RU2820960C1 - Method of analyzing blood serum or milk samples for detecting antibodies to bovine leukaemia virus (blv) - Google Patents
Method of analyzing blood serum or milk samples for detecting antibodies to bovine leukaemia virus (blv) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2820960C1 RU2820960C1 RU2023131013A RU2023131013A RU2820960C1 RU 2820960 C1 RU2820960 C1 RU 2820960C1 RU 2023131013 A RU2023131013 A RU 2023131013A RU 2023131013 A RU2023131013 A RU 2023131013A RU 2820960 C1 RU2820960 C1 RU 2820960C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- blood serum
- milk
- samples
- blv
- antibodies
- Prior art date
Links
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 24
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 18
- 239000008267 milk Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title abstract description 18
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 title abstract description 18
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title abstract description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 17
- 241000714266 Bovine leukemia virus Species 0.000 claims description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 239000010868 animal carcass Substances 0.000 description 1
- 230000000719 anti-leukaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способам диагностики лейкоза крупного рогатого скотаThe invention relates to the field of veterinary virology, in particular to methods for diagnosing leukemia in cattle
Современная серологическая диагностика лейкоза крупного рогатого скота основана большей частью на использовании реакции иммунодиффузии в геле агара (РИД) и методов иммуноферментного анализа (ИФА). При этом предлагаются разные способы выявления больных лейкозом животных основанные на данные тесты.Modern serological diagnosis of bovine leukemia is based mostly on the use of the agar gel immunodiffusion reaction (AGI) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) methods. At the same time, various methods are proposed for identifying animals with leukemia based on these tests.
Известен способ выявления больных лейкозом крупного рогатого скота животных, при котором проводят дополнительные исследования в РИД после провокации иммунного ответа путем трехкратного введения инактивированной вакцины против лейкоза крупного рогатого (патент RU 2264628 C2).There is a known method for identifying animals with bovine leukemia, in which additional research is carried out in the RID after provoking an immune response by three-time administration of an inactivated vaccine against bovine leukemia (patent RU 2264628 C2).
Известен способ с поэтапной иммобилизацией вируса (патент RU 2377962 C1).There is a known method with step-by-step immobilization of the virus (patent RU 2377962 C1).
Известен способ послеубойной диагностики лейкоза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа смывов с туш или субпродуктов животных (патент RU 2803893 C1) и др.There is a known method for post-mortem diagnosis of leukemia in cattle using the method of enzyme immunoassay of swabs from animal carcasses or offal (patent RU 2803893 C1), etc.
Недостатком этих способов является, если с одной стороны, недостаточно высокая чувствительность и специфичность РИД, то с другой сложность технологий, особенно по части обработки проб при постановке методов ИФА. Еще одним из недостатков серологических методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота, в том числе и ИФА, является то, что они не позволяют выявлять «связанные антитела», т.е. антитела в составе иммунных комплексов. В результате снижается эффективность оздоровительных мероприятий при лейкозе крупного рогатого скота.The disadvantage of these methods is, on the one hand, the sensitivity and specificity of RID is not high enough, on the other hand, the complexity of the technology, especially in terms of sample processing when setting up ELISA methods. Another disadvantage of serological methods for diagnosing bovine leukemia, including ELISA, is that they do not allow the detection of “bound antibodies”, i.e. antibodies as part of immune complexes. As a result, the effectiveness of health measures for bovine leukemia decreases.
При хронических инфекциях, вызванных вирусами семейства Retroviridae, в биологических жидкостях организма образуются иммунные комплексы «антиген-антитело», которые имеют определенное значение в патогенезе этих инфекций. Доказано, что циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) в сыворотке крови ВЛКРС-серопозитивных коров содержат антигены вируса и IgG и IgM. Соотношение антител в комплексах («связанные антитела») меняется с возрастом животного и стадией болезни. Сывороточные иммунные комплексы обладают низкой температурной устойчивостью и достаточно легко диссоциируют.During chronic infections caused by viruses of the Retroviridae family, antigen-antibody immune complexes are formed in the biological fluids of the body, which have a certain significance in the pathogenesis of these infections. It has been proven that circulating immune complexes (CICs) in the blood serum of BLV-seropositive cows contain both viral antigens and IgG and IgM. The ratio of antibodies in complexes (“bound antibodies”) changes with the age of the animal and the stage of the disease. Serum immune complexes have low temperature stability and dissociate quite easily.
Ближайшим аналогом заявленного изобретения является способ диагностики лейкоза крупного рогатого скота, включающий выявление анти-ВЛКРС антител в молоке или в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализа, в котором предварительно перед анализом пробу обезжиренного молока или сыворотки крови инкубируют 2 часа при температуре 50°С, после чего пробы сразу же используют для иммуноферментного анализа (патент RU 2425377 C1). The closest analogue of the claimed invention is a method for diagnosing leukemia in cattle, including detection of anti-BLV antibodies in milk or blood serum using an enzyme-linked immunosorbent assay, in which, before analysis, a sample of skim milk or blood serum is incubated for 2 hours at a temperature of 50°C, after whereby the samples are immediately used for enzyme immunoassay (patent RU 2425377 C1).
Целью заявляемого изобретения является сокращение сроков обработки биоматериала сохранив высокую чувствительность и специфичность иммуноферментного метода анализа.The purpose of the claimed invention is to reduce the processing time of biomaterial while maintaining the high sensitivity and specificity of the enzyme immunoassay method.
Поставленная задача в способе исследования проб сыворотки крови или молока на выявление антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), включающем выявление анти-ВЛКРС антител в молоке или сыворотке крови животного с помощью иммуноферментного анализа, достигается тем, что предварительно перед анализом пробу обезжиренного молока или сыворотки крови в объеме по 1 мл в пробирках типа Эппендорф инкубируют 45 минут при температуре 60°С, после чего пробы сразу же используют для иммуноферментного анализа («Методические указания по диагностике лейкоза крупного рогатого скота»/ МСХ РФ, Департамент ветеринарии №13-7-2/2130 от 23.08.00.- С.5-8.).The objective in the method of studying samples of blood serum or milk for the detection of antibodies to the bovine leukemia virus (BLVV), including the detection of anti-BLVV antibodies in the milk or blood serum of an animal using an enzyme-linked immunosorbent assay, is achieved by the fact that, before analysis, a sample of skim milk or blood serum in a volume of 1 ml in Eppendorf tubes is incubated for 45 minutes at a temperature of 60°C, after which the samples are immediately used for enzyme immunoassay (“Guidelines for the diagnosis of leukemia in cattle” / Ministry of Agriculture of the Russian Federation, Department of Veterinary Medicine No. 13- 7-2/2130 from 08.23.00.- P.5-8.).
Предлагаемый способ позволяет значительно сократить время постановки ИФА теста и увеличить количество исследуемых животных. Метод обеспечивает полную диссоциацию иммунных комплексов и позволяет обнаружить наряду со свободными и связанные в иммунных комплексах антитела в сыворотке крови и молоке. Следовательно, если учесть, что чувствительность метода по сравнению с аналогом не понижается, то эффективность диагностики лейкоза крупного рогатого скота повышается.The proposed method can significantly reduce the time of performing an ELISA test and increase the number of animals studied. The method ensures complete dissociation of immune complexes and makes it possible to detect, along with free and bound antibodies in immune complexes, antibodies in blood serum and milk. Consequently, if we take into account that the sensitivity of the method does not decrease in comparison with the analogue, then the efficiency of diagnosing leukemia in cattle increases.
Пример 1. Исследовали по 200 проб сыворотки крови и молока от одних и тех же животных из оздоравливаемого от лейкоза хозяйства Новошишминского района РТ. Перед анализом пробы обезжиренного молока и сывороток крови в объеме по 1 мл в пробирках типа Эппендорф инкубировали 45 минут при температуре 60°С, после чего пробы сразу же использовали для иммуноферментного анализа. ИФА ставили в непрямом твердофазном варианте с использованием «Набора для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в сыворотке крови и молоке иммуноферментным методом» производства ФКП «Курсая биофабрика - фирма «Биок». Учет результатов реакции проводили согласно наставлению по применению набора. Результаты исследований представлены в таблице 1и 2.Example 1. We studied 200 samples of blood serum and milk from the same animals from a farm recovering from leukemia in the Novoshishminsky district of the Republic of Tatarstan. Before analysis, 1 ml samples of skim milk and blood serum in Eppendorf tubes were incubated for 45 minutes at 60°C, after which the samples were immediately used for enzyme immunoassay. ELISA was performed in an indirect solid-phase version using the “Kit for the detection of antibodies to the bovine leukemia virus in blood serum and milk by the enzyme immunoassay method” produced by the Kursaya Biofactory - Biok company. The reaction results were recorded according to the instructions for use of the kit. The research results are presented in tables 1 and 2.
Таблица 1.Table 1.
Результаты исследования проб сывороток крови методом ИФА на лейкоз крупного рогатого скота.Results of the study of blood serum samples using ELISA for bovine leukemia.
РИД (-)RID (+)
RID (-)
100100
100
11100
eleven
890
89
23100
23
770
77
23100
23
770
77
Таблица 2.Table 2.
Результаты исследования проб сывороток молока методом ИФА на лейкоз крупного рогатого скота.Results of the study of milk serum samples using ELISA for bovine leukemia.
РИД (-)RID (+)
RID (-)
100100
100
976
9
9124
91
1491
14
869
86
1691
16
849
84
100 проб сывороток крови и молока из 200 исследованных были получены от РИД положительных, а остальные 100 от РИД отрицательных животных.100 samples of blood serum and milk out of 200 examined were obtained from RID positive animals, and the remaining 100 from RID negative animals.
100 проб сывороток крови от РИД положительных животных были положительные в ИФА до и после термической обработки (таблица 1). Пробы молока от этих же коров показали положительные результаты в ИФА в 76 случаях. После диссоциации ЦИК, как по способу аналога, так и по предложенному способу положительными оказались 91 проба (таблица 2).100 blood serum samples from RID positive animals were positive in ELISA before and after heat treatment (Table 1). Milk samples from the same cows showed positive ELISA results in 76 cases. After dissociation of the CEC, 91 samples turned out to be positive both by the analogue method and by the proposed method (Table 2).
11 проб сывороток крови из 100 от РИД отрицательных коров показали положительные результаты в классическом ИФА. После инкубирования в вышеуказанных условиях положительно реагирующих проб стало 23 (таблица 1).11 blood serum samples out of 100 from RID negative cows showed positive results in the classical ELISA. After incubation under the above conditions, there were 23 positive samples (Table 1).
В иммуноферментном анализе проб молока от этих же животных получены следующие результаты: 9 - положительные и 91 - отрицательные по обычной методике ИФА, 14 - положительные и 86 - отрицательные по методике аналога, 16-положительные и 84 - отрицательные по предлагаемому способу (таблица 2).In the enzyme immunoassay of milk samples from the same animals, the following results were obtained: 9 - positive and 91 - negative using the conventional ELISA method, 14 - positive and 86 - negative using the analogue method, 16 - positive and 84 - negative using the proposed method (Table 2) .
Таким образом, предлагаемый способ исследования проб сыворотки крови или молока на выявление антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) позволяет более полно выявлять в оздоравливаемых стадах ВЛКРС-инфицированных животных, исключить потенциальных источников перезаражения и повысить эффективность противолейкозных мероприятий в хозяйствах. Кроме того, данный способ открывает широкие перспективы мониторинга эпизоотической ситуации по лейкозу в хозяйствах методом иммуноферментного анализа проб молока.Thus, the proposed method for examining blood serum or milk samples for the detection of antibodies to the bovine leukemia virus (BLV) makes it possible to more fully identify BLV-infected animals in recovering herds, eliminate potential sources of reinfection and increase the effectiveness of anti-leukemia measures on farms. In addition, this method opens up broad prospects for monitoring the epizootic situation of leukemia in farms using the method of enzyme immunoassay of milk samples.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2820960C1 true RU2820960C1 (en) | 2024-06-13 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2200955C2 (en) * | 2001-03-07 | 2003-03-20 | Государственное учреждение Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт | Method for detecting sick animals suffering with cattle leukosis |
| RU2379683C1 (en) * | 2008-06-04 | 2010-01-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии) | Method of diagnosing leukemia in cattle |
| RU2425377C1 (en) * | 2010-01-11 | 2011-07-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана" | Method to diagnose leukosis in cattle |
| WO2021100668A1 (en) * | 2019-11-19 | 2021-05-27 | 株式会社ケーナインラボ | Kit for detecting bovine leukemia virus |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2200955C2 (en) * | 2001-03-07 | 2003-03-20 | Государственное учреждение Дальневосточный зональный научно-исследовательский ветеринарный институт | Method for detecting sick animals suffering with cattle leukosis |
| RU2379683C1 (en) * | 2008-06-04 | 2010-01-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Сибирского отделения Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии) | Method of diagnosing leukemia in cattle |
| RU2425377C1 (en) * | 2010-01-11 | 2011-07-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана" | Method to diagnose leukosis in cattle |
| WO2021100668A1 (en) * | 2019-11-19 | 2021-05-27 | 株式会社ケーナインラボ | Kit for detecting bovine leukemia virus |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Джапаралиев, Н.Т. Применение серологических методов и ПЦР для обнаружения вируса лейкоза крупного рогатого скота в образцах крови, молока и носовых истечений / Н.Т. Джапаралиев, Л.Б. Прохватилова, А.И. Ломакин, П.К. Аянот // Достижения молодых ученых - в ветеринарную практику: мат. конф. молодых ученых. - Владимир: ОКНИИиМС, ВНИИЗЖ, 2000. - С.127-131. Вангели С. В. Методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота. NAUKI VETERINARNІ. N 8, 2016, с. 91-94. Gutierrez, G. Detection of bovin leukemia virus specific antibodies using recombinant p24-ELISA/ G. Gutierrez, I. Alvares, N. Fondevila, R. Politzki, M. Lomonaco, S. Rodrigues, M.J. Dus Santos, K. Trono// Veterinary Microbiology. - 2009. - Vol. 137. - N 3/4. - P. 224-234. Hala El Daous et al. Establishment of a novel diagnostic test for Bovine leukaemia virus infection using direct filter PCR. Transbound Emerg Dis. 2020 Jul;67(4):1671-1676. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Acaite et al. | The eradication experience of enzootic bovine leukosis from Lithuania | |
| Milner et al. | The sensitivity and specificity of a modified ELISA for the diagnosis of Johne's disease from a field trial in cattle | |
| Gall et al. | Serological diagnosis of bovine brucellosis: a review of test performance and cost comparison | |
| RU2425377C1 (en) | Method to diagnose leukosis in cattle | |
| US20070141653A1 (en) | Method for diagnosing infectious diseases | |
| RU2820960C1 (en) | Method of analyzing blood serum or milk samples for detecting antibodies to bovine leukaemia virus (blv) | |
| Rahman et al. | Brucellosis among ruminants in some districts of Bangladesh using four conventional serological assays | |
| Al-Alo et al. | A cross sectional study on the seroprevalence of bovine brucellosis in Al-Najaf province in Iraq | |
| Saleha et al. | Comparison of milk ring test; serum plate agglutination test and polymerase chain reaction for the detection of bovine brucellosis | |
| Walunj et al. | Detection of brucellosis by serological techniques in bovines | |
| Chand et al. | Comparison of Dot Enzyme‐linked Immunosorbent Assay (Dot‐ELISA) with other Serological Tests for the Detection of Brucella Antibodies in Bovine Sera | |
| RU2372098C1 (en) | Method for preparing anaplasma antigen for serum diagnostics in animals | |
| Mishra et al. | Seroprevalence of brucellosis among cows and buffaloes of Gorakhpur district of Uttar Pradesh | |
| RU2741239C1 (en) | Diagnostic technique for cattle leukemia | |
| Stegniy et al. | Comparative diagnostics of Cattle leukemia by ELISA method in test kits of various constructions | |
| Mishra et al. | Comparative efficacy of lateral flow assay, RBPT, MAT and i-ELISA for diagnosis of bovine brucellosis | |
| Mustafayev et al. | Retrospective analysis of enzootic bovine leucosis spread in Republic of Dagestan considering natural and climatic conditions | |
| RU2264628C2 (en) | Method for predicting leukosis in cattle | |
| Chandel et al. | Detection of precipitating antibodies to bluetongue virus in aborted and clinically healthy ruminants in north Gujarat | |
| Wolfram et al. | Diagnostic and vaccine chapter | |
| Yapkic et al. | An investigation of equine infectious anaemia infection in the central Anatolia region of Turkey | |
| Panda et al. | Investigation of Sero Prevalence of Brucella Outbreak in an Organised Dairy Farm | |
| Boyle | Streptococcus equi ss equi | |
| Velić et al. | Applicability of a brucellin skin test in seropositive cattle | |
| RU2287154C2 (en) | Method for predicting toxoplasmosis in dogs and cats |