Claims (19)
1. Очищенная фитаза из бобов сои, отличающаяся тем, что указанная фитаза имеет единственное оптимальное значение pH около 5,0, если проводить измерение pH в буфере, содержащем 0,0091 М фитата натрия в 50 мМ уксусной кислоте/NaOH и 1 мМ CaCl2 при 50°С в течение 4 ч.1. Purified soya bean phytase, characterized in that said phytase has a single optimum pH value of about 5.0 if pH is measured in a buffer containing 0.0091 M sodium phytate in 50 mM acetic acid / NaOH and 1 mM CaCl 2 at 50 ° C for 4 hours
2. Фитаза из бобов сои по п. 1, отличающаяся тем, что указанная фитаза обладает специфической активностью, составляющей по меньшей мере, 6 мкмоль/мин/г белка, если проводить измерение активности в буфере, содержащем 0,0091 М фитата натрия в 50 мМ уксусной кислоте/NaOH и 1 мМ CaCl2 при 50°С в течение 4 ч при pH 5,0.2. Phytase from soybeans according to claim 1, characterized in that said phytase has a specific activity of at least 6 μmol / min / g protein, if the activity is measured in a buffer containing 0.0091 M sodium phytate in 50 mM acetic acid / NaOH and 1 mM CaCl 2 at 50 ° C. for 4 hours at pH 5.0.
3. Фитаза из бобов сои по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанная фитаза имеет значение рH около 4,9. 3. Phytase from soybeans according to claim 1 or 2, characterized in that said phytase has a pH value of about 4.9.
4. Фитаза из бобов сои по пп. 1 - 3, отличающаяся тем, что указанная фитаза имеет молекулярную массу между 30000 и 100000 Дальтон, более предпочтительно около 75000 Дальтон. 4. Phytase from soybeans in paragraphs. 1-3, characterized in that said phytase has a molecular weight between 30,000 and 100,000 Daltons, more preferably about 75,000 Daltons.
5. Фитаза из бобов сои по любому из пп. 1 - 4, отличающаяся тем, что указанная фитаза включает в себя аминокислотную последовательность N-концевого участка белка, имеющего, по меньшей мере, 85% гомологию с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID No: 1, и/или аминокислотную последовательность внутреннего участка, имеющую, по меньшей мере, 85% гомологию с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ ID No: 3. 5. Phytase from soybeans according to any one of paragraphs. 1 to 4, characterized in that said phytase includes the amino acid sequence of the N-terminal portion of a protein having at least 85% homology with the amino acid sequence shown in SEQ ID No: 1 and / or the amino acid sequence of the inner portion, having at least 85% homology with the amino acid sequence shown in SEQ ID No: 3.
6. Фитаза из бобов сои по любому из пп. 1 - 5, отличающаяся тем, что указанная фитаза включает в себя аминокислотную последовательность N-концевого участка белка, представленную в SEQ ID No: 1, и/или аминокислотную последовательность внутреннего участка, представленную в SEQ ID No: 3. 6. Phytase from soybeans according to any one of paragraphs. 1 to 5, characterized in that said phytase includes the amino acid sequence of the N-terminal portion of the protein represented in SEQ ID No: 1, and / or the amino acid sequence of the inner portion represented in SEQ ID No: 3.
7. Очищенная фитаза из бобов сои по любому из пп. 1 - 6, отличающаяся тем, что указанную фитазу можно получить способом, состоящим из следующих этапов: а) осуществление осаждения сульфатом аммония в концентрации 50-70% белковой фракции, входящей в состав экстракта, полученного из бобов сои или их долей, соевой муки, пророщенных бобов сои или их частей с образованием осадка, содержащего указанную фитазу; б) разделение указанного осадка с применением анионообменной хроматографии и сбор фракций, содержащих указанную фитазу; и в) разделение указанного осадка с применением катионообменной хроматографии и сбор фракций, содержащих указанную фитазу. 7. Purified phytase from soybeans according to any one of paragraphs. 1 - 6, characterized in that the specified phytase can be obtained by the method consisting of the following steps: a) the deposition of ammonium sulfate at a concentration of 50-70% of the protein fraction included in the extract obtained from soybeans or their fractions, soy flour, sprouted soybeans or parts thereof to form a precipitate containing said phytase; b) separating said precipitate using anion exchange chromatography and collecting fractions containing said phytase; and c) separating said precipitate using cation exchange chromatography and collecting fractions containing said phytase.
8. Молекула ДНК, кодирующая фитазу по любому из пп. 1 - 7. 8. A DNA molecule encoding a phytase according to any one of paragraphs. 1 - 7.
9. Вектор молекулы ДНК, включающий в себя молекулу ДНК по п. 8. 9. A vector of a DNA molecule, including a DNA molecule according to claim 8.
10. Прокариотический или экуариотический организм или клетка-хозяин, трансформированные молекулой ДНК по п. 8 или 9 и способные экспрессировать указанную фитазу. 10. A prokaryotic or ecuariotic organism or host cell transformed with a DNA molecule according to claim 8 or 9 and capable of expressing said phytase.
11. Прокариотическая клетка-хозяин по п. 10, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин выбрана из группы, включающей в себя E.coli, Bacillus sp., Lactobacillus sp. и Lactococcus sp. 11. The prokaryotic host cell according to claim 10, characterized in that said host cell is selected from the group comprising E. coli, Bacillus sp., Lactobacillus sp. and Lactococcus sp.
12. Эукариотический организм по п. 10, отличающийся тем, что указанный организм является грибковым организмом, выбираемым из группы, включающей в себя Aspergillus, Trichoderma, Penicillium, Mucor, Kluyveromyces и Saccharomyces или является растением, выбираемым из группы, включающей в себя бобы сои, зерновые злаки и рапс или их семена. 12. The eukaryotic organism of claim 10, wherein said organism is a fungal organism selected from the group consisting of Aspergillus, Trichoderma, Penicillium, Mucor, Kluyveromyces and Saccharomyces, or is a plant selected from the group comprising soybeans , cereals and rapeseed or their seeds.
13. Способ получения фитазы, отличающийся тем, что указанная фитаза выделена из прокариотической или эукариотической клетки-хозяина или организма по любому из пп. 10 - 12. 13. A method of producing phytase, characterized in that said phytase is isolated from a prokaryotic or eukaryotic host cell or organism according to any one of paragraphs. 10-12.
14. Способ получения фитазы, состоящий из следующих этапов: а) осуществление осаждения сульфатом аммония в концентрации 50-70% белковой фракции, входящей в состав экстракта, полученного из бобов сои или их долей, соевой муки, пророщенных бобов сои или их частей с образованием осадка, содержащего указанную фитазу; б) разделение указанного осадка с применением анионообменной хроматографии и сбор фракций, содержащих указанную фитазу; и в) разделение указанного осадка с применением катионообменной хроматографии и сбор фракций, содержащих указанную фитазу. 14. A method of producing phytase, consisting of the following steps: a) precipitation of ammonium sulfate at a concentration of 50-70% of the protein fraction included in the extract obtained from soy beans or their fractions, soy flour, sprouted soy beans or parts thereof with the formation sediment containing the specified phytase; b) separating said precipitate using anion exchange chromatography and collecting fractions containing said phytase; and c) separating said precipitate using cation exchange chromatography and collecting fractions containing said phytase.
15. Применение фитазы по любому из пп. 1 - 7 с семенами, пищей или кормами животных или их составляющих. 15. The use of phytase according to any one of paragraphs. 1 - 7 with seeds, food or animal feed or their components.
16. Применение фитазы по любому из пп. 1 - 7 для обработки злаков, бобовых и других агроматериалов для приготовления пищевых материалов, кормов или их составляющих. 16. The use of phytase according to any one of paragraphs. 1 - 7 for the processing of cereals, legumes and other agricultural materials for the preparation of food materials, feed or their components.
17. Применение растения или семян по п. 12 с пищей или кормами животных или их составляющими. 17. The use of plants or seeds according to claim 12 with food or animal feed or their components.
18. Применение по пп. 15 - 17, где указанное применение снижает влияние на окружающую среду фосфатов в составе продуктов жизнедеятельности домашнего скота. 18. The use of PP. 15 - 17, where the indicated application reduces the environmental impact of phosphates in livestock products.
19. Применение по пп. 15 - 17, где указанное применение уменьшает отрицательный питательный эффект фитата, который связывает мультивалентные ионы металлов. 19. The use of PP. 15 to 17, where the specified application reduces the negative nutritional effect of phytate, which binds multivalent metal ions.