Claims (14)
1. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза, происходящая из микроорганизма, принадлежащего к роду Escherichia, имеющая мутацию, вызывающую десенсибилизацию к ингибированию по типу обратной связи фосфоенолпируваткарбоксилазы аспарагиновой кислотой.1. A mutant phosphoenolpyruvate carboxylase, derived from a microorganism belonging to the genus Escherichia, with a mutation that causes desensitization to feedback inhibition of phosphoenolpyruvate carboxylase by aspartic acid.
2. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза по п. 1, которая, в случае существования в клетках микроорганизма, принадлежащего к роду Escherichia, делает эти клетки устойчивыми к соединению, имеющему следующие свойства:
соединение проявляет ингибирующее рост действие против микроорганизма, принадлежащего к роду Escherichia, продуцирующего фосфоенолпируваткарбоксилазу дикого типа;
ингибирующее рост действие этого соединения снимается в присутствии L-глутаминовой кислоты или L-аспарагиновой кислоты; и соединение ингибирует активность фосфоенолпируваткарбоксилазы дикого типа.2. The mutant phosphoenolpyruvate carboxylase according to claim 1, which, if a microorganism belonging to the genus Escherichia exists in the cells, makes these cells resistant to a compound having the following properties:
the compound exhibits a growth inhibitory effect against a microorganism belonging to the genus Escherichia producing the wild type phosphoenolpyruvate carboxylase;
the growth inhibitory effect of this compound is removed in the presence of L-glutamic acid or L-aspartic acid; and the compound inhibits the wild-type phosphoenolpyruvate carboxylase activity.
3. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза по п. 2, отличающаяся тем, что указанное соединение выбрано из 3-бромпирувата, β-гидразида аспарагиновой кислоты и DL-трео -β-гидроксиаспарагиновой кислоты. 3. The mutant phosphoenolpyruvate carboxylase according to claim 2, characterized in that said compound is selected from 3-bromopyruvate, aspartic acid β-hydrazide and DL-threo-β-hydroxyaspartic acid.
4. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза по п. 1, отличающаяся тем, что указанная мутация представляет собой мутацию для замены глутаминовой кислоты 625 лизином (нумерация от N-конца фосфоенолпируваткарбоксилазы). 4. The mutant phosphoenolpyruvate carboxylase according to claim 1, characterized in that said mutation is a mutation for replacing glutamic acid 625 with lysine (numbering from the N-terminus of phosphoenolpyruvate carboxylase).
5. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза по п. 1, отличающаяся тем, что указанная мутация представляет собой мутацию для замены аргинина 222 гистидином и глутаминовой кислоты 223 лизином, соответственно (нумерация от N-конца фосфоенолпируваткарбоксилазы). 5. Mutant phosphoenolpyruvate carboxylase under item 1, characterized in that the mutation is a mutation to replace arginine 222 with histidine and glutamic acid 223 with lysine, respectively (numbering from the N-terminus of phosphoenolpyruvate carboxylase).
6. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза по п. 1, отличающаяся тем, что указанная мутация представляет собой мутацию для замены серина 288 фенилаланином, глутаминовой кислоты 289 лизином, метионина 551 изолейцином и глутаминовой кислоты 804 лизином, соответственно (нумерация от N-конца фосфоенолпируваткарбоксилазы). 6. The mutant phosphoenolpyruvate carboxylase according to claim 1, characterized in that said mutation is a mutation to replace serine 288 with phenylalanine, glutamic acid 289 with lysine, methionine 551 with isoleucine and glutamic acid 804 with lysine, respectively (numbering from the N-terminal phosphoenolpv carcate
7. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза по п. 1, отличающаяся тем что, указанная мутация представляет собой мутацию для замены аланина 867 треонином (нумерация от N-конца фосфоенолпируваткарбоксилазы). 7. The mutant phosphoenolpyruvate carboxylase according to claim 1, characterized in that said mutation is a mutation for replacing alanine 867 with threonine (numbering from the N-terminus of phosphoenolpyruvate carboxylase).
8. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза по п. 1, отличающаяся тем, что указанная мутация представляет собой мутацию для замены аргинина 438 цистеином (нумерация от N-конца фосфоенолпируваткарбоксилазы). 8. Mutant phosphoenolpyruvate carboxylase under item 1, characterized in that the mutation is a mutation to replace arginine 438 with cysteine (numbering from the N-terminus of phosphoenol pyruvate carboxylase).
9. Мутантная фосфоенолпируваткарбоксилаза по п. 1, отличающаяся тем, что указанная мутация представляет собой мутацию для замены лизина 620 серином (нумерация от N-конца фосфоенолпируваткарбоксилазы). 9. Mutant phosphoenolpyruvate carboxylase under item 1, characterized in that the mutation is a mutation to replace lysine 620 with serine (numbering from the N-terminus of phosphoenolpyruvate carboxylase).
10. Фрагмент ДНК, кодирующий мутантную фосфоенолпируваткарбоксилазу по любому из пп. 1-9. 10. The DNA fragment encoding the mutant phosphoenolpyruvate carboxylase according to any one of paragraphs. 1-9.
11. Микроорганизм, принадлежащий к роду Escherichia или к коринеформным бактериям, трансформированный посредством интеграции в хромосомную ДНК фрагмента ДНК по п. 10. 11. A microorganism belonging to the genus Escherichia or to coryneform bacteria, transformed through integration into the chromosomal DNA of the DNA fragment according to claim 10.
12. Рекомбинантная ДНК, образованная лигированием фрагмента ДНК п. 10 с векторной ДНК, способной автономно реплицироваться в клетках бактерий, принадлежащих к роду Escherichia или к коринеформным бактериям. 12. Recombinant DNA formed by ligating the DNA fragment of p. 10 with vector DNA capable of autonomously replicating in bacterial cells belonging to the genus Escherichia or to coryneform bacteria.
13. Микроорганизм, принадлежащий в роду Escherichia или к коринеформным бактериям, трансформированный рекомбинантной ДНК п. 12. 13. A microorganism belonging to the genus Escherichia or to coryneform bacteria, transformed with recombinant DNA, paragraph 12.
14. Способ получения аминокислоты, предусматривающий: культивирование микроорганизма по п. 11 или 13 в пригодной для его культивирования среде и выделение из этой среды аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из L-лизина, L-треонина, L-метионина, L-изолейцина, L-глутаминовой кислоты, L-аргинина и L-пролина. 14. A method of obtaining an amino acid, comprising: cultivating a microorganism according to claim 11 or 13 in a medium suitable for its cultivation and isolating from this medium an amino acid selected from the group consisting of L-lysine, L-threonine, L-methionine, L-isoleucine , L-glutamic acid, L-arginine and L-proline.