Claims (49)
1. Способ получения растений с цитоплазматической мужской стерильностью, включающий: а) выбор родительской линии растения; б) получение родительского растения с трансгенными пластидами из родительской линии растения путем стабильной трансформации пластид в клетках родительской линии растения геном пластидной мужской стерильности и регенерацию из них растения с трансгенными пластидами, причем ген пластидной мужской стерильности может регулироваться кодируемым в ядре пластид-ориентированным регуляторным полипептидом, при этом регуляция в ткани пыльника вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы в) получение родительского растения с трансгенными ядрами из родительской линии растения путем стабильной трансформации ядер в клетках родительской линии растения геном ядерной мужской стерильности и регенерацию из них растения с трансгенными ядрами, причем ген ядерной мужской стерильности содержит специфичную для пыльника 5'-регуляторную нуклеотидную последовательность, действенным образом сцепленную с кодирующей нуклеотидной последовательностью, которая кодирует пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который способен проникать в пластиды и регулировать ген пластидной мужской стерильности; и г) скрещивание растения с трансгенными пластидами с растением с трансгенными ядрами для получения растения, в котором пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который делают специфичным для пыльника, проникает в трансформированные пластиды клеток пыльника и регулирует ген пластидной мужской стерильности, причем регуляция вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы, приводя тем самым к получению растений с цитоплазматической мужской стерильностью.1. A method of obtaining plants with cytoplasmic male sterility, including: a) selecting the parent line of the plant; b) obtaining a parent plant with transgenic plastids from the parent line of the plant by stably transforming the plastids in the cells of the parent line of the plant with the plastid male sterility genome and regenerating the plant with transgenic plastids from them, and the plastid male sterility gene can be regulated by a plastid-oriented regulatory polypeptide encoded in the kernel, in this case, regulation in the anther tissue causes a violation of the formation of viable pollen c) obtaining the parent plant with a transgene nuclei from the parent line of the plant by stably transforming the nuclei in the cells of the parent line of the plant with the genome of nuclear male sterility and regeneration of plants with transgenic nuclei from them, the gene of nuclear male sterility containing an anther-specific 5'-regulatory nucleotide sequence, effectively linked to the coding nucleotide a sequence that encodes a plastid-oriented regulatory polypeptide that is able to penetrate plastids and regulate the plas gene idnoy male sterility; and d) crossbreeding a plant with transgenic plastids with a plant with transgenic nuclei to produce a plant in which a plastid-oriented regulatory polypeptide that is specific for anther penetrates transformed plastids of anther cells and regulates the plastid male sterility gene, and regulation causes a violation of the formation of viable pollen, thereby leading to the production of plants with cytoplasmic male sterility.
2. Способ по п. 1, где специфичную для пыльника 5'-регуляторную нуклеотидную последовательность выбирают из группы, состоящей из специфичных для тапетума промоторов и специфичных для микроспор промоторов. 2. The method of claim 1, wherein the anther-specific 5'-regulatory nucleotide sequence is selected from the group consisting of tapetum-specific promoters and microspore-specific promoters.
3. Способ по п. 1, где: а) ген пластидной мужской стерильности содержит нуклеотидную последовательность-мишень для активации экспрессии гена, действенным образом сцепленную с кодирующей нуклеотидной последовательностью, которая кодирует генный продукт, который способен нарушать образование жизнеспособной пыльцы при экспрессии в пластидах клеток пыльника; и б) ген ядерной мужской стерильности кодирует пластид-ориентированный полипептид-активатор, который проникает в пластиды и специфично взаимодействует с нуклеотидной последовательностью-мишенью, причем взаимодействие приводит к экспрессии гена пластидной мужской стерильности. 3. The method of claim 1, wherein: a) the male plastid sterility gene contains a target nucleotide sequence for activating gene expression, effectively linked to a coding nucleotide sequence that encodes a gene product that is capable of disrupting the formation of viable pollen when expressed in cell plastids anther; and b) the nuclear male sterility gene encodes a plastid-oriented activator polypeptide that penetrates the plastids and specifically interacts with the target nucleotide sequence, and the interaction leads to expression of the plastid male sterility gene.
4. Способ по п.3, где ген пластидной мужской стерильности кодирует РНК. 4. The method according to claim 3, where the gene for plastid male sterility encodes RNA.
5. Способ по п.4, где РНК выбирают из группы, состоящей из антисмысловой РНК и рибозим. 5. The method according to claim 4, where the RNA is selected from the group consisting of antisense RNA and ribozyme.
6. Способ по п.3, где ген пластидной мужской стерильности кодирует полипептид. 6. The method of claim 3, wherein the plastid male sterility gene encodes a polypeptide.
7. Способ по п. 6, где полипептид выбирают из группы, состоящей из ДНКаз, РНКаз, протеаз, рекомбиназ и трансмембранных порообразующих полипептидов. 7. The method of claim 6, wherein the polypeptide is selected from the group consisting of DNases, RNases, proteases, recombinases, and transmembrane pore-forming polypeptides.
8. Способ по п.3, где пластид-ориентированный полипептид-активатор содержит активатор транскрипции, а нуклеотидная последовательность-мишень содержит регуляторную область, с которой связывается активатор транскрипции. 8. The method according to claim 3, where the plastid-oriented activator polypeptide contains a transcription activator, and the target nucleotide sequence contains a regulatory region to which a transcription activator binds.
9. Способ по п.8, где активатор транскрипции является полимеразой. 9. The method of claim 8, where the transcription activator is a polymerase.
10. Способ по п. 9, где полимераза является РНК-полимеразой фага Т7, а нуклеотидная последовательность-мишень содержит промотор фага Т7. 10. The method of claim 9, wherein the polymerase is a T7 phage RNA polymerase and the target nucleotide sequence comprises a T7 phage promoter.
11. Способ по п. 8, где активатор транскрипции является химерным протеином, содержащим ДНК-связывающий домен и домен-активатор. 11. The method of claim 8, wherein the transcription activator is a chimeric protein containing a DNA binding domain and an activator domain.
12. Способ по п.3, где пластид-ориентированный полипептид-активатор содержит активатор трансляции, а нуклеотидная последовательность-мишень содержит регуляторную область, с которой связывается активатор трансляции. 12. The method according to claim 3, where the plastid-oriented activator polypeptide contains a translation activator, and the target nucleotide sequence contains a regulatory region to which a translation activator binds.
13. Способ по п.1, где: а) ген пластидной мужской стерильности содержит нуклеотидную последовательность-мишень для предотвращения экспрессии гена, действенным образом сцепленную с основным пластидным геном, причем пластидная мужская стерильность обусловлена геном, ориентированным на пластидный геном, так что нативные формы основного пластидного гена в трансформированных пластидах замещают геном пластидной мужской стерильности, причем предотвращение экспрессии гена пластидной мужской стерильности в пластидах клеток пыльника позволяет нарушить образование жизнеспособной пыльцы; и 6) ген ядерной мужской стерильности кодирует пластид-ориентированный полипептид-инактиватор, который проникает в пластиды и специфично взаимодействует с нуклеотидной последовательностью-мишенью для предотвращения экспрессии гена, причем взаимодействие предотвращает экспрессию гена пластидной мужской стерильности. 13. The method according to claim 1, where: a) the plastid male sterility gene contains a target nucleotide sequence to prevent gene expression, effectively linked to the main plastid gene, and the plastid male sterility is due to the gene oriented to the plastid gene, so that native forms the main plastid gene in transformed plastids is replaced by the plastid male sterility gene, while preventing the expression of the plastid male sterility gene in the anther cell plastids allows t disrupt the formation of viable pollen; and 6) the nuclear male sterility gene encodes a plastid-oriented inactivator polypeptide that penetrates the plastids and specifically interacts with the target nucleotide sequence to prevent gene expression, and the interaction prevents the expression of the plastid male sterility gene.
14. Способ по п.13, где основной пластидный ген выбирают из группы, состоящей из рибосомного РНК-оперона, гена рибосомного протеина 165, гена trn V и гена rроВ. 14. The method according to item 13, where the main plastid gene is selected from the group consisting of a ribosomal RNA operon, a ribosomal protein gene 165, a trn V gene and a rroB gene.
15. Способ по п.13, где пластид-ориентированный полипептид-инактиватор содержит репрессор транскрипции, а нуклеотидная последовательность-мишень содержит регуляторную область, с которой связывается репрессор транскрипции. 15. The method according to item 13, where the plastid-oriented polypeptide inactivator contains a transcription repressor, and the target nucleotide sequence contains a regulatory region to which a transcription repressor binds.
16. Способ по п. 15, где репрессор транскрипции является lac-репрессором, а нуклеотидная последовательность-мишень содержит по крайней мере один сайт связывания 1ас-репрессора. 16. The method of claim 15, wherein the transcription repressor is a lac repressor and the target nucleotide sequence contains at least one binding site of the 1ac repressor.
17. Способ по п.13, где полипептид-инактиватор является химерным протеином, содержащим ДНК-связывающий домен и домен-репрессор. 17. The method of claim 13, wherein the inactivator polypeptide is a chimeric protein comprising a DNA binding domain and a repressor domain.
18. Способ по п.13, где пластид-ориентированный полипептид-инактиватор содержит репрессор трансляции, а нуклеотидная последовательность-мишень содержит регуляторную область, с которой связывается репрессор трансляции. 18. The method of claim 13, wherein the plastid-oriented inactivator polypeptide comprises a translation repressor, and the target nucleotide sequence contains a regulatory region to which a translation repressor binds.
19. Способ получения гибридных семян с мужской фертильностью от двух родительских линий растения, одна из которых включает растения с цитоплазматической мужской стерильностью, включающий: а) получение растений с цитоплазматической мужской стерильностью из первой родительской линии растения путем: I) получения родительского растения с трансгенными пластидами из родительской линии растения путем стабильной трансформации пластид в клетках родительской линии растения геном пластидной мужской стерильности и регенерации из них растения с трансгенными пластидами, причем ген пластидной мужской стерильности может регулироваться кодируемым в ядре пластид-ориентированным регуляторным полипептидом, при этом регуляция в ткани пыльника вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы; II) получения родительского растения с трансгенными ядрами из родительской линии растения путем стабильной трансформации ядер в клетках родительской линии растения геном ядерной мужской стерильности и регенерации из них растения с трансгенными ядрами, причем ген ядерной мужской стерильности содержит специфичную для пыльника 5'-регуляторную нуклеотидную последовательность, действенным образом сцепленную с кодирующей нуклеотидной последовательностью, которая кодирует пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который способен проникать в пластиды и регулировать ген пластидной мужской стерильности; и (III) скрещивания растения с трансгенными пластидами с растением с трансгенными ядрами для получения растения, в котором пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который делают специфичным для пыльника, проникает в трансформированные пластиды клеток пыльника и регулирует ген пластидной мужской стерильности, причем регуляция вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы, приводя тем самым к получению растений с цитоплазматической мужской стерильностью; б) получение растения с восстановленной мужской фертильностью из второй родительской линии растения путем стабильной трансформации ядер в слетках второй родительской линии растения геном-восстановителем мужской фертильности и регенерацию из них растения, причем ген-восстановитель мужской фертильности кодирует генный продукт-восстановитель, способный предотвращать регуляцию гена пластидной мужской стерильности пластид-ориентированным регуляторным полипептидом, тем самым делая возможным образование жизнеспособной пыльцы; и в) скрещивание растений с цитоплазматической мужской стерильностью с растениями с восстановленной мужской фертильностью для получения из двух родительских линий растений гибридных семян с мужской фертильностью. 19. A method of producing hybrid seeds with male fertility from two parent lines of a plant, one of which includes plants with cytoplasmic male sterility, comprising: a) obtaining plants with cytoplasmic male sterility from the first parent line of the plant by: I) obtaining a parent plant with transgenic plastids from the parent line of the plant by stable transformation of plastids in the cells of the parent line of the plant with the genome of plastid male sterility and regeneration of them plants with transgenic plastids, and the plastid male sterility gene can be regulated by a plastid-oriented regulatory polypeptide encoded in the nucleus, while regulation in the anther tissue causes a disturbance in the formation of viable pollen; II) obtaining a parent plant with transgenic nuclei from the parent line of the plant by stably transforming the nuclei in the cells of the parent line of the plant with a nuclear male sterility genome and regenerating plants with transgenic nuclei from them, the nuclear male sterility gene containing an anther-specific 5'-regulatory nucleotide sequence, effectively linked to a coding nucleotide sequence that encodes a plastid-oriented regulatory polypeptide, which method n penetrate plastids and regulate the gene for plastid male sterility; and (III) crossing the plant with transgenic plastids with a plant with transgenic nuclei to obtain a plant in which the plastid-oriented regulatory polypeptide that is specific for the anther penetrates the transformed plastids of the anther cells and regulates the plastid male sterility gene, and regulation causes a violation of the formation viable pollen, thereby leading to the production of plants with cytoplasmic male sterility; b) obtaining a plant with restored male fertility from the second parent line of the plant by stably transforming the nuclei in the cells of the second parent line of the plant with a male fertility reducing gene and regenerating the plants from them, the male fertility reducing gene encodes a gene reducing product capable of preventing gene regulation male plastid sterility with a plastid-oriented regulatory polypeptide, thereby making possible the formation of viable pollen; and c) crossing plants with cytoplasmic male sterility with plants with restored male fertility to obtain hybrid seeds with male fertility from two parent plant lines.
20. Способ по п. 19, где а) ген пластидной мужской стерильности содержит нуклеотидную последовательность-мишень, имеющую сайт активации экспрессии гена и сайт предотвращения экспрессии гена, причем сайт предотвращения экспрессии гена находится в контролирующем положении по отношению к сайту активации экспрессии гена, нуклеотидная последовательность-мишень действенным образом сцеплена с кодирующей нуклеотидной последовательностью, которая кодирует генный продукт, способный нарушать образование жизнеспособной пыльцы при экспрессии в пластидах клеток пыльника; б) ген ядерной мужской стерильности кодирует пластид-ориентированный полипептид-активатор, который проникает в пластиды и специфично взаимодействует с сайтом активации экспрессии гена, причем взаимодействие приводит к экспрессии гена пластидной мужской стерильности; и в) ген-восстановитель мужской фертильности кодирует пластид-ориентированный полипептид-восстановитель, который проникает в пластиды и специфично взаимодействует с сайтом предотвращения экспрессии гена, причем взаимодействие предотвращает экспрессию гена пластидной мужской стерильности. 20. The method according to p. 19, where a) the male plastid sterility gene contains a target nucleotide sequence having a gene expression activation site and a gene expression prevention site, wherein the gene expression prevention site is in a control position relative to the gene expression activation site, nucleotide the target sequence is efficiently linked to a coding nucleotide sequence that encodes a gene product capable of disrupting the formation of viable pollen when expressed in anthers of the anther cells; b) the nuclear male sterility gene encodes a plastid-oriented activator polypeptide that penetrates the plastids and specifically interacts with the gene expression activation site, and the interaction leads to expression of the plastid male sterility gene; and c) the male fertility reducing gene encodes a plastid-oriented reducing polypeptide that penetrates the plastids and specifically interacts with the gene expression prevention site, the interaction preventing the expression of the male plastid sterility gene.
21. Способ по п.20, где пластид-ориентированный полипептид-активатор содержит активатор транскрипции, а сайт активации экспрессии гена содержит регуляторную область, с которой связывается активатор транскрипции. 21. The method according to claim 20, where the plastid-oriented activator polypeptide contains a transcription activator, and the gene expression activation site contains a regulatory region to which a transcription activator binds.
22. Способ по п.21, где активатор транскрипции является РНК-полимеразой фага Т7, а сайт активации экспрессии гена содержит промотор фага Т7. 22. The method of claim 21, wherein the transcription activator is T7 phage RNA polymerase and the gene expression activation site contains a T7 phage promoter.
23. Способ по п.20, где пластид-ориентированный полипептид-восстановитель содержит репрессор транскрипции, а сайт предотвращения экспрессии гена содержит регуляторную область, с которой связывается репрессор транскрипции. 23. The method according to claim 20, where the plastid-oriented polypeptide-reducing agent contains a transcriptional repressor, and the gene expression prevention site contains a regulatory region to which a transcriptional repressor binds.
24. Способ по п.23, где репрессор транскрипции является lac-репрессором, а сайт предотвращения экспрессии гена содержит по крайней мере один сайт связывания lac-репрессора. 24. The method according to item 23, where the transcription repressor is a lac repressor, and the site for preventing gene expression contains at least one lac repressor binding site.
25. Способ по п. 19, где а) ген пластидной мужской стерильности содержит первую нуклеотидную последовательность-мишень для предотвращения экспрессии гена, действенным образом сцепленную с основным пластидным геном, причем ген пластидной мужской стерильности является геном, ориентированным на пластидный геном, так что нативные формы основного пластидного гена в трансформированных пластидах замещают геном пластидной мужской стерильности, причем предотвращение экспрессии гена пластидной мужской стерильности в пластидах клеток пыльника позволяет нарушить образование жизнеспособной пыльцы; б) ген ядерной мужской стерильности содержит вторую нуклеотидную последовательность-мишень для предотвращения экспрессии гена, действенным образом сцепленную с кодирующей нуклеотидной последовательностью, которая кодирует пластид-ориентированный полипептид-инактиватор, который проникает в пластиды и специфично взаимодействует с первой нуклеотидной последовательностью-мишенью для предотвращения экспрессии гена, причем взаимодействие предотвращает экспрессию гена пластидной мужской стерильности; и в) ген-восстановитель мужской фертильности кодирует ядерно-ориентированный полипептид-восстановитель, который проникает в ядра и специфично взаимодействует со второй нуклеотидной последовательностью-мишенью для предотвращения экспрессии гена, причем взаимодействие предотвращает экспрессию гена ядерной мужской стерильности. 25. The method of claim 19, wherein a) the plastid male sterility gene comprises a first target nucleotide sequence to prevent gene expression, effectively linked to the main plastid gene, wherein the plastid male sterility gene is a plastid gene oriented gene, so that native the forms of the main plastid gene in transformed plastids replace the plastid male sterility gene, while preventing the expression of the plastid male sterility gene in the anther cell plastids This allows you to disrupt the formation of viable pollen; b) the nuclear male sterility gene contains a second target nucleotide sequence to prevent gene expression, effectively linked to a coding nucleotide sequence that encodes a plastid-oriented inactivator polypeptide that penetrates plastids and specifically interacts with the first target nucleotide sequence to prevent expression a gene, the interaction preventing the expression of a plastid male sterility gene; and c) a male fertility reducing gene encodes a nuclear-oriented reducing polypeptide that penetrates the nuclei and specifically interacts with a second target nucleotide sequence to prevent gene expression, the interaction preventing the expression of a nuclear male sterility gene.
26. Способ по п.25, где пластид-ориентированный полипептид-инактиватор содержит репрессор транскрипции, а первая нуклеотидная последовательность-мишень содержит регуляторную область, с которой связывается репрессор транскрипции. 26. The method of claim 25, wherein the plastid-oriented inactivator polypeptide comprises a transcription repressor, and the first target nucleotide sequence contains a regulatory region to which a transcription repressor binds.
27. Способ по п. 26, где пластид-ориентированный репрессор транскрипции является lac-репрессором, а первая нуклеотидная последовательность-мишень содержит по крайней мере один сайт связывания lac-репрессора. 27. The method of claim 26, wherein the plastid-oriented transcriptional repressor is a lac repressor and the first target nucleotide sequence comprises at least one lac repressor binding site.
28. Способ по п.26, где пластид-ориентированный репрессор транскрипции является tet-репрессором, а первая нуклеотидная последовательность-мишень содержит по крайней мере один сайт связывания tet-репрессора. 28. The method according to p, where the plastid-oriented transcription repressor is a tet repressor, and the first target nucleotide sequence contains at least one tet repressor binding site.
29. Способ по п.25, где ядерно-ориентированный полипептид-восстановитель содержит репрессор транскрипции, а вторая нуклеотидная последовательность-мишень содержит регуляторную область, с которой связывается репрессор транскрипции. 29. The method of claim 25, wherein the nuclear-oriented reducing polypeptide comprises a transcriptional repressor, and the second target nucleotide sequence comprises a regulatory region to which a transcriptional repressor binds.
30. Способ по п.29, где репрессор транскрипции является tet-репрессором, а вторая нуклеотидная последовательность-мишень содержит по крайней мере один сайт связывания tet-репрессора. 30. The method according to clause 29, where the transcription repressor is a tet repressor, and the second target nucleotide sequence contains at least one tet repressor binding site.
31. Способ по п.29, где репрессор транскрипции является 1ас-репрессором, а вторая нуклеотидная последовательность-мишень содержит по крайней мере один сайт связывания lac-репрессора. 31. The method of claim 29, wherein the transcription repressor is a 1ac repressor and the second target nucleotide sequence comprises at least one lac repressor binding site.
32. Растение, имеющее пластидные геномы, которые включают стабильно интегрированный ген пластидной мужской стерильности, который можно регулировать кодируемым в ядре пластид-ориентированным регуляторным полипептидом, причем регуляция в ткани пыльника вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы. 32. A plant having plastid genomes that includes a stably integrated plastid male sterility gene that can be regulated by a plastid-oriented regulatory polypeptide encoded in the nucleus, and regulation in the anther tissue causes the formation of viable pollen.
33. Растение по п.32, в котором ген пластидной мужской стерильности содержит нуклеотидную последовательность-мишень, имеющую сайт активации экспрессии гена и сайт предотвращения экспрессии гена, причем сайт предотвращения экспрессии гена находится в контролирующем положении по отношению к сайту активации экспрессии гена, а нуклеотидная последовательность-мишень действенным образом сцеплена с кодирующей нуклеотидной последовательностью, которая кодирует генный продукт, способный нарушать образование жизнеспособной пыльцы при экспрессии в пластидах клеток пыльника. 33. The plant of claim 32, wherein the male plastid sterility gene contains a target nucleotide sequence having a gene expression activation site and a gene expression prevention site, wherein the gene expression prevention site is in a control position relative to the gene expression activation site, and the nucleotide the target sequence is efficiently linked to a coding nucleotide sequence that encodes a gene product capable of interfering with the formation of viable pollen upon expression these in plastids of anther cells.
34. Растение по п.33, в котором нуклеотидная последовательность-мишень содержит промотор фага Т7 для активации экспрессии гена и по крайней мере один 1ас-репрессор для предотвращения экспрессии гена. 34. The plant of claim 33, wherein the target nucleotide sequence comprises a T7 phage promoter to activate gene expression and at least one 1ac repressor to prevent gene expression.
35. Растение по п.32, в котором ген пластидной мужской стерильности содержит нуклеотидную последовательность-мишень для предотвращения экспрессии гена, действенным образом сцепленную с основным пластидным геном, причем ген пластидной мужской стерильности является геном, ориентированным на пластидный геном, так что нативные формы основного пластидного гена в трансформированных пластидах замещают геном пластидной мужской стерильности, а предотвращение экспрессии гена пластидной мужской стерильности в пластидах клеток пыльника позволяет нарушить образование жизнеспособной пыльцы. 35. The plant according to p, in which the plastid male sterility gene contains a target nucleotide sequence to prevent gene expression, effectively linked to the main plastid gene, and the plastid male sterility gene is a gene oriented to the plastid gene, so that native forms of the main the plastid gene in transformed plastids is replaced by the plastid male sterility gene, and preventing the expression of the plastid male sterility gene in the anther cell plastids allows This disrupts the formation of viable pollen.
36. Растение по п.35, в котором нуклеотидная последовательность-мишень содержит по крайней мере один сайт связывания lac-репрессора. 36. The plant according to clause 35, in which the target nucleotide sequence contains at least one lac repressor binding site.
37. Растение, имеющее ядерные геномы, которые включают стабильно интегрированный ген ядерной мужской стерильности, который содержит нуклеотидную последовательность, имеющую специфичную для пыльника 5'-регуляторную область, действенным образом сцепленную с нуклеотидной последовательностью, которая кодирует пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который способен проникать в пластиды и регулировать ген пластидной мужской стерильности, причем регуляция приводит к нарушению образования жизнеспособной пыльцы. 37. A plant having nuclear genomes that includes a stably integrated nuclear male sterility gene that contains a nucleotide sequence having an anther specific 5'-regulatory region, effectively linked to a nucleotide sequence that encodes a plastid-oriented regulatory polypeptide that is able to penetrate into plastids and regulate the gene for plastid male sterility, and regulation leads to disruption of the formation of viable pollen.
38. Растение по п.37, в котором ген ядерной мужской стерильности кодирует пластид-ориентированный полипептид-активатор, который проникает в пластиды и специфично взаимодействует с геном пластидной мужской стерильности, содержащим нуклеотидную последовательность-мишень для активации экспрессии гена, причем взаимодействие вызывает экспрессию гена пластидной мужской стерильности, при этом экспрессия приводит к нарушению образования жизнеспособной пыльцы. 38. The plant according to clause 37, in which the gene for nuclear male sterility encodes a plastid-oriented activator polypeptide that penetrates the plastids and specifically interacts with the plastid male sterility gene containing a target nucleotide sequence for activating gene expression, and the interaction causes gene expression plastid male sterility, while expression leads to disruption of the formation of viable pollen.
39. Растение по п.38, в котором полипептид-активатор является РНК-полимеразой фага Т7. 39. The plant of claim 38, wherein the activator polypeptide is a T7 phage RNA polymerase.
40. Растение по п.37, в котором ген ядерной мужской стерильности дополнительно содержит нуклеотидную последовательность-мишень для предотвращения экспрессии гена, действенным образом сцепленную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей пластид-ориентированный полипептид-инактиватор, который проникает в пластиды и специфично взаимодействует с геном пластидной мужской стерильности, содержащим другую нуклеотидную последовательность-мишень для предотвращения экспрессии гена, причем взаимодействие предотвращает экспрессию гена пластидной мужской стерильности, при этом предотвращение экспрессии приводит к нарушению образования жизнеспособной пыльцы. 40. The plant according to clause 37, in which the nuclear male sterility gene further comprises a target nucleotide sequence to prevent gene expression, effectively linked to a nucleotide sequence encoding a plastid-oriented inactivator polypeptide that penetrates plastids and specifically interacts with the plastid gene male sterility containing a different target nucleotide sequence to prevent gene expression, and the interaction prevents gene expression p male sterile sterility, while the prevention of expression leads to disruption of the formation of viable pollen.
41. Растение по п.40, в котором полипептид-инактиватор является 1ас-репрессором. 41. The plant of claim 40, wherein the inactivator polypeptide is a 1ac repressor.
42. Растение, имеющее ядерные геномы, которые включают стабильно интегрированный ген-восстановитель мужской фертильности, который кодирует генный продукт-восстановитель, обладающий способностью предотвращать регуляцию регулируемого гена пластидной мужской стерильности с помощью кодируемого в ядре пластид-ориентированного регуляторного полипептида. 42. A plant having nuclear genomes that includes a stably integrated male fertility reducing gene that encodes a reducing gene product that is capable of preventing the regulation of a regulated plastid male sterility gene using a nucleic encoded plastid-oriented regulatory polypeptide.
43. Растение по п.42, в котором ген-восстановитель мужской фертильности кодирует пластид-ориентированный полипептид-восстановитель, который проникает в пластиды и специфично взаимодействует с сайтом предотвращения экспрессии гена, действенным образом расположенным в гене пластидной мужской стерильности, причем взаимодействие предотвращает экспрессию гена пластидной мужской стерильности. 43. The plant according to § 42, in which the male fertility reducing gene encodes a plastid-oriented reducing polypeptide that penetrates the plastids and specifically interacts with the gene expression prevention site, which is effectively located in the plastid male sterility gene, and the interaction prevents gene expression plastid male sterility.
44. Растение по п.43, в котором полипептид-восстановитель выбирают из группы, состоящей из lac-репрессора и tet-репрессора. 44. The plant of claim 43, wherein the reducing polypeptide is selected from the group consisting of a lac repressor and a tet repressor.
45. Растение по п.42, в котором ген-восстановитель мужской фертильности кодирует ядерно-ориентированный полипептид-восстановитель, который проникает в ядра и специфично взаимодействует с нуклеотидной последовательностью-мишенью для предотвращения экспрессии гена, действенным образом расположенной в ядерном гене мужской стерильности, причем взаимодействие предотвращает экспрессию ядерного гена мужской стерильности. 45. The plant according to § 42, in which the male fertility reducing gene encodes a nuclear-oriented reducing polypeptide that penetrates the nuclei and specifically interacts with the target nucleotide sequence to prevent gene expression, effectively located in the male sterility nuclear gene, and the interaction prevents the expression of a nuclear gene of male sterility.
46. Растение по п.45, в котором полипептид-восстановитель выбирают из группы, состоящей из tet-репрессора и lac-репрессора. 46. The plant of claim 45, wherein the reducing polypeptide is selected from the group consisting of a tet repressor and a lac repressor.
47. Растение с цитоплазматической мужской стерильностью, имеющее пластидные геномы, которые включают стабильно интегрированный ген пластидной мужской стерильности, который может регулироваться с помощью кодируемого в ядре пластид-ориентированного регуляторого полипептида, и имеющее ядерные геномы, которые включают стабильно интегрированный ген ядерной мужской стерильности, который содержит нуклеотидную последовательность, имеющую специфичную для пыльника 5'-регуляторную область, действенным образом сцепленную с нуклеотидной последовательностью, которая кодирует пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который способен проникать в пластиды и регулировать ген пластидной мужской стерильности, причем регуляция приводит к нарушению образования жизнеспособной пыльцы. 47. A plant with cytoplasmic male sterility having plastid genomes that includes a stably integrated plastid male sterility gene that can be regulated using a plastid-oriented regulatory polypeptide encoded in the nucleus, and having nuclear genomes that include a stably integrated nuclear male sterility gene that contains a nucleotide sequence having anther specific 5'-regulatory region, effectively linked to the nucleotide after a sequence that encodes a plastid-oriented regulatory polypeptide that is able to penetrate into plastids and regulate the plastid male sterility gene, and regulation leads to disruption of the formation of viable pollen.
48. Растение с цитоплазматической мужской стерильностью, полученное способом, который включает: а) выбор родительской линии растения; б) получение родительского растения с трансгенными пластидами из родительской линии растения путем стабильной трансформации пластид в клетках родительской линии растения геном пластидной мужской стерильности и регенерацию из них растения с трансгенными пластидами, причем ген пластидной мужской стерильности может регулироваться кодируемым в ядре пластид-ориентированным регуляторным полипептидом, при этом регуляция в ткани пыльника вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы; в) получение родительского растения с трансгенными ядрами из родительской линии растения путем стабильной трансформации ядер в клетках родительской линии растения геном ядерной мужской стерильности и регенерацию из них растения с трансгенными ядрами, причем ген ядерной мужской стерильности содержит специфичную для пыльника 5'-регуляторную нуклеотидную последовательность, действенным образом сцепленную с кодирующей нуклеотидной последовательностью, которая кодирует пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который способен проникать в пластиды и регулировать ген пластидной мужской стерильности; и г) скрещивание растения с трансгенными пластидами с растением с трансгенными ядрами для получения растения, в котором пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который делают специфичным для пыльника, проникает в трансформированные пластиды клеток пыльника и регулирует ген пластидной мужской стерильности, причем регуляция вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы. 48. A plant with cytoplasmic male sterility obtained by a method that includes: a) selecting the parent line of the plant; b) obtaining a parent plant with transgenic plastids from the parent line of the plant by stably transforming the plastids in the cells of the parent line of the plant with the plastid male sterility genome and regenerating the plant with transgenic plastids from them, and the plastid male sterility gene can be regulated by a plastid-oriented regulatory polypeptide encoded in the kernel, while regulation in the anther tissue causes a violation of the formation of viable pollen; c) obtaining a parent plant with transgenic nuclei from the parent line of the plant by stably transforming the nuclei in the cells of the parent line of the plant with a nuclear male sterility genome and regenerating plants with transgenic nuclei from them, the nuclear male sterility gene containing an anther-specific 5'-regulatory nucleotide sequence, effectively linked to a coding nucleotide sequence that encodes a plastid-oriented regulatory polypeptide, which method n penetrate plastids and regulate the gene for plastid male sterility; and d) crossbreeding a plant with transgenic plastids with a plant with transgenic nuclei to produce a plant in which a plastid-oriented regulatory polypeptide that is specific for anther penetrates transformed plastids of anther cells and regulates the plastid male sterility gene, and regulation causes a violation of the formation of viable pollen.
49. Гибридные семена с мужской фертильностью, полученные из двух родительских линий растения, одна из которых включает растения с цитоплазматической мужской стерильностью, способом, который включает: а) получение растений с цитоплазматической мужской стерильностью из первой родительской линии растения путем: I) получения родительского растения с трансгенными пластидами из родительской линии растения путем стабильной трансформации пластид в клетках родительской линии растения геном пластидной мужской стерильности и регенерации из них растения с трансгенными пластидами, причем ген пластидной мужской стерильности может регулироваться кодируемым в ядре пластид-ориентированным регуляторным полипептидом, при этом регуляция в ткани пыльника вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы; II) получения родительского растения с трансгенными ядрами из родительской линии растения путем стабильной трансформации ядер в клетках родительской линии растения геном ядерной мужской стерильности и регенерации из них растения с трансгенными ядрами, причем ген ядерной мужской стерильности содержит специфичную для пыльника 5'- регуляторную нуклеотидную последовательность, действенным образом сцепленную с кодирующей нуклеотидной последовательностью, которая кодирует пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который способен проникать в пластиды и регулировать ген пластидной мужской стерильности; и III) скрещивания растения с трансгенными пластидами с растением с трансгенными ядрами для получения растения, в котором пластид-ориентированный регуляторный полипептид, который делают специфичным для пыльника, проникает в трансформированные пластиды клеток пыльника и регулирует ген пластидной мужской стерильности, причем регуляция вызывает нарушение образования жизнеспособной пыльцы, приводя тем самым к получению растений с цитоплазматической мужской стерильностью; б) получение растения с восстановленной мужской фертильностью из второй родительской линии растения путем стабильной трансформации ядер в клетках второй родительской линии растения геном-восстановителем мужской фертильности, который кодирует генный продукт-восстановитель, способный предотвращать регуляцию гена пластидной мужской стерильности пластид-ориентированным регуляторным полипептидом, тем самым делая возможным образование жизнеспособной пыльцы и регенерацию растения из клетки со стабильно трансформированным ядром; и в) скрещивание растений с цитоплазматической мужской стерильностью с растениями с восстановленной мужской фертильностью для получения из двух родительских линий растений гибридных семян с мужской фертильностью. 49. Hybrid seeds with male fertility, obtained from two parent lines of the plant, one of which includes plants with cytoplasmic male sterility, by a method that includes: a) obtaining plants with cytoplasmic male sterility from the first parent line of the plant by: I) obtaining the parent plant with transgenic plastids from the parent line of the plant by stable transformation of plastids in the cells of the parent line of the plant with the plastid male sterility genome and regeneration from them plants with transgenic plastids, the male plastid sterility gene can be regulated by a plastid-oriented regulatory polypeptide encoded in the nucleus, while regulation in the anther tissue causes a disturbance in the formation of viable pollen; II) obtaining a parent plant with transgenic nuclei from the parent line of the plant by stably transforming the nuclei in the cells of the parent line of the plant with a nuclear male sterility genome and regenerating plants with transgenic nuclei from them, the nuclear male sterility gene containing an anther-specific 5'-regulatory nucleotide sequence, effectively linked to a coding nucleotide sequence that encodes a plastid-oriented regulatory polypeptide, which method n entering plastids and regulate plastid male sterility gene; and III) crossing a plant with transgenic plastids with a plant with transgenic nuclei to produce a plant in which a plastid-oriented regulatory polypeptide that is specific for anther penetrates the transformed plastids of anther cells and regulates the plastid male sterility gene, and regulation causes a violation of the formation of viable pollen, thereby leading to the production of plants with cytoplasmic male sterility; b) obtaining a plant with restored male fertility from the second parent line of the plant by stably transforming the nuclei in the cells of the second parent line of the plant with a male fertility reducing gene that encodes a reducing gene product that can prevent the regulation of the plastid male sterility gene by a plastid-oriented regulatory polypeptide, thereby making it possible to form viable pollen and regenerate a plant from a cell with a stably transformed nucleus; and c) crossing plants with cytoplasmic male sterility with plants with restored male fertility to obtain hybrid seeds with male fertility from two parent plant lines.