RU2821765C1 - Метод седиментации для диагностики криптоспоридиоза - Google Patents
Метод седиментации для диагностики криптоспоридиоза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2821765C1 RU2821765C1 RU2023126273A RU2023126273A RU2821765C1 RU 2821765 C1 RU2821765 C1 RU 2821765C1 RU 2023126273 A RU2023126273 A RU 2023126273A RU 2023126273 A RU2023126273 A RU 2023126273A RU 2821765 C1 RU2821765 C1 RU 2821765C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cryptosporidiosis
- rpm
- minutes
- added
- drained
- Prior art date
Links
- 208000008953 Cryptosporidiosis Diseases 0.000 title description 29
- 206010011502 Cryptosporidiosis infection Diseases 0.000 title description 22
- 238000007560 sedimentation technique Methods 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 47
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 210000003250 oocyst Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims abstract description 19
- 241000223935 Cryptosporidium Species 0.000 claims abstract description 15
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 17
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 9
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 10
- 244000309466 calf Species 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 241000223936 Cryptosporidium parvum Species 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 241000234569 Cryptosporidium andersoni Species 0.000 description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 1
- 241001223608 Cryptosporidium bovis Species 0.000 description 1
- 241000333156 Cryptosporidium meleagridis Species 0.000 description 1
- 241000223938 Cryptosporidium muris Species 0.000 description 1
- 241000712166 Cryptosporidium ryanae Species 0.000 description 1
- 241001329304 Cryptosporidium ubiquitum Species 0.000 description 1
- 241000276612 Cryptosporidium xiaoi Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000035472 Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 244000079386 endoparasite Species 0.000 description 1
- DQYBDCGIPTYXML-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;hydrate Chemical compound O.CCOCC DQYBDCGIPTYXML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- KMUONIBRACKNSN-UHFFFAOYSA-N potassium dichromate Chemical compound [K+].[K+].[O-][Cr](=O)(=O)O[Cr]([O-])(=O)=O KMUONIBRACKNSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004215 spore Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии и может быть использовано для выявления ооцист криптоспоридий в пробах фекалий. Проводят метод седиментации, при этом 1 г пробы фекалий помещают в ступку и приливают 5 мл дистиллированной воды, после добавляют 1 мл моющего средства «Италмас». Пробу тщательно растирают в ступке и процеживают через двойной слой марли в центрифужные пробирки, после чего дистиллированной водой доводят объем до 10 мл и центрифугируют при 1500 об/мин 4 минуты. Далее надосадочную жидкость сливают и приливают 10 мл 5% муравьиной кислоты, осадок ресуспендируют и вновь центрифугируют 7 при 1500 об/мин 4 минуты. Надосадочную жидкость сливают и получившийся осадок наносят на предметное стекло и выявляют ооцисты криптоспоридий. Изобретение обеспечивает высокую эффективность, относительно аналогичных методов исследования, также при постановке данного метода не используются вещества, относящиеся ко 2 классу опасности. 3 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии, к работе по выявлению ооцист криптоспоридий в фекалиях. Сущность изобретения заключается в разработке усовершенствованного седиментационного метода для увеличения достоверности прижизненной диагностики криптоспоридиоза.
Криптоспоридиоз относится к остро протекающим зоонозным заболевания молодняка. Болеют домашние и дикие животные, в том числе человек. Возбудителем являются простейшие из рода Cryptosporidium. У млекопитающих заболевание вызывают различные виды: Cryptosporidium parvum, C. bovis, C. ryanae, C. andersoni, C. muris, C. ubiquitum, C. meleagridis, C. xiaoi, C. suis-like и т.д. Первые пять видов относятся к наиболее распространенным среди крупного рогатого скота, тогда как другие встречались изредка [11, 12, 16, 18, 20, 21, 22, 23, 24, 28, 29].
Криптоспоридиоз имеет широкий диапазон распространения как в развивающихся, так и в развитых странах. Например, в Бразилии ЭИ составляет в среднем 25,7 %, в Малайзии - 12,5 %, в Иране - 22,3 %, в Китае от 11,9 % до 17 %, в Эфиопии от 11 % до 21 %, в Онтарио достигает до 78 %. В России ЭИ по данным многих авторов варьирует от 11,5 до 92 % [3, 4, 7, 8, 9, 11, 12, 16, 17, 19, 20, 23, 24, 25, 26, 27, 28].
Данное заболевание представляет собой серьезную проблему для животноводства, вызывает поражение желудочно-кишечного тракта у молодняка с первых дней жизни и до 6 месяцев (иногда до года). При этом повреждается эпителий кишечника, что приводит к снижению всасывания питательных веществ, обезвоживанию, осложнению течения основных вирусных или бактериальных инфекций, снижению прироста живой массы до 55 % (относительно здоровых животных), а так же может вызывать гибель животных. Таким образом, хозяйства несут значительный экономический ущерб [2, 3, 5, 11, 11, 15, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28].
Криптоспоридиоз клинически схож с другими заболеваниям, которые характеризуются поражением пищеварительного тракта, поэтому необходимо особое внимание уделять его диагностике [2, 23].
Диагноз на криптоспоридиоз обычно ставится микроскопическими (копроскопическими) методами обнаружения ооцист паразита, которые широко используются за счет простоты и доступности. Так же данными методами можно проводить предварительное исследование фекалий для дальнейшего молекулярного анализа [2, 16, 17, 18, 21, 22, 25, 28].
Самым простым и доступным методом диагностики является приготовление мазков из свежих фекалий. Для этого на обезжиренное предметное стекло наносят каплю фекалий, разбавляют каплей физиологического раствора и распределяют тонким слоем. Полученный мазок можно сразу микроскопировать, либо его высушивают при комнатной температуре и окрашивают. Данный метод позволяет быстро без лишних затрат провести исследование, но обладает низкой достоверностью. Ооцисты криптоспоридий бесцветные, шаровидные или яйцевидные, в поле зрения их заметить сложно за счет их крайне малого размера. Эффективность метода нативного мазка низкая, всего 46 %, ооцисты встречаются не во всех полях зрения. При добавлении раствора сахарозы или при окрашивании мазков, криптоспоридии становятся визуально заметнее, но просмотр проб затрудняет большое количество детритного материала [2, 4, 5, 6, 10, 13, 16, 21, 28].
Для увеличения эффективности выявления ооцист криптоспоридий используют различные методы обогащения: флотации и седиментации.
При флотационных методах пробу фекалий заливают небольшим количеством флотационного раствора (насыщенный раствор хлорида натрия, сульфата цинка, аммиачной селитры, сахара, смесь Павласека, раствор Бреза). Тщательно размешивают палочкой, добавляют раствор до краев стакана, фильтруют через сито и отстаивают в течение 15-20 мин. Затем металлической петлей снимают 15-20 капель с поверхностной пленки, переносят на предметное стекло и микроскопируют, либо делают тонкий мазок, который высушивают на воздухе и окрашивают. Для повышения эффективности данной методики применяют центрифугирование в сочетании с флотацией [2, 5, 6, 10, 12, 13, 18, 19].
Недостатком данной методики является то, что флотационные растворы могут приводить к морфологическим и структурным изменениям ооцист (приобретают форму полушара или полукруга, а иногда и разрушатся), исключение составляет только раствор сахарозы, который позволяет сохранять оболочку ооцист криптоспоридий [6, 10, 14, 16].
Для обогащения проб при диагностике на криптоспоридиоз используют метод седиментации с центрифугированием. Фекалии процеживают через 2-слойную марлю в центрифужные пробирки в количестве 1 мл, добавляют до уровня 10 мл воды и центрифугируют в течение 4 минут при 1500 об./мин. В последующем надосадочную жидкость сливают, из полученного осадка делают мазки и исследуют под микроскопом. Метод седиментации центрифугированием повышал выявление ооцист криптоспоридий до 64 %, но осадок на дне пробирки был значительным, что затрудняет выявление ооцист. Для повышения эффективности в данной методике предлагают использовать в качестве детергента поверхностно-активные вещества (перколл, 0,3 % раствор стирального порошка «Самара» или «Миф»), это позволяет увеличить чувствительность данного метода [1, 2, 4, 6, 11].
Широко используют в практике для диагностики криптоспоридиоза методы эфирной седиментации в различном сочетании (водно-эфирная, уксусно-эфирная, формалин-эфирная). Данные методы обладают хорошей эффективностью (от 76 до 86 %) и позволяют увеличить концентрацию ооцист в пробе, благодаря воздействию эфира или его смеси с уксусом (формалином) частицы непереваренного корма эмульгируют, а жироподобные вещества растворяются и ооцисты осаждаются на дно. Однако вместе с ооцистами осадок содержит большое количество микроорганизмов, спор, простейших, что затрудняет диагностику, при этом ооцисты морфологически были слабодифференцированы. Для устранения данного недостатка Мехова О. С. с соавторами предложила к седиментированному осадку добавлять раствор сахарозы, далее центрифугировать в течение 5 минут при 1,5 тыс. об./мин. Поверхностную пленку переносят на предметное стекло и микроскопируют. Сочетание седиментации и флотации позволяет очистить поле зрения от примеси непереваренных частиц корма, микроорганизмов и простейших, при этом ооцисты морфологически легко диагностируются [2, 4, 6, 13, 21].
Кириллов Е. Г. с соавторами в модифицированном методе исследования предлагают фекалии телят фильтровать через марлю в центрифужную пробирку, после добавляют воду до уровня 10 мл, центрифугируют в течение 3-х минут при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость сливают и к осадку добавляют 7 мл 4 % раствора молочной кислоты, перемешивают, затем вливают 2 мл этилового эфира, встряхивают в течение 5-10 сек и центрифугируют в течение 2-х минут при 1500 об/мин, после коагулянт и надосадочную жидкость сливают, а осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. Использование молочной кислоты для суспензирования фекалий позволяет увеличить эффективность исследования до 96 %, так же молочная кислота усиливает проникающее свойство красителя в тело паразита [4, 6, 21, 23].
Несмотря на высокую эффективность методов эфирной седиментации при их применении используются химические соединения 2 класса опасности (эфир, формалин, ледяная уксусная кислота), так же эфир является прекурсором, что значительно усложняет процесс использования, за счет ограничения доступа к данным средствам.
Исходя из вышеизложенного поиск эффективных и доступных методов исследования на выявление ооцист криптоспоридий остается актуальным на данный момент.
Усовершенствование способов диагностики протозоозов позволит своевременно выявлять их в хозяйствах, что является залогом успешной борьбы с ними и позволит снизить экономические потери.
Нами был усовершенствован метод седиментации, с целью улучшении выявления ооцист криптоспоридий в пробах фекалий и повышения достоверности прижизненной диагностики.
Техника проведения усовершенствованного метода седиментации для диагностики криптоспоридиоза у животных заключается в следующем. Берут фекалии исследуемых животных весом 1 гр, можно использовать как свежие пробы фекалий, так и консервированные 2,5 % раствором бихромата калия, помещают в ступку, добавляют 5 мл воды дистиллированной и 1 мл моющего средства «Италмас». Пробу тщательно растирают в ступке и процеживают через двойной слой марли в центрифужные пробирки и доводят дистиллированной водой до объема 10 мл. Центрифугируют при 1500 об/мин 4 минуты, далее надосадочную жидкость сливают, в последующем к осадку добавляют 10 мл 5 % муравьиной кислоты, осадок ресуспендируют стеклянной палочкой и центрифугируют при 1500 об/мин 4 минуты. Надосадочную жидкость сливают, из полученного осадка делают мазки, если осадок получался в большом количестве, то его делят на 2 и более частей.
Настоящее изобретение иллюстрируют следующие примеры.
Пример 1
При разработке усовершенствованного метода диагностики криптоспоридиоза особое внимание уделяли материалам для проведения исследования, обращали внимание на их безопасность и доступность.
В качестве детергента было выбрано моющее средство «Италмас», в состав которого входят анионные и амфотерные поверхностно-активные вещества. При выборе вещества используемого для суспезирование фекалий, провели сравнительное исследование муравьиного спирта и 5% муравьиной кислоты.
В ходе проведения исследования пробу фекалии разделяли на 2 части и помещали по 1 гр в ступки, добавляли 5 мл воды дистиллированной и 1 мл моющего средства «Италмас», далее пробу тщательно растирали в ступке и процеживали через двойной слой марли в центрифужные пробирки и дистиллированной водой доводя объем до 10 мл. Центрифугировали при 1500 об/мин 4 минуты, затем надосадочную жидкость сливали, в последующем к осадку в первой пробирке добавляли 10 мл муравьиного спирта, а во вторую - 10 мл 5 % муравьиной кислоты. Осадок ресуспендировали стеклянной палочкой и центрифугировали при 1500 об/мин 4 минуты. Надосадочную жидкость сливали, из полученного осадка делали мазки и окрашивали по Цилю-Нильсену. Сравнительные результаты приведены в таблице 1.
Таблица 1. Результаты копроовоскопического исследования при использовании муравьиного спирта и 5 % муравьиной кислоты
| Наименование исследования | ЭИ, % | ИИ, экз |
| усовершенствованный метод с муравьиным спиртом | 85 % | 1 |
| усовершенствованный метод с 5 % муравьиной кислотой | 97 % | 12 |
В усовершенствованном методе с муравьиным спиртом ЭИ составила 85 %, при этом ИИ была 1 экз. в поле зрения. При использовании в качестве суспезирующего вещества 5 % раствор муравьиной кислоты ЭИ увеличилась до 97 %, а ИИ составила 12 экз. в поле зрения.
Пример 2
Сравнительное изучение диагностической эффективности при криптоспоридиозе телят проводилось между нашим усовершенствованным методом седиментации с «Италмасом» и 5 % муравьиной кислотой, модифицированным методом исследования Кирилова Е. Г. с соавторами и методом седиментации по Красильникову в модификации Красновой О.П. (таблица 2).
Таблица 2. Сравнительная оценка постановки методов определения ооцист криптоспоридий в биологическом материале (фекалии)
| Усовершенствованный метод седиментации с муравьиной кислотой | Модифицированный метод седиментации по Кириллову Е. Г. с соавторами [6] | Метод седиментации по Красильникову в модификации Красновой О. П. [9] |
| 1. Пробу фекалий помещают в ступку в количестве 1 гр | ||
| 2. добавляют дистиллированную воду 5 мл, моющее средство «Италмас» 1 мл и тщательно растерают | 2. добавляют воду и тщательно растерают | |
| 3. процеживают через двойной слой марли в центрифужные пробирки и доводят дистиллированной водой до объема 10 мл | ||
| 4. центрифугируют при 1500 об/мин 4 минуты | 4. центрифугируют в течение 3-х минут при 1500 об/мин | 4. центрифугируют при 1500 об/мин 4 минуты |
| 5. надосадочную жидкость сливают | ||
| 6. к осадку добавляют 10 мл 5% муравьиной кислоты, осадок ресуспендируют стеклянной палочкой | 6. к осадку добавляют 7 мл 4 % раствора молочной кислоты, перемешивают, затем вливают 2 мл этилового эфира, закрывают пробкой, встряхивают в течение 5-10 сек | 6. к осадку добавляют до уровня 10 мл 0,3 % стирального порошка «Самара», осадок ресуспендируют стеклянной палочкой |
| 7. центрифугируют при 1500 об/мин 4 минуты | 7. центрифугируют в течение 2-х минут при 1500 об/мин. | 7. центрифугируют в течение 3-х минут при 1500 об/мин |
| 8. Надосадочную жидкость сливают, из полученного осадка делают мазки | ||
Предлагаемый нами усовершенствованный метод выявления ооцист криптоспоридий совмещает в себе использование детергента, в виде ПАВ моющего средства «Италмас» и седеминтирующего вещества - муравьиной кислоты, что позволяет наиболее эффективно очистить исследуемый материал от частичек детрита и освободить ооцисты.
В таблице 3 приведены результаты сравнительного исследования эффективности проводимых диагностических методов.
Материалом для исследования служили 15 проб фекалий от больных криптоспоридиозом телят. Все пробы исследовали тремя методами.
Таблица 3. Сравнительная оценка эффективности методов диагностики криптоспоридиоза
| Наименование исследования | ЭИ, % | ИИ, экз |
| Усовершенствованный метод седиментации с муравьиной кислотой | 97 | 18 |
| Модифицированный метод седиментации по Кириллову Е.Г. с соавторами | 95 | 15 |
| Метод седиментации по Красильникову в модификации Красновой О.П. | 91 | 13 |
Было установлено, что степень инвазированности криптоспоридиозом составила в предлагаемом нами методе с использованием 5 % муравьиной кислоты 97 %, в поле зрения ооцисты легко диагностировались.
В модифицированном методе Красновой О.П. ооцисты были слабо дифференцированны.
Разработанный нами усовершенствованный метод седиментации показал свою высокую эффективность, относительно аналогичных методов исследования, так же при постановке данного метода не используются вещества, относящиеся ко 2 классу опасности.
Список литературы:
1. Данко М.М. Сравнительная оценка копроскопических методов диагностики криптоспоридиоза крупного рогатого скота / М.М. Данко, А.Л. Тишин, Р.В. Хомяк // Науковий вісник Львівського національного університету ветеринарної медицинита біотехнологій імені С.З. Ґжицького. - 2016. - Т. 18, №3-1(70). - С. 71-73.
2. Диагностика криптоспоридиоза телят [Текст]: методические рекомендации / М.Ш. Акбаев, Н.В. Есаулова, О.Е. Давыдова, С.А. Шемякова, Д.Н. Шемяков. - М.: ФГОУВПО «МГАВМиБ им. К.И. Скрябина», 2004. - 14 с.
3. Дмитриева Е.Л. Распространение возбудителя криптоспоридиоза в природных и синантропных биоценозах Центрально-Черноземной зоны (на примере Курской области): специальность 03.00.19: диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук / Дмитриева Екатерина Леонидовна. - Курск, 2008. - 128 с.
4. Кириллов Е.Г. Криптоспоридиоз телят в Республике Татарстан: эпизоотология, диагностика, патоморфология и терапия: специальность 03.02.11: диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук / Кириллов Евгений Геннадьевич. - Казань, 2017. - 146 с.
5. Кириллов Е.Г. Криптоспоридиоз: общая характеристика и особенности его распространения / Е.Г. Кириллов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2014. - Т. 218. - №2. - С. 128-131.
6. Кириллов Е.Г. Усовершенствование копроскопического метода диагностики криптоспоридиоза телят / Е.Г. Кириллов, Д.Г. Латыпов // Ветеринарный врач. - 2016. - №1. - С. 39-43.
7. Кириллов Е.Г. Эпизоотология криптоспоридиоза в Республике Татарстан / Е.Г. Кириллов, Д.Г. Латыпов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2015. - Т. 223. - №3. - С. 93-96.
8. Климова Е.С. Инвазированность крупного рогатого скота эндопаразитозами в зависимости от категории хозяйств / Е.С. Климова // Ветеринарная патология. - 2022. - №2(80). - С. 14-18.
9. Климова Е.С. Распространенность возбудителя Cryptosporidium parvum в синантропных биоценозах / Е.С. Климова // Международный вестник ветеринарии. - 2022. - №4. - С. 70-76.
10. Климова Е.С. Сравнительный анализ методов диагностики криптоспоридиоза крупного рогатого скота / Е.С. Климова, Т.В. Бабинцева // Вклад молодых ученых в реализацию приоритетных направлений развития аграрной науки: материалы Национальной науч.-прак. конф. молодых ученых (Ижевск, 17-19 ноября 2021 г.). - Ижевск, 2021. - С. 135-139.
11. Краснова О.П. Криптоспоридиоз телят и меры борьбы с ним: специальность 03.00.19: диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук / Краснова Оксана Петровна. - Саратов, 2000. - 125 с.
12. Кряжев А.Л. Криптоспоридиоз телят в хозяйствах молочной специализации Северо-Запада России (Эпизоотология, клиническая картина, терапия и профилактика): специальность 06.02.02: диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук / Кряжев Андрей Леонидович. - Москва, 2005. - 152 с.
13. Мехова О.С. Криптоспоридиоз лабораторных мышей (методы диагностики) / О.С. Мехова // Животноводство и ветеринарная медицина. - 2016. - №1. - С. 38-41.
14. Никитин Н.Ф. Копроскопическая диагностика криптоспоридиоза и эймериоза телят / Н.Ф. Никитин // Ветеринария. - 2002. - №9. - C. 27-31.
15. Решетникова А.Д. Влияние кишечных кокцидиозов на прирост массы тела молодняка крупного рогатого скота / А.Д. Решетникова, Е.С. Климова // Российский паразитологический журнал. - 2023. - Т. 17. - №1. - С. 99-104.
16. Calf-level risk factors for neonatal diarrhea and shedding of Cryptosporidium parvum in Ontario dairy calves / Lise A. Trotz-Williams, S. Wayne Martin, Kenneth E. Leslie, Todd Duffield, Daryl V. Nydam, Andrew S. Peregrine // Preventive Veterinary Medicine. - 15 November 2007. - Vol. 82. - Issues 1-2. - P. 12-28.
17. Cryptosporidium Infection and Associated Risk Factors among Cattle in the Central Region of Ghana / K. Dankwa, P. K. Feglo, S. V. Nuvor, M. Aggrey-Korsah, M. Mutocheluh // Journal of Parasitology Research. - 2021. - Vol. 2021. - P. 1-8.
18. Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in feces and water and the associated exposure factors on dairy farms / R.D. Toledo, F.D. Martins, F.P. Ferreira, J.C. de Almeida, L. Ogawa, H.L. Dos Santos, M.M. Dos Santos, F.A. Pinheiro, I.T. Navarro, J.L. Garcia, R.L. Freire // PLoS One. - 2017. - Vol. 12(4). - e0175311.
19. Ebiyo A. Prevalence and Factors Associated with Cryptosporidium Infection in Calves in and around Nekemte Town, East Wollega Zone of Ethiopia / A. Ebiyo, G. Haile // Veterinary Medicine International. - 17 Feb. 2022. - Vol. 2022. - 1468242.
20. Epidemiology of Cryptosporidium infection in cattle in China: a review / C. Gong, X.F. Cao, L. Deng, W. Li, X. M. Huang, J.C. Lan, Q.C. Xiao, Z.J. Zhong, F. Feng, Y. Zhang, W.B. Wang, P. Guo, K.J. Wu, G.N. Peng // Parasite. - 2017. - Vol. 24:1.
21. Gerace E. Cryptosporidium Infection: Epidemiology, Pathogenesis, and Differential Diagnosis / E. Gerace, V.D.M. Lo Presti, C.Biondo // European Journal of Microbiology and Immunology. - 2019. - Vol. 9(4). - P. 119-123.
22. Helmy Y. A. Cryptosporidiosis: From Prevention to Treatment, a Narrative Review / Y.A. Helmy, H.M. Hafez // Microorganisms. - 2022. - Vol. 10. - Issue 12. - 2456.
23. Long-term production effects of clinical cryptosporidiosis in neonatal calves / Hannah J. Shaw, Elisabeth A. Innes , Liam J. Morrison, Frank Katzer, Beth Wells // International Journal for Parasitology. - May 2020. - Vol. 50. - Issue 5. - P. 371-376.
24. Mirzai Y. Cryptosporidium parvum and Cryptosporidium andersoni infection in naturally infected cattle of northwest Iran / Y. Mirzai, M. Yakhchali, K. Mardani // Vet Res Forum. - 2014. - Vol. 5(1). - P. 55-60.
25. Molecular detection and epidemiological risk factors associated with Cryptosporidium infection among cattle in Peninsular Malaysia / D.A. Abdullah, S.D. Ola-Fadunsin, K. Ruviniyia, F.I. Gimba, P. Chandrawathani, Y.A.L. Lim, F.F.A. Jesse, R.S.K. Sharma // Food and Waterborne Parasitology. - March 2019. - Vol. 14. - e00035.
26. Prevalence of Cryptosporidium in dairy cattle in China during 2008-2018: A systematic review and meta-analysis / Y. Cai, N.Z. Zhang, Q.L. Gong, Q. Zhao, X.X. Zhang // Microbial Pathogenesis. - 2019. - Vol. 132. - P. 193-200.
27. Prevalence of infection by Cryptosporidium spp. in calves and associated risk factors in Northeastern Brazil / A.I. Conceição1, L.P.S. Almeida, L.O. Macedo, C.L. Mendonça, L.C. Alves, R.A.N. Ramos, G.A. Carvalho // Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. - 2021. - Vol. 73. - № 1. - P. 34-40.
28. Prevalence, risk factors and molecular characterization of Cryptosporidium infection in cattle in Addis Ababa and its environs, Ethiopia / A. Manyazewal, S. Francesca, M. Pal, M. Gezahegn, M. Tesfaye, M. Lucy, W. Teklu, T. Getachew // Veterinary Parasitology: Regional Studies and Reports. - August 2018. - Vol. 13. - P. 79-84.
29. Tarekegn Z.S. Cryptosporidium infection in cattle and humans in Ethiopia: A systematic review and meta-analysis / Z.S. Tarekegn, Y. Tigabu, H. Dejene // Parasite Epidemiology and Control. - August 2021. - Vol. 14. - e00219.
Claims (1)
- Способ выявления ооцист криптоспоридий в пробах фекалий, включающий проведение метода седиментации, отличающийся тем, что 1 г пробы фекалий помещают в ступку и приливают 5 мл дистиллированной воды, после добавляют 1 мл моющего средства «Италмас», пробу тщательно растирают в ступке и процеживают через двойной слой марли в центрифужные пробирки, после чего дистиллированной водой доводят объем до 10 мл и центрифугируют при 1500 об/мин 4 минуты, далее надосадочную жидкость сливают и приливают 10 мл 5% муравьиной кислоты, осадок ресуспендируют и вновь центрифугируют 7 при 1500 об/мин 4 минуты, надосадочную жидкость сливают и получившийся осадок наносят на предметное стекло и выявляют ооцисты криптоспоридий.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2821765C1 true RU2821765C1 (ru) | 2024-06-26 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2343879A1 (en) * | 1998-09-21 | 2000-03-30 | Jeff Gray | Diagnostic assays for detection of cryptosporidium parvum |
| RU2229128C2 (ru) * | 2002-06-28 | 2004-05-20 | Российский государственный медицинский университет | Способ диагностики криптоспоридиоза |
| RU2638811C1 (ru) * | 2016-12-13 | 2017-12-15 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ЦСП" Минздрава России) | Способ пробоподготовки биологического материала кала для определения цист лямблий и ооцист криптоспоридий |
| RU2766796C1 (ru) * | 2021-06-02 | 2022-03-15 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ диагностики криптоспоридиоза по концентрациям молекулярных маркеров микроорганизмов в крови |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2343879A1 (en) * | 1998-09-21 | 2000-03-30 | Jeff Gray | Diagnostic assays for detection of cryptosporidium parvum |
| RU2229128C2 (ru) * | 2002-06-28 | 2004-05-20 | Российский государственный медицинский университет | Способ диагностики криптоспоридиоза |
| RU2638811C1 (ru) * | 2016-12-13 | 2017-12-15 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "ЦСП" Минздрава России) | Способ пробоподготовки биологического материала кала для определения цист лямблий и ооцист криптоспоридий |
| RU2766796C1 (ru) * | 2021-06-02 | 2022-03-15 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ диагностики криптоспоридиоза по концентрациям молекулярных маркеров микроорганизмов в крови |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Бридский Е.В., Мякишев А.М. СЕДИМЕНТАЦИОННЫЙ АНАЛИЗ. КРИВЫЕ СЕДИМЕНТАЦИИ МОНОДИСПЕРСНЫХ И ПОЛИДИСПЕРСНЫХ СИСТЕМ. В сборнике: Молодежь и XXI век - 2019. Материалы IX Международной молодежной научной конференции. 2019. С. 14-17. О.С. МЕХОВА. КРИПТОСПОРИДИОЗ ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ (МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ). Животноводство и ветеринарная медицина. 2016, N 1, с. 38-41. Васильева В.А., Кулясов П.А., Курочкина Ю.Е. ДИАГНОСТИКА И МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ КУЛЬТУРЫ C. PARVUM // Фундаментальные исследования. 2014, N 11-2, с. 321-323. Pavlasek, I. Nalezy kryptosporidii ve žlaznatem žaludku u slepic a u volně žijicich a exotickych ptaků odchycenych z volne přirody (Findings of cryptosporidia in the proventriculum of hens and in wild and exotic birds) / I. Pavlasek // Veterinařstvi, 2001. N3. P. 103-108. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Szwabe et al. | Stray dogs and cats as potential sources of soil contamination with zoonotic parasites | |
| Wolf et al. | Diagnosis of gastrointestinal parasites in reptiles: comparison of two coprological methods | |
| Jackson et al. | In vitro methods for the primary screening of plant products for direct activity against ruminant gastrointestinal nematodes | |
| Duthaler et al. | Fasciola hepatica: comparison of the sedimentation and FLOTAC techniques for the detection and quantification of faecal egg counts in rats | |
| Soares et al. | A historical review of the techniques of recovery of parasites for their detection in human stools | |
| Kroten et al. | Environmental contamination with Toxocara eggs and seroprevalence of toxocariasis in children of northeastern Poland | |
| Garcia-Campos et al. | One-year parasitological screening of stray dogs and cats in County Dublin, Ireland | |
| McMurtry et al. | Distinguishing morphological features of the third larval stage of ovine Trichostrongylus spp. | |
| De Aquino et al. | Cryptosporidiosis and giardiasis in buffaloes (Bubalus bubalis) | |
| Hanif et al. | Seroprevalence and risk factors associated with toxoplasmosis in sheep in Multan and Khanewal districts of Punjab (Pakistan). | |
| Höglund et al. | Ascaridia galli-An old problem that requires new solutions | |
| RU2821765C1 (ru) | Метод седиментации для диагностики криптоспоридиоза | |
| Żarnowska et al. | A serological and epidemiological evaluation of risk factors for toxocariasis in children in central Poland | |
| Tan et al. | Detection of Schistosoma spindale ova and associated risk factors among Malaysian cattle through coprological survey | |
| RU2683324C2 (ru) | Набор для комплексной диагностики эндопаразитов животных методом копроскопии | |
| Bessat | Parasitological prevalence of Cryptosporidium infection in calves, chickens and human in Behera province | |
| Öner et al. | Prevalence of Cryptosporı̇dı̇um spp. in dogs in the Aegean Region | |
| IDRISSI et al. | Canine cardiopulmonary nematodes in Morocco: Prevalence of Dirofilaria immitis and report of the first autochthonous infection with Angiostrongylus vasorum | |
| Vinnie-Siow et al. | Integration of microscopic, serologic and molecular techniques for detection of filarial parasites in dogs in Malaysia | |
| Ekelozie et al. | Hookworm Infestation amongst Primary School Children in Enugu | |
| SHUKUR | Prevalence of canine intestinal parasites in Duhok province, Kurdistan Region, Iraq | |
| RU2269939C2 (ru) | Способ определения антгельминтной резистентности у паразитических нематод и скрининга препаратов против них in vitro | |
| Ikpeama et al. | Intestinal Parasites among HIV/AIDS Patients on ART Attending Specialist Hospital, Sokoto State, Nigeria | |
| Al-Lahaibi et al. | EVALUATION OF FASCIOLA SPP INFECTION IN CATTLE AND SHEEP IN MOSUL CITY | |
| Setiawan et al. | The Effect of Breeding Management on the Prevalence and Trematode Infection Degree in calves |