوانات من ١5 إلى 16,9 شهرآً عند نهاية الدراسة. وحددت Yo مجموعات المعالجة في الجدول ٠١ أدناه. vasa
Ya ٠١ الجدول المادة المساعدة مولد المناعة محلول التخفيف المنظم كيفية الإعطاء لدرجة الحموضة ميكروغرام) VO) ميكروغرام) YO) ميكروغرام) VO) ميكروغرام) VO) mseense| = || اعم [ees] مغير - TT -ببتيد مولد مضاد متعدد؛ 480 :٠١ والمختصرات المستخدمة في الجدول
PBS البريتون؛ Jala - IP تحت الجلد؛ - SQ لذوفان الكزاز (844-471)؛ 7 WA خاصية محلول ملحي فوسفاتي منظم لدرجة الحموضة؛ 158-51 - مادة مساعدة متوفرة تجارياً - sucrose _)3_Swfcitrate تركيبة من جليسين 1(0106ع/سيترات - GCS (IFA مشابهة ل 5 مجموعات المعالجة هو نفسه باستثاء AS وكان برنامج التمنيع المستخدم في المجموعة ؛ وهي مجموعة البرنامج المختصر ب 0521/8271792. وحقنت الفثران في الا AY AF ف ىق oF و14 ونزفت في الأسابيع 70 15 17604 cf oY الأسابيع صفرء و ؟ ثمان حقنات وتلقت المجموعة © أربع حقنات أثناء فترة ال ١ و5؟. وتلقت المجموعتان ©؟ أسبوع من الدراسة. وتلقت المجموعة 4؛ التي تمثل مجموعة البرنامج المغتصر ب 0-0٠ تحقن هذه المجموعة في alg فقط. A 7ء 4 و hua حقنات في الأسابيع 2 الأسابيع المتبقية من الدراسة؛ بالرغم من أنها نزفت في نفس برنامج النزف مثل بقية
PBS و QS2I/AN1792 «© مجموعات الدراسة لتتبع انحلال العيار. وعملت المجموعتان ؟ و على الترتيب؛ بصفتها ضوابط ايجابية وسلبية لهذه الدراسة.
افلا وحددت العيارات عن طريق معايرة عيار الجسم المضاد ل AR المجموعة ١١ مجموعة MPL-SE/AN1792 أظهرت متوسط عيار هندسي (GMT) ذروي بلغ ١7٠٠١ في الأسبوع 9؛ انخفض إلى 6147 بلغ ٠٠٠٠١ في الأسبوع 75. وفي البداية» ارتفعت عيارات MPL-SE بمعدل أعلى من المجموعة الضابطة QS21/AN1792 ° (المجموعة ؛) إلى حدٍ ما. المجموعة 7؛ مجموعة SA 51/ANT792 أظهرت عيارات عالية خلال الدراسة حيث وصلت إلى 6141 يزيد عن ٠٠٠٠٠١ في الأسابيع التسعة الأخيرة من الدراسة. المجموعة «F المجموعة الضابطة 0521/8141792؛ بلغ العيار قيمته الذروية في الأسبوع VY بقيمة GMT بلغت 16009. ثم انخفض العيار خلال الأسابيع الثمانية اللاحقة ٠ لينتهي إلى قيمة GMT بلغت AV ee وفشل أحد حيوانات هذه المجموعة في إطلاق عيار خلال فترة إجراء التجربة بالكامل. المجموعة of مجموعة برامج الحقن المختصر ب 0521/8201792؛ بلغ العيار iad ذروية بلغت 770٠0 في الأسبوع VY بعد © أسابيع من الحقن النهائي. ومن ثم انخفض العيار إلى 0347 بلغ 7٠٠١ في النزف النهائي (الأسبوع (YO وكما هو الحال في المجموعة ve الضابطة؛ فشل أحد الحيوانات في إطلاق عيار يمكن الكشف عنه؛ في حين فقد حيوان آخر كافة العيار عند نهاية فترة الانحلال. المجموعة 5؛ مجموعة PBS بمفرده؛ لم يكن لها أي عيارات. ولتقييم مستويات AB في القشرة؛ قيس مستوى AB و 281-42 الكلي بواسطة .ELISA ومجمل (Jal شرح أحد نصفي كرة الدماغ لتحديد نسيج القشرة؛ حصان البحرء والمخيخ ثم © تم تجنيسه في محلول جوانيدين guanidine منظم لدرجة الحموضة تركيزه 0 جزيئي وعوير لتحديد مستوى AB في الدماغ. وكانت نتائج AB و AB42 الكلية في القشرة متشابهة. Goals تحليل مان-ويتني إحصائي Mann-Whitney statistical analysis لتحديد الدلالة بين المجموعات مع < بقيمة 2 ١.05 تشير إلى تغير كبير في AB ولكل مجموعات المعالجة مستويات AB كلية منخفضة بشكل ملموس بالمقارنة مع vo المجموعة الضابطة PBS (انظر الجدول .)١١ وبينت المجموعة MPL-SE/AN1792 أكبر تغير
دلا في AB وكانت أفضل بشكل كبير من مجموعات المعالجة الأخرى. وكانت المجموعة المختصرة ب QS2I/ANITOZ مشابهة من حيث التغير الكلي في AB فيها للمجموعة الضابطة 1 التي تلقت ثمان حقنات. وكانت مستويات AB في المجموعة 51/241792 ISA منخفضة مثل المجموعة (81-7ه)ظطهاانذد "الدع . ° الجدول ١١ مستويات AR في القشرة Qs-21 Qs-21 ISA MPL-Se PBS (المجموعة (t (نانوغرام/غرام من النسيج) (نانتوغرام/غرام من النسيج) وو Ce Joel ١ وفي الختام؛ تعتبر المواد المساعدة <MPL-SE 158-51 و0521 المخلوطة مع AN1792 هي الفعالة في حث استجابة مناعية كافية بدرجة كبيرة لإعاقة ترسب BAB القشرة. <. تحليل dau ١ جمعت الأنسجة لإجراء فحص التغيرات المرضية في الأنسجة histopathologic examination عند انتهاء الدراسات الموصوفة في الأمثلة Ys YY وبالإضافة إلى ذلكء أجريت اختبارات لتحديد الكيمياء السريرية clinical chemistry وطبيعة الدم وأمراضه hematology على عينات الدم النهائية من المثالين ؟ و 7. وقيمت معظم الأعضاء الرئيسية بما في ذلك الدماغ؛ cpulmonary (ll الخلايا اللمفاوية ل101م1700؛ القناة المعدية المعوية gastrointestinal Vo الكبد liver الكلية «kidney الكظر adrenal والغدد التناسلية 800805. ومع أنه لوحظت آفات lesions فرادية في حيوانات الدراسة؛ إلا أنه لم توجد فروق واضحة؛ لا في الأنسجة المصابة ولا في حدة (AY) بين الحيوانات المعالجة ب AN1792 والحيوانات غير
ا المعالجة. ولم تلاحظ آفات مرضية نسيجية histopathological lesions فريدة في الحيوانات الممنعة ب AN-1528 بالمقارنة مع الحيوانات المعالجة ب PBS أو غير المعالجة. كما لم توجد فروق في مخطط الكيمياء السريرية clinical chemistry profile بين الحيوانات المعالجة بمادة مساعدة والحيوانات المعالجة ب PBS في المثال 7. ومع أنه Ad ارتفاع كبير في قيم العديد ٠ من الوسائط الدموية بين الحيوانات المعالجة ب 111792 ومادة فرويند المساعدة Freund's adjuvant في المثال 7 بالنسبة إلى الحيوانات المعالجة ب PBS إلا أن هذا النمط من التأثيرات متوقع عند المعالجة بمادة فرويند المساعدة Freund's adjuvant والمعالجة ضد التهاب البريتون 33a) peritonitis ولا يشير إلى أي تأثيرات عكسية ناتجة عن المعالجة ب AN1792 ومع أنه ليس Te Ja من التقييم السمّي إلا أنه تمت دراسة المرض الدماغي brain pathology في ٠ > فثران PDAPP بشكل شامل كجزء من نقاط الفعالية النهائية. ولم تلاحظ A تأثيرات عكسية على شكل الدماغ متعلقة بالمعالجة في أي من الدراسات. وتشير هذه النتائج إلى أن المعالجة ب 211792 كانت محتملة Tas وخالية على الأقل من التأثيرات الجانبية بصفة جوهرية. 1. المعالجة الوقائية باستخدام أجسام مضادة ل AB يختبر هذا المثال مقدرة أجسام وحيدة النسيلة ومتعددة النسائل مضادة ل AR مختلفة ve على تثبيط تراكم 8م في أدمغة الفئثران Gina Aad) مغايرة الزيجوت. .١ تصميم الدراسة تم الحصول على ٠١ فأر إناث وذكور من فأران PDAPP المحئولة الجينياً مغايرة الزيجوت»؛ تراوحت أعمارها من 8,9 إلى ٠١,© شهرآء من شارلز ريفر لابوراتوري Charles Rivet Laboratory وصنفت الفئران إلى ست مجموعات لمعالجتها بأجسام مضادة مختلفة Y. موجهة ضد AB ووزعت الحيوانات في المجموعات وفقآً للجنس؛ العمر؛ النسسل ومصدر الحيوانات قدر الإمكان. وكما هو مبين في الجدول ١٠؛ تشمل الأجسام المضادة أربعة أجسام مضادة فأرية وحيدة النسيلة متخصصة ب AB 2113 (موجهة ضد شقات AB من ١ إلى (VY 5 (موجهة ضد شقات AR من ١ إلى (VT 777 (موجهة ضد شقات AR من ١١ إلى YA وترتبط مع AN1792 مونمري وليس متكتل) و 21712 (موجهة ضد شقات AB من YY إلى Yo 7؛). وعولجت المجموعة الخامسة بجزء من جسم مضاد متعدد النسائل متخصص ب AB
VY. (تم تكوينه بالتمنيع باستخدام 2 متكتل). وتلقت المجموعة الضابطة السلبية المادة بمفردها من غير الجسم المضاد. (PBS المخففة؛ ملغم/كغم (على ٠١ وحقنت الأجسام المضادة وحيدة النسيلة بجرعة بلغت حوالى فرض أن أوزان الفئران = 00 غم). وأعطيت جرعات الحقن داخل البريتون كل سبعة أيام ومع أنه قيست .٠٠٠١ أعلى من AB م - بمعدل يكفل المحفاظة على عيارات الأجسام المضادة ل ب 2211792 المتكتل المستخدم Tua نظرآ لأنه لا يرتبط mAb 266 عيار ات منخفضة ل في الاختبارء فقط حوفظ على نفس برنامج capture antigen بصفته مولد المضاد الاحتجازي إعطاء الجرعات لهذه المجموعة. وأوقف إعطاء الجرعات للمجموعة التى تلقت الجسم المضاد وحيد النسيلة 2113 في الأسابيع الثلاثة الأولى نظرا لأن الجسم المضاد تم تصفيته بسرعة في الجسم الحي . ونزفت الحيوانات قبل إعطاء كل جرعة لقياس عيارات الأجسام المضادة. ٠ يوم. وقتلت الحيوانات قتلآ رحيماً ١97 واستمرت المعالجة لمدة ستة أشهر بعدد أيام كلي بلغ بعد أسبوع واحد من إعطاء الجرعة النهائية. ١١ الجدول تصميم التجرية soll المجموعة المعالجة | | »ا | الجسم المضاد للمعالجة_ | نوعية الجسم المضاد | النمط المتمائل
NA
مخلط 161 IgG! 101 | aps | mae | ١ 19622 ملاحظات: ٠١ أ . عدد الفئثران في المجموعة عند نهاية التجربة. حيث بدأت كل المجموعات ب vo . ic gana حيوانات لكل غير قابل للتطبيق. INA ب. ج. طغفد: جسم مضاد وحيد النسيلة.
١١١ | sal) . ¥ 3 والطرق ‘Materials and Methods أ. تحضير الأجسام المضادة Preparation of the Antibodies حضر الجسم المضاد متعدد النسائل ضد AB من الدم الذي جمع من مجموعتين من الحيوانات. حيث تكونت المجموعة الأولى من ٠٠١ فأر وبستر سويسري Swiss Webster إناث م تراوح عمرها ١ إلى A أسابيع. وممتعت في الأيام صفرء ١5 و 74 ب ٠٠١ ميكروغم من 2 مدمجاً مع LIFA/CFA وأعطيت الحقنة الرابعة في اليوم TT بمقدار نصف جرعة 2. ونزفت الحيوانات Lad عند ذبحها في اليوم £Y وحضر مصل الدم؛ وجمعت الأمصال فنتج حجم كلي بلغ TE مل. وتكونت المجموعة الثانية من YE فأر متماثل النمط الجيني إناث مع فئران PDAPP لكن غير محولة جينياً لجين APP البشري؛ تراوح عمرها من ١ - ٠ إلى 4 أسابيع. Ci ag في الأيام صفر؛ YA OE و +0 باستخدام ٠٠١ ميكروغم من 2 مدمجاً مع IFA/CFA ونزفت هذه الحيوانات دما كذلك عند ذبحها بعد TY يومآء وحضر المصل وجمعت الأمصال فنتج حجم كلي بلغ VE مل. وجمعت مجموعتي الأمصال. ونقي جزء الجسم المضاد باستخدام دورتين متعاقبتين من الترسيب باستخدام كبريتات الأمونيوم المشبع saturated ammonium sulfate تركيزه ٠ 78 وأجري للراسب الأخير عملية ve ديلزة ضد PBS واختبر لتحديد مستوى الذوفان الداخلي. وكان مستوى الذوفان الداخلي endotoxin أقل من ١ وحدة إنزيمية/ملغم -(EU/mg) وحضرت أجسام مضادة وحيدة النسيلة ضد AB من مائع استسقائي ascites fluid أولاء أزيل الدهن من المائع بإضافة كبريتات ديكستران الصوديوم sodium dextran sulfate المركز إلى المائع الاستسقائي المبرد بالثلج للحصول على تركيز نهائي بلغ 70.774. ومن ثم أضيف © ياه مركز مع التقليب للحصول على تركيز نهائي بلغ 14 ملي جزيئي. وفصل هذا المحلول بالطرد المركزي بتسارع بلغ ٠٠٠٠١ * تسارع الجاذبية الأرضية وطرحت الكريّة. وقلب المحلول الطافي supematant على الثللج بإضافة حجم مساو من كبريتات الأمونيوم المشبع saturated ammonium sulfate نقطة نقطة. وفصل المحلول 3a أخرى بتسارع بلغ god X ٠ الجاذبية الأرضية وطرح المحلول الطافي. وأعيد تعليق الكرية وأجري لها Yo عملية ديلزة مقابل ٠١ ملي جزيثي من ترس-110؛ HE جزيثي من NaCl درجة حموضته
١" ووضع هذا الجزء على عمود من نوع فارماكيا إف بي إل سي سيفاروز كيو .58 ونقي بالتصويل عكسياً باستخدام محلول يتدرج تركيزه Pharmacia FPLC Sepharose Q Column ملي جزيئي من ترس-107؛ درجة ٠١ إلى 7975© جزيئي من 11801 في eH ١,4 من V,0 حموضته عند طول موجة بلغ absorbance وحددت ذروة الجسم المضاد بدرجة الامتصاص ° المنقى ad نانومتر وجمعت الأجزاء المناسبة. وتميز تحضير الجسم ٠ بقياس تركيز البروتين باستخدام طريقة م80 والنقاوة باستخدام طريقة (SDS-PAGE) الرحلان الكهربائي على هلام متعدد أكريلاميد-دوديسيل كبريتات الصوديوم واختبر كذلك التجمع لتحديد sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis وحدة إنزيمية/ملغم. وحددت ١ مستوى الذوفان الداخلي. وكان مستوى الذوفان الداخلي أقل من ys بشكل تحكمي. Yo قيمة عيار بلغت ٠٠١ العيارات التي تقل عن
AP and APP Levels in the Brain في الدماغ APP و AB مستويات VY أزيلت CAB ضد alias بعد نحو ستة شهور من المعالجة باستخدام مستحضرات جسم الأدمغة من الحيوانات بعد أن أشبعت بمحلول ملحي . وحضتّر أحد نصفي كرة الدماغ لتحليل
APP و AB كيمياء الأنسجة المناعي واستخدم النصف الآخر من كرة الدماغ لتحديد مستويات ve ومصدر بروتين beta amyloid peptide ولقياس تراكيز الأشكال المختلفة من بيتا-ببتيد نشواني شرح نصف كرة الدماغ وحضرت جناسات «amyloid precursor protein (APP) J sii سلفي guanidine من مناطق حصان البحر والمناطق القشرية المخيخية في غوانيدين homogenates تركيزه © جزيئي. وخففت هذه الجناسات على نحو متسلسل وحدد مستوى الببتيد التشواني أو قياسي APP قياسي أو AB بالمقارنة مع مجموعة من عمليات التخفيف باستخدام ببتيد APP > ‘ELISA بتراكيز معروفة من نسق في جناسات ELISA الكلي و 01-42 الكلي المقاسة وفقاً لاختبار AB وتبين مستويات على )١( و )١7( ؛)١١( الكلي في المخيخ في الجداول A القشرة؛ وحصان البحر ومستوى للمجموعة الضابطة؛ التي لقحت باستخدام SAR الترتيب. وكان التركيز المتوسط ل 88©؛ أعلى بمقدار 7,1 ضعف في حصان البحر منه في القشرة (بلغت القيمة المتوسطة ve
١١١ نانوغم/غم في نسيج حصان البحر بالمقارنة مع 788 نانوغم/غم للقشرة). وكان 4 المستوى المتوسط في المخيخ للمجموعة الضابطة ( 5 نانوغم/غم من الأنسجة) أكبر من في حصان البحر. وتعتبر هذه المستويات مماثلة لتلك المستويات المذكورة die ضعف ٠ المحولة جينياً مغايرة الزيجوت ولها نفس العمر (انظر ما جاء عن PDAPP مسبقاً لفئران (V94Y ومعاونيه؛ Tohnson-Wood et DT Oss 0 مقاس في (AB وبالنسبة للقشرة؛ كان لإحدى المجموعات المعالجة مستوى متوسط من 0.06)؛ وقد >P) صورة 881-42 يختلف بشكل كبير عن ذلك المستوى للمجموعة الضابطة
AV كما هو مبين في الجدول AB تلقت هذه الحيوانات جسم مضاد متعدد النسائل ضد وانخفض المستوى المتوسط ل 8142م بنسبة 775 بالمقارنة مع المجموعة الضابطة بالمقارنة Zoo المعالجة هذه. وانخفضت المستويات المتوسطة ل 8142م بشكل كبير بنسبة Ve مع المجموعة الضابطة في مجموعة معالجة إضافية؛ وقد أعطيت هذه الحيوانات جرعة (++ 5477 =p) من 1005طغد
١ - { 0 1 ل ١ ٌ . 0 a وا ا AEE: 0 3 Eyed 1 13 4 2 < gl. ل | . Jt 3 > 8 E هل 23 لا 4 3 1204738 : - 9 + .. ب 3 + - 1 ا 3 3 ; 2 94 9, 4
J د 3 5 را ص <|r|=< 4 4, > z= 12 . 0 i 112% . * 0 بكم i I 2 3 < . ol w| > ? 2 1 -— 0 ١ == الإا 3 ِ ا واج : : 1 om >“ و 3 1 7 4
J = lez > ! 1° ~~ =i
SS
3 = i 1 لوا [alge (44)
Tr 3 | * 2 بيدا © | w| سي — | =3 و 1| (4ا ابا E 7 : + وا w| كك أ a هداس | << ١ EEE ا نت , ray 4 بزاع اح ١ 3 z - SR .
A “ Rat اح . . -
Fl > Ll
A= 2 Tl 1 alr © | انم rls Tow
Z| oe ola | XZ <| 7١| + +H +H i 2 قاس > احم H ale >| |Z = hdl Id o>] > al Zs اا | a الا اا + — rr pt أ 5 al + +1 +١ ب مايا TD]
Bly Le IT va | TTT
\Yo
وفي حصان البحرء لم تكن النسبة المئوية لمتوسط الانخفاض في AB الكلي المقتسرن بالمعالجة بجسم مضاد متعدد النسائل ضد AB (انخفاض بنسبة 750 =p 065 0,+( كبيرة مثل تلك الملاحظة في القشرة (انخفاض بنسبة (F710 (انظر الجدول (VE غير eal تكون القيمة المطلقة للانخفاض كانت أكبر بثلاث أضعاف تقريباً في حصان البحر منها في القشرة؛ ٠ فقد بلغ الانخفاض الكلي ©٠187 نانوغرام/غرام من الأنسجة في حصان البحر مقابل VV TOA نانوغرام/غرام من الأنسجة في القشرة. وعندما قيس الانخفاض على أساس مستوى الشكل نشواني الأصل amyloidogenic form بدرجة أكبر ل (AB 881-42 بدلا من AB الكلي؛ كان الانخفاض الناتج باستخدام جسم مضاد متعدد النسائل YO =p) aS +0 ,+( وانخفضت المستويات المتوسطة في المجموعات المعالجة ب 1005 mAb و 266 mAb بنسبة 777 و١77/
على الترتيب.
. = a ١ 13 ص ~ 1 3 alg = ا a 1 © a — J ٠" د20 3 2323333 د E 3 ا E Ef لا م 2 < =
EK 7> ل = ل 4 2 + >> ِ : i 4 ~~ J ب J] 1 1 2 مي 3 : . 7 3 + = «| > | < 5 J = 4 = : > a) > * - . 0 1 3 * E * a | a | a 3 الا = - “l=! >| < سر J = <l3-| > >| 0 = i 34 | ~~ ~ |< — 3 ريا | ويح س3 7 ل إ 0 . 3 ْ J . ِ 3 1 الي : ١ ا al - < 3 i < 3 « >| a ba + . lz سج | صر > a, el. > !
YF HEE 9
I
J ١١ ا 221 >> 83 ~ | س3 a = = 3 2 > |» — 3 3 r 95 ا ~ ا و3 ص ا ْ ب 4 7 E 3 a | > ws —
I: > | >» را ~
I <<] عي - > سر | وما glow | > i > ل1١ © |» 3 | ويا في تت I I f . Q 3 . a i 3 < > جح ب a 2اايوا 1: [YT |< بم أل ~ ١ - - 2 Sols 3 =| به ١١١ 3 | م pod
NY
ض i 3 | © > | > < - © | wr 3 = 3 aj,” wo > : | ١ “ 3- س3 | قم 0 << + +H +H + , i ul > 1 ويا | با يمر > = 3] © 3 . >
I =3 سن قا > ويا tg 3 1 ْ — | > > | > < 1 > — | > 3 i
Be —| 3 0 |e Q i *» | 0 سي | حر . 5: <L |< w | من 3 1 3 | wr | > -
I ale © | > 3-413 Q ١ الل <| «| + + + +H i < = —| > صر | > > 1 | w | > > vas el SE قا a ! w |< >| o 3 — | — — | > > /
و وقيس 8م الكلي في المخيخ كذلك (الجدول (VO وأظهرت هذه المجموعات التي أعطيت جرعات من الجسم المضاد متعدد النسائل ضد 88 والجسم المضاد متعدد النسائل 266 انخفاضات كبيرة في مستويات AR الكلي (انخفاض بنسبة 7547 وبنسبة oreo TY =p JET YALE =p مت على الترتيب) وكان للمجموعة المعالجة ب 1005 انخفاض كبير تقريباً 0 (انخفاض بنسبة 75 =p ذخات i vaq
0 ) ‘ = + 1 + 1 — : به ىن 3 لا = , i 3 ل 2 ] 1 Ble = * 4 9 ٠ © مب صا ١ سا 000 تا . *
E 2/4 8255] 5X3 4 أ 237 > El 2 J ا 0 58 3 7 |E £ J TFS .4 = 4 = 4 : > لج 1 3 : <7 4 J E
Ww, EC 3 = , 31 = = را <|r-|< 3 ؤ 3
I
3 ياوا اراسي ١ al JST =a al] < = i J 2 7١
A] إ ل 0 - ادا 5 .د ا olwlV 2325 [25
NA Es | عا 4 . 0 i “ 35s Tins 1
BRE
با |= He اي ا شو هاا ما 3 اي
F< حابم 3 م كا اانا Hw] 4 9 22 كاي or Tir] 1 va4
١ في القشرة والمخيخ من فثئران معالجة بجسم ELISA كذلك وفقآ ل APP وحدد تركيز
LAPP واستخدمت معايرتان مختلفتان لتحديد تركيز PBS مضاد وضابطة؛ ومعالجة ب هو الشكل المفرز من a) APP-WH كل من APP-alpha/FL وتُميز الأولى؛ المشار إليها ب ‘APP من full-length forms (FL) والأشكال كاملة الطول ٠ (AB الذي انقسم في سياق APP في AB فقط. وعلى النقيض من الانخفاض المقترن بالمعالجة ل APP- حين تميز الثانية © فعلياً في كل المجموعات APP مجموعة جزئية من المجموعات المعالجة؛ لم تتغير مستويات المعالجة بالمقارنة مع الحيوانات الضابطة. وتشير هذه النتائج إلى أن التمنيعات بأجسام مضادة
APP بدون أن تستتفذ AR MEG ل 8م بشكل كبير في القشسرة؛ وحصان البحر AR ومجمل القول؛ انخفضت مستويات والمخيخ في حيوانات معالجة بجسم مضاد متعدد النسائل وتكوّن ضد 8211792. ولمدى أقل ٠ لل amino terminal region الطرفية sie) أظهرت الأجسام المضادة وحيدة النسيلة لمنطقة كذلك تأثيرات YAY ومن ١176-١ من amino acids وبصفةٍ خاصة أحماض أمينية 81-2 معالجة كبيرة. ‘Histochemical Analyses ؛. تحليل كيمياء الأنسجة ب 8م في مجموعات جزئية من أدمغة مأخوذة Lelie قورن شكل لويحات متفاعلة vo 21712 ¢AB42 وجسم مضاد متعدد النسائل ل PBS من فئران في المجموعات المعالجة ب و 1005 نوعياً بتلك الأشكال للدراسات السابقة حيث اتبعت إجراءات التمنيع القياسية 6 باستخدام 042م. amyloid plaques ويحدث التغيير الأكبر في كل من نطاق ومظهر اللويحات النشوانية في الحيوانات الممنعة بالجسم المضاد متعدد النسائل ضد 8842. ويشابه انخفاض الحمل - © المقترنة بالخلايا AB النشواني؛ الذي ينخر شكل اللويحات والتفاعلية المناعية ل التأثيرات الناتجة من إجبراء التمنيع القياسي cell-associated AB immunoreactivity حيث ELISA إلى حد. بعيد وتدعم هذه الملاحظات نتائج standard immunization procedure الكلي و 80842 الكلي بإعطاء الجسم المضاد متعدد AB تحققت انخفاضات كبيرة في كل من النسائل ل 842م. Yo
Vy أيضاً عدد اللويحات النتشوائية في المجموعة J 28 وفي تقييمات نوعية مماثلة؛ المعالجة ب 1005 وتغير مظهرها؛ مع إظهار تفاعلية مناعية ل 8م مقترنة بالخلايا. للجسم المضاد متعدد النسائل ضد Ig جزء JB وبالنسبة للحيوانات المعالجة بمجموعة ضابطة؛ 7/97 بنسبة plaque burden حمل اللويحات (10D5) وأحد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة AB على حمل Laws وتبين أن ل 21712 التأثير المعتدل (+000 > P) على الترتيب JAY و 0 للدماغ بعد المعالجة ب مرةغطدم Micrographs اللويحات. وتبين الرسوم التخطيطية الدقيقة وجود رواسب مشتتة وعدم وجود عدد من اللويحات المدمجة الأكبر في المجموعة المعالجة ب .0088م بالنسبة إلى الحيوانات المعالجة بالمجموعة الضابطة :Measurement of Antibody Titers قياس عيارات الجسم المصاد . © ١ نزفت مجموعة جزئية من ثلاثة فئثران مختارة Ll pie من كل مجموعة قبل كل تطعيم داخل البريتون inoculation 1005801600821 بحيث كان عدد مرات النزف الكلي ٠ مرة. وقيست عيارات الجسم المضاد بصفته جسم مضاد مرتبط ب 8142م باستخدام ELISA الطبقي باستخدام ألواح متعددة العيون بلاستيكية plastic multi-well plates مغلفة ب 81-2 كما وصف بتفصيل في المواد والطرق العامة -General Materials and Methods ويبين ١ متوسط العيارات لكل نزف في الأشكال من VT إلى VA للجسم المضاد متعدد النسائل والأجسام المضادة وحيدة النسيلة 1025 و 21712 على الترتيب. وبلغ متوسط العيارات نحو ٠ خلال هذه الفترة الزمنية لتحضير الجسم المضاد متعدد النسائل وكانت أعلى من هذا المستوى بدرجة طفيفة للحيوانات المعالجة ب 1005 و 21F12 ؟. استجابات تشعبية لمفاوية :Lymphoproliferative Responses spleen cells باستخدام خلايا طحال AR قيس تشعب الخلايا اللمفاوية المعتمد على Y.
Cua a أيام من تسريب الجسم المضاد النهائي. واستنبتت الخلايا المحصودة A حصدت بعد لكل عين؛ لمدة © أيام في وجود 881-40 بتركيز بلغ © ميكرو جزيئي للتتبيه. ٠١ بتركيز استنبتت خلايا إضافية باستخدام مسبب انقسام فتيلي للخلايا 0051006 control وكضابط إيجابي استنبتت الخلايا بدون إضسافة negative control وكضابط سلبي «PHA 1 cell mitogen T peptide Ain Yo
VT
مسنة ممنعة بشكل سلبي PDAPP مأخوذة من فئران splenocytes طحالية LMA ونبهت بأجسام مضادة ل 8م مختلفة في أنبوب الاختبار باستخدام 8111792 وقيست الاستجابات التشعبية واستجابات السيتوكين ع0ت01ن. وكان الهدف من هذه المعايرات تحديد فيما لو «antigen presentation تمثيل المولدات المضادة passive immunization سهّل التمنيع السلبي ولم تلاحظ استجابات LAN1792 المتخصصة ب T استجابات خلايا priming م ومن ثم برمجة والخلايا المتشعبة المتخصصة ب 8211792 في فئران منتعت بشكل سلبي cytokine السيتوكين AB بأجسام مضادة ل
FURTHER STUDY OF PASSIVE IMMUNIZATION دراسة إضافية للتمنيع السلبي .17 وفي دراسة ثانية؛ أعيدت المعالجة باستخدام الجسم المضاد 1015 واختبر جسمان وتلقت 16CT1(ABssaz) إضافيان؛ وحيدا النسيلة (ى306)28 و AB مضادان ل ٠ أو جسم مضاد مطابق للنمط المتمائل غير مناسب PBS المجموعات الضابطة إما وكانت الفئران أكبر من فران الدراسة ٠. (TM2a) irrelevant isotype-matched antibody (TM2a) وكان «(heterozygotes ومغايرة الزيجوت Tog ١١ إلى ١١,8 السابقة (تراوح عمرها من تصميم التجربة مماثلاً بطريقةٍ أخرى. وقلل الجسم المضاد 1005 حمل اللويحات بعد 76 أشهر أو المجموعات الضابطة للجسم PBS بالنسبة إلى 78٠0 المعالجة مرة أخرى بأكبر من pa vo
AB وكان أحد الأجسام المضادة الأخرى ضد .)0.009 =p) المضاد المطابق للنمط المتماثئل وعلى النقيض من .)٠007 =p) ZAT و 306 فعالاً على حدٍ سواء؛ فنتج انخفاض بنسبة ذلك؛ فشل الجسم المضاد الثالث ضد الببتيدء 16011؛ في أن يكون له أي تأثير على حمل ووضحت هذه AB; — ELISA اللويحات. وحصل على نتائج مشابهة باستخدام قياسات في عدم وجود مناعة AB peptide النتائج في أن الجسم المضاد الذي يستجيب ضد الببتيد Y.
JS لكن ليس PDAPP في فئران amyloid deposition خلايا 7 كاف لخفض الترسب النشواني فعّالة. وتكون الأجسام المضادة الموجهة نحو مغيرات خاصية AB الأجسام المضادة ل
AB من ١-ه أو من -لال amino acids تشتمل على أحماض أمينية epitopes فعالة بصفة خاصة. va4q
ومجمل (JAN لقد تبين أن الأجسام المضادة المعطاة جرعة بشكل سلبي ضد AB قللت حجم ترسب اللويحات plaque deposition في نموذج فأري مصاب بمرض الزهيمر dic 5. Alzheimer’s disease الحفاظ على تراكيز مصل معتدلة بدرجة كبيرة (تراوحت من 7١-٠ ميكروغرام/مل)؛ كان للأجسام المضادة منفذآً للوصول إلى ONS بمستويات كافية ٠ ا لزخرفة اللويحات .B-amyloid plaques B= sill ولم يكن دخول الجسم المضاد إلى CNS بسبب الكسر غير السوي لحاجز الدماغ الدموي blood-brain barrier نظراً لأنه لا توجد هنالك زيادة في النفاذية الوعائية vascular permeability كما قيس عن طريق إيفانز بلو Evans Blue في فثران .PDAPP وبالإضافة إلى ذلك؛ كان تركيز الجسم المضاد في النسيج اللبي الدماغي brain parenchyma لفئثران PDAPP مسنة مماثلاً لذلك التركيز في الفئثران غير Ve المحولة جينياً non-transgenic mice حيث بلغ 701 من تركيز الجسم المضاد في مصل الدم serum (بإهمال النمط المتمائل). XII مراقبة ارتباط الجسم المضاد MONITORING OF ANTIBODY BINDING لتحديد إن كان من الممكن أن تؤثرالأجسام المضادة ل 8م ile 5 في (ONS اختبرت أدمغة مأخوذة من فئران مشبعة بمحلول ملحي saline-perfused mice عند نهاية المثال XI Vo لتحديد وجود أجسام مضادة أعطيت في دم محيطي -peripherally-administered antibodies وعرضت أقسام دماغية قرّية غير ثابثة unfixed cryostat brain sections إلى مفاعل فلورة fluorescent reagent ضد غلوبلين مناعي فأري IgG-Cy3) mouse immunoglobulin مأخوذ من ماعز ضد فأر). وزخرفت اللويحات ضمن دماغ المجموعات المعالجة ب 1005 و 376 بقوة باستخدام الجسم المضاد؛ في حين لم يكن هنالك صبغة في المجموعة المعالجبة ب 16011. © وللكشف عن الحجم الكامل لترسب اللويحات؛ تفاعلت أقسام متسلسلة لكل دماغ مناعياً مع جسم مضاد ل AB ثم مع مفاعل ثانوي .secondary reagent وكان ل 1005 و (3D6 بعد الإعطاء في دم محيطي Tha ٠ للوصول إلى معظم اللويحات في 0115. وانخفض حمل اللويحات بدرجةٍ كبيرة في هذه المجموعات المعالجة بالمقارنة مع المجموعة المعالجة ب 160611. وبينت هذه البيانات أنه يمكن أن تدخل الأجسام المضادة التي أعطيت في دم محيطي؛ إلى ONS حيث
يمكنها إجراء التنقية النشوائية amyloid clearance مباشرة. ومن المحتمل أن يكون ل 16011 Tain للوصول إلى اللويحات لكن يكون غير Ta على الارتباط. XIV معايرة فحص خارج الجسم الحي لقياس فعالية الجسم المضاد ضد الرواسب النشوانية EX VIVO SCREENING ASSAY FOR ACTIVITY OF AN ANTIBODY AGAINST AMYLOID DEPOSITS ٠ لاختبار تأثير الأجسام المضادة على تنقية اللويحات؛ أجريت معايرة خارج الجسم الحي حيث استنبتت خلايا غرائية عصبية دقيقة أولية primary microglial cells باستخدام أقسام قرّية غير ثابتة من أدمغة بشرية مصابة ب AD أو أدمغة PDAPP (Jy مصابة ب AD وحصل على خلايا غرائية عصبية دقيقة من قشور مخية DBA/2N (J il cerebral cortices ٠ | حديثة الولادة neonate (تراوح عمرها من يوم إلى ثلاثة أيام). وفصلت القشور ميكانيكياً في 7 (المحلول الملحي المتوازن لهانكس Hanks’ Balanced Salt Solution سيغما (Sigma باستخدام DNasel (يحصل عليه من شركة سيغما (Sigma بتركيز ٠٠ ميكروغرام/مل. ورشحت الخلايا المفصولة باستخدام مصفاة خلايا strainer ااه يبلغ طولها ٠٠١ ميكرومتر (من نوع فالكون (Falcon وفصلت بالطرد المركزي بسرعة ٠٠٠١ دورة/دقيقة لمدة خمس vo دقائق. وأعيد تعليق الكريّة pellet في وسط نمو growth medium (يحتوي على غلوكوز glucose مرتفقع الوزن الجزيئي FBS (DMEM تركيزه rmGM-CSF 7٠١ تركيزه YO نانوغرام/مل) وطليت الخلايا بكثافة دماغين لكل قارورة استنبات بلاستيكية plastic culture flask من نوع 5. وبعد 7 إلى 9 أيام؛ دورت القوارير على هزاز مداري orbital shaker بسرعة ٠٠١ دورة/دقيقة لمدة ساعتين عند a TY وفصل المعلق الخلوي cell suspension Y. بالطرد المركزي بسرعة ٠٠٠١ دورة/دقيقة وأعيد تعليقه في وسط المعايرة. وثبتت الأقسام القرّية ذات قطر ٠١ ميكرومتر لأدمغة فئران PDAPP مصابة ب AD وأدمغة بشرية مصابة ب AD (بعد فترة قتل زمنية أقل من ؟ ساعات) وهي مذابة على ليسين متعدد poly-lysine يغلف شرائح تغطية زجاجية coverslips ووضعت في عيون لألواح استتبات نسيجية tissue culture plates ذات le YE وغسلت شرائح التغطية مرتين باستخدام وسط 1s معايرة يتكون من 115774 (وسط يخلو من مصل خلايا ima يحصل عليه من شركة
Ve بنسيلين cglutamine غلوتامين 7١ تركيزه FBS باستخدام (Gibeo BRL جيبكو بي ار إل (يحصل عليه من rmGM-CSF /ستربتوميسين ه80©0107» و © نانوغم/مل من penicillin مركزة مرتين AP وأضيفت أجسام مضادة ضابطة وضد (D 8 8 شركة آر آند دي ميكروغم/مل نهائي) لمدة ساعة واحدة. ومن ثم بذرت الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة عند 0) خلية/مل من وسط المعايرة. وحوفظ على المستنبتات في حاضن رطب "٠١ x A كثافة بلغت ٠ لمدة 4 7 ساعة أو ( © 538 HCO, و a YY (عند درجة حرارة بلغت humidified incubator / 4 تركيزة paraformaldehyde أكثر. وعند نهاية الحضن؛ ثبتت المستنبتات ببارافورمالدهيد وصبغت الأقسام .7 0١ وجعلت منفذة باستخدام تريتون إكس-١٠٠ 100-100 تركيزه ثم باستخدام المركب الاقتراني من biotinylated 3D6 باستخدام 306 بيوتينيلي (يُحصل عليه من شركة جاكسون اميونو ريسيرش Cy3/ streptavidin ستربتافيدين ٠ وكان بالإمكان رؤية الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة خارجية . (Jackson ImmunoResearch ولوحظت المستنبتات باستخدام مجهر (DAPI) nuclear stain المتشأ عن طريق الصبغة النووية وأخذت (TE300 «Nikon (من نوع نيكون inverted fluorescent microscope فلورة مقلوب من 0181181 camera باستخدام آلة تصوير رقمية photomicrographs الصور المجهرية الضوئية وفيما يتعلق . (Diagnostic instruments (أدوات تشخيصية SPOT نوع 7 باستخدام برنامج ae urea Loe استخلصت المستنبتات في (Western blot analysis لبقعة ويسترن Ta, بتحليل من buffer في عينة محلول منظم لدرجة الحموضة 1:١ جزيئي؛ وخففت بنسبة A تركيزها JAN تركيزه tricine gel وحتملت على هلام تريسين reducing tricine تريسين مختزل عرّضت البقع إلى immobilon وبعد النقل على اموبيلون . (Novex (من نوع نوفكس وطورت باستخدام HRP ثم إلى جسم مضاد لفأر مقترن ب pabAB42 ميكروغم/مل من * x. (Amersham (يُحصل عليه من شركة أميرشام ECL 16011 في وجسود PDAPP وعندما أجريت المعايرة باستخدام أقسام دماغية من الذي يعتبر غير فغّال في الجسم الحي)؛ حوفظ على اللويحات AB (أحد الأجسام المضادة ل وعلى النقيض من ذلك؛ عند استنبات phagocytosis النشوانية.8 سليمة ولم يلاحظ الالتهام أقسام متجاورة في وجود 1005؛ تحركت الرواسب النشوانية بشكل كبير؛ وبينت الخلايا vo
الغرائية العصبية الدقيقة وجود حويصلات ملتهمة phagocytic vesicles عديدة تحتوي على AP وحصل على نتائج مماثلة باستخدام أقسام دماغية مصابة ب م/؛ حيث حث 1105 التهام اللويحات المصابة ب (BAD حين كان 16011 غير فعال. وبالإضافة إلى ذلك؛ زودت المعايرة نتائج مشابهة عندما أجريت باستخدام DIA غرائية عصبية دقيقة فأرية أو بشرية؛ ° وباستخدام أجسام مضادة أولية primate antibodies من فأر ‘ أو من <i ضد AB ويبين الجدول ١76 إن كان حصل على الارتباط و/أو الالتهام لتخصص ارتباط أجسام مضادة مختلفة عديدة. ويمكن إدراك أن الأجسام المضادة التي ترتبط بمغيرات خاصية ضمن الأحماض الأمينية amino acids من Y=) تعمل على ربط وتنقية الرواسب النشوانية؛ في حين تعمل الأجسام المضادة التي ترتبط بمغيرات خاصية ضمن الأحماض الأمينية amino acids من ٠ ؛-١٠ على ربط الرواسب النشوانية بدون تنقيتها. ولا تعمل الأجسام المضادة التي ترتبط بالطرف الكربوني C-terminal لمغيرات الخاصية للشضق ٠١ residue على ربط أو تنقية الرواسب النشوانية.
yr الجدول : تحليل تخصص مغير الخاصية
EE
مغير الخاصية النمط المتمائتل النوع عند الطرف النتروجيني جسم مضاد وحيد النسيلة + + IgG2b 5-١ 36 + + IgGl ب“ 1005 + + IgG2a إلا 2208 - + IgGl Yeo 6EI0 —- + من جرذ 1 ١٠. 148 ا أإحلذا - - من جرذ 1 YA=Y 18G11 — — IgGl يخا 266 - - IgG2b ملحلا 2212 النوع عن الطرف الكربوني - - IgGl .مع 203 = = IgGl -م-7 16011 - = IgG2a EY— 21F12 + + 1-١ لأرنب (CFA) + + v-v لفأر (cra + + لفأر إل sn) + + 9-١ لقرد )05-21( + + لفأر Marin) (AP النتائج التي حصل عليها باستخدام أجسام مضادة عديدة ضد VY ويبين الجدول في معايرة خارج الجسم الحي وتقليل حمل اللويحات في lal! بمقارنة مقدرتها على حث
الجسم الحي في دراسات انتقال سلبية. ومع أن 16011 و 21712 يرتبطان مع ببتيد AB تخليقي متكتل aggregated synthetic AB peptide بقوة اجتذاب avidity كبيرة (انظر الجدول ١ ( إلا أن هذان الجسمان المضادان غير قادرين على التفاعل مع لويحات Bal sis في أقسام دماغية غير ثابتة؛ ولا يستطيعان إحداث الالتهام في المعايرة خارج الجسم الحي؛ ولا يكونا فالين ٠ في الجسم الحي . وكان 1005 356 والجسم المضاد متعدد النسائل ضد AR كلها 28 Al على كل القياسات ADEN ويرتبط الجسم المضاد 2208 بشكل قوي بالشكل المناظر ل Ap الطبيعي حيث يستخدم حمض أيزو-اسبارتيك Lia se iso-aspartic acid عن حمض أسبارتيك aspartic acid عند الموضعين ١ و 7. وتبين هذه النتائج أن الفعالية في الجسم all كانت سبب التنقية المباشرة التي يسببها الجسم المضاد للويحات ضمن (ONS وتتنبأ المعايرة خارج الجسم الحي عن المعايرة في الجسم الحي. ولقد استخدمت نفس المعايرة لاختبار تنقية الجسم المضاد ضد جزء سينيوكلين synuclein يشار إليه ب NAC ولقد تبين أن السينيوكلين synuclein عبارة عن بروتين مرافق للويحة النشوانية. وتلامس الجسم المضاد ل NAC مع عينة نسيجية دماغية تحتوي على لويحات نشوائية؛ خلايا غرائية عصبية دقيقة؛ كما ذكر مسبقا. واستخدم مصل الأرنب Rabbit serum Vo بصفته مادة ضابطة. وبينت المراقبة اللاحقة انخفاضاً Us gale في عدد وحجم اللويحات مما يشير إلى فعالية التنقية للجسم المضاد.
ا الجدول :١١7 معايرة خارج الجسم al) بصفتها المتنبئ عن المعايرة في الجسم الحي. الجسم المضاد التمط المتماثل قوة الاجتذاب ل AP الارتباط باللويحات الفعالية خارج الفعالية في المتكتل (بيكو جزيني) Bas الجسم الحي الجسم الحي وحيد النسيلة ev.
IgG2b 3D6 + + + IgGl 1005 3 + ّ| + + IgGl 16C11 4 - - - ou IgG2a 21F12 - - - IgGl TM2a - - - - متعدد التسائل 7-١ مخلط Te + + + واستخدمت الدراسة المجهرية متحدة البؤر Confocal microscopy للتأكيد على أن AB م كان في الداخل أثناء سير المعايرة خارج الجسم الحي. وفي وجود الأجسام المضادة الضابطة؛ بقيت الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة خارجية المنشاً في المستوى متحد البوّر confocal plane فوق النسيج؛ ولم يكن هناك حويصلات ملتهمة تحتوي على AB وبقيت اللويحات سليمة ضمن القسم. وفي وجود 1005؛ حيث توجد كل مادة اللويحات في Day gall ضمن الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة خارجية Lisa ولتحديد مصير الببتيد الداخلي؛ استخلصت المستنبتات ٠١ المعالجة ب 1005 باستخدام يوريا ©« تركيزه A جزيئي عند فترات زمنية مختلفة؛ واختبر بتحليل بقعة ويسترن. وبعد فترة زمنية بلغت ساعة واحدة؛ حيث لم يحدث بعد التهام؛ كشف التفاعل مع الجسم المضاد متعدد النسائل ضد AP عن شريط قوي وزنه الجزيثشي ؛ كيلودالتون (مناظر للببتيد (AB وانخفضت التفاعلية المناعية ل 88 في اليوم الأول ولم يكون لها وجود في اليوم الثالث. وبناءآ على ذلك؛ يمكن أن يؤدي الالتهام الذي يسببه الجسم Vo المضاد ل JAR انحلاله. v44
AR
Fo- Fo ولتحديد إذا كان الالتهام في المعايرة خارج الجسم الحي يحدث في وسط ومع أن شدفات AB المضاد ل 3D6 حضرت شدفات 17)850772 للجسم المضاد 0 احتفظت بمقدرتها الكلية على التفاعل مع اللويحات؛ إلا أنها غير قادرة على إحداث F(ab')2 وبالإضافة إلى ذلك؛ قد microglial cells الالتهام عن طريق الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة الالتهام باستخدام الجسم المضاد الكامل عن طريق مادة مفاعلة ضد مستقبلات blocked يعاق o تحدث al داخل الجسم AB وتشير هذه البيانات إلى أن تنقية . (CD16/32 الفأرية (مضاد Fo ‘Fe بواسطة التهام تسببه مستقبلة
Blood Brain Barrier دماغي دموي Jala مرور الأجسام المضاد من خلال XV يحدد هذا المثال تركيز الجسم المضاد الذي صرّف إلى الدماغ بعد الحقن داخل الوريد -PDAPP لفئران سوية أو فقران peripheral tissue إلى نسيج محيطي intravenous injection ٠١ تركيزه 0,4 7. وشرحت NaCl الفئران السوية الضابطة ب PDAPP وأشبعت فئران وتمت مجانسة La a frozen مناطق دماغية (حصان البحر أو القشرة) وجمدت dissected وكشف عن protease inhibitors ومثبطات بروتياز 70,١ تركيزه triton الدماغ في تريتون
IgG وغلف .ELISA ل Gy extracts في الخلاصات Immunoglobulin الغلوبلين المناعي capture بصفته مادة مفاعلة احتجازية RIA المأخوذ من ماعز ضد فأر ل 200/2 على لوح yo عه وحضن المصل أو خلاصات الدماغ لمدة ساعة واحدة. وكشف عن الأنماط المتماثلة أو 160250-18 ضد فأر (تقدمه شركة كالتاج 1gG2a-HRP باستخدام معت 01ل 8 بتركيز بلغ ONS وقد وجدت أجسام مضادة؛ بصرف النظر عن النمط المتمائل؛ في (Caltag 18022 من تركيز el في الدم. فعلى سبيل المثالء عندما كان تركيز1801 في الدم ٠٠1 من تركيز 11020 بثلاثة أضعاف»؛ ويوجد كل ed بثلاثة أضعاف؛ كان تركيزه في الدماغ vy.
Gol من مستواهما المعني في الدم. ولوحظت هذه النتيجة في كل من 7٠0,١ منهما بتركيز
PDAPP وبذلك لا يكون ل nontransgenic وغير المحولة جينياً transgenic Lia المحوّلة على نحو فريد. leak blood brain barrier تسرب دماغي دموي Gala
Yo
م 7. الفعالية العلاجية لببتيد AB في تشكيلة لببتيسد مولد مضا متعدد Therapeutic Efficacy of AN AB PEPTIDE IN MAP CONFIGURATION أجريت دراسة الفعالية العلاجية للمادة المساعدة/مولد المناعة في ذكور وإناث فثران PDAPP محولة جينياً مغايرة الزيجوت heterozygous تراوح عمرها من 4 إلى ٠,6 شهر م لاختبار فعالية بروتين اندماجي يشتمل على 2801-7 في تشكيلة ببتيد مولد مضاد متعدد multi-antigenic peptide (MAP) رباعية الأقسام tetrameric كما وصف أعلاه. وبلغت مدة الدراسة Yo أسبوعاً باستخدام من 9؟ إلى 50 حيوان لكل مجموعة معالجة treatment مهع؛ وبناء على ذلك تراوح عمر الحيوانات من ١5 إلى Tied ١6,5 عند نهاية الدراسة. وكانت المنهجية المستخدمة في هذه الدراسة مشابهة لتلك المستخدمة في الدراسة العلاجية ded ٠ مساعدة مختلفة في المثال 7117 أعلاه. وحددت مجموعات المعالجة في الجدول YA أدناه. الجدول VA المادة المساعدة مولد المناعة محلول مخفف منظم كيفية الإعطاء لدرجة الحموضة ٠٠١ ميكروغرام) ميكرولتر) ميكروغرام) ميكرولتر) ETT ميكرولتر) الاختصارات في الجدول: MAP = ببتيد مولد مضاد متعدد TT ¢multi-antigenic peptide = مغير خاصية خلايا 1 لذوفان Vo الكزاز SC f(A EE—-AY ) tetanus toxoid t-cell epitope = تحت الجلد IP ‘subcutaneous = داخل البريتون PBS tintraperitoneally = محلول ملحي منظم بالفوسفات phosphate buffered عدزاه؟؛ GCS = تركيبة من غليسين/سترات/سكروز -glycine/citrate/sucrose
VEN
متماثلاً لجميع مجموعات المعالجة. immunization schedule وكان جدول التمنيع مع حدوث نزف 516605 في YE 7٠0 VT OY A 4؛ oF وحقنت الفئران في الأسابيع صفر؛ ثمان حقن ١ و FY ء١ وتلقت المجموعات YO و YY AV OY A oF الأسابيع على الترتيب؛ بصفتها ضوابط إيجابية PBS وعملت المجموعات 7؛ 7 0521/8201792 و لهذه الدراسة. positive and negative controls م | وسلبية
AB للجسم المضاد ل titer assay وحددت العيارات عن طريق المعايرة العيارية كان لها مستويات عيار (CFA/IFAIMAP المجموعة ١؛ المجموعة(801-7:17) ثم انخفض AY فقط في الأسبوع ١٠١ التي تم الوصول إليها GMT منخفضة. وبلغت ذروة فأرا لم تظهر أي Ye ووجد أن ثلاث فئران من بين ال YO في الأسبوع ٠٠١ إلى 6147 بلغ عند نهاية الدراسة. 50٠0 فئران أخرى عيار بلغ ١7 عيار ولم تتجاوز ٠ المجموعة ؟؛ المجموعة الضابطة 0521/8<11792؛ بلغت ذروة العيار في الأسبوع انخفض العيار خلال الأسابيع الثمانية اللاحقة لينتهي Beg) Teen بلغت GMT بقيمة VY وفشل أحد حيوانات هذه المجموعة في إطلاق عيار خلال سير AY بلغت GMT إلى قيمة التجربة الكامل. وحدهاء لم يكن لها أي عيارات. PBS مجموعة oF المجموعة في القشرة مقارنة AB أظطهرت كلا المجموعتين المعالجتين انخفاض كبير في مستويات وخفضت المجموعة (V4 (انظر الجدول PBS مع المجموعة الضابطة التي أعطيت بالرغم من PBS بدرجةٍ كبيرة بالمقارنة مع المجموعة الضابطة AB «CFA/IFA:MAP(ABL-7)
AB العيارات المنخفضة نسبياً للأجسام المضادة ل
VEY
في القشرة AB مستويات ١9 الجدول osm | مهس | oes (ناتوغرام/غرام من الأنسجة) (نانوغرام/غرام من الأنسجة) ب ا ل Te] المناعة 881-7248 فعالاً في حث استجابة مناعية كافية alge وفي النهاية؛» يكون بدرجة كبيرة لإعاقة ترسب 8م في القشرة. في القرود AR عمل خريطة مغير خاصية للاستجابة المناعية ل 1
EPITOPE MAPPING OF IMMUNOGENIC RESPONSE TO AB IN MONKEYS °
AN1792 باستخدام immunization للتمنيع primate يحلل هذا المثال استجابة الرئيسيات (4؛ إجنس/مجموعة) monkeys عشرة مجموعة من القرود sa] (أي؛ 81-2). منعت 05-21 ميكروغرام) بالإضافة إلى مادة ٠0١ أو VO (بمقدار جرعة بلغ AN1792 باستخدام sterile dextrose ميكروغرام) أو دكستروز معقم ٠٠١ أو ٠ المساعدة (بمقدار جرعة بلغ المجموعة الضابطة). وقد تلقت جميع الحيوانات حقن داخل DSW) تركيزه #8 في الماء ٠ لجرعات كلية بلغت ٠١ العضل على واحد من جداول الحقن الثلاث كما هو مبين في الجدول مصل (من 4 قرود/جنس/مجموعة) جمعت في اليوم Clie جرعات. وتم تقييم A أو © of من WT (من 7 قرود/جنس/مجموعة) جمعت في اليوم CSF من الدراسة وعينات 5 على الارتباط مع ability لتحديد قدرتها (necropsy الدراسة (عند الشهر +7 من تشريح الجثة
APP و AB1-40 ببتيد ٠
VEY
تعيين المجموعات ومستويات الجرعة :7١ الجدول المجموعة (ذكور/إناث) | (ميكروغرام/جرعة) | (ميكروغرام/جرعة - أ أ دا » | سس | د | سناسيل
Cees [oe [wg أ ا دا
Cees |e أو أ ا لا لم أيام إعطاء of الجدول 919 VEY OV VF دش (ov فى فى ١ أيام إعطاء الجرعات ١ أ. الجدول
VIAL 8 أيام إعطاء الجرعات ت oF الجدول 119 117 coy 7 ٠ الجرعات DSW ب. مجموعة ضابطة حقنت ب والذي sucrose ج. مادة ناقلة تتكون من محلول منظم يحتوي على غليسين ©170:0ع/ستيرات 68 /سكروز °
AN1792 يعد سواغ ل تم تمييزها linear peptides لببتيدات خطية »©+ array وتم تحديد صفيف الخلاصة — بواسطة الأجسام المضادة الموجودة في عينات المصل المأخوذة من حيوانات حقنت overlapping تقيس ارتباط هذه الأجسام المضادة ببتيدات متراكبة ELISA عن طريق 2 بيوتينيلينية ذات Sia ay تغطي كامل سياق ال 881-42. وتم الحصول على peptides ١
Chiron Technologies من كيرون تكنولوجيز AN1792 partial sequences سياقات جزئية
AR
في صورة ببتيدات مكونة من ٠١ أحماض أمينية مع تداخل 4 شقات residues وخطوة لشق واحد لكل ببتيد (سياق تخليق رقم 7 رقم 077١ ورقم 5814). وأضيفت مجموعة بيوتينيل للببتيدات ال FY الأولى (من الحمض الأميني الثامن الذي يقع el الطرف النتروجيني N-terminal ل AN1792 أسفل الحمض الأميني الرابع والعشرين ل (AN1792 ° على الطرف الكربوكسيل C-terminal باستخدام رابط من 06016. وتمت إضافة مجموعة بيوتينيل للببتيدات العشرة الأخيرة (إعادة الببتيدات الثلاثة عشر الثانية من السلسلة السابقة) على الطرف النتروجيني باستخدام رابط يتضمن EGEG (سياق تمييز رقم: (V1 . وأذييت الببتيدات البيوتينيلينية المجفدة lyophilized عند تركيز بلغ © ملي جزيئي في 11450. وخففت تراكيز الببتيدات إلى © ميكروجزيئي في TTBS (يتكون من توين Tween 20 5١ تركيزه 8#.,ءاء حمض هيدروكلوريك تريس Tris HCl تركيزه YO ملي جزيئي؛ ١7١ 2 38 ANACL ملي جزيئي؛ .01 تركيزه 85,١ ملي جزيئي؛ درجة حموضته (V,0 وأضيفت أجزاء تحتوي على ٠٠١ ميكرولتر من محلول تركيزه © ميكروجزيئي بتضاعف في ألواح تحتوي على 41 Lue مطلية Gre باستخدام ستريبتافيدين streptavidin (تقدمها شركة بيسرس (Pierce وحضنت الألواح لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة؛ ثم غسلت أربع مرات vo باستخدام TTBS وخففت عينات مصل في عينة مادة مخففة لا تحتوي على أزيد azide لمعادلة normalize عيسارات» وأضيف ٠٠١ ميكرولتر لكل عين. وحضنت هذه الألواح لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ثم غسلت أربع مرات باستخدام TTBS وخفف جسم مضاد بشري مأخوذ من Sele مقترن مع HRP (تقدمه شركة جاكسون أميونوريسيرش Jackson (ImmunoResearch بنسبة ٠٠٠١٠١١١ في عينة مادة مخففة لا تحتوي على أزيد azide وأضيف ٠ Y- ميكرولتر لكل عين. وحضنت الألواح مرة أخرى وغسلت. ولإظهار لون التفاعل؛ أضيف» TMB (تقدمه شركة بيرس «(Pierce بمقدار ٠٠١ ميكرولتر/عين وحضنت لمدة Yo دقيقة قبل إضافة ٠١ ميكرولتقر من ,11:90 تركيزه ؟ عياري لإيقاف التفاعل. وتم قياس الكثافة البصرية optical density عند طول موجة بلغ 190 نانومتر باستخدام قارئ الواح لوني colorimetric plate reader من في ماكس Vmax أو سبكتروماكس 0600327 Yo
Veo أدى التمنيع باستخدام 2 إلى إنتاج أجسام مضادة في جميع الحيوانات بنسبة وتراوح متوسط العيارات .١78 في جميع المجموعات التي تلقت جرعات عند اليوم ٠ وكان هنالك ميل لأن تكون العيارات أعلى ضمن . AS إلى ١1997 في المجموعات من جدول التمنيع بوجود مولد مضاد أعلى و/أو تركيز مادة مساعدة أعلى؛ لكن لم تظهر اختلافات م كبيرة إحصائياً نتيجة للتفاوت المرتفع في استجابة الحيوان المنفردة للتمنيع. احتوت الأمصال التي احتوت على أجسام المضادة ل 8201792 أيضاً على الأجسام 1159951 وتراوح متوسط العيارات في المجموعة من 1851 إلى AB1-40 المضادة ل لم تظهر اختلافات كبيرة إحصائياً بين المجموعات في اليوم (AN1792 مثل عيارات مضاد معامل Lb) مرتفع positive correlation موجب Jad 5 AN1792 وأظهر الارتباط ب Vve -AB1-40 مع الارتباط ل (+, ATV) Spearmant ارتباط سبيرمان - بحجم وجودة CSF عينة TY 8001792 قرد منع بجداول مختلفة باستخدام £A وأنتج .411792 عيارات موجبة ل (ZY) من هذه القرود Taj TY كافيين للتحليل . وكان ل وبلغت مستويات مضاد YY, VEE 49,44 بمتوسط بلغ YET وتراوحت العيارات من * إلى مما قيس في المصل وأظهر ترابط موجب مرتفع 70,0) 18 CSF من ANT792 مع عيارات المصل. ولم تظهر أية اختلافات عبر المجموعة (YAS (معامل سبيرمان- ye أو بين الأجناس في النسبة المئوية للجسم المضاد في 057. وينسجم مستوى الجسم المضاد في عبر الحاجز peripherally مع الانتقال الموجب للجسم المضاد المتولد محيطياً CSF ال الدماغي الدموي إلى الجهاز العصبي المركزي. بشكل «of AN1792 موجبة مضادة ل CSF وقد أظهر اختبار مجموعة جزئية لعينات بشكل تبادلي CSF مماثل للجسم المضاد في عينات الأمصال؛ يتفاعل الجسم المضاد في vy. وأظهرت عيارات 881-40 ارتباط مرتفع (معامل ارتباط -AB1-40 مع cross reacted المقابلة. ولم يظهر اختبار مجموعة جزئية AN1792 مع عياراتها (HAE = lay هو الحال في أجسام LS APP ارتباط مع AN1792 ذات عيارات مرتفعة ل CSF لعينات الأمصال المضادة.
ا Ven وعندما اختبرت أمصال من اليوم ١78 مقابل سلسلة لتداخل ٠١ ببتيدات؛ ارتبطت جميع الأجسام المضادة المأخوذة من جميع القرود مع الببتيد الذي يغطي سياقه الأحماض الأمينية من ٠١-١ لببتيد 8171792 (الأحماض الأمينية 177-707 ل (APP وفي بعض الحيوانات؛ كان هذا الببتيد الوحيد حيث يمكن قياس الارتباط (انظر الشكل (VA
° وفي حيوانات أخرىء يمكن قياس تفاعليات أخرى؛ لكن في جميع الحالات كانت التفاعلية لسياق الببتيد عند الطرف النتروجيني هو السائد. ووقعت التفاعليات الإضافية في مجموعتين. الأولى والأكثر dle gud كانت الارتباط ببتيدات تتوسط حول ببتيد 4171792 من ١ إلى ٠١ عند الطرف التتروجيني (الشكل ٠ )٠١ وقد وجه ارتباط من هذا النوع نحو الببتيدات التي تغطي الأحماض الأمينية -8-1؛ 08-1 و7-١١ لببتيد 101792م. وتمثل هذه التفاعليات
© المرتبطة مع تلك الخاصية ببتيد Vem) غالبية قصوى للتفاعلية في جميع الحيوانات. وتشير خريطة مغير الخاصية لحيوانات منفردة مع مرور الزمن إلى أن تفاعلية الجسم المضاد لببتيد ٠١-١ يتخطى الانتشار إلى الببتيدات المجاورة. وهذا يظهر انحياز biasing قوي للاستجابة المناعية للطرف النتروجيني الخاص ببتيد 8201792 مع طرفه الحر شق حمض الأسبارتيك aspartic acid وقد ارتبطت الفعالية الثانية الصغرى القابلة للكشف في بعض الحيوانات مع
\o ببتيدات تقع على الطرف الكربوكسيلي للمنطقة الرئيسية وتمركزت حول ببتيدات تغطي أحماض أمينية “-ة1ء YO), 7١-١١ للببتيد LANT792 وظهرت هذه الفعاليات فقط في
٠ إلى 77١ من القرود. ولم يرتبط التفاوت في الاستجابة بين حيوانات مختلفة Jie) سواء أكانت الأحماض الأمينية ٠١-١ هي مغيرات خاصية متفاعلة حصرية أو سائدة)؛ مع جرعة مولد المضاد/مادة
+ - المساعدة؛ جدول إعطاء الجرعات؛ أو عيار الجسم المضاد؛ ومن المحتمل أن يكون انعكاس لكل تعديل وراثي في كل حيوان منفرد.
1. وقاية ومعالجة الأشخاص Prevention and Treatment of HUMAN Subjects أجريت محاولة أولى لطور أحادي single-dose الجرعة لتحديد الأمان في البشر. حيث ac عامل therapeutic agent ade على شكل جرعات متزايدة increasing dosage إلى
VEY
¥ تمثل مستوى الفعالية المفترضة؛ ثم تزداد بعامل ١0٠ مرضى مختلفين تبدأ من حوالي
Aad أضعاف جرعة الفأر ٠١ حتى يتم الوصول إلى مستوى يبلغ حوالي وأجريت محاولة ثانية لطور لتحديد الفعالية العلاجية. حيث اختير مرضى مصابين أو في مرحلة مبكرة أو في مرحلة متوسطة Alzheimer's disease يحتمل إصابتهم بمرض الزهيمر
Alzheimer's Disease م كما حدد وفقاً لمعايير جمعية مرض الزهيمر والاضطرابات المتعلقة به والمرضى الملائمون هم الذين سجلوا في . (ADRDA) and Related Disorders Association
Mini-Mental State Exam بالنسبة للحد الأدنى لاختبار الحالة العقلية 71-١7 المدى من للعيش أثناء مدة الدراسة a yall وتتمثل معايير أخرى للاختيار في احتمالية عيش (MMSE) concomitant medications وإظهارهم عواقب معقدة بدرجة أقل مثل استخدام الأدوية المتزامنة التي قد تتداخل. وتجرى عمليات التقييم الأساسية لوظائف المريض باستخدام مقاييس قياس > ٠ كفطف التي 5 «MMSE مثل «classic psychometric measures القوى النفسية التقليدية المصابين بمسرض aia yall لتقييم حالة وظيفة comprehensive scale تعتبر مقياس شامل مرض الزهيمر. Ala progression الزهيمر. وتزود مقاييس القوى النفسية هذه مقياس لتطور ملائمة كذلك لمراقبة المعالجة. qualitative life scales ويمكن استخدام مقاييس أعمار نوعية
Magnetic) ويمكن كذلك مراقبة تطور المرض باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسسي 40 للمريض عن blood profiles ويمكن كذلك مراقبة مخططات الدم .MRI (Resonance Image
T-cells T طريق إجراء معايرات لأجسام مضادة متخصصة بالمولد المناعي واستجابات خلايا .responses وباتباع المقاييس الأساسية؛ يبدأ المرضى بتلقي المعالجة. حيث يختار المرضى blinded بكيفية محجوبة placebo أو دواء غفل ade عشوائياً ويعالجوا باستخدام عامل v. ويراقب المرضى كل ستة أشهر على الأقل. وتحدد الفعالية بانخفاض كبير في تطور fashion المرض في المجموعة المعالجة بالنسبة إلى مجموعة المعالجة باستخدام دواء غفل. مرضى مصابين بفقدان conversion وأجريت محاولة ثانية لطور ثان لتقييم تحول
Caray Glad نتيجة مرض غير مرض الزهيمرء يشار إليه early memory loss ذاكرة مبكر أو الضعف الإدراكي (AAMI) age-associated memory impairment الذاكرة المرافق للعمر Yo
VEA
إلى مرضى يحتمل إصابتهم بمرض الزهيمر كما ¢(MCI) mild cognitive impairment المعتدل لمعايير 817808. ويختار مرضى معرضين لخطر التحول الكبير إللى مرضى Gy عرّف بفحص أشخاص مرجعيين non-clinical مصابين بمرض الزهيمر من أشخاص لا سريريين لتحديد علامات فقدان الذاكرة المبكر أو أي صعوبات أخرى مقترنة بالأعراض family التاريخ العائلي «pre-Alzheimer's symptomatology التمهيدية لمرض الزهيمر e الجنس cage العمر cgenetic risk factors العوامل الخطرة الوراثية ¢ 5a 3) لمرض history وميزات أخرى توجد للتنبؤ بالخطر الكبير للإصابة بمرض الزهيمر. وتجمع القيم »©* بالإضافة إلى طرق قياس ADAS و MMSE Jedi لطرق قياس ملائمة Gy المسجلة الأساسية أخرى مصممة لتقييم عدد من الأشخاص السويين بشكل كبير. وتقسم أعداد المرضى 8
Jie هؤلاء إلى مجموعات ملائمة بإجراء مقارنة مع المجموعات التي تعطى دواء غفل - مجموعات بديلة تعطى جرعات من العامل العلاجي. ويراقب هؤلاء المرضى عند فترات تبلغ حوالي 6 أشهرء وتعتبر النقطة النهائية لكل مريض عبارة عن تلك النقطة التي يتحول أو لا يتحول عندها المريض أو المريضة إلى مريض تحتمل إصابته بمرض الزهيمر كما حدد عن عند نهاية المراقبة. ADRDA طريق معايير المواد والطرق العامة XIX vo قياس عيارات الجسم المضاد .١ وجمع حوالي tail vein صغير في وريد الذيل nick نزفت فئران عن طريق عمل ثلم guinea ونزفت خنازير هندية .microfuge tube طرد دقيق a gui ميكرولتر من الدم في Yu phd VA قياسها needle »امد ثم باستخدام إبرة hock وعم أولا بحلق منطقة العرقوب الخلفية لمدة clot وجمع الدم في أنابيب طرد دقيقة. وترك الدم ليتخثر metatarsal vein وريد مشط القدم Y. ثم فصل vortexed دوم room temperature (RT) ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة لمدة gravity (g) بتسارع تسارع الجاذبية الأرضية centrifuged بالطرد المركزي دقائق لفصل الدم المتخثر عن المصل. ومن ثم؛ نقل المصل إلى أنبوب طرد دقيق نظيف ٠ وخزن عند درجة حرارة بلغت 4م حتى يعاير. vas
وقيست عيارات الجسم المضاد Gy ل (ELISA وطليت ألواح معايرة دقيقة تحتوي Lue 41 (ألواح كوستار ئي آي إيه (Costar EIA باستخدام ٠٠١ ميكرولقر من محلول يحتوي على ٠٠١ ميكروغم/مل من 8842م أو SAPP أو مولدات مضادة أخرى كما Las في كل من التقارير الفريدة في ول كوتتج بافر Well Coating Buffer (يحتوي على ° فوسفات صوديوم sodium phosphate بتركيز )+ جزيئي؛ درجة حموضته AO وأزيد صوديوم sodium azide تركيزه 0.1 7) وحوفظ عليه طوال الليل عند درجة حرارة الغرفة. وسحب الدم من العيون وأضيفت الأمصال إلى العيون Teas من تخفيف بنسبة ٠٠١:١ باستخدام عينة من مادة مخففة (تحتوي على فوسفات صوديوم sodium phosphate تركيزه 084 جزيثي؛ درجة الحموضة NaCl «Vf تركيزه 016 جزيئي؛ زلال مصل بقري bovine serum albumin ٠١ تركيزه 7 وثيمروسال thimerosal تركيزه ٠١6 ”( . وأجريت سبع عمليات تخفيف متسلسلة serial dilutions للعينات مباشرةٌ في الألواح على ثلاث خطوات للوصول إلى نسبة التخفيف النهائية التي بلغت VAY) وحضنت محاليل التخفيف في عيون على ألواح مطلية لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة (RT) ومن ثم غسلت الألواح أربع مرات باستخدام PBS يحتوي على توين Tween 20 ٠١ تركيزه 7005 وأضيف Vo الجسم المضاد الثاني Ig المأخوذ من ماعز aia فأر goat anti-mouse مقترن مع بيروكسيداز Jad الخيل Jan) horseradish peroxidase عليه من شركة بويرينجر مانهيم «(Boehringer Mannheim إلى العيون بمقدار ٠٠١ ميكرولتر بنسبة تخفيف (AV) عينة مادة التخفيف وحضن لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. وغسلت الألواح مرةٌ أخرى أربع مرات في PBS توين Tween 20 ٠١ ولتحضير مولد الصبغة «chromogen أضيف ٠٠١ + ميكرولتر من سلو Slow TMB TMB (50707؛٠ '-رباعي مثيل بنزيدين tetramethyl 3,3°.5,5 benzidine يحصل عليه من شركة بيرس كيميكالز (Pierce Chemicals إلى كل عين وحضن لمدة 10 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. وأوقف التفاعل بإضافة Yo ميكرولتر من H,S0, تركيزه ؟ جزينئي . ومن ثم قرأت شدة اللون color intensity على موليكيولار ديفايسز في ماكس Molecular Devices Vmax (عند طول موجة تراوح من 45٠0 نانومتر
إلى 150 نانومتر).
ل vo.
وعرفت العيارات بأنها مقلوب reciprocal التخفيف لمصل يعطي نصف أقصسى OD Bale يؤخذ أقصى OD من نسبة تخفيف ابتدائية تبلغ vv vr) ) باستثناء حالات تستخدم فيها عيارات مرتفعة fan حيث يكون من الضروري في هذه الحالة إنتاج أقصى 07. وإذا وقعت قيمة ٠ 7.5 بين نسبتي التخفيف؛ يتم إجراء استقراء خطي linear extrapolation لحساب العيار
° النهائي . ولحساب المتوسط الهندسي geometric mean لعيارت الجسم المضاد؛ حددت عيارات أقل من ٠٠١ اختيارياً عيار قيمته Yo ". معايرة تشعب الخلايا اللمفقاوية Lymphocyte proliferation assay
خدرت anesthetized فثران باستخدام أيزوفلوران isoflurane وأزيلت طحالات Spleens
وشطفت rinsed مرتين باستخدام © مل من PBS يحتوي على مصل بقري جنيني
(PBS-FBS) fetal bovine serum ٠١ غير منشط حرارياً heat-inactivated تركيزه 7/٠١ ومن ثم جونست في وحدة سنتريكون Centricon unit بزاوية - (تقدمه شركة داكو أيه/أس Dako
A/S دنمارك (Denmark في 2 مل من PBS-FBS لمدة ٠١ ثوان بسرعة ٠٠١ دورة/دقيقة
في مكنة ميدي Medimachine (تقدمها شركة داكو (Dako ثم رشحت filtration من خلال
غربال من نايلون nylon mesh حجم مسامه ٠٠١ ميكرون micron وغسلت الخلايا الطحالية
Splenocytes Vo مرة واحدة باستخدام ٠ مل من 055-7835 ثم جعلت على شكل كريات 0م بالطرد المركزي بتسارع 700 X تسارع الجاذبية الأرضية لمدة © دقائق. وحللت
10 كريات الدم الحمراء Red blood cells بإعادة تعليق الكرية pellet في © مل من
محلول منظم لدرجة الحموضة يحتوي على 101,01 تركيزه ١016 جزيئي؛ ,10100 تركيزه
Aa) جزيثي؛ ودرجة حموضته 4 ,ا لمدة خمس دقائق عند ١,١ تركيزه NaEDTA جزيثي؛ ١
Y. حرارة الغرفة. ومن ثم غسلت الخلايا البيضاء Leukocytes كما ذكر أعلاه. واستنبتت خلايا الطحال المعزولة حديثاً ( وى خلية/عين) في مجموعات مضاعفة triplicate sets ثلاث مرات
في ألواح عيارية دقيقة معالجة في مستنبت نسيجي ذات قاع على شكل حرف [آ U-bottomed
«Cambridge كامبريدج «Corning به 95 عيناً (إيحصل عليها من شركة كورنينج tissue culture عليها من شركة جي آر as) RPMI1640 في وسط (Massachusetts (MA) مساشوستس
vo اتش بيوسيانسز <JRH Biosciences مدينة لينيكسا Lenexa كانساس (Kansas (KS) مزود ب
Vo .آ» ومزيج بنسيلين glutamine من 1-غتوتمين ux ملي 7٠١ غير منشط حرارياً تركيزه FBS ١ تركيزه Streptomycin 7أستر يبتوميسين 72 مختلفة؛ 1-16م AB م. وأضيفت كذلك ببتيدات TY لمدة 97 ساعة عند درجة حرارة بلغت بجرعات reverse sequence protein لبروتين ذي سياق عكسي AB40-1 أو AB1-42 1-0قيفى على أربع خطوات. واستنبتت الخلايا micromola ميكروجزيثي A تتراوح من * إلى ° عليه Jean) Concanavalin A (ConA) الموجودة في العيون الضابطة باستخدام كونكانفالين أيه ميكروغم/سل) ١ 0-5275؛ بتركيز OY VO— emu كاتالوج رقم (Sigma من شركة سيجما تيميدين HY الخلايا لمدة ؛ ؟ ساعة أخيرة باستخدام pulsed بدون إضافة بروتين . ونبضت ميكروكوري :0م/عين» يحصل عليه من شركة أميرشال كورب ١ (تركيزه 3H-thymidine ومن ثم؛ ٠ (Illinois (IL) ولاية إليونيز cArlington Heights أرلنجتون هايتس cAmersham Corp \ وتم عدها باستخدام عداد UniFilter الخلايا على ألواح من نوع يونيفلتر harvested حصدت (أدوات Top Count Microplate Scintillation Counter علوي التلألوٌ ذو ألواح دقيقة علوية للعد
Iinois ولاية إليوتيز 0070076 Grove دونرز جروف Packard Instruments باكارد للتفاعلية الإشعاعية 5 per minute (cpm) تعداد/دقيقة Sosa وعبر عن النتائج في . (av) -Insoluble macromolecules مدمجة في جزيئات ضخمة عديمة للذوبان radioactivity Vo تحضير نسيج الدماغ ¢ hemisphere من أحد نصفي كرة الدماغ brains أزيلت الأدمغة ceuthanasia بعد القتل في حين شرحت مناطق «immunohistochemical analysis لتحليل كيمياء الأنسجة المناعي البحرء القشرة والمخيخ) من نصف كرة الدماغ الآخر واستخدمت لقياس Olean) الدماغ الثلاثة المتخصسص ELISA ل Gay باستخدام معايرات APP المختلفة وأشكال AB تركيز بروتينات ومعاونيه في المرجع سابق الذكر). Johnson-Wood (انظر ما جاء عن جونسون- وود أحجام من محلول منظم ٠١ وتمت مجانسة الأنسجة المقررة لمعايرات 11188 في (يحتوي على هيدروكلوريد LIL مبرد guanidine buffer لدرجة الحموضة من غوانيدين تركيزه © ملي جزيني؛ Tris HOI تركيزه © جزيئي؛ تريس-1101 guanidine-HCI غوانيدين المعتدل باستخدام جهاز آدمز- agitation وخلطت الجناسات بالرج . (A+ درجة الحموضة yo voy
نوتاتور Adams Nutator (فيشر (Fisher لمدة تتراوح من ثلاث إلى أربع ساعات عند درجة حرارة dial ومن ثم؛ خزنت عند درجة حرارة بلغت ١7م تحت الصفر لتحديد كمية AB و LAPP وبينت تجارب سابقة أن نواتج التحليل كانت ثابتة stable في ظروف التخزين storage condition هذه؛ وأنه يمكن استعادة بروتين AB التخليقي (تقدمه شركة باشيم (Bachem بشكل كمي quantitatively عند إضافتها إلى جناسات نسيج الدماغ الضابط من فثران مولودة في ولادة واحدة hi) mouse littermates ما ela عن جونسون-وود Johnson-Wood ومعاونيه في
المرجع سابق الذكر).
0 قياس مستويات AB خففت جناسات الدماغ بنسبة ٠١:١ باستخدام مادة مخففة من كازيين Casein مبرد Ve بالثلج (يحتوي على كازيين Casein تركيزه 70 PBS أزيد صوديوم sodium azide تركيزه 0+ ,+ /« أبروتينين aprotinin تركيزه ٠١ ميكروغم/مل» EDTA تركيزه © ملي جزيئي؛ درجة حموضته + A, وليوبيبتين leupeptin تركيزه ٠١ ميكروغم/مل) ومن ثم فصلت بالطرد المركزي بتسارع ١60٠0١0 * تسارع الجاذبية الأرضية لمدة 7١0 دقيقة عند درجة حرارة بلغت af وحضرت محاليل قياسية standards من بروتين AB التخليقي (أحماض \o أمينية amino acids من )47-١ ومحاليل قياسية من APP لتشتمل على غوانيدين guanidine تركيزه whoa ١,5 وزلال مصل بقري bovine serum albumin (BSA) تركيزه )700 في التركيب النهائي. ويستخدم ELISA الشطيري ل 8م "الكلي" جسم مضاد وحيد النسيلة 771١ monoclonal متخصص بأحماض أمينية من 18-١١ ل AB (انظر ما جاء عن سيوبيرت Seubert ومعاونيه) بصفته جسم مضاد احتجازي؛ وجسم مضاد وحيد النسيلة 36 ve بيوتينيلي biotinylated متخصص بأحماض أمينية من 0 ل AB (انظر ما جاء عن جونسون-وود Johnson-Wood ومعاونيه) بصفته الجسم المضاد المقرر. ولم يميز الجسم المضاد وحيد النسيلة 306 ببتيد APP المفرز secreted أو APP كامل الطول cfull-length لكنه كشف فقط عن AB Ola مع حمض أسبارتيك عند الطرف الأميني amino-terminal aspartic acid ولهذه المعايرة حد أدنى من التأثر بلغ ٠٠ نانوغرام/مل ١١( Lusi نانو جزيئي) ولم Yo تبين أي تفاعلية تبادلية cross-reactivity لبروتين AB الفأري داخلي endogenous murine Lidl vaq
لا
بتراكيز لا تزيد عن ١ نانوغم/مل (انظر ما ela عن جونسون-وود Johnson-Wood ومعاونيه
في المرجع سابق الذكر). وتستخدم ELISA الشطيرية المتخصصة ب 881-42 002821712 المتخصسص بالأحماض الأمينية من EY-FY ل AB (انظر ما جاء عن جونسون- وود Johnson-Wood ٠ه ومعاونيه) بصفته الجسم المضاد الاحتجازي. ويمثل 306 قله البوتينيلي كذلك الجسم المضاد المقرر في هذه المعايرة الذي له حد أدنى من التأثر بلغ حوالي ١*5 ميكروغم/مل YA) ميكروجزيني؛ انظر ما جاء عن جونسون-وود Johnson-Wood ومعاونيه). وبالنسبة لمعايرات ELISA ل «AB طلي ٠ ميكرواتر من 8266م (بتركيز ٠١ ميكروغم/مل) أر mAB 2 (تركيزه © ميكروغم/مل) في عيون ألواح معايرية مناعية بها 476 Le (من نوع 0٠ كوستار (Costar عن طريق حضن طوال الليل عند درجة حرارة الغرفة. وأزيل المحلول عن طريق السفط aspiration وسدت blocked العيون بإضافة ٠٠١ ميكرولتر من زلال مصسل بشري human serum albumin تركيزه 7/8 في محلول منظم لدرجة الحموضة من PBS لمدة ساعة واحدة على الأقل عند درجة حرارة الغرفة. وأزيل محلول blocking solution aul وخزنت الألواح وهي مجففة عند درجة حرارة بلغت ؛ م إلى حين استخدامها. وأعيد تميه rehydrated Vo الألواح باستخدام محلول منظم لدرجة الحموضة من نوع ووش Wash Buffer [محلول ملحي منظم da al الحموضة- تريس Tris-buffered (يحتوي على NaCl تركيزه ٠5 جزيئي؛ تريس-1101 Tris-HCI تركيزه 001 جزيئي؛ درجة حموضته (V0 بالإضافة إلى توين Tween 20 7١ تركيزه 0,05 7] قبل الاستخدام. وأضيفت العينات والمحاليل القياسية على أجزاء مضاعفة ثلاث مرات بمقدار ٠٠١ ميكرولتر لكل عين ومن ثم حضنت طوال Jy. عند درجة حرارة بلغت ؛أم. وغسلت الألواح ثلاث مرات على الأقل باستخدام المحلول المنظم لدرجة لحموضة من نوع ووش بين كل خطوة من خطوات المعايرة. وأضيف 6ه البيوتينيلي؛ المخفف إلى ٠,5 ميكروغم/مل في محلول المعايرة pli all باستخدام كازيين Casein (يحتوي على كازيين Casein تركيزه 70,76 PBS توين Tween 20 ٠١ تركيزه 70.06 درجة حموضته (VE وحضن في العيون لمدة ساعة واحدة عند درجة ve حرارة الغرفة. وأضيف المركب الاقتراني من بيروكسيداز فجل الخيل-أفيدين avidin.
Voi من شركة فيكتور Avidin-HRP HRP (إيحصل على أفيدين horseradish peroxidase conjugate في Ere) والمخفف بنسبة (California (CA) كاليفورنيا «Burlingame بورلنجام «Vector إلى العيون لمدة ساعة واحدة عند Casein Assay Buffer محلول المعايرة المنظم من كازيين في SLOW-TMP «colorimetric substrate درجة حرارة الغرفة. وأضيفت مادة أساس لونية دقيقة عند درجبة Vo وتركت لتتفاعل لمدة «(Pierce (من شركة بيرس ELISA م معايرة ميكرولتر مسن YO بإضافة enzymatic reaction حرارة الغرفة؛ ثم أوقف التفاعل الأنزيمي عياري . وحددت كمية منتج التفاعل باستخدام موليكيولار ديفايسز في ماكس ١ تركيزه H,S0, 156 نانومتر و for عند طول موجة بلغت absorbance لقياس الفرق في الامتصاص تانومتر. APP قياس مستويات 1 86 حيث ميزت الأولى؛ المشار LAPP استخدام معايرتان مختلفتان لتحديد تركيز وكانت المعايرة LAPP من (FL) إليها ب 1/-<ئه كل من »-”م والأشكال كاملة الطول
VY المفرز بما في ذلك أول APP APP-/FL الثانية متخصصة ب 2317-8. وحددت معايرة غير متخصسص بموقع (2H3) ونظراً لأن الجسم المضاد المقرر Ap حمض أميني ل
APP69S الذي يوجد بين الأحماض الأمينية من 117-7617 ل a-clip-site الشبك عند yo 174-١177 ص (YEA العدد (Science ومعاونيه في مجلة Esch عن إتش ela (انظر ما وتقترح تجارب أولية (APPFL) كامل الطول APP ويميز هذا الاختبار كذلك f(a) 994) cytoplasmic إلى الذيل السيتوبلازمي immobilized APP المثبت APP تستخدم أجسام مضادة ل
TV لأن نسبة تتراوح من APPEL جناسات الدماغ من deplete لاستتزاف APP-FL — tail (البيانات غير مبينة). ويكون الجسم المضاد APP-FL تمثل APP-o/FL APP تقريباً من 6 v. يتكون Cus mAb 8ES عبارة عن APP-o ومعايرة APP-a/FL الاحتجازي لكل من معايرة
Games عن جيمس ela (انظر ما APP69S لشكل 04Y ضد أحماض أمينية من ؛؛؛ إلى 2113 عبارة عن «APP-a/FL المقرر لمعايرة mAb ومعاونوه في المرجع سابق الذكر) . ويكون (انظر ما جاء عن APP69S وهو متخصص لأحماض أمينية من 07-841 ل «mAb ومعاونيه في المرجع سابق الذكر) ويكون الجسم المضاد Johnson-Wood جونسون-<وود Yo
Voo
المقرر لمعايرة APP-a عبارة عن مشتقة بيوتيتيلية «mAb16H9 — 1 biotinylated derivative الذي تكون ضد أحماض أمينية من Tee إلى +1١ ل LAPP وبلغ الحد الأدنى للتأثر في معايرة متخصصة ب APP-0/FL حو الي ١١ نانوغرام/مل ١5١( بيكو جزيئي) (انظر ما sla عن جونسون-وود Johnson-Wood ومعاونيه) وبلغ التأثر للمعايرة المتخصصة ب YY APP-a ٠ نانوغرام/مل (7, نانو جزيئي). وبالنسبة لكل من المعايرتين المتخصصتين ب APP يطلى 5ه على العيون في ألواح 218 تحتوي على 976 Lie كما وصف أعلاه ل 266طخد. واستخدم »-807 المفرز المنقى المأشوب recombinant بصفته معيار مرجعي للمعايرة المتخصصة ب APP-o والمعايرة المتخصصة ب APP-o/FL (انظر ما ela عن إتش Esch ومعاونيه في المرجع سابق الذكر) . وخففت عينات جناسة الدماغ في غوانيدين guanidine ٠ تركيزه © جزيئي بنسبة ٠0١:١ في عينة من مادة مخففة ل ELISA (تحتوي على محلول منظم لدرجة الحموضة بالفوسفات phosphate buffer تركيزه 0014 جزيثي؛ درجة حموضته ,7 زلال مصل بقري bovine serum albumin تركيزه 1 7 ثيمروسال thimerosal تركيزه ,ءا NaCl تركيزه ,© جزيئي؛ 1040 تركيزه 0٠ 7). ومن ثم خففت بنسبة 54:١ في عينة من مادة مخففة تحتوي على غوانيدين guanidine تركيزه ٠١,8 جزيثي ومن ثم فصلت ye الجناسات المخففة بالطرد المركزي بتسارع us * تسارع الجاذبية الأرضية لمدة ١١ ثانية عند درجة حرارة الغرفة. وأضيفت محاليل APP القياسية والعينات إلى اللوح على مقادير مضاعفة مرتين وحضنت لمدة ساعة ونصف عند درجة حرارة الغرفة. وحضن الجسم المضاد المقرر البيوتينيلي 3 أو 1639 مع العينات لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. وحضن ستربتافيدين --فوسفاتاز قلوي Streptavidin-alkaline phosphatase (تقدمه شركة © بويرينجر مانهيم (Boehringer Mannheim المخفف بنسبة ٠٠٠ ١:١ في عينة من مادة مخففة؛ في العيون لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. وأضيفت مادة الأساس المفلورة 1 من فوسفات 4 -مثيل- أمبيليفيريل 4-methyl-umbellipheryl-phosphate للحضن لمدة © دقيقة عند درجة حرارة الغرفة Ol jig الأالواح على مقياس الفلورة fluorimeter سيتوفلور تي أم Cytofluor tm 7750 (مللي بور (Millipore عند إثارة excitation بلغت
FO Yo نانومتر وانبعاث emission بلغ ٠ 55 نانومتر.
vaq
احا ا كيمياء الأنسجة المناعي ثبتت الأدمعة لمدة ثلاثة أيام عند درجة حرارة بلغت a fe في بارافورماليدهيد paraformaldehyde تركيزه 4 / في PBS ومن ثم خزنت من يوم واحد إلى سبعة أيام عند درجة حرارة بلغت 4 مم في بارافورمالدهيد paraformaldehyde تركيزه 7/١ و PBS حتى قطعث ° 1.. وقطعت أقسام تاجية coronal sections بلغت سماكتها 0٠؛ ميكرون على جهاز هزاز vibratome عند درجة حرارة الغرفة وخزنت في مادة حافظة قريَّة cryoprotectant (تحتوي على غليسرول glycerol تركيزه + ZY إثيلين غليكول ethylene glycol تركيزه 7.7١٠ في محلول منظم لدرجة الحموضة بالفوسفات (phosphate عند درجة حرارة بلغت Yo 5 تحت الصفر قبل المعالجة الكيميائية المناعية للأنسجة. ولكل led حضنت ستة أقسام عند مستوى ٠١ حصان البحر الظهري <dorsal hippocampus فصل كل منها على فترات متعاقبة بمقدار Yeo ميكرومتر؛ طوال الليل باستخدام أحد الأجسام المضادة التالية: )١( جسم مضاد بيوتينيلي ضد mAD) AB من نوع 3D6 متخصص ب AB البشري) مخفف إلى تركيز بلغ ¥ ميكروغرام/مل في PBS ومصل حصان تركيزه )4 أو (7) mAb بيوتينيلي متخصص ب APP البشري؛ من نوع BES ومخفف إلى تركيز بلغ ؟ ميكروغرام/مل في PBS ومصل حصان تركيزه 0١.71؛ ٠ أو (FY) د متخصص بيروتين حمضي ليفي غرائي عصبي glial fibrillary acidic protein GFAP) من شركة سيجما كيميكال كو . (Sigma Chemical Co مخفف بنسبة 500:١ باستخدام تريتون Triton X-100 V+ «=X تركيزه 70,75 ومصل حصان تركيزه )7 في محلول ملحي منظم-تريس (Tris-buffered saline درجة =4iia ges 4 ,لا ¢(TBS) أو )£( mAb متخصص ب 0115 ؛ مولد مضاد ل MAC-1 (يحصل عليه من شركة كيميكون نترناشيوثال Chemicon (International Y. مخفف بنسبة ٠٠١:١ باستخدام تريتون Trion-X ٠٠١-<* تركيزه 74X06 ومصل أرنب rabbit serum تركيزه 7/١ في (TBS أو )©( mAb متخصص بالمولد المضاد ل MHC من الصنف ؟؛ (تقدمه شركة فارمينجين (Pharmingen ومخفف بنسبة ٠٠١:١ باستخدام تريتون Trion-X ٠٠١-< تركيزه 70,76 ومصل أرنب تركيزه 7/١ في 185؛ أر )1( mAb مأخوذ من جرذ متخصص ب 43 CD (تقدمه شركة فارمينجين (Pharmingen مخفف بنسبة ٠0١:١ ve باستخدام مصل أرنب تركيزه )74 في PBS أو mAb (VY) مأخوذ من جرذ متخصص
١7 باستخدام مصسل ٠٠١:١ مخفف بنسبة (Pharmingen (تقدمه شركة فارمينجين CD با4582 مأخوذ من جرذ AR جسم مضاد وحيد النسيلة ل (A) أو PBS في 7١ أرتب تركيزه ٠٠١:١ مخفف بنسبة (Pharmingen (تقدمه شركة فارمينجين CD 45RB متخصص ب مأخوذ AB ؛ أو )3( جسم مضاد وحيد النسيلة ل PBS في 7١ باستخدام مصل أرنب تركيزه ٠٠١:١ مخفف بنسبة (Pharmingen (تقدمه شركة فارمينجين CD 45 متخصص ب Ja من ٠ polyclonal جسم مضاد متعدد التنسائل )٠١( في 5؛ أو ZY باستخدام مصل أرنب تركيزه (تقدمه شركة فارمينجين CD3e متخصص ب hamster ued مأخوذ من AR بيوتينيلي ل mAb (VV) sl PBS (37) باستخدام مصل أرنب تركيزه ٠٠١:١ مخفف بنسبة (Pharmingen ٠٠١:١ مخفف بنسبة (Serotec مأخوذ من جرذ متخصص ب 003 (تقدمه شركة سيروتك يفتقر إلى PBS محلول من (VY) أو باستخدام PBS في 7١ باستخدام مصل أرنب تركيزه - .7١ جسم مضاد أولي يحتوي على مصل حصان سوي تركيزه ١7-6 7و ١ وعولجت الأقسام المتفاعلة مع محاليل الجسم المضاد المذكورة في وبيروكسيد هيدروجين ٠.١ Trion-X تركيزه ٠٠١-<© باستخدام تريتون Gras أعلاه دقيقة عند درجة حرارة الغرفة لإعاقة ٠١ تركيزه %,+/ في 5 لمدة hydrogen peroxide ومن ثم حضنت طوال الليل عند درجة endogenous peroxidase البيروكسيداز داخلي المنشأ yo حرارة بلغت ؛أم باستخدام جسم مضاد أولي. ومن ثم تفاعلت الأقسام المتفاعلة مع الأجسام لمدة ساعة واحدة عند درجة CD3e من نوع 306 أو 8155 أو (mAbs) المضادة وحيدة النسيلة horseradish حرارة الغرفة مع متراكب من بيروكسيداز فجل الخيل وأفيدين وبيوتين
Vor) "م" و "8 مخفف بنسبة kit باستخدام مكونات طقم peroxidase-avidin-biotin complex فيكتور لاب (Vector Elite Standard Kit (من شركة فيكتور إيليت ستاندرد كت PBS في Y. وحضنت أقسام ٠ (California (CA) كاليفورنيا (Burlingame بورلينجام «Vector Labs
CD3 و CD 45 «CD 45RB «CD 45RA متفاعلة مع أجسام مضادة متخصصة. ب الخالي من الجسم المضاد الأولي لمدة ساعة واحدة عند درجة PBS وحضن محلول مخفف بنسبة (Vector بيوتينيلي ضد جرذ (تقدمه شركة فيكتور IgG حرارة الغرفة باستخدام
Vor) مخفف بنسبة (Vector بيوتينيلي ضد فأر (تقدمه شركة فيكتور IgG أو PBS في 25:١ ve
١٠١ على الترتيب. ومن ثم تفاعلت الأقسام لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة PBS في horseradish peroxidase-avidin-biotin أفيدين -بيوتين - (Lal Jad باستخدام متراكب بيروكسيداز في 5 (من شركة فيكتور إيليت 79:١ باستخدام مكونات "م" و "8" مخفف بنسبة complex «Burlingame بورلينجام «Vector Labs فيكتور لاب «Vector Elite Standard Kit ستاندرد كيت
كاليفورنيا (CA) منصوطتله).
Caaf الأقسام في بيروكسيد هيدروجين hydrogen peroxide تركيزه Ys Zoo, oN ل ثنائي أمينو بنزيدين 3S 55 (DAB) 3,3-diaminobenzidine 5 0+ ,+7 عند درجة حرارة الغرفة. وعولجت الأقسام المتخصصة للحضن مع أجسام مضادة متخصصة ب MHC من الصنف ١ GFAP- و MAC-1- مسبقاً باستخدام بيروكسيد هيدروجين hydrogen peroxide تركيزه A - عند درجة حرارة الغرفة لإعاقة peroxidase ay yl داخلي المنشأ ثم حضنها طوال الليل مع جسم مضاد أولي عند درجة حرارة بلغت of وحضنت الأقسام Adela) مع الجسم المضاد المتخصص ب GFAP لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة مع IgG بيوتينيلي ضد فأر ناتج في حصان (من فيكتور لابوراتوريز Vector Laboratories فيكتاستين إيليت ايه بي سي كيت (Vectastain Elite ABC Kit مخفف بنسبة 500:١ باستخدام 5. ومن ثم تفاعلت yo الأقسام لمدة ساعة واحدة مع متراكب من أفيدين-بيوتين-بيروكسيداز avidin-biotin-peroxidase (من فيكتور لابوراتوريز (Vector Laboratories فيكتاستين ايليت ايه بي سي كيت Vectastain (Elite ABC Kit مخفف بنسبة Vo vv) باستخدام TBS وتفاعلت أقسام حضنت مع جسم مضاد وحيد النسيلة متخصص ب MACH! أو MHC من الصنف 7 بصفته جسم مضاد أولي لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة مع 6 بيوتينيلي ضد جرذ ناتج في أرنب مخفف vy. بنسبة Your) باستخدام TBS ثم حضنت لمدة ساعة واحدة مع متراكب من أفيدين-بيوتين- بيروكسيداز avidin-biotin-peroxidase مخفف بنسبة Vo ver) باستخدام 185. ومن ثم أمكن رؤية الأقسام المحضونة مع أجسام مضادة متخنصصة ب MAC-1 (GFAP و MHC من الصنف ؟ بالمعالجة عند درجة حرارة الغرفة باستخدام DAB تركيزه 70.06 بيروكسيد الهيدروجين hydrogen peroxide تركيزه 7.0٠ وكلوريد نيكل nickel chloride تركيزه 4 70.6
Yo و TBS لمدة ؛ دقائق و ١١ دقيقة على الترتيب.
٠١ (في glass slides على شرائح زجاجية Immunolabeled Lelia وثبتت الأقسام الموسومة الليل J sha وجففت بالهواء (Superfrost slides شرائح من نوع سوبر فروست GVWR دبليو أر وغطيت بشرائح تغطية (Anatech (تقدمه شركة أناتيخ Propar وغطست في جهاز بروبار بصفته وسط تثبيت (Fisher (تقدمه شركة فيشر Permount زجاجية باستخدام بيرومونت -mounting medium ° مجموعة جزئية من أقسام Cid ccounterstain Lue Lua AR ولصبغ لويحات وحضنت في محلول Superfrost على شرائح من نوع سوبر فروست GFAP تحتوي على دقائق بعد ١ لمدة (Sigma تركيزه )7 (تقدمه شركة سيجما tell Thioflavin ثيوفلافين ومن Propar المعالجة الكيميائية المناعية للأنسجة. ومن ثم أعيد تميه الأقسام ونقيت في بروبار -Permount ثم غطيت باستخدام شرتائح تغطية زجاجية مثبتة مع بيرمونت ye التحليل الصوري A (من شركة أونكور؛ إنك. ٠9٠١ قوته Image Analysis استخدم نظام تحليل صوري مرتبط بمجهر (Mariland (MD) ولاية ماريلئه «Gaithersburg مدينة جيثرسبيرج Oncor, Inc. تصوير مرئية من Al من خلال Nikon Microphot-FX microscope FX— sd 5 Sua بنيكون لتحديد كمية الشرائح المتفاعلة Sony Trinitron نوع 600 ومراقب من نوع سوني ترينيترون vo threshold وحددت عتبة video buffer مناعياً. وخزنت صورة القسم في ذاكرة مؤقتة مرئية total لاختبار وحساب المنطقة الكلية لعنصر الصورة color واللون saturation أساسها التشبع التي تشغلها البنيات الموسومة مناعياً. ولكل قسم؛ حددت منطقة حصان البحر يدوياً pixel area
Al وحسبت المنطقة الكلية لعنصر الصورة التي يشغلها حصان البحر. وقيست النسبة في صورة: (الجزء من منطقة حصان البحر التي تحتوي amyloid burden للحمل النشواني - وبالمثلء .٠٠١ x مع 6 هم) immunoreactive Lelia تتفاعل AB deposits على رواسب في صورة: (الجزء من منطقة neuritic burden قيست النسبة المئوية للحمل عصبي الالتهاب متفاعلة مع جسم dystrophic neurites حصان البحر التي تحتوي على محاور عصبية سغلية وربط نظام التصوير من نوع © (يحصل عليه من شركة .٠٠١ X )885 مضاد وحيد النسيلة بنسلفانيا «Cranberry Township كر انبيري تاون شيب «Compix, Inc. ٠ كومبيكس» إنك Yo vag
Yi.
Software Application program الذي يشغل برنامج التطبيق لبرمجيات (Pennsylvania (PA) من خلال آلة تصوير من نوع أوبترونكس FX البسيطة بمجهر نيكون ميكروفوت- FY واستخدم لتحديد النسبة المثوية للمنطقة القشرية الشوكية الخلفية التي تشغلها 5 والغراء العصبي الدقيق الذي يحتوي على GFAP الخلايا النجمية 28000785 التي تحتوي على MAC-1 ° و MHC من الصنف 7. وخزنت صورة القسم المتفاعل مناعياً في الذاكرة naga المرئية وحددت العتبة التي أساسها مركب أحادي اللون لاختيار وحساب المنطقة الكلية للنقطة الصغيرة من الصورة التلفزيونية التي تشغلها الخلايا الموسومة مناعياً. ولكل auld حددت القشرة الشوكية الخلفية (RSC) يدوياً وحسبت المنطقة الكلية للنقطة الصغيرة من الصورة التلفزيونية التي تشغلها RSC وعرّفت النسبة المئوية لتكثر الخلايا النجمية في صورة: (الجزء ٠ من RSC الذي تشغله الخلايا التجمية المتفاعلة مع LY +X (GFAP وبالمثل» عرفت النسبة المئوية لتكثر LAY الغرائية الدقيقة في صورة: (الجزء من RSC الذي يشغله الغراء العصبي الدقيق المتفاعل مع MAC-1 أو ©1020 من الصنف ؟)7١٠٠. وبالنسبة لكل عمليات التحليل الصوري؛ حددت كمية الأقسام الستة عند مستوى حصان البحر الظهري التي فصل كل منها على فترات متعاقبة بمقدار YE ميكرومتر؛ لكل حيوان. وفي جميع الحالات كانت حالة yo المعالجة للحيوانات غير معروفة لمراقب الحالة. ومع أن الاختراع السابق قد وصف بتفصيل لأغراض التوضيح؛ إلا أنه يتضح أنه ستجرى تعديلات معينة ضمن نطاق عناصر الحماية الملحقة. وقد ذكرت كل النشرات ووثائق البراءة في هذا البيان بكامل محتواها للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض بنفس الدرجة كما لو أشير إلى كل منها على حدة. أ ويتضح مما سبق أن الاختراع يتعلق بعدة استخدامات. فعلى سبيل (Jha يتعلق الاختراع باستخدام أي من الأجسام المضادة ل AB الموصوف أعلاه في معالجة؛ الوقاية من أو تشخيص نفس المرض نشواني الأصل camyloidogenic أو في صناعة دواء medicament أو تركيب تشخيصي diagnostic composition لاستخدامه لنفس الأغراض. وبالمثل يتعلق الاختراع باستخدام أي من شدفات مغير الخاصية ل AB الموصوفة أعلاه لمعالجة أو الوقاية من مرض ve نشواني الأصل أو في تصنيع دواء لاستخدامه لنفس الغرض.
اس ا سا 53 a, بم < a a, Fillo ا. Mo ea +f *| 0| «| «| © ww] | سر | م ]> el اا 7 ل" :3:7 YL. le ~~ = a e| i |« Qf > | 3 A |« 2 ذم | اللي a. a, < 5 ب oe 3 ee :]3 3 قا قاف اذ 4 Nel a. . بهم | بهم | =— oy ce + ضما ا 5 ِ مو | سو لاا 3 A 7 2 ] “lv 7 a -= 4 لل353 5 انا 2 و 32 13 : 3 4 ذا 1 ما ما قفد : - oo. = 3 wv J PR - : > م ام 3 ب اك د ES ل 7 218 23 ا 1 1 ا . ص ~ 1 3 = 7 :3 < 1 مد ١ مد ١ مه 31 : - اه | 1“ cf 0[ . ذا ما ياك 7 = AE 1 ~ ما ما Ral Rl 3 Ne * = o | 2x] = > به ٌ لا نا SIF 3 - —|V |V IV 3 7 2 موا اراق Alii: ما ما Mo مام ام اماع ل من | من | Qi 0 | © | © | > se ا اجا اا ا )2 ؟ ١١7 |١7 |v 7 وام اوداق : oe 3 دا يدا يد : أ ها قا ١ : Mo ب بهذا بهذا يبراي : 2 > =| نا جا > سي | — - “viv iv 7 وام ا No. * | = a . سو | > ا :ا:: :3-201 LC ا. Yo. ]& أن Z| |] eo] سل | قي | a] THF ال
Claims (1)
- ١ عناصر الحماية خيمري antibody يشتمل على جسم مضاد pharmaceutical composition تركيب صيدلي -١ ١ يرتبط بشكل متخصص humanized أو معدل ليصلح استخدامه في البشر chimeric Y ومادة (AB ل ٠١-١ من residues ضمن الشقات epitope بمغير خاصية specifically ¥ -pharmaceutically acceptable carrier حاملة مقبولة صيدلياً ¢ يرتبط antibody على جسم مضاد Jil pharmaceutical composition تركيب صيدلي -“ ١ ٠١-١ من residues ضمن الشقات epitope بمغير خاصية specifically بشكل متخصص 7 IgGl عبارة عن antibody للجسم المضاد isotype حيث يكون النمط الإسوي AB لت r -pharmaceutically acceptable carrier Wana ومادة حاملة مقبولة <human IgG! بشري $ Lal يكون Cuno) لعنصر الحماية (8 5 pharmaceutical composition تركيب صيدلي -* ١ أو 4 بشري IgGl عبارة عن antibody للجسم المضاد isotype الإسوي Yo-human 1:61 or IgG4 7 ball حيث يكون oF وفقاً لعنصر الحماية pharmaceutical composition ؛- تركيب صيدلي ١ -human IgG1 بشري IgGl عبارة عن antibody للجسم المضاد isotype الإسوي Y—o ١ تركيب صيدلي pharmaceutical composition وفقاً لعنصر الحماية ١ حيث يكون النمط الإسوي isotype للجسم المضاد antibody عبارة عن 1502 أو 1503.© إلى ١ وفقاً لأي من عناصر الحماية من pharmaceutical composition تركيب صيدلي —1 ١ بمغير خاصية specifically بشكل متخصص intibody يرتبط الجسم المضاد Cua y ضمن: epitope و yar CAB ل -١ من residues الشقات ¢ CAB ل Y=) من residues الشقات 5 (AB من ١ح ل residues الشقات 1 CAB من ١-؟ ل residues الشقات 7 من 1-7 ل قم؛ أو residues الشقات A AB ل 7-١ من residues الشقات 4 وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ حيث pharmaceutical composition تركيب صيدلي -١ ١ epitope بمغير خاصية specifically بشكل متخصص intibody يرتبط الجسم المضاد Y -AB ل free N-terminal residue يشتمل على شق حر عند الطرف النتروجيني ¥ وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ حيث pharmaceutical composition تركيب صيدلي - ١ من residues ضمن الشقات epitope بمغير خاصية antibody يرتبط الجسم المضاد Y حمض AB ل ١ residue الشق Sis ١ residue حيث يمثل الشق AB ل ٠١-١ ¥ .iso-aspartic acid الأيزو أسبرتيك £ وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة حيث pharmaceutical composition تركيب صيدلي -9 ١ polyclonal متعدد النسيلة antibody عبارة عن جسم مضاد antibody يكون الجسم المضاد 4 .monoclonal أو وحيد النسيلة r وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ pharmaceutical composition تركيب صيدلي -٠ ١ من نفس زوج two copies على نسختين antibody حيث يشتمل الجسم المضاد -same pair of light and heavy chains السلاسل الخفيفة والثقيلة ¥ إلى ١ وفقاً لأي من عناصر الحماية من pharmaceutical composition تركيب صيدلي -١ ١محاA Y حيث يكون الجسم المضاد Ble antibody عن جسم مضاد ثناثي 1 التخصص bispecific antibody يشتمل على زوج Jf من السلاسل الخفيفة ¢ والثقيلة light and heavy chain pair 8 يرتبط بشكل متخصسص specifically ° بمغير خاصية epitope ل AB وزوج ثان من السلاسل_الخفيفة 1 والثقيلة second light and heavy chain pair يرتبط بشكل متخصسص بمستقبلة Fo Fe receptor 7 على خلايا الدبق العصبي الدقيق .microglial cells-١ ١ تركيب صيدلي (sy pharmaceutical composition لأي من عناصر الحماية السابقة؛ Y حيث تدمج fuse سلسلة الجسم المضاد chain of the antibody في متعدد ببتيد مغاير و -heterologous polypeptide 9-١٠ ١ تركيب صيدلي pharmaceutical composition وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ Y حيث يرتبط الجسم المضاد antibody بشكل متخصص specifically بببتيد AB AB peptide v بدون أن يرتبط ببروتين مصدري نشواني كامل الطول full-length amyloid «precursor protein (APP) ¢١ 64- تركيب صيدلي pharmaceutical composition وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ Y حيث يشتمل التركيب الصيدلي Lad pharmaceutical composition على جسم مضاد antibody 7 آخر واحد على الأقل يرتبط بمغير خاصية epitope مختلف ل AB-١٠ ١ تركيب صيدلي pharmaceutical composition 5 88( لأي من عناصر الحماية من ١ إلى Y ؛؛»؛ Cua تكون المادة الحاملة carrier عبارة عن مادة مخففة مقبولة ¥ فسيولوجياً physiologically acceptable diluent للإعطاء عن طريق لا معوي -parenteral administration ¢8لا11 التركيب composition وفقا لأي من عناصر الحماية من ١ إلى ١٠١ حيث يعد للإعطاء Y داخل البريتون cintraperitoneally عن طريق لقم corally داخل ‘intranasally «ail ¥ تحت الجلد «subcutaneously في العضل intramuscularly موضعياً «topically أو في ¢ الوريد -intravenously-١ ١ التركيب composition وفقاً لأي من عناصر الحماية من ١ إلى (V1 حيث يعد للإعطاء Y على شكل جرعات متعددة multiple dosages لفترة من الزمن تبلغ ستة أشهر على الأقل.-١8 ٠ التركيب Gag composition لأي من عناصر الحماية من ١ إلى AY حيث يعد للإعطاء ل في صورة تركيب ثابت الإطلاق -sustained release composition| 14 التركيب Gi composition لأي من عناصر الحماية من ١ إلى OA حيث تبلغ جرعة dosage Y الجسم المضاد ١ antibody ملغم/كغم 8 من وزن جسم المريض body weight of the patient ¥ على الأقل.dosage ic a حيث تبلغ V4 لعنصسر الحماية Ls composition التركيب -Y. ١ من وزن جسم المريض mg/kg ملغمإكغم ١ ٠ antibody الجسم المضاد Y على الأقل. body weight of the patient ¥YY ١ — تركيب Gay composition لأي من عناصر الحماية من ١ إلى 80؛ حيث يستخدم Y التركيب للوقاية من preventing أو disease Us treating dallas مقترن برواسب ¥ نشوانية amyloid deposits من AB في دماغ brain مريض.epitope بمغير خاصية specifically يرتبط بشكل متخصص intibody alae جسم —YY ١ للجسم isotype حيث يكون النمط الإسوي AR ل ٠١-١ من residues ضمن الشقات Y1 المضاد . antibody عبارة عن IgGl بشري human IgGl لاستخدامه للوقاية من preventing 1 معالجة treating مرض disease مقترن برواسب نشوانية amyloid deposits ° ل AB في دماغ مريض .brain of a patient؟١ إلى ١ كما هو محدد في أي من عناصر الحماية من antibody استخدام جسم مضاد -77 ١ مرض treating أو معالجة preventing للوقاية من medicament في صنع دواء Y في دماغ مريض AB ل amyloid deposits مقترن برواسب نشوائية disease 7 .brain of a patient ¢ vaa
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SA00210285A SA00210285B1 (ar) | 2000-08-14 | 2000-08-14 | الوقاية من مرض نشواني الأصل amyloidogenic disease ومعالجته |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SA00210285A SA00210285B1 (ar) | 2000-08-14 | 2000-08-14 | الوقاية من مرض نشواني الأصل amyloidogenic disease ومعالجته |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SA00210285B1 true SA00210285B1 (ar) | 2006-05-13 |
Family
ID=58232830
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SA00210285A SA00210285B1 (ar) | 2000-08-14 | 2000-08-14 | الوقاية من مرض نشواني الأصل amyloidogenic disease ومعالجته |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SA (1) | SA00210285B1 (ar) |
-
2000
- 2000-08-14 SA SA00210285A patent/SA00210285B1/ar unknown
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5580504B2 (ja) | アミロイド形成疾患の予防および処置 | |
US6743427B1 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
US6761888B1 (en) | Passive immunization treatment of Alzheimer's disease | |
US8034348B2 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
US6787637B1 (en) | N-Terminal amyloid-β antibodies | |
US6750324B1 (en) | Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies | |
US20050059802A1 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
US7588766B1 (en) | Treatment of amyloidogenic disease | |
SA00210285B1 (ar) | الوقاية من مرض نشواني الأصل amyloidogenic disease ومعالجته | |
AU2008203784B2 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
NZ570086A (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
AU2011265382A1 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease | |
AU2005200811A1 (en) | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |