SA00210285B1 - الوقاية من مرض نشواني الأصل amyloidogenic disease ومعالجته - Google Patents

Abstract

الملخص: يتعلق الاختراع بتزويد عوامل agentsوطرق محسنة لمعالجة treatment أمراض diseases مقترنة برواسب نشوانية amyloid deposits من Aβ في دماغ brain مريض. وتقتضي طرق من هذا القبيل إعطاء عوامل تحث استجابة مناعية مفيدة beneficial immunogenic response ضد الراسب النشواني. وتعتبر الطرق مفيدة للوقاية مز مرض الزهيمر Alzheimer's disease ومعالجته. وتشمل العوامل المفضلة شدفات عند الطرف النتروجيني -N terminal fragments من Aβ وأجسام مضادة antibodies مرتبطة بها.

Description

Y

‏ومعالجته‎ amyloidogenic disease ‏الوقاية من مرض نشواني الأصل‎ ‏الوصف الكامل‎ ‏خلفية الاختراع‎ progressive disease ‏مرض متقدم‎ (AD) Alzheimer's disease ‏يعتبر مرض الزهيمر‎ ‏في‎ Selkoe ‏116ه9. انظر بشكل عام ما جاء عن سيلكو‎ dementia ‏يؤدي إلى العته الشيخوخي‎ ‏ومعاونيه‎ Hardy ‏ص 405-5408 (1937م)؛ وما جاء عن هاردي‎ OT ‏المجلد‎ TINS ‏مجلة‎ ‎J ‏في مجلة‎ Selkoe ‏م في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 7/1306364؟ ؛ وما جاء عن سيلكو‎

Duff ‏عن دن‎ ela ‏المجلد ؟ مص 597-578 84 ام)؛ وما‎ «Neuropathol. Exp. Neurol. ‏عن غيمز‎ ela ‏وما‎ ؛)م١990(‎ EVVEVT ‏ص‎ VY ‏المجلد‎ (Nature ‏ومعاونيه في مجلة‎ ‏ومجمل القول؛ ينقسم‎ ٠ ‏ص 577 )0 5م(‎ (YVY ‏المجلد‎ «Nature ‏ومعاونيه في مجلة‎ 5 ‏تظهر في الشيخوخة (20 سنة أو أكثر)‎ Cus date onset ‏المرض إلى فئتين: بداية متأخرة‎

Yo ‏أي بين‎ esenile period ‏قبل فترة الشيخوخة‎ Lola ‏تتطور‎ Cua cearly onset ‏وبداية مبكرة‎ ‏في نوعي المرض نفسها لكن تميل الشذوذ‎ pathology ‏سنة. وتكون الأعراض المرضية‎ ١و‎ ‏في عمر مبكر. ويتميز المرض‎ fan ‏وأوسع انتشارآ في حالات‎ Bad ‏لتكون أكثر‎ abnormalities senile plaques ‏لويحات شيخوخة‎ <brain ‏بنوعين على الأقل من الآفات 585 في الدماغ‎

وتعقدات لييفية عصبية ‎neurofibrillary tangles‏ وتكون لويحات الشيخوخة عبارة عن مناطق شبكات عصبية لبادية غير منظمة ‎BY disorganized neuropil‏ عن 150 ميكرومتر ‎(nm) micrometer‏ متقاطعة مع رواسب نشوانية خارج الخلية ‎extracellular amyloid deposits‏

عند المركز المرثي ‎visible‏ عن طريق تحليل ميكروسكوبي ‎microscopic analysis‏ لمقاطع من

0 النسيج الدماغي ‎tissue‏ 0ن. وتكون التعقدات اللييفية العصبية عبارة عن رواسب داخل الخلية ‎intracellular deposits‏ لبروتين تاو مقترن بأنبوب 3:82( ‎microtubule associated tau protein‏

يتكون من خيطين ‎filaments‏ ملتويين حول بعضهما البعض في صورة أزواج ‎.pairs‏

ويعتبر الببتيد ‎peptide‏ المسمى ‎AB‏ أو ببتيد 8 النشواني ‎B-amyloid peptide‏ المكون

الأساسي للويحات ‎٠‏ وببتيد ‎AB‏ هو شدفة داخلية ‎internal fragment‏ بها من 79 إلى ؟؛ حمضاً

‎٠١‏ أمينياً ‎amino acids‏ لمصدر بروتيني ‎precursor protein‏ يسمى مصدر بروتين نشواني ‎٠. (APP) amyloid precursor protein‏ وارتبطت عدة طفرات ‎mutations‏ في البروتين ‎APP‏ بوجود

‏مرض الزهيمر. انظرء؛ على سبيل المثال ما ‎sla‏ عن غوت ‎Goate‏ ومعاونيه في مجلة © _المجلد 749 ‎Vet a‏ ) 91 ١م‏ (من ‎valine? 7 Yo‏ إلى أيزولوسين

‎(isoleucine‏ ؛ وما جاء عن كارتير هارلان ‎Chartier Harlan‏ ومعاونيه في ‎Nature Asa‏ المجلد

‎(TOY Vo‏ ص 844 (1999م) (من فالين” '" ‎valine’?‏ إلى غليسين ‎¢(glycine‏ وما جاء عن موريل ‎Murrell‏ ومعاونيه في مجلة ‎(Science‏ المجلد 4 ص ‎AY‏ ) 1951م (من ‎valine”? "(pla‏

‏إلى فنيل ألانين ‎(phenylalanine‏ ؛ وما جاء عن مولان ‎Mullan‏ ومعاونيه في مجلة ‎«Nature Genet.‏ المجلد ‎١‏ ص ‎Yio‏ ) 7م) (طفرة مزدوجة ‎double mutation‏ تغير

‏ليزين*** “ثم وزورر|-مثونين + * ‎methionine™‏ إلى أسباراجين**" ‎jam shasparagine®™‏ **

‎(leucine™ - ٠‏ ويعتقد بأن طفرات_ من هذا القبيل ‎cand‏ مرض الزهيمر عن طريق المعالجة المتزايدة والمتعاقبة ل ‎APP‏ إلى ‎AB‏ وبصفة خاصة معالجة ‎APP‏ إلى مقادير متزايدة من الشكل الطويل ‎long form‏ ل ‎AB‏ (أي؛ 81-2 و81-43). ويعتقد بأن طفرات في ‎Clim‏ ‎«is sal genes‏ مثل جينات البريسينيلين ‎«PS2 9 PSI «presenilin genes‏ تؤثر بشكل غير مباشر على معالجة ‎APP‏ لإنتاج مقادير متزايدة من الشكل الطويل ل ‎Ap‏ (انظر ما جاء عن هاردي

¢ 7 في مجلة تينز ‎(TINS20‏ المجلد ‎Ve‏ ص ‎١54‏ (99597٠م)).‏ وتشير هذه الملاحظات إلى أن ‎AB‏ خاصة الشكل الطويل منه؛ يعتبر عنصرا ‎Lae‏ لمرض الزهيمر. وتقترح براءة الاختراع الأوروبية باسم ماك مايكل ‎McMichael‏ رقم 71,511 إعطاء جرعات مداواة مثيلة ‎homeopathic dosages‏ (أقل من أو مساوية ل ‎TY‏ ملغم/يوم ‎((mg/day) milligram/day °‏ من ‎AB‏ لمرضى مصابين ب- ‎AD‏ مسبقاً. ويتوقع؛ حتى للحد الأعلى لهذه الجرعة بأن يتولد في إنسان ‎human‏ نموذجي به نحو © لترات ‎liters‏ من البلازما ‎plasma‏ ‏تركيزآ ‎mY concentration‏ عن ؟ بيكوغرام/مل ‎picogram/milliliter‏ (ل0اءم). ويكون التركيز الطبيعي ‎normal concentration‏ ل ‎AB‏ في بلازما الإتسان ‎Sale‏ المدى من ‎٠5 ٠‏ إلى ‎٠‏ بيكوغرام/مل (انظر ما جاء عن سوبرت ‎Seubert‏ ومعاونيه في مجلة ‎(Nature‏ المجلد ‎Fed.‏ ص 72-75 )43 )2( ولأن الجرعة المقترحة في براءة الاختراع الأوروبية رقم )07,00 بالكاد تغير مستوى ‎AB level‏ الدائر داخلي المنشاً ‎endogenous circulating AB‏ ولأن براءة الاختراع الأوروبية رقم ‎077,51١‏ لا توصي باستخدام مادة مساعدة ‎adjuvant‏ بصفتها منبه مناعي ‎(immunostimulant‏ فإنه يبدو أنه من المستبعد الحصول على أي فائدة علاجية ‎.therapeutic benefit‏ ‎Vo‏ وعلى النقيض من ذلك؛ يوجه الاختراع الراهن نحو معالجة؛ من جملة معالجات أخرى؛ لمرض الزهيمر وأمراض أخرى ‎Al sii‏ الأصل عن طريق إعطاء شدفات من ‎AB‏ ‏أو جسم مضاد ‎antibody‏ لمغيرات خاصية ‎cpitopes‏ معينة ضمن ‎AB‏ إلى مريض في ظروف تولد استجابة مناعية ‎immune response‏ مفيدة في المريض ‎٠‏ وبناءا على ذلك؛ يفي الاختراع بحاجة طويلة العهد لأنظمة علاجية ‎therapeutic regimes‏ للوقاية من أو تحسين الأمراض ‎Y.‏ العصبية ‎(A neuropathology‏ بعض المرضىء الضعف الإدراكي ‎cognitive impairment‏ المقترن بمرض الزهيمر. ويتعلق هذا الطلب بنشرة براءة الاختراع الدولية رقم 19/77946؛ المودعة في ‎Fo‏ ‎ads‏ 998١م؛‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 0/0597,746؛ المودعة في 7 ديسمبرء 15١م؛‏ وبراءة الاختراع الأمريكية برقم متسلسل 10/085,9970؛ المودعة في 7 ‎Wind‏ ‎AR‏

4١م‏ وبراءة الاختراع الأمريكية برقم متسلسل 09/701,170؛ المودعة في ‎7١‏ نوفمبرء 334 م؛ وذكر كل منها في هذا البيان بكامل محتواها للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض. الوصف العام للاختراع في أحد الأوجه؛ يزود الاختراع طرق للوقاية من أو معالجة مرض مقترن برواسب ‎٠‏ نشوانية ل 8 في دماغ مريض. وتشمل أمراض من هذا القبيل مرض الزهيمر؛ متلازمة داون ‎Down's syndrome‏ والضعف الإدراكي. وقد يحدث المرض الأخير بوجود أو عدم وجود خصائص أخرى لمرض نشواني الأصل. وتقتضي بعض طرق الاختراع إعطاء جرعة ‎effective dosage AL a3‏ من جسم مضاد يرتبط ‎(Shy‏ متخصص ‎specifically‏ بمكون ‎component‏ لراسب نشواني إلى المريض. وتعتبر طرق من هذا القبيل مفيدة بصفةٍ خاصة ‎٠‏ للوقاية من أو معالجة مرض الزهيمر في مرضى من البشر. وتقتضي بعض الطرق إعطاء جرعة فعَّالة من جسم مضاد يرتبط ب ‎AB‏ وتقتضي بعض الطرق إعطاء جرعة ‎AL ad‏ من جسم مضاد يرتبط بشكلٍ متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات ‎residues‏ من ‎٠0-١‏ ل ‎LAB‏ وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بشكل متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من ‎1-١‏ ل ‎AB‏ وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بشكل متخصص ‎Ne‏ بمغير خاصية ضمن الشقات من ‎5-١‏ ل ‎AB‏ وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد ‎JK‏ متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من ‎72-١‏ ل ‎AB‏ وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بشكل متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من ‎VY‏ 8م. وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد ‎JOG‏ متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من ‎3-١‏ ل ‎APR‏ ‏وفي ‎pan‏ الطرقء يرتبط الجسم المضاد ‎(JK‏ متخصص بمغير خاصية ضمن الشقات من ص ١-؛‏ ل ‎AB‏ وفي بعض ‎(Gok‏ يرتبط الجسم المضاد بمغير خاصية يشتمل على شق حر عند الطرف النتروجيني ‎free N-terminal residue‏ ل قم. وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بمغير خاصية ضمن الشقات من ‎٠١-١‏ ل ‎AB‏ حيث يمثل الشق ‎١‏ و/أو الشق ‎١‏ من ‎AB‏ حمض الأسبارتيك ‎aspartic acid‏ وفي ‎am‏ الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بشكلٍ متخصص بببتيد ‎AB‏ دون الارتباط بمصدر البروتين النشواني ‎(APP)‏ كامل الطول. وفي بعض ‎Yo‏ الطرق؛ يكون النمط الإسوي ‎isotype‏ للجسم المضاد هو 1501 بشري 1601 ‎.human‏

:+ وفي بعض الطرقء يرتبط الجسم المضاد براسب نشواني في المريض ويحث استجابة تنقية ‎clearing response‏ ضد الراسب النشواني ‎٠‏ فعلى سبيل المثال؛ قد تحدث استجابة تنقية من هذا القبيل عن طريق الالتهام الذي تتوسطه مستقبلة ‎.Fc receptor mediated phagocytosis Fc‏ ويمكن تطبيق الطرق على كل من المرضى الذين لا تظهر عليهم أعراض المرض ‎asymptomatic patients °‏ وأولئك الذين تظهر عليهم أعراض المرض ‎٠‏ وقد يكون الجسم المضاد المستخدم في هذه الطرق عبارة عن جسم مضاد بشري؛ معدل ليصلح استخدامه في البشر 40+ خيمري ‎chimeric‏ أو غير بشري ‎nonhuman‏ وقد يكون وحيد النسيلة ‎monoclonal‏ ‏أو متعدد النسائل ‎polyclonal‏ وفي بعض الطرق؛ يحضر الجسم المضاد من إنسان ممدّع ‎(AB Ahm immunized‏ وقد يكون هذا الإنسان هو المريض الذي ينبغي معالجته بالجسم ‎٠١‏ المضاد. وفي بعض ‎٠ Gohl‏ يعطى الجسم المضاد مسع مادة ‎i Lda‏ صيدلية ‎pharmaceutical carrier‏ في صورة تركيب صيدلي ‎pharmaceutical composition‏ وفي بعض الطرق؛ يعطى الجسم المضاد بجرعة تتراوح من 0.0001 إلى ‎٠٠١‏ ملغم/كقم ‎(mg/kg) milligramvkilogram‏ ويفضل أن تبلغ ‎١‏ ملغم/كغم من وزن الجسم ‎body weight‏ على ‎١‏ الأقل. وفي بعض الطرق؛ يعطى الجسم المضاد على عدة جرعات لفترة زمنية طويلة» على سبيل المثال لا تقل عن ستة أشهر . وفي بعض الطرق؛ يعطى الجسم المضاد في صورة تركيب ذو إطلاق طويل الأمد ‎sustained release composition‏ وقد يعطى الجسم المضادء على سبيل المثال؛ داخل البريتون 00600817 عن طريق الفم ‎corally‏ تحت الجلد ‎¢subcutaneously‏ داخل الجمجمة ‎cintracranially‏ في العضل ‎cintramuscularly‏ موضيياً ‎ctopically Y.‏ داخل الأنف ‎intranasally‏ في الوريد ‎.intravenously‏ ‏وفي بعض_الطرق؛ يعطى_ الجسم ‎Lad‏ بإعطاء ‎papal‏ متعدد نوكليوتيد ‎polynucleotide‏ يحمل شيفرة ‎encoding‏ سلسلة جسم مضاد ‎antibody chain‏ واحدة على الأقل. ويعبر عن متعدد النوكليوتيد لإنتاج سلسلة الجسم المضاد في المريض. واختيارياء يحمل متعدد النوكليوتيد شيفرة السلاسل الثقيلة و الخفيفة ‎heavy and light chains‏ للجسم المضاد. ويعبر عن ‎vasa‏

لا متعدد النوكليوتيد لإنتاج السلاسل الثقيلة والخفيفة في المريض. وفي بعض الطرق؛ يراقب المريض لتحديد مستوى الجسم المضاد المعطى في دمه ‎blood‏ ‏وفي ‎Aas‏ آخر؛ يزود الاختراع طرق للوقاية من أو معالجة مرض مقترن برواسب نشوانية من ‎(BAB‏ دماغ مريض. فعلى سبيل المثال؛ يمكن استخدام الطرق لمعالجة مرض ‎٠‏ الزهيمر أو متلازمة داون أو الضعف الإدراكي. وتقتضي طرق من هذا القبيل إعطاء شدفات من 8ه أو نظائر ‎analogs‏ منه تحدث استجابة مناعية ضد مغيرات خاصية معينة في ‎AB‏ ‏وتقتضي بعض الطرق إعطاء لمريض ‎Aad dc ja‏ من متعدد ببتيد ‎polypeptide‏ يشتمل على جزء ‎segment‏ عند الطرف النتروجيني يحتوي على الشقات من ‎5-١‏ ل ‎AR‏ على ‎JR‏ ‏حيث يكون الشق الأول ل ‎AB‏ هو الشق عند الطرف النتروجيني لمتعدد ‎cal)‏ حيث يخلو ‎٠‏ > متعدد الببتيد من الجزء عند الطرف الكربوكسيلي ‎C-terminal‏ ل ‎AB‏ وتقتضي بعض الطرق إعطاء لمريض جرعة فعغَّالة من متعدد ببتيد يشتمل على جزء عند الطرف النتروجيني ل ‎fas <A‏ الجزء عند الشق من ‎7-١‏ ل ‎AB‏ وينتهي عند الشقات من ‎١١-١7‏ ل ‎AB‏ ‏وتقتضي بعض الطرق إعطاء لمريض جرعة فغّالة من عامل ‎agent‏ يحث استجابة مناعية ضد جزء عند الطرف النتروجيني ل ‎AB‏ ويبدأ الجزء عند الشقات ل ‎7-١‏ ل 8م وينتهي ‎Vo‏ عند الشقات من ‎١١-١‏ ل ‎AR‏ بدون حث استجابة مناعية ضد مغير الخاصية ضمن الشقات من ‎4-1١١‏ من ‎APA3‏ ‏وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يرتبط الجزء عند الطرف النتروجيني ل ‎AB‏ ‏بمتعدد ببتيد مغاير ‎heterologus polypeptide‏ عند طرفه الكربوكسيلي. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يرتبط الجزء عند الطرف النتروجيني ل 8م بمتعدد ببتيد مغاير عند طرفه ‎Ys‏ النتروجيني. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يرتبط الجزء عند الطرف النتروجيني ل ‎AB‏ ‏بمتعدد ببتيد مغاير أول وثاني عند طرفيه النتروجيني والكربوكسيلي. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يرتبط الجزء عند الطرف النتروجيني ل 8م بمتعدد ببتيد مغاير عند طرفه النتروجيني؛ وبنسخة إضافية من الجزء عند الطرف النتروجيني واحدة على الأقل عند طرفه الكربوكسيلي. وفي بعض الطرق المذكورة ‎del‏ يستجيب متعدد الببتيد المغاير وبالتالي ‎vo‏ خلية-8 3-11 ضد الجزء عند الطرف النتروجيني. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛

A

‏يشتمل متعدد الببتيد كذلك على نسخة إضافية من الجزء عند الطرف النتروجيني واحدة على‎ ‏الأقل. وفي بعض الطرق المذكورة أعلاه؛ يشتمل متعدد الببتيدء من الطرف النتروجيني إلى‎ ‏على عدة نسخ إضافية من‎ AB ‏الطرف الكربوكسيلي؛ على الجزء عند الطرف النتروجيني ل‎ ‏الجزء عند الطرف النتروجيني؛ وعلى جزء الأحماض الأمينية المغايرة. وفي بعض الطرق‎ ‏وفي بعض الطرق‎ ABLT ‏م المذكورة أعلاه؛ يتكون الجزء عند الطرف النتروجيني من‎

AB 37 ‏المذكورة أعلاه؛ يتكون الجزء عند الطرف النتروجيني من‎ ‏الشدفة من الأحماض الأمينية الخمسة عند الطرف‎ dan (Gohl ‏وفي بعض‎ ٠١ ‏تشتمل الشدفة على ما لا يزيد عن‎ (Gohl ‏الكربوكسيلي على الأقل في 8843. وفي بعض‎ ‏وعادة ما تعطى الشدفات بمقدار‎ LAP (contiguous amino acids ‏أحماض أمينية متجاورة‎ ‏ميكروغرام لكل جرعة لكل مريض.‎ ٠١ ‏.يزيد عن‎ ٠ ‏مساعدة تعزز الاستجابة المناعية ضد ببتيد‎ ale ‏وفي بعض الطرقء تعطى الشدفة مع‎ ‏في صورة تركيب‎ be ‏ترتيب أو‎ gl ‏المساعدة والشدفة‎ sald else) ‏ويمكن‎ AP ‏وقد تكون المادة المساعدة؛ على سبيل المثال؛ عبارة عن هيدروكسيد الألومتيوم‎ composition ‏تجارية)‎ idle) MPL ‏ستتعنصداة»‎ phosphate ‏الألومنيوم‎ Cling caluminum hydroxide ‏فرويند المساعدة غير‎ sale ‏أو‎ (Stimulon™ ‏تجارية)‎ Ade) ‏(ستيميولون‎ 059-21 0017“ ١٠ .incomplete Freund’s adjuvant ‏الكاملة‎ ‏تشتمل على‎ pharmaceutical compositions ‏ويزود الاختراع كذلك تراكيب صيدلية‎

AB ‏أو عوامل أخرى تحدث استجابة مناعية ضد نفس مغيرات الخاصية ل‎ AB ‏شدفات من‎ ‏كما وصف أعلاه؛ وعلى مادة مساعدة. ويزود الاختراع كذلك تراكيب صيدلية تشتمل على أي‎ ‏حاملة مقبولة صيدليا.‎ sole ‏.من الأجسام المضادة الموصوفة أعلاه وعلى‎ © ‏مضاد لتحديد فعاليته في‎ awa screening ‏؛ يزود الاختراع طرق لغربلة‎ Alaa ‏وفي‎ ‏مرض الزهيمر).‎ (Jad ‏سبيل‎ Je) ‏علاج مرض يقترن برواسب 8م في دماغ مريض‎ ‏يشتمل على خمسة‎ afin ‏وتقتضي طرق من هذا القبيل تلامس الجسم المضاد مع متعدد‎ ‏عند الشقات بين‎ fag AB ‏أحماض أمينية متجاورة على الأقل لجزء عند الطرف النتروجيني ل‎ ‏ومن‎ AB ‏على أن يخلو متعدد الببتيد من الجزء عند الطرف الكربوكسيلي ل‎ AB ‏و ل‎ ١ Yo vaq

ثم؛ يحدد الشخص ارتباط الجسم المضاد بمتعدد الببتيد ‎JS‏ متخصص أم لاء ويشير الربط المتخصص إلى أن للجسم المضاد فعالية في معالجة المرض. وفي وجه آخر؛ يزود الاختراع ‎Goda‏ لغربلة جسم مضاد لتحديد فعاليته في تنقية وحدة إحيائية مقترنة بمولد مضاد ‎biological entity‏ 2011860-2550012160. وتقتضي طرق من هذا القبيل ° دمج الوحدة الإحيائية المقترنة بمولد المضاد والجسم المضاد وخلايا ملتهمة تحمل مستقبلات ‎Fc‏ في وسط ‎-medium‏ ومن شم يراقب مقدار الوحدة الإحيائية المقترنة بمولد المضاد المتبقية في الوسط. ويشير الانخفاض في مقدار الوحدة الإحيائية المقترنة بمولد المضاد إلى أن للجسم المضاد فعالية في تنقية الوحدة الإحيائية المقترنة بمولد المضاد ‎٠.‏ ويمكن تزويد مولد المضاد في صورة ‎Aue‏ نسيجية ‎tissue sample‏ أو في صورة معزولة ‎Jed isolated form‏ سبيل المثالء ‎٠‏ > يمكن تزويد مولد المضاد في صورة عينة نسيجية من دماغ مريض مصاب بمرض الزهيمر أو حيوان تديي ‎las mammal animal‏ بمرض الزهيمر. وتشمل عينات نسيجية أخرى يمكن اختبار أجسام مضادة لها لتحديد فعاليتها في تتقية عينات نسيجية سرطانية ‎Clue cancerous tissue samples‏ نسيجية مصابة بعدوى فيروسية ‎virally infected tissue samples‏ عينات نسيجية تشتمل على ‎Wa‏ التهابية ‎«inflammatory cells‏ ‎yo‏ نموات خلوية شاذة غير خبيثة ‎nonmalignant abnormal cell growths‏ أو عينات نسيجية تشتمل على مادة أساس شاذة خارج الخلية ‎.abnormal extracellular matrix‏ وفي ‎Aas‏ آخرء يزود الاختراع ‎Gok‏ للكشف عن راسب نشواني في مريض. وتقتضي طرق من هذا القبيل إعطاء لمريض جسم مضاد يرتبط بشكل متخصص بمغير خاصية ضمن الأحماض الأمينية من ‎٠١-١‏ ل ‎AB‏ والكشف عن وجود الجسم المضاد في ‎ye‏ دماخ المريض. وفي بعض الطرق؛ يرتبط الجسم المضاد بمغير خاصية ضمن الشقات من 4 - ‎٠‏ ل ‎AB‏ وفي بعض الطرق؛ يكون الجسم المضاد موسوماً ‎labelled‏ بوسم بارامغنطيسي ‎paramagnetic label‏ ويكشف عنه عن طريق التصوير الإشعاعي المقطعي للرنين المغنطيسي النووي ‎.nuclear magnetic resonance tomography‏ ويزود الاختراع كذلك أطقم تشخيصية ‎diagnostic kits‏ ملائمة للاستخدام في الطرق ‎vo‏ المذكورة أعلاه. ويشتمل طقم من هذا القبيل على جسم مضاد يرتبط ‎JS‏ متخصص بمغير ‎vasa‏

0" خاصية يحتوي على الشقات من ‎٠١-١‏ ل 8م. وتحمل بعض الأطقم بطاقة تصف استخدام الجسم المضاد للتشخيص في الجسم الحي ‎vivo‏ 0: أو مراقبة مرض الزهيمر. شرح مختصر للرسوم الشكل ‎١‏ : يبين عيار ‎titer‏ جسم مضاد بعد حقن فئران محولة جينياً ‎transgenic mice‏ ب ‎ABL42 5‏ الشكل ‎١‏ : يبين حيمل نشواني ‎amyloid burden‏ في حصان البحن ‎-hippocampus‏ ‏وحددت النسبة المثوية لمساحة المنطقة الحصينية ‎hippocampal region‏ التي تشغلها لويحات نشوانية؛ المحددة بالتفاعلية ‎reactivity‏ مع الجسم المضاد وحيد النسيلة ‎3D6‏ المتخصص ب ‎(AB‏ عن طريق تحليل صوري كمي بمساعدة ‎٠١‏ الكمبيوتر ‎computer-assisted quantitative image analysis‏ لأقسام من الدماغ متفاعلة ‎.immunoreacted brain sections Lelie‏ وتبين_القيم للفثران المنفردة مصنفة لكل مجموعة معالجة. ويشير الخط الأفقي ‎horizontal line‏ لكل مجموعة إلى القيمة المتوسطة للتوزيع. الشكل ؟ : يبين سغل التهابي عصبي ‎neuritic dystrophy‏ في حصان البحر. وحددت ‎yo‏ النسبة المئوية لمساحة المنطقة الحصينية التي تشغلها محاور عصبية سغلية ‎cdystrophic neurites‏ المحددة بتفاعليتها مع الجسم المضاد وحيد النسيلة 815 البشري المتخصص ب ‎APP‏ عن طريق تحليل صوري كمي بمساعدة الكمبيوتر لأقسام من الدماغ متفاعلة ‎Lelie‏ وتبين القيم للفثران المنفردة للمجموعة المعالجة ب ‎AN1792‏ والمجموعة الضابطة ‎control group‏ المعالجة ‎١‏ ب ‎PBS‏ ويشير الخط الأفقي لكل مجموعة إلى القيمة المتوسطة للتوزيع. الشكل ‏ : يبين تكاثر الخلايا النجمية ‎astrocytosis‏ في قشرة عضلة الطحال الخلفية ‎.retrosplenial cortex‏ وحددت النسبة المئوية لمساحة المنطقة القشرية ‎cortical region‏ التي تشغلها خلايا نجمية ‎astrocytes‏ تحتوي على البروتين الحمضي ‎dull‏ الدبقي ‎(GFAP) glial fibrillary acidic protein‏ عن طريق ‎Yo‏ تحليل صوري كمي بمساعدة الكمبيوتر لأقسام من الدماغ متفاعلة مناعياً.

١ ‏وتبين القيم للفثران المنفردة مصنفة لكل مجموعة معالجة ويشار إلى قيم‎ ‏المجموعة المتوسطة بخطوط أفقية.‎ ‏لعيارات الأجسام المضادة ل‎ geometric mean ‏المتوسط الهندسي‎ af ‏يبين‎ : o ‏الشكل‎ ‏بشمان جرعات من 101792 يحتوي‎ immunization ‏بعد التمتيع‎ 2881-2 dogs See Feo ‏أو‎ ٠6١ FFA) YAY ‏على قارف كرت‎ 5 . (ng) microgram ‏استجابة جسم مضاد للتمنيع ب 8211792. ويعبر عن‎ kinetics ‏الشكل > : يبين حركيات‎ ‏العيارات في صورة متوسط هندسي للقيم للحيوانات الستة في كل مجموعة.‎ cortical amyloid burden ‏الشكل 7 : يبين تحليل صوري كمي للحمل النشواتي القشري‎ .AN1792 5 PBS ‏في الفثران المعالجة ب‎ ١ ‏يبين تحليل صوري كمي لحمل اللويحات العصبية الالتهابية في الفئران‎ : A ‏الشكل‎ ‎.AN1792 5 PBS ‏المعالجة ب‎ ‏الشكل 1 : يبين تحليل صوري كمي للنسبة المئوية لقشرة عضلة الطحال الخلفية التي‎ .AN1792 3 PBS ‏يشغلها تكاثر الخلايا النجمية في الفئران المعالجة ب‎ ‏في‎ lymphocyte proliferation assay ‏معايرة تشعب الخلايا الليمفاوية‎ Cpu : ٠١ ‏الشكل‎ Vo ‏(اللوحة العلوية) أو‎ ANI792 ‏خلايا الطحال من المجموعة المعالجة ب‎ ‏(اللوحة السفلية).‎ PBS ‏المجموعة المعالجة ب‎ ‏الكلية في القشرة. ويبين رسم بياني لتشتت المخططات‎ AB ‏يبين مستويات‎ : ١١ ‏الشكل‎ ‎APP ‏أو‎ AB ‏من‎ derivatives ‏الجانبية ل 8م المنفردة في فئران ممنعة بمشتقات‎ ‏مدمجة مع مادة فرويند المساعدة.‎ 7 ‏يبين تحديد حمل نشواني في القشرة عن طريق تحليل صوري كمي‎ : VY ‏الشكل‎ ‎AB ‏بببتيد‎ Ay tie ‏لفئران ممنعة بمواد‎ Lelie ‏لأقسام من الدماغ متفاعلة‎

AB ‏و8813-28؛ وكتل‎ «AB1-12 ‏وهي 01-5م؛‎ AP peptide conjugates (AB1-40) AN15285 (AP1-42) AN1792 ‏كامل الطضول‎ AB aggregates

PBS ‏والمجموعة الضابطة المعالجة ب‎ vo

VY

‏لمجموعات‎ AP ‏يبين المتوسط الهندسي لعيارات جسم مضاد متخصص ب‎ : ١١ ‏الشكل‎ ‏مدمجة مع مادة فرويند المساعدة.‎ APP ‏أو‎ AP ‏فثران ممنعة بمشتقات من‎ ‏لمجموعات‎ AB ‏يبين المتوسط الهندسي لعيارات جسم مضاد متخصص ب‎ : ١6 ‏الشكل‎ ‏معالج بالبلميتويل‎ (nie ‏أو‎ (AN1792 ‏ممنعة ب‎ guinea pigs ‏من خنازير هندية‎ ‏منه؛ مدمجاً مع مواد مساعدة مختلفة.‎ palmitoylated derivative ° ‏شهراً‎ VY ‏يبلغ عمرها‎ PDAPP ‏في القشرة لفثران‎ AB ‏(أ-ه) : يبين مستويات‎ vo ‏الشكل‎ ‏أو 111528 مع مواد مساعدة مختلفة.‎ AN1792 ‏معالجة ب‎ ‏متعدد النتسائل.‎ AB ‏يبين متوسط العيارات في فئران معالجة بجسم مضاد ل‎ : ١٠١ ‏الشكل‎ ‏وحيد النسيلة‎ AB ‏يبين متوسط العيارات في فئران معالجة بجسم مضاد ل‎ : ١١ ‏الشكل‎ ‎. 5 ٠١ ‏يبين متوسط العيارات في فئران معالجة بجسم مضاد ل 8م وحيد النسيلة‎ : YA ‏الشكل‎ ‎.2 ‏استجابة عند الطرف النتروجيني‎ epitope map ‏يبين خريطة مغير الخاصية‎ : ya ‏الشكل‎ ‏5؛ اختبرت أمصال من‎ poll (As .restricted N-terminal response ‏مقيدة‎ ‏بواسطة معايرة استشرابية مناعية‎ cynomolgus monkeys ‏قردة سينومولغس‎ yo ‏لسلسلة من‎ (ELISA) enzyme linked immunosorbent assay ‏مرتبطة بالأنزيم‎ ‏تشمل سياق‎ )49-١ ‏وحدات متداخلة من ببتيدات (سياقات التمييز أرقام:‎ ٠ ‏استجابة مقيدة عند الطرف‎ F10920M ‏الكامل. ويبين رقم الحيوان‎ 2

Cus (4 ‏(سياق_التمييز رقم:‎ DAEFRHDSGY ‏النتتروجيني تمثيلية للببتيد‎ ‏لببتيد 001792 حيث استخدم كمولد‎ ٠١-١ ‏أ يشمل الأحماض الأمينية من‎ .immunizing antigen Kian ‏مضاد‎ ‏يبين خريطة مغير الخاصية: استجابة عند الطرف النتروجيني غير مقيدة‎ : ٠١ ‏الشكل‎ ‏اختبرت أمصال من‎ 0 asl (4s .non-restricted N-terminal response ‏وحدات متداخلة من‎ ٠١ ‏لسلسلة من‎ ELISA ‏سينومولغس بواسطة‎ 338 ‏الكامل. ويبين‎ AN1792 ‏ببتيدات (سياقات التمييز أرقام: ١-١؛) تشمل سياق‎ Yo

VY

‏رقم الحيوان 7109757 استجابة عند الطرف النتروجيني غير مقيدة تمثيلية.‎ ‏وتظهر تفاعلية ضد ببتيدين عند الطرف النتروجيني وببتيد واحد عند الطرف‎ ‏(سياق_التمييز _رقم: 4( حيث يشمل‎ DAEFRHDSGY ‏الكربوكسيلي للببتيد‎

LAN1T792 ‏للببتيد‎ ٠١-١ ‏الأحماض الأمينية من‎ ‏تعريفات‎ ‏عندما‎ «afin ‏أن سياقي‎ "substantial identity ‏يقصد بالمصطلح "تطابق بصفة جوهرية‎ ‏باستخدام أوزان فجوات‎ BESTFIT ‏أو‎ GAP ‏عن طريق البرامج‎ Mie ‏يتحاذيان بصورة مثالية؛‎ ‏على‎ “٠ ‏يتطابقان بنسبة 716 على الأقل» ويفضل 7860 أو‎ default gap weights ‏فرضية‎ ‏سبيل المثال؛ تطابق السياق بنسبة 799 أو‎ Je) ‏الأقل؛ والأفضل 795 على الأقل أو أكثر‎ ٠ ‏أعلى). ويفضل أن تختلف مواقع الشقات غير المتطابقة عن طريق إبدالات محفوظة للأحماض‎ .conservative amino acid substitutions ‏لأمينية‎ J ‏تقارن‎ reference sequence ‏سياق مرجعي‎ sale ‏ولمقارنة السياقاتء يكون أحد السياقات‎ ‏وعند استخدام خوارزمية مقارنة السياقات‎ test sequences ‏به سياقات اختبارية‎ ‏يتم إدخال بيانات السياقات الاختبارية والسياقات المرجعية‎ csequence comparison algorithm Vo ‏حسب الحاجة؛ وتعين‎ subsequence ‏وتعين إحداثيات سياق ثانوي‎ computer ‏إلى كمبيوتر‎ ‏ومن ثم تحسيب‎ .560600© algorithm program parameters ‏وسائط برنامج خوارزمي للسياقات‎ ‏خوارزمية مقارنة السياق النسبة المئوية لتطابق السياقات للسياق (السياقات) الاختباري بالنسبة‎

Af ‏إلى السياق المرجعيء بالاعتماد على وسائط البرنامج‎ ‏على سبيل المثال». عن طريق خوارزمية‎ do all ‏ويمكن إجراء محاذاة مثلى للسياقات‎ Y. ‏في مجلة‎ Smith & Waterman ‏لسميث و ووترمان‎ local homology algorithm ‏التمائل الموضعي‎ ‏عن طريق خوارزمية المحاذاة‎ »)م١1948١(‎ GAY ‏ص‎ oF ‏المجلد‎ Adv. Appl Math. ‏في‎ Needleman & Wunsch ‏مان وونش‎ Jail homology alignment algorithm ‏المماقلة‎ ‏(1970م)؛ عن طريق طريقة البحث عن‎ EEF ‏ص‎ fA ‏المجلد‎ 7 Mol Biol ‏مجلة‎

Ve

التشابه ‎search for similarity methode‏ لبيرسن وليبمان ‎Pearson & Lipman‏ في مجلة ‎Ao Aad Proc.

Nat'l Acad.

Sci.

USA‏ ص 7444 ‎(pV IM)‏ عن طريق تطبيقات ‎computerized implementations grabs‏ لهذه الخوارزميات ‎«FASTA 1 «GAP)‏ ‎TFASTA 3‏ في وسكونسن جينيتكس سوفت وير باكيج ‎«Wisconsin Genetics Software Package‏ 0 شركة جينيتكس كمبيوتر جروب ‎Genetics Computer Group‏ ¢ في ‎OVO‏ سيانس درايف ‎Science Drive‏ ¢575 مدينة ماديسون 24801500؛ ولاية وسكونسن ‎(WI‏ أو عن طريق المعاينة المرئية ‎visual inspection‏ (انظر عموماً ما ‎ela‏ عن أوسوبل ‎Ausubel‏ ومعاونيه في المرجع سابق الذكر). وأحد أمثلة خوارزمية ملائمة لتحديد النسبة المئوية للتطابق وتشابه السياقات خوارزمية ‎(BLAST‏ الموصوفة في مجلة ‎oJ Mol Biol.‏ باسم ألتشول ‎Altschul‏ ومعاونيه؛ ‎٠‏ المجلد 715 ص 07؛-0٠47‏ (19950م). وتكون البرامجيات ‎Software‏ التي تجري تحليل 17 متوفرة بشكل عام عن طريق المركز الوطني للمعلومات التقنية الإحيائية ‎٠. (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) National Center for Biotechnology Information‏ وقد تستخدم ‎Bale‏ وسائط برنامج فرضية لإجراء مقارنة السياقات؛ بالرغم من أنه يمكن استخدام الوسائط المصنوعة على طلب الزبون ‎parameters‏ 0/0 أيضاً. وبالنسبة لسياقات الأحماض . الأمينية؛ يُستخدِم برنامج ‎BLASTP program BLASTP‏ _كقيم ‎Apap‏ طول كلمة ‎aly (W) wordlength‏ « وتوقع ‎(E) expectation‏ يبلغ ‎٠١‏ ومصفوفة تحزيز ‎BLOSUM62‏ ‎hi) BLOSUMS62 scoring matrix‏ ما جاء عن هينيكوف وهينيكوف ‎Henikoff & Henikoff‏ في

مجلة ‎(Proc.

Natl.

Acad.

Sci.

USA‏ المجلد ‎Ad‏ ص ‎٠١51٠6‏ (1849 لم). وتصنف الأحماض الأمينية لأغراض تصنيف إبدالات الأحماض الأمينية على أنها © محفوظة أو غير محفوظة على النحو التالي: المجموعة ‎(I)‏ (سلاسل جانبية كارهة للماء ‎(hydrophobic side chains‏ نورلوسين ‎cnorleucine‏ مثيونين اع؛ ألاتنين 1ه؛ فالين ‎val‏ ‏لوسين »ها أيزولوسين ‎tile‏ المجموعة )0( (سلاسل جانبية أليفة للماء متعادلة ‎(neutral hydrophilic side chains‏ : سيستثين ‎ccys‏ سيرين ©5؛ ثريونين #«ة؛ المجموعة ‎(II)‏ ‏(سلاسل جانبية حمضية ‎(acidic side chains‏ حمض الأسبرتيك ‎casp‏ حمض الغلوتاميك ‎tglu‏ ‎Yo‏ المجموعة ‎(Iv)‏ (سلاسل جانبية قاعدية ‎(basic side chains‏ : أسباراجين ‎casn‏ غلوتامين ‎cgln‏ vasa vo ‏(شقات تؤثر على توجيه السلسلة‎ (V) ‏المجموعة‎ targ ‏أرجينين‎ dys ‏لايزين‎ chis ‏هستيدين‎ ‏(سلاسل جانبية‎ (VI) ‏والمجموعة‎ pro ‏برولين‎ gly ‏حمض غليسين‎ : (chain orientation ‏وتشمل الإبدالات‎ phe ‏فنيل ألانين‎ ctyr ‏تيروزين‎ erp ‏تربتوفان‎ : (aromatic side chains ‏عطرية‎ ‏وتُشكّل الإبدالات غير‎ class ‏المحفوظة إبدالات بين الأحماض الأمينية في نفس الصنف‎ ‏المحفوظة الاستعاضة عن عضو من أحد هذه الأصناف بعضو آخر.‎ ٠ ‏العوامل العلاجية وفقاً للاختراع نقية بصفةٍ جوهرية من مادة ملوثة‎ Sale ‏وتكون‎ ‎6 ‏حوالي‎ Ze ‏تبلغ‎ purity ‏غير مرغوبة. ويعني هذا أن للعامل درجة نقاوة‎ contaminant ‏بصفة جوهرية من‎ free ‏على الأقل؛ بالإضافة إلى أنها خالية‎ (wiw) weight/weight ‏وزن/وزن‎ ‏ومواد ملوثة. وتبلغ درجة نقاوة العوامل في بعض‎ interfering proteins ‏بروتينات متداخلة‎ ‏والأفضل 790 أو حوالي 795 وزن/وزن على‎ JW ‏وزن/وزن على‎ IA ‏الأحيان حوالي‎ - ٠ ‏تبلغ‎ homogeneous peptides ‏الأقل. إلا أنه يمكن الحصول على ببتيدات متجانسة‎ ‏بروتين_تقليدية‎ AGE hi Jail JB ‏درجة_نقاوتها 759 وزن/وزن على‎ . 011760110021 protein purification techniques ‏لا تقل‎ affinity ‏بين أي وجودين ألفة‎ specific binding ‏ويقصد بالارتباط المتخصص‎ ‏وتفضل قيم ألفة تزيد عن‎ MY ‏لكل تركيز جزيئي‎ "٠١ ‏أو‎ ءا٠١‎ Be ‏.اك‎ Be ‏مد عن‎ ‏لكل تركيز جزيئي.‎ ٠ "immunoglobulin ‏أو "غلوبلين مناعي‎ "antibody ‏ويستخدم المصطلح "جسم مضاد‎ ‏تتنافس الشدفات مع‎ dale 5 ‏والشدفات المرتبطة منها.‎ intact ‏ليشمل الأجسام المضادة السليمة‎ ‏في ذلك‎ Lay ‏الجسم المضاد السليم الذي اشتقت منه لترتبط بشكلٍ متخصص بشدفات مولد مضاد‎ dlight chains Fab Fab ‏السلاسل الخفيفة‎ separate heavy chains ‏منفصلة‎ ald ‏أ سلاسل‎ ‏(حمض نووي‎ DNA ‏ويتم إنتاج الشدفات عن طريق تقنيات‎ Fv «Fab 2 ‏أو‎ recombinant DNA techniques ‏مأشوب‎ (deoxyribonucleic acid ‏ريبوزي منزوع الأكسجين‎ ‏للغلوبلينات المناعية السليمة.‎ enzymatic or chemical separation ‏بالفصل الإنزيمي أو الكيميائي‎ ‏كذلك سلسلة غلوبلين مناعي واحدة أو أكثر تقترن‎ antibody ‏ويشمل المصطلح "جسم مضاد‎ ‏بء أو يعبر عنها في صورة؛ بروتينات اندماجية‎ chemically conjugated ‏كيميائياً‎ Yo vad

١ ‎fusion proteins‏ مع بروتينات أخرى. ويشمل المصطلح "جسم مضاد ‎"antibody‏ كذلك جسم مضاد ثنائي التخصص ‎bispecific antibody‏ ويعتبر الجسم المضاد ‎(HD‏ التخصص أو ثنائي المجموعة الوظيفية ‎bifunctional‏ جسم مضاد هجين صناعي ‎artificial hybrid antibody‏ يحتوي على زوجين مختلفين من سلاسل تقيلة/خفيفة وموقعي ارتباط مختلفين. ويمكن إنتاج الأجسام ‎١‏ المضادة ثنائية التخصص باستخدام عدة طرق تشمل دمج خلايا ورمية هجينية ‎hybridomas‏ أو ‎bls‏ شدفات ‎Fab’‏ انظرء_ على ‎ela Lo JG daw‏ عن سونغسيفيلاي ولاتشمان ‎Songsivilai & Lachmann‏ في مجلة ‎«Clin. Exp. Immunol.‏ المجلد ‎VA‏ ص ‎١-١9‏ ‎٠6 )‏ ١م‏ ؛ وما جاء عن كوستيلني ‎Kostelny‏ ومعاونيه في مجلة ‎oJ Immunol.‏ المجلد ‎NEA‏ ‏ص ‎٠٠67-١٠47‏ (14437م). ‎٠١‏ ويشير ‎APP, APP”! (APPT‏ على الترتيب؛ إلى متعددات ببتيد طويلة ‎long‏ ذات شقات مكونة من 745 ‎VV VO)‏ حمض أميني تحمل شيفرة جين ‎APP gene APP‏ البشري. انظر ما ‎ela‏ عن كانغ ‎Kang‏ ومعاونيه في مجلة ‎Namre‏ المجلد 7756؛ ص ‎YVY‏ ‏(149١م)؛‏ وما ‎ela‏ عن بونتي ‎Ponte‏ ومعاونيه في ‎(Nature Alaa‏ المجلد ‎77١‏ ص 575 ‎¢(a) AA)‏ وما جاء عن كيتاغوتشي ‎Kitaguchi‏ ومعاونيه في مجلة ‎(Nature‏ المجلد ‎77١‏ ص ‎(APP) ‏وتخصص للأحماض الأمينية في المصدر_ البروتيني النشواني‎ (a) AA) © Vo

Jie ‏وتشير مصطلحات‎ -APP770 isoform APP770 ‏لسياق الشكل الإسوي‎ Gy ‏البشري أرقاماً‎ -١ FAY ‏يحتوي على شقات بها من‎ AR ‏و843م إلى ببتيد‎ AB42 ‏احتف‎ <AP40 ‏9ه‎ ‏حمض أميني.‎ ؛-١و‎ EY) ‏د احا‎ ‏ويشير المصطلح "مولد مضاد ‎"antigen‏ إلى وحدة يرتبط بها الجسم المضاد بشكلٍ ‏- متخصص. ويشير المصطلح "مغير خاصية ‎"epitope‏ أو محدد مولد مضاد ‎"antigenic determinant‏ إلى موقع على مولد مضاد تستجيب له خلايا ‎B‏ و/أو ‎and/or Teells 1 WA‏ 3. ويمكن تشكيل مغيرات خاصية خلايا 8 من أحماض أمينية متجاورة أو أحماض أمينية غير متجاورة توضع بجانب بعضها عن طريق طي ثلاثي ‎tertiary folding‏ للبروتين. ويحافظ عادةٌ على مغيرات ‏»> الخاصية المتشكلة من الأحماض الأمينية المتجاورة عند تعرضها لمذيبات مفسدة

VY

‎Ly denaturing solvents‏ 3885 مغيرات الخاصية المتشكلة من الطي الثلاثي ‎dle‏ عند المعالجة بمذيبات مفسدة. وعادةً ما يشتمل مغير خاصية على ثلاثة أحماض أمينية على ‎JY‏ ‎Bale‏ أكثرء أو © أو ‎٠١-8‏ أحماض أمينية على الأقل في شكل حيزي فريد ‎unique spatial conformation‏ وتتضمن طرق تحديد الشكل الحيزي لمغيرات الخاصية؛ على ° سبيل المثال؛ ‎ale‏ البلورات بالأشعة السينية ‎x-ray crystallography‏ والرنين المغتطيسي النووي 3( البعدين ‎.2-dimensional nuclear magnetic resonance‏ انظرء على سبيل المثال؛ ما جاء في كتاب بعنوان ‎Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology‏ للمحرر غلين إي. موريس. ‎(Glenn E. Morris‏ المجلد 265 )997 ‎(a)‏ ويمكن تمييز الأجسام المضادة التي تميز نفس مغير الخاصية في معايرة مناعية بسيطة ‎simple immunoassay‏ تبين قابلية أحد الأجسام ‎١‏ المضادة على إعاقة ارتباط جسم مضاد آخر بمولد مضاد مستهدف ‎target antigen‏ وتميز خلايا ‎T‏ مغيرات خاصية متصلة ‎continuous‏ مكونة من حوالي تسعة أحماض أمينية لخلايا ‎CDS cells CDS‏ أو حوالي ‎159-١١‏ حمض أميني لخلايا 004 ‎cells‏ 004. ويمكن تمييز خلايا 7 التي ‎po‏ مغير الخاصية عن طريق معايرات في أنابيب الاختبار ‎in vitro assays‏ تقيس التشعب المعتمد على مولد المضاد ‎«antigen-dependent proliferation‏ كما حدد ‎Vo‏ بدمج 4 -ثميدين عدنن”«رط-11 عن طريق ‎T WA‏ مبرمجة ‎primed T cells‏ استجابة لمغير خاصية (انظر ما جاء عن بورك ‎Burke‏ ومعاونيه في مجلة ‎Inf Dis.‏ 7 المجلد ‎Ye‏ ص ‎١11-9٠‏ (94ام))؛ بالقتل المعتمد على ‎alge‏ المضاد ‎antigen-dependent killing‏ (معايرة ‎WA‏ 7 اللمفاوية السامة للخلايا ‎«cytotoxic 1 lymphocyte assay‏ انظر ما جاء عن تيغز ‎Tigges‏ ومعاونيه في مجلة ‎of Immunol.‏ المجلد ‎Vou‏ ص ‎)74٠-7401‏ ‏أ أو بإفراز السيتوكين ‎.cytokine secretion‏ ويعني المصطلح استجابة ‎response‏ "مولدة للمناعة ‎"immunological‏ أو 'مناعية ‎"immune‏ تطور استجابة خلطية مفيدة (يسببها جسم مضاد) و/أو خلوية (تسبيها خلايا 7 متخصصة بمولد مضاد أو منتجات إفرازاتها) موجهة ضد ببتيد نشوائي في مريض يتلقى العلاج. ‎(Sarg‏ أن تكون استجابة من هذا القبيل استجابة ‎ALT a8‏ تحث عن طريق إعطاء ‎vo‏ مولد مناعة أو استجابة سلبية تحث بإعطاء جسم مضاد أو خلايا ‎T‏ المبرمجة. وتظهر ‎vaq

VA

MHC ‏الاستجابة المناعية الخلوية بتمثيل مغيرات خاصية متعددة الببتيد بالاقتران مع جزيئات‎ 008 dul wT ‏من الصنف 1 أو الصنف 17 لتنشضيط خلايا 7 معززة 004 و/أو خلايا‎ «monocytes ‏متخصصة بمولد مضاد. وقد تتضمن الاستجابة كذلك تنشيط خلايا أحادية النواة‎ ‏محبة للقاعدة‎ LMA (NK cells ‏خلايا 18 4 طبيعية‎ (macrophages ‏ملتهمة كبيرة‎ LIA ‏خلايا الدبق العصبي الدقيق‎ astrocytes ‏خلايا نجمية‎ dendritic cells ‏خلايا متفرعة‎ <basophils ‏أو مكونات أخرى من المناعة‎ eosinophils ‏سهلة الاصطباغ بالأيوزين‎ LA ¢microglia ‏وله‎ ‏الخلقية. ويمكن تحديد وجود استجابة مناعية تسببها خلية عن طريق معايرات تشعب‎

Burke ‏عن بورك‎ ela ‏لمفاوية سامة) (انظر ما‎ T ‏(خلايا‎ CTL ‏(خلايا 7 0047) أو معايرات‎ ‏في المرجع سابق الذكر؛ وما جاء عن تيجز 118888؛ في المرجع سابق الذكر). ويمكن تمييز‎ ‏مناعة عن‎ algal ‏المشاركات النسبية للاستجابات الخلطية والخلوية للتأثير الوقائي أو العلاجي‎ ‏جينياً ممنع وقياس‎ Silda ‏طريق عزل أجسام مضادة وخلايا 7 بشكل منفصل من حيوان‎ ‏التأثير الوقائي أو العلاجي في حيوان ثان.‎ ‏قادراً‎ "immunogen ‏أو "مولد للمناعة‎ "immunogenic agent ‏ويكون "عامل مولد للمناعة‎ ‏مساعدة.‎ Bale ‏على حث استجابة مناعية ضد نفسه عند إعطائه إلى ثدييء ويجوز بالاقتران مع‎ ‏إلى متعدد نوكليوتيد‎ "naked polynucleotide ‏نوكليوتيد مكشوف‎ Janta’ ‏ويشير المصطلح‎ ‏81ل1ه011. وتكون متعددات النوكليوتيد المكشوفة‎ materials ‏غير متراكب مع مواد غروائنية‎ .plasmid vector ‏منسلة في ناقل بلازميد‎ Glal ‏إلى مركب عندما يعطى بالاقتران مع مولد‎ "adjuvant ‏ويشير المصطلح 'مادة مساعدة‎ ‏مضاد يعمل على زيادة الاستجابة المناعية للمولد المضاد؛ ولكنه لا يولد استجابة مناعية للمولد‎ ‏المضاد عندما يعطى لوحده. وقد تزيد المواد المساعدة من الاستجابة المناعية بعدة آليات تشمل‎ © ‏وتنبيه خلايا ملتهمة كبيرة.‎ T ‏و/أو‎ B ‏تجديد خلايا لمفاوية؛ تنبيه خلايا‎ ‏إنسان وحيوانات ثديية أخرى تتلقى معالجة وقائية‎ "patient ‏ويتضمن المصطلح "مريض‎ ‏أو دوائية.‎ ‏وحدات‎ disaggregated or monomeric AB ‏غير متكتل أو مونمري‎ AB ‏ويقصد بمصطلح‎ ‏مونمري في إذابة ببتيد‎ AB ‏وتتمثل إحدى طرق تحضير‎ LAB ‏للذوبان ومونمرية من‎ ALE ‏بيتيد‎ ve v44

مجفد في ‎DMSO‏ نقي مع التعرض للأمواج فوق الصوتية. ويفصل المحلول الناتج بالطرد المركزي ‎centrifuge‏ لإزالة أي جسيمات عديمة الذوبان. ويكون ‎AB‏ المتكتل عبارة عن مزيج من الأوليغمرات ‎oligomers‏ حيث ترتبط الوحدات المونمرية مع بعضها بروابط غير إسهامية التكافؤ ‎.noncovalent bonds‏ ِ ويحدد التنافس بين الأجسام المضادة عن طريق معايرة حيث يثبط غلوبلين مناعي تحت المعايرة الربط المتخنصص لجسم مضاد مرجعي ‎reference antibody‏ بمولد مضاد مشترك؛ مثل 8م. وتبين عدة أنواع من معايرات الربط التنافسي على سبيل المثال معايرة المناعة الإشعاعية المباشرة أو غير المباشرة ذات ‎shall‏ الصلب ‎solid phase direct or indirect‏ ‎radioimmunoassay (RIA)‏ معايرة المناعة الإنزيمية المباشرة أو غير المباشرة ذات الطور ‎ye‏ الصلب ‎¢solid phase direct or indirect enzyme immunoassay (EIA)‏ المعايرة التنافسية الطبقية ‎sandwich competition assay‏ (انظر ما جاء عن ستاهلي ‎Stahli‏ ومعاونيه في مجلة ‎alae Methods in Enzymology‏ 9 ص 47 77-7 ‎¢(a) AAT)‏ معايرة ‎BIA‏ للبيوتين-أفيدين المباشرة ذات الطور الصلب ‎solid phase direct biotin-avidin EIA‏ (انظر ما جاء عن كيركلاند 40 ومعاونيه في مجلة ‎«J.

Immunol.‏ مجلد ‎YY‏ ص ‎AAT) EVAN E‏ لم))؛ ب المعايرة الموسومة المباشرة ذات الطور الصلب ‎¢solid phase direct labeled assay‏ المعايرة الطبقية الموسومة المباشرة ذات الطور الصلب ‎solid phase direct labeled sandwich assay‏ ‎hi)‏ ما ‎ela‏ عن هارلو ‎Harlow‏ و لآن ‎Lane‏ في ‎"Antibodies, A Laboratory Manual’‏ مطبعة كولد سبرنج هاربور برس ‎a AN) Cold Spring Harbor Press‏ ١م(‏ ؛ معايرة ‎RIA‏ الموسومة المباشرة ذات الطور الصلب ‎solid phase direct label RIA‏ باستخدام الوسم ب 1125 (انظر ما :1 جاء عن موريل ‎Morel‏ ومعاونيه في مجلة ‎Molec.

Immunol.‏ مجلد ‎«Yo‏ العدد )1(¢ ص ‎(a AAA) ١9-١7‏ معايرة ‎EIA‏ ل بيوتين-أفيدين المباشرة ذات الطور الصلب ‎solid phase direct biotin-avidin EIA‏ (انظر ما جاء عن تشوينج ‎Cheung‏ ومعاونيه في مجلة ‎Virology‏ مجلد 0767© ص 07-845 )+29 ‎¢((pV‏ و معايرة ‎RIA‏ الموسومة المباشرة ‎direct labeled RIA‏ (انظر ما جاء عن مولدينهاور ‎Moldenhauer‏ ومعاونيه في مجلة ‎FY alas Scand.

J.

Immunol. vo‏ ص ‎dale 5 (4149+) AY=VY‏ يتضمن معايرة من هذا

Y. ‏القبيل استخدام مولد مضاد منقى مرتبط بسطح صلب أو خلايا تحمل أي من الغلوبلين المناعي‎

Ly fa) ‏الذي خضع للمعايرة غير الموسومة والغلوبلين المناعي المرجعي الموسوم. ويقاس‎ ‏التنافسي بتحديد مقدار الوسم المرتبط بالسطح الصلب أو الخلايا في وجود الغلوبلين المناعي‎ ‏يوجد الغلوبلين المناعي الذي خضع للمعايرة بمقدار فائض.‎ Sale 5 ‏الذي خضع للمعايرة.‎ ‏وتشمل الأجسام المضادة المميزة بالمعايرة التنافسية (الأجسام المضادة التنافسية) أجسام مضادة‎ © ‏ترتبط بنفس مغير الخاصية بصفتها الجسم المضاد المرجعي وأجسام مضادة ترتبط بمغير‎ ‏خاصية مجاور يكون قريبا بشكل كاف بمغير الخاصية المرتبط بالجسم المضاد المرجعي‎ ‏لحدوث الإعاقة الفراغية. وعادة؛ عندما يتواجد الجسم المضاد التنافسي بمقدار فائض فإنه يثبط‎ ‏على الأقل.‎ ve ‏أو‎ 75٠ ‏الربط المتخنصص لجسم مضاد مرجعي بمولد مضاد مشترك بنسبة‎ ‏وقد تشمل تراكيب أو طرق "تحتوي" على عنصر واحد أو أكثر من العناصر المذكورة‎ ١

AB ‏عناصر أخرى لم تذكر بصفة خاصة. فعلى سبيل المثال يتضمن تركيب يشتمل على ببتيد‎ ‏بصفته مكون لسياق متعدد ببتيد أكبر.‎ AB ‏معزول وببتيد‎ AB ‏كل من ببتيد‎ ‏الوصف التفصيل‎ ‏المفهوم العام‎ 1 ‏متكتل مع‎ AB ‏تتميز عدة ظروف وأمراض نشوانية الأصل بوجود رواسب من ببتيد‎ Ve ‏عديمة الذوبان في دماغ المريض. وتشمل أمراض من هذا القبيل مرض الزهيمرء‎ AS ‏متلازمة داون والضعف الإدراكي. ويعتبر المرض الأخير أحد أعراض مرض الزهيمر‎ ‏لأي من المرضين. فعلى سبيل المثال؛‎ AT ‏ومتلازمة داون لكنه قد لا يبدي خصائص‎ ‏أو فقدان الذاكرة المقترن بالعمر‎ mild cognitive impairment ‏يحدث الضعف الإدراكي المعتدل‎ ‏في بعض المرضى الذين لم يتطور فيهم مرض الزهيمر أو الذين‎ age-associated memory loss ‏لن يتطور فيهم مرض الزهيمر الكامل مطلقا. ويمكن أن يعرف الضعف الإدراكي المعتدل كما‎

Ade ‏وفقاً لما اتفق‎ Mini-Mental State Exam ‏وفقآ لمعايرة الحالة العقلية المصغرة‎ Ja 8 ‏وتتميز أمراض من هذا القبيل بكتل من 8م لها بنية ألواح مطوية من نوع‎ ‏وتوصف‎ .Congo Red dye ‏وأنها مصبوغة بصبغة أحمر الكونغو‎ B-pleated sheet structure ‏الطريقة الأساسية للوقاية من أو معالجة مرض الزهيمر أو أمراض نشوانية الأصل أخرى‎ ve

١ ‏بتوليد استجابة مولده للمناعة إلى مكون الراسب النشواني في مريض في نشرة براءة الاختراع‎ ‏الدولية رقم 99/797444 (مذكورة في هذا البيان للإحالة إليها كمرجع). ويكرر الطلب الراهن‎ 0 ‏ويؤكد على فعالية الطريقة الأساسية. بيد أن الطلب الراهن يوجه بصفةٍ أساسية إلى مواد‎ ‏جزئي‎ J ‏وطرق محسنة. وفرضت هذه التحسينات أن يضع المخترعون الحاليون‎ Aelia ‏حيث ينبغي أن توجه الاستجابة المولده للمناعة ضدها.‎ AB ‏مغيرات خاصية مفضلة ضمن‎ ٠ ‏إلى عوامل وطرق لها فعالية كبيرة؛ احتمالية‎ AP ‏ويؤدي تمييز مغيرات خاصية مفضلة ضمن‎ ‏منخفضة نحو التأثيرات الجانبية؛ و/أو سهولة كبيرة في التصنيع؛ التركيب والإعطاء.‎ ‏عوامل علاجية‎ .] ‏قد تكون الاستجابة المناعية فعالة عندما يعطى المولد المناعي لحث أجسام مضادة‎ ‏تتفاعل مع 8م في مريضء أو قد تكون سلبية؛ عندما يعطى جسم مضاد حيث يرتبط بحد ذاته‎ ‏مريض.‎ (BAR ‏مع‎ ‏تحث استجابة مناعية فعّالة‎ Jal ge .١ ‏تحث عوامل علاجية استجابة مولدة للمناعة توجه بشكل متخصص نحو مغيرات‎ ‏بحد ذاته وأجزاء منه.‎ AR ‏وتشمل العوامل المفضلة ببتيد‎ JAB ‏خاصية معينة ضمن ببتيدات‎

AB ‏ويمكن كذلك استخدام مغيرات من هذه الأجزاء ونظائر ومركبات محاكية من ببتيد‎ ve

AB ‏أجسام مضادة لمغيرات الخاصية المفضلة من ببتيد‎ ge Wald ‏الطبيعي تحث و/أو تتفاعل‎ ‏بببتيد 8 النشواني أو ببتيد 4م (انظر ما جاء في براءة‎ Lad ‏يعرف‎ AB ‏ويعتبر‎ ‏في‎ Wong ‏و ونج‎ Glenner ‏عن جلينر‎ ela ‏الاختراع الأمريكية رقم 4,177,879؛ وما‎ ‏ببتيد به من‎ ؛))م١٠944(‎ ١١7١ ‏ص‎ VY ‏مجلد‎ Biochem. Biophys. Res. Commun.ilas ‏--40*-؛ حمضآ أمينياً والذي يعتبر المكون الأساسي للويحات مميزة لمرض الزهيمر. وينتج‎ ©

B and y secretases ‏أطول بإنزيمين يطلق عليهما سكريتاز م رو‎ APP ‏بمعالجة بروتين‎ AB ‏وتحدث‎ .))م١99597(‎ ١54 ‏ص‎ Ve ‏في مجلة 1115؛ مجلد‎ Hardy ‏عن هاردي‎ ela ‏(انظر ما‎ 7 ‏مقترنة بمرض الزهيمر بقرب موقع سكريتاز 8 أو‎ APP ‏معروفة في‎ mutations ‏طفرات‎ ‏قريباً من موقع فصم‎ 7٠١ ‏فعلى سبيل المثال؛ يكون الموقع‎ LAB ‏8؛ أو ضمن‎ «7 secretase ‏قريبة من‎ IVY AV. ‏وتكون المواقع‎ AR ‏عند معالجته ل‎ APP ‏ل‎ yesecretase y ‏سكريتاز‎ yo

YY

‏عن طريق تفاعلها مع‎ AD ‏ويعتقد بأن الطفرات تسبب‎ Bosecretase 8 ‏سكريتاز‎ pad ‏موقع‎ ‏لزيادة مقدار شكل الحمض الأميني 7/47؛ ل‎ AR ‏تفاعلات الفصم التي عن طريقها يتشكل‎ ‏الناتج.‎ AB ‏خاصية غير اعتيادية في أنه يمكن أن يثبت وينشط كل من عمليات‎ AB ‏ويمتلك‎ ‎٠‏ متعاقبة متكاملة متبادلة وتقليدية. وبصفة خاصة؛ يرتبط ب ‎Clq‏ وأخيراً ب ‎-C3bi‏ ويسهل هذا الاقتران الارتباط بخلايا ملتهمة كبيرة مما يؤدي إلى تنشيط خلايا 8. وبالإضافة إلى ذلك؛ ‎Jay‏ :0305 بشكل إضافي ومن ثم يرتبط ب 682 على خلايا 3 بكيفية معتمدة على خلايا ‎T‏ مما يؤدي إلى زيادة تبلغ ‎٠٠‏ في فعالية هذه الخلايا. وتتسبب هذه الآلية بجعل 8ه يولد استجابة مناعية بمقدار يزيد عن تلك المتولدة من المولدات المضادة الأخرى. ‎ve‏ ول 8م أشكال متعددة موجودة في الطبيعة. ويشار إلى الأشكال البشرية من ‎AB‏ ب 9ه ‎AB42 (AB4L (AB40‏ و ‎LAP43‏ وتوضح سياقات هذه الببتيدات وعلاقتها بالمصدر ‎APP‏ ‏في الشكل١؛‏ انظر ما ‎ela‏ عن هاردي ‎Hardy‏ ومعاونيه في مجلة ‎(TINS‏ مجلد ‎«Ve‏ ص ‎١١/١0‏ (9997١م).‏ فعلى سبيل المثال؛ يكون ل 0842م السياق التالي: ‎H2N-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-‏ ‎Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val- Vo .)47 ‏(سياق تميز رقم:‎ Te-Ala-OH ‏وتختلف 41د 840و ‎AB39‏ عن 8842 بحذف دلاخ ‎¢Ala-Ile‏ و ‎Ala-Tle-Val‏ على الترتيب من الطرف الكربوني . ويختلف 8843 عن 8842 بوجود شق ثريونين ‎dic threonine‏ الطرف الكربوني. ‎Y.‏ وتكون الشدفات المولدة للمناعة ل مم مفيدة بالنسبة لجزيء سليم في طرق الاختراع الراهن لعدة أسباب. أولاً؛ لأن مغيرات خاصية معينة ضمن ‎AB‏ تحث فقط استجابة مولدة للمناعة مفيدة لمعالجة مرض الزهيمر؛ حيث تزود جرعة متساوية لكتلة من شدفة تحتوي على مغيرات خاصية من هذا القبيل تركيزاً جزيئياً من مغيرات الخاصية المولدة للمناعة المفيدة ‎LS‏ مما ستزوده جرعة من ‎AB‏ سليم. ‎(Lili‏ تولد شدفات من ‎AB‏ مولدة للمناعة معينة استجابة ‎APP ‏مولدة للمناعة ضد رواسب نشوانية بدون توليد استجابة مولدة للمناعة كبيرة ضد بروتين‎ vo

حيث يشتق منه ‎BIG LAB‏ يعتبر تصنيع شدفات من ‎AB‏ أبسط من تصنيع ‎AB‏ سليم نظرآ لحجمها الأقصر. ورابعاء لاتتكتل شدفات من ‎AB‏ بنفس الكيفية التي يتكتل بها ‎AB‏ السليم مما

يسهل تحضير التراكيب الصيدلية وطرق إعطائها. ويكون لبعض الشدفات المولدة للمناعة من ‎AP‏ سياق يتكون من ‎٠١ 2 8# FY‏ أو ‎Laas ٠ 5‏ أمينياً متجاوراً على الأقل من ببتيد طبيعي. وتحتوي بعض الشدفات المولدة للمناعة على ما لا يزيد عن ‎VA QV‏ © أو ؟ شقات متجاورة من ‎LAR‏ وتفضل أجزاء من منتصف الطرف التتروجيني ل ‎AR‏ وتشمل شدفات مولدة ‎dcliall‏ مفضلة 1-5ةوّيى 1-6قى ‎<AB1-10 1-7‏ 83-7؛ 81-3 و ‎LABIA‏ فعلى سبيل المثال يشير الرمز 81-5 إلى جزء يشتمل على الشقات من ‎5-١‏ ل ‎Ap‏ ويفتقر إلى شقات أخرى ل ‎AR‏ وبصفة خاصة تفضل ‎٠‏ أجزاء تبدأ عند الشقات ‎7-١‏ ل ‎AR‏ وتنتهي عند الشقات ‎11-١7‏ ل ‎AR‏ ويمكن كذلك استخدام شدفات 881-12 لكنها مفضلة بدرجةٍ أقل. وفي بعض ‎(Gok‏ تكون الشدفة عبارة عن شدفة غير 881-10 عند الطرف النتروجيني. وتشتمل أجزاء أخرى مفضلة بدرجةٍ أقل ‎<AB13-28‏ 817-28ه» ‎<AB25-35 «AB1-28‏ 2835-40 و ‎LAB35-42‏ وتتطلب هذه الشدفات فحص لقياس فعاليتها في التنقية أو منع الرواسب النشوانية كما وصف في الأمثلة قبل الاستخدام. ‎١‏ وتستخدم ‎Glad‏ تفتقر إلى حمض أميني عند الطرف الكربوني واحد على الأقل أو في بعض الأحيان © أو ‎٠١‏ أحماض أمينية عند الطرف الكربوني في أشكال ‎AB‏ الموجودة في الطبيعة في بعض الطرق. فعلى سبيل ‎(JO)‏ تشتمل شدفة تفتقر إلى خمسة أحماض أمينية من الطرف الكربوني ل 8843 على أول ‎YA‏ حمض أميني من الطرف النتروجيني ‏ ل ‎AB‏ وقد تستخدم كذلك مكونات أخرى للويحات نشوانية؛ على سبيل المثال. سينيوكيلين ‎y esynuclein‏ وشدفات

‎Ye‏ مغيرة للخاصية منه لحث استجابة مولدة للمنتاعة. وما لم يشار إلى غير ذلك؛ يشتمل ‎AB‏ عند ذكره على سياقات الحمض الأميني البشري الطبيعي المشار إليه أعلاه بالإضافة إلى نظائر ‎analogs‏ تشمل نظائر أليلية ‎allelic‏ ‏وجزيئات ومتغيرات مستحثة ‎Sale 5 .0060168 and induced variants‏ تختلف النظائر عن الببتيدات الموجودة في الطبيعة في موقع واحد؛ موقعين أو بضعة مواقع؛ وغالباً بفضل بدائل »> مقاومة ‎dale spall‏ تظهر النظائر تطابق سياق بنسبة ‎ZA‏ أو 790 على الأقل مع ببتيدات

AR

طبيعية. وتشتمل بعض النظائر كذلك على أحماض أمينية غير طبيعية أو تعديلات لأحماض أمينية عند الطرف النتروجيني أو الكربوني ‎Nor © terminal amino acids‏ في موقع واحدء موقعين أو بضعة مواقع. فعلى سبيل ‎(Se (JB‏ استخدام حمض أيزو- أسبارتيسك ‎iso-aspartic acid‏ عوضاً عن شق حمض الأسبارتيك الطبيعي ‎natural aspartic acid‏ عند الموقع ‎١ >‏ و/أو ‎١‏ ل ‎Ap‏ وتشمل ‎Bd‏ أحماض أمينية غير طبيعية أحماض 7-أمينو ‎(D-Aminoacids‏ أحماض أمينية تحمل بديلين عند الموقعين ‎«a, a-disubstituted amino acids a so‏ أحماض 7<-ألكيل أمينو ‎(N-alkyl amino acids‏ حمض لاكتيك ‎lactic acid‏ 4 -هيدروكسي برولين ‎4-hydroxyproline‏ (-كربوكسي غلوتامات ‎¢y-carboxyglutamate‏ رحلل1111-ثلاتي مثيل لايزين ‎«y-N,N,N-trimethyllysine‏ (-17- أسيتيل لايزين ‎«y-N-acetyllysine‏ 0- ‎Ye‏ فوسفوسيرين ‎«O-phosphoserine‏ 177-أسيتيل سيرين ‎(N-acetylserine‏ 11-فورميل مثيونين ‎(N-formylmethionine‏ ١-مثيل‏ هستيدين ‎3-methylhistidine‏ *©-هيدروكسي لايزين ‎«S-hydroxylysine‏ 11-0 مثيل أرجينين ‎«@-N-methylarginine‏ وحمض أيزو أسبارتيك ‎acid‏ #ن2:1م1806. ويمكن فحص الشدفات والنظائر لتحديد الفعالية الوقائية أو العلاجية في نماذج حيوان محول ‎transgenic animal models Lia‏ بالمقارنة مع ضوابط ‎je controls‏ معالجة أو ‎Vo‏ ضوابط معالجة إرضائية ‎placebo controls‏ كما هو موصوف أدتاه. ‏ويمكن تخليق ‎AB‏ شدفاته ونظائره عن طريق تخليق ببتيد في طور صلب ‎solid phase peptide synthesis‏ أو تعبير مأشوب ‎recombinant expression‏ أو يمكن الحصول عليه من مصادر طبيعية. وتتوفر مواد تخليق الببتيد التلقائية ‎automatic peptide synthesizers‏ تجارياً من مصادر تزويد متعددة ‎(Jie‏ شركة أبلايد بيوسيستيمز ‎Applied Biosystems‏ مدينة © فوسترء ولاية كاليفورنيا. ويمكن أن يكون التعبير المأشوب في بكتيريا ‎chacteria‏ مثل الخلايا الإشريكية القولونية ‎coli‏ .2؛ الخميرة ‎«yeast‏ خلايا الحشرات ‎insect cells‏ أو خلايا التدييات ‎.mammalian cells‏ ولقد وصفت إجراءات التعبير المأشوب من قبل سامبروك ‎Sambrook‏ ‏ومعاونيه في كتاب بعنوان ‎Molecular Cloning: A Laboratory Manual‏ (مطبعة سي.إس.اتش.بي. برس ‎«C.SHP. Press‏ نيويورك؛ الطبعة الثانية؛ ‎ji Ty (x) TAY‏ كذلك ‎ve‏ بعض أشكال ببتيد ‎AB‏ تجارياً (على سبيل ‎Jl)‏ من شركة أميريكان ببتيدز كومباني ‎vas‏ vo

إنك ‎<American Peptides Company, Inc..‏ مدينة سونيفال» ولاية كاليفورنيا وشركة كاليفورنيا

ببتيدز ريسرتش» إنك..106 ‎California Peptide Research,‏ ¢ مدينة ناباء ولاية كاليفورنيا). وتشتمل العوامل العلاجية كذلك على متعددات ببتيد أطول تشتمل؛ على سبيل ‎JA‏ ‏على شدفة فعّالة من ببتيد 8م بالإضافة إلى أحماض أمينية أخرى. فعلى سبيل ‎(Jal‏ ‏5 تشتمل العوامل المفضلة على بروتينات اندماجية ‎fusion proteins‏ تشتمل على جزء من ‎AB‏ ‏مدمج مع سياق حمض أميني مغاير يحث استجابة خلايا ‎T‏ المعززة ضد سياق حمض أميني مغاير ومن ثم استجابة ‎Bada‏ ضد الجزء ‎AB‏ ويمكن فحص متعددات ببتيد من هذا ‎Jl)‏ ‏لتحديد الفعالية الوقائية أو العلاجية في نماذج حيوانية بالمقارنة مع ضوابط غير معالجة أو ضوابط معالجة إرضائية كما سيوصف أدناه. ويمكن إعطاء الببتيد ‎(AR‏ نظيره أو الشدفة الفعسّالة ‎A‏ أو متعدد ببتيد ‎AT‏ في صورة مقترنة أو في صورة مركبات متعددة أو في صورة مفككة. وتشتمل العوامل العلاجية كذلك على مركبات متعددة من عوامل مولدة للمناعة

مونمرية. ووفقا لطريقة أخرى؛ يمكن أن يقدم ببتيد مولد للمناعة؛ مثل شدفة من ‎(AB‏ بواسطة فيروس أو بكتيريا كجزء من تركيب مولد المناعة. ويدمج حمض نووي ‎nucleic acid‏ يحمل شيفرة الببتيد المولد للمناعة في مجين ‎genome‏ أو جسيم سطحي ‎episome‏ للفيروس أو البكتيريا. ويجوز أن يدمج الحمض النووي بكيفية تكفل التعبير عن الببتيد المولد للمناعة في صورة بروتين مفرز ‎secreted protein‏ أو في صورة بروتين اندماجي ذي بروتين سطحي خارجي ‎outer surface protein‏ لفيروس أو بروتين غشائي انتقالي ‎transmembrane‏ لبكتيريا ‎Cus‏ ‏يعرض الببتيد. وينبغي أن تكون الفيروسات أو البكتيريا المستخدمة في طرق من هذا القبيل 7 غير ممرضة أو موهنة. وتشتمل الفيروسات الملاثمة على فيروس غدي ‎cadenovirus‏ فيروس الحلا البسيط ‎(HSV) herpes simplex virus‏ فيروس التهاب الدماغ الخليلي الفنزويلي ‎«Venezuelan equine encephalitis virus‏ وفيروسات ‎A alpha viruses Lali‏ 5( فيروس التهاب الفم الحويصلي ‎«vesicular stomatitis virus‏ وفيروسات عصوية ‎rhabdo viruses‏ أخرى» وجدري ‎vaccinia ll‏ وجدري الطيور ‎fowl pox‏ وتشمل البكتيريا الملائمة السسلموثلا ‎salmonella‏ ‎Yo‏ وشيغلا ‎shigella‏ ويعتبر اندماج ببتيد مولد للمناعة مع ‎HBsAg‏ ل ‎LDL HBV‏ بصفة خاصة. ‎vad‏ v1

وتشتمل العوامل العلاجية كذلك على ببتيدات ومركبات أخرى ليس بالضرورة أن يكون لها سياق حمض أميني مميز مشابه ل 8م لكن بالرغم من ذلك تعمل كمركبات محاكية ل ‎AB‏ ‏وتحث استجابة مناعية مشابهة. فعلى سبيل ‎(JB‏ يمكن فحص أي ببتيدات وبروتينات تشكل صفائح مطوية من نوع 8 ‎sheets‏ ل8-01:216 لتحديد ملاءمتها. ويمكن كذلك استخدام أجسام ° مضادة لأنماط ذاتية مضادة لأجسام مضادة وحيدة النسيلة ‎monoclonal antibodies‏ ل ‎AB‏ أو ببتيدات نشوانية الأصل أخرى. وتحاكي هذه الأجسام المضادة لأنماط ذاتية المولد المضاد وتولد استجابة مناعية ضده (انظر ما جاء في كتاب بعنوان ‎Jaa) Essential Immunology‏ رويت ‎Roit‏ شركة بلاك ويل سياتتيفك ببليكيشنز ‎Blackwell Scientific Publications‏ مدينة ‎«all gl‏ الطبعة السادسة)؛ ص ‎.)١8١‏ وينبغي أن تحث عوامل غير ببتيدات ‎AB‏ استجابة ‎٠‏ - مولدة للمناعة ضد واحد أو أكثر من الأجزاء المفضلة ل 8م المذكورة أعلاه (على سبيل المثال من ‎٠١-١‏ ١-لاء‏ ١-؟‏ و ‎(VF‏ ويفضل أن تحث عوامل من هذا القبيل استجابة مولدة للمناعة توجه بشكل متخصص نحو أحد هذه الأجزاء بدون أن توجه نحو أجزاء أخرى

ل ‎Ap‏ ‏ويمكن ‎AIX‏ فحص مكتبات عشوائية ‎libraries‏ صمعدة«_من_ببتيدات ‎peptides‏ أو ‎ve‏ مركبات أخرى ‎yaad‏ ملاءمتها ‎gla) Say suitability‏ مكتبات توليفية ‎combinatorial libraries‏ لأنواع عديدة من المركبات التي يمكن تخليقها ‎synthesized‏ بطريقة تدريجية ‎step-by-step fashion‏ وتشتمل مركبات ‎Ge‏ هذا القبيل على متعددات ببتيد ‎CUS je polypeptides‏ محاكية تتشكل بالثني عند الموقع م ‎beta-tum mimetics‏ ومتعددات ‎polysaccharides Sud)‏ وشحوم فوسفورية ‎phospholipids‏ وهرمونات ‎hormones‏ ‏أ وبروستاغالااتدينات ‎prostaglandins‏ وستيرويدات ‎steroids‏ ومركبات عطرية ‎aromatic compounds‏ ومركبات حلقية مخلطة ‎heterocyclic compounds‏ ومركبات بنزو ثنائي أزبين ‎benzodiazepines‏ ومركبات غليسين تحمل ‎Sn‏ عند الموقع ‎N‏ قصيرة السلسلة ‎oligomeric N-substituted glycines‏ ومركبات كربامات قصيرة السلسلة ‎.oligocarbamates‏ ‏ويمكن تشكيل مكتبات توليفية كبيرة من المركبات ‎Gy‏ لطريقة المكتبات التخليقية المحمولة ‎Yo‏ شفرتها ‎encoded synthetic libraries (ESL) method (ESL)‏ الموصوفة في ما جاء عن أفيماكس vag vv

‎cAffymax‏ 3 585 براءة الاختراع الدولية رقم 5/1776508؛ ‎Ley‏ جاء عن أفيماكس ‎Affymax‏ في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم ‎(AF)‏ جامعة كولومبيا ‎«Columbia University‏ في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 94/085051؛ ودستور الأدوية 10020068 في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 95/708557 وما جاء عن سكريبس ‎Scripps ٠‏ في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 90/705647 (أدمجت كل منها في هذا البيان للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض). ويمكن إنتاج مكتبات ببتيدات كذلك عن طريق طرق كشف ملتهمة ‎phage display methods‏ انظر على سبيل المثال ما ‎ela‏ عن ديفيلين ‎Devlin‏ في

‏نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 41/18346. وتفحص المكتبات التوليفية والمركبات الأخرى أولا لتحديد ملاءمتها عن طريق ‎٠‏ تحديد قدرتها على الارتباط بأجسام مضادة أو ‎LOA‏ لمفاوية ‎B)‏ أو ‎(T‏ معروفة بأنها متخصصة ب ‎AB‏ أو ببتيدات نشوائية الأصل ‎amyloidogenic peptides‏ أخرى. فعلى سبيل ‎«Jal‏ يمكن إجراء عمليات فحص ابتدائية ‎initial screens‏ باستخدام أي ‎Jad‏ متعددة النسافل ‎polyclonal sera‏ أو جسم مضاد وحيد النسيلة ‎monoclonal antibody‏ ل ‎AB‏ أو شدفة منه. ومن ثم تفحص المركبات لتحديد ارتباطها بمغير خاصية متخصسص ‎specific epitope‏ ضمن ‎AP‏ ‎ve‏ (على سبيل ‎Fm) ءال-١ 1١-١ Jaa‏ ١-؛ء‏ )507 #-7). ويمكن اختبار المركبات باتباع نفس الإجراءات الموصوفة لتحديد نوعيات مغير الخاصية للجسم المضاد ‎epitope specificities‏ 007ط00ة. ومن ثم تحلل المركبات المميزة عن طريق عمليات فحص من هذا القبيل بشكل إضافي تحدد قدرتها على حث الأجسام المضادة أو خلايا لمفاوية فعالة ‎reactive lymphocytes‏ ل ‎AB‏ أو أجزاء منها. فعلى سبيل المثال؛ يمكن اختبار عدة محاليل ‎Ye‏ مخففة ‎dilutions‏ من مصل على الواح معايرة دقيقة ‎microtiter plates‏ طليت مسبقاً ‎precoated‏ ‏ب ‎AB‏ أو شدفة منه ويمكن إجراء اختبار ‎ELISA‏ (معايرة اشرابية مناعية مرتبطة بانزيم) القياسي لاختبار أجسام مضادة فعالة ضد ‎AB‏ أو شدفات منه. ومن ثم تختبر الفعالية ‎efficacy‏ ‏الوقائية ‎prophylactic‏ والعلاجية ‎therapeutic‏ للمركبات في حيوانات محولة ‎Lia‏ ‎transgenic animals‏ كانت عرضة لمرض نشواني الأصل ‎amyloidogenic disease‏ مسبقآء كما ‎Yo‏ سيوصف في الأمثلة. وتشتمل حيوانات من هذا القبيل؛ على سبيل ‎(Jha)‏ على فئران تحمل

YA

‏ومعاونيه» في‎ Games ‏الموصوفة من قبل غيمس‎ APP ‏من‎ ١/١١7 ‏عند الموقع‎ mutation ‏طفرة‎ ‏مثل تلك الموصوفة من‎ APP ‏من‎ TV [TV 0 ‏المرجع سابق الذكر وفئران تحمل طفرة سويدية‎ 5,117,487 ‏ومعاوتيه في براءة الاختراع الأمريكية رقم‎ McConlogue ‏قبل ماك كونلوغ‎ ¢ م١‎ 341 ) 14 ‏ص‎ 7١75 ‏المجلد‎ Science ‏وهسياو 0 ومعاونيه في مجلة‎ 4 ‏المجلد‎ «Proc. Natl. Acad. Sci. USA ‏ومعاونيه في مجلة‎ Staufenbiel ‏وستوفنبيل‎ ° ‏ومعاوتيه في مجلة‎ Sturchler-Pierrat ‏وستروشلر -بيرات‎ (AAV) ١717-17 7/97 ‏ص‎ ‏وبورشلت‎ ¢(aY 49Y) 747-1777 ‏المجلد 8% ص‎ Proc. Natl. Acad. Sci. USA ‏ص 145-474 (157١م)). ويمكن‎ ٠4 ‏ومعاونيه في مجلة 7:00 المجلد‎ Borchelt potential agents analogs ‏استخدام طريقة الفحص ذاتها على عوامل فعالة أخرى مناظرة‎ ‏الموصوفة أعلاه.‎ AR ‏أطول تشتمل على شدفات ل‎ peptides ‏وببتيدات‎ AB ‏ال‎ ٠

Agents Inducing Passive Immune ‏تحث استجابة مناعية سلبية‎ Jal ge ."

Response تشتمل العوامل العلاجية ‎therapeutic agents‏ وفقآً للاختراع كذلك على أجسام مضادة ترتبط بشكل متخصص ب ‎AP‏ أو مكون آخر للويحات نشضوانية ‎amyloid plaques‏ ‎Vo‏ ويمكن أن تكون أجسام مضادة من هذا القبيل وحيدة النسيلة ‎monoclonal‏ أو متعددة التسائل ‎polyclonal‏ وترتبط بعض أجسام مضادة من هذا القبيل بشكل متخصسص بالشكل المتكتل ‎aggregated form‏ من ‎AB‏ دون الارتباط بالشكل المفكك ‎dissociated form‏ وبعضها يرتبط بشكل متخصص بالشكل المفكك دون أن يرتبط بالشكل المتكتل وبعضها يرتبط بالشكلين المتكتل والمفكك. ويرتبط بعض من أجسام مضادة من هذا القبيل بالشكل القصير من ‎AB‏ ‏© الموجود في الطبيعة (أي» ‎AB39‏ أو 8840 أو ‎(ABA‏ بدون الارتباط بالشكل الطويل من ‎AB‏ ‏الموجود في الطبيعة (أي؛ 8842 و ‎(AB43‏ وترتبط بعض الأجسام المضادة بالشكل الطويل بدون الارتباط بالشكل القصير. وترتبط بعض الأجسام المضادة ب ‎AB‏ بدون الارتباط بالبروتين المصدري النشواني كامل الطول ‎amyloid precursor protein‏ 1011-1671 ‎Sale‏ يكون للأجسام المضادة المستخدمة في الطرق العلاجية منطقة ثابتة سليمة ‎intact constant region Yo‏ أو مقدار كاف من المنطقة الثابتة ‎constant region‏ لتتفاعل مع مستقبلة v44

Ya ‏نظرآ لامتلاكه‎ human isotype 1:01 IgGl ‏ويفضل النمط المتمائل البشري‎ Fe receptor Fe ‏على‎ 181 receptor FeRI Alii wal human isotypes ‏أعلى ألفة من الأنماط المتماثلة البشرية‎ ‏ثشائية التخصسص‎ Fab ‏ويمكن كذلك استخدام أجزاء‎ phagocytic cells ‏المتلهمة‎ LIA ay) ‏وللذراع‎ AB ‏حيث لأحد أذرع الجسم المضاد تخصص ب‎ bispecific Fab fragments ‏بألفة ارتباط تزيد عن أو‎ AB ‏وترتبط بعض الأجسام المضادة ب‎ Fo ‏م تخصص بمستقبلة‎ ‏لكل تركيز جزيئي.‎ "٠١ ‏أو‎ ٠١ ٠١ ٠١ 7٠١ ‏تساوي نحو‎ ‏على أعداد مخلطة‎ polyclonal sera ‏تحتوي الأمصال متعددة النسائل‎ Bale ‏من الأجسام المضادة المرتبطة بمغيرات خاصية متعددة على امتداد طول‎ mixed populations ‏قد تكون الأمصال متعددة النسائل متخصصة بجزء خاصة ل 8م مثل 81-10م.‎ cad ‏بيد‎ LAB ‏وترتبط الأجسام المضادة وحيدة النسيلة بمغير خاصية متخصص ضمن 88 قد يكون مغير‎ ٠ .nonconformational ‏أو غير بنيوي‎ conformational ‏خاصية بنيوي‎ lel ya) ‏ويمكن اختبار الفعالية الوقائية والعلاجية للأجسام المضادة باستخدام‎ transgenic animal model procedures Laisa ‏الاختبارات على التموذج الحيواني المحول‎ ‏الموصوفة في الأمثلة. وترتبط الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المفضلة بمغير خاصية ضمن‎ ‏الطبيعي‎ AB ‏أن يرمز لشق الطرف النيتروجيني الأول ل‎ Je) AB ‏ل‎ ٠١-١ ‏الشقات من‎ ae ‏وترتبط بعض الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المفضلة بمغير خاصية ضمن‎ .)١ ‏بالرقم‎ ‎.٠٠-* ‏من‎ dud ‏أحماض أمينية من )07 ويرتبط بعضها بمغير خاصية ضمن أحماض‎

FY ‏وترتبط بعض الأجسام المضادة المفضلة بمغيرات خاصية ضمن أحماض أمينية من‎ ‏أو 7-لا. وترتبط بعض الأجسام المضادة المفضلة بمغير خاصية يبدأ عند‎ ال-١‎ ء1-١‎ of) ‏وتشمل أجسام مضادة مفضلة‎ JAP ‏ل‎ ١١-١7 ‏الشقات من ١-؟ وينتهي عند الشقات من‎ > ‏بدرجة أقل تلك التي ترتبط بمغيرات خاصية ضمن الشقات من 1ف مرج ماح‎ ‏ويوصى بفحص أجسام مضادة من هذا القبيل لتحديد‎ AB ‏ل‎ 10-٠١ ‏7ه أو‎ ءاءح٠‎ ‏فعاليتها في نموذج فأري موصوف في الأمثلة قبل الاستخدام. فعلى سبيل المثال؛ لقد وجد أنه‎ ‏مح‎ YET AY ٠ ‏ترتبط أجسام مضادة معينة بمغيرات خاصية ضمن شقات‎ ‏تفتقر إلى الفعالية. وفي بعض الطرق تستخدم أجسام مضادة وحيدة النسيلة متعددة‎ EY-FY ‏و‎ ve vasa v. ‏لها تخصص ارتباط بمغيرات خاصية مختلفة. وقد تعطى أجسام مضادة من هذا القبيل على‎

AB ‏التعاقب أو في نفس الوقت. ويمكن كذلك استخدام أجسام مضادة لمكونات نشوانية غير‎ ‏فعلى سبيل المثال؛ يمكن توجيه أجسام مضادة نحو سينيوكلين بروتيني مرافق للمكون النشواني‎ .amyloid associated protein synuclein

AB ‏من‎ Jie ‏يذكر أن جسم مضاد مرتبط بمغير خاصية ضمن شقات معينة؛‎ Lexie ‏على سبيل المثال؛ فإن هذا يعني أن الجسم المضاد يرتبط بشكل متخصص بمتعدد ببتيد‎ 5-١ ‏في هذا المثال). وليس من الضروري أن يتلامس‎ 0m) AB ‏يحتوي على الشقات المعينة (أي؛‎ ‏وليس من الضروري أن يؤثر‎ 0m) AR ‏جسم مضاد من هذا القبيل مع كل شق ضمن الشقات‎ ‏على ألفة الارتباط‎ ABL-S ‏كل حمض أميني مفرد ضمن‎ deletion ‏أو حذف‎ substitution (Ja) ‏لجسم مضاد‎ epitope specificity ‏بدرجةٍ كبيرة. ويمكن تحديد تخصص مغير الخاصية‎ ١ ‏حيث تعرض‎ phage display library ‏على سبيل المثال؛ بتشكيل مكتبة عرض ملتهمة‎ antibody ‏ومن ثم تختار مكتبة عرض المتلهمة لأعضاء‎ (AP ‏أعضاء مختلفة سياقات جزئية مختلفة من‎ dale ‏متخصص بجسم مضاد تحت الاختبار. وتعزل عائلة من السياقات.‎ (Kio ‏ترتبط‎ ‏وأطوال مختلفة‎ common core sequence ‏تحتوي عائلة من هذا القبيل على سياق لبي مشترك‎ ‏بأعداد مختلفة. ويميز السياق اللبي القصير الذي يبين‎ flanking sequences ‏من سياقات مجائحة‎ Vo ‏ارتباط متخصص بالجسم المضاد؛ مغير خاصية مرتبط عن طريق الجسم المضاد. ويمكن‎ ‏كذلك اختبار الأجسام المضادة لتحديد تخصصها بمغير خاصية في معايرة تنافسية‎

Jal ‏مع جسم مضاد قد حدد تخصصه بمغير الخاصية له. فعلى سبيل‎ competition assay ‏مع نفس مغير‎ AP ‏ترتبط الأجسام المضادة التي تتنافس مع الجسم المضاد 306 للارتباط ب‎ .ه-١ ‏من‎ AP ‏أي ضمن الشقات‎ 3D6 ‏الخاصية أو مغير خاصية مشابه كما هو الحال مع‎ © ‏وبالمثل؛ ترتبط الأجسام المضادة التي تتنافس مع الجسم المضاد 1005 مع نفس مغير الخاصية‎ ‏ويعتبر فحص أجسام مضادة لتحديد‎ IF ‏من‎ AR ‏أو مغير خاصية مشابه؛ أي ضمن الشقات‎ ‏فعلى سبيل‎ therapeutic efficacy ‏تخصص مغير الخاصية متنبئٌ مفيد عن الفعالية العلاجية‎

V=) ‏المثال. من المحتمل أن يكون جسم مضاد حدد ليرتبط بمغير خاصية ضمن الشقات من‎ .Alzheimer's disease ‏للوقاية من ومعالجة مرض الزهيمر‎ YU 28 AB ‏ل‎ Yo vasa

A

‏وللأجسام المضادة وحيدة النسيلة أو متعددة النسائل التي ترتبط بشكل متخصص بجزء‎ ‏مفضل ل 8م بدون الارتباط مع مناطق أخرى ل 8م عدد من المزايا مقارنة بالأجسام‎ ‏سليم‎ AB ‏المضادة وحيدة النسيلة التي ترتبط بمناطق أخرى أو أمصال متعددة النسائل ل‎ ‏تحتوي‎ equal mass dosages ‏يتعلق بالجرعات ذات المقادير المتساوية‎ Lad ‏أولك‎ .intact AB ‏جرعات من أجسام مضادة ترتبط بشكل متخصص بأجزاء مفضلة على جرعة جزيئية كبيرة‎ 0 ‏يمكن أن تحث‎ «Lil amyloid plaques ‏في تنقية لويحات نشوانية‎ Aad ‏من أجسام مضادة‎ ‏ضد‎ clearing response ‏أجسام مضادة ترتبط بشكل متخصص بأجزاء مفضلة استجابة تنقية‎ ‏سليم‎ APP ‏بدون حث استجابة تنقية ضد متعدد ببتيد ل‎ amyloid deposits ‏رواسب نشوائنية‎ side effects ‏مما يؤدي إلى تقليل احتمالية التأثيرات‎ intact APP polypeptide ‏للغلوبلينات المناعية‎ dale ‏خصائص‎ i ٠١ els ‏للجسم المضاد‎ basic antibody structural unit ‏تعرف الوحدة الأساسية البنيوية‎ ‏من زوجين‎ tetramer ‏وتتألف كل بنية رباعية‎ subunits ‏تشتمل على أربع وحدات ثائوية‎ sa) ‏واحدة‎ "i aed’ ‏متمائلين من سلاسل متعدد ببتيد ويحتوي كل زوج على سلسلة‎ ‏كيلودالتون). ويحتوي جزء الأمين‎ 7+-© ٠ ‏واحدة (نحو‎ TLE ‏كيلودالتون) وسلسلة‎ Yo ‏تتكون من‎ variable region ‏من كل سلسلة على منطقة متغيرة‎ amino-terminal portion ‏الطرفي‎ Vo ‏أو أكثر من الأحماض الأمينية مسؤولة بصفةٍ أساسية عن تمييز‎ ٠٠١ ‏إلى‎ ٠٠١ ‏نحو‎ ‎carboxy-terminal portion ‏ويحدد جزء الكربوكسي الطرفي‎ .2018©0 recognition ‏المولد المضاد‎ ‏مسؤولة بصفة أساسية عن وظيفة المؤثر‎ constant region ‏من كل سلسلة منطقة ثابتة‎ -effector function ‏وتصنف‎ .Jambda ‏أو لمدا‎ kappa ‏إما بصفتها كابا‎ light chains ‏سلاسل خفيفة‎ Cilia g Y. ‏أو ابسيلون‎ delta ‏دلتا‎ calpha Wl anu ‏ميو‎ (gamma ‏بصفتها جاما‎ heavy chains ALE ‏السلاسل‎ ‎JgA IgM IgG ‏بالصورة‎ antibody's isotype ‏وتحدد النمط المتمائل للجسم المضاد‎ epsilon ‏و 185 على الترتيب. وضمن السلاسل الخفيفة والثقيلة ترتبط المنتطقتين المتغيرة والثابتة‎ 0 ‏حمض أميني أو أكثر على أن تشتمل السلسلة‎ ١١ ‏تتكون من نحو‎ AT ‏عن طريق المنطقة‎

GUS ‏أحماض أمينية أو أكثر. (انظر عموما؛‎ ٠١ ‏الثقيلة كذلك على منطقة "7 تتكون من نحو‎ ve

بعنوان ‎Fundamental Immunology‏ باسم دبليو ‎٠‏ بول ‎(Paul, W.‏ الطبعة الثانية؛ مطبعة رافين ‎«Raven‏ نيويورك»؛ 989 ١م)؛‏ الفصل السابع؛ (حيث دمج في هذا البيان بكامل محتواه للإحالة إليه كمرجع لجميع الأغراض). وتشكل المناطق المتغيرة ‎variable regions‏ لكل زوج من السلاسل الخفيفة والثقيلة موقع ارتباط الجسم المضاد ‎tly antibody binding site‏ على ذلك ؛ للجسم المضاد السليم ‎intact‏ ‎antibody‏ موقعي ارتباط باستثناء الأجسام المضادة ثنائية المجموعة الوظيفية ‎bifunctional‏ أو ثنائية التخصص 0 يكون موقعي الارتباط متماثلين. وتبدي كل السلاسل نفس البنية العامة للمناطق الهيكلية المحفوظة نسبيآً ‎relatively conserved framework regions (FR) (FR)‏ المتصلة عن طريق المناطق الثلاثة المتغيرة بشكل مفرط ‎hypervariable regions‏ تسمى كذلك ‎Ve‏ مناطق تحديد الكمال ‎complementarity determining regions‏ أو ‎.CDRs‏ وتتحاذى ‎CDRs‏ من السلسلتين لكل زوج عن طريق المناطق الهيكلية ‎framework regions‏ مما ‎(Fas‏ الارتباط بمغير الخاصية المتخنصص ‎epitope‏ ©06015. وتشتمل كل من السلاسل الخفيفة والثقيلة من الطرف النيتروجيني ‎N-terminal‏ إلى الطرف الكربوكسيلي ‎C-terminal‏ على الميادين ‎(FRI‏ ‎CDR3 <FR3 «CDR2 FR2 «CDRI‏ و ‎.FR4‏ وكان تخصص الأحماض الأمينية لكل ‎Vo‏ ميدان ‎Lag‏ للتعريفات التي ‎Lada‏ كابات ‎Kabat‏ في كتاب بعنوان ‎Sequences of Proteins of Immunological Interest‏ (شركة ناشيونال انستيتيوت أف هيلث ‎National Institutes of Health‏ بيؤئيسدا ‎Bethesda‏ ولاية مارياند؛ ‎AAY‏ لم و9951 ١م)؛‏ أو ما جاء عن كوثا ‎Chothia‏ وليسك ‎Lesk‏ في مجلة ‎of Mol Biol.‏ المجلد 197 ص 17-401 ‎AV)‏ 8٠م)؛‏ وما ‎sla‏ عن كوثيا ‎Chothia‏ ومعاونيه في مجلة ‎(Nature‏ المجلد ‎FEY‏ ‎Ap) AAR) AAY-AVA a x.‏ ‎ii‏ إنتاج أجسام مضادة غير بشرية ‎Nonhuman Antibodies‏ يمكن إنتاج أجسام مضادة وحيدة النسيلة غير شرية ‎monoclonal antibodies‏ مصقصن-«ه» على سبيل المثال من فأر ‎«murine‏ ختزير هندي ‎guinea pig‏ حيوان رئيسي 01106 أرتب ‎rabbit‏ أو جرذ ‎rat‏ عن طريق ‎immunizing aia‏ ‎ve‏ الحيوان باستخدام ‎AB‏ على سبيل المثال. ويشتمل متعدد الببتيد الأطول على 08م أو شدفة ‎vad‏

مناعية ‎AP — immunogenic fragment‏ أو أجسام مضادة للنمط الذاتي ‎anti-idiotypic antibodies‏ ضد جسم مضاد ‎LAR‏ انظر ما جاء عن هارلو ‎Harlow‏ ولان ‎Lane‏ في كتساب بعنوان ‎cdntibodies‏ _دليل مرشد للمختبرات ‎«CSHP)‏ نيويورك؛ ‎AAA‏ ١م)‏ (دمج في هذا البيان للإحالة إليه كمرجع لجميع الأغراض). ويمكن الحصول على ‎Ase‏ مناعي ‎immunogen‏ من هذا القبيل 0 ل ‎.recombinant expression‏ ويمكن إعطاء ‎A gall‏ المناعي جوازاً وهو ملتحم 0 أو بطريقة أخرى متراكب مع بروتين حامل ‎carrier protein‏ كما سيوصف أدناه. ويمكن إعطاء المولد المناعي مع مادة مساعدة ‎adjuvant‏ جوازاً. ويمكن استخدام عدة أنواع من المواد المساعدة كما سيوصف أدناه. ويفضل استخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة ‎Complete Freund’s adjuvant‏ ‎ye‏ ثم المادة المساعدة غير الكاملة لتمنيع حيوانات المختبر ‎Bale 5 .laboratory animals‏ تمستخدم ‎ail Jf‏ أو خنازير هندية لتحضير أجسام مضادة متعددة النسائل. وعادةٌ تستخدم فئران لتحضير أجسام مضادة وحيدة النسيلة. وتفحص أجسام مضادة لتحديد الارتباط المتخصسص ل ‎AB‏ ‏وبشكل إضافي تفحص الأجسام المضادة جوازاً لتحديد الارتباط بالمنطقة المتخصصة ‎specific region‏ ل ‎-AB‏ ويمكن إجراء الفحص الأخير بتحديد إرتباط جسم مضاد بطوافر ‎Vo‏ حذف ‎deletion mutants‏ لببتيد ‎AR‏ وتحديد أي من طوافر الحذف مرتبطة بالجبسم المضاد. ويمكن تقييم الارتباط عن طريق بقعة ويسترن ‎Western blot‏ أو ‎ELISA‏ على سجبيل المثال. وتحدد الشدفة الصغرى التي تبين الارتباط المتخصص بالجسم المضاد مغير الخاصية للجبسم المضاد ‎Yas‏ من ذلك؛ يمكن تحديد تخصص مغير الخاصية عن طريق معايرة تنافسية ‎Cua competition assay‏ يتنافس الجسم المضاد المرجعي ‎reference antibody‏ والجسم المضاد ‎٠‏ اللاختبار ‎test‏ ليرتبط ب ‎AP‏ وإذا تنافس الجسم المضاد المرجعي أو الجسم المضاد للاختبار فإنهما يرتبطان بنفس مغير الخاصية أو بمغيرات الخاصية بصورةٍ قريبة بشكل ‎CHS‏ ليتداخل ارتباط أحد الأجسام المضادة مع ارتباط الجسم المضاد الأخير. ويتمثل النمط المتمائل المفضل لأجسام مضادة من هذا القبيل في نمط متمائل فأري من 18028 أو نمط متمائل مكافيء في جزيئات ‎species‏ أخرى. ويعتبر النمط المتماثل الفأري 84 مكافئاً للنمط المتمائل البشري ‎JgGl1 Yo‏ ve humanized ‏ومعذلة في صورة بشرية‎ chimeric ‏أجسام مضادة خيمرية‎ iii ‏يكون للأجسام المضاة الخيمرية والمعدلة في صورة بشرية نفس تخصص الارتباط‎ ‏ونفس الألفة أو تخصص ارتباط وألفة متشابهين كما هو في فأر أو جسم مضاد غير بشري‎ ‏لتشكيل جسم مضاد خيمري أو معذل في‎ starting material ‏آخر يزود المادة الأولية‎ nonhuman ‏صورة بشرية. وتعتبر الأجسام المضادة الخيمرية تلك الأجسام المضادة التي شكلت فيها‎ 0 ‏الخفيفة والثقيلة عادة عن طريق الهندسة الوراثية‎ chain genes ‏جينات السلسلة‎ ‏من أجزاء جين غلوبلين مناعي تنتمي لجزيئات مختلفة. فعلى سبيل‎ «genetic engineering ‏للجينات المأخوذة من جسم مضاد وحيد النسيلة‎ (V) variable ‏المثال» قد ترتبط أجزاء المتغير‎

IgGl ‏مثل‎ human constant (C) (C) ‏بأجزاء الثابت لبشري‎ mouse monoclonal antibody ‏فأري‎ ‏على ذلك يكون الجسم المضاد الخيمري‎ Teli IgGl ‏ويفضل النمط المتمائل البشري‎ IgG4 ‏و‎ ٠ ‏يتكون من 7 أو ميدان الارتباط بالمولد‎ hybrid protein ‏النموذجي عبارة عن بروتين هجين‎ ‏من جسم مضاد فأري و © أو ميدان المؤثر من جسم مضاد‎ antigen-binding domain ‏المضاد‎ ‏بشري.‎ ‏وتحتوي الأجسام المضادة المعدلة في صورة بشرية على شقات هيكلية لمنطقة متغيرة‎ ‏من جسم مضاد بشري بصفةٍ جوهرية (يسمى جسم مضاد‎ variable region framework residues Vo ‏مسن‎ complementarity determining regions ‏ومناطق تحديد الكمال‎ (acceptor antibody ‏متقبل‎ ‎la ‏بصفةٍ جوهرية (يسمى غلوبلين مناعي‎ mousc-antibody ‏جسم مضاد فأري‎ ‏انظر ما جاء عن كوين 8 ومعاونيه في مجلة‎ . (donor immunoglobulin ‏ونشرة براءة‎ (a) AA AY ٠١-٠ Y4 ‏ص‎ «AT ‏المجلد‎ «Proc. Natl. Acad. Sci. USA ‏وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 9,197,707 وبراءة‎ ٠ /١7851 ‏الاختراع الدولية رقم‎ xe ‏وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 9,988,084 وبراءة‎ 0,197,76١ ‏الاختراع الأمريكية رقم‎ ‏في براءة الاختراع‎ Winter ‏وما جاء عن وينتر‎ 9,970.0٠ ‏الاختراع الأمريكية رقم‎ ‏الأمريكية رقم 5,778,074 (دمجت في هذا البيان بكامل محتواها للإحالة إليها كمرجع لجميع‎ ‏كذلك إن وجدت؛ من‎ constant region(s) ‏وتتكون المنطقة (المناطق) الثابتة‎ ٠ ‏الأغراض)‎ ‏غلوبلين مناعي بشري بصفةٍ جوهرية أو بشكل كامل. وعادة تختار الميادين المتغيرة‎ ve

Yo ‏من أجسام مضادة بشرية تبدي سياقاتها الهيكلية‎ human variable domains ‏البشرية‎ ‏من تطابق السياق مع ميادين المنطقة المتغيرة الفأارية‎ Ale ‏ا:500060درجة‎ 458 ‏ويمكن أن تشتق الشقات الهيكلية في‎ .CDRs ‏من حيث تشتق‎ murine variable region domains ‏المتطقة المتغيرة للسلسلة الثقيلة والخفيفة من نفس سياقات الجسم المضاد البشري‎ ‏أو من سياقات مختلفة. وقد تكون سياقات الجسم المضاد البشري‎ human antibody sequences ° ‏عبارة عن سياقات للأجسام المضادة البشرية الموجودة في الطبيعة أو قد تكون سياقات قانونية‎ ‏ومعاونيه‎ Carter ‏عن كارتر‎ sla ‏لأجسام مضادة بشرية عديدة. انظر ما‎ consensus sequences ‏في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 97/77307. وتختار أحماض أمينية معينة من الشقات‎ ‏اعتمادآ على تأثيرها الممكن على بنية‎ substitution ‏الهيكلية للمنطقة المتغيرة البشرية للاستبدال‎ ‏الارتباط بالمولد المضاد «©©. ويمكن البحث عن تأثيرات‎ Ss CDR conformation CDR Ve ‏ممكنة من هذا القبيل بتشكيل واختبار خصائص الأحماض الأمينية عند مواقع معينة أو‎ ‏لأحماض أمينية خاصة.‎ mutagenesis ‏بالملاحظة الأولية لتأثيرات الاستبدال أو توليد الطفرات‎ ‏فعلى سبيل المثال؛ عندما يختلف حمض أميني بين شق هيكلي لمنطقة متغيرة فأارية‎ ‏استخدام الحمض الأميني الهيكلي‎ Bale ‏وشق هيكلي لمنطقة متغيرة بشرية مختارة ينبغي‎ ‏عوضاً عن الحمض الأميني الهيكلي‎ mouse antibody ‏المكافئ من الجسم المضاد الفأري‎ Vo : ‏عندما يتوقع على نحو معقول أن الحمض الأميني‎ human framework amino acid ‏البشري‎ ‏المضادء‎ A gall ‏مع‎ noncovalently ‏يرتبط مباشرةٌ بشكل غير إسهامي التكافؤ‎ )١( «CDR region CDR ‏مجاور لمنطقة‎ )7( ‏أنجستروم‎ ١ ‏(على سبيل المثال ضمن نحو‎ CDR ‏يتفاعل بطريقةٍ أخرى مع منطقة‎ (7) ‏أو‎ (CDR ‏».من منطقة‎ ./1-1711 interface VL-VH ‏يشارك في السطح البيني‎ (¢) ‏وتتمثل أحماض أمينية أخرى مرشحة للإبدال في أحماض أمينية هيكلية بشرية متقبلة‎ ‏تعتبر غير اعتيادية للغلوبلين المناعي البشري عند‎ acceptor human framework amino acids ‏ذلك الموقع. وقد تستخدم أحماض أمينية من الموقع المكافئ للجسم المضاد المانح الفأري‎ ‏من المواقع المكافئة للغلوبلينات المناعية البشرية الأكثر نموذجية‎ mouse donor antibody ~~ Ye vaa

‎Lage‏ عن هذه الأحماض الأمينية. وتتمتل أحماض أمينية أخرى مرشحة للإبدال في أحماض أمينية هيكلية بشرية متقبلة تعتبر غير اعتيادية للغلوبلين المناعي البشري عند ذلك الموقع. ‎Bale‏ تبدي هياكل المنطقة المتغيرة ‎variable region frameworks‏ للغلوبلينات المناعية المعدلة بالصورة بشرية ‎humanized immunoglobulins‏ تطابق سياق بنسبة 7788 على الأقل لسياق ° هيكل المنطقة المتغيرة البشرية ‎human variable region framework sequence‏ أو لسياق قانوني من هذه السياقات. ‎Liv‏ أجسام مضادة بشرية: تزود أجسام مضادة بشرية ‎Human antibodies against AB AB ua‏ باستخدام تشكيلة من التقنيات الموصوفة أدناه. وتختار بعض الأجسام المضادة البشرية عن طريق تجارب ‎Ve‏ ارتباط تنافسية ‎competitive binding experiments‏ أو بطريقة ‎«sal‏ ليكون لها نفس تخصص مغير الخاصية كما في الجسم المضاد الفأري الخاص مثل أحد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ‎a‏ الموصوفة في المثال ‎(XT)‏ ويمكن كذلك فحص الأجسام المضادة البشرية لتحديد تخصص مغير الخاصية الخاص باستخدام فقط شدفة من ‎AB‏ بصفتها المولد المناعي ‎immunogen‏ و/أو بفحصض أجسام مضادة ضد مجموعة من طوافر الحذف ‎deletion mutants‏ ‎yo‏ ل ‎AR‏ ويفضل أن يكون للأجسام المضادة البشرية ‎isotype specificity human IgGl‏ تخصص نمط متمائل بشري ‎IgGl‏ ‎)١(‏ منهجية ‎WA‏ تريوما ‎:Trioma Methodology‏ لقد وصفت الطريقة الأساسية وشريك التحام الخلايا التنمونجي ‎SPAZ-4 exemplary cell fusion partner‏ ليستخدم في الطريقة الراهنفة من قبل أوستبيرغ 068008 ومعاونيه في مجلة ‎Hybridoma‏ المجلد ‎oY‏ ص 77-799 (1987م)؛ ولقد ذكرت براءة الاختراع الأمريكية رقم 4,175,174 باسم أوستبيرغ ‎Oestberg‏ وبراءة الاختراع الأمريكية رقم £176,111 باسم انغليمان ‎Engloman‏ ومعاونيه (وأدمج كل منها في هذا البيان بالكامل للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض). وتسمى خطوط الخلية التي تنتتج الجسم المضاد ‎antibody-producing cell lines‏ والناتجة من هذه الطريقة خلايا تريوما ‎f 13 triomas‏ ‎ve‏ الأنها ناتجة من ثلاث خلايا خليتين بشريتين وخلية فأرية واحدة. وبشكل ابتدائي» يلتمم

بي خط ورم نضاعي فأري ‎mouse myeloma line‏ بخلايا ليمفاوية بشرية من نوع8 ‎human B-lymphocyte‏ للحصول على خلية هجينة غيرية لا تقوم بإنتاج الجسم المضاد ‎cnon-antibody-producing xenogeneic hybrid cell‏ مثل خط خلية ‎SPAZ-4 cell line SPAZ-4‏ الموصوف من قبل أوستبيرغ 06058 في المرجع سابق الذكر. ومن ثم تلتحم ‎xenogeneic cell A pel adsl) °‏ بالخلية الليمفاوية البشضرية الممنعة من نوع ‎B‏ ‎immunized human B-lymphocyte‏ للحصول على خط ‎als‏ تريوما تنتتج جسم مضاد ‎.antibody-producing trioma cell line‏ ولقد وجد أن خلايا تريوما 700 جسم مضاد أكثر ‎Lol‏ ‏من الخلايا الهجينة الاعتيادية ‎ordinary hybridomas‏ الناتجة من الخلايا البشرية ‎.human cells‏ وتنتج الخلايا اللمفاوية الممنعة من نوع 3 من الدم ‎blood‏ الطحال ‎«spleen‏ العقد ‎x‏ اللمفاوية ‎lymph nodes‏ أو نخاع العظم ‎bone marrow‏ من ‎gle‏ بشري ‎.human donor‏ وإذا كاتنت أجسام مضادة ضد مولد مضاد متخصص أو مغير خاصية متخصص مرغوبة؛ يفضل استخدام ذلك المولد المضاد أو مغير الخاصية منه للتمنيع. وقد يجرى التمنيع في الجسم الحي ‎in vivo‏ أو في أنبوب الاختبار ‎vitro‏ «:. وفيما يتعلق بالتمنيع في الجسم الحي؛ تعزل ‎WIA Bile‏ 18 من بشر ممنع ب 8م أو شدفة منه أو متعدد ببتيد أكبر يحتوي على 8م أو شدفة منه أو جسم ‎٠‏ - مضاد للنمط المتمائل ‎anti-idiotypic antibody‏ لجسم مضاد ل ‎AB‏ وفي بعض الطرق؛ تعزل خلايا 8 من نفس المريض الذي يتلقى في النهاية العلاج بالجسم المضاد. وفيما يتعلق بالتمنيع في أنبوب الاختبار ؛ تعرض خلايا ‎B‏ اللمفاوية ‎Bale‏ إلى مولد مضاد لمدة تتراوح من ‎١7‏ إلى ‎VE‏ يوم في أوساط مثل ‎RPMI-1640‏ (انظر ما جاء عن انغليمان ‎Engleman‏ في المرجع سابق الذكر) مكمل باستخدام بلازما بشر ‎human plasma‏ تركيزه ‎N+‏ ‏9 وتلتحم الخلايا اللمفاوية الممنعة من نوع ‎B‏ بخلية هجينة غيرتّة مثل ‎SPAZ-4‏ ‏باستخدام طرق معروفة جيدآ. فعلى سبيل المثال ؛ تعالج الخلايا باستخدام متعدد إثيلين غليكول ‎polyethylene glycol‏ يتراوح تركيزه من 2-40 7/5 وبوزن جزيئي يتراوح من ‎45200-1٠٠١0‏ ‏عند نحو الم لمدة تتراوح من نحو ‎٠١-©‏ دقائق. وتفصل الخلايا من مزيج الالتحام ‎fusion mixture‏ وتتكائر في أوساط ذات انتقائية نحو الخلايا الهجينة المرغوبة ‎hybrids‏ (على ‎Yo‏ سبيل المثال ‎HAT‏ أو ‎(AH‏ وتميز النسائل التي تفرز أجسام مضادة ذات تخصص ارتباط

YA

‏خلايا تريوما لتحديد مقدرتها على الارتباط‎ culture medium ‏مطلوب بمعايرة وسط مستنبت‎ ‏ب 5ه أو شدفة منه. وتنسل خلايا تريوما التي تنتج أجسام مضادة بشرية ذات التخصسص‎ limiting dilution technique ‏جزئياً 410 باستخدام تقنية التخفيف المحدّد‎ Shad ‏المنشود‎ ‏وتنمو في أنبوب الاختبار في وسط مستنبت. ومن ثم تختبر خطوط خلية تريوما لتحديد قدرتها‎ ‏على الارتباط ب 8م أو شدفة منه.‎ ٠ ‏ومع أن خلايا تريوما ثابتة وراثياً إلا أنها لا تنتج أجسام مضادة بمستويات مرتفعة‎ ‏بتنسيل جينات الجسم المضاد من خلية‎ expression levels ‏جدآً. ويمكن زيادة مستويات التعبير‎ ‏واحد أو أكثر وتحويله إلى خطوط خلية ثديية‎ expression vectors ‏تريوما إلى ناقل تعبير‎ ‏قياسية.‎ yeast ‏أو خيميرية‎ bacterial ‏أو بكتيرية‎ mammalian

Transgenic Non-Human (ia ‏حيوانات ثديية غير بشرية محولة‎ (Y) ye -Mammals ‏من حيوانات ثديية غير بشرية محولة جينياً‎ AP ‏يمكن إنتاج أجسام مضادة بشرية ضد‎ ‏تحمل شيفرة جزء‎ transgenes ‏تحتوي على جينات محولة‎ non-human transgenic mammals ‏الغلوبلين المناعي البشري. وعادةٌ يثبط موضع الغلوبلين المناعي‎ Tocus ‏على الأقل من موضع‎ ‏من هذا القبيل من الناحية‎ transgenic Lia ‏ثديية محولة‎ Gl sad endogenous ‏داخلي المنشأ‎ ve ‏الوظيفية. ويفضل أن يشتمل جزء موضع الغلوبلين المناعي البشري على سياقات لم يعاد‎ ‏جينات الغلوبلين‎ inactivation apf ‏ترتيبها لمكونات السلسلة الثقيلة والخفيفة. ويمكن تحقيق‎ ‏وإدخال جينات الغلوبلين المناعي‎ endogenous immunoglobulin genes ‏المناعي داخلية المنشأ‎ ‏أو‎ targeted homologous recombination ‏عن طريق تأشب مستهدف مماتل‎ Lindl ‏خارجية‎ ‏©8ا. وتكون الحيوانات الثديية المحولة جينيآ‎ chromosomes YAC ‏بإدخال كروموسومات‎ > © ‏الناتجة من هذه العملية قادرة على إعادة ترتيب سياقات مكون الغلوبلين المناعي وظيفيا‎ ‏والتعبير عن مجموعة الأجسام المضادة للأنماط المتماثلة المختلفة التي تحمل شفرتها جينات‎ ‏غلوبلين مناعي بشري بدون التعبير عن جينات غلوبلين مناعي داخلية المنشأً. ووصف إنتاج‎ ‏على سبيل المثالء‎ (Jd ‏وخواص الحيوانات الثديية التي لها هذه الخواص بتفصيل من‎ ‏لونبيرغ 100068 ومعاونيه في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 37/177797 (1447م)؛‎ ve ‏ل‎ ve ‏خط لخرف‎ (O,AVE, YA (0, AVY, TAY ‏وبراءت الاختراع الأمريكية أرقام‎ (0,0M4,AY0 ‏م جام ترف تارم تترف‎ (0,11), VT ‏كارف 4 ب اثلارف‎

Nature ‏ام)»؛ ومجلة‎ 654 ١٠67-4 V La) EA ‏المجلد‎ Nature ‏ومجلة‎ 0 AT ‏في‎ Kucherlapati ‏المجلد ذا ص آي )1 149( وما جاء عن كوتشير لاباتي‎ Biotechnology ‏(199م)؛ (حيث دمج كل منها بكامل محتواها‎ 91/٠747 ‏نشرة براءة الاختراع الدولية رقم‎ ٠ ‏للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض) . وتعتبر الفثران المحولة جينياً ملائمة بصفة خاصة.‎ ‏بتمنيع حيوان ثديي غير بشري محول جينياً كما وصسف‎ AP ‏وتنتج الأجسام المضادة ضد‎ ‏أو‎ AB ‏في المرجع سابق الذكر ¢ باستخدام‎ Kucherlapati ‏أو كوتشير لاباتي‎ Lonberg ‏لونبرغ‎ ‎B ‏جزء منه. وتحضر أجسام مضادة وحيدة النسيلة عن طريق؛ على سبيل المثال؛ التحام خلايا‎ ‏ملائمة‎ myeloma cell lines ‏ورم نخاعي‎ ada ‏من حيوانات تديية من هذا القبيل بخطوط‎ ve ‏ويمكن‎ -conventional Kohler-Milstein technology ‏-ملستين التقليدية‎ Hla ‏باستخدام تقنية كو‎ ‏كذلك تزويد أجسام مضادة متعددة النسائل بشرية في صورة مصل 2 من بشر ممنع بعامل‎ ‏ويمكن كذلك تركيز أجسام مضادة متعددة التسائل من هذا‎ immunogenic agent ‏مولد للمناعة‎

Jia ‏أو ببتيد نشواني آخر‎ AB ‏باستخدام‎ affinity purification ‏القبيل جوازاً عن طريق تنقية ألفية‎ ‏مادة مفاعلة للألفة.‎ Ne :Phage Display Methods ‏طرق عرض ملتهمة‎ (7) ‏في فحص مكتبة‎ AB ‏وتتمثل طريقة أخرى للحصول على أجسام مضادة بشرية ل‎ ‏من خلايا‎ (deoxy ribonucleic acid ‏(حمض ريبي نووي منقوص الأكسجين‎ DNA library DNA «Science ‏ومعاونيه في مجلة‎ Huse ‏بشرية وفقآً للبروتوكول العام المذكور من قبل هوسي‎ 3 ‏وكما وصف لمنهجية خلايا تريوماء يمكن‎ (pV AAR) ١781-١729 ‏المجلد 7 ص‎ © ‏شدفات؛ متعددات ببتيد كبيرة‎ CAB ‏الحصول على خلايا 8 من هذا القبيل من إنسان ممنع ب‎ ‏ويحصل‎ .200-0100016 antibodies ‏تحتوي على 8م أو شدفات أو أجسام مضادة للنمط الذاتي‎ ‏على خلايا 8 من هذا القبيل من مريض يتلقى في النهاية العلاج بالجسم المضاد. وتختار‎ ‏سياقات تحمل شيفرة أجسام مضادة‎ Jud ‏أو جزء منه. ومن ثم‎ AB ‏أجسام مضادة مرتبطة ب‎ ‏هذا القبيل (أو أجزاء مرتبطة) وتضخم. ويصبح البروتوكول الموصوف من قبل هوسي‎ 0a ve

‎Huse‏ أكثر فعالية عند التأشب باستخدام تقنية عرض ملتهمة. انظر؛ على سبيل المثال؛ ما جاء عن دوير ‎Dower‏ ومعاونيه في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم ‎97/17799١‏ وماك كافيرتي ‎MoCafferty‏ ومعاونيه في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم ‎97/01٠041‏ والبراءات الأمريكية أرقسام ‎YA‏ /الاخرف الادكرا لاخرف الامترط قارف 47 1 ‎ATV,‏ 0( الى ‎FFTs ١‏ 0,070 (حيث دمج كل منها بكامل محتواها للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض). وفي هذه ‎Guhl‏ ؛ تنتج مكتبات ملتهمة ‎Cua libraries‏ تعرض الأعضاء ‎members‏ أجسام مضادة مختلفة على سطوحها الخارجية. ‎Bale‏ تعرض الأجسام المضادة في صورة شدفات ‎Fv‏ أو ‎Fab‏ وتختار أجسام مضادة تعرض خلايا ملتهمة بتخصص منشود بزيادة الألفة لببتيد

‏8ه أو شدفة منه.

‎Gays ١‏ لشكل آخر لطريقة عرض الملتهمة؛ يمكن إنتاج أجسام مضادة بشضرية لها تخصص ارتباط للجسم المضاد الفأاري المختار. انظر ما جاء عن وينتر ‎Winter‏ في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 47/70991. وفي هذه الطريقة؛ تستخدم المنطقة المتغيرة من السلسلة ‎Ala al‏ أو الخفيفة للجسم المضاد الفأري المختار بصفتها مادة أولية ‎starting material‏ وإذا اختيرت؛ على سبيل المثال » المنطقة المتغيرة من السلسلة الخفيفة بصفتها المادة الأولية؛

‎JZ Sam ve‏ المكتبة الملتهمة بحيث تعرض الأعضاء نفس المنطقة المتغيرة من السلسلة الخفيفة ‎light chain variable region‏ (أي المادة الأولية ‎(A‏ ومنطقة متغيرة من سلسلة ثقيلة ‎heavy chain variable region‏ مختلفة. ويحصل على المناطق المتغيرة من السلسة ‎ALE AY‏ من مكتبة مناطق متغيرة بشرية معادة الترتيب ‎(ae rearranged‏ سلسلة ‎ALAS‏ وتختار ملتهمة تبدي ارتباط متخصص قوي ل ‎AB‏ (على سبيل المثال ‎*٠١‏ لكل تركيز جزيئي على الأقل ويفضل

‎٠١‏ لكل تركيز جزيئي على الأقل). ومن ثم تعمل المنطقة المتغيرة البشرية من السلسلة

‏الثقيلة من هذه الملتهمة بصفتها مادة أولية لتشكيل مكتبة ملتهمة أخرى. وفي هذه المكتبة؛

‏تعرض كل خلية ملتهمة نفس المنطقة المتغيرة من السلسلة الثقيلة (أي المنطقة المميزة من

‏مكتبة العرض ‎display library‏ الأولى) ومنطقة متغيرة من سلسلة خفيفة مختلفة. ويحصل على

‏المناطق المتغيرة من السلسلة الخفيفة من مكتبة لمناطق متغيرة بشرية معادة الترتيسب من

‎ve‏ سلسلة خفيفة. ومرة أخرى تختار ملتهمة تبدي ارتباط متخصص قوي ل ‎AB‏ وتعرض هذه

الملتهمة المناطق المتغيرة من الأجسام المضادة ل ‎AB‏ البشرية بشكل كامل. وعادةٌ يكون للأجسام المضادة نفس تخصص مغير الخاصية أو تخصص مغير خاصية مشابه مثل المادة الأولية الفأرية. (5). اختيار المنطقة الثابتة:

يمكن ربط المناطق المتغيرة من السلسلة الثقيلة والخفيفة للأجسام المضادة الخيمرية أو المعدلة في صورة بشرية أو البشرية التي يمكن أن ترتبط بجزء على الأقل من المنطقة الثابتة البشرية. ويعتمد اختيارالمنطقة الثابتة جزئياً إن كان المكمل المعتمد على الجسم المضاد ‎antibody-dependent complement‏ و /أو السمية التي تحدثها الخلايا ‎cellular mediated toxicity‏ مرغوبة. فعلى سبيل ‎(Jal‏ يكون للنمطين المتماظين ‎IgGl‏ و 1503 ‎A led‏ مكملة

‎complement activity Ve‏ ولا يكون ذلك للنمطين المتماثلين 1802 و 1804. ويمكن أن يؤثر اختيار النمط المتمائل كذلك على مرور الجسم المضاد إلى الدماغ ‎brain‏ ويفضل النمط المتماثل البشري ‎IgGl‏ وقد تكون المناطق الثابتة من السلسلة الخفيفة ‎lambda laa}‏ أو كابا ‎kappa‏ ‏ويمكن التعبير عن الأجسام المضادة في صورة وحدات رباعية تحتوي على سلسلتين خفيفتين وسلسلتين شقيلتين» في صورة سلاسل ثقيلة وخفيفة منفصلة مثل ‎«Fab‏ 1207)80(2 و ‎Fv‏ أو ‎ve‏ في صورة أجسام مضادة ذات سلسلة مفردة حيث ترتبط ميادين متغيرة من السلسلة ‎Ale AN‏ والخفيفة من خلال مباعد ‎spacer‏ ‏)1( التعبير عن الأجسام المضادة المأشوبة: تنتج عادة الأجسام المضادة الخيميرية والمعدلة في صورة بشرية والبشرية عن طريق تعبير مأشوب. وعادةً تشتمل وحدات متعددة نوويتيد مأشوبة على سياق تعبير ضابط ‎expression control sequence Ye‏ يرتبط بشكل ممكن إجراؤه بسياقات التشسفير لسلاسل الجسم ‎lad‏ بما في ذلك مناطق معززة ‎promoter regions‏ مقترنة طبيعياً ‎naturally-associated‏ أو مغايرة. ويفضل أن تكون سياقات التعبير الضابطة عبارة عن أنظمة معززة سوية النواة ‎eukaryotic promoter systems‏ في نواقل قادرة على تحويل أو تخميج الخلايا العائلة سوية النواة ‎eukaryotic host cells‏ خمجاً تحويلياً. وبمجرد دمج الناقل في العائل المناسبء ‎daisy‏ العائل في

و ظروف ملائمة للتعبير عن سياقات نوكليوتيد بمستوى عالٍ ‎Tax‏ وجمع وتنقية الأجسام المضادة المتفاعلة تفاعلا تبادلياً ‎.crossreacting‏ ‎dale‏ تتضاعف نواقل التعبير هذه في الكائنات الحية العائلة في صورة جسيمات سطحية ‎episomes‏ أو في صورة جزء مكمل مسن ‎DNA‏ الصبغي العافل ‎.host chromosomal DNA °‏ وعادة تحتوي نواقل التعبير على واسمات اختيار ‎«selection markers‏ على سبيل ‎(JB‏ مقاومة ضد أمبيسيلين ‎ampicillin-resistance‏ أو مقاومة ضد الهيغروميسين ‎hygromycin-resistance‏ لإتاحة الكشف عن هذه الخلايا المحولة باستخدام سياقات ‎DNA‏ المرغوبة. وتعتبر الأشريكية القولونية ‎Mile E.coli‏ بدائي النواة ‎prokaryotic‏ مفيدة بصفة خاصة ‎٠‏ التنسيل سياقات ال ‎Gy DNA‏ للاختراع الراهن. وتعتبر الأحياء الدقيقة ‎microbes‏ مثل الخميرة ‎yeast‏ 3044 كذلك للتعبير. وتعتبر الفطريات السكرية ‎Jilesaccharomyces‏ خميرة مفضل على أن تحتوي النواقل الملائمة على سياقات تعبير ضابطة ومصدر للتضاعف ‎replication‏ ‏وسياقات انتهاء ‎termination sequences‏ وما شابه ‎aus‏ الرغبة. وتشمل المعززات ‎promoters‏ النموذجية ١-فوسفو‏ غليسيرات كيناز ‎3-phosphoglycerate kinase‏ وانزيمات ‎ia‏ ‎Vo‏ للسكر ‎glycolytic enzymes‏ أخرى. وتشمل معززات الخميرة القابلة للحث ‎cinducible‏ من بين معززات أخرى؛ معززات من ديهيدروجيناز كحولي ‎calcohol dehydrogenase‏ سيتوكروم متمائل ع © ‎isocytochrome‏ وانزيمات مسؤولة عن استخدام المالتوز ‎maltose‏ والغلاكتوز ‎.galactose‏ ‏وتعتبر الخلايا الثديية العائل المفضل للتعبير عن أجزاء نوكليوتيدية تحمل © شيفرة غلوبلينات مناعية أو أجزاء منها. انظر ما جاء عن ويناكر ‎Winnacker‏ في كتاب ‎From Genes to Clones‏ (من شركة في سي اتش ببليشرز ‎«VCH Publishers‏ نيويورك؛ 7 ١م).‏ ولقد طور عدد من خطوط خلية عائلة ملائمة قادرة على إفراز بروتينات مغايرة سليمة ‎intact heterologous proteins‏ في التقنية؛ وتشمل خطوط خلية ‎«CHO cell lines CHO‏ خطوط خلية ‎various COS cell lines COS‏ مختلفة وخلاايا ‎HeLa cells HeLa‏ وخلايا ‎L‏ ‎cells vo‏ .1 وخطوط خلية ورم نخاعي. ويفضل أن تكون الخلايا غير بشرية. وقد تشتمل نواقل

LY

التعبير لهذه الخلايا على سياقات تعبير ضابطة مثل مصدر التضاعف؛ معزز ومحرّض ‎an enhancer‏ (انظر ما ‎ela‏ عن كوين ‎Queen‏ ومعاونيه في ‎(Immunol. Rev. daa‏ المجلد ‎A‏ ‏ص £9 (1987م))؛ ومواقع معالجة معلومات ضرورية مثتل مواقع ارتباط الريبوسوم ‎ribosome binding sites‏ ومواقع وصل ال ‎RNA splice sites RNA‏ ومواقع متعددة الأدينيلات ‎polyadenylation sites °‏ وسياقات إنهاء استتنساخية ‎.transcriptional terminator sequences‏ وتتمثل سياقات التعبير الضابطة المفضلة في معززات مشتقة من جينات داخلية المنشأ ‎endogenous genes‏ وفيروسات ضخمة خلوية ‎cytomegalovirus‏ و 5740 وفيروسات غدية ‎adenovirus‏ وفيروسات الورم الحليمي البقري ‎bovine papillomavirus‏ وما شابه ذلك. انظر ما (YAY) ١١495 ‏ص‎ VEN ‏المجلد‎ oJ Immunol. ‏ومعاونيه في مجلة‎ Co ‏من كو‎ ela ‏وبدلاً من ذلك؛ قد تدمج سياقات تشفير الجسم المضاد في جينات محولة لإدخالها في‎ ye ‏لحيوان محول جينياً ومن ثم التعبير عنها في حليب الحيوان المحول جينيا‎ genome ‏مجين‎ ‎OF EEA (OVEN, A0V ‏البراءات الأمريكية أرقام‎ (Jud Jue ‏على‎ ha) ‏وتشمل الجينات المحولة الملائمة سياقات تشفير للسلاسل الخفيفة و/أو‎ L(0,A£9,39Y ‏جين متخصص بغدة_ثديية‎ Oe ‏اللقيلة في ربط يمكن إجراؤه مع معزز ومحرض‎ .beta lactoglobulin ‏أو بيتا لاكتو غلوبلين‎ casein ‏مثل كازيين‎ mammary gland Vo ‏المعنية إلى الخلايا العائلة‎ DNA ‏التي تحتوي على أجزاء‎ vectors ‏النواقل‎ Jan ‏وقد‎ ‏فعلى‎ cellular host ‏اعتماداً على نوع العائل الخلوي‎ Tam ‏باستخدام طرق معروفة‎ host cells ‏للخلايا‎ Gh gat ‏خمجاً‎ calcium chloride ‏تخميج كلوريد الكالسيوم‎ dale ‏سبيل المثال؛ يستخدم‎ ‏في حين يمكن استخدام المعالجة بفوسفات الكالسيوم‎ prokaryotic cells ‏بدائية النواة‎ 110060000 ‏خمج تحويلي شحمي‎ celectroporation ‏تشكيل المسام كهربائياً‎ calcium phosphate Ye ‏لعوائل خلوية‎ viral-based transfection ‏أو خمج تحويلي أساسه فيروس‎ biolistics ‏بيولستكس‎ ‏اندماج‎ cpolybrene ‏استخدام متعدد برين‎ dnd WA ‏أخرى. وتشمل طرق أخرى لتحويل‎ ‏تشكيل المسام كهربائياً‎ cliposomes ‏الجسيمات الشحمية‎ protoplast fusion ‏الخلايا غير النوعية‎

Sambrook ‏عن سامبروك‎ ela ‏(انظر عموماً ما‎ microinjection ‏والحقن الدقيق‎ celectroporation ‏يمكن حقن‎ bia ‏ومعاونيه؛ في المرجع سابق الذكر). وبالنسبة لإنتاج حيوانات محولة‎ |»

الجينات المحولة ‎Laas Lun‏ دقيقاً في الخلايا البيضاء المخصبة ‎fertilized oocytes‏ أو يمكن دمجها في مجين ‎genome‏ الخلايا الجذعية الجنينية ‎cembryonic stem cells‏ وتنقل أنوية ‎nuclei‏ ‎WIS‏ من هذا القبيل إلى الخلايا البيضاء ‎de 5 ya‏ النواة ‎.enucleated oocytes‏ وبمجرد التعبير عن الأجسام المضادة؛ يمكن تنقيتها وفقاً لإجراءات ° قياسية ‎standard procedures‏ في التقنية بما في ذلك التنقية بالاستشراب ‎Jn‏ ‏عالي الأداء ‎high performance liquid chromatography (HPLC)‏ الاستشراب العمودي ‎ccolumn chromatography‏ الرحلان الكهربائي ‎gel electrophoresis Shell‏ وما شابه ذلك (انظر عموماً ما جاء عن سكوبس ‎Scopes‏ في ‎Protein Purification US‏ (سبرينجر -فير لاج ‎«Springer-Verlag‏ نيويورك ‎New York‏ 67 ام). ‎=F ١‏ بروتينات حاملة ‎Carrier Proteins‏ تحتوي بعض العوامل المستخدمة لحث استجابة مناعية ‎immune response‏ على مغيسر الخاصية ‎epitope‏ المناسب لحث استجابة مناعية ‎immune response‏ ضد رواسب نشوائية ‎amyloid deposits‏ لكنها ضعيفة جدآً لتكوين استجابة مولدة للمناعة ‎immunogenic‏ وفي هذه ‎AA‏ يمكن ربط ‎A ge‏ مناعة ‎peptide immunogen (sie‏ بمادة حاملة ملائمة للمساعدة في ‎Vo‏ إظهار استجابة مناعية. وتشمل المواد الحاملة الملائمة ‎JY)‏ مصل ‎«serum albumins‏ هيموسيانين رخو لسد المسام ‎keyhole limpet hemocyanin‏ جزيثشات غلوبلين مناعي ‎«immunoglobulin molecules‏ غلويلين درقي ‎«thyroglobulin‏ زلال البيض ‎covalbumin‏ ذوفان الكزاز ‎tetanus toxoid‏ أو ذوفان من بكتيريا ممرضة ‎«sal pathogenic bacteria‏ مثل دفتيريا ‎diphtheria‏ الأشريكية القولونية ‎coli‏ .ل أو الكوليرا ‎«cholera‏ أو إتش. بيلوري ‎pylori‏ 77 ‎Y.‏ مشتقة تكسين موهن ‎toxin derivative‏ 21002160. وتشتمل المواد الحاملة الأخرى على مغيرات خاصية خلايا ‎T‏ ترتبط بأليلات ‎MHC alleles‏ متعددة؛ على سبيل ‎JB‏ لا يقل عن ‎INO‏ من كل من الأليلات ‎MHC alleles‏ البشرية. وتعرف مواد حاملة من هذا القبيل في بعض الأحيان في التقنية بصفتها "مغيرات خاصية خلايا ‎T‏ الشاملة ‎"universal T-cell epitopes‏ وتشتمل أمثلة لمغيرات الخاصية لخلايا 7 الشاملة على ما يلي: ‎vasa‏

$0 انفلسونزا هيماغلوتينين ‎:Hemagluttinin‏ ورمويفتا ‎PKYVKQNTLKLAT‏ (سياق التمييز رقم: 47) ‎PADRE‏ (الشقات الشائعة مطبوعة بحروف ثخينة) ‎AKXVAAWTLKAAA‏ (سياق التمييز رقم: 44) © ملاريا 5©: ‎EKKIAKMEKASSVFNV‏ مغير خاصية ل ‎T3‏ (سياق التمييز رقم: £0( مولد مضاد سطحي لاتهاب الكبد 38 ‎HBsAg.

FFLLTRILTI ‘hepatitis B surface antigen‏ (سياق التمييز رقم: £7( بروتين الصدمة الحرارية ‎Heat Shock Protein‏ 119 مور كط ‎DQSIGDLIAEAMDKVGNEG‏ ‏(سياق التمييز رقم: ‎(£V‏ ‎٠‏ > باشيلي كلميتي-جوارين ‎QVHFQPLPPAVVKL :bacille Calmette-Guerin‏ (سياق التمييز رقم: ‎EA‏ ( ذوفان الكزاز: ‎QYIKANSKFIGITEL TTasorsas‏ (سياق التمييز رقم: £9( ذوفان الكزاز: ‎FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE TTosmse‏ (سياق التمييز رقم: ‎٠‏ ©( ‎KQINMWQEVGKAMYA :HIV gp120 T1‏ (سياق التمييز رقم: ‎)5١‏ ‎yo‏ وتشمل مواد حاملة أخرى لتنبيه أو تعزيز استجابة مناعية تشمل سيتوكينات ‎cytokines‏ ‏مثل ‎«IL-1‏ ببتيدات ‎IL-1 a peptides‏ و ‎B‏ املا ‎«GM-CSF ¢IL-10 ¢yINF «IL-2‏ ومركبات كيموكين ‎chemokines‏ مثل ‎Bs MIP1 a‏ 11101و ‎.RANTES‏ ويمكن كذلك ربط عوامل مولدة للمناعة بببتيدات ‎peptides‏ تعزز الانتقال عبر الأنسجة كما وصسف في بحث أوماهوني ‎O'Mahony‏ في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 97/777117 ونشرة براءة الاختراع الدولية ‎x.‏ رقم 47/176114 ويمكن ربط العوامل المولدة للمناعة بمواد حاملة عن طريق الربط التقاطعي الكيميائي ‎chemical crosslinking‏ وتشتمل تقنيات ربط مولد مناعي بمادة حاملة بما في ذلك تشكيل ‎Ath dy,‏ كبريتيد ‎disulfide‏ باستخدام 17-سكسينيميديل-؟-(7-بيريديل-شيو) بروبيونات ‎N-succinimidyl-3-(2-pyridyl-thio) propionate (SPDP) Yo‏ و -(11-ماليميدو مثيل) هكسان حلقي-

succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1- ‏كربوكسيلات سكس_يتيميديل‎ -١

‎carboxylate (SMCC)‏ (إذا افتقر الببتيد ‎peptide‏ لمجموعة سلفدريل ‎¢sulfhydryl group‏ فإنه يمكن تزويدها عن طريق إضافة شق سيستثين ‎(cysteine‏ وتشكل هذه المواد ‎reagents Ale lial‏

‏رابطة ثنائي كبريتيد ‎disulfide linkage‏ بين بعضها البعض وشقات ببتيد سيستثين

‎peptide cysteine °‏ على أحد البروتينات ورابطة أميد ‎amide‏ من خلال إبسيلون-أمينو ‎e-amino‏ على لايزين ‎ dysine‏ مجموعات أمينو طلقة ‎free amino‏ أخرى في أحماض أمينية

‎amino acids‏ أخرى. وتوصف مجموعة مختلفة من عوامل تشكيل رابطة ‎Al‏ كبريتيد ‎[disulfide‏ أميد ‎amide‏ من هذا القبيل في مجلة ‎Rev.‏ .8م المجلد ‎VY‏ ص ‎(pV AAY) YAS‏

‏وتشكل عوامل اقتران ثنائية المجموعة الوظيفة ‎bifunctional coupling agents‏ أخرى من ثيوإيثر

‎Yu thioether ٠١‏ من رابطة ثنائي كبريتيد ‎disulfide‏ ويتوفر العديد من عوامل تشكيل رابطة ثيو- إيثر ‎thioether‏ هذه تجارياً وتشتمل على استرات متفاعلة من حمض ١+-ماليميدو‏ كبرويك

‎aaa «esters of 6-maleimidocaproic acid‏ ؟-برومو أسيتيك ‎«2-bromoacetic acid‏ حمض "-يودو أسيتيك ‎2-iodoacetic acid‏ وحمض ‏ -(13-ماليميدو -مثيل) هكسان حلقي-١-‏ كربوكيليك ‎.4-(N-maleimido-methyl)cyclohexane-1-carboxylic acid‏ ويمكن تشيط

‎vo‏ مجموعات الكربوكسيل ‎carboxyl groups‏ عن طريق ربطها مع سكسيتيميد ‎succinimide‏ أو حمض )= هيدروكسيل-7-نترو -؛ -كبريتونيك ‎1-hydroxyl-2-nitro-4-sulfonic acid‏ أو ملح

‎.sodium salt ‏الصوديوم‎

‏ويمكن التعبير عن ببتيدات ‎peptides‏ مولدة للمناعة في صورة بروتينات اندماجية

‎fusion proteins‏ مع مواد حاملة (أي؛ ببتيدات مغايرة ‎-(heterologous peptides‏ ويمكن ربط

‎Y.‏ الببتيد ‎peptide‏ المولد للمناعة عند طرفه الأمينسي ‎amino terminus‏ أو طرفه الكربوكسيلي ‎«carboxyl terminus‏ أو كليهما بمادة حاملة. وبشكل اختياري؛ يمكن أن توجد مجموعات متكررة متعددة من الببتيد ‎A sal peptide‏ للمناعة في البروتين الاندماجي. وبشكل اختياري؛

‏يمكن ربط الببتيد ‎Al gall peptide‏ للمناعة بنسخ متعددة من الببتيد ‎peptide‏ المغاير؛ على سبيل

‏المثال عند الطظرف النتروجيني ‎terminus‏ آ< والكربوني ‎terminus‏ © من الببتيد ‎peptide‏ وتحث

‎vo‏ بعض ببتيدات ‎dala peptides‏ على استجابة ‎T WA‏ المعززة ضد الببتيد ‎peptide‏ الحامل.

‎vasa tv ‏للمناعة‎ a gall peptide ‏ضد الببتيد‎ B ‏المعززة المستحثة بدروها استجابة خلايا‎ T ‏وتحث خلايا‎ ‏الحامل.‎ peptide ‏المرتبط بالببتيد‎ ‏وتشتمل بعض العوامل وفقآ للاختراع على بروتين اندماجي حيث ترتبط شدفة الطضرف‎ ‏حامل. وفي‎ peptide ‏بببتيد‎ C-terminus ‏عند طرفه الكربوني‎ AB ‏من‎ N-terminal ‏النتروجيني‎ ‏شق‎ AB ‏عوامل من هذا القبيل» يشكل شق الطرف النتروجيني 11-0001 من الجزء من‎ ٠ ‏من البروتين الاتدماجي. ووفقآً لذلك؛ تعتبر بروتينات اندماجية‎ N-terminal ‏الطرف النتروجيني‎ ‏من هذا القبيل فعالة في حث أجسام مضادة ترتبط بمغير خاصية يتطلب أن يكون شق الطرف‎ ‏في صورة طلقة. وتشتمل بعض عوامل الاختراع على عدة‎ AB ‏من‎ N-terminal ‏النتروجيني‎ ‏مرتبطة عند الطرف‎ AB ‏من‎ N-terminal ‏مجموعات متكررة من جزء الطرف النتروجيني‎ ‏الحامل. ويندمج جزء الطرف‎ peptide ‏بنسخة واحدة أو أكثر من الببتيد‎ C-terminus ‏الكربوني‎ ٠١ ‏في بروتينات اندماجية في بعض الأحيان من هذا القبيل تبدأ‎ AB ‏من‎ N-terminal ‏النتروجيني‎ ‎AB1-5 ¢AB1-4 (ABL-3 (ABL-7 ‏في بعض الأحيان عند 2881-3 وتنتهي عند 87-11م. ويعتبر‎ ‏مفضلة. وتشتمل بعض البروتينات‎ AB ‏من‎ N-terminal ‏شدفة طرف نتروجيني‎ AB3-7 ‏و‎ ‏مختلفة ترادفياً. فعلى سبيل المثال‎ AB ‏من‎ N-terminal ‏الاندماجية على أجزاء طرف نتروجيني‎ ‏مغاير.‎ peptide ‏ثم ببتيد‎ ABL-3 ‏قد يشتمل بروتين اندماجي على 2801-7 ثم‎ Vo ‏من‎ N-terminal ‏وفي بعض بروتينات الاندماجية؛ يلتحم جزء عند الطرف النتروجيني‎ ‏حامل مغاير. ويمكن استخدام نفس‎ peptide ‏بببتيد‎ N-terminal ‏عند طرفها النتروجيني‎ AB ‏كما هو الحال في العمليات‎ AB ‏من‎ N-terminal ‏التشكيلة من الأجزاء عند الطرف النتروجيني‎ ‏لعصنس»-. وتشتمل بعض البروتينات الاندماجية‎ fusions ‏الاندماجية عند الطرف الكربوني‎ ‏من الجزء عند الطرف‎ N-terminal ‏مغاير مرتبط بالطرف النتروجيني‎ peptide ain ‏على‎ © ‏الذي يرتبط بدوره بأجزاء عند الطرف النتروجيني‎ (AB ‏من‎ Neterminal ‏النتروجيني‎ ‏ترادفياً.‎ AB ‏إضافية واحدة أو أكثر من‎ N-terminal ‏وتبين بعض أمثلة البروتينات الاندماجية الملائمة لتستخدم في الاختراع أدناه. وتشتمل‎ ‏مرتبطة بمغيرات خاصية ذوفان الكزاز‎ AB ‏بعض من البروتينات الاندماجية هذه أجزاء من‎ ‏كما وصف في براءة الاختراع الأمريكية رقم 0,195,017 وبراءة الاختراع الأوروبية رقم‎ vo

EA

7,81 وبراءة الاختراع الأوروبية رقم 797,747 . وتشتمل بعض بروتينات الاندماجية على أجزاء من ‎AB‏ مرتبطة بببتيدات ‎peptides‏ حاملة موصوفة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 0,77 . وتعتبر بعض من الببتيدات ‎peptides‏ المغايرة مغيرات خاصية لخلايا 1 شاملة. وفي بعض الطرق؛ يعتبر عامل الإعطاء ببساطة بروتين اندماجية مفرد مع جزء 48 م مرتبط بجزء مغايرة في شكل خطي. وفي بعض الطرق؛ يكون ‎Jalal‏ عبارة عن مركب متعدد ‎multimer‏ من بروتينات اندماجية ممثلة بالصيغة "” حيث » يمثقل عددا صحيحاً يتراوح من ‎١‏ إلى ©. ويفضل أن يساوي ‎١ ٠‏ أو ‎oF‏ والأفضل أن يساوي ‎.١‏ وعندما *«<؟؛ يحتوي المركب المتعدد على أربعة بروتينات اندماجية مرتبطة بشكل مفضل يشار إليه ب 4م« (انظر براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎2,1٠‏ ). ويوضع تحت حروف > مغيرات الخاصية خط. ويبين الشكل 14/804 ‎lial‏ حيث تنتج البنيات المتفرعة ‎branched structures‏ عن طريق تخليق الببثيد ‎Yl peptide‏ عند كل من الطرف النتروجينسي ‎terminal‏ 17 وأمينات السلسلة الجانبية ‎side chain amines‏ من اللايزين ‎Lysine‏ واعتمادآ على عدد المرات التي يندمج ‎Led‏ اللايزين ‎lysine‏ في السياق ويسمح له بالتفرع؛ ستنتج البنية الناتجة أطراف نيتروجينية م ‎N termini‏ متعددة. وفي هذا المثال؛ تنتج أربعة أطراف نيتروجينية ‎N termini‏ متمائلة على اللب الذي يحتوي على اللايزين ‎lysine‏ المتفرع. ويعزز تعدد من هذا القبيل استجابة خلايا ‎B‏ القريبة بدرجةٍ كبيرة. ‎KGG‏ ‎rT.‏ <> — ببتيد ‎KA‏ ‏سح بيتيد ‎KGG‏ اس ‎AN90S49 yo‏ (1-7 8/ذوفان )3 ‎844-87٠‏ في شكل ‎:(MAP4‏

£9 ‎DAEFRHDQYIKANSKFIGITEL‏ (سياق التمييز رقم: ‎(OF‏ ‎CB 5Y/AB 1-7( 0‏ الكزاز 427-447 في شكل ‎(MAP‏ ‎DAEFRHDFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE‏ (سياق ‎(CARER BUSTA‏ 2 (1-7 8م/ذوفان الكزاز 4-870 84+ 477-447 في شكل خطي): ‎Glu) DAEFRHDQYIKANSKFIGITELFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE‏ التمييز رقم: ‎(OF‏ ‎OY 5YAB 3-9( 6‏ الكزاز ‎4-87٠‏ 84 في شكل ‎(MAPA‏ ‎EFRHDSGQYIKANSKFIGITEL 0٠‏ (سياق التمييز رقم: °°( الببتيد ‎peptide‏ الموصوف في براءة الاختراع الأمريكية رقم 5,771,157 (كلها في شكل خطي): ‎AN90562‏ )1-7 8يبتيد ‎AKXVAAWTLKAAADAEFRHD =(peptide‏ (سياق التمييز ‎Yo‏ رقم :556 ( ‎1-7x3) AN90543‏ قح أيبتيد ‎(peptide‏ ‎DAEFRHDDAEFRHDDAEFRHDAKXVAAWTLKAAA‏ (سياق التمييز رقم: ‎(OY‏ ‏أ بحروف ثخينة سوداء) ‎AKXVAAWTLKAAA-DAEFRHD-DAEFRHD-DAEFRHED‏ (سياق التمييز رقم: ‎(oA‏ ‎DAEFRHD-AKXVAAWTLKAAA‏ (سياق التمييز رقم: 54) ‎DAEFRHD-ISQAVHAAHAEINEAGR‏ (سياق التمييز ‎(Vad‏ ‎FRHDSGY-ISQAVHAAHAEINEAGR‏ (سياق التمييز رقم: )0( ‎EFRHDSG-ISQAVHAAHAEINEAGR Yo‏ (سياق التمييز رقم: 17)

(OF ‏(سياق التمييز رقم:‎ PKYVKQNTLKLAT-DAEFRHD-DAEFRHD-DAEFRHD )764 ‏(سياق التمييز رقم:‎ DAEFRHD-PKYVKQNTLKLAT-DAEFRHD (0 ‏(سياق التمييز رقم:‎ DAEFRHD-DAEFRHD-DAEFRHD-PKYVKQNTLKLAT )67 ‏(سياق التمييز رقم:‎ DAEFRHD-DAEFRHD-PKYVKQNTLKLAT

DAEFRHD-PKYVKQNTLKLAT-EKKIAKMEKASSVENV. ‏(سياق التمييز‎ QYIKANSKFIGITEL-FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-DAEFRHED (Tv: ‏رقم‎ ‎DAEFRHD-DAEFRHD-DAEFRHD-QYIKANSKFIGITEL- ‎(VA ‏(سياق التمييز رقم:‎ NNFTVSFWLRVPKVSASHLE ‏التمييز‎ Gl) DAEFRHD-QYIKANSKFIGITELCFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE \ (4 ‏رقم:‎ ‏(سياق‎ DAEFRHD-QYIKANSKFIGITELCFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-DAEFRHD (Ve ‏التمييز رقم:‎ |ّ ‏على راتنج يحمل فرعين‎ (oY ‏(سياق التمييز رقم:‎ DAEFRHD-QYIKANSKFIGITEL : 0

TT Lys-Gly-Cys ‏يبتيدد‎ > ‏(بروتين اندماجي من‎ (VY : ‏(سياق التمييز رقم‎ EQVTINVGGAISQAVHAAHAEINEAGR (MAP-4 ‏في شكل‎ Synuclein ‏سينيوكلين‎ 7 ‏ويمكن استخدام نفس البروتينات الحاملة أو بروتينات حاملة مشابهة ونفس طرق الربط‎ ‏ليستخدم‎ AB ‏أو طرق ربط مشابهة لتوليد مولدات مناعة لتستخدم في توليد أجسام مضادة ل‎ ‏أو شدفة منها‎ AB ‏يمكن إعطاء‎ (Jil ‏فعلى سبيل‎ passive immunization ‏في التمنيع السلبي‎ ‏أجسام مضادة وحيدة‎ z WY laboratory animal ‏مرتبطة بمادة حاملة إلى حيوان مخبري‎ -AB ‏ل‎ monoclonal antibodies ‏النسيلة‎ Yo

© ؛ - حمض نووي يحمل شيفرة عوامل علاجية ‎Nucleic Acid Encoding Therapeutic‏ ‎Agents‏ ‏يمكن كذلك حث استجابات مناعية ضد رواسب نشوائية بإعطاء أحماض نووية تحمل شيفرة أجزاء من ببتيد ‎AB peptide‏ وشدفات منهاء مولدات مناعة ببتيدية ‎peptide‏ أخرى أو م أجسام مضادة وسلاسل مكوناتها المستخدمة للتمنيع السلبي. وقد تكون أحماض نووية من هذا القبيل ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ وعادة يرتبط جزء حمض نووي يحمل شيفرة مولد المناعة بعناصر منظمة ‎‘regulatory elements‏ مثل معزز ‎enhancer‏ ومحض(ضض ‎promoter‏ مما يتيح التعبير عن جزء ‎DNA‏ في الخلايا المستهدفة المرغوبة في مريض . وللتعبير في ‎LMA‏ الدم ‎¢blood cells‏ ما هو مرغوب لحث استجابة مناعية؛ تكون العناصر المعززة والمحضضة من جينات غلوبلين مناعي من سلسلة خفيفة أو شقيلة أو المعزز والمحضض المبكر الوسيطي الرئيسي ‎OMY‏ ملائمة لتوجيه التعبير ‎Ge 4 -expression‏ »+ تنسل العناصر المنظمة المرتبطة وسياقات التشفير ‎coding sequences‏ في ناقل ‎vector‏ وبالنسبة لإعطاء أجسام مضادة مزدوجة السلسلة ‎¢double-chain antibodies‏ قد تتسل السلسلتان في نفس النواقل أو في نواقل منفصلة. ويتوفر عدد من أنظمة نقل فيروسية بما في ذلك أنظمة فيروسية ارتجاعية ‎retroviral systems Vo‏ (انظرء على سبيل المثال» ما جاء عن ‎Lawrie Sod‏ وتومين ‎Tumin‏ في مجلة ‎«Cur.

Opin.

Gener.

Develop‏ المجلد ص ‎FY ٠١-١١7‏ 144( ؛ نواقل فيروسية مقترنة بغدة ‎adenoviral vectors‏ (انظرء على سيبيل المثال؛ ما جاء عن بيت ‎Bett‏ ومعاونيه» في مجلة 7701 / المجلد ‎WY‏ ص ‎841١‏ )139%( ؛ نواقل فيروسية غدية مقترنة ‎adeno-associated virus vectors‏ (انظرء على سبيل ‎ela l_ 4. Jad‏ عن زو ‎Zhou‏ ‏+ - ومعاوتيه في مجلة ‎Exp Med‏ 7 المجلد 4 ص ‎YATY‏ ( 64 م))؛ نواقل فيروسية من عائلة الجدري ‎pox family‏ تشتمل على فيروسات جدري ‎vaccinia virus yl)‏ وفيروسات جدري الطيور ‎avian pox viruses‏ ونواقل فيروسية من جنس فيروس ألفا ‎Jia 5 alpha virus genus‏ تلك المشتقة من فيروسات سيندبيز ‎Sindbis Viruses‏ وسيمليكي فوريست ‎Semliki Forest Viruses‏ (انظر ‎le‏ سبيل المثال» ما ‎ela‏ عن دوبنسكي ‎Dubensky‏ ‎vo‏ ومعاونيه في مجلة ‎J Viros‏ المجلد ‎av.‏ 11-008 )1 4 م))؛ فيروسات إالتهاب oY ‏(انظر براءة الاختراع الأمريكية‎ Venezuelan equine encephalitis virus (JY ‏فينزو‎ Lal) ‏الدماغ‎ ‏مثلاً فيروس إلتهاب القسم الحويصلي‎ crhabdoviruses ‏رقم 2,17 )؛ فيروسات عصوية‎ ‏(انظر نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 7ح 12/7 ( وفيروسات‎ vesicular stomatitis virus ‏ومعاوتيه؛ في مجلة‎ Ohe — ‏عن‎ ela ‏(انظر ما‎ papillomaviruses ‏الورم الحليمي‎

Woo ‏4م)؛ وما جاء عن وو‎ 0) Y¥¥=¥Yo ‏المجلد 3 ص‎ Human Gene Therapy °

Xiao shu] ‏ومعاونيه في نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 44/177174 وما جاء عن‎ 77١-7١7١ ‏المجلد 74 ص‎ «Nucleic Acids. Res. ‏في مجلة‎ Brandsma ‏وبراندسما‎ ‏ام)).‎ 7 ) ‏يحمل شيفرة مولد مناعة؛ أو ناقل يحتوي على نفس المولد‎ DNA ‏ويمكن تغليف‎ ‏وتوصف شحوم 05 ملائمة ونظائر متعلقة بها في‎ liposomes ‏المناعي في جسيمات شحمية‎ ٠١ ‏لتر تارف ار 1ر8 و‎ 0,Y A, ‏براءات الاختراع الأمريكية أرقام تا‎ ‏يحمل شيفرة مولد مناعة في مواد حاملة‎ DNA ‏ويمكن كذلك امتزاز نواقل و‎ .0, YAY, YAO ‏جسيمية أو الاقتران بهاء وتشتمل أمثلتها على بوليمرات متعدد مثيل ميشاكريلات‎ ‏ومركبات متعدد (لاكتيد-‎ polylactides ‏ومتعددات اللاكتيد‎ polymethyl methacrylate polymers ‏ما جاء عن مكجي‎ (Ja) ‏انظرء على سبيل‎ -poly(lactide-co-glycolides) ‏غليكوليد إسهامي)‎ Vo . (a ١١" ) J. Micro Encap. ‏ومعاونيه في‎ McGee naked ‏مكشضوف‎ DNA ‏أو‎ gene therapy vectors ‏ويمكن تصريف نواقل معالجة جينية‎ ‏بإعطائها إلى مريض منفرد؛ وعادةٌ بإعطائها بصورة نظامية‎ in vivo ‏داخل الجسم الحي‎ ‏أو داخل البريتون‎ intravenous ‏(على سبيل المثال» داخل الوريد‎ systemic administration ‏أو في‎ intradermal ‏أو المعدة 885012 أو في الأدمة‎ nasal ‏أو عن طريق الأنف‎ intraperitoneal 7 ‏أو بالتسسريب داخل الجمجمة‎ subdermal ‏عن طريق الجلد‎ intramuscular ‏العضل‎ ‏براءة الاختراع‎ (Jad Ju ‏أو بالإعطاء الموضعي (انظرء على‎ (intracranial infusion ‏الأمريكية رقم 1 ). ويمكن أن تشتمل نواقل من هذا القبيل على عوامل تسهيل‎ ‏(انتظطر براءة الاختراع الأمريكية رقم‎ bupivacine ‏بيوبيفاسين‎ Jia facilitating agents ‏انظر ما جاء‎ Lgene gun ‏باستخدام مسدس جينات‎ DNA ‏ويمكن كذلك إعطاء‎ . (e,04v,av. Yo vag oY ‏الذي يحمل‎ DNA ‏في المرجع سابق الذكر. ويرسب‎ Brandsma ‏وبراندسما‎ Xiao ‏عن اكسياو‎ ‏وتسرع‎ «microscopic metal beads ‏شيفرة مولد مناعة على سطح خرزات فلزية مجهرية‎ ‏أو غاز هيليوم‎ 81001 wave ‏عن طريق موجة صدمية‎ microprojectiles ‏المقذوفات الدقيقة‎ ‏ممدّدء وخرق الأنسجة إلى عمق يصل إلى طبقات خلايا متعددة. فعلى سبيل‎ helium gas ‏(علامة تجارية) لتصريف الجين التي تصنع من قبل شركة‎ Accel™ ‏المثال؛ تكون أداة أسيل‎ ٠ ‏من‎ Vg ‏مدينة ميدلتون» ولاية وسكونسن ملائمة للاستخدام.‎ cAgacetus, Inc. ‏أجاستوس إنك.‎ ‏على‎ DNA ‏المكشوف المرور عبر الجلد إلى مجرى الدم بسهولة بتبقيع‎ DNA ‏ذلك يمكن ل‎ ‏(انظر ما جاء في‎ mechanical ‏أو ميكانيكي‎ chemical irritation ‏الجلد باستخدام تهيج كيميائي‎

نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 35/.57827).

‎y‏ ووفقا لطريقة أخرى يمكن تصريف نواقل تحمل شيفرة مولدات مناعة إلى خلايا خارج الجسم الحي ‎WIA Jie tex vivo‏ مزروعة خارج جسم مريض مستقل (على سبيل ‎(JU‏ خلايا لمفاوية ‎lymphocytes‏ ومواد مزالة من نضخاع العظم ‎bal a‏ ‎bone marrow aspirates‏ وخزعات نسيجية ‎(tissue biopsy‏ أو خلايا جذعية مكونة للدم مانحة شاملة ‎universal donor hematopoietic stem cells‏ ثم ‎sale)‏ غرس الخلايا ‎reimplantation‏ في

‎Vo‏ المريض» ‎sale‏ بعد اختيار خلايا احتوثت على الناقل.

‏1 فحص أجسام مضادة لتحديد فعالية التنقية ‎Screening Antibodies for Clearing Activity‏

‏يزود الاختراع طرق لفحص جسم مضاد لتحديد فعاليته في تنقية راسب نشواني أو أي مولد مضاد ‎antigen‏ آخر أو وحدة إحيائية مقترنة حيث يكون من المرغوب وجود فعالية التتقية. ولإجراء الفحص لتحديد الفعالية ضد راسب نشواني؛ تتلامس عينة نسيجية مأخوذة

‏أ من دماغ مريض مصاب بمرض الزهيمر ‎Alzheimer's‏ أو من نموذج حيواني له خصائص

‏مرض الزهيمر مع خلايا ملتهمة ‎phagocytic cells‏ تحمل مستقبلة ‎Jie «Fe‏ خلايا غرائية عصبية دقيقة ‎cmicroglial cells‏ والجسم المضاد الموضوع تحت الاختبار في وسط أنبوب الاختبار ‎vin vitro‏ ويمكن أن تستنبت الخلايا الملتهمة بصفة أساسية أو خط ‎(WA‏ مثا ‎BV-2‏ ‎«C8-B4‏ أو 1110-1. وفي بعض الطرق»؛ تدمج المكونات على شريحة مجهر ‎microscope slide‏

‎wells ‏لتشهيل المراقبة المجهرية. وفي بعض الطرق؛ يتم إجراء عدة تفاعلات في عيون‎ ve

‎vas ot ‏وفي أشكال من هذا القبيل؛ يمكن مراقبة‎ emicrotiter dish ‏متوازية في صحن معايرة دقيقة‎ ‏شريحة مجهرية مصغرة منفصلة في عيون منفصلة؛ أو يمكن استخدام شكل كشضف غير‎ ‏ويفضل؛ إجراء عدة قياسات لتحديد مقدار الراسب‎ AB ‏عن‎ BLISA ‏مجهري؛ مثل كشف‎ deli ‏من قيمة أساسية قبل حدوث‎ feds ‏النتشواني في مزيج تفاعل في أنبوب الاختبار؛‎ ‏وقيمة اختبار واحدة أو أكثر أثناء التفاعل. ويمكن الكشف عن المولد المضاد بالصبغ» على‎ 5 ‏أو أي مكون‎ fluorescently labelled ‏موسوم فلورياً‎ AR ‏باستخدام جسم مضاد ل‎ (JU ‏سبيل‎ ‏وقد يكون الجسم المضاد المستخدم للصبغ نفس الجسم‎ . 40 plaques ‏للويحات نشوانية‎ ‏المضاد الذي اختبر لتحديد فعالية التنقية وقد لا يكون. ويشير الانخفاض بالنسبة إلى القيمة‎ ‏أن للجسم المضاد الموضوع تحت الاختبار فعالية‎ af ga) ‏الأساسية أثناء تفاعل الرواسب‎ ‏تقية. وقد تكون أجسام مضادة من هذا القبيل مفيدة في الوقاية من أو معالجة مرض الزهيمر‎ + ‏أو أمراض نشوائية الأصل أخرى.‎ ‏وقد تستخدم طرق مناظرة لفحص أجسام مضادة لتحديد فعاليتها في تنقية أنواع أخرى‎ ‏ضد وحدة إحيائية‎ dan ‏من الوحدات الإحيائية. ويمكن استخدام المعايرة للكشف عن فعالية‎ ‏يكون للوحدة الإحيائية دورآ في مرض الإنسان أو الحيوان‎ dale ‏فعلية أو أي نوع منها.‎ ‏ب إلى حدٍ ما. ويمكن تزويد الوحدة الإحيائية في صورة عينة نسيجية أو في صورة معزولة.‎ ‏وإذا زود في صورة عينة نسيجية؛ يفضل أن تكون العينة النسيجية غير مثبتة لإتاحة منفدا‎

Sl ‏سريعا لمكونات العينة النسيجية ولتجنب اضطراب بنية المكونات المترتبة عن‎ ‏وتشمل أمثلة العينات النسيجية التي يمكن اختبارها في هذه المعايرة أنسجة سرطائية‎ ‏أنسجة تحتوي على أورام حميدة‎ ¢precancerous tissue ‏أنسجة قبل السرطان‎ » 681206170115 tissue ‏أنسجة مصابة بأحياء دقيقة ممرضة‎ cmoles ‏أو الشامات‎ 5 Adal ‏مثل‎ benign growths Y. ‏بخلايا إلتهابية‎ tissue infiltrated ‏مرتشحة‎ da ‘pathogenic microorganisms tissue bearing pathological ‏أنسجة تحمل قوالب مرضية بين الخلإيا‎ ¢inflammatory cells «(fibrinous pericarditis ‏التهاب التأمور الليفيني‎ (Jad) ‏(على سبيل‎ matrices between cells ‏وأنسجة ذات ندبة‎ tissue bearing aberrant antigens ‏أنسجة تحمل مولدات مضادة زائفة‎ ‏مولدات‎ (AB ‏وتشمل أمثلة الوحدات الإحيائية المعزولة التي يمكن استخدامها‎ scar tissue Yo

مضادة فيروسية أو فيروسات؛ مركبات بروتيوغليكان ‎proteoglycans‏ مولدات مضادة لأحياء دقيقة ممرضة أخرى؛ مولدات مضادة ورمية ‎tumor antigens‏ وجزيئثات التصساق ‎adhesion molecules‏ ويمكن الحصول على مولدات مضادة من هذا القبيل من مصادر طبيعية؛ تعبير مأشوب ‎recombinant expression‏ أو تخليق كيميائي من بين طرق أخرى. م وتلامس العينة النسيجية أو الوحدة الإحيائية المعزولة مع خلايا ملتهمة تحمل مستقبلات ‎Fo‏ ‏مثل الخلايا البيضاء وحيدة النواة أو الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة ‎microglial cells‏ وجسم مضاد ينبغي اختباره في وسط. ويمكن توجيه الجسم المضاد نحو الوحدة الإحيائية الموضوعة تحت الاختبار أو نحو مولد مضاد مقترن بالوحدة. ‎Gag‏ للحالة الأخيرة؛ يتبتي اختبار الجسم المضاد سواء التهم الوحدة الإحيائية من قبل المولد المضاد بشكل بديل. وعادة؛ ‎٠١‏ ومع أنه غير ضروري؛ يتلامس الجسم المضاد والوحدة الإحيائية (وفي بعض الأحيان مع مولد مضاد مقترن) مع بعضهما البعض قبل إضافة الخلايا الملتهمة. ومن ثم يراقب تركيز الوحدة الإحيائية و/أو المولد المضاد المقترن؛ إن ‎cans‏ المتبقي في الوسط. ويشير الانخفاض في مقدار أو تركيز المولد المضاد أو الوحدة الإحيائية المقترنة في الوسط إلى أن للجسم المضاد استجابة تنقية ضد المولد المضاد و/أو الوحدة الإحيائية المقترنة بالاقتران مع الخلايا ‎VE ‏على سبيل المثال‎ hil) ‏الملتهمة‎ Vo

Patients Amenable To Treatment ‏ضون للمعالجة‎ pos ‏مرضى‎ 7 ‏يشتمل المرضى المتعرضون للمعالجة أفراد معرضين لخطر الإصابة بالمرض لكن لا تظهر عليهم الأعراض» بالإضافة إلى مرضى تظهر عليهم أعراض حالية. وفي ‎Alla‏ مرض الزهيمرء يكون أي شخص ‎Los‏ معرض فليا لخطر المعاناة من مرض الزهيمر إذا عاش ‏+ فترة طويلة. وبناءً على ذلك؛ يمكن تطبيق الطرق الراهنة ‎Lalas‏ على عدد إجمالي من السكان ‏دون احتمالية تعرض المريض الخاضع للعلاج إلى أي خطورة. وتعتبر الطرق الراهنة مفيدة بصفة خاصة لأفراد معرضين وراثياً لخطر الإصابة بمرض الزهيمر المعروف. ويشمل أفراد من هذا القبيل أولئك الذين لهم أقارب عانوا من هذا المرض» وأولئك الذين تحدد خطورة إصابتهم بتحليل واسمات جينية أو كيميائية إحيائية. وتشمل الواسمات الجينية ‎Yo‏ المعرضة لخطر الإصابة بمرض الزهيمر طفرات في جين ‎APP‏ وبصفة خاصة طفرات عند ‎vaq on الموقع ‎١١‏ والموقعين 17 و ‎+7١‏ المشار إليهما بطفرات هاردي ‎Hardy mutations‏ وطفرات سويدية ‎Swedish mutations‏ على الترتيب (انظر ما ‎ela‏ عن هاردي ‎Hardy‏ في ‎TINS dla‏ في المرجع سابق الذكر) . وتكون الواسمات الأخرى المعرضة للخطر عبارة عن طفرات في جينات ما قبل الشيخوخة ‎«PS2 (PSI «presenilin genes‏ و ‎<ApoE4‏ تاريخ العائلة ° ل ‎(AD‏ فرط كوليسترول الدم ‎hypercholesterolemia‏ أو التصلب العصيدي ‎-atherosclerosis‏ ‏ويمكن تمييز الأفراد الذين يعانون حالياً من مرض الزهيمر من عته مميز ‎characteristic dementia‏ بالإضافة إلى وجود العوامل الخطرة الموصوفة أعلاه. وبالإضافة إلى ذلك؛ يتوفر عدد من الاختبارات التشخيصية لتمييز أفراد مصابين ب ‎AD‏ وتشتمل هذه الاختبارات على قياس مستويات ‎CSF tau‏ و 8842. ويدل ارتفاع ‎tau‏ وانخفاض مستويات ‎١‏ 2 على وجود ‎AD‏ ويمكن تشخيص الأفراد المصابين بمرض الزهيمر كذلك عن طريق معايير ‎ADRDA‏ كما سيتم مناقشته في جزء الأمثلة. وفي المرضى الذين لا تظهر عليهم أعراض المرض؛ يمكن بدء المعالجة عند أي عمر (على سبيل المثال ‎7٠١0700٠١‏ سنة) . غير أنه ليس من الضروري ‎Bale‏ بدء المعالجة إلى أن يصل عمر المريض إلى 6 ‎٠‏ أو ‎Ve‏ سنة. وتستزم المعالجة ‎bale‏ عدة جرعات خلال فترة من الزمن. ويمكن مراقبة المعالجة باختبار جسم مضاد أو استجابات فعالة لخلايا ‎T‏ أو خلايا 8 للعامل العلاجي (على سبيل المثال؛ ببتيد ‎(AB peptide‏ مع الزمن. وفي ‎Als‏ ضعف الاستجابة فإنه يوصى بأخذ جرعة معززة. وفي حالة مرض متلازمة داون ‎Down's syndrome‏ المحتملة؛ ‎(Say‏ بدء المعالجة قبل الولادة عن طريق إعطاء عامل علاجي إلى الأم أو بعد الولادة بفترة قصيرة.

Treatment Regimes ‏أنظمة المعالجة‎ v Y. في التطبيقات الوقائية؛ تعطى تراكيب صيدلية أو أدوية لمريض عرضة ‎Mal‏ ‏بمرض الزهيمر أو لخطر الإصابة به بطريقة أخرى بمقدار كاف لإزالة أو تقليل خطر الإصابة أو حدتهاء أو لتأخير بداية المرض ‎Lay‏ في ذلك الأعراض الكيميائية الإحيائية و/أو النسيجية و/أو السلوكية للمرض ومضاعفات المرض والأنماط الظاهرية المرضية الوسيطية ‎Yo‏ التي تظهر أثناء تطور المرض. وفي التطبيقات العلاجية؛ تعطى تراكيب أو أدوية إلى ov ‏مريض يشتبه بإصابته بالمرض أو يتوقع أو يعاني من مرض من هذا القبيل مسبقا بمقدار‎ ‏الإحيائية و/أو النسيجية‎ Abas) ‏أعراض المرض‎ (J) ‏على‎ Bia ‏كاف لعلاج؛ أو كبح‎ ‏و/أو السلوكية)؛ بما في ذلك مضاعفاته والأنماط الظاهرية المرضية الوسيطية أثتاء‎ ‏تطور المرض. وفي بعض الطرق؛ يقلل أو يزيل عامل الضعف الإدراكي العضلي‎

‎myocognitive impairment °‏ في مرضى لم تتطور فيهم خصائص مرض الزهيمر. ويعرف

‏مقدار كاف لتحقيق المعالجة العلاجية بأنه جرعة فعّالة ‎Ladle‏ أو صيدلياً. وفي كل من النظم الوقائية والعلاجية؛ تعطى ‎Sale‏ عوامل بجرعات متعددة إلى أن يحصل على استجابة مناعية كافية. 5 ‎dale‏ تراقب الاستجابة المناعية وتعطى جرعات بصورة متكررة في حالة بدء الاضمحلال التدريجي للاستجابة المناعية.

‎١‏ وتتفاوت الجرعات الفعّالة من التراكيب ‎Gy‏ للاختراع الراهن المعطاة لمعالجة الحالات الموصوفة أعلاه اعتماداً على عدة عوامل مختلفة عديدة بما في ذلك طرق الإعطاء والموقع المستهدف والحالة الفسيولوجية للمريض وسواء كان المريض إنسان أو حيوان والأدوية الأخرى المعطاة وسواء كانت المعالجة وقائية أو علاجية. وعادة يكون المريض إنسان ‎oS‏ يمكن معالجة ثدييات غير بشرية بما في ذلك ثدييات محولة جينياً. وينبغي معايرة

‏جرعات المعالجة لاستمثال السلامة والفعالية. ويعتمد مقدار المولد المناعي فيما إذا أعطيست كذلك المادة المساعدة ‎adjuvant‏ مع الحاجة إلى جرعات أعلى في غياب المادة المساعدة. ويتفاوت مقدار المولد المناعي المعطى أحياناً من ‎١‏ إلى ميكروغرام لكل مريض وعادةٌ يتراوح من © إلى ‎٠‏ ميكروغرام لكل حقنة تعطى للإنسان . وتستخدم أحياناً جرعة أكبر

‏تتراوح من ‎١‏ إلى ¥ مغم لكل حقنة. ويستخدم عادةً حوالي دا ‎7٠١‏ .© أو ‎٠٠١‏

‎Sl ‏لكل حقنة بشرية. ويعتمد مقدار المولد المناعي كذلك على النسبة‎ Ags ey. ‏المناعة إلى كتلة مولد المناعة ككل.‎ Alga ‏لمغير الخاصية المولد للمناعة ضمن‎ 5 ratio ‏ميكرومول من مغير الخاصية المولد‎ TTY ‏إلى‎ ' ٠١ ‏يستخدم مقدار يتراوح من‎ dale ‏للمناعة لكل ميكروغرام من مولد المناعة. ويمكن أن يختلف توقيت الحقن بشكل كبير من‎ ‏مرة واحدة في اليوم إلى مرة واحدة في السنة إلى مرة واحدة في العقد. وفي أي يوم تعطى‎

‎Yo‏ فيه جرعة من مولد المناعة؛ تكون الجرعة أعلى من ‎١‏ ميكروغرام/مريض وعادةً oA ‏المساعدة كنلك؛‎ sal all ‏ميكروغرام/إمريض إذا أعطيت‎ ٠١ ‏أعلى من‎

Ala ‏ميكروغرام/مريض في‎ ٠٠١ ‏أعلى من‎ Bale ‏ميكروغرام/مريض‎ ٠١ ‏وتزيد عن‎ ٠ ‏عدم وجود المادة المساعدة. ويتكون نظام نموذجي من تمنيع ثم حقن معزز لفترة تبلغ‎ ‏شهر. ويستلزم‎ VY ‏أسابيع. ويتكون نظام آخر من تمنيع ثم حقن معزز بعد شهر وشهرين و‎ ‏نظام آخر حقن كل شهرين مدى الحياة. وبدلا من ذلك. قد تعطى الحقن المعززة على أساس‎ ٠ ‏غير منتظم كما حدد عن طريق مراقبة الاستجابة المناعية.‎ ٠٠٠001 ‏وبالنسبة للتمنيع السلبي باستخدام جسم مضاد تتراوح الجرعة من حوالي‎ ‏إلى © ملغم/كغم من وزن الجسم العائل. فلي سبيل‎ ١.0٠ ‏ملغم/كغم؛ عادةٌ من‎ ٠٠١ ‏إلى‎ ‏ملغم/كغم من وزن الجسم.‎ ٠١ ‏ملغم/كغم من وزن الجسم أو‎ ١ ‏المثال قد تبلغ الجرعة‎ ‏ويتطلب نظام معالجة نموذجي إعطاء جرعة مرة واحدة كل أسبوعين أو مرة واحدة شهرياً‎ ١ ‏أو مرة واحدة كل ؟ إلى 1 شهور. وفي بعض الطرق؛ يعطى جسيمين مضادين وحيدي‎ ‏النسيلة أو أكثر بتخصص ارتباط مختلف في نفس الوقت حيث في هذه الحالة تقع جرعة‎ sac ‏معطاة من كل جسم مضاد ضمن الأمداء المشار إليها. وعادةً يعطى الجسم المضاد‎ ‏مرات. وقد تكون الفترات بين الجرعات المفردة أسبوعياً؛ شهرياً أو سنوياً. وقد تكون‎ ‏في المريض.‎ AR ‏الفترات منتظمة كما حددت بقياس مستويات الدم للجسم المضاد ل‎ Vo ‏وفي بعض الطرق؛ تضبط الجبرعة لتحقيق تركيز بلازما في الجسم المضاد‎ ‏ميكروغرام/مل وفي بعض الطرق‎ ٠ ‏إلى‎ ١ ‏من‎ zs plasma antibody concentration ‏إلى 080 ميكروغرام/مل. وبدلا من ذلك؛ قد يعطى الجسم المضاد في‎ Yo ‏يتراوح من‎ ‏صورة تركيب ثابت الإطلاق حيث في هذه الحالة يتطلب الإعطاء على فترات قصيرة.‎ ‏ويتفاوت مقدار الجرعة وتكرار إعطائها على عمر النصف للجسم المضاد في المريض.‎ Ye ‏تظهر الأجسام المضادة البشرية أطول عمر نصف ثم تأتي الأجسام المضادة المعدلة‎ (La gac chimeric antibodies ‏والأجسام المضادة الخيمرية‎ humanized antibodies ‏في صورة بشرية‎ ‏وقد يتفاوت إعطاء الجرعة وتكرارها‎ nonhuman antibodies ‏والأجسام المضادة غير البشرية‎ ‏منخفضة‎ de ja ‏اعتماداً على كون المعالجة وقائية أو علاجية. ففي التطبيقات الوقائية؛ تعطى‎ ‏تسببا على فترات غير منتظمة نسبيا لفترة زمنية طويلة. ويستمر بعض المرضى في تلقي‎ +

المعالجة بقية حياتهم. وفي التطبيقات العلاجية؛ تتطلب في بعض الأحيان جرعة مرتفعة نسبياً على فترات قصيرة نسبياً حتى ينخفض أو ينتهي تطور المرض ويفضل حتى يظهر المرضى

‎Gas‏ جزئياً أو ‎LK‏ لأعراض المرض. ومن ثم قد يعطى المريض نظام وقائياً. وتتراوح جرعات أحماض نووية تحمل شيفرة مولدات مناعة من حوالي ‎٠ o‏ نانوغرام إلى ‎١‏ غم أو ‎٠٠١‏ نانوغرام إلى ‎٠٠١‏ ملغم أو ‎١‏ ميكروغرام إلى ‎٠١‏ مغم أو من ‎٠0‏ إلى ‎Yeo‏ ميكروغرام من ‎DNA‏ لكل مريض. وتتراوح جرعات نواقل فيروسية

‏معدية من ‎٠١‏ إلى ‎٠٠١‏ جسيم فيروسي/جرعة أو أكثر.

‏ويمكن إعطاء عوامل لحث استجابة مناعية عن طريق لا معوي ‎parenteral‏ موضعياء في ‎cyl‏ عن طريق الفم؛ تحت الجلدء في الشريان ‎cintraarterial‏ داخل الجمجمة ‎٠١‏ 1 داخل البريتون» داخل الأنف؛ أو في العضل للمعالجة الوقائية و/أو العلاجية. وتتمثل الطريقة النموذجية بشكل أكبر لإعطاء عامل مولد للمناعة في إعطاء تحت الجلد بالرغم من أن الطرق الأخرى قد تكون فعّالة بشكل مماثل. وتتمثل الطريقة التالية الأكثر ‎Lalas‏ في الحقن في العضل. ويجرى هذا النوع من الحقن على الأغلب في عضلات الذراع ‎arm muscles‏ أو القدم ‎leg‏ وفي بعض الطرق؛ تحقن العوامل مباشرة في نسيج معين

‏ب تراكمت فيه الرواسب؛ على سبيل المثال» حقن داخل الجمجمة. ويفضل الحقن في العضل على التسريب في الوريد لإعطاء الجسم المضاد. وفي بعض الطرق؛ تحقن أجسام مضادة علاجية معينة مباشرة في الجمجمة. وفي بعض الطرق؛ تعطى أجسام مضادة في صورة تركيب ثابت الإطلاق ‎sustained release composition‏ أو أداة مثل أداة ميديباد ‎Medipad™‏ ‏(علامة تجارية).

‎Y.‏ ويجوز إعطاء عوامل ‎Gy‏ للاختراع في توليفة مع عوامل أخرى تكون ‎Ald‏ جزئياً على الأقل في معالجة مرض نشواني الأصل ‎.amyloidogenic disease‏ وفي حالة مرض الزهيمر ومتلازمة داون» حيث تظهر رواسب نشوائية في الدماغ؛ يمكن إعطاء عوامل الاختراع كذلك بالاقتران مع عوامل أخرى تزيد مرور عوامل الاختراع عبر الحاجز الدموي الدماغي ‎-blood-brain barrier‏

وتعطى عوامل مولدة للمناعة وفقاً للاختراع؛ مثل الببتيدات ‎peptides‏ في بعض

الأحيان في توليفة مع مادة مساعدة. ويمكن استخدام تشكيلة من مواد مساعدة في توليفة مع

ببتيد ‎(AB Jie peptide‏ لإظهار استجابة مناعية. وتزيد المواد المساعدة المفضلة استجابة

داخلية ضد مولد مناعة دون التسبب في تغيرات بنيوية في مولد المناعة تؤثر على الشسكل

° النوعي للاستجابة. وتشتمل المواد المساعدة المفضلة على هيدروكسيد الألومنيوم

(7) ‏الشسب ودهمن‎ aluminum phosphate ‏وفوسفات الألومنيوم‎ aluminum hydroxide

أحادي الفوسفوريل يحتوي على شق أسيل منزوع الأكسجين عند الموقع ”

‎De-O-acylated monophosphoryl lipid A‏ 3 متوفر بالعلامة التجارية ‎MPL™‏ (انظر ما جاء في

‏براءة الاختراع البريطائية رقم ‎77071١‏ مزود من شركةريبي إميونوكيم

‎٠١‏ ريسيرتش إنك ‎(RIBI ImmunoChem Research Inc. ٠‏ هاملتون ‎«Hamilton‏ مونتانا

‎«Montana‏ و هي ‎OY‏ جزء من كوريكسا ‎(Corixa‏ . والاسم التجاري ستميولين كيو

‏إس- ‎Stimulon™ YY QS-21‏ هو اسم لغليكوسيد ثلاثي تربين ‎triterpene glycoside‏ أو

‏صابونين ‎saponin‏ معزول من قشرة شجرة كولاجا-صابوناريا مولينا

‎Quillaja Saponaria Molina tree‏ موجودة في أمريكا الجنوبية ‎South America‏ (انظطر ما

‎ela Vo‏ عن كنسيل ‎Kensil‏ ومعاوتنيه في مجلة ‎Vaccine Design‏ في مقالة بعنوان

‎The Subunit and Adjuvant Approach‏ (إصدار بويل ‎Powell‏ ونيومان ‎(Newman‏ بلينوم بريس

‎«Plenum Press‏ نيويورك ‎(New York‏ 490 ٠١م)؛‏ وبراءة الاختراع الأمريكية رقم

‎,e0V,0¢,‏ ( ‘ (أكويلا بيوفارماس_يتيكالز 108025 ‎«Aquila‏ فرامينام

‎«Framingham‏ ماساشوستس) . وتكون المواد المساعدة الأخرى عبارة عن مستحلبات زيت في

‎«(peanut oil ‏السوداني‎ Js all ‏أو زيت‎ squalene ‏(مثل سكوالين‎ oil in water emulsions ‏ماء‎ T.

‏وبشكل اختياري في توليفة مع منبهات مناعة؛ مثل دهن )1( أحادي الفوسفوريل

‎Lai) monophosphoryl lipid A‏ ما جاء عن ستوتي ‎Stoute‏ ومعاونيه في مجلة

‎Engl J Med‏ 37 المجلد ‎FY‏ ص 91-45 (9917٠م)).‏ ويعتبر ‎CpG‏ مادة مساعدة

‏أخرى (نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 18/40109). ‎Yay‏ من ذلك؛ يمكن اقتران ‎AB‏

‎sala Yo‏ مساعدة. غير أن اقتران من هذا القبيل لا ينبغي أن يغير بنية ‎AB‏ للتأثير على طبيعة ‎vaa‏

الاستجابة المناعية كذلك. ويمكن إعطاء مادة مساعدة في صورة مكون من تركيب علادجي مع عامل فعّال أو يمكن إعطاؤها في صورة منفصلة قبل أو في وقت متزامن أو بعد إعطاء

العامل العلاجي. وتعتبر أملاح الألومنيوم ‎aluminum salts‏ (الشب ‎(alum‏ تنوعاً مفضل من المواد ° المساعدة؛ ‎(Fle‏ هيدروكسيد الالومنيوم ‎caluminum hydroxide‏ فوسفات الألومنيوم ‎caluminum phosphate‏ كبريتات الألومنيوم ‎aluminum sulfate‏ ويمكن استخدام مواد مساعدة من هذا القبيل مع أو بدون عوامل تنبيه مناعية متخصصة مثل ‎MPL‏ أو ‎3-DMP‏ أو 0521 أو أحماض أمينية ‎amino acids‏ بوليمرية أو مونمرية مثل حمض متعدد الغلوتاميك ‎polyglutamic acid‏ أو متعدد لايزين ع50زالزاهم. وتعتبر تراكيب مستحلبة من زيت في ماء ‎Leg ١‏ آخرآ من المواد المساعدة. ويمكن استخدام مواد مساعدة من هذا القبيل مع أو بدون عوامل تتبيه مناعية متخصصة أخرى مثل ببتيدات موراميل ‎muramyl peptides‏ (على سبيل المثال؛ 77-أسيتيل موراميل-1-ثريونيل- (7- أيسزو غلوتامين ‎N-acetylmuramyl-L-threonyl-‏ ‎«D-isoglutamine (thre-MDP)‏ 77-أسيتيل-تورمور اميل-.1-الانيل-7-أيزو غلوتامين ‎«N-acetyl-normuramyl-L-alanyl-D-isoglutamine (nor-MDP)‏ 7-أسيتيل موراميل-.1- ألانيل-- ‎ae‏ ©-أيزوغلوتامينيل-1-ألانين-7-(١*-؟؟‏ ثنائي بالميتويل--غليسيرو -7-هيدروكسي فوسفوريلوكسي)-إثيل أمين ‎N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-2-(1'-‏ ‎J—o WN «2'dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyphosphoryloxy)-ethylamine (MTP-PE)‏ غلوكسامينيل-7<-أسيتيل ميوراميل-1-1/-1-أيسزوغلو -1-و1/-شائفشسي بالميتوكسي بروبيل أميد ‎N-acetylglucsaminyl-N-acetylmuramyl-L-Al-D-isoglu-L-‏ ‎Ala-dipalmitoxy propylamide (DTP-DPP) Y.‏ فيراميد ‎theramide™‏ (علامة تجارية) « أو مكونات أخرى لجدار خلية بكتيرية. وتشتمل مستحلبات من زيت في ماء )1( 14559 (انظر نشرة براءة الاختراع الدولية رقم 4477 40/1)؛ يحتوي على 720 سكوالين ‎squalene‏ 70,6 توين ‎tween 80 ٠‏ 0,+/ سبان عدم 85 ‎span‏ (يحتوي بشكل اختياري على مقادير مختلفة من ‎(MTP-PE‏ مشكلة في جسيمات دون مجهرية ‎submicron particles‏ باستخدام مميع مجهري ‎Jie microfluidizer Yo‏ المميع المجهري من نموذج 7 (مزود من شركة ميكروفلويدكس vaa

‎Aide cmicrofluidizer‏ نيوتن ‎Newton‏ مساشوستس)؛ (ب) ‎SAF‏ يحتوي على ‎7٠١‏ سكوالين ‎١.4 squalene‏ توين ‎Av‏ 80 هع و £0 بوليمر ‎L121‏ معاق ببلورنيك ‎pluronic-blocked polymer L121‏ و ‎cthr-MDP‏ إما يميع مجهرياً إلى مستحلب دون مجهري أو يدوم لإنتاج مستحلب ذي حجم جسيمي أكبرء و (ج) نظام مادة مساعدة ° من ريبي (علامة تجارية) ‎adjuvant system (RAS)‏ “17طن؛ (مزود من شركة ريبيء ميونوكيم ‎(Ribi ImmunoChem‏ مدينة هاميلتون ‎«Hamilton‏ مونتانا) يحتوي على 7/7 سكوالين ‎«squalene‏ 7 توين ‎tween 80 Av‏ ومكون ‎Jaa‏ خلية بكتيرية واحد أو أكثر من مجموعة تشتمل على دهن )7( أحادي الفوسفوريل ‎«monophosphoryllipid A (MPL)‏ تر يهالوز ثنائي ميكو لات ‎«trehalose dimycolate (TDM)‏ هيكل جدار خلية ‎cell wall skeleton‏ ‎¢(CWS) Ve‏ ويفضل ‎CWS +MPL‏ (بالاسم التجاري ديتوكس ‎Detox™‏ (علامة تجارية)). وتعتبر مادة صابونين ‎saponin‏ المساعدة نوعاً مفضلا ‎THAT‏ من المواد المساعدة» مثل ستيميولون “107 (علامة تجارية) ( 021»؛ من شركة أكويلا ‎¢Aquil‏ مدينة فرامينام ‎«Framingham‏ ‏ولاية مساشوستس) أو جسيمات متولدة منه مثل 1500148 (متراكبات تتبيه مناعة ‎(immunostimulating complexes‏ و ‎ISCOMATRIX‏ وتشتمل مواد مساعدة أخرى على مادة ‎Vo‏ فرويند المساعدة الكاملة ‎Freund's Adjuvant (CFA)‏ ومادة فرويند المساعدة غير الكاملة ‎Incomplete Freund's Adjuvant (IFA)‏ وتشمل مواد مساعدة أخرى مركبات سيتوكين ‎cytokines‏ مثل مركبات انترلوكين ‎¢1L-2 ¢1L-1) interleukins‏ و 11-12)» عامل تتبيه مستعمرة ملتهمة كبيرة ‎macrophage colony stimulating factor (M-CSF)‏ وعامل نخر

‏ورمي ‎-tumor necrosis factor (TNF)‏ ‎Y.‏ ويمكن إعطاء مادة مساعدة مع مولد مناعة في صورة تركيب منفردء أو يمكن إعطاؤه قبل أو ‎Lidl Jia‏ مع أو بعد إعطاء مولد المناعة. ويمكن تعبئة وتزويد مولد المناعة والمادة المساعدة في نفس القارورة ‎vial‏ أو ‎(Say‏ تعبئتهما في قوارير منفصلة ومزجهما قبل الاستخدام. ويعبأ مولد المناعة والمادة المساعدة ‎Bale‏ مع وضع بطاقة تشير إلى التطبيق العلاجي المرغوب. وفي ‎Alla‏ تعبئة مولد المناعة والمادة المساعدة بشكل متفصسل؛ تشمل ‎Yo‏ التعبئة ‎Sale‏ تعليمات للمزج قبل الاستخدام. ويعتمد اختيار مادة مساعدة و/أو مادة حاملة على

‎vas

21> ثبات التركيبة المولدة للمناعة التي تحتوي على المادة المساعدة؛ وطريقة الإعطاء ومواعيد إعطاء الجرعات وفعالية المادة المساعدة لأنواع ينبغي تلقيحهاء وفي البشر؛ تعتبر مادة مساعدة مقبولة صيدلياً واحدة من تلك المواد الموافق عليها أو المستحسن إعطاؤها للبشر عن طريق أجسام منظمة وثيقة الصلة. فعلى سبيل المثال؛ لا تعتبر مادة فرويند المساعدة الكاملة ‎Complete Freund's Adjuvant °‏ ملائمة للإعطاء البشري ‎٠.‏ ويفضل استخدام الشب صستاة» ‎MPL‏ ‏و ‎.QS-21‏ وبشكل اختياري؛ تستخدم مادتين مساعدتين مختلفتين أو أكثر في نفس الوقت. وتشتمل التوليفات المفضلة على شب ‎alum‏ مع .4101 شب ‎alum‏ مع 05-21 ‎MPL‏ مع ‎QS-21‏ وشب ‎alum‏ و 05-21 و ‎MPL‏ معاً. ويمكن كذلك استخدام مادة فرويند المساعدة غير الكاملة (انظر ما ‎ela‏ عن شانج ‎Chang‏ ومعاونيه في مجلة ‎<ddvanced Drug Delivery Reviews ٠١‏ المجلد ‎FY‏ ص ‎(AV VIA) ١87-177‏ وبشكل اختياري. في توليفة مع أي من أملاح شب ‎calum‏ 90521؛ و ‎MPL‏ وكل التوليفات متنها. وغالباً تعطى العوامل ‎Gay‏ للاختراع في صورة تراكيب صيدلية تشتمل على عامل علاجي ‎(Jad‏ أي مجموعة متنوعة من مكونات مقبولة صيدلياً أخرى. انظر ما جاء في ‎Remington's Pharmaceutical Science‏ (الطبعة ‎١٠9‏ إصدار شركة ماك ببلشنج كومباني ‎<Mack Publishing Company Vo‏ مدينة استون ‎Easton‏ ولاية بنسلفانيا ‎(Pennsylvania‏ 17850 ١م‏ . ويعتمد الشكل المفضل على طريقة الإعطاء المرغوبة والتطبيق العلاجي. ويمكن أن يشتمل التركيب كذلك؛ بالاعتماد على التركيب المرغوب؛ على مواد حاملة أو مواد مخففة مقبولة صيدلياً وغير سامة؛ والتي عرّف بأنها مواد ناقلة تستخدم ‎Bale‏ لتشسكيل تراكيب صيدلية تعطى للحيوان أو الإنسان. وتختار المادة المخففة بحيث لا تؤثر على الفعالية الإحيائية 2 للتوليفة. وتشتمل أمثلة مواد مخففة من هذا القبيل ماء مقطر ‎distilled water‏ ومحلول ملحي منظم بفوسفات فسيولوجي ‎¢phosphate-buffered saline‏ محاليل رينجنر ‎«Ringer's solutions‏ ومحلول دكستروز ‎cdextrose solution‏ ومحلول هانك ‎Hank's solution‏ وبالإضافة إلى ذلكء يمكن أن يشتمل التركيب أو المستحضر الصيدلي كذلك على مواد حاملة أو مواد مساعدة أو مثبتات غير سامة وغير علاجية ولا تولد مناعة أخرى وما أشبه.

ويمكن كذلك أن تشتمل التراكيب الصيدلية على جزينات ضخمة يجرى لتتأيض بشكل ‎day‏ 2 مثل البروتينات ومتعددات السكريد ‎polysaccharides‏ مثل خيتوسان ‎«chitosan‏ وأحماض متعدد اللاكتيك ‎¢polylactic acids‏ أحماض متعدد الغليكوليك ‎polyglycolic acids‏ وبوليمرات إسهامية ‎Je)‏ سفاروز يحتوي على مجموعة وظيفية من للاتكس ‎latex functionalized sepharose (TM) °‏ (علامة تجارية) « أجاروز ‎cagarose‏ سليلوز ‎cellulose‏ ‏وما أشبه)؛ أحماض أمينية ‎amino acids‏ بوليمرية. بوليمرات إسهامية من أحماض أمينية ‎amino acid copolymers‏ ومركبات دهنية متكتلة ‎lipid aggregates‏ (مثل قطرات الزيت ‎oil‏ ‎droplets‏ أو الجسيمات الشحمية ‎(liposomes‏ . وبالإضافة إلى ذلك؛ قد تعمل هذه المواد حاملة بصفتها عوامل تنبيه مناعية ‎immunostimulating agents‏ (أي مواد مساعدة). ‎Ve‏ وللإعطاء عن طريق غير معوي؛ يمكن إعطاء العوامل ‎Wy‏ الاختراع في صورة جرعات قابلة للحقن من محلول أو معلق من مادة في مخفف مقبول فسيولوجيا مع مادة حاملة صيدلية يمكن أن يكون سائل معقم ‎sterile liquid‏ مثل زيوت مائية ‎cwater oils‏ أو محلول ملحي أو غليسيرول ‎«glycerol‏ أو إيثانول ‎ethanol‏ وبالإضافة إلى ذلك؛ يمكن أن تتواجد مواد مساعدة؛ مثل عوامل ترطيب ‎cwetting agents‏ استحلاب ‎cemulsifying‏ مواد خافضة للتوتر ‎surfactants hdl yo‏ مواد منظمة ‎da jal‏ الحموضة ‎pH buffering substances‏ وما أشبه في التراكيب. ومن المكونات الأخرى للتراكيب الصيدلية مكونات من مصدر بترولي ‎(petroleum‏ ‏حيواني؛ أو نباتي أو من مصدر تخليقي؛ على سبيل المثال؛ زيت الفول السوداني؛ وزيت فول الصويا ‎soybean oil‏ وزيت معدني ‎.mineral oil‏ وعمومآء تعتبر مركبات الغليكول ‎glycols‏ مثل بروبيلين غليكول ‎propylene glycol‏ أو متعدد إثيلين غليكول ‎polyethylene glycol‏ ‎Ye‏ مواد حاملة سائلة مفضلة؛ وبصفة خاصة للمحاليل القابلة للحقن. ويمكن إعطاء الأجسام المضادة في صورة حقن مختزن أو مستحضر غرز قد يشكل بكيفية تتيح إطلاق ثابت للمقوم الفعال ‎active ingredient‏ ويشتمل تركيب نموذجي على جسم مضاد وحيد النسيلة بتركيز © ملغم/مل؛ مشكل في محلول مائي منظم لدرجة الحموضة يتكون من [-هستيدين ‎L-histidine‏ تركيزه ‎٠‏ © ملي ‎HI»‏ و ©1180 تركيزه ‎٠5١‏ ملي جزيئي» ضبطت ‎vo‏ درجة حموضته إلى ‎١‏ باستخدام ‎HCL‏

+ ‎Bole‏ ما تحضر تراكيب في صورة مواد ‎ALB‏ للحقن ‎cnjectables‏ إما في صورة محاليل ‎solutions‏ أو معلقات ‎suspensions‏ سائلة؛ ويمكن كذلك تحضير أشكال صلبة ملائمة لتذاب, أو تعلق في مواد ناقلة سائلة ‎liquid vehicles‏ قبل الحقن. ويمكن كذلك استحلاب أو تغليف المستحضر في جسيمات شحمية ‎liposomes‏ أو جسيمات دقيقة ‎micro particles‏ مثل ° متعدد لاكتيد ‎,polylactide‏ متعدد جليكوليد ‎,polyglycolide‏ أو بوليمر إسهامي ‎copolymer‏ ‏للحصول على تأثير معزز للمادة المساعدة, كما وصف أعلاه (انظر ما جاء عن لانجر :© , في مجلة ‎(Science‏ المجلد ‎١749‏ ص ‎١5977‏ (19950م)؛ وما ‎ela‏ عن هائز ‎Hanes‏ ‏في مجلة ‎Advanced Drug Delivery Reviews‏ المجلد ‎«YA‏ ص ‎٠ م١ 14 V) ١١-947‏ ويمكن إعطاء العوامل ‎Gy‏ للاختراع الراهن في صورة حقنة مختزنة ‎depot injection‏ أو مستحضر ‎٠١‏ غرز ‎implant preparation‏ حيث يمكن تشكيله بكيفية تتيح إطلاق ثابت أو نابض للمقوم الفغال. وتشتمل تراكيب إضافية ملائمة لطرق إعطاء أخرى على تراكيب تعطى عن طريق الفم ‎oral‏ الأنف ‎intranasal‏ والرئة ‎pulmonary‏ تحاميل ‎suppositories‏ وتراكيب تعطى خلال الأدمة. ‎Vo‏ وبالنسبة للتحاميل؛ تشتمل المواد الرابطة ‎binders‏ والحاملة ‎carriers‏ على سبيل المثالء على مركبات غليكول متعدد الألكيلين ‎polyalkylene glycols‏ أو مركبات ثلاني غفليسيريد ‎Striglycerides‏ ويمكن تشكيل تحاميل من هذا القبيل من مخاليط تحتوي على المقوم الفغال بنسبة تتراوح من 70,0 إلى ‎Ye‏ ويفضل من ‎7١‏ إلى 77 وتشتمل التراكيب المعطاة عن طريق ‎all‏ على سواغات 5م»»»؛ مثل أصناف صيدلية من مانيتول ‎mannitol‏ لاكتوز ‎lactose Ye‏ نشا ‎starch‏ وستيارات المغنيسيوم ‎magnesium stearate‏ سكرين الصوديوم ‎,sodium saccharine‏ سليلوز ‎cellulose‏ وكربونات المغنيسيوم ‎.magnesium carbonate‏ وتكون هذه التراكيب في صورة محاليل, معلقات, أقراص ‎tablets‏ أو حبوب ‎pills‏ أو كبسولات ‎capsules‏ تراكيب أو مساحيق ‎powders‏ ثابتة الإطلاق وتحتوي على المقوم الفغّال بتسبة تتراوح من ‎7٠١‏ إلى 795, ويفضل من 775 إلى ‎SY‏ ‎vaa‏

ويمكن أن يؤدي الاستخدام الموضعي إلى التوزيع عبر الأدمة ‎transdermal‏ أو داخل الأدمة ‎intradermal‏ ويمكن تسهيل الإعطاء الموضعي عن طريق الإعطاء الإسهامي للعامل مع توكسين كوليرا ‎cholera toxin‏ أو مشتقات أزيلت سميتها ‎detoxified derivatives‏ أو وحدات جزئية منه أو مركبات توكسين بكتيرية ‎bacterial toxins‏ أخرى مشابهة (انطر ما ‎ela‏ عن ° غلين ‎Glenn‏ ومعاونيه في مجلة ‎Narre‏ المجلد ‎YAY‏ ص ‎A) +8١‏ 14 ١م‏ . ويمكن تحقيق إعطاء إسهامي باستخدام المكونات في صورة خليط أو في صورة جزيئات مرتبطة ‎linked molecules‏ يحصل عليها عن طريق الربط الكيميائي التقاطعي ‎chemical crosslinking‏ أو التعبير عنها في صورة بروتين التحام ‎-fusion protein‏ ‎Ya‏ من ذلك, يمكن توزيع الجرعة عبر الأدمة باستخدام ممر ‎skin path sata‏ أو ‎Ve‏ باستخدام جسيمات انتقالية ‎transferosomes‏ (انظر ما جاء عن بول ‎Paul‏ ومعاونيه في مجلة ‎J Immunol‏ ليل ‎Yo Madd‏ ص ‎7574-787١‏ )° 4 ١م‏ ؛ وما جاء عن سفك ‎Ceve‏ ‏ومعاونيه في ‎Biophys.

Acta daa‏ المجلد ‎VTA‏ ص ‎A) 7١-7٠١٠‏ 99 م)). ‎.vI‏ طرق التشخيص ‎Methods of Diagnosis‏ يقدم الاختراع ‎Gok‏ للكشف عن استجابة مناعية ‎immune response‏ ضد ببتيد ‎AB‏ ‎AB peptide‏ في مريض يعاني من مرض الزهيمر أو عرضة للإصابة به. وتعتبر الطرق مفيدة بصفة خاصة لمراقبة سير المعالجة المعطاة للمريض. ويمكن استخدام الطرق لمراقبة كل من المعالجة الدوائية ‎therapeutic treatment‏ في مرضى تظهر عليهم الأعراض ‎symptomatic patients‏ والمعالجة الوقائية ‎prophylactic treatment‏ في مرضى لا تظهر عليهم الأعراض ‎asymptomatic patients‏ وتعتبر الطرق مفيدة لمراقبة كل من التمتنيع الفعال ‎active immunization Y.‏ (على سبيل المثال جسم مضاد ‎antibody‏ ينتج استجابة لإعطاء المولد المناعي ‎(immunogen‏ والتمنيع السلبي ‎sic) passive immunization‏ سبيل المثال قياس مستوى الجسم المضاد المعطى). ‎LY‏ التمنيع الفعال تستلزم بعض الطرق تحديد قيمة أساسية لاستجابة مناعية في مريض قبل إعطائه ‎ve‏ جرعة من عامل, ومقارنة هذه القيمة مع قيمة أخرى للاستجابة المناعية بعد المعالجة. وتشير vy

زيادة كبيرة (أي أعلى من الحد النموذجي للخطأ التجريبي في قياسات متكررة لنفس العينة؛ يعبر عنها في صورة انحراف معياري واحد ‎one standard deviation‏ عن متوسط ‎mean‏ هذه القياسات) في قيمة الاستجابة المناعية إلى نتيجة معالجة إيجابية (أي أن إعطاء العامل قد تحقق أو ازدادت الاستجابة المناعية). وإذا لم تتغير ‎Aad‏ الاستجابة المناعية بشكل كبير؛ أو تناقصت؛ يشار إلى نتيجة معالجة سلبية. وعموماً؛ يتوقع أن يبدي المرضى الخاضعون إلى سير معالجة ابتدائي باستخدام عامل مولد للمناعة ‎immunogenic agent‏ زيادة في الاستجابة المناعية بجرعات متعاقبة, حيث تصل فعلياً إلى قيمة مستقرة. وعادةٌ؛ يستمر إعطاء عامل أثناء زيادة الاستجابة المناعية. ويشير الوصول إلى القيمة المستقرة إلى أنه بالإمكان إيقاف

المعالجة أو تقليل الجرعة أو تواتر المعالجة.

‎١‏ وفي طرق ‎Al‏ 5( تقاس ‎dad‏ ضابطة ‎control value‏ (أي؛ متوسط وانحراف معياري) لاستجابة مناعية لمجموعة ضابطة من السكان. وعادة لا يتلقى الأفراد في المجموعة الضابطة من السكان ‎Base alle‏ ومن ثم تقارن قيم الاستجابة المناعية المقاسة في مريض بعد أن أعطي عامل علاجي مع القيمة الضابطة. وتشير الزيادة الكبيرة مقارنة مع القيمة الضابطة (على سبيل المثال؛ أعلى من انحراف معياري واحد عن المتوسط) إلى نتيجة

‏> معالجة إيجابية. ويشير الافتقار إلى زيادة كبيرة أو نقصان كبير إلى نتيجة معالجة سلبية. وعادةٌ يستمر إعطاء العامل أثناء زيادة الاستجابة المناعية بالنسبة إلى القيمة الضابطة. وكما ذكر مسبقآء يشير الوصول إلى القيمة المستقرة بالنسبة إلى القيم الضابطة أنه بالإمكان إيقاف المعالجة أو تخفيض الجرعة أو تواتر المعالجة.

‏وفي طرق أخرى؛ تحدد قيمة ضابطة لاستجابة مناعية ‎Je)‏ سبيل المثال؛ متوسط

‏9 وانحرف معياري) من مجموعة ضابطة من السكان لأفراد خضعوا للعلاج بعامل علاجي ووصلت استجاباتهم المناعية إلى قيمة مستقرة استجابة للمعالجة. وتقارن قيم مقاسة للاستجابة المناعية في مريض مع القيمة الضابطة. وإذا لم يكن المستوى المقاس في مريض مختلف بدرجةٍ كبيرة ‎Jo)‏ سبيل المثال؛ أكثر من انحراف معياري واحد) عن القيمة الضابطة, فإنه يمكن إيقاف المعالجة. وإذا كان المستوى في المريض أقل من القيمة الضابطة بدرجة كبيرة,

TA

‏فإن ذلك يبرر استمرار إعطاء العامل. وإذا استمر المستوى في المريض أقل من القيمة‎ ‏باستخدام مادة مساعدة مختلفة.‎ (Jd ‏الضابطة؛ فإنه يوصى بتغيير نظام المعالجة على سبيل‎ ‏وفي طرق أخرى, تراقب استجابة المريض المناعية الذي لا يتلقى المعالجة حالياً لكنه‎ ‏خضع لسير معالجة مسبقة لتحديد فيما إذا كان هنالك حاجة للعودة إلى المعالجة. ويمكن‎ ‏مقارنة قيمة الاستجابة المناعية المقاسة في المريض مع قيمة الاستجابة المناعية التي حصل‎ ٠ ‏عليها مسبقآً في مريض بعد فترة معالجة مسبقة. ويشير الانخفاض الكبير بالنسبة إلى‎ ‏أعلى من الحد النموذجي للخطأً في القياسات المتكررة لنفس القيمة)‎ (sl) ‏القياسات السابقة‎ ‏من ذلك, يمكن مقارنة القيمة المقاسة في مريض مع‎ Yay ‏إلى إمكانية إعادة تلك المعالجة.‎ ‏قيمة ضابطة (المتوسط بالإضافة إلى الانحراف المعياري) محددة في عدد من مرضى بعد‎ ‏من ذلك, يمكن مقارنة القيمة المقاسة في مريض مع قيمة‎ Yau ‏التعرض لفترة معالجة معينة.‎ ١ ‏أو في عدد‎ gana) ‏تظهر عليهم أعراض‎ aly Wildy ‏ضابطة في عدد من مرضى معالجين‎ ‏في خصائص المرض. وفي كل هذه الحالات؛‎ lad ‏من مرضى معالجين دوائياً وأظهروا‎ ‏يشير الانخفاض الكبير بالنسبة إلى المستويات الضابطة (أي يزيد عن انحراف معياري) إلى‎ ‏ضرورة إعادة المعالجة في المريض.‎ blood ‏المأخوذة للتحليل عبارة عن دم‎ tissue sample ‏وعادةٌ تكون العينة النسيجية‎ Vo ‏من‎ cerebrospinal fluid ‏أو مائع مخي شوكي‎ mucous ‏مخاط‎ serum ‏مصل‎ splasma ‏بادزما‎ ‎AB ‏المريض. وتحلل العينة للاستدلال على الاستجابة المناعية لأي شكل من أشكال ببتيد‎ ‏على سبيل المثال؛‎ casas ‏ويمكن تحديد الاستجابة المناعية من‎ .2 sale 5 AB peptide ‏وتوصف طرق‎ AB peptide AB ‏أجسام مضادة أو خلايا 7 ترتبط بشكل متخصص بببتيد‎ ‏ووصفت طرق‎ A Balle ja ‏للكشف عن أجسام مضادة متخصصة ب 8م في‎ ELISA 7 ‏تقدم (انظر التعريفات). وفي بعض الطرق, تحدد‎ Leg ‏المتفاعلة‎ T ‏للكشف عن خلايا‎ ‏أعلاه.‎ IIT ‏كما وصف في الجزء‎ clearing assay ‏الاستجابة المناعية باستخدام معايرة تنقية‎ ‏وفي هذه الطرق, تلامس العينة النسيجية المأخوذة من مريض خاضع للاختبار مع‎ ‏وخلايا بلعمية‎ (PDAPP ‏(على سبيل المثال, من فأر‎ amyloid deposits ‏رواسب نشوانية‎ ‏للراسب النشواني.‎ A SOU ‏ومن ثم تراقب التنقية‎ Fe ‏تحمل مستقبلات‎ phagocytic cells Yo vaq

ويشير وجود ومدى استجابة التنقية إلى وجود ومستوى الأجسام المضادة الفعالة ضد 8 نقي في العينة النسيجية للمريض الخاضع للاختبار. ". التمنيع السلبي ‎Passive Immunization‏ ‎a gac‏ تكون إجراءات مراقبة التمنيع السلبي ‎Blas‏ لمراقبة التمتيع ‎Jud‏ ‏م الموصوفة أعلاه. بيد أن مخطط الجسم المضاد بعد التمنيع السلبي يبدي ‎Bale‏ ذروة مباشرة في تركيز الجسم المضاد يتبعها انحلال أسي ‎.exponential decay‏ وبدون إعطاء جرعة إضافية؛ يقترب الانحلال من مستويات المعالجة المسبقة ضمن فترة تتراوح من أيام إلى أشهر اعتماداآً على العمر النصفي للجسم المضاد المعطى. فعلى سبيل ‎(JB‏ يكون عمر ‎Call‏ لبعض الأجسام المضادة البشرية في حدود ‎Yo‏ يوماً.

‎٠١‏ وفي بعض الطرق؛ يجرى قياس أساسي لجسم مضاد ل ‎AB‏ في المريض قبل الإعطاء؛ ويجرى قياس ثان بعد ذلك مباشرةٌ لتحديد المستوى الذروي للجسم المضاد ‎peak antibody level‏ وتجرى قياسات أخرىء واحدة أو أكثر على فترات لمراقبة انحلال مستويات الجسم المضاد. وإذا انخفض مستوى الجسم المضاد إلى قيمة أساسية أو إلى نسبة مئوية محددة ‎le‏ لقيمة أساسية تقل عن الذروة (مثل ‎Jon‏ 776 أو ١٠7)»؛‏ تعطى جرعة

‎ve‏ إضافية من الجسم المضاد. وفي بعض الطرق؛ تقارن الذروة أو المستويات المقاسة اللاحقة الأقل خلفية مع المستويات المرجعية المحددة ‎Gane‏ لوضع نظام معالجة وقائية أو علاجية مفيدة في مرضى آخرين. وإذا كان مستوى الجسم المضاد المقاس أقل بدرجةٍ كبيرة من المستوى المرجعي (على سبيل المثال؛ أقل من المتوسط ناقص انحراف معياري واحد للقيمة المرجعية في عدد من المرضى المستفيدين من المعالجة) يوصى بإعطاء جرعة إضافية من

‏ى الجسم المضاد. ¥. طقوم تشخيصية ‎Diagnostic Kits‏

‏يزود الاختراع كذلك طقومآً تشخيصية لإجراء الطرق التشخيصية الموصوفة أعلاه. ‎fale‏ ما تحتوي تلك الطقوم على عامل يرتبط بشكل متخصص بأجسام مضادة ل ‎AB‏ ‏ويحتوي الطقم كذلك على وسم ‎Label‏ وللكشف عن الأجسام المضادة ل ‎AB‏ يكون الوسم

‎‘labelled anti-idiotypic antibodies ‏عادةٌ في صورة أجسام مضادة موسومة للأتماط الذاتية‎ vo

وللكشف عن الأجسام المضادة؛ قد يزود العامل المرتبط ‎Base‏ بطور صلب, مثل جدران ‎wells‏ ‏صحن عياري دقيق ‎dish‏ ©0110001. وعادة تحتوي الطقوم كذلك على وسم يزود تعليمات عن استخدام الطقم . وقد يشتمل الوسم كذلك على مخطط أو مستويات أخرى متعلقة بنظام مناظر للوسم المقاس باستخدام مستويات الأجسام المضادة ل ‎AB‏ ويشير المصطلح وسم إلى أي مادة

م مكتوبة أو مسجلة مرتبطة ب أو بطريقة أخرى مصاحبة لطقم عند أي زمن أثناء تصنيعهاء نقلهاء بيعها أو استخدامها. فعلى سبيل المثال؛ يشتمل المصطلح وسم على وريقات وكراسات إعلان ‎«advertising leaflets and brochures‏ مواد تغليف ‎packaging materials‏ تعليمات ‎instructions‏ كاسيتات سمعية أو مرئية ‎caudio or video cassettes‏ أقراص كمبيوتر ‎computer discs‏ بالإضافة إلى كتابة مطبوعة مباشرةً على الطقوم.

‎١‏ ويزود الاختراع كذلك طقومآ تشخيصية لإجراء تصوير 102808 في الجسم الحي. وتحتوي ‎fale‏ تلك الطقوم على جسم مضاد مرتبط بمغير خاصية ‎epitope‏ ل ‎,AB‏ ويفضل ضمن الشقات من ‎١‏ إلى ‎.٠١‏ ويفضل أن يوسم الجسم المضاد أو أن توجد مادة مفاعلة لوسم ثانوي في الطقم . ويفضل أن يوسم الطقم بتعليمات لإجراء معايرة تصوير في الجسم الحي. 1. تصوير في الجسم الحي

‏ب يزود الاختراع ‎Bk‏ لتصوير رواسب نشوائية في الجسم الحي في مريض. وتعتبر طرق من هذا القبيل مفيدة لتشخيص أو تعزيز تشخيص مرض الزهيمر, أو العرضة للإصابة به. فعلى سبيل ‎(Jl‏ يمكن تطبيق الطرق على مريض يظهر أعراض العته ‎dementia‏ وإذا احتوى المريض على رواسب نشوانية غير سوية؛ فإنه من المحتمل أن يعاني المريض من مرض الزهيمر. ويمكن كذلك تطبيق الطرق على مرضى لا تظهر عليهم أعراض المرض.

‎٠‏ - ويشير وجود رواسب نشوانية غير سوية إلى عرضة الإصابة بأعراض المرض في المستقبل. وتعتبر الطرق كذلك مفيدة لمراقبة تطور المرض و/أو الاستجابة إليه لمعالجة مرضى قد تم تشخيص مرض الزهيمر فيهم مسبقاً.

‏وتجرى الطرق بإعطاء مادة مفاعلة؛ ‎Jie‏ جسم مضادء يرتبط ب ‎AB‏ للمريض؛ ومن

‏ثم الكشف عن ‎Jalal‏ بعد ارتباطه. وتتمثل الأجسام المضادة المفضلة في الأجسام المضادة

‎ve‏ المرتبطة برواسب 8ه في مريض بدون الارتباط بمتعدد ببتيد ‎AB polypeptide APP‏ كامل

الطول. وتعتبر أجسام مضادة مرتبطة بمغير خاصية ل ‎AB‏ ضمن أحماض أمينية ‎amino acids‏ من ‎١‏ إلى ‎٠١‏ مفضلة بصفة خاصة. وفي طرق أخرى, يرتبط الجسم المضاد بمغير خاصية ضمن أحماض أمينية ‎amino acids‏ من 7 إلى ‎٠١‏ ل ‎AB‏ وعادةٌ ترتبط أجسام مضادة من هذا القبيل بدون أن تحث استجابة تنقية جوهرية. وفي طرق ‎cs Jal‏ يرتبط الجسم 0 المضاد بمغير خاصية ضمن الأحماض الأمينية ‎acids‏ دنه من ‎١‏ إلى ال ‎AB‏ ‏وترتبط الأجسام المضادة هذه ‎fale‏ وتحث استجابة تنقية ل 8م. بيد أنه يمكن تفادي استجابة التنقية باستخدام أجزاء من الجسم المضاد تفتقر إلى منطقة ثابتة كاملة ‎Jie full length constant region J skal‏ مناطق ‎Fab‏ وفي بعض الطرق؛ قد يعمل نفس الجسم المضاد بصفته مادة مفاعلة معالجة ومادة مفاعلة تشخيصية. وعموماً, لا تبدي أجسام مضادة ‎٠‏ مرتبطة بمغيرات خاصية عند الطرف الكربوني للشق ‎٠١‏ من ‎AB‏ إشارة قوية مقارنة بالإشارة التي تبديها أجسام مضادة مرتبطة بمغيرات خاصية ضمن الشقات من ‎١‏ إلى ١٠؛‏ نظرآً لأن مغيرات الخاصية عند الطرف الكربوني لا يمكن الوصول إليها بشكل محتمل في رواسب

نشوانية. ‎Ga yy‏ لذلك؛ تعتبر أجسام مضادة من هذا القبيل مفضلة بدرجةٍ أقل. : ويمكن إعطاء مواد مفاعلة تشخيصية عن طريق حقن في الوريد ‎intravenous injection‏ ‎Vo‏ إلى جسم المريض, أو مباشرة في الدماغ عن طريق حقن ‎Jala‏ الجمجمة ‎intracranial injection‏ أو بعمل فتحة من خلال الجمجمة. وينبغي أن تكون جرعة المادة المفاعلة ضمن نفس الأمداء كما هو الحال في طرق المعالجة. ‎fale‏ توسم المادة المفاعلة؛ مع أنه في بعض الطرقء لا توسم المادة المفاعلة الأولية التي لها ألفة ‎AB affinity‏ ويستخدم عامل وسم ثانوي لربط المادة المفاعلة الأولية. ويعتمد اختيار الوسم على طريقة الكشف. فعلى سبيل ‎JA‏ يكون 7 وسم مفلور ‎fluorescent label‏ ملائماً للكشف الضوئي ‎optical detection‏ ويعتبر استخدام واسمات بارا مغناطيسية ‎Le Bl paramagnetic labels‏ للكشف بالتصوير الإشعاعي المقطعي ‎tomographic detection‏ بدون تدخل جراحي . ويمكن كذلك الكشف عن واسمات مشعة

.SPECT ‏أو‎ PET ‏باستخدام طريقة‎ radioactive labels ‏ويجرى التشخيص بمقارنة عدد, حجم و/أو شدة بقعة موسومة بالمقارنة مع قيم أساسية‎ ‏مناظرة. ويمكن أن تمثل القيم الأساسية المستويات المتوسطة في عدد من أفراد غير مصابين‎ vo

بالمرض. ويمكن كذلك أن تمثل القيم الأساسية مستويات سابقة محددة في نفس المريض. فعلى سبيل المثال؛ يمكن تحديد القيم الأساسية في مريض قبل بدء المعالجة؛ ثم تقارن القيم المقاسة مع القيم الأساسية. ويشير الانخفاض في القيم بالنسبة إلى الإشارات الأساسية إلى استجابة إيجابية للمعالجة. ‎٠‏ الأمثقلة 1. الفعالية الوقائية ل ‎AP‏ ضد ‎AD‏ ‏تصف هذه الأمثلة إعطاء ببتيد 8842 ‎AB42 peptide‏ إلى ‎J‏ محولة جيتنيا ‎transgenic mice‏ تعبر بشكل مفرط عن ‎APP‏ بطفرة عند الموقع ‎7٠١7‏ لمم مط) تجعلها ميالة لإظهار أمراض عصبية تشبه مرض الز هيمر ‎Alzheimer's-like neuropathology‏ بشكلٍ ‎Ve‏ تمهيدي. ووصف إنتاج هذه الفثران وخصائصها (فئران ‎ela Lad (PDAPP‏ عن جيمز ‎Games‏ ‏ومعاونيه في مجلة ‎Nature‏ في المرجع سابق الذكر. وبدأت هذه الحيوانات؛ في صورة زيجوت مغاير ‎cheterozygote‏ بترسيب ‎AB‏ عند الأشهر الستة الأولى من العمر. وأظهرت هذه ‎of yl‏ مستويات لترسيب ‎AB‏ تكافئ تلك المستويات التي تلاحظ في مرض الزهيمر عندما بلغت من العمر خمسة عشر شهراً. وحقنت فئران ‎PDAPP‏ ب ‎AB,‏ متكتل أو بمحلول ملحي ‎Vo‏ منظم بالفوسفات ‎-phosphate buffered saline‏ وقد اختير ‎AB,‏ متكتل بسبب مقدرته على حث أجسام مضادة ضد مغيرات خواص متعددة ل ‎AB‏ ‏أ. الطرق ‎١‏ مصدر الفئران قسمت فئثران إناث مغايرة النسيلة ‎PDAPP‏ عددها ‎Ye‏ بشكل عشوائي إلى المجموعات التالية: ‎٠١‏ فئران حقنت ب ,8م متكتل (مات أحدهم عند النقل)؛ © فثران حقنت بمحلول منظم بالفوسفات (035)/مادة مساعدة أو ‎PBS‏ و ‎٠١‏ فئران ضابطة لم تحقن. وحقنت خمسة فئران بببتيدات ‎peptides‏ مشتقة من سياق بروتيني نشواني مصلي ‎(sap) sequence of serum amyloid protein‏ . ". تحضير مولدات مناعة vy ‏ملغم من 8842 (من شركة يو إس ببتيدز إنك‎ Youll ‏تحضير ,8م متكتل:‎ ١ ‏في 4 مل من الماء وأكمل الحجم إلى‎ (lot 142-12 ١7-4 ‏لوت كيه -؟‎ «US Peptides Inc dll ‏أضعاف. ودوّم هذا المحلول وحضن طوال‎ ٠١ ‏تركيزه‎ PBS ‏ملم من‎ ٠١,١ ‏مل بإضافة‎ ‏غير مستخدم في صورة‎ AB ‏م, حيث يكتل الببتيد عند هذه الظروف. وخزن أي‎ TY ‏عند‎ ‏7م إلى وقت الحقن التالي.‎ ١<- ‏عند‎ dry lyophilized powder ‏م مسحوق مجفد جاف‎ ‏تحضير محاليل الحقن‎ ." ‏ميكروغرام من 8842 متكتل في 785 لكل فأر بنسبة‎ ٠٠١ ‏لكل محلول حقن؛ استحلب‎ ‏إلى أن بلغ‎ (CFA) Complete Freund's adjuvant ‏باستخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة‎ ١ ‏من مولد المناعة‎ Jal ‏ميكرولتر للتمنيع الأول, ثم زيد نفس‎ for ‏الحجم النهائي للمستحلب‎ ‏خلال أسبوعين.‎ (IFA) Incomplete Freund's adjuvant ‏في مادة فرويند المساعدة غير الكاملة‎ Ve ‏على فترات شهرية. وأجريت التمنيعات اللاحقة على‎ TFA ‏وأعطيت جرعتان إضافيتان في‎ ‏وأعطيت محاليل الحقن داخل البريتون‎ PBS ‏ميكرولتر من‎ ٠٠0٠0 ‏فترات شهرية في‎ . (ip.) intraperitoneally ‏باتباع نفس الطريقة وحقنت الفئران بمزيج من‎ PBS ‏وحضرت محاليل حقن من‎ ‏بمقدار بلغ 50860 ميكرولتر لكل فأر, أو 90860 ميكرولتر من‎ ٠:١ ‏مساعدة بنسبة‎ 30LPBS . ١ ‏بإتباع نفس الطريقة باستخدام جرعة‎ SAP ‏حضرت محاليل الحقن من‎ (Bully. li JS) PBS ‏ميكروغرام لكل محلول حقن.‎ ٠٠١ ‏بلغت‎ ‏تحضير‎ Titration of Mouse Bleeds ‏؛. معايرة فار ينزف‎

Immunohistochemistry ‏وكيمياء الأنسجة المناعية‎ Tissue Preparation ‏أنسجة‎ ‏توصف الطرق المذكورة أعلاه فيما يلي في الطرق والمواد العامة.‎ Ye ‏ب. النتائج‎ ‏أو محلول ملحي‎ SAP peptides SAP ‏متكتل, ببتيدات‎ AB42 ‏ب‎ PDAPP ‏حقنت فئران‎ ‏كضوابط موجبة غير‎ PDAPP ‏وتركت كذلك مجموعة من فئران‎ phosphate ‏منظم بالفوسفات‎ 4842 ‏وروقبت عيارات الفثران بالنسبة إلى مقدار‎ .010[60160, positive controls ‏محقونة‎ ‏المتكتل كل شهر من الزيادة الرابعة إلى أن أصبح عمر الفثران سنة واحدة. وذبحت الفثران‎ ve yas

ل عندما أصبح عمرها ‎١“‏ شهراً. وعند كل النقاط الزمنية المختبرة؛ شكلت ثمانية فثران من الفئران التسع المحقونة ب 8842 متكتل عيار جسم مضاد عال, يبقى بتركيز عال, خلال سلسلة من عمليات الحقن (عيارات تزيد عن ‎.)٠٠٠٠١/١‏ وللفأر التاسع عيار منخفض, ولكن يمكن قياسه حيث بلغ ‎٠٠١‏ تقريباً (انظر الشكل ١؛‏ الجدول ‎.)١‏ وللفثران المحقونة م ب ‎SAPP‏ عيارات تتراوح من ‎٠٠٠١:١‏ إلى ‎Fave)‏ لمولد المناعة هذا مع تجاوز فأر واحد فقط عيار من ‎.٠٠٠٠٠٠:١‏ ‏وعويرت الفئران المعالجة ب ‎PBS‏ ضد 8842م متكتل عند الشهر السادس, العاشر والثاني عشر. وعند التخفيف بنسبة ‎٠٠١/١‏ لم تتجاوز الفئثران المعالجة ب ‎PBS‏ عندما عويرت ضد 8842 متكتل إلا ؛ أضعاف النقطة المرجعية عند نقطة بيانات واحدة, ومن ناحية أخرى كانت أقل بأربع أضعاف النقطة المرجعية لكل النقاط الزمنية (انظر الجدول ‎.)١‏ وكانت الاستجابة المتخصصة ب ‎SAP‏ مهملة عند النقاط الزمنية هذه لكل العيارات التي تقل عن ا

ولم تكشف سبعة فئران من الفئران التسع في المجموعة المعالجة ب 881-42 متكتل عن وجود مادة نشوانية في دماغها. وعلى النقيض من ذلك؛ تحتوي أنسجة الدماغ من فثران ‎Vo‏ في المجموعات المعالجة ب ‎SAP‏ و ‎PBS‏ على عدة رواسب نشوانية في حصان البحر ‎hippocampus‏ بالإضافة إلى القشرات الأمامية والمطوقة. وكان أسلوب الترسيب مماثلا لأسلوب الترسيب في الضوابط غير المعالجة, مع وجود مميز لمناطق تحتية حساسة ‎vulnerable subregions‏ مثل الطبقة الجزيئية الخارجية ‎outer molecular layer‏ لتلفيفة مسننة حصينية ‎-hippocampal dentate gyrus‏ ويمتلك أحد الفثران من المجموعة المحقونة © ب 8142م حملا ‎Gil pd‏ منخفضاً بدرجة كبيرة, محصور بحصان البحر. وميزت لويحة

معزولة ‎plaque‏ 15012160 في فأر معالج ب ‎AB1-42‏ آخر . وأثبتت التحاليل الصورية الكمية ‎quantitative image analyses‏ للحمل التشواني في حصان البحر انخفاضاً مفاجئاً حدث في الحيوانات المعالجة ب ‎(AN1792)‏ 8842 (انظر الشكل "). وكانت القيم المتوسطة للحمل النشواني للمجموعة ‎PBS‏ (77,77), وللمجموعة الضابطة ‎ve‏ غير المعالجة )7¥,70( أكبر بشكل ملحوظ من تلك القيم للحيوانات الممئئعة ب ‎AN1792‏ vo ‏وعلى النقيض من ذلك؛ كانت القيمة المتوسطة للمجموعة‎ (v0 e0 =p 7 ‏(صفر‎ ‏وقد احتوى نسيج دماغي من الفئران‎ .70,VE (SAPP) SAP peptides SAP ‏بببتيدات‎ dated ‏أحادي‎ 3D6 ‏عديدة ظهرت مع جسم مضاد‎ AB ‏الضابطة غير المعالجة على رواسب نشوانية‎ ‏في حصان البحر,‎ (mAb) AB-specific monoclonal antibody ‏النسيلة متخصسص ب 8م‎

Jai Jaa gl ‏وقد‎ .retrosplenial cortex ‏بالإضافة إلى وجودها في قشرة عضلة الطحال الخلفية‎ ‏وبالإضافة‎ .)١ ‏(انظر الشكل‎ PBS ‏أو‎ SAPP ‏لترسب نشواني كذلك في فئران ممنعة ب‎ Blea ‏إلى ذلك؛ لوحظ في المجموعات الثلاثة الأخيرة هذه وجود مميز لمناطق تحتية حساسة من‎ ‏الطبقة الجزيئية الخارجية للتلفيفة المسننة الحصينية في كل‎ Jie (AD ‏بشكل تقليدي في‎ § Ladd ‏من المجموعات الثلاثة هذه.‎ ‏خالية كذلك من اللويحات عصبية‎ AB ‏وكانت الأدمغة التي لا تحتوي على رواسب‎ ١ ‏البشري‎ APP ‏مع الجسم المضاد‎ PDAPP (J yi ‏التي تشاهد عادة في‎ neuritic plaques ‏الالتهاب‎ ‏وغير‎ PBS ‏و‎ SAP ‏وتحتوي كل الأدمغة من المجموعات المتبقية (الفثران المحقونة ب‎ .5 ‏غير‎ PDAPP ‏المحقونة) على لويحات عصبية الالتهاب عديدة مماثلة لتلك الموجودة في الفثران‎

JAN1792 ‏المعالجة. ووجد عدد قليل من لويحات عصبية الالتهاب في فأر واحد معالج ب‎ ‏في فأر ثان معالج‎ dystrophic neurites ‏ب ووجدت مجموعة منفردة من محاور عصبية سغلية‎ ‏ب 8201792. وتوضح التحاليل الصورية لحصان البحرء المبين في الشكل © الإزالة الفعلية‎ ‏بالمقارنة مع‎ (7 jbo = ‏(المتوسط‎ AN1792 ‏للمحاور العصبية السغلية في فئران معالجة ب‎ (+0000 =p ‏(المتوسط 7ت‎ PBS ‏حيوانات تلقت‎ ‏في الالتهاب‎ astrocytosis characteristic ‏ولم توجد كذلك خاصية تكثر الخلايا النجمية‎ ‏في أدمغة المجموعة المحقونة‎ plaque-associated inflammation ‏المقثترن بلويحة‎ +. ‏في المجموعات الأخرى على خلايا نجمية تحتوي‎ A ‏ب 8142م. واحتوت الأدمغة من‎ ‏وصبغت‎ AR ‏المقترن بلويحات‎ gliosis ‏بوفرة وعلى شكل عناقيد مماثلة للدباق‎ GFAP ‏على‎ ‏بشكل مضاد باستخدام ثيوفلافين إس‎ GFAP ‏مجموعة جزئية من الشرائح المتفاعلة مع‎

GFAP ‏وتقترن الخلايا النجمية التي تحتوي على‎ LAB ‏لتحديد موضع رواسب‎ Thioflavin § ‏وغير المعالجة. ولم يوجد اقتران من هذا‎ PBS ‏و‎ SAP ‏بلويحات 8ه في الضوابط المحقونة ب‎ ve yA ‏القبيل في الفئران المعالجة ب 881-42 والتي تخلو من اللويحات, في حين ميز أدتى دباق‎ ‏مقترن باللويحات في أحد الفئران المعالجة ب 151792م.‎ ‏وأثبتت التحاليل الصورية, المبينة في الشكل ؛ لقشرة عضلة الطحال الخلفية أن‎ ‏للفثران المعالجة‎ 7٠,597+ ‏بقيمة متوسطة بلغت‎ Tous ‏الاتخفاض في تكثر الخلايا النجمية كان‎

SAP peptides SAP ‏متوسطة تزيد عن 77 لمجموعات ممنعة بببتيدات‎ af ‏ب 2201792 مقابل‎ © (+r VY =p) ‏أو غير معالجة‎ PBS ‏أو ب‎ ‏تشير إلى‎ PBS ‏ولم توجد دلالة من مجموعة جزئية لفثران محقونة ب 881-42 و‎ ‏من الصنف 17 مقرونة بلويحات في الفئران المحقونة ب‎ MHC ‏تفاعلية مناعية لجزيئات‎

Ap ‏متعلقة ب‎ inflammatory response ‏81-2م, وهذا يتوافق مع الافتقار إلى استجابة التهابية‎ ‏متخصص بجسم مضاد وحيد النسيلة‎ mAb ‏وتفاعلت أقسام من أدمغة الفئران كذلك مع‎ ٠١

MAC-1 ‏ويعتبر‎ .cell surface protein ‏وهو بروتين على سطح الخلايا‎ , MAC-1 ‏متخصص ب‎ ‏مغاير‎ (SLE ‏ذات مستقبلات التصاق خلوي توجد في صورة مركب‎ Alle ‏عضو‎ (CDI11b) ‏ويتواجد متراكب من 0116© و 0018 على خلايا أحادية النواة‎ .CDIS ‏مع‎ heterodimer ‏وخلايا قاتلة‎ neutrophils ‏وخلايا متعادلة بيضاء‎ macrophages ‏وخلايا ملتهمة كبيرة‎ monocytes ‏ومن المحتمل أن تكون‎ (Simard ‏وسيمارد‎ Mak ‏(انظر ما جاء عن ماك‎ natural killer ‏طبيعية‎ 1s ‏يعتمد‎ microglia ‏الخلايا المتفاعلة مع 1080-1 الكامنة في الدماغ عبارة عن غراء عصبي دقيق‎

MAC-1 ‏مع 1-©10/8. وكان وسم‎ Lelia ‏على شكل نمط ظاهري متماثئل في الأقسام المتفاعلة‎ ‏مقارنة بالمجموعة الضابطة‎ AN1792 ‏المقترن باللويحات أقل من أدمغة فئران معالجة ب‎ ‏وكانت هذه النتيجة متوافقة مع الافتقار إلى استجابة التهابية مستحثة ب‎ PBS ‏المحقونة ب‎

AB Y. ‏ج. النتيجة‎ reactive neuronal changes ‏والتغيرات العصبية المتفاعلة‎ AB ‏ض يشير الافتقار إلى لويحات‎ ‏في أدمغة الفئران المحقونة ب 881-42 إلى أنه لم يحدث‎ gliotic changes ‏والتغيرات الغرائية‎

Sia ‏في أدمغتها, ولم تظهر العواقب المرضية,‎ Tan ‏ترسب نشواني أو حدث ترسب بشكل قليل‎ ‏المعالجبة‎ PDAPP ‏ومرض التهاب الأعصاب. وأظهرت الفئران‎ gliosis ‏مرض الدباق‎ Yo

لالا ب 8142م افتقاراً مماثلاً للمرض بصفة أساسية كفئران ضابطة غير محولة جينياً. ‎sls‏ على ذلك يعتبر الحقن ب 881-42 فغَّالاً بدرجة كبيرة في منع ترسب أو تنقية ‎AB‏ البشري من أنسجة الدماغ, وإزالة التغيرات الخلوية العصبية والتنكسية الالتهابية اللاحقة. وهكذاء يكون لإعطاء ببتيد ‎AB peptide AB‏ فائدة وقائية وعلاجية في ‎AD aie‏ ‎٠‏ 17. دراسة الاستجابة للجرعة متعت مجموعات من فثئران وبستر سويسرية ‎Swiss Webster‏ إناث, عمرها خمسة أسابيع ‎=N)‏ +7 لكل مجموعة) بإعطاء ‎Fe‏ يل ار لل لاا رار ره أو ‎CY‏ ‏ميكروغرام من ‎AB‏ مشكل في ‎IFA/CFA‏ داخل البريتون. وأعطيت ثلاث جرعات على فترة أسبوعين واتبعت بجرعة رابعة بعد ‎Hed‏ واحد. واستحلبت الجرعة الأولى باستخدام ‎CFA‏ ‏ا واستحلبت الجرعات المتبقية باستخدام ‎TFA‏ ونزفت الحيوانات لمدة ؛-7 أيام بعد كل تمنيع بدأ بعد الجرعة الثانية لقياس عيارات الجسم المضاد. ونزفت الحيوانات من مجموعة جزئية من المجموعات الثلاثة؛ التي منعت باستخدام ‎,١١‏ ,أو 060 ميكروغرام من المولد المضاد, بشكلٍ إضافي على فترات شهرية تقريباً لمدة أربعة أشهر بعد التمنيع الرابع لمراقبة انخفاض استجابة الجسم المضاد عبر مدى من جرعات من تراكيب مولدة للمناعة. وتلقت هذه ‎١‏ الحيوانات تمنيعاً خامساً نهائياً عند الشهر السابع بعد بدء الدراسة. وذبحت بعد أسبوع لقياس استجابات الأجسام المضادة ل ‎AN1792‏ ولإجراء تحاليل سمومية ‎-toxicological analyses‏ ولوحظ تضاؤل الاستجابة للجرعة من 060 إلى ‎VV‏ ميكروغرام بدون استجابة عند أقل جرعتين. وبلغ متوسط عيارات الأجسام المضادة نحو ‎٠٠٠١١:١‏ بعد * جرعات ونحو ‎٠٠٠١‏ بعد ؛ جرعات من ‎Age‏ مضاد بمقدار تراوح من ‎١١‏ إلى ‎Yer‏ ميكروغرام ‎Y.‏ (انظر الشكل #). وارتفعت عيارات الأجسام المضادة بشكل مفاجئ لكل المجموعات ولكن حدثت زيادة للمجموعة التي تلقت أقل جرعة بعد التمنيع الثالث تراوحت من * إلى ‎Yo‏ ضعف. ومن ثم أمكن تحديد الاستجابات المخفضة للجسم المضاد حتى للحيوانات التي تلقت جرعة بلغت ‎١,4‏ ميكروغرام. وللمجموعتين اللتين تلقت كل منهما جرعة بلغت ‎VV LY‏ ‎ve‏ ميكروغرام عيارات متساوية بقيمة 01475 بلغت نحو ‎٠٠٠١‏ وتجمعت أعلى أربع جرعات مع

YA

قيمة ل ‎GMTs‏ بلغت نحو ‎Youur‏ باستثناء المجموعة التي تلقت جرعة بلغت ؟؟ ميكروغرام مع قيمة أقل ل ‎GMT‏ بلغت ‎Fees‏ وبعد التمنيع الرابع؛ كانت زيادة العيار معتدلة لمعظم المجموعات. وتراوحت الاستجابة الواضحة للجرعة في المجموعات التي تلقت جرعات منخفضة من المولد المضاد تراوحت من ‎١,٠4‏ ميكروغرام إلى ‎١١‏ ميكروغرام من م جسم مضاد غير قابل للكشف لحيوانات تلقت جرعة بلغت ‎١,14‏ ميكروغرام إلى قيمة ل ‎٠٠٠١ Cals GMT‏ لحيوانات تلقت ‎de ja‏ بلغت ‎١١‏ ميكروغرام. وتجمعت العيارات للمجموعات التي تلقت أعلى أربع جرعات تراوحت من ‎١١‏ إلى ‎Yoo‏ ميكروغرام مع بعضها البعض مرةً أخرى. وهكذا؛ اعتمد عيار الجسم المضاد على جرعة المولد المضاد عبر مدى واسع من ‎١.4‏ إلى 7080 ميكروغرام بعد إجراء تمنيعين. وفي التمنيع الثالث؛ كانت العيارات ‎٠‏ الأعلى أربع جرعات متساوية وبقيت عند مستوى مستقر بعد تمنيع إضافي. وبعد شهر واحد من التمنيع الرابع؛ كانت العيارات أعلى بضعفين إلى ثلاثة أضعاف في المجموعة الممنعة التي تلقت جرعة بلغت ‎٠٠١‏ ميكروغرام من تلك المقاسة من دم سحب لمدة خمسة أيام بعد ‎andl‏ (انظر الشكل ‎L(V‏ وتبين من هذه الملاحظة أن استجابة الجسم المضاد المنبهة للذاكرة القصوى ‎peak anamnestic antibody response‏ حدثت بعد أكثر من © أيام بعد التمنيع. ولوحظت زيادة معتدلة بشكل أكبر ‎(Zo cial)‏ عند الفترة الزمنية هذه في المجموعة التي تلقت جرعة بلغت ‎YY‏ ميكروغرام. وفي المجموعة التي تلقت جرعة بلغت ‎Yoo‏ ميكروغرام لمدة شهرين بعد الجرعة الأخيرة؛ انخفضت قيم 014175 بدرجة كبيرة بنسبة بلغت نحو 770. وبعد شهر ‎aT‏ كان الانخفاض أقل حدة فقد كان بنسبة بلغت 7459 (للمجموعة التي تلقت جرعة بلغت ‎٠٠١‏ ميكروغرام) وبنسبة بلغت نحو ‎7٠4‏ للمجموعة التي © تلقت جرعة بلغت ‎TY‏ و١١‏ ميكروغرام. وهكذا تبين بأن معدل الاتخفاض في عيارات الأجسام المضادة الدائرة بعد وقف التمنيع كان ثنائي الطور ‎biphasic‏ مع انخفاض حاد في ‏الشهر الأول بعد الاستجابة القصوى ثم انخفاض بمعدل أكثر اعتدالاً. وكانت عيارات الأجسام المضادة وحركيات الاستجابة لفئران وبستر السويسرية ‎Swiss Webster‏ هذه مماثلة لتلك العيارات والحركيات للفئران الصغيرة المحولة جينياً ‎PDAPP‏ ‎AR‏ va

مغايرة الزيجوت والممنعة بأسلوب مماثل. وعادة ‎Bla‏ الجرعات الفعالة في حث استجابة

مناعية في بشر الجرعات الفعالة في الفثران.

1. فحص الفعالية العلاجية ضد ‎AD‏ الناتج

أجريت هذه المعايرة لفحص عوامل مولدة للمناعة ‎immunogenic agents‏ لقياس فعاليتها

‎So‏ وقف أو عكس خواص الأمراض العصبية ل ‎AD‏ في حيوانات مسنة. وبدأت التمنيحات

‏باستخدام ‎AB‏ طويل يحتوي على ‎(AN1792) amino acid Gis Laas £Y‏ عند نقطة زمنية

‏عندما توجد لويحات نشوانية في أدمغة الفثران ‎PDAPP‏ مسبقا.

‏وخلال الفترة الزمنية المستخدمة في هذه الدراسة؛ تظهر فئران ‎PDAPP‏ غير معالجة

‏عددآً من التغيرات الانحلالية العصبية ‎neurodegenerative changes‏ تشابه تلك الموجودة في ‎AD‏ ‎١‏ (انظر ما جاء عن جيمز ‎Games‏ ومعاونيه؛ في المرجع سابق الذكرء؛ وما ‎ela‏ عن

‎4 ‏المجالد‎ «Proc.

Natl.

Acad.

Sci.

USA ‏ومعاوتيه في مجلة‎ Johnson-Wood ‏جونسن-وود‎

‏ص 1000-1000 (1947)). ويقترن ترسب 88 على لويحات نشوانية باستجابة خلوية

‏عصبية انتكاسية ‎degenerative neuronal response‏ تتكون من محاور عصبية منحرفة

‎aberrant axonal‏ وعناصر متفرعة ‎dendritic elements‏ تسمى محاور عصبية سغلية. وتسمى ‎vo‏ الرواسب النشوانية المحيطة بالمحاور العصبية السغلية وتحتوي عليها لويحات عصبية

‏الالتهاب. وفي كل من الفتئران المصابة ب ‎AD‏ و ‎PDAPP‏ تكون المحاور العصبية السغلية

‏التي لها بنية كروية مميزة ‎distinctive globular structure‏ متفاعلة ‎Lelia‏ مع لوح من أجسام

‏مضادة يميز ‎APP‏ ومكونات هيكلية خلوية ‎cytoskeletal‏ وتظهر تغيرات انتكاسية خلوية تحتية

‎.ultrastructural level ‏معقدة عند المستوى البنيوي الفوقي‎ subcellular degenerative changes ‏وتأخذ هذه الخصائص بعين الاعتبار قياسات تشكل لويحة عصبية الالتهاب في أدمغة فثران‎ x.

‎PDAPP‏ وثيقة الصلة بالمرض وانتقائية ويمكن إعادتها. ويمكن رؤية المكون الخلوي العصبي

‏السغلي للويحات عصبية الالتهاب في ‎PDAPP‏ بسهولة باستخدام جسم مضاد متخصسص ب

‎APP‏ بشري (جسم مضاد وحيد النسيلة 885), ويمكن قياسه ‎Ase‏ عن طريق التحليل

‏الصوري بمساعدة الكمبيوتر. وبناءً على ذلك؛ بالإضافة إلى قياس تأثيرات ‎AN1792‏ على ‎ve‏ تشكل لويحات نشوانية؛ روقبت تأثيرات هذه المعالجة على نمو سغل عصبي الالتهاب.

A

‏وتعتبر الخلايا النجمية والغراء العصبي الدقيق خلايا غير عصبية تستجيب ل وتعكس‎ ‏وغراء عصبي دقيق‎ GFAP ‏درجة الإصابة العصبية. وعادة تلاحظ خلايا نجمية تحتوي على‎ ‏على‎ sly ‏ويزيد نشاطها بازدياد شدة المرض.‎ (AD (AT ‏من الصنف‎ MHC ‏يحتوي على‎ ‏ذلك روقبت كذلك زيادة تكثر الخلايا النجمية المتفاعلة وتشكل الدباق الدقيق في فئران معالجة‎ م0 ب ‎.AN1792‏ أ. المواد والطرق قسم 48 فأرآ من فئران ‎PDAPP‏ إناث مغايرة الزيجوت, عمرها تراوح من ‎١١‏ إلى شهرا ‎dual a‏ عليها من شارلز ريفر ‎Charles River‏ بشكل عشوائي إلى مجموعتين: ؛؟ فأر ينبغي تمنيعها ب ‎٠٠١‏ ميكروغرام من ‎AN1792‏ و4 7 فأر ينبغي تمنيعها ب ‎(PBS‏ ‎٠‏ ا واقترن كل منها بمادة فرويند المساعدة ‎Freund's adjuvant‏ وقسمت المجموعات الممنعة ب 2 و ‎PBS‏ مرة أخرى عندما أصبح عمرها ‎١١‏ شهرآً تقريباً. وعندما أصبح عمرها ‎١١‏ ‎Ted‏ قتل نصف كل من مجموعتي الحيوانات المعالجة ب ‎AN1792‏ و2385 ‎+=n)‏ )5 4 على الترتيب) ‎Lesa; SN Gy ji‏ واستمر الباقي من المجموعتين بتلقي جرعات المناعة إلى أن أصبح عمرها ‎VA‏ شهراً (ه<ة و ‎VY‏ على الترتيب). ومات ‎A‏ حيوانات (خمسة ممنتعة ب ‎٠‏ 2211792 وثلاثة ممنعة ‎(PBS‏ أثناء الدراسة. وبالإضافة إلى الحيوانات الممنعة؛ فقد استخدمت ‎PDAPP (Ji‏ غير معالجة أعمارها سنة واحدة ‎)٠١<:(‏ و ‎١١‏ شهراً (د<١٠)‏ و ‎)٠١<#( Tog VA‏ للمقارنة في المعايرات الإشرابية المناعية المرتبطة بإنزيم ‎(ELISAs) enzyme-linked immunosorbent assays‏ لقياس مستويات ‎AB‏ و ‎APP‏ في الدماغ؛ وأدمجت الحيوانات التي عمرها سنة واحدة كذلك في التحاليل الكيميائية النسيجية المناعية. ‎Y.‏ والطريقة المستخدمة هي كما في المثال ‎١‏ ما لم يذكر خلاف ذلك. واستخدمت ببتيدات يو أس لوت ‎US Peptides Tot 12 VY‏ وببتيدات من كاليفورنيا لوت ‎ME0339‏ ‎California Peptides lot ME0339‏ ل ‎AN1792‏ لتحضير المولد المضاد لست تمنيعات تعطى قبل أن تبلغ ‎of Jill‏ عمر ‎V0‏ شهراً. واستخدمت ببتيدات من كاليفورنيا لوتز 1480339 و 1180439 ‎California Peptides lots ME0339 and ME0439‏ للتمنيعات الإضافية ‎COA)‏ التي تعطى للفئران ‎vo‏ بين عمر ‎١١‏ و ‎VA‏ شهراً.

لم ولإجراء التمنيع؛ استحلب ‎٠٠١‏ ميكروغرام من 4311792 في ‎٠٠١‏ ميكرولتر من أو ‎PBS‏ لوحده بنسبة ‎٠:١‏ (حجم:حجم) باستخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة ‎(CFA)‏ أو مادة فرويند المساعدة غير الكاملة ‎(IFA)‏ أو 285 في حجم نهائي بلغ ‎fer‏ ميكرولتر. وأعطيت جرعة التمنيع الأولى مع ‎CFA‏ بصفتها مادة مساعدة؛ وأعطيت الجرعات الأربعة م اللاحقة مع ‎FA‏ وأعطيت الجرعات الأربعة النهائية مع ‎PBS‏ وحده بدون إضافة مادة مساعدة. وأعطيت كل جرعات التمنيع التسعة خلال فترة زمنية بلغت ‎١7‏ أشهر بحيث أعطيت الجرعات الثلاثة الأولى لمدة أسبوعين ثم أعطيت الحقن المتبقية لمدة أربعة أسابيع. وتلقت المجموعة المعالجة لمدة ؛ أشهر, والتي قتلت عندما أصبح عمرها 10 شهرا ‎Taga) SN‏ التمنيعات الست الأولى فقط. ‎٠١‏ ب. النتائج ‎١‏ تأثيرات المعالجة ب ‎AN1792‏ على الحمل النشواني تبين نتائج المعالجة ب ‎AN1792‏ على الحمل النشواني القشري المحدد بالتحليل الصوري الكمي في الشكل 7. وكانت القيمة المتوسطة للحمل النشواني القشري 700748 في مجموعة من ‎PDAPP (J i‏ عمرها ‎Ted VY‏ غير معالجة؛ وهي قيمة تمثل حمل اللويحة في ‎ve‏ فئران عند بدء الدراسة. وعند ‎VA‏ شهراً؛ زاد الحمل النشواني بمقدار ‎١١‏ ضعف إلى 4,87 / في فئران معالجة ب ‎PBS‏ في حين كان للفئران المعالجة ب ‎AN1792‏ حملا نشوانياً منخفضاً بدرجةٍ كبيرة بلغ 70,01 فقط, وعلى الخصوص أقل من ذلك للفئران غير المعالجة التي بلغ عمرها ‎VY‏ شهراً ومجموعتي الفئران المعالجتين ب ‎PBS‏ التي بلغت أعمارها ‎١#‏ و ‎VA‏ ‏شهراً. وقد انخفض الحمل النشواني بدرجة كبيرة في حيوانات تلقت ‎AN1792‏ عند ‎V0‏ شهرا ‎٠»‏ (انخفاض بنسبة 17 ‎=p‏ 07..) و ‎١8‏ شهرا (انخفاض بنسبة تزيد عن 754 محا ...). ‎sale‏ يبدأ الترسب ‎i sal‏ القشفري في فئشران ‎PDAPP‏ في القشرات الأمامية وقشرات عضلة الطحال الخلفية ‎(RSC)‏ ويمتد في الاتجاه البطني الجانبي ‎Jad ventral-lateral direction‏ القشرات الصدغية ‎temporal cortices‏ والقشرات

AY

‎Jala‏ الأنف ‎(EC) entorhinal cortices‏ وقد وجد مقدار قليل من المادة النشوانية في ‎EC‏ أو لم ‏يوجد أي مقدار منها في ‎JAN‏ التي عمرها ‎cf gd ١١‏ وهو العمر التقريبي الذي أعطي عنده 2 أولا. وبعد ؛ أشهر من المعالجة ب ‎CAN1792‏ انخفض الترسب النشواني في ‎RSC‏ ‏بدرجة كبيرة, وأزيل وجود الراسب النشواني المتزايد في ‎EC‏ بشكل ‎IS‏ عن طريق المعالجة ‏م ب ‎LANIT792‏ وبينت الملاحظة الأخيرة أن 2241792 يوقف تزايد المادة النشوائية الذي يغزو ‎RSC ‏القشرات الصدغية والبطنية؛ بالإضافة إلى وقف أو يمكن عكس الترسب في‎ sale ‏وتوضح التأثيرات العميقة للمعالجة ب ‎AN1792‏ على تشكل حمل نشواني قشري في ‎PDAPP J il‏ بشكل إضافي عن طريق المجموعة التي عمرها ‎VA‏ شهراً, والتي عولجت ‏لمدة ‎١‏ أشهر. وكان هنالك عدم وجود كلي تقريباً للمادة النشوانية القشرية في الفأر المعالج ‎١‏ ب ‎,AN1792‏ مع افتقار كلي للويحات المنتشرة, بالإضافة إلى اتخفاض في الرواسب المدمجة. ". تغيرات خلوية وشكلية مقترنة بالمعالجبة ب ‎AN1792‏ ‎AN1792 Treatment-associated Cellular and Morphological changes ‏وجد عدد من الخلايا التي تحتوي على ‎AB-positive cells AB‏ في مناطق الدماغ ‎Jag ale ‏وبشكل‎ amyloid deposits dul gli ‏التي تحتوي عادة على رواسب‎ brain regions ‎Jaa ALI extracellular cortical amyloid plaques ‏وجدت لويحات نشوانية قشرية خارج الخلية‎ Vo ‏وتبين أن معظم التفاعلية المناعية‎ LAN1792 ‏أو لم توجد نهائياً في عدة أدمغة لحيوانات تلقت‎ ‏أو أجسام‎ lobular soma Araya ‏موجودة في خلايا ذات أجسام‎ AB ‏ل‎ immunoreactivity ‏متكتلة ‎clumped soma‏ كبيرة. وفيما يتعلق بالنمط الظاهري؛ كانت هذه الخلايا متشابهة مع ‏الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة ‎microglia‏ المنشطة أو الخلايا أحادية النواة ‎monocytes‏ ‎ligands ‏ربيطات‎ ¥ 143 antibodies ‏المنشطة. واعتبرت فعالة مناعياً مع أجسام مضادة‎ Y. ‏من‎ MHC ‏عنها خلايا أحادية النواة وخلايا غرائية عصبية دقيقة منشطة (جزيثات‎ ws ‘blood vessels ‏الصنف 7 و 00115) وكانت عادة مقترنة بجدار أو تجويف أوعية الدم‎

MHC ‏وأجسام مضادة متخصصة ب‎ AB ‏وأظهرت مقارنة أجزاء مجاورة تقريباً موسومة ب‎ ‏أنه قد ميزت أنماط مماثلة لهذه الخلايا عن طريق‎ MHC II-specific antibodies Y ‏من الصنف‎ ‏أن الخلايا التي‎ AN1792 ‏صنفي الأجسام المضادة. وأظهر فحص مفصل لأدمغة معالجة ب‎ vo ‎va4q

AY

‏محصورة بجوار المادة النشضوائية‎ MHC H-positive cells ¥ ‏من الصنف‎ MHC ‏تحتوي على‎ ‏المحددة المتبقية في هذه الحيوانات. وفي الظروف الثابتة المستخدمة؛ لم تكن الخلايا فعالة‎ «CD45RA) B ‏أر خلايا‎ (CD3e «CD3) T ‏مع أجسام مضادة تميز ربيطات خلايا‎ Lelia ‏(6045)؛ ولكنها‎ leukocyte common antigen ‏مشترك لخلايا بيضاء‎ alias Al ga ‏أو‎ (CD4SRB ‏يتفاعل بشكل‎ (CD43) leukosialin ‏كانت فعالة مع جسم مضاد يميز سيالين الخلايا البيضاء‎ ٠ ‏تبادلي مع خلايا أحادية النواة. ولم توجد خلايا من هذا القبيل في أي من الفئران المعالجة ب‎ .PBS ‏بشكل ثابت في‎ heavy amyloid deposition ‏ترسب نشواني شديد‎ PDAPP ‏فئران‎ ii hippocampal ‏للتلفيفة المسننة الحصينية‎ outer molecular layer ‏الطبقة الجزيئية الخارجية‎ ‏وهي‎ «perforant pathway ‏مميزآ في المسار المتقوب‎ Und ‏ويشكل الترسب‎ dentate gyrus ٠١ ‏ويمائل المظهر المميز‎ AD ‏على لويحات نشوانية في‎ sole ‏تحتوي‎ subregion ‏منطقة تحتية‎ ‏غير‎ PDAPP ‏في فثران‎ (ue ‏ذلك المظهر المميز‎ PBS ‏لهذه الرواسب في الفئران المعالجة ب‎ diffuse and compacted ‏المعالجة. ويتكون الترسب النشواني من لويحات منتشسرة ومدمجة‎ ‏هذا النمط على‎ Jae ‏وعلى النقيض من ذلك؛‎ continuous band ‏في شريط متواصل‎ 65 ‏ولم يعد الترسب النشواني‎ LANTT92 ‏نحو شديد جدآً في عدد من أدمغة فئران معالجة ب‎ ١ ‏كلياً.‎ banded pattern ‏الحصيني يحتوي على مادة نشوانية منتشرة؛ ومزق النمط الشريطي‎ ‏غير اعتيادية متفاعلة مع أجسام‎ punctate structures ‏من ذلك؛ وجد عدد من بنيات مثقبة‎ Yau, amyloid- ‏وقد تبين أن العديد منها عبارة عن خلايا تحتوي على مادة نشوانية‎ AB ‏مضادة ل‎ .containing cells ‏من الصنف ¥ بجوار المادة‎ MHC ‏ولوحظت عادةٌ الخلايا التي تحتوي على جزيئات‎ 7 ‏وكان نمط اقتران الخلايا التي‎ LANT792 ‏خارج الخلايا في الحيوانات المعالجة ب‎ dl ‏جدآ في أدمغة عديدة مأخوذة من فئران معالجة ب‎ Slee ‏مع المادة النشوانية‎ AB ‏تحتوي على‎ ‏هذه بالقرب من المادة الشوانية‎ monocytic cells ‏وقيد توزيع الخلايا أحادية النواة‎ .2 ‏وكشفت‎ AR ‏في مناطق دماغية أخرى خالية من لويحات‎ LIS ‏المترسبة وكان غير موجود‎

AL

‏من‎ MHC ‏عن أجزاء موسومة ب‎ confocal microscopy ‏الدراسة المجهرية متحدة البؤر‎ ‏اللويحة موجودة ضمن العديد من الخلايا أحادية النواة.‎ Bale ‏أن‎ AB ‏الصنف ؟ وب‎ ‏لأجزاء موسومة ب‎ quantitative image analysis ‏وكشف التحليل الصوري الكمي‎

RSC ‏عن الميل نحو تفاعلية مناعية متزايدة في‎ ١ ‏من الصنف‎ MAC ‏من الصنف ؟ و‎ MHC ‏التي‎ PBS ‏م وحصان البحر للفئران المعالجة ب 8211792 بالمقارنة مع المجموعة المعالجة ب‎ ‏نالت أهمية بقياس تفاعلية 1482-1 في حصان البحر.‎ ‏للمادة‎ active, cell-mediated clearance ‏وتشير هذه النتائج إلى تنقية فعالة تسببها الخلايا‎ plaque-bearing brain ‏الموجودة في المناطق الدماغية التي تحتوي على لويحات‎ Af sil regions

ELISA ‏المقادير المحددة عن طريق‎ AR ‏على مستويات‎ AN1792 ‏تأثيرات‎ .” ١ 3.AN1792 Effects on APB Levels: ELISA Determinations

Cortical Levels ‏المستويات القشرية‎ 0 ‏الكلي‎ AB ‏لمقدار‎ median level ‏غير معالجة؛ بلغ المستوى المتوسط‎ PDAPP ‏في فئران‎ ‏وقد زاد إلى‎ cnanogram/gram (ng/g) ‏ناتوغرام/غرام‎ ٠6٠١ ‏شهراً‎ ١١ ‏في القشرة عند عمر‎

VA ‏وعند عمر‎ .)١ ‏شهراً (انظر الجدول‎ ١١ ‏نانوغرام/غرام عندما أصبح عمرها‎ ٠ ‏أضعاف أثناء الفترة‎ ٠١ ‏شهراً؛ بلغت القيمة 77068 نانوغرام/غرام» وهي زيادة بما يزيد عن‎ ‏على مقدار كلي من 8م بلغ‎ PBS ‏الزمنية لسير التجربة. واحتوت الحيوانات المعالجة ب‎ ‏نانوغرام/غرام عندما أصبح‎ ١90٠06 ‏شهرآً وقد زاد إلى‎ ١١ ‏نانوغرام/غرام عند عمر‎ 5 ‏على‎ AN1792 ‏شهرا. وعلى النقيض من ذلك؛ فقد احتوت الحيوانات المعالجة ب‎ VA ‏عمرها‎ ‏نانوغرام/غرام) بالمقارنة مع‎ ٠٠٠١( ‏شهراً‎ ١5 ‏أقل بنسبة 7481 عند عمر‎ AB ‏من‎ JS ‏مقدار‎ x. ‏ولوحظ انخفاض كبير (مج01٠500٠) في‎ .PBS-immunized group PBS ‏المجموعة الممنعة ب‎ ‏عندما قورنت المجموعات‎ Ted VA jee ‏نانوغرام/غرام) عند‎ ©٠٠١( ‏مقدار م.م الكلي‎ ‏هذا وجود؛ بطريقة أخرى؛‎ JT ay oY ‏(انظر الجدول‎ PBS 5 AN1792 ‏المعالجة ب‎ ‏وحصل على نتائج مماثلة عندما قورنت المستويات القشرية ل‎ (AB ‏في‎ AVY ‏انخفاض بنسبة‎ ‏842م؛ وبالتحديد احتواء المجموعة المعالجة ب 8211792 على 8842 بمقدار أقل بكثير» ولكن‎ vo

As ‏في هذه الحالة كبيرة عند الشهر‎ PBS 5 AN1792 ‏كانت )8 35( بين المجموعات المعالجة ب‎ .)١ ‏والشهر الثامن عشر (م-<٠0.000؛ انظر الجدول‎ (v0 £7p) ‏الخامس عشر‎ ‏(نانوغرام/غرام) في القشرة‎ AB ‏الجدول ؟: مستويات متوسطة ل‎

AN1792 ‏حيوانات معالجة ب‎ PBS ‏حيوانات غير معالجة حيوانات معالجة ب‎ ‏)م‎ AB42 يلكلا‎ 8 (n) 842 ‏8د الكلي‎ )«( 842 ASH AR | ‏العمصر‎ ‎)١( ‏م‎ ٠٠٠ ١" (0 ( "VY. 1 6 ‏.لال‎ Alen ( ٠( ‏كم‎ AY + Vo (1) ‏لني.:*ع‎ *roX.. (VY) "6 ‏در ال ال‎ YYYLL VA

EY Y=p *

Cyeaa =p rE °

Hippocampal Levels ‏المستويات الحصينية‎ (<) ‏غير معالجة؛ كانت المستويات الحصينيسة المتوسطة‎ PDAPP ‏في فكران‎ ‏نانوغرام/إغرام‎ ١٠٠٠٠١ ‏شهراً‎ VY ‏الكلي عند عمر‎ AB ‏لمقدار‎ median hippocampal levels 80٠٠٠ ‏شهراً وزادت كذلك إلى‎ ١# ‏نانوغرام/غرام عند عمر‎ ©٠٠٠١ ‏وزادت إلى‎ ‏(انظر الجدول ©) . وبالمثل؛ أظهرت الفثئران الممنعة‎ Ted VA ‏تانوغرام/غرام عند عمر‎ ٠

Vo ‏بلغت 560800 نانوغرام/غرام و 15080860 نانوغرام/غرام عند عمر‎ Lad PBS ‏ب‎ ‎AN1792 AN1792 ‏شهراً على الترتيب. وأظطهرت الحيوانات الممنعة ب‎ VA ‏شهرآً و‎ ‏وبصفة خاصة 19000 تنانوغرام/إغرام‎ AB ‏مقداراً كليا أقل من‎ immunized animals ‏شهراً على الترتيب. وكانت قيمة‎ YA ‏شهراً و‎ ١5 ‏نانوغرام/غرام عند عمر‎ 0٠٠٠١و‎ ‏شهرآً أقل بكثير من تلك القيمة المجموعة‎ VA ‏عند عمر‎ AN1792 ‏المجموعة المعالجة ب‎ ١ ‏نفس النمط من‎ AB42 ‏(م-0.0005؛ انظر الجدول “) . وأعطى قياس‎ PBS ‏المعالجة ب‎ ‏النتائج؛ وبالتحديد كانت المستويات في المجموعة المعالجة ب 8211792 أقل بكثير من تلك‎ 51000 ‏نانوغرام/إغرام مقابل‎ 7900٠0( PBS ‏المستويات في المجموعة المعالجة ب‎ ‏شهرا (انظر‎ VA ‏نانوغرام/غرام على الترتيب؛ م-0.007) وقيمت عندما قيست عند عمر‎ .)" ‏الجدول‎ - ٠

لم الجدول “: مستويات متوسطة ل ‎AR‏ (نانوغرام/غرام) في حصان ‎A‏ ‏حيوانات غير معالجة حيوانات معالجة ب ‎PBS‏ حيوانات معالجة ب ‎AN1792‏ ‏العمر | 8 الكلي | 842 ‎(n)‏ 8ه الكلي | 0842م | () 8 الكلي 2م ‎(n)‏ ‎)٠١( ٠ Yoo... VY‏ ‎YYY.

Yio. (3) Yyov. ٠٠١ )٠١( 66 ovo.

Vo‏ )+( ‎*oud. (VY) ov). Totes (V4) TEY.

AAs VA‏ انلحم () ‎ve Yeo =p *‏ ‎vee YY=p **‏ ° )==( المستويات المخيخية ‎Cerebellar Levels‏ في فثئران ‎PDAPP‏ غير معالجة عمرها ‎١١‏ شهرآء كان المستوى المتوسط المخيخي ‎median cerebellar level‏ لمقدار ‎AB‏ الكلي ‎١5‏ نانوغرام/غرام (انظر الجدول ؛) . وعند عمر ‎٠‏ شهرآء زاد هذا المستوى المتوسط إلى ‎YA‏ نانوغرام/غرام وارتفع إلى ‎Yo‏ نانوغرام/غرام عند عمر ‎Ted ١8‏ وأظهرت الحيوانات المعالجة ب ‎PBS‏ قيم ‎AB‏ كلية متوسطة بلغت ‎YY‏ ‏نانوغرام/غرام عند عمر ‎V0‏ شهراً و 47 نانوغرام/غرام عند عمر ‎YA‏ شهراً. ووجد أن للحيوانات المعالجة ب 28011792 ‎GIST ate‏ من ‎AB‏ بلغ ‎YY‏ نانوغرام/غرام عند عمر ‎Vo‏ ‎LST loins [ye‏ من ‎AB‏ أقل بشكل كبير ‎(oye Y=p)‏ عند عمر ‎VA‏ شهرا ‎Yo)‏ ‏نانوغرام/غرام) من المجموعة المعالجة ب ‎PBS‏ المقابلة (انظر الجدول 4) . الجدول ؛: مستويات متوسطة ل ‎AR‏ (نانوغرام/غرام) في المخيخ حيوانات غير معالجة حيوانات معالجة ب ‎PBS‏ حيوانات معالجة ب ‎AN1792‏ ‎AB 0 GUAR ed‏ الكلي ‎(m)‏ 8ه الكلي ‎(n)‏ ‎VY‏ 1 )0( ‎(V+) YH), (2) YA (+) Yv,v Vo‏ ‎*Y ELA (OY) £Y,) (+) Yo, VA‏ )3( ‎ov YA=p * Vo‏ ‎vaq‏

AY

APP ‏مستويات‎ de AN1792 ‏؛. تأشثيرات المعالجة ب‎

Effects of AN1792 Treatment on APP Levels full-length APP molecule ‏كامل الطول‎ APP ‏والجزيء‎ APP-ot ‏يحتوي كل جزيء‎ ‏أو جزء منه وبذلك من المحتمل أن يدمجا عن طريق تولد استجابة مناعية‎ AB ‏على كل سياق‎ ‏ل©2271792-421601. 5 5 8 للدراسات التي أجريت حتى‎ immune response AN1792 ‏موجهة ب‎ 5 ‏كما حدثت زيادة في الأمراض العصبية‎ APP ‏لوحظت زيادة طفيفة في مستويات‎ oY) ‏وفي القشرة؛ لم تتغيسر مستويات الجبزيء‎ .PDAPP ‏في الفأر‎ neuropathology ‏انخفقض‎ APP-a ‏(كامل الطول) بصفة أساسية بالمعالجة باستثناء أن‎ APP ‏«-<طم/الجزيء‎ ‏مقابل المجموعة‎ AN1792 ‏ب‎ A allel ‏شهراً في المجموعة‎ YA ‏بنسبة 719 عند عمر‎

Ted YA jee ‏عند‎ AN1792 ‏للمجموعة المعالجة ب‎ APP ‏قيم‎ alias ‏ولم‎ PBS ‏المعالجة ب‎ Ve ‏شهراً والمجموعات‎ ١5 ‏و‎ ١" ‏بشكل كبير عن تلك القيم للمجموعات غير المعالجة عند عمر‎ ‏ضمن الأمداء التي‎ APP a ‏شهراً. وفي كل الحالات بقيت‎ ١١ ‏عند عمر‎ PBS ‏المعالجة ب‎

PDAPP ‏توجد عادة في فثران‎ ‏تأثيرات المعالجة ب 801792 على الانتكاس العصبي والمرض الغرائي العصبي‎ Lo

Effects of AN1792 Treatment on Neurodegenerative and Gliotic Pathology ١ ‏بشكل كبير في القشرة‎ neuritic plaque ‏انخفض حمل اللويحات عصبية الالتهاب‎

PBS ‏بالمقارنة مع المجموعة المعالجة ب‎ AN1792 ‏لفئثران معالجة ب‎ frontal cortex ‏الأمامية‎ ‏(نسبة الانخفاض‎ Hed VA ‏و‎ )٠,١7<م‎ /AE ‏(نسبة الانخفاض بلغت‎ Tied Vo ‏عند عمر‎ ‏وقد ازدادت القيمة المتوسطة لحمل اللويحات‎ [A ‏[انظر الشكل‎ (+, 0) =p ‏بلغت 755؛‎ ‏عند عمر يتراوح‎ PBS ‏عصبية الالتهاب من 70,77 إلى 70,49 في المجموعة المعالجة ب‎ © ‏شهراً. وهذا يتناقض مع الإنتاج المنخفض بدرجة كبيرة للويحات عصبية‎ VA ‏و‎ ١١ ‏بين‎ ‏مع قيم متوسطة لحمل لويحات عصبية الالتهاب‎ (AN1792 ‏الالتهاب في المجموعة المعالجة ب‎ ‏على‎ Ted VA ‏و‎ ١9 ‏تتراوح بين 750,06 و 70,77 في المجموعات التي عمرها بين‎ ‏الترتيب.‎

AA

‏وانخفض تكثر‎ Tas ‏محتملة‎ AN1792 ‏ب‎ immunizations ‏وقد ظهر أن التمنيعات‎ ‏عند‎ AN1792 ‏للفئران المعالجة ب‎ RSC ‏المتفاعلة بدرجة كبيرة في‎ astrocytosis ‏الخلايا النجمية‎ 70% ‏شهراً (انخفاض بنسبة‎ ١١5 ‏عند العمرين‎ PBS ‏مقارنتها بالمجموعة المعالجة ب‎ ‏الشكل 3( وقد زادت‎ pla) (v0 YASp ‏شهرا (انخفاض بنسبة 779؛‎ YA ‏و‎ (+, 0) Vp ‏بين‎ PBS ‏القيم المتوسطة للنسبة المئوية لتكثر الخلايا النجمية في المجموعة المعالجة ب‎ ٠ ‏على كبح‎ AN1792 ‏وعملت المعالجة ب‎ .78,7١ ‏شهراً من 77,؛7 إلى‎ VA ‏و‎ ١١ ‏العمرين‎ ‏زيادة تكثر الخلايا النجمية عند كلا العمرين إلى 71,89 و 77,7 على الترتيب. وهذا يقترح‎ clearance process ‏بعملية التنقية‎ neuropil ‏عدم تلف الشبكة العصبية اللبادية‎

Antibody Responses ‏استجابات الأجسام المضادة‎ JY heterozygous PDAPP mice ‏مغايرة الزيجوت‎ PDAPP ‏تلقت فئران‎ (ode ‏وكما وصف‎ ١ migrogram (ug) ‏ميكروغرام‎ ٠٠١ ‏سلسلة من © تمنيعات بمقدار‎ (YE=N) Ted ١١ ‏عمرها‎ ‏وأعطيت الجرعات‎ Freund's adjuvant ‏مستحلب باستخدام مادة فرويند المساعدة‎ AN1792 ‏من‎ ‏أسبوعاء‎ VY 5A ‏4؛‎ oY ‏على فترات أسبوعية عند صفر؛‎ intraperitoneally ‏البريتون‎ Jala ‏وكمادة‎ .٠١ ‏لوحده (بدون مادة فرويند المساعدة) عند الأسبوع‎ PBS ‏وأعطيت ستة تمنيعات ب‎ a jac ‏متوافقة‎ Lia ‏تلقت مجموعة مناظرة من فئران محولة‎ negative control ‏ضابطة سلبية‎ ‏مستحلب باستخدام نفس المواد‎ PBS ‏تمنيعات من‎ 24 age-matched transgenic mice ‏؛؟ شهراً‎ ‏المساعدة وأعطيت بنفس المواعيد. ونزفت الحيوانات خلال ثلاثة إلى سبعة أيام بعد كل تمنيع‎ .51158 ‏عن طريق‎ AN1792 ‏بدأ بعد الجرعة الثانية. وقيست استجابات الجسم المضاد ل‎ ‏للحيوانات الممنعة ب‎ Geometric mean titers (GMT) ‏وبلغ المتوسط الهندسي للعيارات‎ ‏والثالثة والأخيرة (السادسة)‎ Aull ‏تقريباآً بعد الجرعات‎ ©080١ ‏و‎ 206 1100 2 ٠ ‏على الترتيب. ولم يقس أي جسم مضاد متخصص ب 8م في حيوانات ضابطة بعد التمنيع‎ ‏السادس.‎ ‎YE 07١0 ‏بتلقيها تمنيعات عند‎ os jal ‏وعولج نصف الحيوانات تقريباً لمدة ثلاثة أشهر‎ ‏لوحده بدون مادة فرويند‎ PBS ‏تقريباً. وأعطيت كل من هذه الجرعات في ناقل‎ te gud YY ‏و‎ ‏خلال الفقرة‎ Wl mean antibody titers ‏المساعدة. وبقي متوسط عيارات الأجسام المضادة‎ #٠

كم الزمنية هذه. وفي الحقيقة؛ فقد ظهر أن عيارات الأجسام المضادة بقيت ثابتة من النزيف الرابع إلى الثامن مقابل فترة زمنية شملت الحقنة الخامسة إلى التاسعة. ولتحديد ‎Lad‏ إذا اقترنت الأجسام المضادة المتخصصة ب 8م كذلك والناتجة عن طريق التمنيع والمكشوفة في أمصال الفئران المعالجة ب ‎AN1792‏ مع المادة التنشوانية © المترسبة في الدماغ؛ تفاعلت مجموعة جزئية من أجزاء الفثران المعالجة ب ‎AN1792‏ و ‎PBS‏ ‏مع جسم مضاد متخصص ب ‎IgG‏ فأري. وبخلاف المجموعة المعالجة ب ‎(PBS‏ فقد غلفت لويحات ‎AB‏ أدمغة الفثران المعالجة ب ‎AN1792‏ ب 150 داخلي المنشا ‎.endogenous IgG‏ وقد لوحظ هذا الفرق بين المجموعتين في كل من المجموعتين عند عمر 510 ‎VA‏ شهراً. ومما يلفت الانتباه بصفة خاصة الافتقار إلى الوسم في المجموعة المعالجة ب ‎PBS‏ بالرغم من ‎٠‏ وجود حمل مادة نشوانية كبير في هذه الفئكران. وتبين هذه النتائج أن التمنيع ببروتين ‎AB‏ تخليقي ‎synthetic AB protein‏ يولد أجساماً مضادة تميز وترتبط في الجسم الحي ب ‎BAB‏ ‏اللويحات النشوانية. ‎.V‏ استجابات مناعية تسببها الخلايا ‎Cellular-Mediated Immune Responses‏ أزبلت طحالات ‎spleens‏ من 4 فئران ‎PDAPP‏ ممنعة ب ‎AN1792‏ و ‎١١‏ فأر ‎PDAPP‏ ‎١‏ ممنعة ب ‎PBS‏ تبلغ من العمر ‎١8‏ شهرآ لمدة 7 أيام بعد التمنيع التاسع. وعزلت خلايا طحالية ‎splenocytes‏ وزرعت لمدة ‎VY‏ ساعة في وجود ‎APA2 (ABAD‏ أو 8840-1 (بروتين ذو ترتيب معكوس ‎٠ (reverse order protein‏ ويعمل مسبب الانقسام الفتيلي ‎mitogen‏ وهو ‎Con‏ كضابط إيجابي ‎positive control‏ وحصل على الاستجابات المتلى باستخدام بروتين بتركيز يزيد عن ‎١‏ ميكرو جزيئي. وتشعبت الخلايا من كل الحيوانات التسع المعالجة ب ‎AN1792‏ استجابة © ا لبروتين 801-40 أو 801-42 مع مستويات متساوية لدمج البروتينين (انظر الشكل ١٠؛‏ اللوحة العلوية). ولم تكن هنالك استجابة للبروتين العكسي 8840-1. ولم تستجيب الخلايا من الحيوانات الضابطة لأي من بروتينات ‎AB‏ (انظر الشكل ‎٠١‏ اللوحة السفلية). ج. النتيجة تبين نتائج هذه الدراسة أن التمنيع ب ‎AN1792‏ لفثران ‎ABS PDAPP‏ رواسب نشوائية ‎amyloid deposits Yo‏ يبطئ ويمنع الترسب النشواني المتزايد ويعيق التغيرات المرضية العصبية a. ‏بصفة أساسية‎ AN1792 ‏مسنتة. وتوقف التمنيعات ب‎ PDAPP (J) J ‏المتعاقبة في دماغ‎ ‏وهكذاء يكون‎ amyloidosis ‏تزايد المادة النشوانية في بنيات تخضع عادة للداء النشواني‎

AD ‏فائدة علاجية في معالجة‎ AB ‏لإعطاء ببتيد‎

Screen Of AB Fragments Ap ‏فحص شدفات‎ .7 ‏بتسع مناطق‎ Ted ١١-9 ‏وعمرها تراوح من‎ ٠٠١ ‏عددها‎ PDAPP ‏معت فثئران‎ 5 ‏ينقل الاستجابة الفعالة.‎ epitopes ‏لتحديد أي من مغيرات الخاصية‎ AR ‏و‎ APP ‏مختلفة من‎ ‏مناعة ضابط داخل البريتون كما‎ al gay ‏التسع المختلفة‎ immunogens ‏وحقنت مولدات المناعة‎ ‏بشري‎ AB ‏من ببتيد‎ conjugates ‏وصف أعلاه. وتشمل مولدات المناعة أربعة مركبات اقترانية‎ ‏مضاد لفأر ومأخوذ من خراف‎ IgG ‏وجميعها تقترن ب‎ ؛٠-١‎ 1-١7 (YASYY (VY) ‏وهي أحماض أمينية من 140-097 لمتعدد ببتيد‎ toystine link ‏عن طريق رابطة سيستثئين‎ ٠

APA42 5 ‏و 2825-35 بشري متكتل‎ aggregated human AB 1-40 ‏بشري متكتل‎ AB1-40 «APP ‏بصفتهما‎ PBS ‏واستخدم 8842م المتكتل و‎ aggregated rodent 8842 ‏من حيوان قارض متكتل‎ ‏ضابطين إيجابي وسلبي؛ على الترتيب. واستخدمت عشر فتران لكل مجموعة معالجة.‎ ‏عند نهاية الأربعة أشهر من‎ Loa; DU ‏وروقبت العيارات كما ذكر أعلاه وقتلت الفئران‎ ‏بعد‎ toxicology ‏والسموميات‎ AR ‏ومستويات‎ histochemistry ‏الحقن. وحددت كيمياء الأنسجة‎ Vo ‏القتل.‎ ‎Materials and Methods ‏أ . مواد وطرق‎

Preparation of Immunogens ‏تحضير مولدات المناعة‎ ١ ‏حضرت أربعة مركبات اقترانية‎ coupled AB peptides ‏مقترنة‎ AB ‏تحضير ببتيدات‎ amino acid ‏(شقات الأحماض الأمينية‎ human AP peptide conjugates ‏بشرية‎ AB ‏من ببتيدات‎ Yo ‏منها مقترن ب 150 مضاد لفأر ومأخوذ‎ JS (£Y=FY ‏و‎ YA=YY (VY) ‏اف‎ residues ‏باستخدام مادة مفاعلة‎ AB ‏من خراف) بالاقتران من خلال سيستثين صناعي مضاف إلى الببتيد‎

AB ‏من كبريتو -21405. وأجري تخليق مشتقات الببتيد‎ crosslinking reagent ‏للارتباط التقاطعي‎ ‏باستخدام سياقات الأحماض الأمينية النهائية التالية. وفي كل حالة؛ يحدد موقع شق السيستئثين‎ an ‏المولج بوضع خط تحته. ولمشتقة الببتيد 8813-28 كذلك شقي غليسين مضافين قبل السيستئين‎ ‏كما هو مبين.‎ carboxyl terminal cysteine ‏ذي الطرف الكربوكسيلي‎ glycine (VY ‏(سياق التمييز رقم:‎ NH,-DAEFRHDSGYEVC ~COOH 881-12 ‏ببتيد‎ ‎(VY ‏(سياق التمييز رقم:‎ NH,-DAEFRC COOH 81-5 ‏ببتيد‎ ‏حمض أمينو -هبتانويك--2-,1111 (سياق‎ -GLMVGGVVIA COOH AB3342 ‏م ببتيد‎ (VE ‏التمييز رقم:‎ : ‏(سياق التمييز رقم‎ Ac-NH- HHQKLVFFAEDVGSNK GGC-COOH AB13-28 ‏ببتيد‎ ‎(vo ‏ملغم من 180 مضاد لفأر‎ ٠١ ‏وصنام«ه»؛ ذيلز‎ reaction ‏وللتحضير لتفاعل الاقتران‎

Jackson ImmunoResearch ‏ومأخوذ من خراف (من جاكسون إ(ميونوريسيرتش لابوراتوريز‎ Ve ‏ملي جزيئي من محلول منظم من بورات الصوديوم‎ ٠١ ‏طوال الليل ضد‎ (Laboratories

Sha Zl ‏ومن ثم ركز الجسم المضاد‎ AC ‏درجة حموضتة‎ sodium borate buffer ‏باستخدام أنبوب أميكون ستتريبريب‎ milliliter (ml) Je ¥ ‏إلى حجم‎ dialyzed antibody ‏[1-(-ماليميدو‎ EMCS- ‏ملغم من كبريتو‎ ٠ ‏ومن ثم أذيب‎ -Amicon Centriprep tube ‏(من شركة موليكيولار‎ [[N (y-maleimidocuproyloxy) succinimide] ‏كبرويلوكسي) سكسينيميد‎ Vo .deionized water ‏مل من ماء منزوع الأيونات‎ ١ ‏في‎ (Molecular Sciences Co. . ‏سيانسز؛ كو‎ ‏نقطة نقطة مع التقليب ل‎ EMCS- gu pS ‏وأضيف مقدار فائض جزيئي بلغ £0 ضعف من‎ ‏المضاد لفأر والمأخوذ من خراف ومن ثم قلب المحلول لمدة عشرة دقائق إضافية. ونقي‎ 06 ‏المضاد لفأر والمأخوذ من الخراف المنشط واستبدل المحلول المنظم بإمراره فوق عمود‎ 0

Pierce ‏مل (عمود من نوع بيرس بريستو كولوم‎ ٠١ ‏سعته‎ gel filtration column ‏ترشيح هلامي‎ | © ‏جزيثي‎ ١,١ ‏وعودل باستخدام‎ (Pierce Chemicals ‏من شركة بيرس كيميكالز‎ Presto Column ‏درجة حموضته 71,8. وجمعت الأجزاء التي تحتوي‎ EDTA ‏و © ملي جزيئي من‎ NaPO, ‏من‎ ‏عند طول موجة بلغت 780 نانومتر‎ absorbance ‏على الأجسام المضادة والمميزة بالامتصاص‎ ‏بصفته‎ OD ‏مجم لكل‎ ١,4 ‏وخففت إلى تركيز بلغ ١ملغم/مل تقريباً باستخدام‎ nanometer (nm)

Cana ؛٠ ‏«مناعدت»». وأذيب المقدار الفائض الجزيئي الذي يعادل‎ coefficient ‏معامل إخماد‎ Yo ay ‏باستثناء‎ (A ‏ملي جزيئي ودرجة حموضته‎ ٠١ ‏مل من ,11050 تركيزه‎ 5١ (BAR ‏من ببتيد‎ ‏مل‎ ٠١ ‏ومن ثم خفف إلى‎ DMSO ‏ملغم من ببتيد 4833-42 أولا في 55 مل من‎ ٠١ ‏إذابة‎ ‏ملي جزيئي. وأضيف كل محلول من المحاليل‎ ٠١ ‏باستخدام محلول منظم ب ,110050 تركيزه‎ ‏مل من 150 المنشط المضاد لفأر والمأخوذ من خراف ورج عند درجة‎ ٠١ ‏الببتيدية إلى‎ ‏يقل عن‎ Aled ‏حرارة الغرفة لمدة ؛ ساعات. وركزت المركبات الاقترانية الناتجة إلى حجم‎ ٠

PBS ‏ثم ديلزت باستخدام‎ Amicon Centriprep tube ‏مل باستخدام أنبوب أميكون سنتريبريب‎ ٠ ‏ومررت المركبات الاقترانية من‎ .8»8 peptide ‏لاستبدال المحلول المنظم وإزالة الببتيد الطلق‎ ‏للتعقيم‎ 0.22 pm-pore size filters ‏ميكرومتر‎ +, TY ‏خلال مرشحات بلغ حجم مسامها‎ ‏ملغم وخزنت مجمدة عند -١٠م. وحددت‎ ١ ‏ثم قسمت إلى أجزاء وزن كل منها‎ sterilization

Pierce ‏(من شركة بيرس كيميكالز‎ BCA ‏التراكيز للمركبات الاقترانية باستخدام اختبار بروتين‎ oy. conjugation ‏باستخدام 0 مأخوذ من حصان للمنحنى القياسي. ووثق الاقتران‎ (Chemicals ‏بزيادة الوزن الجزيئي للببتيدات المقترنة بالنسبة إلى الببتيدات ل 180 المنشط المضاد لفأر‎

ABLS ‏والمأخوذ من الخراف. وكان المركب الاقتراني المضاد لفأر والمأخوذ من خراف‎ ‏عبارة عن تجمع من مركبين اقترانيين وكان البقية من مستحضر مفرد.‎

Preparation of aggregated Ap peptides ‏متكتتة‎ AP ‏تحضير ببتيدات‎ ." Vo ‏في‎ Peptides Inc ‏من شركة ببتيدز إنك.‎ (AN1528) 5460-١ ‏أذيبت الببتيدات البشرية‎ ‏(8101792؛ من شركة ببتيدز إنك.‎ 47-١ ‏الببتيدات البشرية‎ ((ME0541 ‏كاليفورنياء دفعة‎

Yo-Yo ‏الببتيدات البشرية‎ ((ME0439 ‏ودفعة‎ ME0339 ‏في كاليفورنياء لوت‎ Peptides Inc ‏في كاليفورنيا؛ دفعة‎ Peptides Inc ‏من حيوان قارض (من شركة ببتيدز إنك.‎ 47-١ ‏وببتيدات‎ ‏إذابة جديدة لتحضير كل مجموعة من جرعات الحقن من مساحيق مجفدة‎ )3 58 7 ‏ملغم من الببتيد إلى‎ Yo ‏أضيف‎ og yall ‏خزنت مجففة عند -٠7”م. ولهذا‎ lyophilized powders ‏منزوع الأيونات ودوّم المزيج لإنتاج محلول أو معلق منتظم نسبياً. ومن‎ ele ‏مل من‎ 4 ‏الببتيدات الأربع» كان 271528 الببتيد الوحيد القابل للذوبان في هذه المرحلة. ومن ثم أضيف‎ ‏تركيزه ضعف‎ PBS) ‏أضعاف‎ ٠١ ‏ميكرولتر من 285 تركيزه‎ ٠٠١ ‏جزء صغير بلغ حجمه‎ ٠١٠ ‏تركيزه‎ sodium phosphate ‏جزيئي وفوسفات صوديوم‎ ١,19 ‏يتكون من: 11:01 تركيزه‎ Yo ay ‏حيث عند هذه المرحلة بدأ 2001528 بالترسب. ودوّم المعلق‎ (V,0 ‏جزيئي؛ درجة حموضته‎ ‏د.م لاستخدامه في اليوم التالي.‎ YY ‏مرة أخرى وحضن طوال الليل عند‎ ‏يحمل شيفرة‎ expression plasmid ‏تحضير بروتين 2*6م: شكّل بلازميد تعبير‎ ‏من سياق دليلي ذي طرف‎ Su fusion protein ‏6!؛ وهو عبارة عن بروتين اندماج‎ ‏حمض أميني مأخوذ من ملتهمة جراثيم‎ ٠٠١ ‏نيتروجيني من بوليمراز 1458-2 يحتوي على‎ ٠ ‏ومتبوع‎ 100-amino acid bacteriophage MS-2 polymerase N-terminal leader sequence

Oltersdorf ‏كما وصف أولترسدورف‎ (BAPP) APP ‏ل‎ 190-04Y ‏بالأحماض الأمينية‎ ‏المجلد 716 ص 4497-4497 (1990م). وخمّح‎ oJ. Biol. Chem ‏ومعاونوه في مجلة‎ ‏عن البروتين بعد حث‎ Tae E.coli ‏البلازميد خمجاً تحويلياً في الاشريكية القولونية‎ ‏جزيئي ونقي 86م جزئيا عن‎ A ‏تركيزها‎ urea ‏وحللت البكتيريا في يوريا‎ promoter ‏المعزز‎ ٠ ‏طريق رحلان كهربائي هلامي تحضيري لمتعدد أكريل أميد باستخدام كبريتات دوديسيل‎ ‏بواسطة تنشيف‎ pBx6 ‏وميزت الأجزاء التي تحتوي على‎ preparative SDS PAGE ‏الصوديوم‎ ‎rabbit ‏مأخوذ من أرنب‎ pBx6 ‏باستخدام جسم مضاد متعدد النسائل ضد‎ Western blot ‏وسترن‎ ‎Amicon ‏أميكون سنتريبريب‎ ail ‏وجمعت وركزث باستخدام‎ anti-pBx6 polyclonal antibody

SDS PAGE ‏وتراوحت نقاوة المستحضر المقذّرة ب‎ (PBS ‏وديلزت باستخدام‎ Centriprep tube Vo ‏تقريباً.‎ 7٠١ ‏من © إلى‎ Coomassie Blue stained SDS PAGE ‏مبقع بصبغة أزرق كوماسييه‎

Results and Discussion ‏ب. النتائج والتوضيح‎

Study Design ‏تصميم الدراسة‎ .١ ‏محولة جينياً مغايرة الزيجبوت‎ PDAPP ‏فأر ذكور وإناث من فئران‎ ٠٠١ ‏حصل على‎ ‏من شارلز ريفر‎ Ted ١١ ‏يتراوح عمرها من 9 إلى‎ heterozygous PDAPP transgenic ‏عنص‎ +٠ ‏وصنفت‎ y Taconic Laboratory ‏وتاكونيك لابوراتوري‎ ©9165 River Laboratory ‏لابوراتوري‎ ‏ممزوجة مع مادة‎ APP ‏أو‎ AB ‏الفثران إلى عشرة مجموعات لتمنيعها بمناطق مختلقة من‎ ‏الجنس والعمر والنسل ومصدر الحيوانات ضمن‎ dee Dad ‏فرويند المساعدة. ووزعث الحيوانات‎ ‏مشتقة من‎ AB ‏المجموعات عن كثب قدر الإمكان. وتشتمل مولدات المناعة على أربعة ببتيدات‎ ‏و 47-77 ويقترن كل منها ب 160 المضاد‎ 18-٠“ Y=) 00) ‏السياق البشري؛‎ vo at (AN1528) ‏البشرية‎ 4 ٠-١ ‏ببتيدات‎ GS AR ‏لفأر والمأخوذ من خراف؛ أربعة ببتيدات‎ ‏من حيوان‎ 47-١ ‏البشرية؛ وببتيدات‎ Yo-Yo ‏ببتيدات‎ ((AN1792) ‏ببتيدات ١-7؛ البشرية‎

APP ‏يحتوي على شقات أحماض أمينية‎ pBx6 ‏قارض؛ ومتعدد ببتيد اندماجي»؛ يرمز إليه ب‎ ‏ممزوج مع مادة مساعدة بصفتها مادة‎ PBS ‏ومنتعت مجموعة عاشرة ب‎ 140-04Y ‏من‎ ‏ضابطة.‎ ©

PBS ‏ميكرولتر من‎ Yoo ‏ميكروغرام من كل ببتيد 8.8 في‎ ٠٠١ ‏ولكل تمنيم؛ استحلب‎ ‏لوحده‎ PBS ‏أو‎ PBS ‏في نفس الحجم من‎ pBx6 ‏لبروتين‎ APP ‏ميكروجم من مشتقة‎ ٠٠١ ‏أو‎ ‎Complete 1760170105 adjuvant (CFA) ‏(حجم تحجم) مع مادة فرويند المساعدة الكاملة‎ 1:١ ‏بنسبة‎ ‏ميكرولتر للتمنيع الأول؛ واتبع بتعزيز باستخدام نفس المقدار من‎ 0٠0 ‏في حجم نهائي من‎

Incomplete Freund’s adjuvant (IFA) ‏مولد المناعة في مادة فرويند المساعدة غير الكاملة‎ Ve ‏للجرعة الأخيرة. وأعطيت جرعات التمنيع داخل البريتون‎ PBS ‏للجرعات الأربعة اللاحقة مع‎ ‏بموعد مرة كل أسبوعين للجرعات الثلاثة الأولى ثم شهرياً. ونزفت الحيوانات لمدة أربعة إلى‎ ‏سبعة أيام بعد كل تمنيع بدأ بعد الجرعة الثانية لقياس عيارات الجسم المضاد. وقتلت الحيوانات‎ ‏بعد أسبوع واحد تقريباً من الجرعة النهائية.‎ Lam ‏قتلاً‎ ‎AP and APP Levels in the Brain ‏في الدماغ‎ APP § AB ‏مستويات‎ ." vo ‏أزيلت‎ APP ‏المختلفة أو بمشتقة‎ AB ‏بعد حوالي أربعة شهور من التمنيع بببتيدات‎ ‏كرة‎ ual ‏وحضر أحد‎ .saline-perfused animals ‏الأدمغة من حيوانات أشبعت بمحلول ملحي‎

DAY ‏واستخدم النصف‎ immunohistochemical analysis ‏الدماغ لتحليل كيمياء الأنسجة المناعي‎ ‏ولقياس تراكيز الأشكال المختلفة من بيتا ببتيد‎ LAPP ‏و‎ AB ‏من كرة الدماغ لقياس مستويات‎ ‏شرح‎ <amyloid precursor protein ‏ومصدر بروتين نشواني‎ beta amyloid peptide ‏نشواني‎ 7 ‏من مناطق حصان البحر والمناطق‎ homogenates ‏نصف كرة الدماغ وحضرت جناسات‎ ‏تركيزه © جزيتي . وخففت هذه الجناسات وقيس‎ guanidine ‏القشرية والمخيخية في غوانيدين‎ ‏بالمقارنة مع مجموعة من محاليل مخففة من ببتيد 48 أو‎ APP ‏مستوى المادة النشوانية‎ .51158 ‏قياسي ذي تراكيز معروفة من نسق‎ APP

وكان التركيز المتوسط ل 8م الكلي للمجموعة الضابطة الممنعة ب ‎PBS‏ أعلى بمقدار 4 ضعف في حصان البحر منه في القشرة (بلغت القيمة المتوسطة ‎YEA‏ نانوغرام/غرام في نسيج حصان البحر بالمقارنة مع ‎£YY)‏ نانوغرام/غرام للقشرة). وكان المستوى المتوسط في المخيخ للمجموعة الضابطة )6 ‎YY‏ نانوغرام/غرام في الأنسجة) أقل بحوالي ‎٠٠٠١‏

‎oo‏ ضعف منه في حصان البحر. وتعتبر هذه المستويات مماثلة لتلك المستويات المذكورة مسبقاً لفثران ‎PDAPP‏ المحولة ‎Lins‏ مغايرة الزيجوت ولها نفس العمر (انظر ما جاء عن بحت جونسون-وودز ‎Johnson-Woods‏ ومعاونيه؛ ‎٠9491‏ المرجع سابق الذكر).

‏وبالنسبة للقشرة؛ تمتلك ‎Ae gene‏ جزئية من المجموعات المعالجة مستويات ‎AIS‏ ‏متوسطة من ‎AB‏ و 881-42 تختلف بشكل كبير عن تلك المستويات للمجموعة

‎٠‏ الضابطة (م < ‎(reo‏ وقد تلقت تلك الحيوانات 8201792 أو المركب الاقتراني الببتيدي 81-2 من حيوان قارض أو ‎ALLS‏ كما هو مبين في الشكل ‎.١١‏ وانخفضت المستويات المتوسطة من 8م الكلي بنسبة ‎yo‏ 774 و ‎71١‏ على الترتيب؛ بالمقارنة مع المجموعة الضابطة للمجموعات المعالجة هذه. ولم توجد علاقات مميزة بين عيارات الأجسام المضادة

‏المتخصصة ب ‎AB‏ ومستويات 8ه في المنطقة القشرية من الدماغ لأي من المجموعات.

‎Vo‏ وفي حصان البحر؛ لم يكن الانخفاض المتوسط في 8ه الكلي المقترن بالمعالجة ب 2 (انخفاض بنسبة 45ت ‎(+0tY=p‏ كبيراً مثل ذلك الانخفاض الملاحظ في القشرة (انخفاض بنسبة ‎(vse YV=p /Vo‏ . غير أن قيمة الانخفاض كانت أكبر بكثير في حصان البحر منها في القشرة؛ فقد بلغ الانخفاض الكلي ‎١١١87‏ نانوغرام/غرام من الأنسجة في حصان البحر مقابل ‎7١١7١‏ نانوغرام/غرام من الأنسجة في القشرة. ولمجموعات الحيوانات

‏© التي تلقت 81-42 أو 81-5 من حيوان قارض؛ انخفضت مستويات ‎AB‏ الكلية المتوسطة بنسبة 776 و 7771 على الترتيب. غير أنه بتحديد أحجام المجموعات الصغيرة والتغير الكبير في مستويات البيتيد النشوانية من حيوان لحيوان في المجموعتين؛ لم تكن هذه الانخفاضات كبيرة. وعند قياس مستويات 881-42 في حصان البحرء لم تصل أي من الانخفاضات المستحثة بالمعالجة إلى مقدار ملحوظ. وبناءً على ذلك؛ بسبب حمل ‎AB‏ الأصغر في القشرة؛

‎ve‏ تكون التغيرات في هذه المنطقة عبارة عن مؤشر أكثر دقة لتأثيرات المعالجة. وتكون a1 ‏في القشرة مماثلة؛ ولكن ليست مطابقة؛‎ ELISA ‏المقاسة باختبار‎ Ap ‏التغيرات في مستويات‎ ‏للنتائج من تحليل كيمياء الأنسجة المناعي (انظر الوصف أدناه).‎ ‏بأدنى حد‎ AD ‏كذلك في المخيخ» وهي منطقة تتأثر عادة ب‎ ISH AR ‏وقد قيس‎

AB ‏المتوسطة لأي من المجموعات الممنعة بببتيدات‎ AB ‏ممكن. ولم يختلف أي من تراكيز‎ ‏عن تلك التراكيز للمجموعة الضابطة في هذه المنطقة من الدماغ.‎ APP ‏المخظفة أو مشتقة‎ ٠ ‏لا تتأثر‎ AB ‏من‎ non-pathological levels ‏وتشير هذه النتيجة إلى أن مستويات غير ممرضة‎ ‏بالمعالجة.‎ ‏في القشرة والمخيخ من فئران معالجة‎ ELISA ‏كذلك باختبار‎ APP ‏وحدد تركيز‎ ‏ويميز الأول المشار إليه ب‎ APP 3S 55 ‏وضابطة. واستخدم اختباران مختلفان لتحديد‎ (AB ‏الذي قسسّم في سياق‎ APP ‏هو الشكل المفرز من‎ »( APP-x ‏ماطف كل من‎ ٠ ‏في حين يميز الثاني >*-07م فقط. وعلى النقيض من‎ (APP ‏من‎ (FL) ‏والأشكال كاملة الطول‎ ‏المقترن بالمعالجة في مجموعة جزئية من المجموعات المعالجة؛ لم تتغير‎ AB ‏الاتخفاض في‎ ‏في كل المجموعات المعالجة بالمقارنة مع الحيوانات الضابطة. وتشير هذه‎ APP ‏مستويات‎ ‏وبالأحرى فإن تأثير المعالجة متخصص‎ APP ‏لا تستنفد‎ AB ‏النتائج إلى أن التمنيعات بببتيدات‎ ‏ب قزم‎ ve ‏و 881-42 الكلية بشكل كبير في القشسرة‎ AB ‏ومجمل القول؛ انخفضت مستويات‎ ‏أو المركب الاقتراني 881-42 أو 4881-5 من حيوان قارض. وفي‎ AN1792 ‏بالمعالجة ب‎ ‏حصان البحرء انخفض 8م الكلي بشكل كبير فقط بالمعالجة باستخدام 2. ولم تلاحظ أي‎ ‏في المناطق الحصينية أو القشرية‎ APP ‏أو‎ AB ‏تغيرات أخرى مقترنة بالمعالجة في مستويات‎ ‏أو المخيخية.‎ >

Histochemical Analyses ‏تحليل كيمياء الأنسجة‎ ." ‏حضرت أدمغة من مجموعة جزئية من ست مجموعات لتحليل كيمياء الأنسجة‎ ‏حيث منتعت ثلاث مجموعات بمركبات اقترانية‎ dimmunohistochemical analysis ‏المتناعي‎ ‏كامل الطول‎ AB JS ‏وهي 881-5؛ 481-12 و 8813-28؛ ومنتعت مجموعتان‎ AB ‏لببتيد‎ ‏وتبين النتائج للتحليل‎ PBS ‏والمجموعة الضابطة المعالجة ب‎ AN1528 ‏وهي 2 و‎ Yo

الصوري ‎image analyses‏ للحمل النشواني في أجزاء الدماغ من هذه المجموعات في ‎Jal‏ ‎NY‏ ووجدت انخفاضات كبيرة في الحمل النشواني في المناطق القشرية لثلاث مجموعات من المجموعات المعالجة مقابل الحيوانات الضابطة. ولقد لوحظ الانخفاض الأكبر في الحمل النشواني في المجموعة التي تلقت ‎ANT792‏ حيث انخفضت القيمة المتوسطة بنسبة ‎ZAY‏ ° (م- 6601 . ولوحظت انخفاضات كبيرة كذلك لتلك الحيوانات المعالجبة ب ‎AN1528‏ ‏(انخفاض بنسبة 7408 م<# 00 ‎)٠.‏ والمركب الاقتراني الببتيدي 81-5 (انخفاض بنسبة ‎SAY‏ ‎Y=p‏ 0+( : وتختلف النتائج التي حصل عليها بتحديد مقدار ‎AB‏ أو ‎AB142‏ الكلي باختبار ‎ELISA‏ ‏والحمل النشواني بالتحليل الصوري إلى حد ما. وللمعالجة ب 8181528 تأثير كبير على ‎١‏ مستوى الحمل النشواني القشري ‎cortical amyloid burden‏ عند قياسه بالتحليل الصوري الكمي وليس له تأثير على تركيز ‎AR‏ الكلي في نفس المنطقة عند قياسه باختبار 851158. ومن المحتمل أن يكون الفرق بين هاتين النتيجتين بسبب مواصفات الاختبارين. فالتحليل الصوري لا يقيس إلا ‎AB‏ عديم الذوبان المتكتل في اللويحات. وعلى النقيض من ذلك؛ يقيس اختبار ‎ELISA‏ كل أشكال ‎AB‏ القابلة للذوبان وعديمة الذوبان؛ المونومرية والمتكتلة. وبما أنه يعتقد ‏| أن الاعتلال المرضي يقترن بالشكل عديم الذوبان من ‎AB‏ المقترن باللويحات ‎insoluble‏ ‎«plaque-associated form‏ فإنه قد يكون لتقنية التحليل الصوري دقة أكبر لكشف تأئثيرات المعالجة. غير أنه نظراً لأن اختبار 21158 يعتبر اختبارا أكثر سرعة وأسهل فهو مفيد ‎fis‏ ‏لأغراض الفحص ‎-screening purposes‏ وعلاوةٌ على ذلك فقد يظهر أن الانخفاض في ‎AB‏ ‏المقترن بالمعالجة أكبر من الانخفاض في ‎AB‏ الكلي المقترن باللويحات. ‎AB-specific antibodies AB ‏ولتحديد فيما إذا تفاعلت الأجسام المضادة المتخصصة ب‎ Y. ‏في الحيوانات المعالجة مع المادة النشوانية المترسبة‎ immunization ‏والناتجة عن طريق التمنيع‎ ‏تفاعلت مجموعة جزئية لأجزاء من الحيوانات المعالجبة‎ «deposited brain amyloid ‏في الدماغ‎ ‏والفثران الضابطة مع جسم مضاد متخصص ب 150 فأري. وبخلاف المجموعة المعالجة ب‎

Laid ‏داخلي‎ IgG ‏ب‎ Ap-containing plaques AB ‏طليت اللويحات التي تحتوي على‎ (PBS ‎yo‏ لحيوانات ممنعة بالمركبات الاقترانية من ببتيد ‎AB‏ وهي 881-5؛ 281-12 و 8813-28؛ وكتل

AA

‏ولم تحلل الأدمغة المأخوذة من حيوانات ممنعة‎ LANT528 ‏كاملة الطول وهي 2 و‎ 8 ‏بهذا الاختبار.‎ pBx6 ‏المعروف ب‎ APP ‏الأخرى أو ببتيد‎ AB ‏باستخدام ببتيدات‎

Measurement of Antibody Titers ‏قياس عيارات الأجسام المضادة‎ .¥ ‏نزفت الفئران لمدة تراوحت أربعة إلى سبعة أيام بعد كل تمنيع بدأ بعد التمنيع الثاني‎ ‏م بحيث كان عدد مرات النزف الكلية خمس مرات. وقيست عيارات الأجسام المضادة في‎ ‏الطبقي‎ ELISA ‏باختبار‎ AB1-42-binding antibody 881-42 ‏صورة جسم مضاد مرتبط ب‎ ‏مطلية ب‎ plastic multi-well plates ‏باستخدام ألواح متعددة العيون لدائنية‎ sandwich ELISA peak ‏ظهرت عيارات الأجسام المضادة الذروية‎ ٠7 ‏812م. وكما هو مبين في الشكل‎ immunogenic formulations ‏بعد الجرعة الرابعة للتركيبات المولدة للمناعة‎ antibody titers :411792 ‏الأربعة هذه التي أظهرت العيارات الأعلى للأجسام المضادة المتخصصة ب‎ > (AATYY ‏الذروية:‎ GMT ‏الذروية: 14747) و 2211528 (قيمة‎ GMT ‏(قيمة‎ 2 ‏المركب الاقتراني 881-12 (قيمة 7 الذروية: 77173؛) و 88142 من حيوان قارض (قيمة‎ ‏وانخفضت العيارات لهذه المجموعات إلى حد ما بعد الجرعتين‎ (V+ VAT ‏الذروية:‎ 27 ‏حصل على القيمة الذروية‎ (Aaa ‏الخامسة والسادسة. وبالنسبة لمولدات المناعة الخمس‎ ‏لللعيارات بعد الجرعة الخامسة أو السادسة وكانت هذه العيارات ذات قيمة أقل بكثير من تلك‎ ١

GMT ‏القيم للمجموعات الأربعة التي لها أعلى عيارات: المركب الاقتراني 8801-5 (قيمة‎ ‏(قيمة 7 الذروية: 9485١)؛ المركب الاقتراني 8013-8 (قيمة‎ pBx6 ‏الذروية: 27 77)؛‎ ‏(قيمة 7 الذروية: 1548)»؛ و‎ AB33- 42 ‏المركب الاقتراني‎ ((VYAY ‏الذروية:‎ 7 ‏وقيست عيارات الأجسام المضادة كذلك ضد الببتيدات‎ (YYo ‏الذروية:‎ GMT ‏(قيمة‎ AB25-35 ‏الطبقي لمجموعة جزئية‎ ELISA ‏باستخدام نفس تصميم اختبار‎ homologous peptides ‏المناظرة‎ Ye ‘AP25-35 <ABI13-28 01-5 — ‏هذه المجموعات‎ Cia” ie ‏من مولدات المناعة؛ وقد‎ ‏من حيوان قارض. وكانت هذه العيارات مماثلة تقريباً لتلك المقاسة ضد‎ AB1-42 ‏أو‎ 833-72 ‏المناعة 881-42 المأخوذ من حيوان قارض حيث كانت عيارات الأجسام‎ A se ‏0812م باستثناء‎ ‏المضادة ضد مولد المناعة المناظر في هذه الحالة أعلى بمقدار ضعفين تقريباً. ولا يكون مقدار‎ a9 ‏عيار الجسم المضاد المتخصص ب 8771792 للحيوانات المنفردة أو القيم المتوسطة‎ ‏القشرة.‎ AB ‏للمجموعات المعالجة مرتبطا بالفعالية المقاسة كانخفاض في مقدار‎

Lymphoproliferative Responses ‏؛. استجابات تشعبية لمفاوية‎ ‏باستخدام‎ AB-dependent lymphoproliferation AB ‏قيس التشعب اللمفاوي المعتمد على‎ ‏حصدت بعد أسبوع واحد تقريباً بعد التمنيع السسادس الأخير.‎ spleen cells ‏م خلايا طحالية‎ ‏لكل عين لمدة © أيام في وجود 881-40 عند‎ ٠١ ‏بتركيز‎ Bt ‏واستنبتت الخلايا المحصودة‎ ‏تركيز بلغ © ميكروجزيثي للتنبيه ©500001810. واستتبتت كذلك خلايا من مجموعة جزئية‎

APA0- reverse peptide ‏من سبع مجموعات من المجموعات العشرة في وجود الببتيد العكسي‎

PHA 1 ‏إضافية باستخدام مسبب انقسام فتيلي للخاديا‎ WIA ‏وكضابط إيجابي؛ استنبتت‎ .1 ‏وكضابط سلبي استنبتت الخلايا بدون إضافة ببتيد.‎ - ‏ولم‎ PHA ‏من معظم الحيوانات استجابة ل‎ lymphocytes ‏وتشعبت الخلايا اللمفاوية‎ ‏توجد هنالك استجابات ملحوظة للببتيد العكسي 840-1. وتشعبت الخلايا المأخوذة من‎ ‏من حيوان قارض و‎ 881-42 CAN1792 ‏المتكتلة الكبيرة و‎ AB ‏الحيوانات الممنعة بببتيدات‎ .411792 ‏بشدة عند تنبيهها ب 881-40 مع أعلى تعداد لكل دقيقة في حيوانات تلقت‎ 98 481-12 ‏وتشعبت خلايا أحد الحيوانات في كل من المجموعات الممنعة بالمركب الاقتراني‎ yo dana ‏و 2825-35 استجابة ل 881-40ي. ولا تحتوي المجموعات‎ AB13-28 ‏المركب الاقتراني‎ ‏على‎ PBS ‏أو‎ pBx6 ‏التي تلقت المركب الاقتراني 801-5؛ المركب الاقتراني 8332م لبروتين‎ ‏هذه النتائج في‎ edb. AB-stimulated response AB ‏حيوانات تظهر استجابة منبهة ل‎ ‏الجدول 5) أدناه.‎

Vou

+ الجدول *مولد ‎Aelia‏ المركب الاقتراني .| أحماض أمينية ‎AB‏ الحيوانات المستجيبةV/ sia © ‏نعم الصنف‎ AB1-5يرقم نعم الصنف ‎A ١7‏ 4/1 V1 ‏نعم الصنف‎ AB13-28 ١ a/) © ١١ ‏الصنف‎ AB25-35٠١/رفص‎ ٠١ ‏نعم الصنف‎ AB33-42 ‎ABl-40 |‏ الصنف 0 م/م ‏| يماقم الصنف ‎EY‏ 1/4 ‏| 281-42 العكسي الصنف 7؛ ‎AA‏ ‎A sina pBx6 |‏ وتبين هذه النتائج أن 8241792 و ‎ANIS28‏ ينبهان استجابات قوية ‎LAAT‏ 1 ومن المحتمل ‎faa‏ من النمط الظاهري +004. ولا يعتبر عدم وجود استجابة خلايا ‎T‏ المتخنصصة ب 8م في حيوانات ممنعة ب 8815 مدهشاً ‎Tk‏ لأن مغيرات الخاصية الببتيدية المميزة م عن طريق ‎WA‏ 0047 تحتوي عادة على نحو ‎lid Laan ١١‏ مع أن ببتيدات أقصر قد تؤدي وظيفتها في بعض الأحيان بفعالية أقل. وبناءا على ذلك من المحتمل أن تكمن معظم مغيرات الخاصية لخلايا 7 المعززة للببتيدات الاقترانية الأربع في الشريك الاقتراني ل ‎IgG‏ ‏وليس في المنطقة ‎AB‏ وتدعم هذه الفرضية بمدى التأثير المنخفض ‎faa‏ للاستجابات التشعبية ‎proliferative responses‏ للحيوانات في كل مجموعة من المجموعات المعالجة هذه. وبما أن ‎٠١‏ المركب الاقتراني 01-5 كان فعالاً عند انخفاض كبير في مستوى 8م في الدماغ» في عدم وجود واضح لخلايا ‎T‏ متخصصة ب ‎AB‏ يبدو أن المؤثر الرئيسي للاستجابة المناعية

‏المستحثة عن طريق التمنيع بهذا الببتيد عبارة عن جسم مضاد. وقد يكون الافتقار إلى خلايا-7 واستجابة الجسم المضاد المنخفضة من الببتيد الاندماجي ‎pBx6‏ الذي يشتمل على الأحماض الأمينية ‎APP‏ من 140-047 بما في ذلك كل ‎Vo‏ شقات ‎AR‏ بسبب توليد المناعة ‎immunogenicity‏ الضعيف للمستحضر الخاص هذا. ومن

٠١١ ‏المحتمل أن يكون توليد المناعة الضعيف لكتل 8825-35 بسبب كون الببتيد صغيراً جدا‎ ‏ليحتوي على نحو ملائم على مغير الخاصية الجيد لخلايا 7 للمساعدة في حث استجابة الجسم‎ ‏من المحتمل أن يكون مولداآً‎ ccarrier protein ‏المضاد. وإذا اقترن هذا الببتيد ببروتين حامل‎ ‏للمناعة بشكل أكبر.‎

Preparation of Polyclonal Awl ‏تحضير أجسام مضادة متعددة النسائل لوقاية‎ . °

Antibodies for Passive Protection ‏بالإضافة إلى مادة‎ AB ‏ميكروغم من‎ ٠٠١ ‏فأر غير محول جينياً ب‎ ١١5 ‏متع‎ ‏من الفثران‎ pall ‏عند عمر بلغ ؛-© أشهر. وجمع‎ Lom) SE ‏مساعدة من 178/م05؛ وقتلت‎ ‏الممنعة. وفصل 180 من مكونات الدم الأخرى. ويمكن تنقية الجسم المضاد المتخصص بمولد‎ ‏وحصل على‎ .affinity chromatography ‏المناعة بشكل جزئي عن طريق الاستشراب الألفوي‎ ١ ‏ملغم من الجسم المضاد المتخصص بمولد المناعة‎ ٠-١, ‏مقدار متوسط تراوح من حوالي‎ ‏ملغم.‎ ١7١-٠٠١ ‏لكل فأرء حيث تراوح المقدار الكلي من‎

Passive Immunization with Antibodies to AB AB ‏تمنيع سلبي بأجسام مضادة ل‎ LVI ‏ملغم في‎ v0 ‏يتراوح عمرها من 9-7 أشهر‎ PDAPP ‏حقنت مجموعات من فثئران‎ ‏أو أجسام مضادة وحيدة النسيلة متخصصة ضد‎ AB ‏من جسم مضاد متعدد النسائل ضد‎ 2385 ١٠ ‏كما هو مبين أدناه. ونقيت كل مستحضرات الأجسام المضادة لتحتوي على مستويات‎ AP ‏ويمكن تحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد شدفة‎ endotoxin ‏منخفضة من الذوفان‎ ‏و فحص‎ hybridomas ‏في فأر وتحضير أشكال هجينة‎ AB ‏بحقن الشدفة أو الشكل الأطول من‎ ‏المرغوبة بدون الارتباط‎ AB ‏الأشكال الهجينة لجسم مضاد يرتبط بشكل متخصص بشدفة‎ -AB ‏أخرى من‎ nonoverlapping fragments ‏بشدفات غير متداخلة‎ +٠

Voy

Vd ‏ا‎ ‎wae | ‏يمصمه‎ ame | ae

EE

I ‏ال‎ ‎- wwe | ame ‏مضاد ل 0842 البشري | مشاد ل 8802 المتكل_|‎ ts ‏وحقنت الفثران داخل البريتون حيث لزم الأمر خلال فترة زمنية بلغت ؛ أشهر‎ ‏محدد‎ ٠٠٠١/١ ‏يزيد عن‎ ELISA ‏للمحافظة على تركيز جسم مضاد دائر مقاس بواسطة عيار‎ ‏ل 8842 أو مولد مناعة آخر. وروقبت العيارات كما وصف أعلاه‎ ELISA ‏بواسطة إجراء‎ ‏عند نهاية الست شهور من الحقن. وأجري تحليل لكيمياء الأنسجة‎ Lam, ‏م وقتلت الفئران قتلاً‎ ‏بعد القتل. واستخدمت عشرة فئران لكل‎ toxicology ‏والسمية‎ AB ‏_مستويات‎ chistochemistry ‏و‎ XI ‏في المثالين‎ passive immunization ‏مجموعة. وتوصف دراسات إضافية للتمنيع السلبي‎ ‏أدناه.‎ 1 ‏مقارنة مواد مساعدة مختلفة‎ .1 ‏و‎ oil-in water emulsion ‏مستحلب زيت في ماء‎ alum ‏شب‎ «CFA ‏يقارن هذا المثال‎ Ve ‏لتحديد قدرتها على تنبيه استجابة مناعية.‎ MPL ‏أ. المواد والطرق‎ ‏تصميم الدراسة‎ .١ ‏عمرها‎ Hartly ‏الإناث من سلالة هارتلي‎ guina pigs ‏من الخنازير الهندية‎ ٠٠١ ‏صنفت‎ ‎AN1792 ‏إلى عشرة مجموعات لتمنيعها ب‎ Elm Hill ‏ستة أسابيع» حصل عليها من إلم هيل‎ ve ‏منه مدمجة مع مواد مساعدة مختلفة. وتلقت سبع‎ palmitoylated derivative ‏أو مشتقة بالميتويلية‎ ‏ب)‎ PBS ‏ميكروغرام ما لم يذكر غير ذلك) مدمج مع أ)‎ YY) ANI792 ‏مجموعات حقن من‎ ‏ه)‎ «squalene ‏سكوالين‎ (+ «MPL (—= «Freund's adjuvant ‏مادة فرويند المساعدة‎ ‏بجرعة منخفضة؛ أو ز شب «سلة بجبسرعة‎ alum ‏و شب‎ «squalene ‏/سكوالين‎ 1

ل عالية ( ‎Yoo‏ ميكروغرام من ‎(AN1792‏ وتلقت مجموعتان حقن من مشتقة بالميتويلية ‎palmitoylated derivative‏ من ‎(p02 5ST) AN1792‏ مدمجة مع أ) ‎PBS‏ أو ب) سكوالين ‎squalene‏ وتلقت المجموعة العاشرة الأخيرة ‎PBS‏ لوحده بدون مولد المضاد أو مادة مساعدة إضافية. وللمجموعة التي تلقت مادة فرويند المساعدة ‎(Freund's adjuvant‏ استحلبت ‎emulsified‏ ‏م الجرعة الأولى باستخدام ‎CFA‏ والجرعات الأربعة المتبقية باستخدام ‎FA‏ وتم إعطاء مولد المضاد بجرعة مقدارها ‎FY‏ ميكروغرام إلى كافة المجموعات باستثناء المجموعة التي تلقت جرعة عالية من الشب ‎alum‏ وهي المجموعة التي أعطيت ‎Tov‏ ميكروغرام من 11792ل4. وأعطيت الحقن ‎Jala‏ البريتون ل ‎IFA[CFA‏ وداخل العضل في العضلة رباعية الرؤوس للأطراف الخلفية ‎hind limb quadriceps‏ عند الجهتين اليمنى واليسرى بالتبادل لكل المجموعات ‎٠‏ - الأخرى. وأعطيت الجرعات الثلاثة الأولى بمعدل جرعة واحدة كل أسبوعين ثم أعطيت جرعتين بمعدل جرعة واحدة شهرياً. وسحب الدم بعد مرور ستة إلى سبعة أيام من كل تمنيع؛ ‎Told‏ من الجرعة الثانية؛ لقياس عيارات الأجسام المضادة. ". تحضير مولدات المناعة أضيف ¥ ملغم من 842 (من شركة كاليفورنيا ببتيدز ‎«California peptids‏ الدفعة م« | ‎(MEO339‏ إلى 0,9 مل من ماء منزوع الأيونات ‎water‏ 061001280» ودوم ‎vortexed‏ المزيج لتشكيل معلق ‎suspension‏ منتظم نسبياً. وأضيف جزء صغير بلغ ‎٠٠١‏ ميكرولتر من ‎PBS‏ ‏تركيزه ‎٠١‏ أضعاف ‎PBS)‏ تركيزه ضعف واحد؛ 18801 تركيزه 0,19 جزيثي؛ فوسفات الصوديوم ‎sodium phosphate‏ تركيزه )++ ‎sux‏ درجة حموضة تبلغ 5,). ودوم المعلق مرة أخرى وحضن 10 طوال الليل عند لالم لاستخدامه في اليوم التالسي. وخزن 7 81-2 غير المستخدم مع مادة مجففة ‎desiccant‏ مثل مسحوق ‎lyophilized powder Maa‏ عند ‎a Ye-‏ وحضرت مشتقة بالميتويلية ‎palmitoylated derivative‏ من ‎AN1792‏ بقرن ‎coupling‏ ‏أنهيدريد بالميتيك ‎anhydride‏ 16» مذاباً في ثنائي مثيل فورماميد ‎«dimethyl formamide‏ بالشق الطرفي الأميني ل 0792م قبل إزالة الببتيد الناشئ من الراتتج بالمعالجة باستخدام ‎Yo‏ حمض هيدروفلوريك ‎-hydrofluoric acid‏

Vet

Complete Freund's ‏ولتحضير تركيبة الجرعات من مادة فرويتد المساعدة الكاملة‎ ‏ميكرولتر‎ ٠٠١ ‏ميكروغرام من 8111792 في‎ FF ‏استحلب‎ «(Y ‏(المجموعة‎ (CFA) adjuvant ‏في حجم نهائي بلغ 500 ميكرولتر للتمنيع الأول.‎ CFA ‏(حجم:حجم) مع‎ 1:١ ‏بنسبة‎ PBS ‏من‎ ‏ومن أجل التمنيعات اللاحقة؛ استحلب مولد المضاد بطريقة مماثلة مع مادة فرويند المساعدة‎ -(IFA) Incomplete Freund's adjuvant ‏غير الكاملة‎ ° ‏أضيف مسحوق مجفد (من‎ (A ‏ولتحضير تركيبة الجرعات من .1001 للمجموعتين © و‎ ‏هاملتون‎ ¢.Ribi ImmunoChem Research Inc. ‏شركة ريبي إميونوكيم ريسيرش « إنك.‎ ‏تركيزه 70,7 إلى‎ aqueous triethylamine ‏إلى ثلاثي إثيل أمين ماي‎ (MT ‏مونتانا‎ «Hamilton +5 ‏ملغم/مل ودوم المزيج. وسخن المزيج إلى درجة حرارة تراوحت من‎ ١ ‏تركيز نهائي بلغ‎ ‏منتظم ومعتم قليلاً. واستخدم‎ micells ‏ثائية لإنتاج معلق من المذيلات‎ ١ ‏لام لمدة‎ ٠ ‏إلى‎ ١ ‏محلول حديث التحضير لكل مجموعة من مجموعات الحقن. ومن أجل كل جرعة حقن في‎ ٠٠ PBS ‏ميكروغرام من 2311792 في 1,0 ميكرولتر من‎ YY ‏المجموعة 0( خلط‎ ‏ميكرولتر من 285 في أنبوب من بوروسليكات‎ ١١7 ‏ميكرولتر) و‎ 00) MPL ‏ميكروغرام من‎ ‏مباشرة قبل الاستخدام.‎ borosilicate ‏في‎ AN1792 ‏ولتحضير تركيبة الجرعات من مستحلب زيت في ماء منخفض؛ أضيف‎ Vo

Span A® ‏تركيزه 74,0 وسبان‎ Tween 80 A+ ‏تركيزه 78 توين‎ squalene ‏إلى سكوالين‎ 5 ‏ميكروغرام‎ YW ‏للوصول إلى تركيز جرعة مفردة نهائي مقداره‎ PBS ‏تركيزه 70,5 في‎ 5 ‏واستحلب المزيج بإمراره خلال أداة تحمل‎ (TV ‏ميكرولتر (المجموعة‎ Yoo ‏من 4111792 في‎ ‏مرة إلى أن‎ ٠١ ‏إلى‎ ١9 ‏من‎ twochambered hand-held device ‏باليد تحتوي على حجيرتين‎ standard latex bead ‏أصبح قطر قطيرات المستحلب مساو تقريباآً لقطر خرزة لثية قياسية‎ Y. ‏وكان المعلق الناتج‎ microscope ‏ميكرومتر عند مشاهدتها تحت المجهر‎ ١ ‏يبلغ قطرها‎ ‏واستخدم مستحلب حديث التحضير لكل‎ .0021650©04 milky white ‏براقا لونه أبيض حليبي‎ ‏في ثلاثي إثيل أمين‎ MPL ‏أضيف‎ eA ‏مجموعة من مجموعات الحقن. ومن أجل المجموعة‎ ‏ميكروغرام لكل جرعة إلى السكوالين‎ ٠ ‏عند تركيز بلغ‎ 7١,7 ‏تركيزه‎ triethylamine

Aa Sell ‏للاستحلاب كما ذكر أعلاه. وبالنسبة‎ detergent mixture ‏والمزيج المنظف‎ squalene Yo yoo “NH- ‏ميكروغرام لكل جرعة من‎ YY ‏أضيف‎ ٠ (v ‏(المجموعة‎ palmitoyl derivative ‏البالميتويلة‎ ‎80 ‏ودوم المزيج. ومن ثم أضيف توين‎ squalene ‏إلى سكوالين‎ palmitoyl ‏بالميتويل‎ 81-2 ‏للوصول إلى تركيز‎ PBS ‏مع التدويم. وأضيف هذا المزيج إلى‎ Span 85 48 ‏وسبان‎ Tween 0 ‏يلغ‎ Span 85 88 ‏سبان‎ ٠ /..,0 ‏بلغ‎ Tween 80 Av ‏بلغ م ؛ توين‎ squalene ‏نهائي للسكوالين‎ ‏واستحلب المزيج كما ذكر أعلاه.‎ 7١,9

AN1792 ‏(المجموعتان 4 و ١٠)؛ أضيف‎ alum ‏ولتحضير تركيبة الجرعات من الشب‎ (aluminum hydroxide gel ‏(هلام هيدروكسيد الألومنيوم‎ Alhydrogel ‏في 5 إلى ألهيدروجل‎ ‏للوصول إلى تراكيز‎ (NY ‏نيويورك‎ Westbury ‏(من شركة أكيوريت 468+ وستبوري‎ dle de ja) ‏ميكروغرام‎ ٠٠ ‏(جرعة منخفضة؛ المجموعة 3( أو‎ ples Se TT ‏بلغت‎ ‎You ‏في حجم جرعة نهائي بلغ‎ alum ‏لكل © ملغم من الشب‎ AN1792 ‏من‎ )٠١ ‏المجموعة‎ ٠١ ‏ميكرولتر. ومزج المعلق بشكل معتدل لمدة ؛ ساعات عند درجة حرارة الغرفة.‎ ‏قياس عيارات الأجسام المضادة‎ LY ‏من التمنيع الثاني‎ Tell ‏نزفت الخنازير الهندية بعد ستة إلى سبعة أيام من التمنيع‎ ‏بحيث كان عدد مرات النزف الكلي أربع مرات. وقيست عيارات الأجسام المضادة مقابل‎ ‏كما وصف تحت عنوان المواد والطرق العامة.‎ ELISA ‏بواسطة‎ 2 Vo ‏؛. تحضير الأنسجة‎ ‏بإعطائها «0©. وجمع‎ Lam) SI ‏قتلت كافة الخنازير الهندية‎ le gud VE ‏بعد حوالي‎

Joan) ‏وأزيلت الأدمغة وشرّحت ثلاث مناطق دماغية‎ cerebrospinal 2010 ‏مائع مخي شوكي‎ ‏واستخدمت لقياس تركيز بروتين‎ (cerebellum ‏والمخيخ‎ cortex ‏والقشرة‎ hippocampus ‏البحر‎ ‏الكلي بواسطة م21158.‎ AB Y. ‏ب. النتائج‎ ‏استجابات الأجسام المضادة‎ ١ ‏المواد المساعدة المختلفة عند قياسها في‎ potency ‏كان هنالك مدى واسع في فعالية‎ ‏عندما‎ VE ‏صورة استجابة الجسم المضاد ل 2 بعد التمنيع. وكما هو مبين في الشكل‎ ‏لم يتم الكشف عن أي جسم مضاد بعد جرعتي أو ثلاثة جرعات‎ PBS ‏في‎ 2 shel ve

تمنيع وتم الكشف عن استجابات يمكن إهمالها بعد إعطاء الجرعتين الرابعة والخامسة مع متوسط هندسي للعيارات ‎(GMTs) geometric mean titers‏ بلغ حوالي *©؛ فقط. ومستحلب الزيت في الماء حث عيارات معتدلة بعد ‎de jal)‏ الثالثة ‎Liga (Yoo = GMT)‏ عليها بعد الجرعة الرابعة ‎(Y+) = GMT)‏ وانخفضت مع الجرعة الأخيرة ‎GMT)‏ = 4 2). وكان هنالك ‎oo‏ استجابة واضحة لجرعة مولد المضاد ل 2 مرتبط بالشب ‎ae alum‏ كون المقدار ‎٠٠0‏ ميكروغرام أكثر ‎fads‏ للمناعة عند كل التقاط الزمتية ‎points‏ عدن من المقدار ؟؟ ميكروغرام. وعند ذروة الاستجابة الجسم المضاد؛ بعد التمنيع الرابع؛ كان الفرق بين الجرعتين 747 مع قيمتي ‎GMTs‏ بلغتا حوالي ‎TY) ١19460‏ ميكروغرام) و7400 ‎Veo)‏ ‏ميكروغرام) . وكانت استجابة الجسم المضاد ل ‎TT‏ ميكروغرام من ‎AN1792‏ مع ‎MPL‏ مماثلة ‎٠‏ جداآ لتلك المتولدة باستخدام جرعة أعلى بعشرة أضعاف تقريباً من المولد المضاد ‎For)‏ ‏ميكروغرام) المرتبط بالشب ««د1اة. وأدت إضافة ‎MPL‏ إلى مستحلب الزيت في الماء إلى تخفيض فعالية التركيبات بالنسبة إلى فعاليته مع ‎MPL‏ بصفته المادة المساعدة الوحيدة بمقدار كبير يصل إلى ‎٠. No‏ وكانت المشتقة البالميتويلية ‎palmitoylated derivative‏ من ‎AN1792‏ غير مولدة للمناعة بشكل كامل عند إعطائها في 0158 وأعطت عيارات معتدلة عند وجودها في ‎ye‏ مستحلب الزيت في الماء مع قيمتي ‎VE Gal GMT‏ و ‎Veo‏ للنزيفين الثالث والرابع. ونتجت أعلى عيارات للأجسام المضادة باستخدام مادة فرويند المساعدة ‎Freund's adjuvant‏ مع قيمة 1 ذروية بلغت حوالي ‎AV ee‏ وهي قيمة أكبر ب ‎linia ٠0‏ تقريباً من قيم ‎GMT‏ ‏للتركيبين الأكثر فعالية اللاحقين» ‎MPL‏ وجرعة عالية من 111792م/الشب صدلة. وأكثر المواد المساعدة الواعدة المعرفة في هذه الدراسة هي ‎MPL‏ والشب ‎alum‏ ومن ‎Yo‏ بينهماء يعتبر ‎MPL‏ هو المفضل لأنه يتطلب جرعة من مولد المضاد تقل ب ‎٠١‏ أضعاف لتوليد نفس استجابة الجسم المضاد كما حصل عليها باستخدام الشب ‎alum‏ ويمكن زيادة الاستجابة بزيادة جرعة مولد المضاد و/أو المادة المساعدة وباستمثال مواعيد التمنيع. وكان مستحلب الزيت في الماء عبارة عن مادة مساعدة ضعيفة ‎Tan‏ ل ‎AN1792‏ وإضافة مستحلب الزيت في الماء إلى مادة ‎MPL‏ المساعدة قللت فعالية المادة المساعدة الفعلية ل ‎MPL‏ لوحده. ‎Yo‏

و ". مستويات م.م في الدماغ عند الأسبوع ‎VE‏ تقريبآ خدرت الخنازير الهندية بشدة وسحب المائع ‎Ad)‏ الشوكي ‎(CSF)‏ واستأصلت الأدمغة من الحيوانات في ‎de sane‏ فرعية من المجموعات؛ تلك الممنعة باستخدام مادة فرويند المساعدة ‎Freund's adjuvant‏ (المجموعة 7)؛ ‎MPL‏ (المجموعة 5)؛ الشب م ‎alum‏ بجرعة عالية بلغت ‎٠١‏ ميكروغرام من 2211792 (المجموعة ‎)٠١‏ والمجموعة الضابطة الممنعة ب ‎PBS‏ (المجموعة ‎L(V‏ ولقياس مستوى الببتيد ‎AB‏ شرح نصف كرة الدماغ ‎hemisphere‏ وحضرت جناسات ‎homogenates‏ من مناطق من حصان البحر؛ القشسرة والمخيخ في جوانيدين ‎guanidine‏ تركيزه © جزيئي. وخففت هذه الجناسات وحددت كمياتها بالمقارنة مع مجموعة محاليل مخففة لبروتين قياسي ‎AB‏ بتراكيز معروفة في أحد أشكال ‎٠١‏ 21158. وكانت مستويات بروتين ‎AB‏ في حصان البحرء القشرة والمخيخ متمائلة جدا لكل المجموعات الأربعة بالرغم من المدى الواسع لاستجابات الأجسام المضادة ل ‎AB‏ الناتجة عن هذه اللقاحات. وقيست مستويات ‎AB‏ المتوسطة فبلغت حوالي ‎YO‏ نانوغرام/غرام من النسيج في حصان البحرء ‎YY‏ نانوغرام/غرام في القشرة و7١‏ نانوغرام/غرام في المخيخ. وبناءً على ذلك؛ فإن وجود عيار مرتفع من الجسم المضاد الدائر بالنسبة ل ‎AB‏ لثلاثة أشهر ‎LB‏ في - بعض من هذه الحيوانات لم يغير مستويات 8م الكلية في أدمغتها. وكانت مستويات ‎AB‏ في ‎CSF‏ متماثلة ‎Lila‏ أيضاً بين المجموعات. ويشير انعدام التأثير الكبير للتمنيع ب ‎AN1792‏ ‏على 8 داخلي ‎endogenous Lidl)‏ إلى أن الاستجابة المناعية مركزة على ‎JIC‏ مرضية ‎pathological formations‏ من ‎-AB‏ ‏1. الاستجابة المناعية ‎gal‏ )3 مساعدة مختلفة في الفئران 7 استخدمت ‎fi‏ وبستر سويسرية ‎Swiss Webster mice‏ إناث عمرها ستة أسابيع لهذه الدراسة بحيث استخدم ‎١7-٠١‏ حيوان لكل مجموعة. وأعطيت جرعات التمنيع في الأيام صفرء؛ ‎YA OVE‏ 10 90 و ‎٠١١‏ تحت الجلد بحجم جرعة بلغ ‎٠٠١9‏ ميكرولتر. واستخدم بصفته المحلول المنظم لدرجة الحموضة ‎buffer‏ لكافة التركيبات. ونزفت الحيوانات بعد سبعة أيام من كل تمنيع ابتداء من الجرعة الثانية لتحليل عيارات الأجسام المضادة بواسطة ‎(ELISA Yo‏ ونظام المعالجة ‎treatment regime‏ لكل مجموعة ملخص في الجدول 7.

٠ ١7 ‏الجدول‎ ‏ميكروغرا‎ ‎| vee Loan | dese ‏لأ‎ [wl oe ‏الل | 792اله ا‎ vel ‏الا‎ ‏اد‎ | sey | 88 ‏ام‎ ‎AN1792 alum ‏05-1+شب‎

ملاحظات:

أ عدد الفئران في كل ‎de gana‏ عند بدء التجربة.

7 لوحظت المواد المساعدة. كان المحلول المنظم لدرجة الحموضة المستخدمة لكافة هذه التراكيب

° عبارة عن 088. وبالنسبة للمجموعة ‎a 1A‏ تضاف مادة مساعدة ولا مولد مضاد.

٠ق‎

A ‏للأجسام المضادة ل 8842 في كل مجموعة مبينة في الجدول‎ ELISA ‏وعيارات‎ ‏أدناه.‎ ‎A ‏الجدول‎ ‏ا | لاا ا‎ [oar | ‏.نه‎ | va [eka] ow ‏لل‎ [ew ove [ve |v oo ‏ا‎ eT vn [vere [vies [en | ‏اا‎ |v [ver [ov [era [von | ows |e [ver [eve [ew [we | ‏هدم‎ |e

Ce [veer [wo en [wx [he [a [ew [ee |W |v ve [ve Te we [Ce a

Cr | er [vee [ar | ve [a ov ew [en [a | ‏عا‎ ‎[rv ee [va [ve |e ow vw ay [vw [ven | ow | ١ oe Te Tew Tew ow orn [wa [ee [ee en owe [ven ee [oe |e on [vee [vee [on | ‏جما‎ ow ee Tove [we oe | ‏ال‎ « eon | ney | ‏مقت‎ Jveoee | mae fo] [eer] YER | ‏ايد‎ ‏حيث‎ AA 50 ‏ويبين الجدول أن أعلى قيمة للعيارات حصل عليها كانت للمجموعات 4؛‎ ‏ميكروغرام من .1101 و‎ 5٠ (MPL ‏ميكروغرام من‎ ١١9 ‏كانت المواد المساعدة عبارة عن‎ °

MPL ‏مع‎ QS21

١٠ ‏الفعالية العلاجية لمواد مساعدة مختلفة‎ IX ‏باستخدام مجموعة من‎ Lisa ‏محّولة‎ PDAPP ‏أجريت دراسة للفعالية العلاجية في فئران‎ ‏المواد المساعدة الملائمة للاستخدام في البشر لتحديد قدرتها على تقوية الاستجابات المناعية ل‎ ‏في الدماغ عن طريق المناعة.‎ amyloid deposits ‏وحث التخلص من الرواسب النشوانية‎ AB ‏محئولة جينياً؛ تراوحت‎ PDAPP ‏ذكور وإناث من فئران‎ Jl ١8١ ‏وتم الحصول على‎ -Charles River Laboratories ‏شهرء من شارلز ريفر لابوراتوريز‎ Ao ‏أعمارها من 7,59 إلى‎ ‏إلى 7 حيوان لتمنع ب‎ ١١5 ‏وصنفت الفئران إلى تسع مجموعات يحتوي كل منها على‎ ‏مخلوط مع مواد مساعدة مختلفة. ووزعت الحيوانات في المجموعات‎ ANIS28 ‏أو‎ 2 ‏و 0521؛‎ MPL calum ‏فقا للجنس؛ العمر والنسل قدر الإمكان. وتشمل المواد المساعدة الشب‎

Freund's adjuvant ‏مع كلا مولدي المضاد؛ ومادة فرويند المساعدة‎ Ua glia ‏يكون كل منها‎ Ve ‏مشكل في محلول‎ AN1792 ‏فقط. ومنتعت مجموعة إضافية ب‎ AN1792 ‏مخلوطة مع‎ (FA) ‏بدون مادة‎ preservative thimerosal ‏منظم لدرجة الحموضة مع المادة الحافظة ثيمروسال‎ 5 .negative control ‏لوحده كضابط سلبي‎ PBS ‏مساعدة. ومنّعت المجموعة التاسعة ب‎ ‏المتكتلة على النحو التالي: أذيب الببتيد 881-40 البضري‎ AB ‏وحضرت ببتيدات‎ ‏كاليفورنيا‎ «Napa ‏نابا‎ » California Peptides Inc. ‏من شركة كاليفورنيا ببتيدز إنك.‎ «AN1528) vo ‏من شركة كاليفورنيا ببتيدز إنك.‎ AN1792) ‏والببتيد 801-42 البشري‎ (ME0S41 ‏الدفعة‎ «CA ‏الدفعة 1080439)؛ قبل تحضير كل مجموعة من جرعات الحقن‎ (California Peptides Inc. ‏مباشرة؛ من مساحيق مجفدة تم تخزينها مجففة عند -١7م. ولهذا الغرض؛ أضيف ؟ ملغم من‎ ‏ودوم المزيج لإنتاج محلول أو‎ deionized water ‏مل من ماء منزوع الأيونات‎ ٠9 ‏الببتيد إلى‎ ‏ومن‎ -AN1792 ‏للذوبان في هذه الخطوة؛ على خلاف‎ SLB 8111528 ‏معلق منتظم نسبياً. وكان‎ Y. ‏تركيزه ضعف‎ PBS) ‏أضعاف‎ ٠١ ‏مركز‎ PBS ‏ميكرولتر من‎ ٠ ‏ثم أضيف جزء صغير بلغ‎ ٠١١ ‏تركيزه‎ sodium phosphate ‏جزيئي وفوسفات صوديوم‎ ١,19 ‏تركيزه‎ NaCl ‏يتكون من‎ ‏وعند هذه المرحلة بدأ 2211528 بالترسب. ودومت المعلقات‎ (V,0 ‏جزيئي؛ درجة الحموضة‎ ‏مرة أخرى وحضنت طوال الليل عند 77م لاستخدامها في اليوم التالي.‎

VA

AB ‏و 0( أضيف الببتيد‎ ١ ‏(المجموعتان‎ alum ‏ولتحضير تركيبة الجرعات من الشب‎ aqueous ‏(محلول هلام هيدروكسيد الألومنيوم المائي‎ Alhydrogel ‏في 5 إلى ألهيدروجل‎ ‏كليفتون‎ (Sargeant, 106. ‏من شركة سارجينت؛ إنك.‎ «AY ‏تركيزه‎ hydroxide gel aluminum

AB ‏ميكروغرام من الببتيد‎ ٠٠١ ‏للوصول إلى تراكيز مقدارها‎ (NI ‏ولاية نيوجيرسي‎ «Clifton ‏أضعاف إلى أن بلغ حجم الجرعة‎ ٠١ ‏تركيزه‎ PBS ‏ملغم من الشب ««اه. وأضيف‎ ١ ‏م الكل‎ ‏تركيزه ضعف. ومن ثم مزج المعلق برفق لمدة ؛ ساعات‎ PBS ‏ميكرولتر في‎ 7٠٠ ‏النهائي‎ ‏تقريبا عند درجة حرارة الغرفة قبل الحقن.‎ ‏(المجموعتان ؟ و 1( أضيف مسحوق مجفد‎ MPL ‏ولتحضير تركيبة الجرعات من‎ ‏هاملتون‎ «.Ribi ImmunoChem Research, Inc. ‏(من شركة ريبي إميونوكيم ريسيرش؛ إنك.‎ ‏إلى محلول ثلاثي إثيل أمين مائي‎ (67039-E0896B ‏الدفعة‎ ¢MT ‏ولاية مونتانا‎ «Hamilton ٠ ‏ملغم/مل ودؤئم المزيج‎ ١ ‏بحيث بلغ التركيز النهائي‎ / ١.7 ‏تركيزه‎ aqueous triethylamine ‏ثانية لإنتتاج‎ Ye ‏لمدة‎ a Ve ‏إلى‎ TO ‏الناتج. وسخن المزيج إلى درجة حرارة تراوحت من‎ ‏معلق منتظم ومعتم قليلاً من المذيلات. وخزن المحلول عند ؛ م. ومن أجل كل مجموعة من‎

PBS ‏ميكروغرام من الببتيد لكل جرعة في 00 ميكرولتر من‎ ٠٠١ ‏جرعات الحقن؛ مزج‎ ‏ميكرولتر من 785 لكل جرعة في‎ ٠٠١ ‏ميكروغرام من .1001 لكل جرعة )00 ميكرولتر) و‎ No ‏مباشرة قبل الاستخدام.‎ borosilicate ‏أنبوب من بوروسليكات‎ ‏ولتحضير تركيبة الجرعات من 0921 (المجموعتان ؟ و 7)؛ أضيف مسحوق مجفد‎ ‏الدفعة‎ (MA ‏ولاية مساشوستس‎ Framingham ‏فرامينجهام‎ <Aquila ‏(من شركة أكويلا‎ ١ ‏بحيث بلغ التركيز النهائي‎ LY ‏درجة الحموضة تتراوح من 6.6 إلى‎ PBS ‏إلى‎ (A7018R ‏أجل مجموعة من جرعات‎ asa Yom ‏ملغم/مل ودوم المزيج الناتج. وخزن المحلول عند‎ x.

Yo PBS ‏ميكرولتر من‎ 5٠ ‏ميكروغرام من الببتيد لكل جرعة في‎ ٠٠١ ‏مزج‎ cial) ‏ميكرولتر من 7185 لكل‎ 1 YO ‏و‎ PBS ‏ميكرولتر من‎ YO ‏ميكروغرام من 9521 لكل جرعة في‎ ‏مباشرة قبل الاستخدام.‎ borosilicate ‏جرعة في أنبوب من بوروسليكات‎ ‏(المجموعة‎ Freund's adjuvant ‏ولتحضير تركيبة الجرعات من مادة فرويند المساعدة‎

Vi) ‏بنسبة‎ PBS ‏ميكرولتقر من‎ ٠٠١ ‏ميكروغرام من 8111792 في‎ ٠٠١ ‏؛)؛ استحلب‎ Yo v44

(حجم:حجم) باستخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة ‎(CFA) Complete Freund's adjuvant‏ في

حجم نهائي بلغ ‎٠‏ ميكرولتر للتمنيع الأول. ومن أجل التمنيعات اللاحقة؛ استحلب مولد المضاد بطريقة مماثلة باستخدام مادة فرويند المساعدة غير ‎Incomplete Freund's A LSJ‏ ‎٠ (IFA) adjuvant‏ ومن أجل التركيبات التي تحتوي على المادة المساعدة الشب ‎MPL calum‏ أو

‎oo‏ 05-21 مزج ‎٠‏ ميكروغرام لكل جرعة من 28211792 أو 2101528 مع ‎١‏ ملغم من الشب ‎alum‏ لكل ‎de ja‏ أو ‎5٠‏ ميكروغرام من .1001 لكل جرعة أو ‎YO‏ ميكروغرام من 05-21 لكل جرعة في حجم نهائي بلغ ‎٠‏ ميكرولتر من ‎PBS‏ وأعطيت عن طريق التطعيم تحث الجلد

‏في الظهر بين العظم الكتفي ‎shoulder blades‏ وبالنسبة للمجموعة التي تلقت ‎FA‏ استحلب

‎٠‏ ميكروغرام من 2101792 بنسبة ‎1:١‏ (حجم:حجم) باستخدام مادة فرويند المساعدة الكاملة

‎(CFA) Complete Freund's adjuvant ٠‏ في حجم نهائي بلغ ميكروائر وأعطيت داخل البريتون من أجل التمنيع الأول؛ أما الجرعات الخمسة اللاحقة فاتبعت بجرعة معززة من نفس المقدار من مولد المناعة في مادة فرويند المساعدة غير الكاملة ‎Incomplete Freund's adjuvant‏ ‎(IFA)‏ وبالنسبة للمجموعة التي تلقت 8211792 بدون مادة مساعدة؛ مزج ‎٠١‏ ميكروغرام من

‏2 مع © ميكروغرام من ثيمروسال ‎thimerosal‏ في حجم نهائي بلغ 00 ميكرولتر من

‎ve‏ 88 وأعطيت الجرعة تحت الجلد. وتلقت المجموعة التاسعة الضابطة ‎Yoo‏ ميكرولتر فقط من ‎PBS‏ وأعطيت الجرعة تحت الجلد. وأعطيت جرعات التمنيع كل أسبوعين ‎Sle all‏ الثلاثة الأولى ثم شهرياً في الأيام صفرء ‎AC OT (YA (VT‏ و ‎.١١‏ ونزفت الحيوانات بعد

‏اليوم السادس إلى السابع من كل تمنيع ابتداءً من الجرعة الثانية لقياس عيارات الأجسام المضادة. وقتلت الحيوانات قتلاً ‎Lamy‏ بعد أسبوع واحد ‎Lui‏ من إعطاء الجرعة النهائية.

‏9 وقيست معدلات الإنتاج ‎outcomes‏ بواسطة معايرة ‎ELISA‏ لقياس مستويات ‎AB‏ و ‎APP‏ في الدماغ وبتقييم كيمياء الأنسجة المناعي للكشف عن وجود لويحات نشوائية في أجزاء الدماغ. وبالإضافة إلى ذلك؛ حددت عيارات الأجسام المضادة المتخصصة ب ‎AB‏ والتشعب المعتمد

‏على ‎AB‏ واستجابات السيتوكين ‎cytokine‏

‏ويبين الجدول 9 أن ‎Jef‏ قيم لعيارات الأجسام المضادة ل 881-42 ظهرت باستخدام

‎CFA vo‏ و 211792 وهي العيارات التي بلغت القيم الذروية بعد التمنيع الرابع ‎GMT)‏ الذروي:

٠١7

)؟) ثم انخفضت بنسبة 709 بعد التمنيع السادس الأخير. وكان متوسط العيارات الذروي ‎peak mean titer‏ الذي ظهر باستخدام ‎MPL‏ مع ‎GMT) AN1792‏ الذروي: ‎(YAAY‏ ‏أقل من ذلك الناتج باستخدام ‎CFA‏ بنسبة 7767 كما أنه تم الوصول ‎a)‏ مبكراً في برنامج التمنيع؛ بعد جرعات؛ وتبعه انخفاض وصل إلى ‎AVA‏ من القيمة الذروية بعد التمتنيع م السادس. وكان متوسط العيارات الذروي الناتج باستخدام ‎QS-21‏ مع ‎:GMT) AN1792‏ )2( أقل بحوالي © أضعاف من ذلك الناتج باستخدام ‎MPL‏ وبالإضافة إلى ذلك؛ كانت حركيات الاستجابة أبطاء حيث لزم إجراء تمنيع إضافي للوصول إلى الاستجابة الذروية. وكانت العيارات الناتجة عن استخدام ‎AN1792‏ المرتبط بشب ‎alum‏ أكبر ‎Gas‏ من تلك الناتجة عن استخدام 08-21 وكانت حركيات الاستجابة أكثر سرعة. وبالنسبة ل ‎AN1792‏ الذي تم ‎ye‏ تصريفه في 5 مع ثيمروسال ‎thimerosal‏ كان تواتر ‎frequency‏ وحجم العيارات أكبر بدرجة ضئيلة من تلك الناتجة ل ‎PBS‏ لوحده. وكانت العيارات الذروية الناتجة باستخدام ‎MPL‏ و ‎GMT) AN1528‏ الذروي: 3 ‎)٠٠١‏ أقل من تلك الناتجة باستخدام ‎ANT792‏ بحوالي 6 أضعاف. وكان 2211528 المرتبط بشب ‎alum‏ ضعيف التوليد للمناعة وذي عيارات منخفضة ظهرت عند بعض الحيوانات فقط. ولم تلاحظ أي استجابات للأجسام المضادة في الحيوانات الضابطة

‎Vo‏ الممنعة ب ‎PBS‏ لوحده.

كلا اع الجدول 6 ‎١ (NYY) ١ (YY) ١ )١/( AN1792 |‏ بحر ‎ARVARN!‏ ‎176١ /MPL‏ ا ‎١١7‏ 16 4 7 الال بحل ‎yoy‏ ححا ‎I‏ ‎(YAY £) (YAY) ARVARY) ARYARY! (Y/Y) AN1792 |‏ ‎(hehe) | (ee) ANIT2 |‏ | مارم | مام | ‎(ene)‏ ‎anise‏ | مغلم ‎Cem Lem Lem Lop)‏ ‎)٠١/١( )١( ١ (MY) ١ (MY) (Yv/ye) AN1528 |‏ ض ‎evn | on |e) ANISZS |‏ | ورم | ‎omy‏ ‏| قيبررسال ‎Ov) | OY) | OV | OY) | (sie) | thimerosal‏ ‎Ooi) | (Vid) |]‏ |(صتراء)] ‎Ooi) | Of)‏ ملاحظات: ' المتوسط الهندسي لعيارات الأجسام المضادة مقاسة مقابل 881-42 7 عدد المستجيبين لكل مجموعة

ا ونتائج تأثير المعالجة ب ‎AN1792‏ أو 81211528 باستخدام مواد مساعدة مختلفة؛ أو ثيمروسال ‎thimerosal‏ على الحمل النشواني القشري ‎cortical amyloid burden‏ في فئران عمرها ‎٠‏ شهراً والمحددة بواسطة ‎ELISA‏ مبينة في الشكل 0). وفي فئران ‎PDAPP‏ الضابطة المعالجة ب ‎PBS‏ كان المستوى المتوسط ل ‎AR‏ الكلي في القشرة بعد ‎١١‏ شهرا ‎١8٠١7‏ ‎٠‏ نانوغرام/غرام. ولوحظت مستويات منخفضة جديرة ‎SUL‏ من ‎AB‏ في الفئران المعالجة ب 2 مع ذىا/فعل 2 مع شب ‎AN1792 ‘alum‏ مع ‎MPL‏ و0521 مع ‎.AN1792‏ ‏وبلغ الانخفاض ‎dad‏ ذات دلالة ‎v,00 > p) statistical significance abl as)‏ ( فقط عند استخدام ‎AN1792‏ مع ‎IFA/CFA‏ إلا أن فعّالية التمنيع في خفض مستويات ‎LS (AP‏ هو مبين في المثالين 1 و17 زادت بشكل جوهري في الفئران التي عمرها ‎١١‏ شهرآً و ‎VA‏ شهراً. ‎٠‏ وبالتالي؛ يتوقع أن تبلغ التراكيب من ‎AN1792‏ مع شب ‎AN1792 calum‏ مع ‎MPL‏ و ‎AN1792‏ ‏مع05-21 على الأقل قيم ذات دلالات إحصائية في معالجة الفئران الأكبر عمراً. وبشكل مغايرء أظهر 2 مع المادة الحافظة ثيمروسال ‎thimerosal‏ مستوى متوسط من ‎AB‏ يمائل ‎Gp i‏ ذلك المستوى في الفئران المعالجة ب ‎PBS‏ وتم الحصول على نتائج مماثلة عند مقارنة مستويات 8842 في القشرة. وبلغ المستوى المتوسط ل 8842 في المجموعات المعالجة ب ‎Vo‏ 5 الضابطة ‎VIVE‏ نانوغرام/غرام. ولوحظت مستويات متوسطة منخفضة جديرة ‎SAIL‏ ‏بلغت ‎VIE 5 170 1149 fF‏ في الفثران المعالجة ب ‎AN1792‏ مع ‎AN1792 (IFA[CFA‏ مع شب ‎calum‏ 2211792 مع ‎AN1792 5 MPL‏ مع 05-21 على الترتيب؛ مع بلوغ الانخفاض قيمة ذات دلالة إحصائية ‎=p)‏ 0+ ,+( للمجموعة المعالجة ب ‎AN1792‏ مع ‎JFA[CFA‏ ‏وبلغ المستوى المتوسط في الفثران المعالجة ب ‎AN1792‏ مع ثيمروسال ‎١١٠9 thimerosal‏ © نانوغرام/غرام من ‎ABA2‏ ‏وأجريت دراسة إضافية للفعالية العلاجية للمادة المساعدة/مولد المناعة في فئران ‎PDAPP‏ المحولة ‎Gua‏ مغايرة الزيجوت ذكور وإناث تراوح عمرها من 9 إلى ‎٠١,*#‏ شهرً. وبلغت مدة الدراسة ‎YO‏ أسبوعاً باستخدام 40-749 حيوان لكل مجموعة معالجة؛ وبناءً على ذلك تراوحت أعمار الحيوانات من ‎١5‏ إلى 16,9 شهرآً عند نهاية الدراسة. وحددت ‎Yo‏ مجموعات المعالجة في الجدول ‎٠١‏ أدناه. ‎vasa‏

Ya ٠١ ‏الجدول‎ ‏المادة المساعدة مولد المناعة محلول التخفيف المنظم كيفية الإعطاء‎ ‏لدرجة الحموضة‎ ‏ميكروغرام)‎ VO) ‏ميكروغرام)‎ YO) ‏ميكروغرام)‎ VO) ‏ميكروغرام)‎ VO) mseense| = || ‏اعم‎ [ees] ‏مغير‎ - TT ‏-ببتيد مولد مضاد متعدد؛‎ 480 :٠١ ‏والمختصرات المستخدمة في الجدول‎

PBS ‏البريتون؛‎ Jala - IP ‏تحت الجلد؛‎ - SQ ‏لذوفان الكزاز (844-471)؛‎ 7 WA ‏خاصية‎ ‏محلول ملحي فوسفاتي منظم لدرجة الحموضة؛ 158-51 - مادة مساعدة متوفرة تجارياً‎ - sucrose _)3_Swfcitrate ‏تركيبة من جليسين 1(0106ع/سيترات‎ - GCS (IFA ‏مشابهة ل‎ 5 ‏مجموعات المعالجة هو نفسه باستثاء‎ AS ‏وكان برنامج التمنيع المستخدم في‎ ‏المجموعة ؛ وهي مجموعة البرنامج المختصر ب 0521/8271792. وحقنت الفثران في‎ ‏الا‎ AY AF ‏ف ىق‎ oF ‏و14 ونزفت في الأسابيع‎ 70 15 17604 cf oY ‏الأسابيع صفرء‎ ‏و ؟ ثمان حقنات وتلقت المجموعة © أربع حقنات أثناء فترة ال‎ ١ ‏و5؟. وتلقت المجموعتان‎ ‏©؟ أسبوع من الدراسة. وتلقت المجموعة 4؛ التي تمثل مجموعة البرنامج المغتصر ب‎ 0-0٠ ‏تحقن هذه المجموعة في‎ alg ‏فقط.‎ A ‏7ء 4 و‎ hua ‏حقنات في الأسابيع‎ 2 ‏الأسابيع المتبقية من الدراسة؛ بالرغم من أنها نزفت في نفس برنامج النزف مثل بقية‎

PBS ‏و‎ QS2I/AN1792 «© ‏مجموعات الدراسة لتتبع انحلال العيار. وعملت المجموعتان ؟ و‎ ‏على الترتيب؛ بصفتها ضوابط ايجابية وسلبية لهذه الدراسة.‎

افلا وحددت العيارات عن طريق معايرة عيار الجسم المضاد ل ‎AR‏ ‏المجموعة ‎١١‏ مجموعة ‎MPL-SE/AN1792‏ أظهرت متوسط عيار هندسي ‎(GMT)‏ ‏ذروي بلغ ‎١7٠٠١‏ في الأسبوع 9؛ انخفض إلى 6147 بلغ ‎٠٠٠٠١‏ في الأسبوع 75. وفي البداية» ارتفعت عيارات ‎MPL-SE‏ بمعدل أعلى من المجموعة الضابطة ‎QS21/AN1792‏ ‏° (المجموعة ؛) إلى حدٍ ما. المجموعة 7؛ مجموعة ‎SA 51/ANT792‏ أظهرت عيارات عالية خلال الدراسة حيث وصلت إلى 6141 يزيد عن ‎٠٠٠٠٠١‏ في الأسابيع التسعة الأخيرة من الدراسة. المجموعة ‎«F‏ المجموعة الضابطة 0521/8141792؛ بلغ العيار قيمته الذروية في الأسبوع ‎VY‏ بقيمة ‎GMT‏ بلغت 16009. ثم انخفض العيار خلال الأسابيع الثمانية اللاحقة ‎٠‏ لينتهي إلى قيمة ‎GMT‏ بلغت ‎AV ee‏ وفشل أحد حيوانات هذه المجموعة في إطلاق عيار خلال فترة إجراء التجربة بالكامل. المجموعة ‎of‏ مجموعة برامج الحقن المختصر ب 0521/8201792؛ بلغ العيار ‎iad‏ ‏ذروية بلغت ‎770٠0‏ في الأسبوع ‎VY‏ بعد © أسابيع من الحقن النهائي. ومن ثم انخفض العيار إلى 0347 بلغ ‎7٠٠١‏ في النزف النهائي (الأسبوع ‎(YO‏ وكما هو الحال في المجموعة ‎ve‏ الضابطة؛ فشل أحد الحيوانات في إطلاق عيار يمكن الكشف عنه؛ في حين فقد حيوان آخر كافة العيار عند نهاية فترة الانحلال. المجموعة 5؛ مجموعة ‎PBS‏ بمفرده؛ لم يكن لها أي عيارات. ولتقييم مستويات ‎AB‏ في القشرة؛ قيس مستوى ‎AB‏ و 281-42 الكلي بواسطة ‎.ELISA‏ ‏ومجمل ‎(Jal‏ شرح أحد نصفي كرة الدماغ لتحديد نسيج القشرة؛ حصان البحرء والمخيخ ثم © تم تجنيسه في محلول جوانيدين ‎guanidine‏ منظم لدرجة الحموضة تركيزه 0 جزيئي وعوير لتحديد مستوى ‎AB‏ في الدماغ. وكانت نتائج ‎AB‏ و ‎AB42‏ الكلية في القشرة متشابهة. ‎Goals‏ ‏تحليل مان-ويتني إحصائي ‎Mann-Whitney statistical analysis‏ لتحديد الدلالة بين المجموعات مع < بقيمة 2 ‎١.05‏ تشير إلى تغير كبير في ‎AB‏ ‏ولكل مجموعات المعالجة مستويات ‎AB‏ كلية منخفضة بشكل ملموس بالمقارنة مع ‎vo‏ المجموعة الضابطة ‎PBS‏ (انظر الجدول ‎.)١١‏ وبينت المجموعة ‎MPL-SE/AN1792‏ أكبر تغير

دلا في ‎AB‏ وكانت أفضل بشكل كبير من مجموعات المعالجة الأخرى. وكانت المجموعة المختصرة ب ‎QS2I/ANITOZ‏ مشابهة من حيث التغير الكلي في ‎AB‏ فيها للمجموعة الضابطة 1 التي تلقت ثمان حقنات. وكانت مستويات ‎AB‏ في المجموعة 51/241792 ‎ISA‏ منخفضة مثل المجموعة (81-7ه)ظطهاانذد "الدع . ° الجدول ‎١١‏ ‏مستويات ‎AR‏ في القشرة ‎Qs-21 Qs-21 ISA MPL-Se PBS‏ (المجموعة ‎(t‏ ‏(نانوغرام/غرام من النسيج) (نانتوغرام/غرام من النسيج) وو ‎Ce Joel ١‏ وفي الختام؛ تعتبر المواد المساعدة ‎<MPL-SE‏ 158-51 و0521 المخلوطة مع ‎AN1792‏ ‏هي الفعالة في حث استجابة مناعية كافية بدرجة كبيرة لإعاقة ترسب ‎BAB‏ القشرة. <. تحليل ‎dau‏ ‎١‏ جمعت الأنسجة لإجراء فحص التغيرات المرضية في الأنسجة ‎histopathologic‏ ‎examination‏ عند انتهاء الدراسات الموصوفة في الأمثلة ‎Ys YY‏ وبالإضافة إلى ذلكء أجريت اختبارات لتحديد الكيمياء السريرية ‎clinical chemistry‏ وطبيعة الدم وأمراضه ‎hematology‏ على عينات الدم النهائية من المثالين ؟ و 7. وقيمت معظم الأعضاء الرئيسية بما في ذلك الدماغ؛ ‎cpulmonary (ll‏ الخلايا اللمفاوية ل101م1700؛ القناة المعدية المعوية ‎gastrointestinal Vo‏ الكبد ‎liver‏ الكلية ‎«kidney‏ الكظر ‎adrenal‏ والغدد التناسلية 800805. ومع أنه لوحظت آفات ‎lesions‏ فرادية في حيوانات الدراسة؛ إلا أنه لم توجد فروق واضحة؛ لا في الأنسجة المصابة ولا في حدة ‎(AY)‏ بين الحيوانات المعالجة ب ‎AN1792‏ والحيوانات غير

ا المعالجة. ولم تلاحظ آفات مرضية نسيجية ‎histopathological lesions‏ فريدة في الحيوانات الممنعة ب ‎AN-1528‏ بالمقارنة مع الحيوانات المعالجة ب ‎PBS‏ أو غير المعالجة. كما لم توجد فروق في مخطط الكيمياء السريرية ‎clinical chemistry profile‏ بين الحيوانات المعالجة بمادة مساعدة والحيوانات المعالجة ب ‎PBS‏ في المثال 7. ومع أنه ‎Ad‏ ارتفاع كبير في قيم العديد ‎٠‏ من الوسائط الدموية بين الحيوانات المعالجة ب 111792 ومادة فرويند المساعدة ‎Freund's‏ ‎adjuvant‏ في المثال 7 بالنسبة إلى الحيوانات المعالجة ب ‎PBS‏ إلا أن هذا النمط من التأثيرات متوقع عند المعالجة بمادة فرويند المساعدة ‎Freund's adjuvant‏ والمعالجة ضد التهاب البريتون ‎33a) peritonitis‏ ولا يشير إلى أي تأثيرات عكسية ناتجة عن المعالجة ب ‎AN1792‏ ومع أنه ليس ‎Te Ja‏ من التقييم السمّي إلا أنه تمت دراسة المرض الدماغي ‎brain pathology‏ في ‎٠‏ > فثران ‎PDAPP‏ بشكل شامل كجزء من نقاط الفعالية النهائية. ولم تلاحظ ‎A‏ تأثيرات عكسية على شكل الدماغ متعلقة بالمعالجة في أي من الدراسات. وتشير هذه النتائج إلى أن المعالجة ب 211792 كانت محتملة ‎Tas‏ وخالية على الأقل من التأثيرات الجانبية بصفة جوهرية. 1. المعالجة الوقائية باستخدام أجسام مضادة ل ‎AB‏ ‏يختبر هذا المثال مقدرة أجسام وحيدة النسيلة ومتعددة النسائل مضادة ل ‎AR‏ مختلفة ‎ve‏ على تثبيط تراكم 8م في أدمغة الفئثران ‎Gina Aad)‏ مغايرة الزيجوت. ‎.١‏ تصميم الدراسة تم الحصول على ‎٠١‏ فأر إناث وذكور من فأران ‎PDAPP‏ المحئولة الجينياً مغايرة الزيجوت»؛ تراوحت أعمارها من 8,9 إلى ‎٠١,©‏ شهرآء من شارلز ريفر لابوراتوري ‎Charles‏ ‎Rivet Laboratory‏ وصنفت الفئران إلى ست مجموعات لمعالجتها بأجسام مضادة مختلفة ‎Y.‏ موجهة ضد ‎AB‏ ووزعت الحيوانات في المجموعات وفقآً للجنس؛ العمر؛ النسسل ومصدر الحيوانات قدر الإمكان. وكما هو مبين في الجدول ١٠؛‏ تشمل الأجسام المضادة أربعة أجسام مضادة فأرية وحيدة النسيلة متخصصة ب ‎AB‏ 2113 (موجهة ضد شقات ‎AB‏ من ‎١‏ إلى ‎(VY‏ ‏5 (موجهة ضد شقات ‎AR‏ من ‎١‏ إلى ‎(VT‏ 777 (موجهة ضد شقات ‎AR‏ من ‎١١‏ إلى ‎YA‏ ‏وترتبط مع ‎AN1792‏ مونمري وليس متكتل) و 21712 (موجهة ضد شقات ‎AB‏ من ‎YY‏ إلى ‎Yo‏ 7؛). وعولجت المجموعة الخامسة بجزء من جسم مضاد متعدد النسائل متخصص ب ‎AB‏

VY. ‏(تم تكوينه بالتمنيع باستخدام 2 متكتل). وتلقت المجموعة الضابطة السلبية المادة‎ ‏بمفردها من غير الجسم المضاد.‎ (PBS ‏المخففة؛‎ ‏ملغم/كغم (على‎ ٠١ ‏وحقنت الأجسام المضادة وحيدة النسيلة بجرعة بلغت حوالى‎ ‏فرض أن أوزان الفئران = 00 غم). وأعطيت جرعات الحقن داخل البريتون كل سبعة أيام‎ ‏ومع أنه قيست‎ .٠٠٠١ ‏أعلى من‎ AB ‏م - بمعدل يكفل المحفاظة على عيارات الأجسام المضادة ل‎ ‏ب 2211792 المتكتل المستخدم‎ Tua ‏نظرآ لأنه لا يرتبط‎ mAb 266 ‏عيار ات منخفضة ل‎ ‏في الاختبارء فقط حوفظ على نفس برنامج‎ capture antigen ‏بصفته مولد المضاد الاحتجازي‎ ‏إعطاء الجرعات لهذه المجموعة. وأوقف إعطاء الجرعات للمجموعة التى تلقت الجسم المضاد‎ ‏وحيد النسيلة 2113 في الأسابيع الثلاثة الأولى نظرا لأن الجسم المضاد تم تصفيته بسرعة في‎ ‏الجسم الحي . ونزفت الحيوانات قبل إعطاء كل جرعة لقياس عيارات الأجسام المضادة.‎ ٠ ‏يوم. وقتلت الحيوانات قتلآ رحيماً‎ ١97 ‏واستمرت المعالجة لمدة ستة أشهر بعدد أيام كلي بلغ‎ ‏بعد أسبوع واحد من إعطاء الجرعة النهائية.‎ ١١ ‏الجدول‎ ‏تصميم التجرية‎ soll ‏المجموعة المعالجة | | »ا | الجسم المضاد للمعالجة_ | نوعية الجسم المضاد | النمط المتمائل‎

NA

‏مخلط‎ ‎161 ‎IgG! ‎101 | aps | mae | ١ 19622 ‏ملاحظات:‎ ‎٠١ ‏أ . عدد الفئثران في المجموعة عند نهاية التجربة. حيث بدأت كل المجموعات ب‎ vo . ic gana ‏حيوانات لكل‎ ‏غير قابل للتطبيق.‎ INA ‏ب.‎ ‏ج. طغفد: جسم مضاد وحيد النسيلة.‎

‎١١١ |‏ ‎sal) . ¥‏ 3 والطرق ‎‘Materials and Methods‏ أ. تحضير الأجسام المضادة ‎Preparation of the Antibodies‏ حضر الجسم المضاد متعدد النسائل ضد ‎AB‏ من الدم الذي جمع من مجموعتين من الحيوانات. حيث تكونت المجموعة الأولى من ‎٠٠١‏ فأر وبستر سويسري ‎Swiss Webster‏ إناث م تراوح عمرها ‎١‏ إلى ‎A‏ أسابيع. وممتعت في الأيام صفرء ‎١5‏ و 74 ب ‎٠٠١‏ ميكروغم من 2 مدمجاً مع ‎LIFA/CFA‏ وأعطيت الحقنة الرابعة في اليوم ‎TT‏ بمقدار نصف جرعة 2. ونزفت الحيوانات ‎Lad‏ عند ذبحها في اليوم ‎£Y‏ وحضر مصل الدم؛ وجمعت الأمصال فنتج حجم كلي بلغ ‎TE‏ مل. وتكونت المجموعة الثانية من ‎YE‏ فأر متماثل النمط الجيني إناث مع فئران ‎PDAPP‏ لكن غير محولة جينياً لجين ‎APP‏ البشري؛ تراوح عمرها من ‎١ - ٠‏ إلى 4 أسابيع. ‎Ci ag‏ في الأيام صفر؛ ‎YA OE‏ و +0 باستخدام ‎٠٠١‏ ميكروغم من 2 مدمجاً مع ‎IFA/CFA‏ ونزفت هذه الحيوانات دما كذلك عند ذبحها بعد ‎TY‏ يومآء وحضر المصل وجمعت الأمصال فنتج حجم كلي بلغ ‎VE‏ مل. وجمعت مجموعتي الأمصال. ونقي جزء الجسم المضاد باستخدام دورتين متعاقبتين من الترسيب باستخدام كبريتات الأمونيوم المشبع ‎saturated ammonium sulfate‏ تركيزه ‎٠‏ 78 وأجري للراسب الأخير عملية ‎ve‏ ديلزة ضد ‎PBS‏ واختبر لتحديد مستوى الذوفان الداخلي. وكان مستوى الذوفان الداخلي ‎endotoxin‏ أقل من ‎١‏ وحدة إنزيمية/ملغم ‎-(EU/mg)‏ ‏وحضرت أجسام مضادة وحيدة النسيلة ضد ‎AB‏ من مائع استسقائي ‎ascites fluid‏ أولاء أزيل الدهن من المائع بإضافة كبريتات ديكستران الصوديوم ‎sodium dextran sulfate‏ المركز إلى المائع الاستسقائي المبرد بالثلج للحصول على تركيز نهائي بلغ 70.774. ومن ثم أضيف © ياه مركز مع التقليب للحصول على تركيز نهائي بلغ 14 ملي جزيئي. وفصل هذا المحلول بالطرد المركزي بتسارع بلغ ‎٠٠٠٠١‏ * تسارع الجاذبية الأرضية وطرحت الكريّة. وقلب المحلول الطافي ‎supematant‏ على الثللج بإضافة حجم مساو من كبريتات الأمونيوم المشبع ‎saturated ammonium sulfate‏ نقطة نقطة. وفصل المحلول ‎3a‏ أخرى بتسارع بلغ ‎god X ٠‏ الجاذبية الأرضية وطرح المحلول الطافي. وأعيد تعليق الكرية وأجري لها ‎Yo‏ عملية ديلزة مقابل ‎٠١‏ ملي جزيثي من ترس-110؛ ‎HE‏ جزيثي من ‎NaCl‏ درجة حموضته

١" ‏ووضع هذا الجزء على عمود من نوع فارماكيا إف بي إل سي سيفاروز كيو‎ .58 ‏ونقي بالتصويل عكسياً باستخدام محلول يتدرج تركيزه‎ Pharmacia FPLC Sepharose Q Column ‏ملي جزيئي من ترس-107؛ درجة‎ ٠١ ‏إلى 7975© جزيئي من 11801 في‎ eH ١,4 ‏من‎ ‎V,0 ‏حموضته‎ ‏عند طول موجة بلغ‎ absorbance ‏وحددت ذروة الجسم المضاد بدرجة الامتصاص‎ ° ‏المنقى‎ ad ‏نانومتر وجمعت الأجزاء المناسبة. وتميز تحضير الجسم‎ ٠ ‏بقياس تركيز البروتين باستخدام طريقة م80 والنقاوة باستخدام طريقة‎ (SDS-PAGE) ‏الرحلان الكهربائي على هلام متعدد أكريلاميد-دوديسيل كبريتات الصوديوم‎ ‏واختبر كذلك التجمع لتحديد‎ sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis ‏وحدة إنزيمية/ملغم. وحددت‎ ١ ‏مستوى الذوفان الداخلي. وكان مستوى الذوفان الداخلي أقل من‎ ys ‏بشكل تحكمي.‎ Yo ‏قيمة عيار بلغت‎ ٠٠١ ‏العيارات التي تقل عن‎

AP and APP Levels in the Brain ‏في الدماغ‎ APP ‏و‎ AB ‏مستويات‎ VY ‏أزيلت‎ CAB ‏ضد‎ alias ‏بعد نحو ستة شهور من المعالجة باستخدام مستحضرات جسم‎ ‏الأدمغة من الحيوانات بعد أن أشبعت بمحلول ملحي . وحضتّر أحد نصفي كرة الدماغ لتحليل‎

APP ‏و‎ AB ‏كيمياء الأنسجة المناعي واستخدم النصف الآخر من كرة الدماغ لتحديد مستويات‎ ve ‏ومصدر بروتين‎ beta amyloid peptide ‏ولقياس تراكيز الأشكال المختلفة من بيتا-ببتيد نشواني‎ ‏شرح نصف كرة الدماغ وحضرت جناسات‎ «amyloid precursor protein (APP) J sii ‏سلفي‎ ‎guanidine ‏من مناطق حصان البحر والمناطق القشرية المخيخية في غوانيدين‎ homogenates ‏تركيزه © جزيئي. وخففت هذه الجناسات على نحو متسلسل وحدد مستوى الببتيد التشواني أو‎ ‏قياسي‎ APP ‏قياسي أو‎ AB ‏بالمقارنة مع مجموعة من عمليات التخفيف باستخدام ببتيد‎ APP > ‘ELISA ‏بتراكيز معروفة من نسق‎ ‏في جناسات‎ ELISA ‏الكلي و 01-42 الكلي المقاسة وفقاً لاختبار‎ AB ‏وتبين مستويات‎ ‏على‎ )١( ‏و‎ )١7( ؛)١١( ‏الكلي في المخيخ في الجداول‎ A ‏القشرة؛ وحصان البحر ومستوى‎ ‏للمجموعة الضابطة؛ التي لقحت باستخدام‎ SAR ‏الترتيب. وكان التركيز المتوسط ل‎ ‏88©؛ أعلى بمقدار 7,1 ضعف في حصان البحر منه في القشرة (بلغت القيمة المتوسطة‎ ve

١١١ ‏نانوغم/غم في نسيج حصان البحر بالمقارنة مع 788 نانوغم/غم للقشرة). وكان‎ 4 ‏المستوى المتوسط في المخيخ للمجموعة الضابطة ( 5 نانوغم/غم من الأنسجة) أكبر من‎ ‏في حصان البحر. وتعتبر هذه المستويات مماثلة لتلك المستويات المذكورة‎ die ‏ضعف‎ ٠ ‏المحولة جينياً مغايرة الزيجوت ولها نفس العمر (انظر ما جاء عن‎ PDAPP ‏مسبقاً لفئران‎ (V94Y ‏ومعاونيه؛‎ Tohnson-Wood et DT Oss 0 ‏مقاس في‎ (AB ‏وبالنسبة للقشرة؛ كان لإحدى المجموعات المعالجة مستوى متوسط من‎ ‏0.06)؛ وقد‎ >P) ‏صورة 881-42 يختلف بشكل كبير عن ذلك المستوى للمجموعة الضابطة‎

AV ‏كما هو مبين في الجدول‎ AB ‏تلقت هذه الحيوانات جسم مضاد متعدد النسائل ضد‎ ‏وانخفض المستوى المتوسط ل 8142م بنسبة 775 بالمقارنة مع المجموعة الضابطة‎ ‏بالمقارنة‎ Zoo ‏المعالجة هذه. وانخفضت المستويات المتوسطة ل 8142م بشكل كبير بنسبة‎ Ve ‏مع المجموعة الضابطة في مجموعة معالجة إضافية؛ وقد أعطيت هذه الحيوانات جرعة‎ (++ 5477 =p) ‏من 1005طغد‎

١ - { 0 1 ‏ل‎ ‎١ ٌ . 0 a ‏وا ا‎ AEE: 0 3 Eyed 1 13 4 2 < gl. ‏ل‎ | . Jt 3 > 8 E ‏هل 23 لا‎ 4 3 1204738 : - 9 + .. ‏ب‎ ‎3 + - 1 ‏ا‎ 3 3 ; 2 94 9, 4

J ‏د‎ 3 5 ‏را ص‎ <|r|=< 4 4, > z= 12 . 0 i 112% . * 0 ‏بكم‎ ‎i I 2 3 < . ol w| > ? 2 1 -— 0 ١ == ‏الإا‎ 3 ِ ‏ا واج‎ : : 1 om >“ ‏و‎ 3 1 7 4

J = lez > ! 1° ~~ =i

SS

3 = i 1 ‏لوا‎ [alge (44)

Tr 3 | * 2 ‏بيدا‎ © | w| ‏سي‎ ‎— | =3 ‏و‎ ‎1| ‏(4ا‎ ‏ابا‎ E 7 : + ‏وا‎ w| ‏كك أ‎ a ‏هداس‎ | << ١ EEE ‏ا‎ ‏نت‎ ‎, ray 4 ‏بزاع اح‎ ١ 3 z - SR .

A “ Rat ‏اح‎ ‎. . -

Fl > Ll

A= 2 Tl 1 alr © | ‏انم‎ ‎rls Tow

Z| oe ola | XZ <| 7١| + +H +H i 2 ‏قاس > احم‎ H ale >| |Z = hdl Id o>] > al Zs ‏اا‎ ‎| a ‏الا اا‎ + — rr pt ‏أ‎ 5 al + +1 +١ ‏ب‎ ‏مايا‎ TD]

Bly Le IT va | TTT

\Yo

وفي حصان البحرء لم تكن النسبة المئوية لمتوسط الانخفاض في ‎AB‏ الكلي المقتسرن بالمعالجة بجسم مضاد متعدد النسائل ضد ‎AB‏ (انخفاض بنسبة 750 ‎=p‏ 065 0,+( كبيرة مثل تلك الملاحظة في القشرة (انخفاض بنسبة ‎(F710‏ (انظر الجدول ‎(VE‏ غير ‎eal‏ تكون القيمة المطلقة للانخفاض كانت أكبر بثلاث أضعاف تقريباً في حصان البحر منها في القشرة؛ ‎٠‏ فقد بلغ الانخفاض الكلي ‎©٠187‏ نانوغرام/غرام من الأنسجة في حصان البحر مقابل ‎VV TOA‏ نانوغرام/غرام من الأنسجة في القشرة. وعندما قيس الانخفاض على أساس مستوى الشكل نشواني الأصل ‎amyloidogenic form‏ بدرجة أكبر ل ‎(AB‏ 881-42 بدلا من ‎AB‏ الكلي؛ كان الانخفاض الناتج باستخدام جسم مضاد متعدد النسائل ‎YO =p) aS‏ +0 ,+( وانخفضت المستويات المتوسطة في المجموعات المعالجة ب 1005 ‎mAb‏ و 266 ‎mAb‏ بنسبة 777 و١77/‏

على الترتيب.

. = a ١ 13 ‏ص‎ ~ 1 3 alg = ‏ا‎ a 1 © a — J ٠" ‏د20‎ ‎3 2323333 ‏د‎ ‎E 3 ‏ا‎ E Ef ‏لا م‎ 2 < =

EK 7> ‏ل = ل‎ 4 2 + >> ِ : i 4 ~~ J ‏ب‎ J] 1 1 2 ‏مي‎ 3 : . 7 3 + = «| > | < 5 J = 4 = : > a) > * - . 0 1 3 * E * a | a | a 3 ‏الا‎ = - “l=! >| < ‏سر‎ J = <l3-| > >| 0 = i 34 | ~~ ~ |< — 3 ‏ريا | ويح س3 7 ل إ‎ 0 . 3 ْ J . ِ 3 1 ‏الي‎ ‎: ١ ‏ا‎ al - < 3 i < 3 « >| a ba + . lz ‏سج | صر‎ > a, el. > !

YF HEE 9

I

J ١١ ‏ا‎ ‎221 >> 83 ~ | ‏س3‎ a = = 3 2 > |» — 3 3 r 95 ‏ا‎ ~ ‏ا و3 ص‎ ‏ا ْ ب‎ 4 7 E 3 a | > ws —

I: > | >» ‏را‎ ~

I <<] ‏عي - > سر | وما‎ glow | > i > ل1١‎ © |» 3 | ‏ويا في‎ ‏تت‎ ‎I ‎I ‎f . Q 3 . a i 3 < > ‏جح ب‎ a ‏2اايوا‎ 1: [YT |< ‏بم أل‎ ~ ١ - - 2 Sols 3 =| ‏به‎ ١١١ 3 | ‏م‎ pod

NY

‏ض‎ ‎i 3 | © > | > < - © | wr 3 = 3 aj,” wo > : | ١ “ 3- ‏س3 | قم‎ 0 << + +H +H + , i ul > 1 ‏ويا | با يمر‎ > = 3] © 3 . >

I =3 ‏سن قا > ويا‎ tg 3 1 ْ — | > > | > < 1 > — | > 3 i

Be —| 3 0 |e Q i *» | 0 ‏سي | حر‎ . 5: <L |< w | ‏من‎ 3 1 3 | wr | > -

I ale © | > 3-413 Q ١ ‏الل‎ <| «| + + + +H i < = —| > ‏صر‎ | > > 1 | w | > > vas el SE ‏قا‎ a ! w |< >| o 3 — | — — | > > /

و وقيس 8م الكلي في المخيخ كذلك (الجدول ‎(VO‏ وأظهرت هذه المجموعات التي أعطيت جرعات من الجسم المضاد متعدد النسائل ضد 88 والجسم المضاد متعدد النسائل 266 انخفاضات كبيرة في مستويات ‎AR‏ الكلي (انخفاض بنسبة 7547 وبنسبة ‎oreo TY =p JET‏ ‎YALE =p‏ مت على الترتيب) وكان للمجموعة المعالجة ب 1005 انخفاض كبير تقريباً 0 (انخفاض بنسبة 75 ‎=p‏ ذخات ‎i‏ ‎vaq‏

0 ) ‘ = + 1 + 1 — : ‏به ىن 3 لا‎ = , i 3 ‏ل‎ 2 ] 1 Ble = * 4 9 ٠ © ‏مب‎ ‏صا‎ ١ ‏سا 000 تا‎ . *

E 2/4 8255] 5X3 4 ‏أ‎ 237 > El 2 J ‏ا‎ 0 58 3 7 |E £ J TFS .4 = 4 = 4 : > ‏لج‎ 1 3 : <7 4 J E

Ww, EC 3 = , 31 = = ‏را‎ <|r-|< 3 ‏ؤ‎ 3

I

3 ‏ياوا اراسي‎ ١ al JST =a al] < = i J 2 7١

A] ‏إ ل‎ 0 - ‏ادا‎ ‎5 ‏.د ا‎ olwlV 2325 [25

NA Es | ‏عا‎ ‎4 . 0 i “ 35s Tins 1

BRE

‏با‎ ‎|= He ‏اي ا‎ ‏شو هاا ما 3 اي‎

F< ‏حابم‎ 3 ‏م كا اانا‎ Hw] 4 9 22 ‏كاي‎ ‎or Tir] 1 va4

١ ‏في القشرة والمخيخ من فثئران معالجة بجسم‎ ELISA ‏كذلك وفقآ ل‎ APP ‏وحدد تركيز‎

LAPP ‏واستخدمت معايرتان مختلفتان لتحديد تركيز‎ PBS ‏مضاد وضابطة؛ ومعالجة ب‎ ‏هو الشكل المفرز من‎ a) APP-WH ‏كل من‎ APP-alpha/FL ‏وتُميز الأولى؛ المشار إليها ب‎ ‘APP ‏من‎ full-length forms (FL) ‏والأشكال كاملة الطول‎ ٠ (AB ‏الذي انقسم في سياق‎ APP ‏في‎ AB ‏فقط. وعلى النقيض من الانخفاض المقترن بالمعالجة ل‎ APP- ‏حين تميز الثانية‎ © ‏فعلياً في كل المجموعات‎ APP ‏مجموعة جزئية من المجموعات المعالجة؛ لم تتغير مستويات‎ ‏المعالجة بالمقارنة مع الحيوانات الضابطة. وتشير هذه النتائج إلى أن التمنيعات بأجسام مضادة‎

APP ‏بدون أن تستتفذ‎ AR MEG ‏ل 8م‎ ‏بشكل كبير في القشسرة؛ وحصان البحر‎ AR ‏ومجمل القول؛ انخفضت مستويات‎ ‏والمخيخ في حيوانات معالجة بجسم مضاد متعدد النسائل وتكوّن ضد 8211792. ولمدى أقل‎ ٠ ‏لل‎ amino terminal region ‏الطرفية‎ sie) ‏أظهرت الأجسام المضادة وحيدة النسيلة لمنطقة‎ ‏كذلك تأثيرات‎ YAY ‏ومن‎ ١176-١ ‏من‎ amino acids ‏وبصفةٍ خاصة أحماض أمينية‎ 81-2 ‏معالجة كبيرة.‎ ‘Histochemical Analyses ‏؛. تحليل كيمياء الأنسجة‎ ‏ب 8م في مجموعات جزئية من أدمغة مأخوذة‎ Lelie ‏قورن شكل لويحات متفاعلة‎ vo 21712 ¢AB42 ‏وجسم مضاد متعدد النسائل ل‎ PBS ‏من فئران في المجموعات المعالجة ب‎ ‏و 1005 نوعياً بتلك الأشكال للدراسات السابقة حيث اتبعت إجراءات التمنيع القياسية‎ 6 ‏باستخدام 042م.‎ amyloid plaques ‏ويحدث التغيير الأكبر في كل من نطاق ومظهر اللويحات النشوانية‎ ‏في الحيوانات الممنعة بالجسم المضاد متعدد النسائل ضد 8842. ويشابه انخفاض الحمل‎ - © ‏المقترنة بالخلايا‎ AB ‏النشواني؛ الذي ينخر شكل اللويحات والتفاعلية المناعية ل‎ ‏التأثيرات الناتجة من إجبراء التمنيع القياسي‎ cell-associated AB immunoreactivity ‏حيث‎ ELISA ‏إلى حد. بعيد وتدعم هذه الملاحظات نتائج‎ standard immunization procedure ‏الكلي و 80842 الكلي بإعطاء الجسم المضاد متعدد‎ AB ‏تحققت انخفاضات كبيرة في كل من‎ ‏النسائل ل 842م.‎ Yo

Vy ‏أيضاً عدد اللويحات النتشوائية في المجموعة‎ J 28 ‏وفي تقييمات نوعية مماثلة؛‎ ‏المعالجة ب 1005 وتغير مظهرها؛ مع إظهار تفاعلية مناعية ل 8م مقترنة بالخلايا.‎ ‏للجسم المضاد متعدد النسائل ضد‎ Ig ‏جزء‎ JB ‏وبالنسبة للحيوانات المعالجة بمجموعة ضابطة؛‎ 7/97 ‏بنسبة‎ plaque burden ‏حمل اللويحات‎ (10D5) ‏وأحد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة‎ AB ‏على حمل‎ Laws ‏وتبين أن ل 21712 التأثير المعتدل‎ (+000 > P) ‏على الترتيب‎ JAY ‏و‎ 0 ‏للدماغ بعد المعالجة ب مرةغطدم‎ Micrographs ‏اللويحات. وتبين الرسوم التخطيطية الدقيقة‎ ‏وجود رواسب مشتتة وعدم وجود عدد من اللويحات المدمجة الأكبر في المجموعة المعالجة‎ ‏ب .0088م بالنسبة إلى الحيوانات المعالجة بالمجموعة الضابطة‎ :Measurement of Antibody Titers ‏قياس عيارات الجسم المصاد‎ . © ‎١‏ نزفت مجموعة جزئية من ثلاثة فئثران مختارة ‎Ll pie‏ من كل مجموعة قبل كل تطعيم داخل البريتون ‎inoculation‏ 1005801600821 بحيث كان عدد مرات النزف الكلي ‎٠‏ مرة. وقيست عيارات الجسم المضاد بصفته جسم مضاد مرتبط ب 8142م باستخدام ‎ELISA‏ الطبقي باستخدام ألواح متعددة العيون بلاستيكية ‎plastic multi-well plates‏ مغلفة ب 81-2 كما وصف بتفصيل في المواد والطرق العامة ‎-General Materials and Methods‏ ويبين ‎١‏ متوسط العيارات لكل نزف في الأشكال من ‎VT‏ إلى ‎VA‏ للجسم المضاد متعدد النسائل والأجسام المضادة وحيدة النسيلة 1025 و 21712 على الترتيب. وبلغ متوسط العيارات نحو ‎٠‏ خلال هذه الفترة الزمنية لتحضير الجسم المضاد متعدد النسائل وكانت أعلى من هذا المستوى بدرجة طفيفة للحيوانات المعالجة ب 1005 و ‎21F12‏ ‏؟. استجابات تشعبية لمفاوية ‎:Lymphoproliferative Responses‏ ‎spleen cells ‏باستخدام خلايا طحال‎ AR ‏قيس تشعب الخلايا اللمفاوية المعتمد على‎ Y.

Cua a ‏أيام من تسريب الجسم المضاد النهائي. واستنبتت الخلايا المحصودة‎ A ‏حصدت بعد‎ ‏لكل عين؛ لمدة © أيام في وجود 881-40 بتركيز بلغ © ميكرو جزيئي للتتبيه.‎ ٠١ ‏بتركيز‎ ‏استنبتت خلايا إضافية باستخدام مسبب انقسام فتيلي للخلايا‎ 0051006 control ‏وكضابط إيجابي‎ ‏استنبتت الخلايا بدون إضسافة‎ negative control ‏وكضابط سلبي‎ «PHA 1 cell mitogen T ‎peptide Ain Yo

VT

‏مسنة ممنعة بشكل سلبي‎ PDAPP ‏مأخوذة من فئران‎ splenocytes ‏طحالية‎ LMA ‏ونبهت‎ ‏بأجسام مضادة ل 8م مختلفة في أنبوب الاختبار باستخدام 8111792 وقيست الاستجابات‎ ‏التشعبية واستجابات السيتوكين ع0ت01ن. وكان الهدف من هذه المعايرات تحديد فيما لو‎ «antigen presentation ‏تمثيل المولدات المضادة‎ passive immunization ‏سهّل التمنيع السلبي‎ ‏ولم تلاحظ استجابات‎ LAN1792 ‏المتخصصة ب‎ T ‏استجابات خلايا‎ priming ‏م ومن ثم برمجة‎ ‏والخلايا المتشعبة المتخصصة ب 8211792 في فئران منتعت بشكل سلبي‎ cytokine ‏السيتوكين‎ ‎AB ‏بأجسام مضادة ل‎

FURTHER STUDY OF PASSIVE IMMUNIZATION ‏دراسة إضافية للتمنيع السلبي‎ .17 ‏وفي دراسة ثانية؛ أعيدت المعالجة باستخدام الجسم المضاد 1015 واختبر جسمان‎ ‏وتلقت‎ 16CT1(ABssaz) ‏إضافيان؛ وحيدا النسيلة (ى306)28 و‎ AB ‏مضادان ل‎ ٠ ‏أو جسم مضاد مطابق للنمط المتمائل غير مناسب‎ PBS ‏المجموعات الضابطة إما‎ ‏وكانت الفئران أكبر من فران الدراسة‎ ٠. (TM2a) irrelevant isotype-matched antibody (TM2a) ‏وكان‎ «(heterozygotes ‏ومغايرة الزيجوت‎ Tog ١١ ‏إلى‎ ١١,8 ‏السابقة (تراوح عمرها من‎ ‏تصميم التجربة مماثلاً بطريقةٍ أخرى. وقلل الجسم المضاد 1005 حمل اللويحات بعد 76 أشهر‎ ‏أو المجموعات الضابطة للجسم‎ PBS ‏بالنسبة إلى‎ 78٠0 ‏المعالجة مرة أخرى بأكبر من‎ pa vo

AB ‏وكان أحد الأجسام المضادة الأخرى ضد‎ .)0.009 =p) ‏المضاد المطابق للنمط المتماثئل‎ ‏وعلى النقيض من‎ .)٠007 =p) ZAT ‏و 306 فعالاً على حدٍ سواء؛ فنتج انخفاض بنسبة‎ ‏ذلك؛ فشل الجسم المضاد الثالث ضد الببتيدء 16011؛ في أن يكون له أي تأثير على حمل‎ ‏ووضحت هذه‎ AB; — ELISA ‏اللويحات. وحصل على نتائج مشابهة باستخدام قياسات‎ ‏في عدم وجود مناعة‎ AB peptide ‏النتائج في أن الجسم المضاد الذي يستجيب ضد الببتيد‎ Y.

JS ‏لكن ليس‎ PDAPP ‏في فئران‎ amyloid deposition ‏خلايا 7 كاف لخفض الترسب النشواني‎ ‏فعّالة. وتكون الأجسام المضادة الموجهة نحو مغيرات خاصية‎ AB ‏الأجسام المضادة ل‎

AB ‏من ١-ه أو من -لال‎ amino acids ‏تشتمل على أحماض أمينية‎ epitopes ‏فعالة بصفة خاصة.‎ va4q

ومجمل ‎(JAN‏ لقد تبين أن الأجسام المضادة المعطاة جرعة بشكل سلبي ضد ‎AB‏ قللت حجم ترسب اللويحات ‎plaque deposition‏ في نموذج فأري مصاب بمرض الزهيمر ‎dic 5. Alzheimer’s disease‏ الحفاظ على تراكيز مصل معتدلة بدرجة كبيرة (تراوحت من ‎7١-٠‏ ميكروغرام/مل)؛ كان للأجسام المضادة منفذآً للوصول إلى ‎ONS‏ بمستويات كافية ‎٠‏ ا لزخرفة اللويحات ‎.B-amyloid plaques B= sill‏ ولم يكن دخول الجسم المضاد إلى ‎CNS‏ ‏بسبب الكسر غير السوي لحاجز الدماغ الدموي ‎blood-brain barrier‏ نظراً لأنه لا توجد هنالك زيادة في النفاذية الوعائية ‎vascular permeability‏ كما قيس عن طريق إيفانز بلو ‎Evans Blue‏ في فثران ‎.PDAPP‏ وبالإضافة إلى ذلك؛ كان تركيز الجسم المضاد في النسيج اللبي الدماغي ‎brain parenchyma‏ لفئثران ‎PDAPP‏ مسنة مماثلاً لذلك التركيز في الفئثران غير ‎Ve‏ المحولة جينياً ‎non-transgenic mice‏ حيث بلغ 701 من تركيز الجسم المضاد في مصل الدم ‎serum‏ (بإهمال النمط المتمائل). ‎XII‏ مراقبة ارتباط الجسم المضاد ‎MONITORING OF ANTIBODY BINDING‏ لتحديد إن كان من الممكن أن تؤثرالأجسام المضادة ل 8م ‎ile‏ 5 في ‎(ONS‏ اختبرت أدمغة مأخوذة من فئران مشبعة بمحلول ملحي ‎saline-perfused mice‏ عند نهاية المثال ‎XI‏ ‎Vo‏ لتحديد وجود أجسام مضادة أعطيت في دم محيطي ‎-peripherally-administered antibodies‏ وعرضت أقسام دماغية قرّية غير ثابثة ‎unfixed cryostat brain sections‏ إلى مفاعل فلورة ‎fluorescent reagent‏ ضد غلوبلين مناعي فأري ‎IgG-Cy3) mouse immunoglobulin‏ مأخوذ من ماعز ضد فأر). وزخرفت اللويحات ضمن دماغ المجموعات المعالجة ب 1005 و 376 بقوة باستخدام الجسم المضاد؛ في حين لم يكن هنالك صبغة في المجموعة المعالجبة ب 16011. © وللكشف عن الحجم الكامل لترسب اللويحات؛ تفاعلت أقسام متسلسلة لكل دماغ مناعياً مع جسم مضاد ل ‎AB‏ ثم مع مفاعل ثانوي ‎.secondary reagent‏ وكان ل 1005 و ‎(3D6‏ بعد الإعطاء في دم محيطي ‎Tha ٠‏ للوصول إلى معظم اللويحات في 0115. وانخفض حمل اللويحات بدرجةٍ كبيرة في هذه المجموعات المعالجة بالمقارنة مع المجموعة المعالجة ب 160611. وبينت هذه البيانات أنه يمكن أن تدخل الأجسام المضادة التي أعطيت في دم محيطي؛ إلى ‎ONS‏ حيث

يمكنها إجراء التنقية النشوائية ‎amyloid clearance‏ مباشرة. ومن المحتمل أن يكون ل 16011 ‎Tain‏ للوصول إلى اللويحات لكن يكون غير ‎Ta‏ على الارتباط. ‎XIV‏ معايرة فحص خارج الجسم الحي لقياس فعالية الجسم المضاد ضد الرواسب النشوانية ‎EX VIVO SCREENING ASSAY FOR ACTIVITY OF AN ANTIBODY AGAINST‏ ‎AMYLOID DEPOSITS ٠‏ لاختبار تأثير الأجسام المضادة على تنقية اللويحات؛ أجريت معايرة خارج الجسم الحي حيث استنبتت خلايا غرائية عصبية دقيقة أولية ‎primary microglial cells‏ باستخدام أقسام قرّية غير ثابتة من أدمغة بشرية مصابة ب ‎AD‏ أو أدمغة ‎PDAPP (Jy‏ مصابة ب ‎AD‏ ‏وحصل على خلايا غرائية عصبية دقيقة من قشور مخية ‎DBA/2N (J il cerebral cortices‏ ‎٠‏ | حديثة الولادة ‎neonate‏ (تراوح عمرها من يوم إلى ثلاثة أيام). وفصلت القشور ميكانيكياً في 7 (المحلول الملحي المتوازن لهانكس ‎Hanks’ Balanced Salt Solution‏ سيغما ‎(Sigma‏ ‏باستخدام ‎DNasel‏ (يحصل عليه من شركة سيغما ‎(Sigma‏ بتركيز ‎٠٠‏ ميكروغرام/مل. ورشحت الخلايا المفصولة باستخدام مصفاة خلايا ‎strainer‏ ااه يبلغ طولها ‎٠٠١‏ ميكرومتر (من نوع فالكون ‎(Falcon‏ وفصلت بالطرد المركزي بسرعة ‎٠٠٠١‏ دورة/دقيقة لمدة خمس ‎vo‏ دقائق. وأعيد تعليق الكريّة ‎pellet‏ في وسط نمو ‎growth medium‏ (يحتوي على غلوكوز ‎glucose‏ مرتفقع الوزن الجزيئي ‎FBS (DMEM‏ تركيزه ‎rmGM-CSF 7٠١‏ تركيزه ‎YO‏ نانوغرام/مل) وطليت الخلايا بكثافة دماغين لكل قارورة استنبات بلاستيكية ‎plastic culture flask‏ من نوع 5. وبعد 7 إلى 9 أيام؛ دورت القوارير على هزاز مداري ‎orbital shaker‏ بسرعة ‎٠٠١‏ دورة/دقيقة لمدة ساعتين عند ‎a TY‏ وفصل المعلق الخلوي ‎cell suspension Y.‏ بالطرد المركزي بسرعة ‎٠٠٠١‏ دورة/دقيقة وأعيد تعليقه في وسط المعايرة. وثبتت الأقسام القرّية ذات قطر ‎٠١‏ ميكرومتر لأدمغة فئران ‎PDAPP‏ مصابة ب ‎AD‏ ‏وأدمغة بشرية مصابة ب ‎AD‏ (بعد فترة قتل زمنية أقل من ؟ ساعات) وهي مذابة على ليسين متعدد ‎poly-lysine‏ يغلف شرائح تغطية زجاجية ‎coverslips‏ ووضعت في عيون لألواح استتبات نسيجية ‎tissue culture plates‏ ذات ‎le YE‏ وغسلت شرائح التغطية مرتين باستخدام وسط ‎1s‏ معايرة يتكون من 115774 (وسط يخلو من مصل خلايا ‎ima‏ يحصل عليه من شركة

Ve ‏بنسيلين‎ cglutamine ‏غلوتامين‎ 7١ ‏تركيزه‎ FBS ‏باستخدام‎ (Gibeo BRL ‏جيبكو بي ار إل‎ ‏(يحصل عليه من‎ rmGM-CSF ‏/ستربتوميسين ه80©0107» و © نانوغم/مل من‎ penicillin ‏مركزة مرتين‎ AP ‏وأضيفت أجسام مضادة ضابطة وضد‎ (D 8 8 ‏شركة آر آند دي‎ ‏ميكروغم/مل نهائي) لمدة ساعة واحدة. ومن ثم بذرت الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة عند‎ 0) ‏خلية/مل من وسط المعايرة. وحوفظ على المستنبتات في حاضن رطب‎ "٠١ x A ‏كثافة بلغت‎ ٠ ‏لمدة 4 7 ساعة أو‎ ( © 538 HCO, ‏و‎ a YY ‏(عند درجة حرارة بلغت‎ humidified incubator / 4 ‏تركيزة‎ paraformaldehyde ‏أكثر. وعند نهاية الحضن؛ ثبتت المستنبتات ببارافورمالدهيد‎ ‏وصبغت الأقسام‎ .7 0١ ‏وجعلت منفذة باستخدام تريتون إكس-١٠٠ 100-100 تركيزه‎ ‏ثم باستخدام المركب الاقتراني من‎ biotinylated 3D6 ‏باستخدام 306 بيوتينيلي‎ ‏(يُحصل عليه من شركة جاكسون اميونو ريسيرش‎ Cy3/ streptavidin ‏ستربتافيدين‎ ٠ ‏وكان بالإمكان رؤية الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة خارجية‎ . (Jackson ImmunoResearch ‏ولوحظت المستنبتات باستخدام مجهر‎ (DAPI) nuclear stain ‏المتشأ عن طريق الصبغة النووية‎ ‏وأخذت‎ (TE300 «Nikon ‏(من نوع نيكون‎ inverted fluorescent microscope ‏فلورة مقلوب‎ ‏من‎ 0181181 camera ‏باستخدام آلة تصوير رقمية‎ photomicrographs ‏الصور المجهرية الضوئية‎ ‏وفيما يتعلق‎ . (Diagnostic instruments ‏(أدوات تشخيصية‎ SPOT ‏نوع 7 باستخدام برنامج‎ ae urea Loe ‏استخلصت المستنبتات في‎ (Western blot analysis ‏لبقعة ويسترن‎ Ta, ‏بتحليل‎ ‏من‎ buffer ‏في عينة محلول منظم لدرجة الحموضة‎ 1:١ ‏جزيئي؛ وخففت بنسبة‎ A ‏تركيزها‎ ‎JAN ‏تركيزه‎ tricine gel ‏وحتملت على هلام تريسين‎ reducing tricine ‏تريسين مختزل‎ ‏عرّضت البقع إلى‎ immobilon ‏وبعد النقل على اموبيلون‎ . (Novex ‏(من نوع نوفكس‎ ‏وطورت باستخدام‎ HRP ‏ثم إلى جسم مضاد لفأر مقترن ب‎ pabAB42 ‏ميكروغم/مل من‎ * x. (Amersham ‏(يُحصل عليه من شركة أميرشام‎ ECL 16011 ‏في وجسود‎ PDAPP ‏وعندما أجريت المعايرة باستخدام أقسام دماغية من‎ ‏الذي يعتبر غير فغّال في الجسم الحي)؛ حوفظ على اللويحات‎ AB ‏(أحد الأجسام المضادة ل‎ ‏وعلى النقيض من ذلك؛ عند استنبات‎ phagocytosis ‏النشوانية.8 سليمة ولم يلاحظ الالتهام‎ ‏أقسام متجاورة في وجود 1005؛ تحركت الرواسب النشوانية بشكل كبير؛ وبينت الخلايا‎ vo

الغرائية العصبية الدقيقة وجود حويصلات ملتهمة ‎phagocytic vesicles‏ عديدة تحتوي على ‎AP‏ ‏وحصل على نتائج مماثلة باستخدام أقسام دماغية مصابة ب م/؛ حيث حث 1105 التهام اللويحات المصابة ب ‎(BAD‏ حين كان 16011 غير فعال. وبالإضافة إلى ذلك؛ زودت المعايرة نتائج مشابهة عندما أجريت باستخدام ‎DIA‏ غرائية عصبية دقيقة فأرية أو بشرية؛ ° وباستخدام أجسام مضادة أولية ‎primate antibodies‏ من فأر ‘ أو من ‎<i‏ ضد ‎AB‏ ‏ويبين الجدول ‎١76‏ إن كان حصل على الارتباط و/أو الالتهام لتخصص ارتباط أجسام مضادة مختلفة عديدة. ويمكن إدراك أن الأجسام المضادة التي ترتبط بمغيرات خاصية ضمن الأحماض الأمينية ‎amino acids‏ من ‎Y=)‏ تعمل على ربط وتنقية الرواسب النشوانية؛ في حين تعمل الأجسام المضادة التي ترتبط بمغيرات خاصية ضمن الأحماض الأمينية ‎amino acids‏ من ‎٠‏ ؛-١٠‏ على ربط الرواسب النشوانية بدون تنقيتها. ولا تعمل الأجسام المضادة التي ترتبط بالطرف الكربوني ‎C-terminal‏ لمغيرات الخاصية للشضق ‎٠١ residue‏ على ربط أو تنقية الرواسب النشوانية.

yr ‏الجدول : تحليل تخصص مغير الخاصية‎

EE

‏مغير الخاصية النمط المتمائتل‎ ‏النوع عند الطرف‎ ‏النتروجيني‎ ‏جسم مضاد وحيد النسيلة‎ + + IgG2b 5-١ 36 + + IgGl ‏ب“‎ 1005 + + IgG2a ‏إلا‎ 2208 - + IgGl Yeo 6EI0 —- + ‏من جرذ‎ 1 ١٠. 148 ‏ا أإحلذا‎ - - ‏من جرذ‎ 1 YA=Y 18G11 — — IgGl ‏يخا‎ 266 - - IgG2b ‏ملحلا‎ 2212 ‏النوع عن الطرف الكربوني‎ - - IgGl ‏.مع‎ 203 = = IgGl ‏-م-7‎ 16011 - = IgG2a EY— 21F12 + + 1-١ ‏لأرنب‎ (CFA) + + v-v ‏لفأر‎ (cra + + ‏لفأر إل‎ sn) + + 9-١ ‏لقرد‎ )05-21( + + ‏لفأر‎ Marin) (AP ‏النتائج التي حصل عليها باستخدام أجسام مضادة عديدة ضد‎ VY ‏ويبين الجدول‎ ‏في معايرة خارج الجسم الحي وتقليل حمل اللويحات في‎ lal! ‏بمقارنة مقدرتها على حث‎

الجسم الحي في دراسات انتقال سلبية. ومع أن 16011 و 21712 يرتبطان مع ببتيد ‎AB‏ تخليقي متكتل ‎aggregated synthetic AB peptide‏ بقوة اجتذاب ‎avidity‏ كبيرة (انظر الجدول ‎١‏ ( إلا أن هذان الجسمان المضادان غير قادرين على التفاعل مع لويحات ‎Bal sis‏ في أقسام دماغية غير ثابتة؛ ولا يستطيعان إحداث الالتهام في المعايرة خارج الجسم الحي؛ ولا يكونا فالين ‎٠‏ في الجسم الحي . وكان 1005 356 والجسم المضاد متعدد النسائل ضد ‎AR‏ كلها 28 ‎Al‏ على كل القياسات ‎ADEN‏ ويرتبط الجسم المضاد 2208 بشكل قوي بالشكل المناظر ل ‎Ap‏ الطبيعي حيث يستخدم حمض أيزو-اسبارتيك ‎Lia se iso-aspartic acid‏ عن حمض أسبارتيك ‎aspartic acid‏ عند الموضعين ‎١‏ و 7. وتبين هذه النتائج أن الفعالية في الجسم ‎all‏ كانت سبب التنقية المباشرة التي يسببها الجسم المضاد للويحات ضمن ‎(ONS‏ وتتنبأ المعايرة خارج الجسم الحي عن المعايرة في الجسم الحي. ولقد استخدمت نفس المعايرة لاختبار تنقية الجسم المضاد ضد جزء سينيوكلين ‎synuclein‏ يشار إليه ب ‎NAC‏ ولقد تبين أن السينيوكلين ‎synuclein‏ عبارة عن بروتين مرافق للويحة النشوانية. وتلامس الجسم المضاد ل ‎NAC‏ مع عينة نسيجية دماغية تحتوي على لويحات نشوائية؛ خلايا غرائية عصبية دقيقة؛ كما ذكر مسبقا. واستخدم مصل الأرنب ‎Rabbit serum Vo‏ بصفته مادة ضابطة. وبينت المراقبة اللاحقة انخفاضاً ‎Us gale‏ في عدد وحجم اللويحات مما يشير إلى فعالية التنقية للجسم المضاد.

ا الجدول ‎:١١7‏ معايرة خارج الجسم ‎al)‏ بصفتها المتنبئ عن المعايرة في الجسم الحي. الجسم المضاد التمط المتماثل قوة الاجتذاب ل ‎AP‏ الارتباط باللويحات الفعالية خارج الفعالية في المتكتل (بيكو جزيني) ‎Bas‏ الجسم الحي الجسم الحي وحيد النسيلة ‎ev.

IgG2b 3D6‏ + + + ‎IgGl 1005‏ 3 + ّ| + + ‎IgGl 16C11‏ 4 - - - ‎ou IgG2a 21F12‏ - - - ‎IgGl TM2a‏ - - - - متعدد التسائل ‎7-١‏ مخلط ‎Te‏ + + + واستخدمت الدراسة المجهرية متحدة البؤر ‎Confocal microscopy‏ للتأكيد على أن ‎AB‏ ‏م كان في الداخل أثناء سير المعايرة خارج الجسم الحي. وفي وجود الأجسام المضادة الضابطة؛ بقيت الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة خارجية المنشاً في المستوى متحد البوّر ‎confocal plane‏ فوق النسيج؛ ولم يكن هناك حويصلات ملتهمة تحتوي على ‎AB‏ وبقيت اللويحات سليمة ضمن القسم. وفي وجود 1005؛ حيث توجد كل مادة اللويحات في ‎Day gall‏ ضمن الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة خارجية ‎Lisa‏ ولتحديد مصير الببتيد الداخلي؛ استخلصت المستنبتات ‎٠١‏ المعالجة ب 1005 باستخدام يوريا ©« تركيزه ‎A‏ جزيئي عند فترات زمنية مختلفة؛ واختبر بتحليل بقعة ويسترن. وبعد فترة زمنية بلغت ساعة واحدة؛ حيث لم يحدث بعد التهام؛ كشف التفاعل مع الجسم المضاد متعدد النسائل ضد ‎AP‏ عن شريط قوي وزنه الجزيثشي ؛ كيلودالتون (مناظر للببتيد ‎(AB‏ وانخفضت التفاعلية المناعية ل 88 في اليوم الأول ولم يكون لها وجود في اليوم الثالث. وبناءآ على ذلك؛ يمكن أن يؤدي الالتهام الذي يسببه الجسم ‎Vo‏ المضاد ل ‎JAR‏ انحلاله. ‎v44‏

AR

Fo- Fo ‏ولتحديد إذا كان الالتهام في المعايرة خارج الجسم الحي يحدث في وسط‎ ‏ومع أن شدفات‎ AB ‏المضاد ل‎ 3D6 ‏حضرت شدفات 17)850772 للجسم المضاد‎ 0 ‏احتفظت بمقدرتها الكلية على التفاعل مع اللويحات؛ إلا أنها غير قادرة على إحداث‎ F(ab')2 ‏وبالإضافة إلى ذلك؛ قد‎ microglial cells ‏الالتهام عن طريق الخلايا الغرائية العصبية الدقيقة‎ ‏الالتهام باستخدام الجسم المضاد الكامل عن طريق مادة مفاعلة ضد مستقبلات‎ blocked ‏يعاق‎ o ‏تحدث‎ al ‏داخل الجسم‎ AB ‏وتشير هذه البيانات إلى أن تنقية‎ . (CD16/32 ‏الفأرية (مضاد‎ Fo ‘Fe ‏بواسطة التهام تسببه مستقبلة‎

Blood Brain Barrier ‏دماغي دموي‎ Jala ‏مرور الأجسام المضاد من خلال‎ XV ‏يحدد هذا المثال تركيز الجسم المضاد الذي صرّف إلى الدماغ بعد الحقن داخل الوريد‎ -PDAPP ‏لفئران سوية أو فقران‎ peripheral tissue ‏إلى نسيج محيطي‎ intravenous injection ٠١ ‏تركيزه 0,4 7. وشرحت‎ NaCl ‏الفئران السوية الضابطة ب‎ PDAPP ‏وأشبعت فئران‎ ‏وتمت مجانسة‎ La a frozen ‏مناطق دماغية (حصان البحر أو القشرة) وجمدت‎ dissected ‏وكشف عن‎ protease inhibitors ‏ومثبطات بروتياز‎ 70,١ ‏تركيزه‎ triton ‏الدماغ في تريتون‎

IgG ‏وغلف‎ .ELISA ‏ل‎ Gy extracts ‏في الخلاصات‎ Immunoglobulin ‏الغلوبلين المناعي‎ capture ‏بصفته مادة مفاعلة احتجازية‎ RIA ‏المأخوذ من ماعز ضد فأر ل 200/2 على لوح‎ yo ‏عه وحضن المصل أو خلاصات الدماغ لمدة ساعة واحدة. وكشف عن الأنماط المتماثلة‎ ‏أو 160250-18 ضد فأر (تقدمه شركة كالتاج‎ 1gG2a-HRP ‏باستخدام معت 01ل‎ 8 ‏بتركيز بلغ‎ ONS ‏وقد وجدت أجسام مضادة؛ بصرف النظر عن النمط المتمائل؛ في‎ (Caltag 18022 ‏من تركيز‎ el ‏في الدم. فعلى سبيل المثالء عندما كان تركيز1801 في الدم‎ ٠٠1 ‏من تركيز 11020 بثلاثة أضعاف»؛ ويوجد كل‎ ed ‏بثلاثة أضعاف؛ كان تركيزه في الدماغ‎ vy.

Gol ‏من مستواهما المعني في الدم. ولوحظت هذه النتيجة في كل من‎ 7٠0,١ ‏منهما بتركيز‎

PDAPP ‏وبذلك لا يكون ل‎ nontransgenic ‏وغير المحولة جينياً‎ transgenic Lia ‏المحوّلة‎ ‏على نحو فريد.‎ leak blood brain barrier ‏تسرب دماغي دموي‎ Gala

Yo

م 7. الفعالية العلاجية لببتيد ‎AB‏ في تشكيلة لببتيسد مولد مضا متعدد ‎Therapeutic Efficacy of AN AB PEPTIDE IN MAP CONFIGURATION‏ أجريت دراسة الفعالية العلاجية للمادة المساعدة/مولد المناعة في ذكور وإناث فثران ‎PDAPP‏ محولة جينياً مغايرة الزيجوت ‎heterozygous‏ تراوح عمرها من 4 إلى ‎٠,6‏ شهر م لاختبار فعالية بروتين اندماجي يشتمل على 2801-7 في تشكيلة ببتيد مولد مضاد متعدد ‎multi-antigenic peptide (MAP)‏ رباعية الأقسام ‎tetrameric‏ كما وصف أعلاه. وبلغت مدة الدراسة ‎Yo‏ أسبوعاً باستخدام من 9؟ إلى 50 حيوان لكل مجموعة معالجة ‎treatment‏ ‏مهع؛ وبناء على ذلك تراوح عمر الحيوانات من ‎١5‏ إلى ‎Tied ١6,5‏ عند نهاية الدراسة. وكانت المنهجية المستخدمة في هذه الدراسة مشابهة لتلك المستخدمة في الدراسة العلاجية ‎ded ٠‏ مساعدة مختلفة في المثال 7117 أعلاه. وحددت مجموعات المعالجة في الجدول ‎YA‏ ‏أدناه. ‏الجدول ‎VA‏ ‏المادة المساعدة مولد المناعة محلول مخفف منظم كيفية الإعطاء لدرجة الحموضة ‎٠٠١‏ ميكروغرام) ميكرولتر) ميكروغرام) ميكرولتر) ‎ETT‏ ‏ميكرولتر) ‏الاختصارات في الجدول: ‎MAP‏ = ببتيد مولد مضاد متعدد ‎TT ¢multi-antigenic peptide‏ = مغير خاصية خلايا 1 لذوفان ‎Vo‏ الكزاز ‎SC f(A EE—-AY ) tetanus toxoid t-cell epitope‏ = تحت الجلد ‎IP ‘subcutaneous‏ = داخل البريتون ‎PBS tintraperitoneally‏ = محلول ملحي منظم بالفوسفات ‎phosphate buffered‏ عدزاه؟؛ ‎GCS‏ = تركيبة من غليسين/سترات/سكروز ‎-glycine/citrate/sucrose‏

VEN

‏متماثلاً لجميع مجموعات المعالجة.‎ immunization schedule ‏وكان جدول التمنيع‎ ‏مع حدوث نزف 516605 في‎ YE 7٠0 VT OY A ‏4؛‎ oF ‏وحقنت الفئران في الأسابيع صفر؛‎ ‏ثمان حقن‎ ١ ‏و‎ FY ء١ ‏وتلقت المجموعات‎ YO ‏و‎ YY AV OY A oF ‏الأسابيع‎ ‏على الترتيب؛ بصفتها ضوابط إيجابية‎ PBS ‏وعملت المجموعات 7؛ 7 0521/8201792 و‎ ‏لهذه الدراسة.‎ positive and negative controls ‏م | وسلبية‎

AB ‏للجسم المضاد ل‎ titer assay ‏وحددت العيارات عن طريق المعايرة العيارية‎ ‏كان لها مستويات عيار‎ (CFA/IFAIMAP ‏المجموعة ١؛ المجموعة(801-7:17)‎ ‏ثم انخفض‎ AY ‏فقط في الأسبوع‎ ١٠١ ‏التي تم الوصول إليها‎ GMT ‏منخفضة. وبلغت ذروة‎ ‏فأرا لم تظهر أي‎ Ye ‏ووجد أن ثلاث فئران من بين ال‎ YO ‏في الأسبوع‎ ٠٠١ ‏إلى 6147 بلغ‎ ‏عند نهاية الدراسة.‎ 50٠0 ‏فئران أخرى عيار بلغ‎ ١7 ‏عيار ولم تتجاوز‎ ٠ ‏المجموعة ؟؛ المجموعة الضابطة 0521/8<11792؛ بلغت ذروة العيار في الأسبوع‎ ‏انخفض العيار خلال الأسابيع الثمانية اللاحقة لينتهي‎ Beg) Teen ‏بلغت‎ GMT ‏بقيمة‎ VY ‏وفشل أحد حيوانات هذه المجموعة في إطلاق عيار خلال سير‎ AY ‏بلغت‎ GMT ‏إلى قيمة‎ ‏التجربة الكامل.‎ ‏وحدهاء لم يكن لها أي عيارات.‎ PBS ‏مجموعة‎ oF ‏المجموعة‎ ‏في القشرة مقارنة‎ AB ‏أظطهرت كلا المجموعتين المعالجتين انخفاض كبير في مستويات‎ ‏وخفضت المجموعة‎ (V4 ‏(انظر الجدول‎ PBS ‏مع المجموعة الضابطة التي أعطيت‎ ‏بالرغم من‎ PBS ‏بدرجةٍ كبيرة بالمقارنة مع المجموعة الضابطة‎ AB «CFA/IFA:MAP(ABL-7)

AB ‏العيارات المنخفضة نسبياً للأجسام المضادة ل‎

VEY

‏في القشرة‎ AB ‏مستويات‎ ١9 ‏الجدول‎ ‎osm | ‏مهس‎ | oes ‏(ناتوغرام/غرام من الأنسجة)‎ ‏(نانوغرام/غرام من الأنسجة)‎ ‏ب ا ل‎ Te] ‏المناعة 881-7248 فعالاً في حث استجابة مناعية كافية‎ alge ‏وفي النهاية؛» يكون‎ ‏بدرجة كبيرة لإعاقة ترسب 8م في القشرة.‎ ‏في القرود‎ AR ‏عمل خريطة مغير خاصية للاستجابة المناعية ل‎ 1

EPITOPE MAPPING OF IMMUNOGENIC RESPONSE TO AB IN MONKEYS °

AN1792 ‏باستخدام‎ immunization ‏للتمنيع‎ primate ‏يحلل هذا المثال استجابة الرئيسيات‎ ‏(4؛ إجنس/مجموعة)‎ monkeys ‏عشرة مجموعة من القرود‎ sa] ‏(أي؛ 81-2). منعت‎ 05-21 ‏ميكروغرام) بالإضافة إلى مادة‎ ٠0١ ‏أو‎ VO ‏(بمقدار جرعة بلغ‎ AN1792 ‏باستخدام‎ ‎sterile dextrose ‏ميكروغرام) أو دكستروز معقم‎ ٠٠١ ‏أو‎ ٠ ‏المساعدة (بمقدار جرعة بلغ‎ ‏المجموعة الضابطة). وقد تلقت جميع الحيوانات حقن داخل‎ DSW) ‏تركيزه #8 في الماء‎ ٠ ‏لجرعات كلية بلغت‎ ٠١ ‏العضل على واحد من جداول الحقن الثلاث كما هو مبين في الجدول‎ ‏مصل (من 4 قرود/جنس/مجموعة) جمعت في اليوم‎ Clie ‏جرعات. وتم تقييم‎ A ‏أو‎ © of ‏من‎ WT ‏(من 7 قرود/جنس/مجموعة) جمعت في اليوم‎ CSF ‏من الدراسة وعينات‎ 5 ‏على الارتباط مع‎ ability ‏لتحديد قدرتها‎ (necropsy ‏الدراسة (عند الشهر +7 من تشريح الجثة‎

APP ‏و‎ AB1-40 ‏ببتيد‎ ٠

VEY

‏تعيين المجموعات ومستويات الجرعة‎ :7١ ‏الجدول‎ ‏المجموعة (ذكور/إناث) | (ميكروغرام/جرعة) | (ميكروغرام/جرعة‎ - ‏أ أ دا » | سس | د | سناسيل‎

Cees [oe [wg ‏أ ا دا‎

Cees |e ‏أو أ ا لا لم‎ ‏أيام إعطاء‎ of ‏الجدول‎ 919 VEY OV VF ‏دش‎ (ov ‏فى فى‎ ١ ‏أيام إعطاء الجرعات‎ ١ ‏أ. الجدول‎

VIAL 8 ‏أيام إعطاء الجرعات ت‎ oF ‏الجدول‎ 119 117 coy 7 ٠ ‏الجرعات‎ ‎DSW ‏ب. مجموعة ضابطة حقنت ب‎ ‏والذي‎ sucrose ‏ج. مادة ناقلة تتكون من محلول منظم يحتوي على غليسين ©170:0ع/ستيرات 68 /سكروز‎ °

AN1792 ‏يعد سواغ ل‎ ‏تم تمييزها‎ linear peptides ‏لببتيدات خطية‎ »©+ array ‏وتم تحديد صفيف الخلاصة‎ — ‏بواسطة الأجسام المضادة الموجودة في عينات المصل المأخوذة من حيوانات حقنت‎ overlapping ‏تقيس ارتباط هذه الأجسام المضادة ببتيدات متراكبة‎ ELISA ‏عن طريق‎ 2 ‏بيوتينيلينية ذات‎ Sia ay ‏تغطي كامل سياق ال 881-42. وتم الحصول على‎ peptides ١

Chiron Technologies ‏من كيرون تكنولوجيز‎ AN1792 partial sequences ‏سياقات جزئية‎

AR

في صورة ببتيدات مكونة من ‎٠١‏ أحماض أمينية مع تداخل 4 شقات ‎residues‏ وخطوة لشق واحد لكل ببتيد (سياق تخليق رقم 7 رقم ‎077١‏ ورقم 5814). وأضيفت مجموعة بيوتينيل للببتيدات ال ‎FY‏ الأولى (من الحمض الأميني الثامن الذي يقع ‎el‏ الطرف النتروجيني ‎N-terminal‏ ل ‎AN1792‏ أسفل الحمض الأميني الرابع والعشرين ل ‎(AN1792‏ ‏° على الطرف الكربوكسيل ‎C-terminal‏ باستخدام رابط من 06016. وتمت إضافة مجموعة بيوتينيل للببتيدات العشرة الأخيرة (إعادة الببتيدات الثلاثة عشر الثانية من السلسلة السابقة) على الطرف النتروجيني باستخدام رابط يتضمن ‎EGEG‏ (سياق تمييز رقم: ‎(V1‏ . وأذييت الببتيدات البيوتينيلينية المجفدة ‎lyophilized‏ عند تركيز بلغ © ملي جزيئي في 11450. وخففت تراكيز الببتيدات إلى © ميكروجزيئي في ‎TTBS‏ (يتكون من توين ‎Tween 20 5١‏ تركيزه 8#.,ءاء حمض هيدروكلوريك تريس ‎Tris HCl‏ تركيزه ‎YO‏ ملي جزيئي؛ ‎١7١ 2 38 ANACL‏ ملي جزيئي؛ .01 تركيزه ‎85,١‏ ملي جزيئي؛ درجة حموضته ‎(V,0‏ وأضيفت أجزاء تحتوي على ‎٠٠١‏ ميكرولتر من محلول تركيزه © ميكروجزيئي بتضاعف في ألواح تحتوي على 41 ‎Lue‏ مطلية ‎Gre‏ باستخدام ستريبتافيدين ‎streptavidin‏ (تقدمها شركة بيسرس ‎(Pierce‏ وحضنت الألواح لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة؛ ثم غسلت أربع مرات ‎vo‏ باستخدام ‎TTBS‏ وخففت عينات مصل في عينة مادة مخففة لا تحتوي على أزيد ‎azide‏ لمعادلة ‎normalize‏ عيسارات» وأضيف ‎٠٠١‏ ميكرولتر لكل عين. وحضنت هذه الألواح لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ثم غسلت أربع مرات باستخدام ‎TTBS‏ وخفف جسم مضاد بشري مأخوذ من ‎Sele‏ مقترن مع ‎HRP‏ (تقدمه شركة جاكسون أميونوريسيرش ‎Jackson‏ ‎(ImmunoResearch‏ بنسبة ‎٠٠٠١٠١١١‏ في عينة مادة مخففة لا تحتوي على أزيد ‎azide‏ وأضيف ‎٠ Y-‏ ميكرولتر لكل عين. وحضنت الألواح مرة أخرى وغسلت. ولإظهار لون التفاعل؛ أضيف» ‎TMB‏ (تقدمه شركة بيرس ‎«(Pierce‏ بمقدار ‎٠٠١‏ ميكرولتر/عين وحضنت لمدة ‎Yo‏ دقيقة قبل إضافة ‎٠١‏ ميكرولتقر من ,11:90 تركيزه ؟ عياري لإيقاف التفاعل. وتم قياس الكثافة البصرية ‎optical density‏ عند طول موجة بلغ 190 نانومتر باستخدام قارئ الواح لوني ‎colorimetric plate reader‏ من في ماكس ‎Vmax‏ أو سبكتروماكس 0600327 Yo

Veo ‏أدى التمنيع باستخدام 2 إلى إنتاج أجسام مضادة في جميع الحيوانات بنسبة‎ ‏وتراوح متوسط العيارات‎ .١78 ‏في جميع المجموعات التي تلقت جرعات عند اليوم‎ ٠ ‏وكان هنالك ميل لأن تكون العيارات أعلى ضمن‎ . AS ‏إلى‎ ١1997 ‏في المجموعات من‎ ‏جدول التمنيع بوجود مولد مضاد أعلى و/أو تركيز مادة مساعدة أعلى؛ لكن لم تظهر اختلافات‎ ‏م كبيرة إحصائياً نتيجة للتفاوت المرتفع في استجابة الحيوان المنفردة للتمنيع.‎ ‏احتوت الأمصال التي احتوت على أجسام المضادة ل 8201792 أيضاً على الأجسام‎ 1159951 ‏وتراوح متوسط العيارات في المجموعة من 1851 إلى‎ AB1-40 ‏المضادة ل‎ ‏لم تظهر اختلافات كبيرة إحصائياً بين المجموعات في اليوم‎ (AN1792 ‏مثل عيارات مضاد‎ ‏معامل‎ Lb) ‏مرتفع‎ positive correlation ‏موجب‎ Jad 5 AN1792 ‏وأظهر الارتباط ب‎ Vve -AB1-40 ‏مع الارتباط ل‎ (+, ATV) Spearmant ‏ارتباط سبيرمان‎ - ‏بحجم وجودة‎ CSF ‏عينة‎ TY 8001792 ‏قرد منع بجداول مختلفة باستخدام‎ £A ‏وأنتج‎ ‎.411792 ‏عيارات موجبة ل‎ (ZY) ‏من هذه القرود‎ Taj TY ‏كافيين للتحليل . وكان ل‎ ‏وبلغت مستويات مضاد‎ YY, VEE 49,44 ‏بمتوسط بلغ‎ YET ‏وتراوحت العيارات من * إلى‎ ‏مما قيس في المصل وأظهر ترابط موجب مرتفع‎ 70,0) 18 CSF ‏من‎ ANT792 ‏مع عيارات المصل. ولم تظهر أية اختلافات عبر المجموعة‎ (YAS ‏(معامل سبيرمان-‎ ye ‏أو بين الأجناس في النسبة المئوية للجسم المضاد في 057. وينسجم مستوى الجسم المضاد في‎ ‏عبر الحاجز‎ peripherally ‏مع الانتقال الموجب للجسم المضاد المتولد محيطياً‎ CSF ‏ال‎ ‏الدماغي الدموي إلى الجهاز العصبي المركزي.‎ ‏بشكل‎ «of AN1792 ‏موجبة مضادة ل‎ CSF ‏وقد أظهر اختبار مجموعة جزئية لعينات‎ ‏بشكل تبادلي‎ CSF ‏مماثل للجسم المضاد في عينات الأمصال؛ يتفاعل الجسم المضاد في‎ vy. ‏وأظهرت عيارات 881-40 ارتباط مرتفع (معامل ارتباط‎ -AB1-40 ‏مع‎ cross reacted ‏المقابلة. ولم يظهر اختبار مجموعة جزئية‎ AN1792 ‏مع عياراتها‎ (HAE = lay ‏هو الحال في أجسام‎ LS APP ‏ارتباط مع‎ AN1792 ‏ذات عيارات مرتفعة ل‎ CSF ‏لعينات‎ ‏الأمصال المضادة.‎

ا ‎Ven‏ ‏وعندما اختبرت أمصال من اليوم ‎١78‏ مقابل سلسلة لتداخل ‎٠١‏ ببتيدات؛ ارتبطت جميع الأجسام المضادة المأخوذة من جميع القرود مع الببتيد الذي يغطي سياقه الأحماض الأمينية من ‎٠١-١‏ لببتيد 8171792 (الأحماض الأمينية 177-707 ل ‎(APP‏ وفي بعض الحيوانات؛ كان هذا الببتيد الوحيد حيث يمكن قياس الارتباط (انظر الشكل ‎(VA‏

° وفي حيوانات أخرىء يمكن قياس تفاعليات أخرى؛ لكن في جميع الحالات كانت التفاعلية لسياق الببتيد عند الطرف النتروجيني هو السائد. ووقعت التفاعليات الإضافية في مجموعتين. الأولى والأكثر ‎dle gud‏ كانت الارتباط ببتيدات تتوسط حول ببتيد 4171792 من ‎١‏ ‏إلى ‎٠١‏ عند الطرف التتروجيني (الشكل ‎٠ )٠١‏ وقد وجه ارتباط من هذا النوع نحو الببتيدات التي تغطي الأحماض الأمينية -8-1؛ 08-1 و7-١١‏ لببتيد 101792م. وتمثل هذه التفاعليات

© المرتبطة مع تلك الخاصية ببتيد ‎Vem)‏ غالبية قصوى للتفاعلية في جميع الحيوانات. وتشير خريطة مغير الخاصية لحيوانات منفردة مع مرور الزمن إلى أن تفاعلية الجسم المضاد لببتيد ‎٠١-١‏ يتخطى الانتشار إلى الببتيدات المجاورة. وهذا يظهر انحياز ‎biasing‏ قوي للاستجابة المناعية للطرف النتروجيني الخاص ببتيد 8201792 مع طرفه الحر شق حمض الأسبارتيك ‎aspartic acid‏ وقد ارتبطت الفعالية الثانية الصغرى القابلة للكشف في بعض الحيوانات مع

‎\o‏ ببتيدات تقع على الطرف الكربوكسيلي للمنطقة الرئيسية وتمركزت حول ببتيدات تغطي أحماض أمينية “-ة1ء ‎YO), 7١-١١‏ للببتيد ‎LANT792‏ وظهرت هذه الفعاليات فقط في

‎٠‏ إلى ‎77١‏ من القرود. ولم يرتبط التفاوت في الاستجابة بين حيوانات مختلفة ‎Jie)‏ سواء أكانت الأحماض الأمينية ‎٠١-١‏ هي مغيرات خاصية متفاعلة حصرية أو سائدة)؛ مع جرعة مولد المضاد/مادة

‏+ - المساعدة؛ جدول إعطاء الجرعات؛ أو عيار الجسم المضاد؛ ومن المحتمل أن يكون انعكاس لكل تعديل وراثي في كل حيوان منفرد.

‏1. وقاية ومعالجة الأشخاص ‎Prevention and Treatment of HUMAN Subjects‏ أجريت محاولة أولى لطور أحادي ‎single-dose‏ الجرعة لتحديد الأمان في البشر. حيث ‎ac‏ عامل ‎therapeutic agent ade‏ على شكل جرعات متزايدة ‎increasing dosage‏ إلى

VEY

¥ ‏تمثل مستوى الفعالية المفترضة؛ ثم تزداد بعامل‎ ١0٠ ‏مرضى مختلفين تبدأ من حوالي‎

Aad ‏أضعاف جرعة الفأر‎ ٠١ ‏حتى يتم الوصول إلى مستوى يبلغ حوالي‎ ‏وأجريت محاولة ثانية لطور لتحديد الفعالية العلاجية. حيث اختير مرضى مصابين أو‎ ‏في مرحلة مبكرة أو في مرحلة متوسطة‎ Alzheimer's disease ‏يحتمل إصابتهم بمرض الزهيمر‎

Alzheimer's Disease ‏م كما حدد وفقاً لمعايير جمعية مرض الزهيمر والاضطرابات المتعلقة به‎ ‏والمرضى الملائمون هم الذين سجلوا في‎ . (ADRDA) and Related Disorders Association

Mini-Mental State Exam ‏بالنسبة للحد الأدنى لاختبار الحالة العقلية‎ 71-١7 ‏المدى من‎ ‏للعيش أثناء مدة الدراسة‎ a yall ‏وتتمثل معايير أخرى للاختيار في احتمالية عيش‎ (MMSE) concomitant medications ‏وإظهارهم عواقب معقدة بدرجة أقل مثل استخدام الأدوية المتزامنة‎ ‏التي قد تتداخل. وتجرى عمليات التقييم الأساسية لوظائف المريض باستخدام مقاييس قياس‎ > ٠ ‏كفطف التي‎ 5 «MMSE ‏مثل‎ «classic psychometric measures ‏القوى النفسية التقليدية‎ ‏المصابين بمسرض‎ aia yall ‏لتقييم حالة وظيفة‎ comprehensive scale ‏تعتبر مقياس شامل‎ ‏مرض الزهيمر.‎ Ala progression ‏الزهيمر. وتزود مقاييس القوى النفسية هذه مقياس لتطور‎ ‏ملائمة كذلك لمراقبة المعالجة.‎ qualitative life scales ‏ويمكن استخدام مقاييس أعمار نوعية‎

Magnetic) ‏ويمكن كذلك مراقبة تطور المرض باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسسي‎ 40 ‏للمريض عن‎ blood profiles ‏ويمكن كذلك مراقبة مخططات الدم‎ .MRI (Resonance Image

T-cells T ‏طريق إجراء معايرات لأجسام مضادة متخصصة بالمولد المناعي واستجابات خلايا‎ .responses ‏وباتباع المقاييس الأساسية؛ يبدأ المرضى بتلقي المعالجة. حيث يختار المرضى‎ blinded ‏بكيفية محجوبة‎ placebo ‏أو دواء غفل‎ ade ‏عشوائياً ويعالجوا باستخدام عامل‎ v. ‏ويراقب المرضى كل ستة أشهر على الأقل. وتحدد الفعالية بانخفاض كبير في تطور‎ fashion ‏المرض في المجموعة المعالجة بالنسبة إلى مجموعة المعالجة باستخدام دواء غفل.‎ ‏مرضى مصابين بفقدان‎ conversion ‏وأجريت محاولة ثانية لطور ثان لتقييم تحول‎

Caray Glad ‏نتيجة مرض غير مرض الزهيمرء يشار إليه‎ early memory loss ‏ذاكرة مبكر‎ ‏أو الضعف الإدراكي‎ (AAMI) age-associated memory impairment ‏الذاكرة المرافق للعمر‎ Yo

VEA

‏إلى مرضى يحتمل إصابتهم بمرض الزهيمر كما‎ ¢(MCI) mild cognitive impairment ‏المعتدل‎ ‏لمعايير 817808. ويختار مرضى معرضين لخطر التحول الكبير إللى مرضى‎ Gy ‏عرّف‎ ‏بفحص أشخاص مرجعيين‎ non-clinical ‏مصابين بمرض الزهيمر من أشخاص لا سريريين‎ ‏لتحديد علامات فقدان الذاكرة المبكر أو أي صعوبات أخرى مقترنة بالأعراض‎ family ‏التاريخ العائلي‎ «pre-Alzheimer's symptomatology ‏التمهيدية لمرض الزهيمر‎ e ‏الجنس‎ cage ‏العمر‎ cgenetic risk factors ‏العوامل الخطرة الوراثية‎ ¢ 5a 3) ‏لمرض‎ history ‏وميزات أخرى توجد للتنبؤ بالخطر الكبير للإصابة بمرض الزهيمر. وتجمع القيم‎ »©* ‏بالإضافة إلى طرق قياس‎ ADAS ‏و‎ MMSE Jedi ‏لطرق قياس ملائمة‎ Gy ‏المسجلة الأساسية‎ ‏أخرى مصممة لتقييم عدد من الأشخاص السويين بشكل كبير. وتقسم أعداد المرضى‎ 8

Jie ‏هؤلاء إلى مجموعات ملائمة بإجراء مقارنة مع المجموعات التي تعطى دواء غفل‎ - ‏مجموعات بديلة تعطى جرعات من العامل العلاجي. ويراقب هؤلاء المرضى عند فترات تبلغ‎ ‏حوالي 6 أشهرء وتعتبر النقطة النهائية لكل مريض عبارة عن تلك النقطة التي يتحول أو لا‎ ‏يتحول عندها المريض أو المريضة إلى مريض تحتمل إصابته بمرض الزهيمر كما حدد عن‎ ‏عند نهاية المراقبة.‎ ADRDA ‏طريق معايير‎ ‏المواد والطرق العامة‎ XIX vo ‏قياس عيارات الجسم المضاد‎ .١ ‏وجمع حوالي‎ tail vein ‏صغير في وريد الذيل‎ nick ‏نزفت فئران عن طريق عمل ثلم‎ guinea ‏ونزفت خنازير هندية‎ .microfuge tube ‏طرد دقيق‎ a gui ‏ميكرولتر من الدم في‎ Yu phd VA ‏قياسها‎ needle ‏»امد ثم باستخدام إبرة‎ hock ‏وعم أولا بحلق منطقة العرقوب الخلفية‎ ‏لمدة‎ clot ‏وجمع الدم في أنابيب طرد دقيقة. وترك الدم ليتخثر‎ metatarsal vein ‏وريد مشط القدم‎ Y. ‏ثم فصل‎ vortexed ‏دوم‎ room temperature (RT) ‏ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة‎ ‏لمدة‎ gravity (g) ‏بتسارع تسارع الجاذبية الأرضية‎ centrifuged ‏بالطرد المركزي‎ ‏دقائق لفصل الدم المتخثر عن المصل. ومن ثم؛ نقل المصل إلى أنبوب طرد دقيق نظيف‎ ٠ ‏وخزن عند درجة حرارة بلغت 4م حتى يعاير.‎ vas

وقيست عيارات الجسم المضاد ‎Gy‏ ل ‎(ELISA‏ وطليت ألواح معايرة دقيقة تحتوي ‎Lue 41‏ (ألواح كوستار ئي آي إيه ‎(Costar EIA‏ باستخدام ‎٠٠١‏ ميكرولقر من محلول يحتوي على ‎٠٠١‏ ميكروغم/مل من 8842م أو ‎SAPP‏ أو مولدات مضادة أخرى كما ‎Las‏ ‏في كل من التقارير الفريدة في ول كوتتج بافر ‎Well Coating Buffer‏ (يحتوي على ° فوسفات صوديوم ‎sodium phosphate‏ بتركيز )+ جزيئي؛ درجة حموضته ‎AO‏ وأزيد صوديوم ‎sodium azide‏ تركيزه 0.1 7) وحوفظ عليه طوال الليل عند درجة حرارة الغرفة. وسحب الدم من العيون وأضيفت الأمصال إلى العيون ‎Teas‏ من تخفيف بنسبة ‎٠٠١:١‏ ‏باستخدام عينة من مادة مخففة (تحتوي على فوسفات صوديوم ‎sodium phosphate‏ تركيزه 084 جزيثي؛ درجة الحموضة ‎NaCl «Vf‏ تركيزه 016 جزيئي؛ زلال مصل بقري ‎bovine serum albumin ٠١‏ تركيزه 7 وثيمروسال ‎thimerosal‏ تركيزه ‎٠١6‏ ”( . وأجريت سبع عمليات تخفيف متسلسلة ‎serial dilutions‏ للعينات مباشرةٌ في الألواح على ثلاث خطوات للوصول إلى نسبة التخفيف النهائية التي بلغت ‎VAY)‏ وحضنت محاليل التخفيف في عيون على ألواح مطلية لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة ‎(RT)‏ ومن ثم غسلت الألواح أربع مرات باستخدام ‎PBS‏ يحتوي على توين ‎Tween 20 ٠١‏ تركيزه 7005 وأضيف ‎Vo‏ الجسم المضاد الثاني ‎Ig‏ المأخوذ من ماعز ‎aia‏ فأر ‎goat anti-mouse‏ مقترن مع بيروكسيداز ‎Jad‏ الخيل ‎Jan) horseradish peroxidase‏ عليه من شركة بويرينجر مانهيم ‎«(Boehringer Mannheim‏ إلى العيون بمقدار ‎٠٠١‏ ميكرولتر بنسبة تخفيف ‎(AV)‏ عينة مادة التخفيف وحضن لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. وغسلت الألواح مرةٌ أخرى أربع مرات في ‎PBS‏ توين ‎Tween 20 ٠١‏ ولتحضير مولد الصبغة ‎«chromogen‏ أضيف ‎٠٠١‏ ‏+ ميكرولتر من سلو ‎Slow TMB TMB‏ (50707؛٠‏ '-رباعي مثيل بنزيدين ‎tetramethyl‏ 3,3°.5,5 ‎benzidine‏ يحصل عليه من شركة بيرس كيميكالز ‎(Pierce Chemicals‏ إلى كل عين وحضن لمدة 10 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. وأوقف التفاعل بإضافة ‎Yo‏ ميكرولتر من ‎H,S0,‏ تركيزه ؟ جزينئي . ومن ثم قرأت شدة اللون ‎color intensity‏ على موليكيولار ديفايسز في ماكس ‎Molecular Devices Vmax‏ (عند طول موجة تراوح من ‎45٠0‏ نانومتر

إلى 150 نانومتر).

ل vo.

وعرفت العيارات بأنها مقلوب ‎reciprocal‏ التخفيف لمصل يعطي نصف أقصسى ‎OD‏ ‎Bale‏ يؤخذ أقصى ‎OD‏ من نسبة تخفيف ابتدائية تبلغ ‎vv vr)‏ ) باستثناء حالات تستخدم فيها عيارات مرتفعة ‎fan‏ حيث يكون من الضروري في هذه الحالة إنتاج أقصى 07. وإذا وقعت قيمة ‎٠‏ 7.5 بين نسبتي التخفيف؛ يتم إجراء استقراء خطي ‎linear extrapolation‏ لحساب العيار

° النهائي . ولحساب المتوسط الهندسي ‎geometric mean‏ لعيارت الجسم المضاد؛ حددت عيارات أقل من ‎٠٠١‏ اختيارياً عيار قيمته ‎Yo‏ ‏". معايرة تشعب الخلايا اللمفقاوية ‎Lymphocyte proliferation assay‏

خدرت ‎anesthetized‏ فثران باستخدام أيزوفلوران ‎isoflurane‏ وأزيلت طحالات ‎Spleens‏

وشطفت ‎rinsed‏ مرتين باستخدام © مل من ‎PBS‏ يحتوي على مصل بقري جنيني

‎(PBS-FBS) fetal bovine serum ٠١‏ غير منشط حرارياً ‎heat-inactivated‏ تركيزه ‎7/٠١‏ ومن ثم جونست في وحدة سنتريكون ‎Centricon unit‏ بزاوية - (تقدمه شركة داكو أيه/أس ‎Dako‏

‎A/S‏ دنمارك ‎(Denmark‏ في 2 مل من ‎PBS-FBS‏ لمدة ‎٠١‏ ثوان بسرعة ‎٠٠١‏ دورة/دقيقة

‏في مكنة ميدي ‎Medimachine‏ (تقدمها شركة داكو ‎(Dako‏ ثم رشحت ‎filtration‏ من خلال

‏غربال من نايلون ‎nylon mesh‏ حجم مسامه ‎٠٠١‏ ميكرون ‎micron‏ وغسلت الخلايا الطحالية

‎Splenocytes Vo‏ مرة واحدة باستخدام ‎٠‏ مل من 055-7835 ثم جعلت على شكل كريات 0م بالطرد المركزي بتسارع 700 ‎X‏ تسارع الجاذبية الأرضية لمدة © دقائق. وحللت

‏10 كريات الدم الحمراء ‎Red blood cells‏ بإعادة تعليق الكرية ‎pellet‏ في © مل من

‏محلول منظم لدرجة الحموضة يحتوي على 101,01 تركيزه ‎١016‏ جزيئي؛ ,10100 تركيزه

‎Aa) ‏جزيثي؛ ودرجة حموضته 4 ,ا لمدة خمس دقائق عند‎ ١,١ ‏تركيزه‎ NaEDTA ‏جزيثي؛‎ ١

‎Y.‏ حرارة الغرفة. ومن ثم غسلت الخلايا البيضاء ‎Leukocytes‏ كما ذكر أعلاه. واستنبتت خلايا الطحال المعزولة حديثاً ( وى خلية/عين) في مجموعات مضاعفة ‎triplicate sets‏ ثلاث مرات

‏في ألواح عيارية دقيقة معالجة في مستنبت نسيجي ذات قاع على شكل حرف [آ ‎U-bottomed‏

‎«Cambridge ‏كامبريدج‎ «Corning ‏به 95 عيناً (إيحصل عليها من شركة كورنينج‎ tissue culture ‏عليها من شركة جي آر‎ as) RPMI1640 ‏في وسط‎ (Massachusetts (MA) ‏مساشوستس‎

‎vo‏ اتش بيوسيانسز ‎<JRH Biosciences‏ مدينة لينيكسا ‎Lenexa‏ كانساس ‎(Kansas (KS)‏ مزود ب

Vo ‏.آ» ومزيج بنسيلين‎ glutamine ‏من 1-غتوتمين‎ ux ‏ملي‎ ‎7٠١ ‏غير منشط حرارياً تركيزه‎ FBS ١ ‏تركيزه‎ Streptomycin ‏7أستر يبتوميسين‎ 72 ‏مختلفة؛ 1-16م‎ AB ‏م. وأضيفت كذلك ببتيدات‎ TY ‏لمدة 97 ساعة عند درجة حرارة بلغت‎ ‏بجرعات‎ reverse sequence protein ‏لبروتين ذي سياق عكسي‎ AB40-1 ‏أو‎ AB1-42 ‏1-0قيفى‎ ‏على أربع خطوات. واستنبتت الخلايا‎ micromola ‏ميكروجزيثي‎ A ‏تتراوح من * إلى‎ ° ‏عليه‎ Jean) Concanavalin A (ConA) ‏الموجودة في العيون الضابطة باستخدام كونكانفالين أيه‎ ‏ميكروغم/سل)‎ ١ ‏0-5275؛ بتركيز‎ OY VO— emu ‏كاتالوج رقم‎ (Sigma ‏من شركة سيجما‎ ‏تيميدين‎ HY ‏الخلايا لمدة ؛ ؟ ساعة أخيرة باستخدام‎ pulsed ‏بدون إضافة بروتين . ونبضت‎ ‏ميكروكوري :0م/عين» يحصل عليه من شركة أميرشال كورب‎ ١ ‏(تركيزه‎ 3H-thymidine ‏ومن ثم؛‎ ٠ (Illinois (IL) ‏ولاية إليونيز‎ cArlington Heights ‏أرلنجتون هايتس‎ cAmersham Corp \ ‏وتم عدها باستخدام عداد‎ UniFilter ‏الخلايا على ألواح من نوع يونيفلتر‎ harvested ‏حصدت‎ ‏(أدوات‎ Top Count Microplate Scintillation Counter ‏علوي التلألوٌ ذو ألواح دقيقة علوية للعد‎

Iinois ‏ولاية إليوتيز‎ 0070076 Grove ‏دونرز جروف‎ Packard Instruments ‏باكارد‎ ‏للتفاعلية الإشعاعية‎ 5 per minute (cpm) ‏تعداد/دقيقة‎ Sosa ‏وعبر عن النتائج في‎ . (av) -Insoluble macromolecules ‏مدمجة في جزيئات ضخمة عديمة للذوبان‎ radioactivity Vo ‏تحضير نسيج الدماغ‎ ¢ hemisphere ‏من أحد نصفي كرة الدماغ‎ brains ‏أزيلت الأدمغة‎ ceuthanasia ‏بعد القتل‎ ‏في حين شرحت مناطق‎ «immunohistochemical analysis ‏لتحليل كيمياء الأنسجة المناعي‎ ‏البحرء القشرة والمخيخ) من نصف كرة الدماغ الآخر واستخدمت لقياس‎ Olean) ‏الدماغ الثلاثة‎ ‏المتخصسص‎ ELISA ‏ل‎ Gay ‏باستخدام معايرات‎ APP ‏المختلفة وأشكال‎ AB ‏تركيز بروتينات‎ ‏ومعاونيه في المرجع سابق الذكر).‎ Johnson-Wood ‏(انظر ما جاء عن جونسون- وود‎ ‏أحجام من محلول منظم‎ ٠١ ‏وتمت مجانسة الأنسجة المقررة لمعايرات 11188 في‎ ‏(يحتوي على هيدروكلوريد‎ LIL ‏مبرد‎ guanidine buffer ‏لدرجة الحموضة من غوانيدين‎ ‏تركيزه © ملي جزيني؛‎ Tris HOI ‏تركيزه © جزيئي؛ تريس-1101‎ guanidine-HCI ‏غوانيدين‎ ‏المعتدل باستخدام جهاز آدمز-‎ agitation ‏وخلطت الجناسات بالرج‎ . (A+ ‏درجة الحموضة‎ yo voy

نوتاتور ‎Adams Nutator‏ (فيشر ‎(Fisher‏ لمدة تتراوح من ثلاث إلى أربع ساعات عند درجة حرارة ‎dial‏ ومن ثم؛ خزنت عند درجة حرارة بلغت ١7م‏ تحت الصفر لتحديد كمية ‎AB‏ و ‎LAPP‏ وبينت تجارب سابقة أن نواتج التحليل كانت ثابتة ‎stable‏ في ظروف التخزين ‎storage‏ ‎condition‏ هذه؛ وأنه يمكن استعادة بروتين ‎AB‏ التخليقي (تقدمه شركة باشيم ‎(Bachem‏ بشكل كمي ‎quantitatively‏ عند إضافتها إلى جناسات نسيج الدماغ الضابط من فثران مولودة في ولادة واحدة ‎hi) mouse littermates‏ ما ‎ela‏ عن جونسون-وود ‎Johnson-Wood‏ ومعاونيه في

المرجع سابق الذكر).

0 قياس مستويات ‎AB‏ ‏خففت جناسات الدماغ بنسبة ‎٠١:١‏ باستخدام مادة مخففة من كازيين ‎Casein‏ مبرد ‎Ve‏ بالثلج (يحتوي على كازيين ‎Casein‏ تركيزه 70 ‎PBS‏ أزيد صوديوم ‎sodium azide‏ تركيزه 0+ ,+ /« أبروتينين ‎aprotinin‏ تركيزه ‎٠١‏ ميكروغم/مل» ‎EDTA‏ تركيزه © ملي جزيئي؛ درجة حموضته + ‎A,‏ وليوبيبتين ‎leupeptin‏ تركيزه ‎٠١‏ ميكروغم/مل) ومن ثم فصلت بالطرد المركزي بتسارع ‎١60٠0١0‏ * تسارع الجاذبية الأرضية لمدة ‎7١0‏ دقيقة عند درجة حرارة بلغت ‎af‏ وحضرت محاليل قياسية ‎standards‏ من بروتين ‎AB‏ التخليقي (أحماض ‎\o‏ أمينية ‎amino acids‏ من ‎)47-١‏ ومحاليل قياسية من ‎APP‏ لتشتمل على غوانيدين ‎guanidine‏ ‏تركيزه ‎whoa ١,5‏ وزلال مصل بقري ‎bovine serum albumin (BSA)‏ تركيزه )700 في التركيب النهائي. ويستخدم ‎ELISA‏ الشطيري ل 8م "الكلي" جسم مضاد وحيد النسيلة ‎771١ monoclonal‏ متخصص بأحماض أمينية من ‎18-١١‏ ل ‎AB‏ (انظر ما جاء عن سيوبيرت ‎Seubert‏ ومعاونيه) بصفته جسم مضاد احتجازي؛ وجسم مضاد وحيد النسيلة 36 ‎ve‏ بيوتينيلي ‎biotinylated‏ متخصص بأحماض أمينية من 0 ل ‎AB‏ (انظر ما جاء عن جونسون-وود ‎Johnson-Wood‏ ومعاونيه) بصفته الجسم المضاد المقرر. ولم يميز الجسم المضاد وحيد النسيلة 306 ببتيد ‎APP‏ المفرز ‎secreted‏ أو ‎APP‏ كامل الطول ‎cfull-length‏ لكنه كشف فقط عن ‎AB Ola‏ مع حمض أسبارتيك عند الطرف الأميني ‎amino-terminal aspartic‏ ‎acid‏ ولهذه المعايرة حد أدنى من التأثر بلغ ‎٠٠‏ نانوغرام/مل ‎١١( Lusi‏ نانو جزيئي) ولم ‎Yo‏ تبين أي تفاعلية تبادلية ‎cross-reactivity‏ لبروتين ‎AB‏ الفأري داخلي ‎endogenous murine Lidl‏ ‎vaq‏

لا

بتراكيز لا تزيد عن ‎١‏ نانوغم/مل (انظر ما ‎ela‏ عن جونسون-وود ‎Johnson-Wood‏ ومعاونيه

في المرجع سابق الذكر). وتستخدم ‎ELISA‏ الشطيرية المتخصصة ب 881-42 002821712 المتخصسص بالأحماض الأمينية من ‎EY-FY‏ ل ‎AB‏ (انظر ما جاء عن جونسون- وود ‎Johnson-Wood‏ ‏٠ه‏ ومعاونيه) بصفته الجسم المضاد الاحتجازي. ويمثل 306 قله البوتينيلي كذلك الجسم المضاد المقرر في هذه المعايرة الذي له حد أدنى من التأثر بلغ حوالي ‎١*5‏ ميكروغم/مل ‎YA)‏ ‏ميكروجزيني؛ انظر ما جاء عن جونسون-وود ‎Johnson-Wood‏ ومعاونيه). وبالنسبة لمعايرات ‎ELISA‏ ل ‎«AB‏ طلي ‎٠‏ ميكرواتر من 8266م (بتركيز ‎٠١‏ ميكروغم/مل) أر ‎mAB‏ ‏2 (تركيزه © ميكروغم/مل) في عيون ألواح معايرية مناعية بها 476 ‎Le‏ (من نوع ‎0٠‏ كوستار ‎(Costar‏ عن طريق حضن طوال الليل عند درجة حرارة الغرفة. وأزيل المحلول عن طريق السفط ‎aspiration‏ وسدت ‎blocked‏ العيون بإضافة ‎٠٠١‏ ميكرولتر من زلال مصسل بشري ‎human serum albumin‏ تركيزه 7/8 في محلول منظم لدرجة الحموضة من ‎PBS‏ ‏لمدة ساعة واحدة على الأقل عند درجة حرارة الغرفة. وأزيل محلول ‎blocking solution aul‏ وخزنت الألواح وهي مجففة عند درجة حرارة بلغت ؛ م إلى حين استخدامها. وأعيد تميه ‎rehydrated Vo‏ الألواح باستخدام محلول منظم لدرجة الحموضة من نوع ووش ‎Wash Buffer‏ [محلول ملحي منظم ‎da al‏ الحموضة- تريس ‎Tris-buffered‏ (يحتوي على ‎NaCl‏ تركيزه ‎٠5‏ جزيئي؛ تريس-1101 ‎Tris-HCI‏ تركيزه 001 جزيئي؛ درجة حموضته ‎(V0‏ بالإضافة إلى توين ‎Tween 20 7١‏ تركيزه 0,05 7] قبل الاستخدام. وأضيفت العينات والمحاليل القياسية على أجزاء مضاعفة ثلاث مرات بمقدار ‎٠٠١‏ ميكرولتر لكل عين ومن ثم حضنت طوال ‎Jy.‏ عند درجة حرارة بلغت ؛أم. وغسلت الألواح ثلاث مرات على الأقل باستخدام المحلول المنظم لدرجة لحموضة من نوع ووش بين كل خطوة من خطوات المعايرة. وأضيف 6ه البيوتينيلي؛ المخفف إلى ‎٠,5‏ ميكروغم/مل في محلول المعايرة ‎pli all‏ باستخدام كازيين ‎Casein‏ (يحتوي على كازيين ‎Casein‏ تركيزه 70,76 ‎PBS‏ توين ‎Tween 20 ٠١‏ تركيزه 70.06 درجة حموضته ‎(VE‏ وحضن في العيون لمدة ساعة واحدة عند درجة ‎ve‏ حرارة الغرفة. وأضيف المركب الاقتراني من بيروكسيداز فجل الخيل-أفيدين ‎avidin.‏

Voi ‏من شركة فيكتور‎ Avidin-HRP HRP ‏(إيحصل على أفيدين‎ horseradish peroxidase conjugate ‏في‎ Ere) ‏والمخفف بنسبة‎ (California (CA) ‏كاليفورنيا‎ «Burlingame ‏بورلنجام‎ «Vector ‏إلى العيون لمدة ساعة واحدة عند‎ Casein Assay Buffer ‏محلول المعايرة المنظم من كازيين‎ ‏في‎ SLOW-TMP «colorimetric substrate ‏درجة حرارة الغرفة. وأضيفت مادة أساس لونية‎ ‏دقيقة عند درجبة‎ Vo ‏وتركت لتتفاعل لمدة‎ «(Pierce ‏(من شركة بيرس‎ ELISA ‏م معايرة‎ ‏ميكرولتر مسن‎ YO ‏بإضافة‎ enzymatic reaction ‏حرارة الغرفة؛ ثم أوقف التفاعل الأنزيمي‎ ‏عياري . وحددت كمية منتج التفاعل باستخدام موليكيولار ديفايسز في ماكس‎ ١ ‏تركيزه‎ H,S0, 156 ‏نانومتر و‎ for ‏عند طول موجة بلغت‎ absorbance ‏لقياس الفرق في الامتصاص‎ ‏تانومتر.‎ ‎APP ‏قياس مستويات‎ 1 86 ‏حيث ميزت الأولى؛ المشار‎ LAPP ‏استخدام معايرتان مختلفتان لتحديد تركيز‎ ‏وكانت المعايرة‎ LAPP ‏من‎ (FL) ‏إليها ب 1/-<ئه كل من »-”م والأشكال كاملة الطول‎

VY ‏المفرز بما في ذلك أول‎ APP APP-/FL ‏الثانية متخصصة ب 2317-8. وحددت معايرة‎ ‏غير متخصسص بموقع‎ (2H3) ‏ونظراً لأن الجسم المضاد المقرر‎ Ap ‏حمض أميني ل‎

APP69S ‏الذي يوجد بين الأحماض الأمينية من 117-7617 ل‎ a-clip-site ‏الشبك عند‎ yo 174-١177 ‏ص‎ (YEA ‏العدد‎ (Science ‏ومعاونيه في مجلة‎ Esch ‏عن إتش‎ ela ‏(انظر ما‎ ‏وتقترح تجارب أولية‎ (APPFL) ‏كامل الطول‎ APP ‏ويميز هذا الاختبار كذلك‎ f(a) 994) cytoplasmic ‏إلى الذيل السيتوبلازمي‎ immobilized APP ‏المثبت‎ APP ‏تستخدم أجسام مضادة ل‎

TV ‏لأن نسبة تتراوح من‎ APPEL ‏جناسات الدماغ من‎ deplete ‏لاستتزاف‎ APP-FL — tail ‏(البيانات غير مبينة). ويكون الجسم المضاد‎ APP-FL ‏تمثل‎ APP-o/FL APP ‏تقريباً من‎ 6 v. ‏يتكون‎ Cus mAb 8ES ‏عبارة عن‎ APP-o ‏ومعايرة‎ APP-a/FL ‏الاحتجازي لكل من معايرة‎

Games ‏عن جيمس‎ ela ‏(انظر ما‎ APP69S ‏لشكل‎ 04Y ‏ضد أحماض أمينية من ؛؛؛ إلى‎ 2113 ‏عبارة عن‎ «APP-a/FL ‏المقرر لمعايرة‎ mAb ‏ومعاونوه في المرجع سابق الذكر) . ويكون‎ ‏(انظر ما جاء عن‎ APP69S ‏وهو متخصص لأحماض أمينية من 07-841 ل‎ «mAb ‏ومعاونيه في المرجع سابق الذكر) ويكون الجسم المضاد‎ Johnson-Wood ‏جونسون-<وود‎ Yo

Voo

المقرر لمعايرة ‎APP-a‏ عبارة عن مشتقة بيوتيتيلية ‎«mAb16H9 — 1 biotinylated derivative‏ الذي تكون ضد أحماض أمينية من ‎Tee‏ إلى ‎+1١‏ ل ‎LAPP‏ وبلغ الحد الأدنى للتأثر في معايرة متخصصة ب ‎APP-0/FL‏ حو الي ‎١١‏ نانوغرام/مل ‎١5١(‏ بيكو جزيئي) (انظر ما ‎sla‏ ‏عن جونسون-وود ‎Johnson-Wood‏ ومعاونيه) وبلغ التأثر للمعايرة المتخصصة ب ‎YY APP-a‏ ‎٠‏ نانوغرام/مل (7, نانو جزيئي). وبالنسبة لكل من المعايرتين المتخصصتين ب ‎APP‏ يطلى 5ه على العيون في ألواح 218 تحتوي على 976 ‎Lie‏ كما وصف أعلاه ل 266طخد. واستخدم »-807 المفرز المنقى المأشوب ‎recombinant‏ بصفته معيار مرجعي للمعايرة المتخصصة ب ‎APP-o‏ والمعايرة المتخصصة ب ‎APP-o/FL‏ (انظر ما ‎ela‏ عن إتش ‎Esch‏ ‏ومعاونيه في المرجع سابق الذكر) . وخففت عينات جناسة الدماغ في غوانيدين ‎guanidine‏ ‎٠‏ تركيزه © جزيئي بنسبة ‎٠0١:١‏ في عينة من مادة مخففة ل ‎ELISA‏ (تحتوي على محلول منظم لدرجة الحموضة بالفوسفات ‎phosphate buffer‏ تركيزه 0014 جزيثي؛ درجة حموضته ,7 زلال مصل بقري ‎bovine serum albumin‏ تركيزه 1 7 ثيمروسال ‎thimerosal‏ تركيزه ,ءا ‎NaCl‏ تركيزه ,© جزيئي؛ 1040 تركيزه ‎0٠‏ 7). ومن ثم خففت بنسبة ‎54:١‏ في عينة من مادة مخففة تحتوي على غوانيدين ‎guanidine‏ تركيزه ‎٠١,8‏ جزيثي ومن ثم فصلت ‎ye‏ الجناسات المخففة بالطرد المركزي بتسارع ‎us‏ * تسارع الجاذبية الأرضية لمدة ‎١١‏ ‏ثانية عند درجة حرارة الغرفة. وأضيفت محاليل ‎APP‏ القياسية والعينات إلى اللوح على مقادير مضاعفة مرتين وحضنت لمدة ساعة ونصف عند درجة حرارة الغرفة. وحضن الجسم المضاد المقرر البيوتينيلي 3 أو 1639 مع العينات لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. وحضن ستربتافيدين --فوسفاتاز قلوي ‎Streptavidin-alkaline phosphatase‏ (تقدمه شركة © بويرينجر مانهيم ‎(Boehringer Mannheim‏ المخفف بنسبة ‎٠٠٠ ١:١‏ في عينة من مادة مخففة؛ في العيون لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. وأضيفت مادة الأساس المفلورة 1 من فوسفات 4 -مثيل- أمبيليفيريل ‎4-methyl-umbellipheryl-phosphate‏ للحضن لمدة © دقيقة عند درجة حرارة الغرفة ‎Ol jig‏ الأالواح على مقياس الفلورة ‎fluorimeter‏ ‏سيتوفلور تي أم ‎Cytofluor tm‏ 7750 (مللي بور ‎(Millipore‏ عند إثارة ‎excitation‏ بلغت

‎FO Yo‏ نانومتر وانبعاث ‎emission‏ بلغ ‎٠‏ 55 نانومتر.

‎vaq

احا ا كيمياء الأنسجة المناعي ثبتت الأدمعة لمدة ثلاثة أيام عند درجة حرارة بلغت ‎a fe‏ في بارافورماليدهيد ‎paraformaldehyde‏ تركيزه 4 / في ‎PBS‏ ومن ثم خزنت من يوم واحد إلى سبعة أيام عند درجة حرارة بلغت 4 مم في بارافورمالدهيد ‎paraformaldehyde‏ تركيزه ‎7/١‏ و ‎PBS‏ حتى قطعث ° 1.. وقطعت أقسام تاجية ‎coronal sections‏ بلغت سماكتها 0٠؛‏ ميكرون على جهاز هزاز ‎vibratome‏ عند درجة حرارة الغرفة وخزنت في مادة حافظة قريَّة ‎cryoprotectant‏ (تحتوي على غليسرول ‎glycerol‏ تركيزه + ‎ZY‏ إثيلين غليكول ‎ethylene glycol‏ تركيزه ‎7.7١٠‏ في محلول منظم لدرجة الحموضة بالفوسفات ‎(phosphate‏ عند درجة حرارة بلغت ‎Yo‏ 5 تحت الصفر قبل المعالجة الكيميائية المناعية للأنسجة. ولكل ‎led‏ حضنت ستة أقسام عند مستوى ‎٠١‏ حصان البحر الظهري ‎<dorsal hippocampus‏ فصل كل منها على فترات متعاقبة بمقدار ‎Yeo‏ ‏ميكرومتر؛ طوال الليل باستخدام أحد الأجسام المضادة التالية: ‎)١(‏ جسم مضاد بيوتينيلي ضد ‎mAD) AB‏ من نوع ‎3D6‏ متخصص ب ‎AB‏ البشري) مخفف إلى تركيز بلغ ¥ ميكروغرام/مل في ‎PBS‏ ومصل حصان تركيزه )4 أو (7) ‎mAb‏ بيوتينيلي متخصص ب ‎APP‏ البشري؛ من نوع ‎BES‏ ومخفف إلى تركيز بلغ ؟ ميكروغرام/مل في ‎PBS‏ ومصل حصان تركيزه 0١.71؛‏ ‎٠‏ أو ‎(FY)‏ د متخصص بيروتين حمضي ليفي غرائي عصبي ‎glial fibrillary acidic protein‏ ‎GFAP)‏ من شركة سيجما كيميكال كو . ‎(Sigma Chemical Co‏ مخفف بنسبة ‎500:١‏ باستخدام تريتون ‎Triton X-100 V+ «=X‏ تركيزه 70,75 ومصل حصان تركيزه )7 في محلول ملحي منظم-تريس ‎(Tris-buffered saline‏ درجة ‎=4iia ges‏ 4 ,لا ‎¢(TBS)‏ أو )£( ‎mAb‏ متخصص ب 0115 ؛ مولد مضاد ل ‎MAC-1‏ (يحصل عليه من شركة كيميكون نترناشيوثال ‎Chemicon‏ ‎(International Y.‏ مخفف بنسبة ‎٠٠١:١‏ باستخدام تريتون ‎Trion-X ٠٠١-<*‏ تركيزه ‎74X06‏ ‏ومصل أرنب ‎rabbit serum‏ تركيزه ‎7/١‏ في ‎(TBS‏ أو )©( ‎mAb‏ متخصص بالمولد المضاد ل ‎MHC‏ من الصنف ؟؛ (تقدمه شركة فارمينجين ‎(Pharmingen‏ ومخفف بنسبة ‎٠٠١:١‏ باستخدام تريتون ‎Trion-X ٠٠١-<‏ تركيزه 70,76 ومصل أرنب تركيزه ‎7/١‏ في 185؛ أر )1( ‎mAb‏ ‏مأخوذ من جرذ متخصص ب 43 ‎CD‏ (تقدمه شركة فارمينجين ‎(Pharmingen‏ مخفف بنسبة ‎٠0١:١ ve‏ باستخدام مصل أرنب تركيزه )74 في ‎PBS‏ أو ‎mAb (VY)‏ مأخوذ من جرذ متخصص

١7 ‏باستخدام مصسل‎ ٠٠١:١ ‏مخفف بنسبة‎ (Pharmingen ‏(تقدمه شركة فارمينجين‎ CD ‏با4582‎ ‏مأخوذ من جرذ‎ AR ‏جسم مضاد وحيد النسيلة ل‎ (A) ‏أو‎ PBS ‏في‎ 7١ ‏أرتب تركيزه‎ ٠٠١:١ ‏مخفف بنسبة‎ (Pharmingen ‏(تقدمه شركة فارمينجين‎ CD 45RB ‏متخصص ب‎ ‏مأخوذ‎ AB ‏؛ أو )3( جسم مضاد وحيد النسيلة ل‎ PBS ‏في‎ 7١ ‏باستخدام مصل أرنب تركيزه‎ ٠٠١:١ ‏مخفف بنسبة‎ (Pharmingen ‏(تقدمه شركة فارمينجين‎ CD 45 ‏متخصص ب‎ Ja ‏من‎ ٠ polyclonal ‏جسم مضاد متعدد التنسائل‎ )٠١( ‏في 5؛ أو‎ ZY ‏باستخدام مصل أرنب تركيزه‎ ‏(تقدمه شركة فارمينجين‎ CD3e ‏متخصص ب‎ hamster ued ‏مأخوذ من‎ AR ‏بيوتينيلي ل‎ mAb (VV) sl PBS (37) ‏باستخدام مصل أرنب تركيزه‎ ٠٠١:١ ‏مخفف بنسبة‎ (Pharmingen ٠٠١:١ ‏مخفف بنسبة‎ (Serotec ‏مأخوذ من جرذ متخصص ب 003 (تقدمه شركة سيروتك‎ ‏يفتقر إلى‎ PBS ‏محلول من‎ (VY) ‏أو باستخدام‎ PBS ‏في‎ 7١ ‏باستخدام مصل أرنب تركيزه‎ - .7١ ‏جسم مضاد أولي يحتوي على مصل حصان سوي تركيزه‎ ١7-6 ‏7و‎ ١ ‏وعولجت الأقسام المتفاعلة مع محاليل الجسم المضاد المذكورة في‎ ‏وبيروكسيد هيدروجين‎ ٠.١ Trion-X ‏تركيزه‎ ٠٠١-<© ‏باستخدام تريتون‎ Gras ‏أعلاه‎ ‏دقيقة عند درجة حرارة الغرفة لإعاقة‎ ٠١ ‏تركيزه %,+/ في 5 لمدة‎ hydrogen peroxide ‏ومن ثم حضنت طوال الليل عند درجة‎ endogenous peroxidase ‏البيروكسيداز داخلي المنشأ‎ yo ‏حرارة بلغت ؛أم باستخدام جسم مضاد أولي. ومن ثم تفاعلت الأقسام المتفاعلة مع الأجسام‎ ‏لمدة ساعة واحدة عند درجة‎ CD3e ‏من نوع 306 أو 8155 أو‎ (mAbs) ‏المضادة وحيدة النسيلة‎ horseradish ‏حرارة الغرفة مع متراكب من بيروكسيداز فجل الخيل وأفيدين وبيوتين‎

Vor) ‏"م" و "8 مخفف بنسبة‎ kit ‏باستخدام مكونات طقم‎ peroxidase-avidin-biotin complex ‏فيكتور لاب‎ (Vector Elite Standard Kit ‏(من شركة فيكتور إيليت ستاندرد كت‎ PBS ‏في‎ Y. ‏وحضنت أقسام‎ ٠ (California (CA) ‏كاليفورنيا‎ (Burlingame ‏بورلينجام‎ «Vector Labs

CD3 ‏و‎ CD 45 «CD 45RB «CD 45RA ‏متفاعلة مع أجسام مضادة متخصصة. ب‎ ‏الخالي من الجسم المضاد الأولي لمدة ساعة واحدة عند درجة‎ PBS ‏وحضن محلول‎ ‏مخفف بنسبة‎ (Vector ‏بيوتينيلي ضد جرذ (تقدمه شركة فيكتور‎ IgG ‏حرارة الغرفة باستخدام‎

Vor) ‏مخفف بنسبة‎ (Vector ‏بيوتينيلي ضد فأر (تقدمه شركة فيكتور‎ IgG ‏أو‎ PBS ‏في‎ 25:١ ve

١٠١ ‏على الترتيب. ومن ثم تفاعلت الأقسام لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة‎ PBS ‏في‎ ‎horseradish peroxidase-avidin-biotin ‏أفيدين -بيوتين‎ - (Lal Jad ‏باستخدام متراكب بيروكسيداز‎ ‏في 5 (من شركة فيكتور إيليت‎ 79:١ ‏باستخدام مكونات "م" و "8" مخفف بنسبة‎ complex «Burlingame ‏بورلينجام‎ «Vector Labs ‏فيكتور لاب‎ «Vector Elite Standard Kit ‏ستاندرد كيت‎

كاليفورنيا ‎(CA)‏ منصوطتله).

‎Caaf‏ الأقسام في بيروكسيد هيدروجين ‎hydrogen peroxide‏ تركيزه ‎Ys Zoo, oN‏ ل ثنائي أمينو بنزيدين ‎3S 55 (DAB) 3,3-diaminobenzidine‏ 5 0+ ,+7 عند درجة حرارة الغرفة. وعولجت الأقسام المتخصصة للحضن مع أجسام مضادة متخصصة ب ‎MHC‏ من الصنف ‎١‏ ‎GFAP-‏ و ‎MAC-1-‏ مسبقاً باستخدام بيروكسيد هيدروجين ‎hydrogen peroxide‏ تركيزه ‎A‏ ‏- عند درجة حرارة الغرفة لإعاقة ‎peroxidase ay yl‏ داخلي المنشأ ثم حضنها طوال الليل مع جسم مضاد أولي عند درجة حرارة بلغت ‎of‏ وحضنت الأقسام ‎Adela)‏ مع الجسم المضاد المتخصص ب ‎GFAP‏ لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة مع ‎IgG‏ بيوتينيلي ضد فأر ناتج في حصان (من فيكتور لابوراتوريز ‎Vector Laboratories‏ فيكتاستين إيليت ايه بي سي كيت ‎(Vectastain Elite ABC Kit‏ مخفف بنسبة ‎500:١‏ باستخدام 5. ومن ثم تفاعلت ‎yo‏ الأقسام لمدة ساعة واحدة مع متراكب من أفيدين-بيوتين-بيروكسيداز ‎avidin-biotin-peroxidase‏ ‏(من فيكتور لابوراتوريز ‎(Vector Laboratories‏ فيكتاستين ايليت ايه بي سي كيت ‎Vectastain‏ ‎(Elite ABC Kit‏ مخفف بنسبة ‎Vo vv)‏ باستخدام ‎TBS‏ وتفاعلت أقسام حضنت مع جسم مضاد وحيد النسيلة متخصص ب ‎MACH!‏ أو ‎MHC‏ من الصنف 7 بصفته جسم مضاد أولي لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة مع 6 بيوتينيلي ضد جرذ ناتج في أرنب مخفف ‎vy.‏ بنسبة ‎Your)‏ باستخدام ‎TBS‏ ثم حضنت لمدة ساعة واحدة مع متراكب من أفيدين-بيوتين- بيروكسيداز ‎avidin-biotin-peroxidase‏ مخفف بنسبة ‎Vo ver)‏ باستخدام 185. ومن ثم أمكن رؤية الأقسام المحضونة مع أجسام مضادة متخنصصة ب ‎MAC-1 (GFAP‏ و ‎MHC‏ من الصنف ؟ بالمعالجة عند درجة حرارة الغرفة باستخدام ‎DAB‏ تركيزه 70.06 بيروكسيد الهيدروجين ‎hydrogen peroxide‏ تركيزه ‎7.0٠‏ وكلوريد نيكل ‎nickel chloride‏ تركيزه 4 70.6

‎Yo‏ و ‎TBS‏ لمدة ؛ دقائق و ‎١١‏ دقيقة على الترتيب.

٠١ ‏(في‎ glass slides ‏على شرائح زجاجية‎ Immunolabeled Lelia ‏وثبتت الأقسام الموسومة‎ ‏الليل‎ J sha ‏وجففت بالهواء‎ (Superfrost slides ‏شرائح من نوع سوبر فروست‎ GVWR ‏دبليو أر‎ ‏وغطيت بشرائح تغطية‎ (Anatech ‏(تقدمه شركة أناتيخ‎ Propar ‏وغطست في جهاز بروبار‎ ‏بصفته وسط تثبيت‎ (Fisher ‏(تقدمه شركة فيشر‎ Permount ‏زجاجية باستخدام بيرومونت‎ -mounting medium ° ‏مجموعة جزئية من أقسام‎ Cid ccounterstain Lue Lua AR ‏ولصبغ لويحات‎ ‏وحضنت في محلول‎ Superfrost ‏على شرائح من نوع سوبر فروست‎ GFAP ‏تحتوي على‎ ‏دقائق بعد‎ ١ ‏لمدة‎ (Sigma ‏تركيزه )7 (تقدمه شركة سيجما‎ tell Thioflavin ‏ثيوفلافين‎ ‏ومن‎ Propar ‏المعالجة الكيميائية المناعية للأنسجة. ومن ثم أعيد تميه الأقسام ونقيت في بروبار‎ -Permount ‏ثم غطيت باستخدام شرتائح تغطية زجاجية مثبتة مع بيرمونت‎ ye ‏التحليل الصوري‎ A ‏(من شركة أونكور؛ إنك.‎ ٠9٠١ ‏قوته‎ Image Analysis ‏استخدم نظام تحليل صوري‎ ‏مرتبط بمجهر‎ (Mariland (MD) ‏ولاية ماريلئه‎ «Gaithersburg ‏مدينة جيثرسبيرج‎ Oncor, Inc. ‏تصوير مرئية من‎ Al ‏من خلال‎ Nikon Microphot-FX microscope FX— sd 5 Sua ‏بنيكون‎ ‏لتحديد كمية الشرائح المتفاعلة‎ Sony Trinitron ‏نوع 600 ومراقب من نوع سوني ترينيترون‎ vo threshold ‏وحددت عتبة‎ video buffer ‏مناعياً. وخزنت صورة القسم في ذاكرة مؤقتة مرئية‎ total ‏لاختبار وحساب المنطقة الكلية لعنصر الصورة‎ color ‏واللون‎ saturation ‏أساسها التشبع‎ ‏التي تشغلها البنيات الموسومة مناعياً. ولكل قسم؛ حددت منطقة حصان البحر يدوياً‎ pixel area

Al ‏وحسبت المنطقة الكلية لعنصر الصورة التي يشغلها حصان البحر. وقيست النسبة‎ ‏في صورة: (الجزء من منطقة حصان البحر التي تحتوي‎ amyloid burden ‏للحمل النشواني‎ - ‏وبالمثلء‎ .٠٠١ x ‏مع 6 هم)‎ immunoreactive Lelia ‏تتفاعل‎ AB deposits ‏على رواسب‎ ‏في صورة: (الجزء من منطقة‎ neuritic burden ‏قيست النسبة المئوية للحمل عصبي الالتهاب‎ ‏متفاعلة مع جسم‎ dystrophic neurites ‏حصان البحر التي تحتوي على محاور عصبية سغلية‎ ‏وربط نظام التصوير من نوع © (يحصل عليه من شركة‎ .٠٠١ X )885 ‏مضاد وحيد النسيلة‎ ‏بنسلفانيا‎ «Cranberry Township ‏كر انبيري تاون شيب‎ «Compix, Inc. ٠ ‏كومبيكس» إنك‎ Yo vag

Yi.

Software Application program ‏الذي يشغل برنامج التطبيق لبرمجيات‎ (Pennsylvania (PA) ‏من خلال آلة تصوير من نوع أوبترونكس‎ FX ‏البسيطة بمجهر نيكون ميكروفوت-‎ FY ‏واستخدم لتحديد النسبة المثوية للمنطقة القشرية الشوكية الخلفية التي تشغلها‎ 5 ‏والغراء العصبي الدقيق الذي يحتوي على‎ GFAP ‏الخلايا النجمية 28000785 التي تحتوي على‎ ‎MAC-1 °‏ و ‎MHC‏ من الصنف 7. وخزنت صورة القسم المتفاعل مناعياً في الذاكرة ‎naga‏ ‏المرئية وحددت العتبة التي أساسها مركب أحادي اللون لاختيار وحساب المنطقة الكلية للنقطة الصغيرة من الصورة التلفزيونية التي تشغلها الخلايا الموسومة مناعياً. ولكل ‎auld‏ حددت القشرة الشوكية الخلفية ‎(RSC)‏ يدوياً وحسبت المنطقة الكلية للنقطة الصغيرة من الصورة التلفزيونية التي تشغلها ‎RSC‏ وعرّفت النسبة المئوية لتكثر الخلايا النجمية في صورة: (الجزء ‎٠‏ من ‎RSC‏ الذي تشغله الخلايا التجمية المتفاعلة مع ‎LY +X (GFAP‏ وبالمثل» عرفت النسبة المئوية لتكثر ‎LAY‏ الغرائية الدقيقة في صورة: (الجزء من ‎RSC‏ الذي يشغله الغراء العصبي الدقيق المتفاعل مع ‎MAC-1‏ أو ©1020 من الصنف ؟)7١٠٠.‏ وبالنسبة لكل عمليات التحليل الصوري؛ حددت كمية الأقسام الستة عند مستوى حصان البحر الظهري التي فصل كل منها على فترات متعاقبة بمقدار ‎YE‏ ميكرومتر؛ لكل حيوان. وفي جميع الحالات كانت حالة ‎yo‏ المعالجة للحيوانات غير معروفة لمراقب الحالة. ومع أن الاختراع السابق قد وصف بتفصيل لأغراض التوضيح؛ إلا أنه يتضح أنه ستجرى تعديلات معينة ضمن نطاق عناصر الحماية الملحقة. وقد ذكرت كل النشرات ووثائق البراءة في هذا البيان بكامل محتواها للإحالة إليها كمرجع لجميع الأغراض بنفس الدرجة كما لو أشير إلى كل منها على حدة. ‏أ ويتضح مما سبق أن الاختراع يتعلق بعدة استخدامات. فعلى سبيل ‎(Jha‏ يتعلق الاختراع باستخدام أي من الأجسام المضادة ل ‎AB‏ الموصوف أعلاه في معالجة؛ الوقاية من أو تشخيص نفس المرض نشواني الأصل ‎camyloidogenic‏ أو في صناعة دواء ‎medicament‏ أو تركيب تشخيصي ‎diagnostic composition‏ لاستخدامه لنفس الأغراض. وبالمثل يتعلق الاختراع باستخدام أي من شدفات مغير الخاصية ل ‎AB‏ الموصوفة أعلاه لمعالجة أو الوقاية من مرض ‎ve‏ نشواني الأصل أو في تصنيع دواء لاستخدامه لنفس الغرض.

اس ا سا 53 ‎a,‏ ‏بم ‏< ‎a‏ ‎a,‏ ‎Fillo‏ ‏ا. ‎Mo ea‏ ‎+f *| 0| «| «| ©‏ ‎ww]‏ | سر | م ]> ‎el‏ ‏اا 7 ل" :3:7 ‎YL. le ~~ =‏ ‎a e| i‏ |« ‎Qf > | 3 A‏ |« 2 ذم | اللي ‎a.‏ ‎a,‏ ‏< ‏5 ‏ب ‎oe 3 ee‏ :]3 3 قا قاف اذ 4 ‎Nel a.‏ . بهم | بهم | =— ‎oy ce‏ + ضما ا 5 ِ مو | سو لاا 3 ‎A 7 2 ] “lv 7‏ ‎a -= 4‏ لل353 5 انا 2 و 32 13 : 3 4 ذا 1 ما ما قفد : - ‎oo.‏ = 3 ‎wv J PR‏ - : > م ام 3 ب اك د ‎ES‏ ل 7 218 23 ا 1 1 ا . ص ~ 1 3 = 7 :3 < 1 مد ‎١‏ مد ‎١‏ مه 31 : - اه | 1“ ‎cf‏ 0[ . ذا ما ياك 7 = ‎AE‏ 1 ~ ما ما ‎Ral Rl 3 Ne‏ * = ‎o | 2x] =‏ > به ٌ لا نا ‎SIF‏ 3 - ‎—|V |V IV‏ 3 7 2 موا اراق ‎Alii:‏ ‏ما ما ‎Mo‏ مام ام اماع ل من | من | ‎Qi 0 | © | © | > se‏ ا اجا اا ا )2 ؟ ‎١١7 |١7 |v‏ 7 وام اوداق : ‎oe‏ 3 دا يدا يد : أ ها قا ‎١ : Mo‏ ب بهذا بهذا يبراي : 2 > =| نا جا > سي | — - ‎“viv iv‏ 7 وام ا ‎No. * | =‏ ‎a‏ . سو | > ا :ا:: :3-201 ‎LC‏ ا. ‎Yo.‏ ‏]& أن ‎Z| |] eo]‏ سل | قي | ‎a] THF‏ ال

Claims (1)

1. ١ ‏عناصر الحماية‎ ‏خيمري‎ antibody ‏يشتمل على جسم مضاد‎ pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ -١ ١ ‏يرتبط بشكل متخصص‎ humanized ‏أو معدل ليصلح استخدامه في البشر‎ chimeric Y ‏ومادة‎ (AB ‏ل‎ ٠١-١ ‏من‎ residues ‏ضمن الشقات‎ epitope ‏بمغير خاصية‎ specifically ¥ -pharmaceutically acceptable carrier ‏حاملة مقبولة صيدلياً‎ ¢ ‏يرتبط‎ antibody ‏على جسم مضاد‎ Jil pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ -“ ١ ٠١-١ ‏من‎ residues ‏ضمن الشقات‎ epitope ‏بمغير خاصية‎ specifically ‏بشكل متخصص‎ 7 IgGl ‏عبارة عن‎ antibody ‏للجسم المضاد‎ isotype ‏حيث يكون النمط الإسوي‎ AB ‏لت‎ r -pharmaceutically acceptable carrier Wana ‏ومادة حاملة مقبولة‎ <human IgG! ‏بشري‎ $ Lal ‏يكون‎ Cuno) ‏لعنصر الحماية‎ (8 5 pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ -* ١ ‏أو 4 بشري‎ IgGl ‏عبارة عن‎ antibody ‏للجسم المضاد‎ isotype ‏الإسوي‎ Yo

   -human 1:61 or IgG4 7 ball ‏حيث يكون‎ oF ‏وفقاً لعنصر الحماية‎ pharmaceutical composition ‏؛- تركيب صيدلي‎ ١ -human IgG1 ‏بشري‎ IgGl ‏عبارة عن‎ antibody ‏للجسم المضاد‎ isotype ‏الإسوي‎ Y

   ‎—o ١‏ تركيب صيدلي ‎pharmaceutical composition‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎١‏ حيث يكون النمط الإسوي ‎isotype‏ للجسم المضاد ‎antibody‏ عبارة عن 1502 أو 1503.

   ‎© ‏إلى‎ ١ ‏وفقاً لأي من عناصر الحماية من‎ pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ —1 ١ ‏بمغير خاصية‎ specifically ‏بشكل متخصص‎ intibody ‏يرتبط الجسم المضاد‎ Cua y ‏ضمن:‎ epitope ‏و‎ yar CAB ‏ل‎ -١ ‏من‎ residues ‏الشقات‎ ¢ CAB ‏ل‎ Y=) ‏من‎ residues ‏الشقات‎ 5 (AB ‏من ١ح ل‎ residues ‏الشقات‎ 1 CAB ‏من ١-؟ ل‎ residues ‏الشقات‎ 7 ‏من 1-7 ل قم؛ أو‎ residues ‏الشقات‎ A AB ‏ل‎ 7-١ ‏من‎ residues ‏الشقات‎ 4 ‏وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ حيث‎ pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ -١ ١ epitope ‏بمغير خاصية‎ specifically ‏بشكل متخصص‎ intibody ‏يرتبط الجسم المضاد‎ Y -AB ‏ل‎ free N-terminal residue ‏يشتمل على شق حر عند الطرف النتروجيني‎ ¥ ‏وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ حيث‎ pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ - ١ ‏من‎ residues ‏ضمن الشقات‎ epitope ‏بمغير خاصية‎ antibody ‏يرتبط الجسم المضاد‎ Y ‏حمض‎ AB ‏ل‎ ١ residue ‏الشق‎ Sis ١ residue ‏حيث يمثل الشق‎ AB ‏ل‎ ٠١-١ ¥ .iso-aspartic acid ‏الأيزو أسبرتيك‎ £ ‏وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة حيث‎ pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ -9 ١ polyclonal ‏متعدد النسيلة‎ antibody ‏عبارة عن جسم مضاد‎ antibody ‏يكون الجسم المضاد‎ 4 .monoclonal ‏أو وحيد النسيلة‎ r ‏وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛‎ pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ -٠ ١ ‏من نفس زوج‎ two copies ‏على نسختين‎ antibody ‏حيث يشتمل الجسم المضاد‎ -same pair of light and heavy chains ‏السلاسل الخفيفة والثقيلة‎ ¥ ‏إلى‎ ١ ‏وفقاً لأي من عناصر الحماية من‎ pharmaceutical composition ‏تركيب صيدلي‎ -١ ١

   محا

   ‎A Y‏ حيث يكون الجسم المضاد ‎Ble antibody‏ عن جسم مضاد ثناثي 1 التخصص ‎bispecific antibody‏ يشتمل على زوج ‎Jf‏ من السلاسل الخفيفة ¢ والثقيلة ‎light and heavy chain pair‏ 8 يرتبط بشكل متخصسص ‎specifically‏ ‏° بمغير خاصية ‎epitope‏ ل ‎AB‏ وزوج ثان من السلاسل_الخفيفة 1 والثقيلة ‎second light and heavy chain pair‏ يرتبط بشكل متخصسص بمستقبلة ‎Fo‏ ‎Fe receptor 7‏ على خلايا الدبق العصبي الدقيق ‎.microglial cells‏

   ‎-١ ١‏ تركيب صيدلي ‎(sy pharmaceutical composition‏ لأي من عناصر الحماية السابقة؛ ‎Y‏ حيث تدمج ‎fuse‏ سلسلة الجسم المضاد ‎chain of the antibody‏ في متعدد ببتيد مغاير و ‎-heterologous polypeptide‏ 9

   ‎-١٠ ١‏ تركيب صيدلي ‎pharmaceutical composition‏ وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ ‎Y‏ حيث يرتبط الجسم المضاد ‎antibody‏ بشكل متخصص ‎specifically‏ بببتيد ‎AB‏ ‎AB peptide v‏ بدون أن يرتبط ببروتين مصدري نشواني كامل الطول ‎full-length amyloid‏ ‎«precursor protein (APP) ¢‏

   ‎١‏ 64- تركيب صيدلي ‎pharmaceutical composition‏ وفقاً لأي من عناصر الحماية السابقة؛ ‎Y‏ حيث يشتمل التركيب الصيدلي ‎Lad pharmaceutical composition‏ على جسم مضاد ‎antibody 7‏ آخر واحد على الأقل يرتبط بمغير خاصية ‎epitope‏ مختلف ل ‎AB‏

   ‎-١٠ ١‏ تركيب صيدلي ‎pharmaceutical composition‏ 5 88( لأي من عناصر الحماية من ‎١‏ إلى ‎Y‏ ؛؛»؛ ‎Cua‏ تكون المادة الحاملة ‎carrier‏ عبارة عن مادة مخففة مقبولة ¥ فسيولوجياً ‎physiologically acceptable diluent‏ للإعطاء عن طريق لا معوي ‎-parenteral administration ¢‏

   ‏8ل

   ا

   11 التركيب ‎composition‏ وفقا لأي من عناصر الحماية من ‎١‏ إلى ‎١٠١‏ حيث يعد للإعطاء ‎Y‏ داخل البريتون ‎cintraperitoneally‏ عن طريق لقم ‎corally‏ داخل ‎‘intranasally «ail‏ ¥ تحت الجلد ‎«subcutaneously‏ في العضل ‎intramuscularly‏ موضعياً ‎«topically‏ أو في ¢ الوريد ‎-intravenously‏

   ‎-١ ١‏ التركيب ‎composition‏ وفقاً لأي من عناصر الحماية من ‎١‏ إلى ‎(V1‏ حيث يعد للإعطاء ‎Y‏ على شكل جرعات متعددة ‎multiple dosages‏ لفترة من الزمن تبلغ ستة أشهر على الأقل.

   ‎-١8 ٠‏ التركيب ‎Gag composition‏ لأي من عناصر الحماية من ‎١‏ إلى ‎AY‏ حيث يعد للإعطاء ل في صورة تركيب ثابت الإطلاق ‎-sustained release composition‏

   ‏| 14 التركيب ‎Gi composition‏ لأي من عناصر الحماية من ‎١‏ إلى ‎OA‏ حيث تبلغ جرعة ‎dosage Y‏ الجسم المضاد ‎١ antibody‏ ملغم/كغم 8 من وزن جسم المريض ‎body weight of the patient ¥‏ على الأقل.

   ‎dosage ic a ‏حيث تبلغ‎ V4 ‏لعنصسر الحماية‎ Ls composition ‏التركيب‎ -Y. ١ ‏من وزن جسم المريض‎ mg/kg ‏ملغمإكغم‎ ١ ٠ antibody ‏الجسم المضاد‎ Y ‏على الأقل.‎ body weight of the patient ¥

   ‎YY ١‏ — تركيب ‎Gay composition‏ لأي من عناصر الحماية من ‎١‏ إلى 80؛ حيث يستخدم ‎Y‏ التركيب للوقاية من ‎preventing‏ أو ‎disease Us treating dallas‏ مقترن برواسب ¥ نشوانية ‎amyloid deposits‏ من ‎AB‏ في دماغ ‎brain‏ مريض.

   ‎epitope ‏بمغير خاصية‎ specifically ‏يرتبط بشكل متخصص‎ intibody alae ‏جسم‎ —YY ١ ‏للجسم‎ isotype ‏حيث يكون النمط الإسوي‎ AR ‏ل‎ ٠١-١ ‏من‎ residues ‏ضمن الشقات‎ Y

   1 المضاد . ‎antibody‏ عبارة عن ‎IgGl‏ بشري ‎human IgGl‏ لاستخدامه للوقاية من ‎preventing 1‏ معالجة ‎treating‏ مرض ‎disease‏ مقترن برواسب نشوانية ‎amyloid deposits °‏ ل ‎AB‏ في دماغ مريض ‎.brain of a patient‏

   ؟١ ‏إلى‎ ١ ‏كما هو محدد في أي من عناصر الحماية من‎ antibody ‏استخدام جسم مضاد‎ -77 ١ ‏مرض‎ treating ‏أو معالجة‎ preventing ‏للوقاية من‎ medicament ‏في صنع دواء‎ Y ‏في دماغ مريض‎ AB ‏ل‎ amyloid deposits ‏مقترن برواسب نشوائية‎ disease 7 .brain of a patient ¢ vaa