RU2824803C1 - Способ диагностики ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом - Google Patents
Способ диагностики ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом Download PDFInfo
- Publication number
- RU2824803C1 RU2824803C1 RU2023128521A RU2023128521A RU2824803C1 RU 2824803 C1 RU2824803 C1 RU 2824803C1 RU 2023128521 A RU2023128521 A RU 2023128521A RU 2023128521 A RU2023128521 A RU 2023128521A RU 2824803 C1 RU2824803 C1 RU 2824803C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- patients
- orexin
- solution
- concentration
- chronic pancreatitis
- Prior art date
Links
- 208000000668 Chronic Pancreatitis Diseases 0.000 title claims abstract description 44
- 206010033649 Pancreatitis chronic Diseases 0.000 title claims abstract description 44
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 22
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 title abstract description 13
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 title abstract description 13
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 title abstract description 11
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 title 1
- 108060005714 orexin Proteins 0.000 claims abstract description 46
- 102000002512 Orexin Human genes 0.000 claims abstract description 44
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- OFNHNCAUVYOTPM-IIIOAANCSA-N orexin-a Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N2)[C@@H](C)O)=O)CSSC1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CNC=N1 OFNHNCAUVYOTPM-IIIOAANCSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 30
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 claims abstract 4
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 claims abstract 2
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 claims abstract 2
- 208000020450 carbohydrate metabolism disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000017745 inborn carbohydrate metabolic disease Diseases 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 208000016222 Pancreatic disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 208000024691 pancreas disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 abstract 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 20
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 20
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 17
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 16
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 16
- 108091005995 glycated hemoglobin Proteins 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 11
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 9
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 9
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 9
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 9
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 9
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 102100035371 Chymotrypsin-like elastase family member 1 Human genes 0.000 description 6
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 6
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 6
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 6
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 6
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 6
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 5
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 4
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 4
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 4
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 4
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 4
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 4
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000020595 eating behavior Effects 0.000 description 4
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 4
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 4
- 210000003918 fraction a Anatomy 0.000 description 4
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710138848 Chymotrypsin-like elastase family member 1 Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 101710099240 Elastase-1 Proteins 0.000 description 3
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 101000737684 Homo sapiens Chymotrypsin-like elastase family member 1 Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 201000001883 cholelithiasis Diseases 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 210000002196 fr. b Anatomy 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 2
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 2
- 208000002705 Glucose Intolerance Diseases 0.000 description 2
- 101000969553 Homo sapiens Cell surface glycoprotein CD200 receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 2
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 2
- 102100037588 Orexin receptor type 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100028141 Orexin/Hypocretin receptor type 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 2
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 2
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 2
- 108091006277 SLC5A1 Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 2
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 2
- 230000007937 eating Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 2
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 2
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 2
- RHLMXWCISNJNDH-UHFFFAOYSA-N n-[2-[3-[[5-[3-(dimethylcarbamoyl)phenyl]-2-methoxyphenyl]sulfonylamino]anilino]ethyl]-3-methylbenzamide Chemical compound COC1=CC=C(C=2C=C(C=CC=2)C(=O)N(C)C)C=C1S(=O)(=O)NC(C=1)=CC=CC=1NCCNC(=O)C1=CC=CC(C)=C1 RHLMXWCISNJNDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 201000009104 prediabetes syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 2
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBWSOTREAMFOCQ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 OBWSOTREAMFOCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 75976-10-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000009663 Acute Necrotizing Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010004637 Bile duct stone Diseases 0.000 description 1
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 1
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 1
- 208000004845 Cholecystolithiasis Diseases 0.000 description 1
- 201000009331 Choledocholithiasis Diseases 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000030814 Eating disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019454 Feeding and Eating disease Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000037011 Microlithiasis Diseases 0.000 description 1
- 101000598924 Mus musculus Orexin Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 102000018886 Pancreatic Polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 102000052651 Pancreatic hormone Human genes 0.000 description 1
- 108700020479 Pancreatic hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 description 1
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 description 1
- 206010058096 Pancreatic necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010062519 Poor quality sleep Diseases 0.000 description 1
- 206010071061 Small intestinal bacterial overgrowth Diseases 0.000 description 1
- 102000058090 Sodium-Glucose Transporter 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 101000983124 Sus scrofa Pancreatic prohormone precursor Proteins 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000002921 anti-spasmodic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124575 antispasmodic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 210000003295 arcuate nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000012550 audit Methods 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019577 caloric intake Nutrition 0.000 description 1
- 210000002318 cardia Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002192 cholecystectomy Methods 0.000 description 1
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037326 chronic stress Effects 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 102000005311 colipase Human genes 0.000 description 1
- 108020002632 colipase Proteins 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000014632 disordered eating Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 230000007368 endocrine function Effects 0.000 description 1
- 238000012336 endoscopic ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000005176 gastrointestinal motility Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000034737 hemoglobinopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000018337 inherited hemoglobinopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000020938 metabolic status Nutrition 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002182 neurohumoral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000007410 oral glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- 210000004798 organs belonging to the digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000004025 pancreas hormone Substances 0.000 description 1
- 210000000277 pancreatic duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000004203 pancreatic function Effects 0.000 description 1
- 229940032957 pancreatic hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 1
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 230000007142 small intestinal bacterial overgrowth Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- VBJGJHBYWREJQD-UHFFFAOYSA-M sodium;dihydrogen phosphate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].OP(O)([O-])=O VBJGJHBYWREJQD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000004514 sphincter of oddi Anatomy 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000008700 sympathetic activation Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N taurodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 AWDRATDZQPNJFN-VAYUFCLWSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000004260 weight control Methods 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, гастроэнтерологии, эндокринологии, и может быть использовано для диагностики ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом. Проводят забор крови из вены пациента, получение сыворотки крови, подготовку реагентов для проведения исследования, измерение оптической плотности растворов. Венозную кровь пациента центрифугируют для получения сыворотки крови в течение 20 минут при ускорении 1000 g, в качестве буферного раствора используют фосфатно-солевой раствор с концентрацией 0,01 моль/л, рН приготовленного раствора должен быть 7,18-7,22. За 15 минут до проведения анализа готовят раствор стандарта Орексина А, в результате получая 5 точек: 1000; 333.33; 111.11; 37.04; 12.35 пг/мл. Проводят исследование с помощью реагентов, на каждом этапе исследования после промывания удаляют с планшета остатки промывающего раствора, поддерживают влажность окружающего воздуха менее 60% и защищают раствор от действия солнечных лучей. При помощи микропланшетного ридера проводят измерения на длине волны 450 нм, рассчитывают средние значения оптической плотности для стандартов, контролей и образцов при анализе в дублях. С помощью полученных значений строят калибровочную кривую, по оси Y откладывают логарифм концентрации каждого стандарта Орексина А, а по оси X - оптическую плотность соответствующего стандарта. Концентрацию Орексина А в образцах определяют путем сравнения полученной оптической плотности образцов с построенной калибровочной кривой. При значении Орексина А более 99,9 пг/мл диагностируют ранние нарушения углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом. Способ обеспечивает возможность выявления ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом, что предотвратит развитие тяжелых осложнений заболеваний поджелудочной железы, за счет определения концентрации Орексина А в крови пациентов. 4 ил., 5 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к способам лабораторной диагностики ранних нарушений углеводного обмена при хроническом панкреатите.
Актуальность проблемы связана с трудностью диагностики нарушений углеводного обмена на ранних, доклинических стадиях, при заболеваниях поджелудочной железы. Лидирующее место в патологии поджелудочной железы занимает хронический панкреатит.
В 90-х годах двумя независимыми группами ученых были обнаружены нейропептиды орексина в гипоталамусе мышей (deLecea L., Kilduff T.S., Peyron С. et al., 1998; Sakurai Т., Amemiya A., Ishii M. et al., 1998). Последующие исследования показали роль орексинов в усилении аппетита и бодрствования, регулировки двигательной активности, секреции гормонов, влиянии на эмоциональные состояния и познание, а также на артериальное давление (Azeez I.A., Igado O.O., Olopade J.O.,2021].Также доказано влияние Орексинов на эндокринную функцию (воздействие нейропептидов на секрецию гормонов поджелудочной железы (deLecea L., Sutcliffe С., 2013)и модуляцию глюкозы (Tsuneki H., Wada Т., Sasaoka T., 2010), а Орексин А принимает участие в поддержании нормальной чувствительности к инсулину у пожилых пациентов, за счет регуляции передачи сигналов гипоталамического инсулина, ответственного за периферическую резистентность к инсулину повышающуюся с возрастом) и пищеварение (орексины способны усиливать моторику желудочно-кишечного тракта, а Орексин А повышать секрециюсоляной кислоты и снижать скорость опорожнения желудка и уровень лептина в плазме) (Tsuneki H., Anzawa Y., SoedaY. et al., 2008).
Известно, что поджелудочная железа сочетает в себе два крайне важных отдела по управлению питанием человека: экзокринный (выработка белкового секрета, 98% которого составляют ферменты, необходимые для расщепления питательных веществ на простые, легкоусвояемые соединения) и эндокринный (синтез гормонов: инсулин, глюкагон, соматостатин и панкреатический полипептид, инсулин и глюкагон регулируют уровень глюкозы в крови и ее транспорт в тканях). При длительном течении хронического панкреатита неизбежно развиваются нарушения углеводного обмена. Вероятность образования эндокринной недостаточности углеводного контроля при хроническом панкреатите через 10 лет достигает около 70% (Ahmed S.A., Wray С, Rilo H.L., et al. Chronicpancreatitis: recent advances and ongoing challenges. CurrProblSurg 2006; 43:127-238). Однако первые признаки нарушений углеводного обмена сложно заметить. Неадекватная потребностям организма эндокринная секреция поджелудочной железы приводит к избыточному накоплению триглицеридов (простых жиров, которые обеспечивают энергией клетки в условиях голодания или усиленной физической нагрузки), то есть росту жировых депо и ожирению, развивается гиперинсулинемия (т.е. уровень циркулирующего в крови инсулина становится выше уровня глюкозы). Появление повышенного уровня глюкозы запускает каскад процессов гликирования белков (процесс, когда изменяются свойства белков, в результате чего они не могут выполнять свою функцию), что нарушает многие процессы всего организма.
Таким образом, предполагается комплексное участие орексинов в регуляции функций пищеварительной системы и пищевого поведения. Поэтому актуальным представляется изучение уровня Орексина А у больных с заболеваниями желудочно-кишечного тракта, особенно при патологии поджелудочной железы, так как именно у таких пациентов наблюдается нарушение всех перечисленных функций.
Основными ферментами, синтезируемыми поджелудочной железой и принимающими участие в пищеварении, являются: амилаза, липаза, трипсин и химотрипсин. Амилаза участвует в расщеплении углеводов, поступающих с пищей, а липаза предназначена для переваривания жиров после их обработки желчью. Небольшое количество панкреатических ферментов попадает в кровоток, и их уровень повышается при затруднении оттока панкреатического сока в двенадцатиперстную кишку и при увеличении проницаемости мембран ацинусов.
Исходя из этого, появилась диагностическая необходимость определения уровня панкреатических ферментов в сыворотке крови (Саблин О.А., Гриневич В.Б., Успенский Ю.П., Ратников В. А. Функциональная диагностика в гастроэнтерологии. Санкт-Петербург. 2002; С. 53-56).
Известен способ диагностики хронического панкреатита, заключающийся в определение уровня липазы в сыворотке крови (Балабина Н.М. Хронический панкреатит: диагностика, лечение и профилактика в амбулаторных условиях: учебное пособие. Иркутск. 2016; С. 30), включающий забор крови у пациента из локтевой вены, получение плазмы крови, проведение анализа крови.
Способ определения липазы в сыворотки крови осуществляют методом ферментативного колориметрического химического анализа (Junge W, Abicht К, Goldman J etal. Оценка колориметрического жидкостного химического анализа липазы поджелудочной железы на анализаторах Hitachi в 7 клинических центрах Европы, Японии и США // Clin.Chem.Lab.Med 1999; 37).
Способ включает следующие действия: готовят 2 флакона: первый флакон-калибратор с лиофилизатом, второй - контрольный. В оба флакона вводят 3,0 млдистиллированной или деионизированной воды и растворяют содержимое взбалтыванием в течение 30 минут, затем в оба флакона добавляют 200 мкл. реагента 1 (трис 40 ммоль/л, дезоксихолат 1,8 ммоль/л, тауродезоксихолат 7,2 ммоль/л, колипаза >1 мг/л), после в контрольную пробу добавляют 2 мклдистиллированной воды, а в опытную пробу 2 мкл сыворотки, содержимое обоих флаконов перемешивают, инкубируют 3 минуты при +37°С, затем в оба флакона добавляются реагент 2 (тартратный буфер 15 ммоль/л, хлорид кальция 0,13 ммоль/л, субстрат липазы >0,7 ммоль/л), полученное содержимое тщательно перемешивают, инкубируют при +37°С в течение 2 минут, затем снимают показания поглощающей способности течение 2 минут. Анализатор автоматический рассчитывает концентрацию LIP каждой пробы после выполнения калибровки (CLSI.
Оценка характеристик точности методов количественного измерения (USA, 2008)
Нормальным значением считается результат от 0-190 МЕ/л, более высокие значения отражают наличие патологии поджелудочной железы: острого или обострения тяжелых форм хронического панкреатита, травм или онкологии поджелудочной железы (Ишманов М.Ю., Сертаков А.В., Соловьев A.M. и др. 250 показателей здоровья. Справочник. Из-во "Научная книга", 2013).
К недостаткам данного способа относятся:
- недостаточная чувствительность способа для выявления обострения хронического панкреатита (так как липаза повышается при некрозе поджелудочной железы, метод наиболее чувствителен при остром панкреатите);
- недостаточная чувствительность способа для ранних стадий хронического панкреатита (пиковых значений при обострении хронического панкреатита концентрация липазы в крови достигает к 3-4 суткам) (Ивашкин В.Т., Маев И.В., Шифрин О.С., Шептулин А.А., Охлобыстин А.В., Кучерявый Ю.А. Рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации по диагностике и лечению хронического панкреатита (проект) // Российский журнал гастроэнтерологии гепатологии, колопроктологии. 2013; 1: 66-87);
- данный метод исследования не чувствителен к нарушению экзокринной функции поджелудочной железы при хроническом панкреатите.
Еще в 1975 году был описан фермент - панкреатическая эластаза. Он вырабатывается поджелудочной железой и не метаболизируется в кишечнике, поэтому его активность в кале отражает экзокринную функцию органа (Маев И.В., Кучерявый Ю.А., Москалева А.Б. Хронический панкреатит: мифы и реалии // Фарматека. 2010; 12: С. 24-31).
Известен способ определения фекальной эластазы-1 иммуноферментным методом (патент № 2273030), включающий определение концентрации фекальной панкреатической эластазы-1 иммуноферментным методом, при этом дополнительно определяют массу сухого вещества кала. Рассчитывают концентрацию фекальной панкреатической эластазы-1 в 1 грамме сухого вещества кала по формуле:
Cd - концентрация эластазы- 1 в 1 грамме сухого вещества кала;
Са - концентрация эластазы - 1 в 1 грамме кала, полученного с помощью иммуноферментного анализа;
M1 - любая масса кала, используемая для определения сухого вещества кала;
Md1 - масса сухого вещества кала, содержащаяся в Ml.
При этом нормальными значениями концентрации фекальной эластазы-1 считают от 1000 до 2500 мкг на 1 г сухого вещества кала.
К недостаткам данного способа относится то, что он не отражает раннихизменений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом.
Наиболее близким к заявляемому способу является способ определения уровня гликированного гемоглобина (HbAlc) в сыворотке крови (Ильин А.В., Арбузова М.И, Князева А.П. Гликированный гемоглобин как ключевой параметр при мониторинге больных сахарным диабетом. Оптимальная организация исследований // Сахарный диабет. Диагностика, контроль и лечение. 2008. №2, С. 60).
Способ включает следующие действия: во флакон с контрольным образцом добавляют 0,3 мл дистиллированной воды и отставляют на 10 минут при комнатной температуре. Затем контрольный образец, не встряхивая, перемешивают до полного растворения лиофилизата, после этого 0,02 мл контрольного образца гликированного гемоглобина разводят с 0,2 мл гемолитика и перемешивают.
Достают микроколонки из холодильника, снимают вначале верхнюю крышку, затем нижний колпачок и удаляют жидкость. Дают возможность микроколонкам прогреться до комнатной температуры 22-25°С. Для каждого анализируемого образца крови (А и Б) маркируют по 2 пробирки. Устанавливают пробирки А в штатив в ряд 1, соответствующие пробирки Б - в соседние гнезда ряда 2.
В соответствующие микроколонки на верхний фильтр вносят по 0,1 мл гемолизата исследуемых образцов крови. После впитывания гемолизатов в фильтр вносят по 0,1 мг буферного раствора и ждут его проникновения в сорбент, затем вносят в микроколонки по 2,0 мл буферного раствора и дают стечь жидкости. Микроколонки из ряда 1 перемещают в пробирки Б ряд 2 и вносят в каждую из них по 2,0 мл раствора уксусной кислоты. Дают жидкости стечь. Вынимают микроколонки из пробирок и переносят в другой штатив. В пробирки А добавляют по 4 мл дистиллированной или деионизированной воды и перемешивают (фракция А). Также тщательно перемешать пробирки Б (фракция Б). Измеряют оптическую плотность растворов из пробирок А и Б при длине волны 414 нм (или в пределах 405-420 нм, или синий фильтр), используя в качестве образца сравнения дистиллированную воду. Содержание гликированного гемоглобина рассчитывают по формуле:
где:
ОП (Б) - оптическая плотность фракции Б;
ОП (А) - оптическая плотность фракции А;
2,07 - пересчетный коэффициент оптической плотности фракции А (соотношение объема фракции А, равной 6.2 мл, и фракции Б, равной 3,0 мл);
100 - пересчетный коэффициент для вычисления процентного содержания.
0,71+1,9 - пересчетные коэффициенты для вычисления фракции гликированного гемоглобина из общего содержания гликогемоглобина.
(Инструкция по применению набора для определения гликогемоглобина (НЬА1 с) в крови «ГЛИКОГЕМОТЕСТ»).
Показатель гликированного гемоглобинаявляется критерием наличия или отсутствия сахарного диабета, компенсации и декомпенсации заболевания и эффективности терапии. При значении гликированного гемоглобина <6,1 ммоль/л отмечают отсутствие сахарного диабета, при значении 6,1-7,5 ммоль/л судят об эффективности терапии сахарного диабета 1 типа, <7,0 ммоль/л - о компенсации сахарного диабета 1 и 2 типов, 7,1-7,5 ммоль/л - субкомпенсации сахарного диабета, более 7,5 ммоль/л - декомпенсации сахарного диабета 1 и 2 типа и неэффективности лечения сахарного диабета 1 типа (Ильин А.В., Арбузова М.И, Князева А.П. Гликированный гемоглобин как ключевой параметр при мониторинге больных сахарным диабетом. Оптимальная организация исследований // Сахарный диабет. Диагностика, контроль и лечение. 2008; № 2, С. 60).
Недостатками данного способа является то, что он отражает латентную (скрытую) форму сахарного диабета, и не отражает экзокринную функцию поджелудочной железы, а также зависим от гематологических заболеваний и демонстрирует ложные значения гликированного гемоглобина у больных анемиями, гемоглобинопатиями (Бирюкова Е.В. Роль гликированного гемоглобина в диагностике и улучшении прогноза сахарного диабета // Медицинский совет 2017; № 3, С. 48-53).
Недавно были обнаружены нейропептиды-орексины А и В, которые осуществляют свое действие в клетках за счет активации специфических орексиновых рецепторов OX1R и OX2R (Wang C, PanY., Zhang R., et al. Heterodimerization of mouse orexin type 2 receptor variants and the effects on signal transduction. Biochim Biophys Acta. 2014; 1843 (3):652-63).
Орексиновые нейроны являются небольшой группой клеток, расположенных в латеральном гипоталамусе, а их аксоны формируют сеть, которая охватывает различные структуры головного мозга, следовательно, функциональная роль орексинов разнообразна. За счет связи с аркуатным ядром гипоталамуса, через реципрокные соединения, в экспериментальных исследованиях было показано, что орексины активируют прием пищи, что опосредованно оказывает влияние на увеличение массы тела и поддержание нормального уровня гликемии, влияют на моторную активность и секрецию верхних отделов пищеварительной трубки (Шаинидзе К.З., Новикова Н.С., Корнева Е.А. Орексин-содержащие нейроны гипоталамуса при стрессе и некоторых формах патологии // Вестник Санкт-Петербургского университета 2011; 11(2), С. 182-184).
В экспериментах на животных было показано влияние обсуждаемых пептидов на всасывание глюкозы в кишечнике посредством регуляции транспортера SGLT1 (Docroc T., Voisin T., Laburthe M. Orexins Control Intestinal Glucose Transportby Distinct Neuronal, Endocrine, and Direct Epithelial Pathways. Diabetes 2007; 56 (10): 2494-2500). OX1R и OX2R ингибируют SGLT1-опосредованное поглощение глюкозы через энтероциты, что предполагает их участие в патогенезе сахарного диабета, а также в регуляции функции поджелудочной железы. Таким образом, показано комплексное участие этих пептидов регуляции функций пищеварительной системы, контроле массы тела и углеводном обмене.
Цель изобретения - создание способа выявления ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом.
Поставленная цель достигается тем, что способ реализуют с помощью набора для определения Орексина А методом конкурентного иммуноферментного анализа в сыворотке крови (Фиг. 1). Реагенты и материалы набора Cloud-CloneCorp.для определения Орексина А методом конкурентного иммуноферментного анализа в сыворотке крови представлены на Фиг. 4.
Для этого восстанавливают стандартный реагент: 1 мл раствора для стандарта выдерживают 10 минут при комнатной температуре, взбалтывают, (концентрация составляет 1000 пг/мл), готовят 5 пробирок, в каждой из которых содержатся 0,6 мл (600 мкл) растворителя для стандарта, в 4 пробирки добавляют 0,3 мл раствора стандарта, перемешивают, в результате получают 5 точек разведения: 1000; 333.33; 111.11; 37.04; 12.35 пг/мл и последняя пробирка с растворителем для стандарта-0 пг/мл (Фиг. 2).
Детектирующий реагент А восстанавливают при помощи 150 мкл растворителя для реагентов, выдерживают 10 минут при комнатной температуре, перемешивают без образования пены, разводят до рабочей концентрации растворителем А (1:100).
Детектирующий реагент взбалтывают или центрифугируют перед использованием, разводят до рабочих концентраций при помощи растворителя В (1:100). 20 мл промывающего раствора разводят в 580 мл деионизированной или дистиллированной воды, чтобы получилось 600 мл промывающего раствора. Достают из набора 9 мл ТМБ раствора и 6 мл Стоп-реагента (прилагаются к набору в готовом виде).
Процедура анализа состоит из следующих действий:
1. Достают из набора 96-луночный стрипованный планшет. Определяют лунки для разведенных стандартов, для бланка (нулевой уровень) и для образцов. Готовят 5 лунок для стандарта и 1 для бланка. Добавляют по 50 мкл разведенных стандартов, образцов и бланк в соответствующие лунки. Затем незамедлительно добавляют по 50 мкл Детектирующего реагента А в каждую лунку, аккуратно встряхивают планшет. Заклеивают планшет пленкой для планшета и инкубируют в течение 1 часа при 37°С.
2. Удаляют жидкость из лунок и промывают 350 мкл Промывающего раствора каждую лунку при помощи пипетки, оставляют на 1-2 минуты. Полностью удаляют оставшуюся жидкость из всех лунок встряхиванием на фильтровальную бумагу, повторяют процедуру 3 раза. После последней промывки удаляют остатки жидкости аспирацией или встряхиванием. Переворачивают планшет на фильтровальную бумагу.
3. Добавляют по 100 мкл рабочего раствора Детектирующего реагента Вв каждую лунку. Заклеивают пленкой для планшета лунки и инкубируютв течение 30 минут при температуре 37°С.
4. Повторяют 5 раз процесс, описанный в пункте 2.
5. Затем добавляют 90 мкл ТМБ раствора в каждую лунку, заклеивают пленкой для планшета и инкубируют 10-20 минут при температуре 37°С, избегают попадания света, жидкость должна приобрести голубой цвет.
6. Добавляют 50 мкл стоп-реагента в каждую лунку, жидкость должна стать желтой, перемешивают жидкость постукиванием по боковой части планшета.
7. Удаляют следы жидкости и отпечатки пальцев со дна планшета, немедленно помещают планшет в микропланшетный ридер с шириной полосы пропускания 10 нм или менее и оптической плотностью 0-3 O.D. или больше, проводят измерения на длине волны 450 нм±10 нм.
Микропланшетный ридер рассчитывает средние результаты оптической плотности для стандартов, контролей и образцов при анализе в дублях. Из полученных значений строят стандартную кривую на логарифмических координатах или полулогарифмических координатах. По оси Y откладывают логарифм концентрации Орексина А, а по оси X - оптическую плотность. По полученным точкам чертят кривую (Фиг. 3).
Минимальная определяемая концентрация 4,99 пг/мл. Это минимальная концентрация белка, которую набор способен отличить от нуля. Она определяется в диапазоне двух стандартных отклонений от медианы оптической плотности величины нулевого стандарта (бланка) при 20 измерениях. Затем вычисляют соответствующую концентрацию. Набор имеет высокую чувствительность и специфичность для определения Орексина А. Не обнаружено кросс-реактивности и интерференции с аналогами. (Инструкция от набора для определения Орексина А методом ИФА для человека invitro Cloude-CloneCorp.USA).
При значении Орексина А более 99,9 пг/мл судят о наличии ранних, доклинических признаков нарушения углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом и риске развития сахарного диабета.
Новизна способа заключается в том, что впервые у пациентов с хроническим панкреатитом определяют уровень Орексина А.
Заявляемый способ позволяет использовать сыворотку крови пациента, без специальной подготовки пациента для анализа, увеличивает выявляемость ранних нарушений углеводного обмена у больных хроническим панкреатитом, что может помочь в поиске новых возможностей лечения ожирения и ассоциированных с ним заболеваний (сахарного диабета, нарушения толерантности к углеводам, артериальной гипертонии и других).
Примеры конкретного выполнения
Пример 1. Были исследованы 90 пациентов, из них 40 больных с хроническим панкреатитом, 50 с эрозивно-язвенными заболеваниями желудка и двенадцатиперстной кишки и 10 здоровых добровольцев. Всем пациентам проведен забор крови из вены, из которой после центрифугирования в течение 20 минут при ускорении 1000 g, получена сыворотка для дальнейшего исследования.
Исследование проводилось с использованием набора CEA607Hu производителя Cloud-CloneCorp., USA.
Набор CEA607Hu для количественного определения Орексина А методом конкурентного ИФА в сыворотке, плазме крови и других биологических жидкостях человека, включает следующие реагенты и материалы:
- 96-лунный стрипованный планшет;
- стандарт;
- детектирующий реагент А;
- детектирующий реагент В;
- растворитель для реагентов;
- ТМБ субстрат (3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида);
- промывающий раствор (30х концентрат);
- пленка для заклейки 96-лунного планшета;
- растворитель для стандарта;
- растворитель А;
- растворитель В;
- стоп-реагент.
Также в исследовании использовались материалы, не входящие в комплект поставки, указанные производителем:
- микропланшетный ридер с фильтром 450±10 нм;
- прецизионная одноканальная или многоканальная пипетки со сменными наконечниками;
- пробирки эппендорфа для разведения образцов;
- деионизированная или дистиллированная вода;
- фильтрационная бумага для подсушивания планшета;
- ванночка для промывающего раствора;
- фосфатно-солевой буферный раствор 0,01 моль/л, рН 7.0-7.2.
Перед проведением исследования готовят реагенты:
- фосфатно-солевой буферный раствор,
- восстанавливают: стандарт (из набора CEA607Hu), детектирующий реагент А (из набора CEA607Hu), детектирующий реагент В (из набора CEA607Hu),
- разводят промывающий раствор (из набора CEA607Hu).
1. Приготовление фосфатно-солевого буферного раствора включает:
Раствор 1. В мерную колбу вместимостью 1000 мл поместить 17,8 г натрия фосфата двузамещенного 2 - водного (Na2HPO4⋅H2O), растворить в 500 мл воды очищенной, довести объем раствора тем же растворителем до метки и перемешать.
Раствор 2. В мерную колбу вместимостью 1000 мл поместить 156 г натрия фосфата однозамещенного 2-водного (NaH2PO4⋅H2O), растворить в 500 мл воды очищенной, довести объем раствора тем же растворителем до метки и перемешать.
В мерную колбу вместимостью 1000 мл внести 720 мл раствора 1, прибавить 280 мл раствора 2 и перемешать. Затем в мерную колбу вместимостью 1000 мл поместить 100 мл приготовленного 0,1 М фосфатного буферного раствора, довести объем раствора водой очищенной до метки, перемешать, прибавить 8,5 г натрия хлорида и вновь перемешать.
(Примечание *РН полученного раствора должен быть 7,2±0,02. Если показатель рН выше или ниже требуемого, его соответственно доводят 1 М раствором хлористоводородной кислоты или 1 М раствором натрия гидроксида).
2. Стандартный раствор, входящий в набор CEA607Hu представляет собой лиофилизированный раствор, содержащий моноклональные антитела, специфичные к Орексину А, конъюгированные с пероксидазой хрена, концентрация которого составляет 1000 пг/мл.
Готовый раствор из набора, в начале исследования необходимо восстановить (развести): 1 мл растворителя для стандарта выдерживают 10 минут при комнатной температуре, взбалтывают без образования пены (концентрация стандарта составляет 1000 пг/мл), готовят 5 пробирок, в каждой из которых содержатся 0,6 мл (600 мкл) растворителя для стандарта, в 4 пробирки добавляют 0.3 мл раствора стандарта, перемешивают, в результате получают 5 точек разведения: 1000; 333.33; 111.11; 37.04; 12.35 пг/мл и последняя пробирка с растворителем для стандарта-0 пг/мл, этапы разведения показаны на Фиг. 1.
(Примечание *в рекомендации производителя указано что Стандарт необходимо приготовить за 15 минут до проведения анализа).
3. Восстановление детектирующего реагента А: в готовый детектирующий реагент А из набора CEA607Hu добавить 150 мкл растворителя для реагентов, выдержать 10 минут при комнатной температуре, перемешать без образования пены, затем развести до рабочей концентрации растворителем А (1:100).
4. Восстановление детектирующего реагента В: взять готовый детектирующий реагент Виз набора CEA607Hu, взболтать вращательными движениями или центрифугировать, затем развести до рабочих концентраций при помощи растворителя В (1:100).
Примечание *в рекомендации производителя указано, что при приготовлении Стандарта и детектирующих реагентов А и В необходимо избегать образования пены при взбалтывании, а для минимизации погрешностей при пипетировании используются малые объемы и калибровочные дозаторы, важно дозировать более чем 10 мкл за один раз).
5. Разведение промывающего раствора: в 20 мл промывающего раствора из набора CEA607Hu добавить 580 мл деионизированной и дистиллированной воды, должно получиться 600 мл промывающего раствора.
(Примечание * если в промывающем растворе образовались кристаллы необходимо довести температуру раствора до комнатной температуры и аккуратно перемещать его до растворения кристаллов).
Процедура анализа
1. Необходимо определить лунки для разведенных стандартов, для бланка (нулевой уровень) и для образцов. Приготовить 5 лунок для стандартов и 1 для бланка. Затем добавить по 50 мкл разведенных стандартов, образцов и бланк в соответствующие лунки, встряхнуть планшет, заклеить его пленкой и инкубировать 1 час при 37°С.
2. Удалить жидкость из лунок и промыть их 350 мкл промывающим раствором (1х) в каждую лунку при помощи пипетки, оставить на 1-2 минуты, затем полностью удалить оставшуюся жидкость из всех лунок встряхиванием на фильтровальную бумагу, процедуру повторить 3 раза, после последней промывки удалить остатки жидкости встряхиванием или аспирацией, затем перевернуть планшет на фильтровальную бумагу.
3. Добавить по 100 мкл раствора детектирующего реагента В в каждую лунку, заклеить пленкой для планшета и инкубировать 30 минут при 37°С.
4. Повторить процесс, описанный в пункте № 2 пять раз.
5. Добавить по 90 мкл готового ТМБ субстрата из набора CEA607Hu в каждую лунку, заклеить пленкой для планшета и инкубировать 10-20 минут при температуре 37°С, избегая попадания света с целью профилактики контаминации, жидкость должна приобрести голубой цвет.
6. Добавить по 50 мкл готового Стоп-реагента из набора CEA607Hu в каждую лунку, жидкость должна стать желтой, перемешать постукиванием по боковой части планшета
7. Удалить следы жидкости и отпечатки пальцев со дна планшета и незамедлительно поместить планшет в ридер и сделать измерение на длине волны 450 нм.
Оценка результатов
Принцип исследования основан на конкурентном методе ИФА, поэтому наблюдается обратная зависимость между концентрацией Орексина А в образце и интенсивностью сигнала. В исследовании рассчитываются средние результаты оптической плотности для стандартов, контролей и образцов при анализе в дублях. Стандартная кривая строится на логарифмических координатах или полулогарифмических координатах. По оси Y откладывают логарифм концентрации Орексина А, а по оси Х - оптическую плотность. Затем чертится кривая, которая наиболее точно соответствует полученным точкам. График можно построить при помощи программного обеспечения.
Линейность набора была определена тестированием образцов с определенной концентрацией Орексина А и их серийных разведений. В таблице 1 показано процентное соотношение расчетной концентрации к ожидаемой.
Чувствительность метода
Минимальная определяема концентрация 4,99 пг/мл. Это минимальная концентрация белка, которую набор способен отличить от нуля. Она определяется в диапазоне двух стандартных отклонений от медианы оптической плотности величины нулевого стандарта при 20 измерениях. Затем вычисляется соответствующая концентрация.
Пример расчета результатов
После проведенной процедуры анализа, 96-тилуночный микропланшет был помещен в ридер и проведены измерения на длине волны 450 нм. В результате нами были получены следующие значения Орексина А, пг/мл сыворотки крови пациентов, участвующих в исследовании (3 группы: 1-больные с хроническим панкреатитом, 2-больные с эрозивно-язвенными заболеваниями желудка и ДПК, 3-контрольная группа здоровых добровольцев), полученные данные представлены в таблице Фиг. 2. Наибольшие значения Орексина А (более 99,9 пг/мл) были характерны для пациентов с хроническим панкреатитом, с выявленными нарушения углеводного обмена по результатам глюкозы крови натощак и уровню гликированного гемоглобина. Что является либо риском развития сахарного диабета в будущем, либо уже подтверждением наличия заболевания. Полученные значения Орексина А, пг/мл. приведены на Фиг. 2.
Затем нами были рассчитаны средние значения оптической плотности для стандартов, контролей и образцов в дублях. После с помощью программного обеспечения (CurveExpert) по полученным результатам построен график, приведенный на рисунке 2, где по оси Y отложены логарифмы концентрации Орексина А, а по оси Х-оптическая плотность. ОП-независимая переменная, а концентрация-зависимая переменная, полученный график представлен на Фиг. 3.
Пример 2
Пациент А., 55 лет, обратился в ГБУЗ ККБ № 2 в гастроэнтерологический центр СКАЛ в 2021 году, с жалобами: на боли в верхних отделах живота, усиливающиеся после приема пищи, снижение аппетита, тошноту, повышенное газообразование, кашицеобразный стул 2-3 раза в сутки без патологических примесей. Из анамнеза: более 5 лет страдает хроническим панкреатитом, обострения отмечает при погрешностях в питании (употребление жирной, жареной и богатой быстрыми углеводами пищи), приеме алкоголя (16-19 баллов по результату теста AUDIT). Наследственность отягощена по Сахарному диабету и Артериальной гипертонии.
Настоящее ухудшение отмечает последние 2 недели, когда после пищевой нагрузки и употребления алкоголя рецидивировали абдоминальные боли, проявления диспепсии и диарейный синдром. Пациент принимал полиферментные препараты 25000 ед. на прием, спазмолитики, на фоне лечения отметил клиническое улучшение.
При определении содержания сывороточных ферментов поджелудочной железы (липазы и амилазы), было выявлено повышение липазы в сыворотке крови до 70,65 МЕ/л, а уровень амилазы в моче и крови у пациента были в пределах нормы. По данным концентрации панкреатической эластазы-1 в кале у пациента значение было в пределах нормы (>500 мкг/г фекалий). Содержание общего холестерина было выше референтных значений и составило 6,3 ммоль/л, а содержание липопротеидов низкой плотности превышало референтные значения и составило 3,9 ммоль/л. В копрограмместеатореи выявлено не было. Определяя уровень гликированного гемоглобина (HbAlc) и глюкозы натощак, значение HbAlc составило 6,4%, а уровень глюкозы 5,94 ммоль/л, что было в пределах нормы.
В отделении были проведены следующие исследования: антропометрическое исследование, в результате чего выявлено ожирение 1 степени (ИМТ>30 кг/м2). По Ультразвуковому исследованию органов брюшной полости были выявлены неравномерность контуров поджелудочной железы, повышение эхогенности и неоднородность структуры ткани железы. Эзофагогастродуодноскопия показала наличие недостаточности кардии и признаки гастрита. Результат эндоскопической ультрасонографии выявил гиперэхогенные очаги без тени и неравномерность главного протока поджелудочной железы.
В результате был установлен диагноз: Хронический панкреатит с сохраненной внешнесекреторной функцией, болевая форма, стадия обострения. СИБР. Ожирение 1 степени (ИМТ>30 кг/м2). Дислипидемия.
Затем мы определили уровень Орексина А-104 пг/мл (норма до 99,9 пг\мл), который свидетельствует о нарушении углеводного обмена у пациента с хроническим панкреатитом.
Пациенту дополнительно, был проведен пероральный глюкозотолерантный тест с 75 г глюкозы, в результате было выявлено нарушение толерантности к углеводам (значение глюкозы через 2 часа после приема глюкозы составил 8,0 ммоль/л), согласно данным диагностических критерий сахарного диабета и нарушений гликемии ВОЗ.
Пример 3
Для проведения сравнительного исследования, осуществлялся отбор пациентов методом случайной выборки. Исследование проводилось на базе гастроэнтерологического отделения центра СКАЛ Краевой клинической больницы № 2 в 2020 году, в него вошли 100 пациентов, из которых 40 - с хроническим панкреатитом, 50 - с эрозивно-язвенными изменениями желудка и двенадцатиперстной кишки и 10 здоровых добровольцев.
Для первой группы пациентов отбирали, учитывая наличие в анамнезе хронический панкреатит, и имеющих клинические проявления, типичные для этого заболевания, без наличия в анамнезе хирургических вмешательств на поджелудочной железе.
Для второй группы были отобраны пациенты, имеющие в анамнезе язвенную болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки, либо впервые выявленные эрозивно-язвенные изменения слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки при проведении эндоскопического исследования.
Критериями исключения стали: НПВП-ассоциированные повреждения желудка и двенадцатиперстной кишки, пациенты с циррозом печени, после операций на пищеводе и желудке, с воспалительными заболеваниями кишечника, опухолями органов пищеварения и других локализаций и пациенты, которые принимали участие в каких-либо клинических исследованиях в настоящее время.
Сравнительное исследование пациентов
Последнее десятилетие широкое распространение во всем мире получила проблема избыточного веса. Ожирение имеет лидирующее место среди причин инвалидности и смертности не только взрослых, но и детей. В связи с тем, что в патогенезе заболевания, помимо дисбаланса между потреблением и расходом энергии, лежат нейрогуморальные механизмы (гормональные и нейротрансмиттерные нарушения в работе оси "кишечник - головной мозг") и факторы внешней среды (малоподвижный образ жизни, нарушение пищевого поведения, хронический стресс) ожирение можно считать мультидисциплинарной проблемой (Дедов И.И., Мокрышева Н.Г., Мельниченко Г.А и др. Клинические рекомендации - Ожирение 2020). Ожирение выступает либо как самостоятельное заболевание, либо как синдром при других заболеваниях. Чаще всего ожирение ассоциировано с сердечно-сосудистыми заболеваниями, сахарным диабетом 2 типа, онкологией, остеоартрозом, поэтому изучение возможности терапии и профилактики остается актуальной задачей современной медицины (Дедов И.И., Мокрышева Н.Г., Мельниченко Г.А и др. Клинические рекомендации - Ожирение 2020).
Для диагностики избыточной массы тела и ожирения, а также для оценки его степени, по-прежнему используется определение индекса массы тела (ИМТ).
В группе с хроническим панкреатитом, только у 9 больных выявлена нормальная масса тела, 13 имели избыточную массу тела, 15-ожирение I степени и 3 человека-ожирение II степени, пациентов с ожирение III степени в этой группе выявлено не было. Во второй группе, нормальную массу тела имели -25 пациентов, избыточную массу тела-12, 11 человек-ожирение I степени, 1-ожирение II степени и 1 -ожирение III степени. Пациентов с недостатком массы тела в обоих группах выявлено не было (Таблица 1).
Ссылаясь на мнение многих авторов, последнее время, увеличилась частота панкреатита на фоне гиперлипидемии, а особенно острого, за счет токсического действия свободных желчных кислот на ткань поджелудочной железы (Немцов Л.М. Патофизиологическое и клинико-диагностическое значение холецистокинина при билиарной патологии // Вестник ВГМУ, 2014, том 13 № 14 С. 12).
Пациентам были определены показатели липидограммы: общий холестерин, липопротеиды низкой плотности (ЛПНП), липопротеиды высокой плотности (ЛПВП), у пациентов с хроническим панкреатитом выявлялся более высокий уровень общего холестерина, выше референтных значений у половины пациентов, а среднее значение общего холестерина составило 5,73 ммоль/л. как и содержание ЛПНП.
Оценивая гликемический профиль у пациентов в группах, были определены: уровень глюкозы натощак и гликированный гемоглобин (HbA1c). Пациенты с хроническим панкреатитом имели более высокие показатели уровня тощаковой глюкозы венозной крови, среднее значение составило 5,79 ммоль/л, а у 5 пациентов выявлен сахарный диабет 2 типа. При анализе значения гликированного гемоглобина, мы обнаружили значимую разницу между группами, пациенты с хроническим панкреатитом имели более высокие средние значения HbA1c, нежели пациенты с эрозивно-язвенными изменениями, что свидетельствует о том, что у пациентов с хроническим панкреатитом чаще развивается нарушение толерантности к глюкозе.
Патология печени, а именно неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) рассматривают в качестве одного из компонентов метаболического синдрома, наряду с ожирением, артериальной гипертензией, нарушением толерантности к глюкозе, гипергликемией натощак, снижением концентрации ЛПВП (Маев И.В., Андреев Д.Н., Кучерявый Ю.А, Дичева Д.Т., Кузнецова Е.И. Неалкогольная жировая болезнь печени с позиции современной медицины // Клиническая гастроэнтерология. 2020; С. 7-15).
Для оценки формы НАЖБП используется лабораторная диагностика. Выявление цитолитического синдрома свидетельствует о воспалении печени-неалкогольном стетогепатите (НАСГ), активность которого определяется по степени повышения печеночных трансаминаз (Маев И.В., Андреев Д.Н., Кучерявый Ю.А, Дичева Д.Т., Кузнецова Е.И. Неалкогольная жировая болезнь печени с позиции современной медицины // Клиническая гастроэнтерология. 2020; С. 7-15).
В результате исследования у пациентов с хроническим панкреатитом чаще выявлялась НАЖБП- у 9 человек, чем у пациентов из группы с эрозивно-язвенными изменениями желудка и ДПК-у 5 человек. НАСГ в группе с панкреатитом был обнаружен у 4 человек, во второй группе у 1 человека (Таблица 3).
Учитывая данные многочисленных исследований, вероятность развития хронического или острого панкреатита у пациентов с желчнокаменной болезнью (ЖКБ) высока, что обусловлено либо механическими причинами: холедохолитиазом или дисфункцией сфинктера Одди, вызванной микролитиазом, либо отеком и фиброзом головки поджелудочной железы на фоне обострений хронического панкреатита, послуживших причиной сдавления желчных протоков и окружающих сосудов (Бордин Д.С, Кучерявый Ю.А., Кирюкова М.А. Обновленная этиологическая классификация панкреатитов TIGAR-O (версия 2): адаптация для российской клинической практики // Альманах клинической медицины. 2020; № 48 (6) С. 349-363).
В группах, по результату Ультразвукового исследования органов брюшной полости, у 15 пациентов в первой группе был выявлен холецистолитиаз, во второй группе у 2 пациентов. Учитывая анамнез пациентов, выявлено, что 10 человек из группы с хроническим панкреатитом имели в анамнезе лапароскопическую холецистэктомию, а во второй группе - 3 пациента.
На основании полученных данных, мы пришли к выводу о том, что пациенты с хроническим панкреатитом наиболее подвержены нарушению углеводного обмена и липидного спектра, соответственно развитию сахарного диабета 2 типа, ожирению, атеросклерозу и сердечно-сосудистым заболеваниям в будущем, значимо чаще имеют неалкогольную жировую болезнь печени и ЖКБ, что может привести к осложненному течению заболевания.
Публикации последних лет показывают, что в патогенезе изменения массы тела ведущая роль принадлежит регуляторным механизмам расходования энергии, где центральное место занимает гипоталамус, так как он интегрирует информацию о питании, полученную от всех периферических органов (MessinaG., DaliaC, TafuriD.etal. Орексин-А контролирует симпатическую активность и пищевое поведение Front:. Psychol., 08 September 2014). Орексин А, являясь гипоталамическим нейропептидом участвует в регуляции пищевого поведения и нейроэндокринного гомеостаза, так же принимает участие в контроле симпатической активации артериального давления, метаболического статуса и уровня глюкозы крови (MessinaG., DaliaC, TafuriD. et al. Орексин-А контролирует симпатическую активность и пищевое поведение Front. Psychol., 08 September 2014).
В нашем исследовании, у пациентов с хроническим панкреатитом, среднее арифметическое значение уровня Орексина А было значительно выше, чем у пациентов других групп.
Причем чем наиболее высокие значения Орексина А (более 99,9 пг/мл) были у пациентов с избыточной массой тела или ожирением и с выявленными показателями нарушенного углеводного обмена.
При определении Орексина А до проведения дополнительного обследования в нашем случае глюкозотолерантного теста, который доступен не всем лечебным учреждениям и имеет определенные финансовые и временные затраты, поможет в выявлении ранних нарушений углеводного обмена, что предотвратит развитие тяжелых осложнений заболеваний поджелудочной железы.
Claims (1)
- Способ диагностики ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом, включающий забор крови из вены пациента, получение сыворотки крови, подготовку реагентов для проведения исследования, измерение оптической плотности растворов, отличающийся тем, что венозную кровь пациента центрифугируют для получения сыворотки крови в течение 20 минут при ускорении 1000 g, в качестве буферного раствора используют фосфатно-солевой раствор с концентрацией 0,01 моль/л, рН приготовленного раствора должен быть 7,18-7,22, за 15 минут до проведения анализа готовят раствор стандарта Орексина А, в результате получая 5 точек 1000; 333.33; 111.11; 37.04; 12.35 пг/мл, проводят исследование с помощью реагентов, на каждом этапе исследования после промывания удаляют с планшета остатки промывающего раствора, поддерживают влажность окружающего воздуха менее 60% и защищают раствор от действия солнечных лучей, при помощи микропланшетного ридера проводят измерения на длине волны 450 нм, рассчитывают средние значения оптической плотности для стандартов, контролей и образцов при анализе в дублях, с помощью полученных значений строят калибровочную кривую, по оси Y откладывают логарифм концентрации каждого стандарта Орексина А, а по оси X - оптическую плотность соответствующего стандарта, концентрацию Орексина А в образцах определяют путем сравнения полученной оптической плотности образцов с построенной калибровочной кривой и при значении Орексина А более 99,9 пг/мл диагностируют ранние нарушения углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2824803C1 true RU2824803C1 (ru) | 2024-08-13 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2452965C1 (ru) * | 2011-02-01 | 2012-06-10 | Институт физиологии природных адаптаций Уральского отделения Российской академии наук | Способ диагностики нарушений компенсации обмена веществ и прогнозирования риска развития осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа с помощью оценки апоптоза лимфоцитов |
| RU2695073C1 (ru) * | 2018-06-08 | 2019-07-19 | Наталья Робертовна Телесманич | Способ ранней диагностики нарушения углеводного обмена |
| RU2022118348A (ru) * | 2022-07-05 | 2024-01-09 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2452965C1 (ru) * | 2011-02-01 | 2012-06-10 | Институт физиологии природных адаптаций Уральского отделения Российской академии наук | Способ диагностики нарушений компенсации обмена веществ и прогнозирования риска развития осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа с помощью оценки апоптоза лимфоцитов |
| RU2695073C1 (ru) * | 2018-06-08 | 2019-07-19 | Наталья Робертовна Телесманич | Способ ранней диагностики нарушения углеводного обмена |
| RU2022118348A (ru) * | 2022-07-05 | 2024-01-09 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ диагностики ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| АМЕТОВ А.С. и др. Нарушения углеводного обмена у пациентов с заболеваниями поджелудочной железы: особенности диагностики и патогенеза. Эндокринология: новости, мнения, обучение. 2021, 10(3), стр.52-58. VISKAITIS P. et al. Orexin cells efficiently decode blood glucose dynamics to drive adaptive behavior. bioRxiv. 2022, 2022.04.14.488310, p.1-28. SKRZYPSKI M. et al. The role of orexin in controlling the activity of the adipo-pancreatic axis. J Endocrinol. 2018, 238(2), p.R95-R108. OUEDRAOGO R. et al. Glucose regulates the release of orexin-a from the endocrine pancreas. Diabetes. 2003, 52(1), p.111-117. VENNER A. et al. Orexin neurons as conditional glucosensors: paradoxical regulation of sugar sensing by intracellular fuels. J Physiol. 2011, 589(Pt 23), p.5701-5708. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wolak-Dinsmore et al. | A novel NMR-based assay to measure circulating concentrations of branched-chain amino acids: Elevation in subjects with type 2 diabetes mellitus and association with carotid intima media thickness | |
| Sekino et al. | Intestinal fatty acid-binding protein level as a predictor of 28-day mortality and bowel ischemia in patients with septic shock: a preliminary study | |
| Korkmaz et al. | The association of oxidative stress markers with conventional risk factors in the metabolic syndrome | |
| Loria et al. | Gallstone disease in non‐alcoholic fatty liver: prevalence and associated factors | |
| Ix et al. | The associations of fetuin-A with subclinical cardiovascular disease in community-dwelling persons: the Rancho Bernardo Study | |
| Ho et al. | The role of gastrointestinal-related fatty acid-binding proteins as biomarkers in gastrointestinal diseases | |
| Mikolasevic et al. | Significant liver fibrosis, as assessed by fibroscan, is independently associated with chronic vascular complications of type 2 diabetes: A multicenter study | |
| Rodriguez-Ortiz et al. | Fibroblast growth factor 23 predicts carotid atherosclerosis in individuals without kidney disease. The CORDIOPREV study | |
| Amin et al. | Serum Ferritin level, microalbuminuria and non-alcoholic fatty liver disease in type 2 diabetic patients | |
| CN101384728B (zh) | 意识障碍患者的病态检测方法和检测试剂盒 | |
| Kamel et al. | The potential use of urinary transferrin, urinary adiponectin, urinary Retinol Binding Protein, and serum zinc alpha 2 glycoprotein levels as novel biomarkers for early diagnosis of diabetic nephropathy: a case-control study | |
| Cikot et al. | The importance of presepsin value in detection of gastrointestinal anastomotic leak: a pilot study | |
| Yu et al. | Association of plasma fatty acid-binding protein 3 with estimated glomerular filtration rate in patients with type 2 diabetes mellitus | |
| Mohamed et al. | The relationship of fetuin-A with coronary calcification, carotid atherosclerosis, and mortality risk in non-dialysis chronic kidney disease | |
| Bojanin et al. | Effects of co-existing autoimmune diseases on serum lipids and lipoprotein subclasses profile in paediatric patients with type 1 diabetes mellitus | |
| RU2824803C1 (ru) | Способ диагностики ранних нарушений углеводного обмена у пациентов с хроническим панкреатитом | |
| Gamrot et al. | Fibroblast growth factor 21 (FGF21) in children and adolescents with chronic kidney disease | |
| Fundora et al. | Galectin-4 as a novel biomarker of neonatal intestinal injury | |
| El-Asrar et al. | Fatty acid binding protein 1 (FABP1) and fatty acid binding protein 2 (FABP2) as a link between diabetic nephropathy and subclinical atherosclerosis in children and adolescents with type 1 diabetes | |
| Mahfuz et al. | Biomarker relationships with small bowel histopathology among malnourished children with environmental enteric dysfunction in a multicountry cohort study | |
| US20240410902A1 (en) | Use of soluble trem2 as a non-invasive biomarker for non-alcoholic steatohepatitis (nash) | |
| Zhu et al. | The association of subclinical atherosclerosis with prediabetes is stronger in people with dyslipidaemia than in those with normoglycaemia: A cross-sectional study in Chinese adults | |
| Chuang et al. | The value of growth differentiation factor 15 as a biomarker for peripheral artery disease in diabetes patients | |
| El Naidany et al. | Association of Pentraxin 3 rs2305619 (A/G) gene polymorphism and its serum level with the risk of nephropathy in type II diabetic patients | |
| Ozenc et al. | Association between the development of diabetic foot and serum fetuin-A levels |