RU2819927C2 - Криоконсервированные клетки-естественные киллеры, предварительно нагруженные конструкцией антитела - Google Patents
Криоконсервированные клетки-естественные киллеры, предварительно нагруженные конструкцией антитела Download PDFInfo
- Publication number
- RU2819927C2 RU2819927C2 RU2021103735A RU2021103735A RU2819927C2 RU 2819927 C2 RU2819927 C2 RU 2819927C2 RU 2021103735 A RU2021103735 A RU 2021103735A RU 2021103735 A RU2021103735 A RU 2021103735A RU 2819927 C2 RU2819927 C2 RU 2819927C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ser
- gly
- val
- thr
- ala
- Prior art date
Links
- 238000010276 construction Methods 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 182
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 177
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 175
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims abstract description 140
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 119
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 119
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 117
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 92
- 108091008877 NK cell receptors Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 176
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 158
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 claims description 84
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 claims description 49
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 claims description 35
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 claims description 35
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 31
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 22
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 18
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 18
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 claims description 17
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 claims description 17
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 15
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 claims description 13
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 13
- -1 CD79b Proteins 0.000 claims description 12
- 102100032870 Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Human genes 0.000 claims description 12
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 claims description 11
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 claims description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 11
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 10
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 10
- 108010004217 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 1 Proteins 0.000 claims description 10
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 10
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 10
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 8
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 8
- 101100279855 Arabidopsis thaliana EPFL5 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 102100026094 C-type lectin domain family 12 member A Human genes 0.000 claims description 7
- 102100024217 CAMPATH-1 antigen Human genes 0.000 claims description 7
- 108010065524 CD52 Antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 claims description 7
- 101150031358 COLEC10 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 102100031507 Fc receptor-like protein 5 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100030595 HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Human genes 0.000 claims description 7
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 101100496086 Homo sapiens CLEC12A gene Proteins 0.000 claims description 7
- 101000846908 Homo sapiens Fc receptor-like protein 5 Proteins 0.000 claims description 7
- 101001082627 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 claims description 7
- 101000998120 Homo sapiens Interleukin-3 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 7
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 7
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 7
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 7
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 7
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 7
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims description 7
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 6
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 6
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 claims description 3
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 102100021462 Natural killer cells antigen CD94 Human genes 0.000 claims 3
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 102000010648 Natural Killer Cell Receptors Human genes 0.000 abstract 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 153
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 102
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 63
- 101100334515 Homo sapiens FCGR3A gene Proteins 0.000 description 53
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 50
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 47
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 43
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 40
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- JMVQDLDPDBXAAX-YUMQZZPRSA-N Pro-Gly-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 JMVQDLDPDBXAAX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 36
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 36
- HTONZBWRYUKUKC-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HTONZBWRYUKUKC-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 35
- JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N Ala-Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CCCN=C(N)N JBGSZRYCXBPWGX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 28
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N Gln-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 28
- LSXGADJXBDFXQU-DLOVCJGASA-N Phe-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 LSXGADJXBDFXQU-DLOVCJGASA-N 0.000 description 28
- PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N Ser-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 28
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 28
- OJCISMMNNUNNJA-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Asp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OJCISMMNNUNNJA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 28
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 28
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 28
- 102000027581 NK cell receptors Human genes 0.000 description 27
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 27
- SFRQEQGPRTVDPO-NRPADANISA-N Cys-Gln-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SFRQEQGPRTVDPO-NRPADANISA-N 0.000 description 26
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 26
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 26
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 25
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N Leu-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 25
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 25
- MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N Trp-Val-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 25
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 25
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 25
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 25
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 25
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 25
- NVWJMQNYLYWVNQ-BYULHYEWSA-N Asn-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O NVWJMQNYLYWVNQ-BYULHYEWSA-N 0.000 description 24
- MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N Asp-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 24
- GBYYQVBXFVDJPJ-WLTAIBSBSA-N Gly-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)CN)O GBYYQVBXFVDJPJ-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 24
- OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N Val-Tyr-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 24
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 24
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 23
- BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N Gly-Gln-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 22
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 22
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 22
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 22
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 22
- AWAXZRDKUHOPBO-GUBZILKMSA-N Ala-Gln-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AWAXZRDKUHOPBO-GUBZILKMSA-N 0.000 description 21
- ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N Arg-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 21
- IKFZXRLDMYWNBU-YUMQZZPRSA-N Gln-Gly-Arg Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IKFZXRLDMYWNBU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 21
- ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N Gln-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 21
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 21
- MVJRBCJCRYGCKV-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O MVJRBCJCRYGCKV-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 21
- UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 21
- SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N Met-Glu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 21
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 21
- MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 21
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 21
- BDMWLJLPPUCLNV-XGEHTFHBSA-N Ser-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BDMWLJLPPUCLNV-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 21
- GLQFKOVWXPPFTP-VEVYYDQMSA-N Thr-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GLQFKOVWXPPFTP-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 21
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 21
- NUQZCPSZHGIYTA-HKUYNNGSSA-N Tyr-Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N NUQZCPSZHGIYTA-HKUYNNGSSA-N 0.000 description 21
- JQTYTBPCSOAZHI-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N JQTYTBPCSOAZHI-FXQIFTODSA-N 0.000 description 21
- USXYVSTVPHELAF-RCWTZXSCSA-N Val-Thr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O USXYVSTVPHELAF-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 21
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 21
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 21
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 20
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 20
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 19
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 19
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 19
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 19
- ZLFNNVATRMCAKN-ZKWXMUAHSA-N Ile-Ser-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)O)N ZLFNNVATRMCAKN-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 18
- LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N L-valyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- FMFNIDICDKEMOE-XUXIUFHCSA-N Leu-Val-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FMFNIDICDKEMOE-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 18
- 108010066427 N-valyltryptophan Proteins 0.000 description 18
- BPCLGWHVPVTTFM-QWRGUYRKSA-N Phe-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O BPCLGWHVPVTTFM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 18
- PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N Pro-Glu-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 18
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 18
- IOVHBRCQOGWAQH-ZKWXMUAHSA-N Ser-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O IOVHBRCQOGWAQH-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 18
- OYTNZCBFDXGQGE-XQXXSGGOSA-N Thr-Gln-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O OYTNZCBFDXGQGE-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 18
- NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N Val-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NZYNRRGJJVSSTJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- 108010072644 valyl-alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 18
- FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 17
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 17
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 17
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 17
- ALMIMUZAWTUNIO-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ALMIMUZAWTUNIO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 16
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IHCXPSYCHXFXKT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 16
- OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N Thr-Val-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 16
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 16
- HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N Asn-Ser-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O HPBNLFLSSQDFQW-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N Thr-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 15
- IQGJAHMZWBTRIF-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N IQGJAHMZWBTRIF-UBHSHLNASA-N 0.000 description 15
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 14
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Gln Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 14
- YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N Leu-Val-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 14
- SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N Thr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SGAOHNPSEPVAFP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 14
- SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N Val-Leu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O SYSWVVCYSXBVJG-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 14
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 14
- VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 13
- UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N Gly-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 13
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 13
- RKQAYOWLSFLJEE-SVSWQMSJSA-N Ile-Thr-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N RKQAYOWLSFLJEE-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N Phe-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 0.000 description 13
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 13
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 13
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 13
- YHBDGLZYNIARKJ-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N YHBDGLZYNIARKJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 12
- WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N Asn-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 12
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-His Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 12
- FOCSWPCHUDVNLP-PMVMPFDFSA-N His-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC4=CN=CN4)N FOCSWPCHUDVNLP-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 12
- FUKDBQGFSJUXGX-RWMBFGLXSA-N Lys-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O FUKDBQGFSJUXGX-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 12
- JHSRGEODDALISP-XVSYOHENSA-N Phe-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JHSRGEODDALISP-XVSYOHENSA-N 0.000 description 12
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HAYADTTXNZFUDM-IHRRRGAJSA-N Ser-Tyr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HAYADTTXNZFUDM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 12
- MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N 0.000 description 12
- XYNFFTNEQDWZNY-ULQDDVLXSA-N Tyr-Met-His Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N XYNFFTNEQDWZNY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 12
- TYFLVOUZHQUBGM-IHRRRGAJSA-N Tyr-Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 TYFLVOUZHQUBGM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 12
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N (2s)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HKZAAJSTFUZYTO-LURJTMIESA-N 0.000 description 11
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- FPCGZYMRFFIYIH-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FPCGZYMRFFIYIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 11
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 11
- 230000006870 function Effects 0.000 description 11
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 11
- 108010050475 glycyl-leucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 108010024654 phenylalanyl-prolyl-alanine Proteins 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 10
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 10
- XKPACHRGOWQHFH-IRIUXVKKSA-N Gln-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O XKPACHRGOWQHFH-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 10
- AAHSHTLISQUZJL-QSFUFRPTSA-N Gly-Ile-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O AAHSHTLISQUZJL-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 10
- FADXGVVLSPPEQY-GHCJXIJMSA-N Ile-Cys-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N FADXGVVLSPPEQY-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 10
- HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N Leu-Gly-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HYMLKESRWLZDBR-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 10
- SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N Leu-Ser-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N Lys-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N Pro-Ser-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PRKWBYCXBBSLSK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 10
- XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XQJCEKXQUJQNNK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N Tyr-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 10
- GNWUWQAVVJQREM-NHCYSSNCSA-N Val-Asn-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N GNWUWQAVVJQREM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 10
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 10
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 10
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 10
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 9
- MADFVRSKEIEZHZ-DCAQKATOSA-N Gln-Gln-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MADFVRSKEIEZHZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 9
- QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N Glu-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QDMVXRNLOPTPIE-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 9
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 9
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 9
- GPICTNQYKHHHTH-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GPICTNQYKHHHTH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 9
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- SJRQWEDYTKYHHL-SLFFLAALSA-N Phe-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=CC=C3)N)C(=O)O SJRQWEDYTKYHHL-SLFFLAALSA-N 0.000 description 9
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 9
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 9
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 9
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 9
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 9
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 9
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 9
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 9
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 9
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 9
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 8
- KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N Ala-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KUDREHRZRIVKHS-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 8
- NVFSJIXJZCDICF-SRVKXCTJSA-N Asp-Lys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N NVFSJIXJZCDICF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 8
- MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MGSVBZIBCCKGCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 8
- OKARHJKJTKFQBM-ACZMJKKPSA-N Gln-Ser-Asn Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OKARHJKJTKFQBM-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 8
- MIQCYAJSDGNCNK-BPUTZDHNSA-N Glu-Gln-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O MIQCYAJSDGNCNK-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 8
- LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N Gly-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 8
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 8
- RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N L-isoleucyl-L-alanine Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- HRTRLSRYZZKPCO-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HRTRLSRYZZKPCO-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 8
- KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 8
- TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 8
- GNRMAQSIROFNMI-IXOXFDKPSA-N Phe-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GNRMAQSIROFNMI-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 8
- OWQXAJQZLWHPBH-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OWQXAJQZLWHPBH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 8
- SXJOPONICMGFCR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O SXJOPONICMGFCR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 8
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 8
- IOVBCLGAJJXOHK-SRVKXCTJSA-N Ser-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IOVBCLGAJJXOHK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 8
- WPSDXXQRIVKBAY-NKIYYHGXSA-N Thr-His-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O WPSDXXQRIVKBAY-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 8
- PRNGXSILMXSWQQ-OEAJRASXSA-N Thr-Leu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O PRNGXSILMXSWQQ-OEAJRASXSA-N 0.000 description 8
- DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 8
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 8
- NLLARHRWSFNEMH-NUTKFTJISA-N Trp-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N NLLARHRWSFNEMH-NUTKFTJISA-N 0.000 description 8
- NSGZILIDHCIZAM-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N NSGZILIDHCIZAM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 8
- ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Pro Natural products CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 8
- MJXNDRCLGDSBBE-FHWLQOOXSA-N Val-His-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)N MJXNDRCLGDSBBE-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 8
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000013461 design Methods 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 108010013768 glutamyl-aspartyl-proline Proteins 0.000 description 8
- 108010027668 glycyl-alanyl-valine Proteins 0.000 description 8
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 8
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 8
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 8
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 8
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 8
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 8
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 8
- 108010071097 threonyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 8
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 8
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N Ala-Leu-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OYJCVIGKMXUVKB-GARJFASQSA-N 0.000 description 7
- SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N Ala-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)NCC(O)=O SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- WQLDNOCHHRISMS-NAKRPEOUSA-N Ala-Pro-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WQLDNOCHHRISMS-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 7
- XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 7
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 description 7
- ZUVMUOOHJYNJPP-XIRDDKMYSA-N Arg-Trp-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZUVMUOOHJYNJPP-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 7
- WONGRTVAMHFGBE-WDSKDSINSA-N Asn-Gly-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N WONGRTVAMHFGBE-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N Asp-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPNWSMBUYCLEDG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQIARYGNVQWOSB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 7
- DHNWZLGBTPUTQQ-QEJZJMRPSA-N Gln-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N DHNWZLGBTPUTQQ-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 7
- XKBASPWPBXNVLQ-WDSKDSINSA-N Gln-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XKBASPWPBXNVLQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 7
- WPJDPEOQUIXXOY-AVGNSLFASA-N Gln-Tyr-Asn Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O WPJDPEOQUIXXOY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 7
- FITIQFSXXBKFFM-NRPADANISA-N Gln-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FITIQFSXXBKFFM-NRPADANISA-N 0.000 description 7
- VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N Gly-Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VSVZIEVNUYDAFR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- FFJQHWKSGAWSTJ-BFHQHQDPSA-N Gly-Thr-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FFJQHWKSGAWSTJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 7
- MAABHGXCIBEYQR-XVYDVKMFSA-N His-Asn-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N MAABHGXCIBEYQR-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 7
- HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N His-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HIAHVKLTHNOENC-HGNGGELXSA-N 0.000 description 7
- CSTDQOOBZBAJKE-BWAGICSOSA-N His-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O CSTDQOOBZBAJKE-BWAGICSOSA-N 0.000 description 7
- JHNJNTMTZHEDLJ-NAKRPEOUSA-N Ile-Ser-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O JHNJNTMTZHEDLJ-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 7
- VGSPNSSCMOHRRR-BJDJZHNGSA-N Ile-Ser-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N VGSPNSSCMOHRRR-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 7
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N Leu-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O OIARJGNVARWKFP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- QJUWBDPGGYVRHY-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N QJUWBDPGGYVRHY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- BTNXKBVLWJBTNR-SRVKXCTJSA-N Leu-His-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BTNXKBVLWJBTNR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 7
- MWVUEPNEPWMFBD-SRVKXCTJSA-N Lys-Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MWVUEPNEPWMFBD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 7
- ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N Lys-Glu-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O ODUQLUADRKMHOZ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 7
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 7
- YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N 0.000 description 7
- JLLJTMHNXQTMCK-UBHSHLNASA-N Phe-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JLLJTMHNXQTMCK-UBHSHLNASA-N 0.000 description 7
- WWPAHTZOWURIMR-ULQDDVLXSA-N Phe-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 WWPAHTZOWURIMR-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 7
- ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N Phe-Pro-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 ZJPGOXWRFNKIQL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 7
- IIEOLPMQYRBZCN-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Cys Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O IIEOLPMQYRBZCN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 7
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 7
- UAYHMOIGIQZLFR-NHCYSSNCSA-N Pro-Gln-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UAYHMOIGIQZLFR-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 7
- KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KIPIKSXPPLABPN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 7
- LGSANCBHSMDFDY-GARJFASQSA-N Pro-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O LGSANCBHSMDFDY-GARJFASQSA-N 0.000 description 7
- ZLXKLMHAMDENIO-DCAQKATOSA-N Pro-Lys-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLXKLMHAMDENIO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 7
- QPFJSHSJFIYDJZ-GHCJXIJMSA-N Ser-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO QPFJSHSJFIYDJZ-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 7
- GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 7
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 7
- VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VGQVAVQWKJLIRM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 7
- PCJLFYBAQZQOFE-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)O PCJLFYBAQZQOFE-KATARQTJSA-N 0.000 description 7
- ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N Ser-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 7
- RCOUFINCYASMDN-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O RCOUFINCYASMDN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 7
- VOHWDZNIESHTFW-XKBZYTNZSA-N Thr-Glu-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O VOHWDZNIESHTFW-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 7
- FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 7
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 7
- BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N Thr-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BDGBHYCAZJPLHX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 7
- XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N Thr-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XKWABWFMQXMUMT-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 7
- UKINEYBQXPMOJO-UBHSHLNASA-N Trp-Asn-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N UKINEYBQXPMOJO-UBHSHLNASA-N 0.000 description 7
- UDCHKDYNMRJYMI-QEJZJMRPSA-N Trp-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UDCHKDYNMRJYMI-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 7
- SINRIKQYQJRGDQ-MEYUZBJRSA-N Tyr-Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 SINRIKQYQJRGDQ-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 7
- QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N Val-Asp-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O)N QHDXUYOYTPWCSK-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 7
- UEHRGZCNLSWGHK-DLOVCJGASA-N Val-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UEHRGZCNLSWGHK-DLOVCJGASA-N 0.000 description 7
- ZIGZPYJXIWLQFC-QTKMDUPCSA-N Val-His-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O ZIGZPYJXIWLQFC-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 7
- XTDDIVQWDXMRJL-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N XTDDIVQWDXMRJL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 7
- HJSLDXZAZGFPDK-ULQDDVLXSA-N Val-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](C(C)C)N HJSLDXZAZGFPDK-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 7
- KSFXWENSJABBFI-ZKWXMUAHSA-N Val-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KSFXWENSJABBFI-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 7
- BZDGLJPROOOUOZ-XGEHTFHBSA-N Val-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O BZDGLJPROOOUOZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 7
- LLJLBRRXKZTTRD-GUBZILKMSA-N Val-Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N LLJLBRRXKZTTRD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 7
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 7
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 7
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 7
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 7
- 108010052774 valyl-lysyl-glycyl-phenylalanyl-tyrosine Proteins 0.000 description 7
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 7
- SMCGQGDVTPFXKB-XPUUQOCRSA-N Ala-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N SMCGQGDVTPFXKB-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 6
- REWSWYIDQIELBE-FXQIFTODSA-N Ala-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O REWSWYIDQIELBE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 6
- PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N Arg-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNQWAUXQDBIJDY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N Arg-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BECXEHHOZNFFFX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 6
- NTWOPSIUJBMNRI-KKUMJFAQSA-N Asn-Lys-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTWOPSIUJBMNRI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 6
- GKKUBLFXKRDMFC-BQBZGAKWSA-N Asn-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O GKKUBLFXKRDMFC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- GMUOCGCDOYYWPD-FXQIFTODSA-N Asn-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GMUOCGCDOYYWPD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 6
- RYEWQKQXRJCHIO-SRVKXCTJSA-N Asp-Asn-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 RYEWQKQXRJCHIO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- NONWUQAWAANERO-BZSNNMDCSA-N Asp-Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 NONWUQAWAANERO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WLODHVXYKYHLJD-ACZMJKKPSA-N Gln-Asp-Ser Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N WLODHVXYKYHLJD-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 6
- JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N Gln-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 6
- FTMLQFPULNGION-ZVZYQTTQSA-N Gln-Val-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O FTMLQFPULNGION-ZVZYQTTQSA-N 0.000 description 6
- YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN YMUFWNJHVPQNQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- FMNHBTKMRFVGRO-FOHZUACHSA-N Gly-Asn-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN FMNHBTKMRFVGRO-FOHZUACHSA-N 0.000 description 6
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 6
- ZVXMEWXHFBYJPI-LSJOCFKGSA-N Gly-Val-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O ZVXMEWXHFBYJPI-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 6
- FBGXMKUWQFPHFB-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N FBGXMKUWQFPHFB-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- VQPPIMUZCZCOIL-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VQPPIMUZCZCOIL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- FIYMBBHGYNQFOP-IUCAKERBSA-N Leu-Gly-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N FIYMBBHGYNQFOP-IUCAKERBSA-N 0.000 description 6
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- LKDXINHHSWFFJC-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)N LKDXINHHSWFFJC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- UGCIQUYEJIEHKX-GVXVVHGQSA-N Lys-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UGCIQUYEJIEHKX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 6
- GODBLDDYHFTUAH-CIUDSAMLSA-N Met-Asp-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GODBLDDYHFTUAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- AXIOGMQCDYVTNY-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Leu Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 AXIOGMQCDYVTNY-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 6
- CLNJSLSHKJECME-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 CLNJSLSHKJECME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 6
- OFGUOWQVEGTVNU-DCAQKATOSA-N Pro-Lys-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OFGUOWQVEGTVNU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 6
- IIRBTQHFVNGPMQ-AVGNSLFASA-N Pro-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 IIRBTQHFVNGPMQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- YDTUEBLEAVANFH-RCWTZXSCSA-N Pro-Val-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 YDTUEBLEAVANFH-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 6
- RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 6
- UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UOLGINIHBRIECN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 6
- CKDXFSPMIDSMGV-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O CKDXFSPMIDSMGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 description 6
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 6
- MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N Thr-Pro-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 MROIJTGJGIDEEJ-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 6
- NGALWFGCOMHUSN-AVGNSLFASA-N Tyr-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NGALWFGCOMHUSN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 6
- QPBJXNYYQTUTDD-KKUMJFAQSA-N Tyr-Met-Gln Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N QPBJXNYYQTUTDD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 6
- PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PWKMJDQXKCENMF-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 6
- ZXAGTABZUOMUDO-GVXVVHGQSA-N Val-Glu-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZXAGTABZUOMUDO-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 6
- 108010090037 glycyl-alanyl-isoleucine Proteins 0.000 description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 6
- 108010073472 leucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 6
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 6
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 5
- ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 5
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 5
- WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N Gly-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)CN)O WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N 0.000 description 5
- SDTPKSOWFXBACN-GUBZILKMSA-N His-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SDTPKSOWFXBACN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 5
- KIZIOFNVSOSKJI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N KIZIOFNVSOSKJI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 5
- ODTZHNZPINULEU-KKUMJFAQSA-N Lys-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ODTZHNZPINULEU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- FIRWJEJVFFGXSH-RYUDHWBXSA-N Phe-Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FIRWJEJVFFGXSH-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 5
- YMIZSYUAZJSOFL-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O YMIZSYUAZJSOFL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 5
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 5
- VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N Pro-Glu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 5
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- HNDMFDBQXYZSRM-IHRRRGAJSA-N Ser-Val-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HNDMFDBQXYZSRM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 5
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 5
- BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N Thr-Phe-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N 0.000 description 5
- NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NHOVZGFNTGMYMI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 5
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 5
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- FCPVYOBCFFNJFS-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin sodium Chemical compound [Na+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 FCPVYOBCFFNJFS-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 5
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 5
- 108700005872 human Fv Proteins 0.000 description 5
- 102000056549 human Fv Human genes 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 5
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 5
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 5
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 108700004896 tripeptide FEG Proteins 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- QDRGPQWIVZNJQD-CIUDSAMLSA-N Ala-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QDRGPQWIVZNJQD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N Ala-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 4
- BEXGZLUHRXTZCC-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Ser Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)CN=C(N)N BEXGZLUHRXTZCC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- ALHMNHZJBYBYHS-DCAQKATOSA-N Asn-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ALHMNHZJBYBYHS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 4
- OHLLDUNVMPPUMD-DCAQKATOSA-N Cys-Leu-Val Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OHLLDUNVMPPUMD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 4
- QYTKAVBFRUGYAU-ACZMJKKPSA-N Gln-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QYTKAVBFRUGYAU-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 4
- NKCZYEDZTKOFBG-GUBZILKMSA-N Gln-Gln-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NKCZYEDZTKOFBG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N Gln-Pro-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 4
- DBUNZBWUWCIELX-JHEQGTHGSA-N Gly-Thr-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DBUNZBWUWCIELX-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 4
- DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- FULZDMOZUZKGQU-ONGXEEELSA-N Gly-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)CN FULZDMOZUZKGQU-ONGXEEELSA-N 0.000 description 4
- UKTUOMWSJPXODT-GUDRVLHUSA-N Ile-Asn-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N UKTUOMWSJPXODT-GUDRVLHUSA-N 0.000 description 4
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VUBIPAHVHMZHCM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N Leu-Val-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 4
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N Lys-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- LQMHZERGCQJKAH-STQMWFEESA-N Met-Gly-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 LQMHZERGCQJKAH-STQMWFEESA-N 0.000 description 4
- SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 4
- QARPMYDMYVLFMW-KKUMJFAQSA-N Phe-Pro-Glu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 QARPMYDMYVLFMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- XDMMOISUAHXXFD-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XDMMOISUAHXXFD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- FMDHKPRACUXATF-ACZMJKKPSA-N Ser-Gln-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FMDHKPRACUXATF-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 4
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 4
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- SQHKXWODKJDZRC-LKXGYXEUSA-N Ser-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SQHKXWODKJDZRC-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 4
- SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N Ser-Thr-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNXUIBACCONSOH-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 4
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- DCLBXIWHLVEPMQ-JRQIVUDYSA-N Thr-Asp-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DCLBXIWHLVEPMQ-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 4
- JMBRNXUOLJFURW-BEAPCOKYSA-N Thr-Phe-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N)O JMBRNXUOLJFURW-BEAPCOKYSA-N 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- HGJRMXOWUWVUOA-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N HGJRMXOWUWVUOA-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 4
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 4
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 4
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 4
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 4
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 108010009297 diglycyl-histidine Proteins 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 4
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 4
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 4
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 4
- 108010069117 seryl-lysyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 4
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 108010033670 threonyl-aspartyl-tyrosine Proteins 0.000 description 4
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 4
- 108010071635 tyrosyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 3
- GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N Ala-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N GSHKMNKPMLXSQW-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 3
- MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N Ala-Leu-Thr Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MEFILNJXAVSUTO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 3
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NCQMBSJGJMYKCK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- DEAGTWNKODHUIY-MRFFXTKBSA-N Ala-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DEAGTWNKODHUIY-MRFFXTKBSA-N 0.000 description 3
- VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N Arg-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- HKRXJBBCQBAGIM-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Ser Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)CN=C(N)N HKRXJBBCQBAGIM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- OGZBJJLRKQZRHL-KJEVXHAQSA-N Arg-Thr-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 OGZBJJLRKQZRHL-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 3
- XRNXPIGJPQHCPC-RCWTZXSCSA-N Arg-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)O)C(O)=O XRNXPIGJPQHCPC-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 3
- MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- UGXYFDQFLVCDFC-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O UGXYFDQFLVCDFC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- JBDLMLZNDRLDIX-HJGDQZAQSA-N Asn-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JBDLMLZNDRLDIX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- DPWDPEVGACCWTC-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPWDPEVGACCWTC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N Asp-Arg-Val Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 3
- DONWIPDSZZJHHK-HJGDQZAQSA-N Asp-Lys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O DONWIPDSZZJHHK-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 3
- SARSTIZOZFBDOM-FXQIFTODSA-N Asp-Met-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SARSTIZOZFBDOM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- CEZSLNCYQUFOSL-BQBZGAKWSA-N Cys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O CEZSLNCYQUFOSL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- OEIDWQHTRYEYGG-QEJZJMRPSA-N Gln-Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N OEIDWQHTRYEYGG-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 3
- TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- UDEPRBFQTWGLCW-CIUDSAMLSA-N Glu-Pro-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O UDEPRBFQTWGLCW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- ZKONLKQGTNVAPR-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZKONLKQGTNVAPR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- XBWMTPAIUQIWKA-BYULHYEWSA-N Gly-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN XBWMTPAIUQIWKA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 3
- HQRHFUYMGCHHJS-LURJTMIESA-N Gly-Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HQRHFUYMGCHHJS-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- KMSGYZQRXPUKGI-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O KMSGYZQRXPUKGI-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- INLIXXRWNUKVCF-JTQLQIEISA-N Gly-Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 INLIXXRWNUKVCF-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N Gly-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- GJHWILMUOANXTG-WPRPVWTQSA-N Gly-Val-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GJHWILMUOANXTG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 3
- HVCRQRQPIIRNLY-IUCAKERBSA-N His-Gln-Gly Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N HVCRQRQPIIRNLY-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 3
- HZWWOGWOBQBETJ-CUJWVEQBSA-N His-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O HZWWOGWOBQBETJ-CUJWVEQBSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XLCZWMJPVGRWHJ-KQXIARHKSA-N Ile-Glu-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N XLCZWMJPVGRWHJ-KQXIARHKSA-N 0.000 description 3
- IITVUURPOYGCTD-NAKRPEOUSA-N Ile-Pro-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IITVUURPOYGCTD-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 3
- WLRJHVNFGAOYPS-HJPIBITLSA-N Ile-Ser-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N WLRJHVNFGAOYPS-HJPIBITLSA-N 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 3
- AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- INCJJHQRZGQLFC-KBPBESRZSA-N Leu-Phe-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(O)=O INCJJHQRZGQLFC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 3
- SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N Leu-Ser-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N 0.000 description 3
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 3
- GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N Lys-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- QLFAPXUXEBAWEK-NHCYSSNCSA-N Lys-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QLFAPXUXEBAWEK-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 3
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N N-L-methionyl-L-tyrosine Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- FGWUALWGCZJQDJ-URLPEUOOSA-N Phe-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FGWUALWGCZJQDJ-URLPEUOOSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- QEWBZBLXDKIQPS-STQMWFEESA-N Pro-Gly-Tyr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O QEWBZBLXDKIQPS-STQMWFEESA-N 0.000 description 3
- FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- HWLKHNDRXWTFTN-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Cys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O HWLKHNDRXWTFTN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- NNFMANHDYSVNIO-DCAQKATOSA-N Ser-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NNFMANHDYSVNIO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- ADJDNJCSPNFFPI-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO ADJDNJCSPNFFPI-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N Ser-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 3
- RXUOAOOZIWABBW-XGEHTFHBSA-N Ser-Thr-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N RXUOAOOZIWABBW-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N Ser-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- GRIUMVXCJDKVPI-IZPVPAKOSA-N Thr-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GRIUMVXCJDKVPI-IZPVPAKOSA-N 0.000 description 3
- VEYXZZGMIBKXCN-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N VEYXZZGMIBKXCN-UBHSHLNASA-N 0.000 description 3
- QOIKZODVIPOPDD-AVGNSLFASA-N Tyr-Cys-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QOIKZODVIPOPDD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- AZGZDDNKFFUDEH-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AZGZDDNKFFUDEH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- AXWBYOVVDRBOGU-SIUGBPQLSA-N Tyr-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N AXWBYOVVDRBOGU-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 3
- FJBCEFPCVPHPPM-STECZYCISA-N Tyr-Ile-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FJBCEFPCVPHPPM-STECZYCISA-N 0.000 description 3
- JHDZONWZTCKTJR-KJEVXHAQSA-N Tyr-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JHDZONWZTCKTJR-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 3
- SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 3
- UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N Val-Ser-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 3
- SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N Val-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 SDHZOOIGIUEPDY-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 3
- JSOXWWFKRJKTMT-WOPDTQHZSA-N Val-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N JSOXWWFKRJKTMT-WOPDTQHZSA-N 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 108010009111 arginyl-glycyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 3
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 3
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 230000036316 preload Effects 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 3,3'-diaminobenzidine Chemical compound C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 HSTOKWSFWGCZMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 2
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- WCBVQNZTOKJWJS-ACZMJKKPSA-N Ala-Cys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WCBVQNZTOKJWJS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- MQIGTEQXYCRLGK-BQBZGAKWSA-N Ala-Gly-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O MQIGTEQXYCRLGK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- MDNAVFBZPROEHO-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Val Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(C)N)CCCCN MDNAVFBZPROEHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MAZZQZWCCYJQGZ-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MAZZQZWCCYJQGZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N Ala-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N 0.000 description 2
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 2
- 206010073478 Anaplastic large-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101100067974 Arabidopsis thaliana POP2 gene Proteins 0.000 description 2
- OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- QBQVKUNBCAFXSV-ULQDDVLXSA-N Arg-Lys-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QBQVKUNBCAFXSV-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- XYOVHPDDWCEUDY-CIUDSAMLSA-N Asn-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XYOVHPDDWCEUDY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- GXMSVVBIAMWMKO-BQBZGAKWSA-N Asn-Arg-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N GXMSVVBIAMWMKO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- RBOBTTLFPRSXKZ-BZSNNMDCSA-N Asn-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RBOBTTLFPRSXKZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- VWADICJNCPFKJS-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VWADICJNCPFKJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- PUUPMDXIHCOPJU-HJGDQZAQSA-N Asn-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O PUUPMDXIHCOPJU-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- PQKSVQSMTHPRIB-ZKWXMUAHSA-N Asn-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PQKSVQSMTHPRIB-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- YNQIDCRRTWGHJD-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O YNQIDCRRTWGHJD-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- KNMRXHIAVXHCLW-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asn-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)C(=O)O KNMRXHIAVXHCLW-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- HSWYMWGDMPLTTH-FXQIFTODSA-N Asp-Glu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HSWYMWGDMPLTTH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- VNXQRBXEQXLERQ-CIUDSAMLSA-N Asp-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VNXQRBXEQXLERQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N Asp-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O YIDFBWRHIYOYAA-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- VIRYODQIWJNWNU-NRPADANISA-N Cys-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VIRYODQIWJNWNU-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 2
- WUAYFMZULZDSLB-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O WUAYFMZULZDSLB-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- WQWMZOIPXWSZNE-WDSKDSINSA-N Gln-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O WQWMZOIPXWSZNE-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- KZEUVLLVULIPNX-GUBZILKMSA-N Gln-Asp-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N KZEUVLLVULIPNX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- FGYPOQPQTUNESW-IUCAKERBSA-N Gln-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N FGYPOQPQTUNESW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- IULKWYSYZSURJK-AVGNSLFASA-N Gln-Leu-Lys Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O IULKWYSYZSURJK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- VXAIXLOYBPMZPT-JBACZVJFSA-N Gln-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N VXAIXLOYBPMZPT-JBACZVJFSA-N 0.000 description 2
- JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- AVZHGSCDKIQZPQ-CIUDSAMLSA-N Glu-Arg-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(O)=O AVZHGSCDKIQZPQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- XXCDTYBVGMPIOA-FXQIFTODSA-N Glu-Asp-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XXCDTYBVGMPIOA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- CKOFNWCLWRYUHK-XHNCKOQMSA-N Glu-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O CKOFNWCLWRYUHK-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 2
- CLROYXHHUZELFX-FXQIFTODSA-N Glu-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLROYXHHUZELFX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N Glu-Ile-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 2
- DMYACXMQUABZIQ-NRPADANISA-N Glu-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DMYACXMQUABZIQ-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- ZALGPUWUVHOGAE-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZALGPUWUVHOGAE-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- QIZJOTQTCAGKPU-KWQFWETISA-N Gly-Ala-Tyr Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QIZJOTQTCAGKPU-KWQFWETISA-N 0.000 description 2
- JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N Gly-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN JRDYDYXZKFNNRQ-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- PABFFPWEJMEVEC-JGVFFNPUSA-N Gly-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)CN)C(=O)O PABFFPWEJMEVEC-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 2
- BIRKKBCSAIHDDF-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O BIRKKBCSAIHDDF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NNCSJUBVFBDDLC-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VBOBNHSVQKKTOT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ZZJVYSAQQMDIRD-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-His Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O ZZJVYSAQQMDIRD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- POJJAZJHBGXEGM-YUMQZZPRSA-N Gly-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN POJJAZJHBGXEGM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N Gly-Val-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SYOJVRNQCXYEOV-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 2
- YGHSQRJSHKYUJY-SCZZXKLOSA-N Gly-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN YGHSQRJSHKYUJY-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- SKYULSWNBYAQMG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SKYULSWNBYAQMG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- BCZFOHDMCDXPDA-BZSNNMDCSA-N His-Lys-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O BCZFOHDMCDXPDA-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- TVMNTHXFRSXZGR-IHRRRGAJSA-N His-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O TVMNTHXFRSXZGR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- RXKFKJVJVHLRIE-XIRDDKMYSA-N His-Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N RXKFKJVJVHLRIE-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 2
- 101100118549 Homo sapiens EGFR gene Proteins 0.000 description 2
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000589301 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 2
- 101000874179 Homo sapiens Syndecan-1 Proteins 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- RWYCOSAAAJBJQL-KCTSRDHCSA-N Ile-Gly-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N RWYCOSAAAJBJQL-KCTSRDHCSA-N 0.000 description 2
- NZGTYCMLUGYMCV-XUXIUFHCSA-N Ile-Lys-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N NZGTYCMLUGYMCV-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 2
- QQFSKBMCAKWHLG-UHFFFAOYSA-N Ile-Phe-Pro-Pro Chemical compound C1CCC(C(=O)N2C(CCC2)C(O)=O)N1C(=O)C(NC(=O)C(N)C(C)CC)CC1=CC=CC=C1 QQFSKBMCAKWHLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 2
- FXJLRZFMKGHYJP-CFMVVWHZSA-N Ile-Tyr-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N FXJLRZFMKGHYJP-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 2
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 2
- 208000032004 Large-Cell Anaplastic Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N Leu-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N 0.000 description 2
- DBVWMYGBVFCRBE-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DBVWMYGBVFCRBE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IAJFFZORSWOZPQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- RZXLZBIUTDQHJQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RZXLZBIUTDQHJQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- VCHVSKNMTXWIIP-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VCHVSKNMTXWIIP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N Leu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N Leu-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N 0.000 description 2
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MPGHETGWWWUHPY-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN MPGHETGWWWUHPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N Lys-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N Lys-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QUCDKEKDPYISNX-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- MLLKLNYPZRDIQG-GUBZILKMSA-N Lys-Cys-Gln Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N MLLKLNYPZRDIQG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N Lys-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- FGMHXLULNHTPID-KKUMJFAQSA-N Lys-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CN=CN1 FGMHXLULNHTPID-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N Lys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- CTJUSALVKAWFFU-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CTJUSALVKAWFFU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- SQXZLVXQXWILKW-KKUMJFAQSA-N Lys-Ser-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SQXZLVXQXWILKW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- SUZVLFWOCKHWET-CQDKDKBSSA-N Lys-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SUZVLFWOCKHWET-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- IEIHKHYMBIYQTH-YESZJQIVSA-N Lys-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O IEIHKHYMBIYQTH-YESZJQIVSA-N 0.000 description 2
- XABXVVSWUVCZST-GVXVVHGQSA-N Lys-Val-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XABXVVSWUVCZST-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- RIPJMCFGQHGHNP-RHYQMDGZSA-N Lys-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O RIPJMCFGQHGHNP-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- HXSUFWQYLPKEHF-IHRRRGAJSA-N Phe-Asn-Arg Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N HXSUFWQYLPKEHF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- JOXIIFVCSATTDH-IHPCNDPISA-N Phe-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)N JOXIIFVCSATTDH-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- RVRRHFPCEOVRKQ-KKUMJFAQSA-N Phe-His-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N RVRRHFPCEOVRKQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- BWTKUQPNOMMKMA-FIRPJDEBSA-N Phe-Ile-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BWTKUQPNOMMKMA-FIRPJDEBSA-N 0.000 description 2
- WKLMCMXFMQEKCX-SLFFLAALSA-N Phe-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)[C@H](CC3=CC=CC=C3)N)C(=O)O WKLMCMXFMQEKCX-SLFFLAALSA-N 0.000 description 2
- MMPBPRXOFJNCCN-ZEWNOJEFSA-N Phe-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MMPBPRXOFJNCCN-ZEWNOJEFSA-N 0.000 description 2
- 229920000436 Poly(lactide-co-glycolide)-block-poly(ethylene glycol)-block-poly(lactide-co-glycolide) Polymers 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MGDFPGCFVJFITQ-CIUDSAMLSA-N Pro-Glu-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MGDFPGCFVJFITQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N Pro-Leu-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VTFXTWDFPTWNJY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- RMODQFBNDDENCP-IHRRRGAJSA-N Pro-Lys-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RMODQFBNDDENCP-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 101100123851 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) HER1 gene Proteins 0.000 description 2
- QGMLKFGTGXWAHF-IHRRRGAJSA-N Ser-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QGMLKFGTGXWAHF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- FTVRVZNYIYWJGB-ACZMJKKPSA-N Ser-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FTVRVZNYIYWJGB-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- GHPQVUYZQQGEDA-BIIVOSGPSA-N Ser-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O GHPQVUYZQQGEDA-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- ZOHGLPQGEHSLPD-FXQIFTODSA-N Ser-Gln-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZOHGLPQGEHSLPD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- HJEBZBMOTCQYDN-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HJEBZBMOTCQYDN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- GZBKRJVCRMZAST-XKBZYTNZSA-N Ser-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GZBKRJVCRMZAST-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- BPMRXBZYPGYPJN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BPMRXBZYPGYPJN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- QBUWQRKEHJXTOP-DCAQKATOSA-N Ser-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QBUWQRKEHJXTOP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- HEUVHBXOVZONPU-BJDJZHNGSA-N Ser-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HEUVHBXOVZONPU-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- PPNPDKGQRFSCAC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPNPDKGQRFSCAC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N Ser-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- FZXOPYUEQGDGMS-ACZMJKKPSA-N Ser-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O FZXOPYUEQGDGMS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- CUXJENOFJXOSOZ-BIIVOSGPSA-N Ser-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O CUXJENOFJXOSOZ-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- VVKVHAOOUGNDPJ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VVKVHAOOUGNDPJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- YEDSOSIKVUMIJE-DCAQKATOSA-N Ser-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YEDSOSIKVUMIJE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 2
- DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWYAUVCQDTZIJI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 2
- GKWNLDNXMMLRMC-GLLZPBPUSA-N Thr-Glu-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N)O GKWNLDNXMMLRMC-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 2
- CYVQBKQYQGEELV-NKIYYHGXSA-N Thr-His-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N)O CYVQBKQYQGEELV-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 2
- CYCGARJWIQWPQM-YJRXYDGGSA-N Thr-Tyr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CYCGARJWIQWPQM-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- NLWCSMOXNKBRLC-WDSOQIARSA-N Trp-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NLWCSMOXNKBRLC-WDSOQIARSA-N 0.000 description 2
- PKZIWSHDJYIPRH-JBACZVJFSA-N Trp-Tyr-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O PKZIWSHDJYIPRH-JBACZVJFSA-N 0.000 description 2
- IEESWNWYUOETOT-BVSLBCMMSA-N Trp-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O IEESWNWYUOETOT-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 2
- SEFNTZYRPGBDCY-IHRRRGAJSA-N Tyr-Arg-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O SEFNTZYRPGBDCY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- SMLCYZYQFRTLCO-UWJYBYFXSA-N Tyr-Cys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMLCYZYQFRTLCO-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 2
- QHEGAOPHISYNDF-XDTLVQLUSA-N Tyr-Gln-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N QHEGAOPHISYNDF-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 2
- SLCSPPCQWUHPPO-JYJNAYRXSA-N Tyr-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 SLCSPPCQWUHPPO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N Tyr-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N 0.000 description 2
- NKUGCYDFQKFVOJ-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NKUGCYDFQKFVOJ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- UPODKYBYUBTWSV-BZSNNMDCSA-N Tyr-Phe-Cys Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 UPODKYBYUBTWSV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- FASACHWGQBNSRO-ZEWNOJEFSA-N Tyr-Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N FASACHWGQBNSRO-ZEWNOJEFSA-N 0.000 description 2
- AUZADXNWQMBZOO-JYJNAYRXSA-N Tyr-Pro-Arg Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AUZADXNWQMBZOO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N Tyr-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O ANHVRCNNGJMJNG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- ZLFHAAGHGQBQQN-AEJSXWLSSA-N Val-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ZLFHAAGHGQBQQN-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 2
- LIQJSDDOULTANC-QSFUFRPTSA-N Val-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LIQJSDDOULTANC-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 2
- BMGOFDMKDVVGJG-NHCYSSNCSA-N Val-Asp-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BMGOFDMKDVVGJG-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- LHADRQBREKTRLR-DCAQKATOSA-N Val-Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LHADRQBREKTRLR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- VFOHXOLPLACADK-GVXVVHGQSA-N Val-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VFOHXOLPLACADK-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- OXVPMZVGCAPFIG-BQFCYCMXSA-N Val-Gln-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N OXVPMZVGCAPFIG-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 2
- WDIGUPHXPBMODF-UMNHJUIQSA-N Val-Glu-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N WDIGUPHXPBMODF-UMNHJUIQSA-N 0.000 description 2
- LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N LYERIXUFCYVFFX-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- RWOGENDAOGMHLX-DCAQKATOSA-N Val-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C(C)C)N RWOGENDAOGMHLX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- CKTMJBPRVQWPHU-JSGCOSHPSA-N Val-Phe-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)O)N CKTMJBPRVQWPHU-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- KRAHMIJVUPUOTQ-DCAQKATOSA-N Val-Ser-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N KRAHMIJVUPUOTQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- TVGWMCTYUFBXAP-QTKMDUPCSA-N Val-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O TVGWMCTYUFBXAP-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 2
- LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(O)=O LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- GVNLOVJNNDZUHS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GVNLOVJNNDZUHS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- QPJSIBAOZBVELU-BPNCWPANSA-N Val-Tyr-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N QPJSIBAOZBVELU-BPNCWPANSA-N 0.000 description 2
- ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N Val-Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ZLNYBMWGPOKSLW-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 2
- ZHWZDZFWBXWPDW-GUBZILKMSA-N Val-Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O ZHWZDZFWBXWPDW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 108010081404 acein-2 Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 2
- 230000009227 antibody-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 2
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 2
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 2
- 108010001064 glycyl-glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010010096 glycyl-glycyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 108010023260 immunoglobulin Fv Proteins 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 2
- 108010087846 prolyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 2
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010079202 tyrosyl-alanyl-cysteine Proteins 0.000 description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- IGXNPQWXIRIGBF-KEOOTSPTSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IGXNPQWXIRIGBF-KEOOTSPTSA-N 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N (R)-lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC[C@@H]1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTCSFFGLRQDZDE-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-2-phenylpropanoate Chemical compound OC(=O)C(N)(C)C1=CC=CC=C1 HTCSFFGLRQDZDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XQGIRPGAVLFKBJ-CIUDSAMLSA-N Ala-Asn-Lys Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O XQGIRPGAVLFKBJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- IFKQPMZRDQZSHI-GHCJXIJMSA-N Ala-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IFKQPMZRDQZSHI-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- DPNZTBKGAUAZQU-DLOVCJGASA-N Ala-Leu-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N DPNZTBKGAUAZQU-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- MSWSRLGNLKHDEI-ACZMJKKPSA-N Ala-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MSWSRLGNLKHDEI-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MMLHRUJLOUSRJX-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MMLHRUJLOUSRJX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SYIFFFHSXBNPMC-UWJYBYFXSA-N Ala-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N SYIFFFHSXBNPMC-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N Ala-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C)N IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- 108010011170 Ala-Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly Proteins 0.000 description 1
- QDGMZAOSMNGBLP-MRFFXTKBSA-N Ala-Trp-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)N QDGMZAOSMNGBLP-MRFFXTKBSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102100038778 Amphiregulin Human genes 0.000 description 1
- 108010033760 Amphiregulin Proteins 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OZNSCVPYWZRQPY-CIUDSAMLSA-N Arg-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OZNSCVPYWZRQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NKNILFJYKKHBKE-WPRPVWTQSA-N Arg-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NKNILFJYKKHBKE-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- JEXPNDORFYHJTM-IHRRRGAJSA-N Arg-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JEXPNDORFYHJTM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QLSRIZIDQXDQHK-RCWTZXSCSA-N Arg-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QLSRIZIDQXDQHK-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- HYQYLOSCICEYTR-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HYQYLOSCICEYTR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MJIJBEYEHBKTIM-BYULHYEWSA-N Asn-Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MJIJBEYEHBKTIM-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- VZNOVQKGJQJOCS-SRVKXCTJSA-N Asp-Asp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VZNOVQKGJQJOCS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- OMMIEVATLAGRCK-BYPYZUCNSA-N Asp-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O OMMIEVATLAGRCK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N Asp-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- RTXQQDVBACBSCW-CFMVVWHZSA-N Asp-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RTXQQDVBACBSCW-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WNGZKSVJFDZICU-XIRDDKMYSA-N Asp-Leu-Trp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N WNGZKSVJFDZICU-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- USNJAPJZSGTTPX-XVSYOHENSA-N Asp-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O USNJAPJZSGTTPX-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- MVRGBQGZSDJBSM-GMOBBJLQSA-N Asp-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC(=O)O)N MVRGBQGZSDJBSM-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- XQFLFQWOBXPMHW-NHCYSSNCSA-N Asp-Val-His Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)O XQFLFQWOBXPMHW-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 102400001242 Betacellulin Human genes 0.000 description 1
- 101800001382 Betacellulin Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021580 Cobalt(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- HHABWQIFXZPZCK-ACZMJKKPSA-N Cys-Gln-Ser Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N HHABWQIFXZPZCK-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150039808 Egfr gene Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010008177 Fd immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- QFJPFPCSXOXMKI-BPUTZDHNSA-N Gln-Gln-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N QFJPFPCSXOXMKI-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- ORYMMTRPKVTGSJ-XVKPBYJWSA-N Gln-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ORYMMTRPKVTGSJ-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- XZLLTYBONVKGLO-SDDRHHMPSA-N Gln-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O XZLLTYBONVKGLO-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- MSHXWFKYXJTLEZ-CIUDSAMLSA-N Gln-Met-Asn Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MSHXWFKYXJTLEZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QBEWLBKBGXVVPD-RYUDHWBXSA-N Gln-Phe-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N QBEWLBKBGXVVPD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- HMIXCETWRYDVMO-GUBZILKMSA-N Gln-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HMIXCETWRYDVMO-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UXXIVIQGOODKQC-NUMRIWBASA-N Gln-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O UXXIVIQGOODKQC-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- ARYKRXHBIPLULY-XKBZYTNZSA-N Gln-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ARYKRXHBIPLULY-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- IESFZVCAVACGPH-PEFMBERDSA-N Glu-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O IESFZVCAVACGPH-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N Glu-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N XTZDZAXYPDISRR-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- DXVOKNVIKORTHQ-GUBZILKMSA-N Glu-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DXVOKNVIKORTHQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- BFEZQZKEPRKKHV-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O BFEZQZKEPRKKHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SYAYROHMAIHWFB-KBIXCLLPSA-N Glu-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O SYAYROHMAIHWFB-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N Gly-Arg-Phe Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KRRMJKMGWWXWDW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N DHDOADIPGZTAHT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N Gly-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN UTYGDAHJBBDPBA-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- CQMFNTVQVLQRLT-JHEQGTHGSA-N Gly-Thr-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O CQMFNTVQVLQRLT-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N Gly-Thr-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- NGBGZCUWFVVJKC-IRXDYDNUSA-N Gly-Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NGBGZCUWFVVJKC-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102100033067 Growth factor receptor-bound protein 2 Human genes 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 108010036972 HLA-A11 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010014597 HLA-B44 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 101800001649 Heparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102400001369 Heparin-binding EGF-like growth factor Human genes 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZSKJIISDJXJQPV-BZSNNMDCSA-N His-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 ZSKJIISDJXJQPV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- TTYKEFZRLKQTHH-MELADBBJSA-N His-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O TTYKEFZRLKQTHH-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- 101000871017 Homo sapiens Growth factor receptor-bound protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N Ile-Lys-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- RQJUKVXWAKJDBW-SVSWQMSJSA-N Ile-Ser-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N RQJUKVXWAKJDBW-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- NURNJECQNNCRBK-FLBSBUHZSA-N Ile-Thr-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NURNJECQNNCRBK-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- GNXGAVNTVNOCLL-SIUGBPQLSA-N Ile-Tyr-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N GNXGAVNTVNOCLL-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 1
- RMJWFINHACYKJI-SIUGBPQLSA-N Ile-Tyr-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N RMJWFINHACYKJI-SIUGBPQLSA-N 0.000 description 1
- UYODHPPSCXBNCS-XUXIUFHCSA-N Ile-Val-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C UYODHPPSCXBNCS-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- WSGXUIQTEZDVHJ-GARJFASQSA-N Leu-Ala-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O WSGXUIQTEZDVHJ-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- NRFGTHFONZYFNY-MGHWNKPDSA-N Leu-Ile-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NRFGTHFONZYFNY-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- KYIIALJHAOIAHF-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 KYIIALJHAOIAHF-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SXOFUVGLPHCPRQ-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Cys Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O SXOFUVGLPHCPRQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- FLCMXEFCTLXBTL-DCAQKATOSA-N Lys-Asp-Arg Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N FLCMXEFCTLXBTL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NRQRKMYZONPCTM-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NRQRKMYZONPCTM-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZJWIXBZTAAJERF-IHRRRGAJSA-N Lys-Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N ZJWIXBZTAAJERF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- IEVXCWPVBYCJRZ-IXOXFDKPSA-N Lys-Thr-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IEVXCWPVBYCJRZ-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- CULGJGUDIJATIP-STQMWFEESA-N Met-Tyr-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CULGJGUDIJATIP-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 230000006051 NK cell activation Effects 0.000 description 1
- 102000014413 Neuregulin Human genes 0.000 description 1
- 108050003475 Neuregulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 1
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N Phe-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BKWJQWJPZMUWEG-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- SEPNOAFMZLLCEW-UBHSHLNASA-N Phe-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O SEPNOAFMZLLCEW-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- AGYXCMYVTBYGCT-ULQDDVLXSA-N Phe-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AGYXCMYVTBYGCT-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- PPHFTNABKQRAJV-JYJNAYRXSA-N Phe-His-Gln Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N PPHFTNABKQRAJV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- NAOVYENZCWFBDG-BZSNNMDCSA-N Phe-His-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 NAOVYENZCWFBDG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- YCCUXNNKXDGMAM-KKUMJFAQSA-N Phe-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YCCUXNNKXDGMAM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- QTDBZORPVYTRJU-KKXDTOCCSA-N Phe-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O QTDBZORPVYTRJU-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002560 Polyethylene Glycol 3000 Polymers 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- TUYWCHPXKQTISF-LPEHRKFASA-N Pro-Cys-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O TUYWCHPXKQTISF-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- DYJTXTCEXMCPBF-UFYCRDLUSA-N Pro-Tyr-Phe Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=CC=C3)C(=O)O DYJTXTCEXMCPBF-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000508269 Psidium Species 0.000 description 1
- 108010052388 RGES peptide Proteins 0.000 description 1
- 102100029986 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Human genes 0.000 description 1
- 101710100969 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100029981 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710100963 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-4 Proteins 0.000 description 1
- JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N Ribitol Natural products OCC(C)C(O)C(O)CO JVWLUVNSQYXYBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YQHZVYJAGWMHES-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UGJRQLURDVGULT-LKXGYXEUSA-N Ser-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UGJRQLURDVGULT-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N Ser-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- KNCJWSPMTFFJII-ZLUOBGJFSA-N Ser-Cys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KNCJWSPMTFFJII-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BRGQQXQKPUCUJQ-KBIXCLLPSA-N Ser-Glu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BRGQQXQKPUCUJQ-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- MUARUIBTKQJKFY-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MUARUIBTKQJKFY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CO OZPDGESCTGGNAD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N Ser-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- AXKJPUBALUNJEO-UBHSHLNASA-N Ser-Trp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AXKJPUBALUNJEO-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- LLSLRQOEAFCZLW-NRPADANISA-N Ser-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LLSLRQOEAFCZLW-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HSWXBJCBYSWBPT-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(O)=O HSWXBJCBYSWBPT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 208000009359 Sezary Syndrome Diseases 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101800001707 Spacer peptide Proteins 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N Stachyose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O2)O1 UQZIYBXSHAGNOE-USOSMYMVSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101150109894 TGFA gene Proteins 0.000 description 1
- XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- VOGXLRKCWFLJBY-HSHDSVGOSA-N Thr-Arg-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O VOGXLRKCWFLJBY-HSHDSVGOSA-N 0.000 description 1
- KWQBJOUOSNJDRR-XAVMHZPKSA-N Thr-Cys-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O KWQBJOUOSNJDRR-XAVMHZPKSA-N 0.000 description 1
- DXNUZQGVOMCGNS-SWRJLBSHSA-N Thr-Gln-Trp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N)O DXNUZQGVOMCGNS-SWRJLBSHSA-N 0.000 description 1
- OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N Thr-Glu-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N)O OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- ONNSECRQFSTMCC-XKBZYTNZSA-N Thr-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ONNSECRQFSTMCC-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- IQPWNQRRAJHOKV-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Lys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IQPWNQRRAJHOKV-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N Thr-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WPSKTVVMQCXPRO-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- FBQHKSPOIAFUEI-OWLDWWDNSA-N Thr-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FBQHKSPOIAFUEI-OWLDWWDNSA-N 0.000 description 1
- YOPQYBJJNSIQGZ-JNPHEJMOSA-N Thr-Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 YOPQYBJJNSIQGZ-JNPHEJMOSA-N 0.000 description 1
- QNXZCKMXHPULME-ZNSHCXBVSA-N Thr-Val-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O QNXZCKMXHPULME-ZNSHCXBVSA-N 0.000 description 1
- BPGDJSUFQKWUBK-KJEVXHAQSA-N Thr-Val-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BPGDJSUFQKWUBK-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N Thr-Val-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VYVBSMCZNHOZGD-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N Trp-Ala-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- GFHYISDTIWZUSU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O GFHYISDTIWZUSU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JJNXZIPLIXIGBX-HJPIBITLSA-N Tyr-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JJNXZIPLIXIGBX-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- UMSZZGTXGKHTFJ-SRVKXCTJSA-N Tyr-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 UMSZZGTXGKHTFJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CLEGSEJVGBYZBJ-MEYUZBJRSA-N Tyr-Thr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CLEGSEJVGBYZBJ-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- HNWQUBBOBKSFQV-AVGNSLFASA-N Val-Arg-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N HNWQUBBOBKSFQV-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- BYOHPUZJVXWHAE-BYULHYEWSA-N Val-Asn-Asn Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N BYOHPUZJVXWHAE-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- HZYOWMGWKKRMBZ-BYULHYEWSA-N Val-Asp-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N HZYOWMGWKKRMBZ-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- DJEVQCWNMQOABE-RCOVLWMOSA-N Val-Gly-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N DJEVQCWNMQOABE-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- VCIYTVOBLZHFSC-XHSDSOJGSA-N Val-Phe-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N VCIYTVOBLZHFSC-XHSDSOJGSA-N 0.000 description 1
- UJMCYJKPDFQLHX-XGEHTFHBSA-N Val-Ser-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O UJMCYJKPDFQLHX-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- PDDJTOSAVNRJRH-UNQGMJICSA-N Val-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O PDDJTOSAVNRJRH-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- SVLAAUGFIHSJPK-JYJNAYRXSA-N Val-Trp-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N SVLAAUGFIHSJPK-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- JVGDAEKKZKKZFO-RCWTZXSCSA-N Val-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O JVGDAEKKZKKZFO-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- RRNJROHIFSLGRA-JEDNCBNOSA-N acetic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O RRNJROHIFSLGRA-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 108091005764 adaptor proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035181 adaptor proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 description 1
- 108010045023 alanyl-prolyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 229910001508 alkali metal halide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008045 alkali metal halides Chemical class 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N alpha-Lipoic acid Natural products OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011230 antibody-based therapy Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 1
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 1
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005890 cell-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229940107161 cholesterol Drugs 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000006854 communication Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 150000003999 cyclitols Chemical class 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 108010066198 glycyl-leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000045108 human EGFR Human genes 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 229960002163 hydrogen peroxide Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 description 1
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N lactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N 0.000 description 1
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000000966 lung oat cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 229960005357 lysine acetate Drugs 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 description 1
- 230000010309 neoplastic transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002895 organic esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035778 pathophysiological process Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940067107 phenylethyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N phosphonotyrosine Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 230000037048 polymerization activity Effects 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 102000027240 receptors by ligand Human genes 0.000 description 1
- 108091008562 receptors by ligand Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003340 retarding agent Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- 238000002702 ribosome display Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940046307 sodium thioglycolate Drugs 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N stachyose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)O)O2)O)O1 UQZIYBXSHAGNOE-XNSRJBNMSA-N 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940035024 thioglycerol Drugs 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000012929 tonicity agent Substances 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 229960000281 trometamol Drugs 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 108010009962 valyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выделенной клетке-естественному киллеру (NK-клетке) человека в криоконсервированном состоянии. Указанная клетка предназначена для получения NK-клетки, способной проявлять цитотоксическое действие в отношении клетки-мишени, и предварительно нагружена перед замораживанием конструкцией антитела, содержащей первый связывающий домен, связывающийся с антигеном рецептора NK-клетки на клеточной поверхности иммунологической эффекторной клетки, и второй связывающий домен, связывающийся с антигеном клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени. Указанные первый и второй связывающие домены содержат три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи. Кроме того, настоящее изобретение также относится к способам получения NK-клеток, фармацевтической композиции и способу лечения опухолевого заболевания. Настоящее изобретение позволяет поддерживать конструкцию антитела в связанном с поверхностью клетки состоянии даже во время и после нахождения NK-клетки в криоконсервированном состоянии. 5 н. и 24 з.п. ф-лы, 9 ил., 6 табл., 4 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение:
В рамках настоящего изобретения предложены выделенные клетки-естественные киллеры (NK-клетки) человека в криоконсервированном состоянии, которые были предварительно нагружены перед замораживанием конструкцией антитела, указанная конструкция антитела содержит по меньшей мере первый связывающий домен, связывающийся с антигеном рецептора на клеточной поверхности иммунологической эффекторной клетки, в особенности, с тем, который экспрессируется на NK-клетках, и второй связывающий домен, связывающийся с антигеном клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени.
Уровень техники
Клетки-естественные киллеры (NK-клетки) представляют собой мощные цитотоксические иммунные эффекторные клетки врожденной иммунной системы. Они способны распознавать и уничтожать опухолевые клетки, а также клетки, инфицированные вирусами или бактериями. NK-клетки могут вызывать антиген-независимый иммунный ответ против злокачественных клеток. Более того, в дополнение к NK-клеткам, существуют другие иммунологические эффекторные клетки, например моноциты, макрофаги, нейтрофилы и т.д., которые способны убивать опухолевые клетки или клетки, инфицированные вирусами или бактериями. В целом это понимают как врожденный иммунитет.
Растущее число научных отчетов и клинических исследований демонстрирует многообещающие и сильные противоопухолевые эффекты при применении иммунотерапии на основе NK-клеток. В настоящее время исследуют различные подходы с целью увеличения количества и функции NK-клеток. В одном из указанных подходов используют конструкции би- или мультиспецифичных антител с целью повышения специфичности эндогенных NK-клеток путем перекрестного связывания их с соответствующими клетками-мишенями. Чтобы найти применение такой синергии, адоптивную клеточную терапию в сочетании с терапией на основе антител комбинируют при различных показаниях. Различные источники NK-клеток для адоптивного переноса находятся в стадии оценки и включают алло генные гаплоидентичные NK-клетки, которые подвергли краткосрочным или долгосрочным активации или размножению, NK-клетки пуповины, которые также выращивают/активируют в определенных условиях, клеточные линии NK-клеток или полученные из стволовых клеток/дифференцированные NK-клетки. Все источники теоретически также могут быть применены для создания NK-клеток с химерным антигенным рецептором (CAR-NK-клеток), которые получены за счет нового типа генетической модификации ленти- или ретровирусами с получением стабильных антиген-специфичных NK-клеток. Первые примеры включают подход на основе CD19-CAR-NK-клеток, который в настоящее время тестируют на пациентах с неходжкинской лимфомой (НХЛ, NHL).
Однако при комбинировании конструкций антител с любым из вышеуказанных источников NK-клеток для адоптивного переноса всегда необходимо получить клетки в месте применения, то есть в больнице, в которой осуществляют терапию соответствующего пациента, и, впоследствии, осуществить совместное введение указанному пациенту требуемой дозы соответствующих конструкций антител. Помимо того факта, что это может быть логистической проблемой для большинства больниц, следует далее отметить, что все комплексы работ, требуемые для подготовки клеток к введению, должны выполняться в соответствии со строго контролируемыми протоколами, чтобы исключить любые проблемы, которые можно предотвратить, что увеличивает такой риск.
Соответственно, существует потребность в средствах и способах для упрощения такой терапии, чтобы обеспечить ее применимость для большей группы пациентов, особенно в неспециализированных больницах или медицинских центрах.
На Фигурах показано:
Фигура 1: 4-часовой анализ цитотоксичности с высвобождением кальцеина на клетках-мишенях MM.1S (А) или DK-MG (В), NK-клетки в качестве эффекторных клеток с указанным соотношением Е:Т, которые были предварительно нагружены 10 мкг/мл указанных антител и отмыты (с) или не отмыты (без) перед одним циклом замораживания/размораживания. В качестве контроля те же самые NK-клетки не были предварительно нагружены, но отмыты и подвергнуты одному циклу замораживания/размораживания, и указанное антитело было добавлено в анализ цитотоксичности (свежие; сплошные серые ромбы).
Фигура 2: Связывание различных антител к CD16 с вариантами антигена CD16 в виде покрытия, проанализированное с помощью иммуноферментного анализа (ИФА (ELISA)). 96-луночные планшеты для ИФА (ELISA) покрывали рекомбинантными вариантами антигена, показанными в легенде к панели А. Различные антитела, показанные в (А)-(D), серийно разводили и инкубировали на планшетах в указанном диапазоне концентраций. Связанные антитела выявляли с помощью анти-His-HRP в (А)-(С) или Белка L-HRP. Реакции субстрата тетраметилбензидина, ТМБ (ТМВ) измеряли при 450 нм (Ext (450 нм)). Кривые связывания были подобраны с применением четырехпараметрической логистической (4PL) модели кривой зависимости логарифма (агониста) от ответа - переменный наклон в Graphpad Prism.
Фигура 3: Реактивность различных антител scFv к CD16 или контрольных scFv или моноклональных антител с рекомбинантными вариантами антигена CD16 или контрольным антигеном рецептора эпидермального фактора роста, РЭФР (EGFR), экспрессируемым на клетках яичника китайского хомячка (СНО) с трансмембранным доменом РЭФР (EGFR) (ТМ) или гликозилфосфатидилинозитол (ГФИ (CPI))-якорем.
Фигура 4: Выравнивание последовательностей внеклеточных доменов CD16A человека и яванского макака и вариантов CD16B человека, применяемых в качестве рекомбинантных антигенов в экспериментах, обобщенных в Таблице 3. Вариации в последовательности внеклеточного домена (ECD) CD16A яванского макака выделены серым цветом. Для выравнивания применяли инструмент множественного выравнивания последовательностей CLUSTAL О (1.2.4).
Фигура 5: Связывание различных антител к CD16 с вариантами антигена CD16 после разделения с помощью электрофорез белков в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-ΠΑΑΓ (SDS-PAGE)) и вестерн-блоттинга. 2 мкг рекомбинантного белка антигена на дорожку загружали, разделяли с помощью SDS-ΠΑΑΓ (SDS-PAGE), переносили на мембрану PVDF и инкубировали с указанными первичными и вторичными антителами. Сигналы от колориметрического проявления с субстратом 3,3'-диаминобензидином (ДАБ (DAB)) показывают отчетливое распознавание вариантов антигена CD16A и CD16B.
Фигура 6: Конкурентное связывание с CD16A различных антител scFv против CD16 с моноклональными антителами 3G8 в ИФА (ELISA). Планшеты, покрытые антигеном CD16A (48R, 158V)-mFc.67, инкубировали со смесью 1 нМ моноклональных антител 3G8 и серийных разведений различных scFv против CD16 в указанном диапазоне концентраций. CD16A-связанный 3G8 обнаруживали с помощью антитела козы против IgG мыши (H+L)-HRPO. Реакции субстрата тетраметилбензидина (ТМБ (ТМВ)) измеряли при 450 нм (Ext (450 нм)). Кривые связывания были подобраны с применением четырехпараметрической логистической (4PL) модели кривой зависимости логарифма(агониста) от ответа - переменный наклон в Graphpad Prism.
Фигура 7: Титрование scFv_CD16-1, содержащего человеческие домены Fv из клона CD16-1 (A), scFv_CD16-2, содержащего человеческие домены Fv против CD16 из клона CD16-2 (В), и scFv_3G8, содержащего мышиные домены Fv от моноклональных антител 3G8 (С) на первичных NK-клетках человека при 37°С в присутствии или в отсутствие 10 мг/мл поликлонального человеческого IgG.
Фигура 8: 4-часовой анализ цитотоксичности с высвобождением кальцеина на клетках-мишенях COLO 205 (А) или KARPAS-299 (В), NK-клетки в качестве эффекторных клеток при указанном соотношении Е:Т, которые были предварительно нагружены 10 мкг/мл указанных антител и заморожены при -80°С. В качестве контроля аликвоты тех же NK-клеток не были предварительно нагружены (без антител), но также были подвергнуты одному циклу замораживания/размораживания, и указанные антитела (scFv-IgAb_75 EpCAM/NKG2D или тандемные диатела CD30/CD16A) были сразу добавлены в концентрации 10 мкг/мл в анализ цитотоксичности. На графике нанесены среднее и стандартное отклонение значений лизиса в двух проворностях. Exp.No.: RBL 1464.
Определения
Термин «конструкция антитела» относится к молекуле, в которой структура и/или функция основана/основаны на структуре и/или функции антитела, например, полноразмерной или целой молекулы иммуноглобулина и/или является/являются взятыми из доменов вариабельной тяжелой цепи (VH) и/или вариабельной легкой цепи (VL) антитела или его фрагмента. Следовательно, конструкция антитела способна связываться со своей специфичной мишенью или антигеном. Кроме того, связывающий домен конструкции антитела, определенный в контексте настоящего изобретения, включает минимальные структурные требования для антитела, которые позволяют связываться с мишенью. Это минимальное требование может, например, быть определено по присутствию по меньшей мере трех участков, определяющих комплементарность (CDR) легкой цепи (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 участка VL) и/или трех CDR тяжелой цепи (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 участка VH), предпочтительно всех шести CDR. Альтернативный подход к определению минимальных структурных требований к антителу - это определение эпитопа антитела в структуре специфичной мишени, соответственно, белкового домена белка-мишени, составляющего участок эпитопа (кластер эпитопа), или по отношению к специфичному антителу, конкурирующему с эпитопом определенного антитела. Антитела, на которых основаны конструкции, определенные в контексте настоящего изобретения, содержат, например, моноклональные, рекомбинантные, химерные, деиммунизированные, гуманизированные и человеческие антитела (антитела человека).
Связывающий домен конструкции антитела, определенного в контексте настоящего изобретения, может, например, включать упомянутые выше группы CDR. Предпочтительно, эти CDR включены в каркасный участок вариабельного участка легкой цепи (VL) антитела и вариабельного участка тяжелой цепи (VH) антитела; однако они не обязательно должны включать и то, и другое. Фрагменты Fd, например, имеют два участка VH и часто сохраняют некоторую антиген-связывающую функцию интактного антиген-связывающего домена. Дополнительные примеры формата фрагментов антител, вариантов антител или связывающих доменов содержат (1) фрагмент Fab, моновалентный фрагмент, имеющий домены VL, VH, CL и СН1; (2) фрагмент F (ab')2, бивалентный фрагмент, имеющий два фрагмента Fab, связанных дисульфидным мостиком в шарнирном участке; (3) фрагмент Fd, имеющий два домена VH и СН1; (4) фрагмент Fv, имеющий домены VL и VH одного плеча антитела, (5) фрагмент dAb (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546), который имеет домен VH; (6) выделенный участок, определяющий комплементарность (CDR), и (7) одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), последний является предпочтительным (например, полученный из библиотеки scFV).
Кроме того, в рамках определения «связывающий домен» или «домен, который связывает» находятся фрагменты полноразмерных антител, такие как VH, VHH, VL, (s)dAb, Fv, Fd, Fab, Fab', F (ab')2 или «r IgG» («полуантитело»). Конструкции антител, как определено в контексте изобретения, могут также включать модифицированные фрагменты антител, также называемые вариантами антител, такие как scFv, ди-scFv или би(c)-scFv, scFv-Fc, scFv-зиппер, scFab, Fab2, Fab3, диатела, одноцепочечные диатела, тандемные диатела (Tandab's), тандемные ди-scFv, тандемные три-scFv, «мультитела», такие как триатела или тетратела, и однодоменные антитела, такие как нанотела или антитела с одиночным вариабельным доменом, включающие только один вариабельный домен, которым может быть VHH, VH или VL, который специфично связывается с антигеном или эпитопом независимо от других V-участков или доменов.
В настоящем документе термины «одноцепочечный Fv», «одноцепочечные антитела» или «scFv» относятся к фрагментам антител с одноцепочечной полипептидной цепью, которые включают вариабельные участки и тяжелой, и легкой цепей, но не имеют константных участков. Обычно одноцепочечное антитело дополнительно включает полипептидный линкер между доменами VH и VL, который позволяет ему образовывать желаемую структуру, которая допускает связывание антигена. Одноцепочечные антитела подробно обсуждаются Plueckthun в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, т.113, Rosenburg и Moore ред. Springer-Verlag, Нью-Йорк, с. 269-315 (1994). Известны различные способы получения одноцепочечных антител, включая методы, описанные в патентах США №№4694778 и 5260203; публикации международной патентной заявки №WO 88/01649; Bird (1988) Science 242: 423-442; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. США 85: 5879-5883; Ward et al. (1989) Nature 334: 54454; Skerra et al. (1988) Science 242: 1038-1041. В специфичных вариантах осуществления одноцепочечные антитела также могут быть биспецифичными, мультиспецифичными, человеческими и/или гуманизированными и/или синтетическими.
Кроме того, определение термина «конструкция антитела» охватываетт моновалентные, двухвалентные и поливалентные/мультивалентные конструкции и, таким образом, биспецифичные конструкции, специфично связывающиеся только с двумя антигенными структурами, а также полиспецифичные/мультиспецифичные конструкции, которые специфично связывают более чем две антигенные структуры, например три, четыре или более через отдельные связывающие домены. Более того, определение термина «конструкция антитела» включает молекулы, состоящие только из одной полипептидной цепи, а также молекулы, состоящие из более чем одной полипептидной цепи, причем эти цепи могут быть как идентичными (гомодимеры, гомотримеры или гомоолигомеры), так и разными (гетеродимер, гетеротример или гетероолигомер). Примеры идентифицированных выше антител и их вариантов или производных описаны, среди прочего, в Harlow and Lane, Antibodies a lab manual, CSHL Press (1988) и Using Antibodies: a lab manual, CSHL Press (1999), Kontermann and Dubel, Antibody Engineering, Springer, 2-е изд. 2010 и Little, Recombinant Antibodies for Immunotherapy, Cambridge University Press, 2009.
Термин «валентный» обозначает наличие определенного количества антигенсвязывающих доменов в антигенсвязывающем белке. Природный IgG имеет два антиген-связывающих домена и является бивалентным. Антигенсвязывающие белки, как определено в контексте изобретения, являются по меньшей мере трехвалентными. Примеры тетра-, пента- и гексавалентных антиген-связывающих белков описаны в настоящем документе.
В настоящем документе термин «биспецифичная» относится к конструкции антитела, которая является «по меньшей мере биспецифичной», т.е. он включает по меньшей мере первый связывающий домен и второй связывающий домен, причем первый связывающий домен связывается с одним антигеном или мишенью (здесь: рецептор NK-клеток, например CD16a), и второй связывающий домен связывается с другим антигеном или мишенью (здесь: поверхностный антиген клетки-мишени). Соответственно, конструкции антител, как определено в контексте изобретения, включают специфичности по меньшей мере к двум различным антигенам или мишеням. Например, первый домен предпочтительно связывается с внеклеточным эпитопом рецептора NK-клетки одного или более видов, выбранных из человека, видов макак и видов грызунов.
Термин «рецептор NK-клетки», используемый в контексте изобретения, определяет белки и белковые комплексы на поверхности NK-клеток. Таким образом, этот термин определяет молекулы клеточной поверхности, которые характерны для NK-клеток, но необязательно экспрессируются исключительно на поверхности NK-клеток, но также и на других клетках, таких как макрофаги или Т-клетки. Примеры рецепторов NK-клеток включают, без ограничения перечисленными, CD16a, CD16b, NKp46 и NKG2D.
«CD16A» относится к активирующему рецептору CD16A, также известному как FCγRIIIA, экспрессируемому на клеточной поверхности NK-клеток. CD16A - это активирующий рецептор, запускающий цитотоксическую активность NK-клеток. Аффинность антител к CD16A напрямую коррелирует с их способностью запускать активацию NK-клеток, таким образом, более высокая аффинность к CD16A снижает дозу антител, требуемую для активации. Антиген-связывающий сайт антиген-связывающего белка связывается с CD16A, но не с CD16B. Например, антиген-связывающий сайт, содержащий вариабельные домены тяжелой (VH) и легкой (VL) цепи, связывающиеся с CD16A, но не связывающиеся CCD16B, может быть обеспечен антигенсвязывающим сайтом, который специфично связывается с эпитопом CD16A, который включает аминокислотные остатки С-концевой последовательности SFFPPGYQ (SEQ ID NO: 172) и/или остатки G130 и/или Y141 CD16A(SEQ ID NO: 23)), которые не присутствуют в CD16B.
«CD16B» относится к рецептору CD16B, также известному как FCγRIIIB, экспрессируемому на нейтрофилах и эозинофилах. Рецептор является ГФИ (GPI)-заякоренным, и предполагается, что он не запускает какую-либо цитотоксическую активность CD16B-положительных иммунных клеток.
«NKp46» относится к рецептору, активирующему цитотоксичность, который может способствовать повышению эффективности активированных клеток-естественных киллеров (NK) клеток по опосредованию лизиса опухолевых клеток. Он также известен как NCR1 или CD335.
«NKG2D» относится к активирующему и костимулирующему рецептору, вовлеченному в иммунный надзор за связыванием с различными лигандами, индуцируемыми клеточным стрессом, отображаемыми на поверхности аутологичных опухолевых клеток и инфицированных вирусом клеток. Обеспечивает и стимулирующий, и костимулирующий врожденные иммунные ответы на активированные киллерные (NK) клетки, приводя к цитотоксической активности. Действует как костимулирующий рецептор для Т-клеточного рецептора (TCR) в CD8(+) Т-клеточно-опосредованных адаптивных иммунных ответах за счет усиления активации Т-клеток. Стимулирует опосредованное перфорином элиминирование лиганд-экспрессирующих опухолевых клеток. Он также известен как лектин-подобный рецептор киллерных клеток К1, KLRK1 или CD314.
Термин «поверхностный антиген клетки-мишени» относится к антигенной структуре, экспрессируемой клеткой и присутствующей на клеточной поверхности, так что она доступна для конструкции антитела, которая описана в данном документе. Это может быть белок, предпочтительно внеклеточная часть белка, пептид, который представлен на клеточной поверхности в контексте главного комплекса гистосовместимости, ГКГ (МНС) (включая HLA-A2, HLA-A11, HLA-A24, HLA-B44, HLA-C4) или углеводная структура, предпочтительно углеводная структура белка, такого как гликопротеин. Это предпочтительно ассоциированный с опухолью или ограниченный опухолью антиген.
Термин «биспецифичная конструкция антитела», как определено в контексте изобретения, также охватывает мультиспецифичные конструкции антител, такие как триспецифичные конструкции антител, последние из которых содержат три связывающих домена, или конструкции, имеющие более трех (например, четыре, пять...) специфичностей. Примеры конструкций би- или мультиспецифичных антител обеспечены, например, в WO 2006/125668, WO 2015/158636, WO 2017/064221, РСТ/ЕР2019/056516, PCT/IB2019/053040 и Ellwanger et al. (MAbs. 2019 Jul; 11 (5):899-918).
Учитывая, что конструкции антител, как определено в контексте изобретения, являются (по меньшей мере) биспецифичными, они не встречаются в природе и заметно отличаются от продуктов природного происхождения. Конструкция «биспецифичного» антитела или иммуноглобулин, следовательно, представляет собой искусственное гибридное антитело или иммуноглобулин, имеющее по меньшей мере два различных сайта связывания с разными специфичностями. Конструкции биспецифичных антител могут быть созданы различными способами, содержащими слияние гибридом или связывание фрагментов Fab'. См, например, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp.Immunol. 79:315-321 (1990).
Эти по крайней мере два связывающих домена и вариабельные домены (VH/VL) конструкции антитела согласно настоящему изобретению могут включать или не включать пептидные линкеры (спейсерные пептиды). Термин «пептидный линкер» включает в соответствии с настоящим изобретением аминокислотную последовательность, согласно которой аминокислотные последовательности одного (вариабельного и/или связывающего) домена и другого (вариабельного и/или связывающего) домена конструкции антитела, определенного в настоящем документе, являются связаны друг с другом. Пептидные линкеры также могут быть применены для слияния третьего домена с другими доменами конструкции антитела, определенного в настоящем документе. Существенной технической особенностью такого пептидного линкера является то, что он не включает какую-либо полимеризационную активность.
Конструкции антител, как определено в контексте изобретения, предпочтительно представляют собой «конструкции антител, генерируемые in vitro». Этот термин относится к конструкции антитела в соответствии с приведенным выше определением, где весь или часть вариабельного участка (например, по меньшей мере, один CDR) генерируется в результате неиммунного отбора клеток, например, фагового дисплея in vitro, белкового чипа или любого другого способа, в котором последовательности-кандидаты могут быть протестированы на их способность связываться с антигеном. Таким образом, этот термин предпочтительно исключает последовательности, созданные исключительно в результате геномной перестройки в иммунной клетке животного. «Рекомбинантное антитело» - это антитело, полученное с применением технологии рекомбинантной ДНК или генной инженерии.
В настоящем документе термин «моноклональное антитело» (mAb) или конструкция моноклонального антитела относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. индивидуальные антитела, включенные в популяцию, идентичны, за исключением возможных естественно происходящих мутаций и/или посттрансляционных модификаций (например, изомеризации, амидирования), которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными, будучи направленными против одного антигенного сайта или детерминанты антигена, в отличие от общепринятых (поликлональных) препаратов антител, которые обычно содержат различные антитела, направленные против различных детерминант (или эпитопов). Вдобавок к своей специфичности, преимущество моноклональных антител в том, что они синтезируются культурой гибридомы и, следовательно, не контаминированы другими иммуноглобулинами. Модификатор «моноклональное» указывает на характер антитела как полученного из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующий получения антитела каким-либо особенным способом.
Для получения моноклональных антител можно применять любую технику, обеспечивающую получение антител, продуцируемых культурами непрерывных клеточных линий. Например, моноклональные антитела, которые будут применяться, могут быть получены гибридомным способом, впервые описанным Koehler et al., Nature, 256: 495 (1975), или могут быть сделаны способами рекомбинации ДНК (см., например, патент США №4816567). Примеры дополнительных техник получения человеческих моноклональных антител содержат технику триомы, технику гибридомы В-клеток человека (Kozbor, Immunology Today 4 (1983), 72) и технику EBV-гибридомы (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985), 77-96).
Гибридомы затем можно подвергнуть скринингу с применением стандартных способов, таких как иммуноферментный анализ, ИФА (ELISA) и анализ поверхностного плазмонного резонанса (BIACORE™), чтобы идентифицировать одну или более гибридом, которые продуцируют антитело, которое специфично связывается с определенным антигеном. Любая форма соответствующего антигена может быть применена в качестве иммуногена, например рекомбинантный антиген, встречающиеся в природе формы, любые его варианты или фрагменты, а также его антигенный пептид.
Поверхностный плазмонный резонанс, используемый в системе BIAcore, можно применять для увеличения эффективности фаговых антител, которые связываются с эпитопом поверхностного антигена клетки-мишени (Schier, Human Antibodies Hybridomas 7 (1996), 97-105; Malmborg, J. Immunol. Methods 183 (1995), 7-13). Другой иллюстративный способ производства моноклональных антител содержит скрининг библиотек экспрессии белков, например библиотек фагового дисплея или рибосомного дисплея. Фаговый дисплей описан, например, в Ladner et al., патент США №5223409; Smith (1985) Science 228:1315-1317, Clackson et al, Nature, 352: 624-628 (1991) и Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991).
Вдобавок к применению дисплейных библиотек, соответствующий антиген можно применять для иммунизации животного, не являющегося человеком, например грызуна (такого как мышь, хомяк, кролик или крыса). В одном варианте осуществления животное, не являющееся человеком, содержит по меньшей мере часть гена иммуноглобулина человека. Например, можно сконструировать линии мышей, дефицитных по продукции мышиных антител, с большими фрагментами локусов человеческого Ig (иммуноглобулина). Применяя гибридомную технологию, можно получить и выбрать антиген-специфичные моноклональные антитела, происходящие от генов с желаемой специфичностью. См., например, XENOMOUSE™, Green et al. (1994) Nature Genetics 7:13-21, США 2003-0070185, WO 96/34096, и WO 96/33735.
Моноклональное антитело также может быть получено от животного, не являющегося человеком, а затем модифицировано, например, гуманизировано, деиммунизировано, превращено в химерное и т.д., с использованием методов рекомбинации ДНК, известных в данной области. Примеры конструкций модифицированных антител содержат гуманизированные варианты нечеловеческих (не относящихся к человеку) антител, антитела с «созревшей аффинностью» (см., например, Hawkins et al. J. Mol. Biol. 254, 889-896 (1992) и Lowman et al., Biochemistry 30, 10832-10837 (1991)) и мутанты антител с измененной (-ыми) эффекторной (-ыми) функцией (-ями) (см., например, патент США 5648260, Kontermann and Dubel (2010), loc. cit. и Little (2009), loc. cit).
В иммунологии созревание аффинности - это процесс, при котором В-клетки продуцируют антитела с повышенной аффинностью к антигену в ходе иммунного ответа. При многократном воздействии одного и того же антигена хозяин будет продуцировать антитела со все большей аффинностью. Как и в природном прототипе, созревание аффинности in vitro основано на принципах мутации и отбора. Созревание аффинности in vitro успешно применялось для оптимизации антител, конструкций антител и фрагментов антител. Случайные мутации внутри CDR вносятся с применением радиации, химических мутагенов или подверженной ошибкам полимеразной цепной реакции, ПЦР (PCR). Кроме того, генетическое разнообразие может быть увеличено путем перестановки цепей. Два или три раунда мутации и отбора с применением дисплейных способов, таких, как фаговый дисплей, обычно приводят к получению фрагментов антител с аффинностями в низком наномолярном диапазоне.
Предпочтительный тип заместительной вариации аминокислот в конструкциях антител подразумевает замену одного или более остатков гипервариабельного участка родительского антитела (например, гуманизированного или человеческого антитела). Как правило, итоговый (-е) вариант (-ы), выбранный (-е) для дальнейшей разработки, будет (-ут) иметь улучшенные биологические свойства по сравнению с родительским антителом, из которого они были получены. Подходящий способ создания таких заместительных вариантов подразумевает созревание аффинности с применением фагового дисплея. Вкратце, несколько сайтов гипервариабельного участка (например, 6-7 сайтов) мутируют для создания всех возможных аминокислотных замен на каждом сайте. Полученные таким образом варианты антител отображаются моновалентным образом из частиц нитчатого фага в виде слияния с продуктом гена III М13, упакованным в каждой частице. Отображенные фагом варианты подвергаются скринингу на их биологическую активность (например, аффинность связывания), как описано в настоящем документе. Чтобы идентифицировать сайты гипервариабельного участка-кандидата для модификации, можно выполнить мутагенез с аланиновым сканированием для идентификации остатков гипервариабельного участка, вносящих значительный вклад в связывание антигена. Альтернативно или дополнительно может быть полезно проанализировать кристаллическую структуру комплекса антиген-антитело для определения точек контакта между связывающим доменом и, например, поверхностным антигеном клетки-мишени человека. Такие контактные остатки и соседние остатки являются кандидатами на замену в соответствии с техниками, разработанными в настоящем документе. Когда такие варианты созданы, панель вариантов подвергается скринингу, как описано в данном документе, и антитела с превосходящими свойствами в одном или более соответствующих анализах могут быть выбраны для дальнейшей разработки.
Моноклональные антитела и конструкции антител, согласно настоящему изобретению, в частности, содержат «химерные» антитела (иммуноглобулины), в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, происходящих от определенного вида или принадлежащих к определенному классу или подклассу антител, в то время как остальная часть цепи (-ей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителах, происходящих от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антител, а также фрагментам таких антител, при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность (патент США № 4816567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984)). Представляющие интерес химерные антитела содержат «примитизированные» антитела, включающие антиген-связывающие последовательности вариабельного домена, полученные от приматов, не являющихся человеком (например, обезьяны Старого Света, широконосые обезьяны и т.д.), и последовательностей константных участков человека. Описаны различные подходы к производству химерных антител. См., например, Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci U.S. A. 81:6851, 1985; Takeda et al., Nature 314:452, 1985, Cabilly et al., патент США №4816567; Boss et al., патент США №4816397; Tanaguchiet al., ЕР 0171496; ЕР 0173494; и GB 2177096.
Антитело, конструкция антитела, фрагмент антитела или вариант антитела также могут быть модифицированы путем специфичного удаления эпитопов Т-клеток человека (способ, называемый «деиммунизация») способами, описанными, например, в WO 98/52976 или WO 00/34317. Вкратце, вариабельные домены тяжелой и легкой цепи антитела можно анализировать на наличие пептидов, которые связываются с главным комплексом гистосовместимости, ГКГС (МНС) II класса; эти пептиды представляют собой потенциальные Т-клеточные эпитопы (как определено в WO 98/52976 и WO 00/34317). Для обнаружения потенциальных эпитопов Т-клеток может быть задействован подход компьютерного моделирования, называемый «пептидное протягивание» и, кроме того, в базе данных пептидов, связывающих человеческий ГКГС (МНС) II класса, можно искать мотивы, присутствующие в последовательностях VH и VL, как описано в WO 98/52976 и WO 00/34317. Эти мотивы связываются с любым из 18 основных аллотипов DR ГКГС (МНС) II класса и, таким образом, составляют потенциальные эпитопы Т-клеток. Обнаруженные потенциальные Т-клеточные эпитопы могут быть элиминированы путем замены небольшого количества аминокислотных остатков в вариабельных доменах или, предпочтительно, путем замены одной аминокислоты. Обычно производятся консервативные замены. Часто, но не исключительно, может применяться аминокислота, общая для положения в последовательностях антител человеческой зародышевой линии. Последовательности человеческой зародышевой линии описаны, например, в Tomlinson, et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798; Cook, G.P. et al. (1995) Immunol. Today Vol. 16 (5): 237-242; и Tomlinson et al. (1995) EMBO J. 14: 14:4628-4638. Каталог V BASE обеспечивает обширный каталог последовательностей вариабельных участков человеческого иммуноглобулина (составлен Tomlinson, LA. et. al. MRC Center for Protein Engineering, Кембридж, Великобритания). Эти последовательности можно применять в качестве источника человеческих последовательностей, например, для каркасных участков и CDR. Также можно применять консенсусные каркасные участки человека, например, как описано в патенте США №6300064.
«Гуманизированные» антитела, конструкции антител, их варианты или фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F (ab')2 или другие антиген-связывающие подпоследовательности антител) представляют собой антитела или иммуноглобулины преимущественно человеческих последовательностей, которые содержат минимальную (-ые) последовательность (-и), полученную (-ые) из нечеловеческого иммуноглобулина. По большей части гуманизированные антитела являются человеческими иммуноглобулинами (реципиентные антитела), в которых остатки гипервариабельного участка (также CDR) реципиента заменены остатками гипервариабельного участка нечеловеческого (например, грызуна) вида (донорское антитело), такого как мышь, крыса, хомяк или кролик, имеющими желаемую специфичность, аффинность и емкость. В некоторых случаях остатки каркасного участка (FR) Fv иммуноглобулина человека заменяются соответствующими остатками нечеловеческого происхождения. Кроме того, в контексте настоящего документа «гуманизированные антитела» могут также включать остатки, которых нет ни в антителе реципиента, ни в антителе донора. Эти модификации сделаны для дальнейшего усовершенствования и оптимизации производительности антител. Гуманизированное антитело может также включать по меньшей мере часть константного участка иммуноглобулина (Fc), обычно иммуноглобулина человека. Подробнее см. Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); и Presta, Curr. Op.Struct. Biol., 2: 593- 596 (1992).
Гуманизированные антитела или их фрагменты могут быть получены путем замены последовательностей вариабельного домена Fv, которые непосредственно не подразумевают связывания антигена эквивалентными последовательностями человеческих вариабельных доменов Fv. Иллюстративные способы получения гуманизированных антител или их фрагментов обеспечены Morrison (1985) Science 229:1202-1207; по Oi et al. (1986) BioTechniques 4:214; и по US 5585089; US 5693761; US 5693762; US 5859205; и US 6407213. Эти способы содержат выделение, манипулирование и экспрессию последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют все или часть вариабельных доменов Fv иммуноглобулина из, по меньшей мере, одной тяжелой или легкой цепи. Такие нуклеиновые кислоты могут быть получены из гибридомы, продуцирующей антитело против заранее определенной мишени, как описано выше, а также из других источников. Рекомбинантная ДНК, кодирующая молекулу гуманизированного антитела, может быть затем клонирована в соответствующий вектор экспрессии.
Гуманизированные антитела также могут быть получены с применением трансгенных животных, таких как мыши, которые экспрессируют человеческие гены тяжелой и легкой цепей, но неспособны экспрессировать гены тяжелой и легкой цепей эндогенного мышиного иммуноглобулина. Winter описывает иллюстративный способ CDR-привития, который можно применять для получения описанных здесь гуманизированных антител (патент США №5225539). Все CDR конкретного человеческого антитела могут быть заменены, по меньшей мере, частью нечеловеческих CDR, или только некоторые из CDR могут быть заменены нечеловеческими CDR. Необходимо только заменить количество CDR, требуемое для связывания гуманизированного антитела с заранее определенным антигеном.
Гуманизированное антитело может быть оптимизировано путем внедрения консервативных замен, замен консенсусной последовательности, замен зародышевой линии и/или обратных мутаций. Такие измененные молекулы иммуноглобулина могут быть созданы любым из нескольких способов, известных в данной области (например, Teng et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 80: 7308-7312, 1983; Kozbor ei al., Immunology Today, 4: 7279, 1983; Olsson et al., Meth. Enzymol., 92: 3-16, 1982, и ЕР 239 400).
Термин «человеческое антитело/антитело человека», «конструкция человеческого антитела» и «связывающий домен человека» содержит антитела, конструкции антител и связывающие домены, имеющие участки антитела, такие как вариабельные и константные участки или домены, которые по существу соответствуют последовательностям иммуноглобулина человеческой зародышевой линии, известным в данной области, содержащим, например, описанные Kabat et al. (1991) (loc. cit.). Человеческие антитела, конструкции антител или связывающие домены, как определено в контексте изобретения, могут содержать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов человеческой зародышевой линии (например, мутации, внесенные случайным или сайт-специфичным мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo), например, в CDR и, в частности, в CDR3. Человеческие антитела, конструкции антител или связывающие домены могут иметь по меньшей мере одно, два, три, четыре, пять или более положений, замененных аминокислотным остатком, который не кодируется последовательностью иммуноглобулина зародышевой линии человека. Однако определение человеческих антител, конструкций антител и связывающих доменов в настоящем документе также предполагает «полностью человеческие антитела», которые содержат только неискусственно и/или генетически измененные человеческие последовательности антител, поскольку они могут быть получены с применением технологий или систем, таких как Xenomouse. Предпочтительно, «полностью человеческое антитело» не содержит аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулина человеческой зародышевой линии.
В некоторых вариантах осуществления конструкции антител, определенные в данном документе, представляют собой «выделенные» или «по существу чистые» конструкции антител. «Выделенная» или «по существу чистая» при применении для описания описанных здесь конструкций антител означает конструкцию антитела, которая была идентифицирован, отделен и/или извлечен из компонента его производственной среды. Предпочтительно конструкция антитела свободна или по существу свободна от связи со всеми другими компонентами из среды, в которой ее получали. Контаминирующие компоненты его производственной среды, такие как те, которые являются продуктом получения рекомбинантных трансфицированных клеток, являются материалами, которые обычно вмешиваются в диагностическое или терапевтическое применение полипептида, и могут содержать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. Конструкции антител могут, например, составлять по меньшей мере около 5% или по меньшей мере около 50% по весу от общего белка в данном образце. Понятно, что выделенный белок может составлять от 5% до 99,9% по весу от общего содержания белка, в зависимости от обстоятельств. Полипептид может быть создан в значительно более высокой концентрации за счет применения индуцибельного промотора или промотора высокой экспрессии, так что он будет получен в повышенных уровнях концентрации. Это определение содержит получение конструкции антитела в широком спектре организмов и/или клеток-хозяев, известных в данной области. В предпочтительных вариантах осуществления конструкция антитела будет очищена (1) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности с применением секвенатора с вращающейся чашей, или (2) до гомогенности с помощью SDS-ΠΑΑΓ (SDS-PAGE) в невосстанавливающих или восстанавливающих условиях с применением окрашивания кумасси синим или, предпочтительно, серебром. Обычно, однако, выделенная конструкция антитела будет получена, по меньшей мере, за один этап очистки.
Термин «связывающий домен» характеризует в связи с настоящим изобретением домен, который (специфично) связывается с/взаимодействует с/распознает данный целевой эпитоп или заданный сайт-мишень на целевых молекулах (антигенах), например антиген рецептора NK-клеток, например CD16, и поверхностный антиген клетки-мишени соответственно. Структура и функция первого связывающего домена (распознавание, например, CD16), и предпочтительно также структура и/или функция второго связывающего домена (распознавание поверхностного антигена клетки-мишени) основана/основаны на структуре и/или функции антитела, например полноразмерной или цельной молекулы иммуноглобулина и/или взята/взяты из доменов вариабельной тяжелой цепи (VH) и/или вариабельной легкой цепи (VL) антитела или его фрагмента. Предпочтительно первый связывающий домен характеризуется наличием трех CDR легкой цепи (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 участка VL) и/или трех CDR тяжелой цепи (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 участка VH). Второй связывающий домен предпочтительно также включает минимальные структурные требования антитела, которые позволяют связываться с мишенью. Более предпочтительно, второй связывающий домен включает по меньшей мере три CDR легкой цепи (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 участка VL) и/или три CDR тяжелой цепи (т.е. CDR1, CDR2 и CDR3 участка VH). Предполагается, что первый и/или второй связывающий домен продуцируется или может быть получен скорее способами фагового дисплея или скрининга библиотеки, чем путем привития последовательностей CDR из ранее существовавшего (моноклонального) антитела в скелет.
В соответствии с настоящим изобретением связывающие домены находятся в форме одного или более полипептидов. Такие полипептиды могут содержать белковые части и небелковые части (например, химические линкеры или химические перекрестно связывающие агенты, такие как глутаральдегид). Белки (определение содержит их фрагменты, предпочтительно биологически активные фрагменты и пептиды, обычно имеющие менее 30 аминокислот) включают две или более аминокислот, связанных друг с другом ковалентной пептидной связью (что приводит к образованию цепи аминокислот).
В настоящем документе термин «полипептид» описывает группу молекул, которые обычно состоят из более чем 30 аминокислот. Полипептиды, далее, могут образовывать мультимеры, такие какдимеры, тримеры и более высокие олигомеры, т.е. состоящие из более чем одной полипептидной молекулы. Молекулы полипептидов, образующие такие димеры, тримеры и т.д., могут быть идентичными или неидентичными. Соответствующие структуры более высокого порядка таких мультимеров, следовательно, называются гомо- или гетеродимерами, гомо- или гетеротримерами и т.д. Примером гетеромультимера является молекула антитела, которая в своей природной форме состоит из двух идентичных легких полипептидных цепей и двух идентичных тяжелых полипептидных цепей. Термины «пептид», «полипептид» и «белок» также относятся к естественно модифицированным пептидам/полипептидам/белкам, причем на модификацию влияют, например, посттрансляционные модификации, такие как гликозилирование, ацетилирование, фосфорилирование и т.п. «Пептид», «полипептид» или «белок», когда они упоминаются в настоящем документе, также могут быть химически модифицированы, например пегилированы. Такие модификации хорошо известны в данной области и описаны в настоящем документе ниже.
Предпочтительно связывающий домен, который связывается с антигеном рецептора NK-клеток, например CD16 и/или связывающий домен, который связывается с поверхностным антигеном клетки-мишени, является/являются человеческими связывающими доменами. Антитела и конструкции антител, включающие по меньшей мере один из группы, состоящей из связывающих доменов человека, минуют некоторые проблемы, связанные с антителами или конструкциями антител, которые обладают нечеловеческими, такими как принадлежащие грызунам (например, мышиным, крысам, хомякам или кроликам) вариабельными и/или константными участками. Присутствие таких белков, происходящих от грызунов, может привести к быстрому удалению антител или конструкций антител или может привести к выработке пациентом иммунного ответа против антитела или конструкции антитела. Чтобы избежать применения антител или конструкций антител, происходящих от грызунов, можно генерировать человеческие или полностью человеческие антитела/конструкции антител путем внедрения функции человеческого антитела грызуну, так что грызун продуцирует полностью человеческие антитела.
Способность клонировать и реконструировать человеческие локусы размером млн п. о. в искусственных дрожжевых хромосомах (YAC) и вносить их в мышиную зародышевую линию обеспечивает мощный подход к объяснению функциональных компонентов очень больших или грубо картированных локусов, а также к созданию полезных моделей заболеваний человека. Кроме того, применение такой технологии для замены мышиных локусов их человеческими эквивалентами может обеспечить уникальное проникновение в механизмы экспрессии и регуляции продуктов генов человека во время развития, их связь с другими системами и их вовлечение в индукцию и прогрессирование заболевания.
Важным практическим воздействием такой стратегии является «гуманизация» мышиной гуморальной иммунной системы. Внедрение локусов человеческого иммуноглобулина (Ig) мышам, у которых были инактивированы эндогенные гены Ig, дает возможность изучить механизмы, лежащие в основе запрограммированной экспрессии и сборки антител, а также их роль в развитии В-клеток. Кроме того, такая стратегия могла бы обеспечить идеальный источник для производства полностью человеческих моноклональных антител (mAb) - важную веху на пути к реализации терапии антителами при заболеваниях человека. Ожидается, что полностью человеческие антитела или конструкции антител минимизируют иммуногенные и аллергические ответы, присущие мышиным или производным от мыши моноклональным антителам, и, таким образом, увеличат эффективность и безопасность вводимых антител/конструкций антител. Можно ожидать, что применение полностью человеческих антител или конструкций антител обеспечит существенное преимущество при лечении хронических и рецидивирующих заболеваний человека, таких как воспаление, аутоиммунитет и рак, которые требуют повторных введений соединения.
Один из подходов к этой цели состоял в том, чтобы сконструировать линии мышей, дефицитных по продуцированию мышиных антител, с большими фрагментами локусов человеческого Ig в ожидании того, что такие мыши будут продуцировать большой репертуар человеческих антител в отсутствие мышиных антител. Большие фрагменты человеческого Ig сохранят большое разнообразие вариабельных генов, а также правильную регуляцию продуцирования и экспрессии антител. Используя механизм мышей для диверсификации и отбора антител и отсутствие иммунологической толерантности к человеческим белкам, репертуар репродуцированных человеческих антител в этих линиях мышей должен давать высокоаффинные антитела против любого интересующего антигена, понятие содержит и человеческие антигены. Применяя гибридомную технологию, антиген-специфичные человеческие mAb с желаемой специфичностью можно легко получить и отобрать. Эта общая стратегия была продемонстрирована в связи с созданием первых линий мышей XenoMouse (см. Green et al. Nature Genetics 7: 13-21 (1994)). Линии XenoMouse были сконструированы с использованием искусственных дрожжевых хромосом (YAC), содержащих фрагменты конфигурации зародышевой линии размером 245 т.п.о. и 190 т.п.о. локуса человеческой тяжелой цепи и локуса легкой цепи каппа соответственно, которые вмещали сердцевинные последовательности вариабельного и константного участка. YAC, содержащие человеческий Ig, оказались совместимыми с мышиной системой как в отношении реаранжировки, так и в отношении экспрессии антител и были способны к замещению инактивированных генов мышиного Ig. Это было продемонстрировано их способностью индуцировать развитие В-клеток, продуцировать репертуар полностью человеческих антител как у взрослого человека, и генерировать антиген-специфичные человеческие моноклональные антитела. Эти результаты также заставляют предполагать, что внедрение больших частей локусов человеческого Ig, содержащих большее количество V-генов, дополнительных регуляторных элементов и константных участков человеческого Ig, может повторять, по существу, полный репертуар, характерный для человеческого гуморального ответа на инфекцию и иммунизацию. Работа Green et al. недавно была расширена до внедрения более чем примерно 80% репертуара человеческих антител путем внедрения фрагментов YAC размером млн п.о. конфигурации зародышевой линии локусов человеческой тяжелой цепи и локусов легкой цепи каппа, соответственно. См. Mendez et al. Nature Genetics 15: 146-156 (1997) и заявка на патент США сер. №08/759620.
Производство мышей XenoMouse дополнительно обсуждается и описывается в патентных заявках США сер. №07/466008, сер. №07/610515, сер. №07/919297, сер. №07/922649, сер. №08/031801, сер. №08/1 12848, сер. №08/234145, сер. №08/376279, сер. №08/430938, сер. №08/464584, сер. №08/464582, сер. №08/463191, сер. №08/462837, сер. №08/486853, сер. №08/486857, сер. №08/486859, сер. №08/462513, сер. №08/724752 и сер. №08/759620; и патенты США №№6162963; 6150584; 61 14598; 6075181 и 5939598 и патенты Японии №№3 068 180 В2, 3 068 506 В2 и 3 068 507 В2. См. также Mendez et al. Nature Genetics 15:146-156 (1997) и Green and Jakobovits J. Exp.Med. 188:483-495(1998), EP0 463 151 B1, WO 94/02602, WO 96/34096, WO 98/24893, WO 00/76310, и WO 03/47336.
В альтернативном подходе другие, в том числе GenPharm International, Inc., использовали «минилокусный» подход. В минилокусном подходе экзогенный локус Ig имитируется путем включения частей (индивидуальных генов) из локуса Ig. Таким образом, один или более генов VH, один или более генов DH, один или более генов JH, константный участок мю и второй константный участок (предпочтительно константный участок гамма) формируются в конструкцию для вставки в животное. Этот подход описан в патенте США №5545807, принадлежащем Surani et al. и патентах США. №№5545806; 5625825; 5625126; 5633425; 5661016; 5770429; 5789650; 5814318; 5877397; 5874299; и 6255458 каждый из которых принадлежит Lonberg and Kay, патенты США №№5591669 и 6023010, принадлежащие Krimpenfort and Berns, патенты США №№5612205; 5721367; и 5789215, принадлежащие Berns et al., и патент США №5643763, принадлежащие Choi and Dunn, и GenPharm International, патентные заявки США сер. №07/574748, сер. №07/575962, сер. №07/810279, сер. №07/853408, сер. №07/904068, сер. №07/990860, сер. №08/053131, сер. №08/096762, сер. №08/155301, сер. №08/161739, сер. №08/165699, сер. №08/209741. См. также ЕР 0546073 В1, WO 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227, WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/ 13852 и WO 98/24884 и патент США №5981175. См., далее, Taylor et al. (1992), Chen et al. (1993), Tuaillon et al. (1993), Choi et al. (1993), Lonberg et al. (1994), Taylor et al. (1994), и Tuaillon et al. (1995), Fishwild et al. (1996).
Kirin также продемонстрировал создание человеческих антител посредством мышей, которым путем слияния микроклеток были внесены большие части хромосом или целые хромосомы. См. европейские патентные заявки №№773288 и 843961. Xenerex Biosciences разрабатывает технологию потенциального создания человеческих антител. В этой технологии мышей с тяжелым комбинированным иммунодефицитом, ТКИД (SCID) восстанавливают лимфатическими клетками человека, например В- и/или Т-клетками. Затем мышей иммунизируют антигеном, и они могут генерировать иммунный ответ против антигена. См. патенты США №№5476996; 5698767; и 5958765.
Ответы с участием антител человека к Ig мыши (НАМА) привели промышленность к тому, чтобы получить химерные или иным образом гуманизированные антитела. Однако ожидается, что будут наблюдаться определенные ответы с участием антител человека против против химерных антител (НАСА), особенно при хроническом или многодозовом использовании антитела. Таким образом, было бы желательно обеспечить конструкции антител, включающие человеческий связывающий домен против поверхностного антигена клетки-мишени и человеческий связывающий домен против CD16, чтобы ослабить опасения по поводу и/или эффекты НАМА- или НАСА-ответа.
Термины "(специфично) связывается с", "(специфично) распознает", "(специфично) направлено" и "(специфично) реагирует с" означают в соответствии с данным изобретением, что связывающий домен взаимодействует или специфично взаимодействует с данным эпитопом или данным сайтом-мишенью на молекулах-мишенях (антигенах), здесь: рецептор NK-клеток, например CD16a, и поверхностный антиген клетки-мишени, соответственно.
Термин «эпитоп» относится к сайту антигена, с которым связывающий домен, такой как антитело или иммуноглобулин, или производное, фрагмент или вариант антитела или иммуноглобулина, специфично связывается. «Эпитоп» является антигенным, и поэтому к термину эпитоп в настоящем документе иногда также относится «антигенная структура» или «антигенная детерминанта». Таким образом, связывающий домен является «сайтом, с которым взаимодействует антиген». Также подразумевается, что указанное связывание/взаимодействие определяет «специфичное распознавание».
«Эпитопы» могут быть образованы как заменимыми аминокислотами, так и незаменимыми аминокислотами, наложенными друг на друга посредством третичной укладки белка. «Линейный эпитоп» представляет собой эпитоп, в котором первичная аминокислотная последовательность включает распознаваемый эпитоп. Линейный эпитоп обычно содержит по меньшей мере 3 или по меньшей мере 4, а чаще по меньшей мере 5 или по меньшей мере 6 или по меньшей мере 7, например, от около 8 до около 10 аминокислот в уникальной последовательности.
«Конформационный эпитоп», в отличие от линейного эпитопа, представляет собой эпитоп, в котором первичная последовательность аминокислот, которые включает эпитоп, не является единственным определяющим компонентом распознаваемого эпитопа (например, эпитоп, в котором первичная последовательность аминокислот не обязательно распознается связывающим доменом). Обычно конформационный эпитоп включает большее количество аминокислот по сравнению с линейным эпитопом. Что касается распознавания конформационных эпитопов, связывающий домен распознает трехмерную структуру антигена, предпочтительно пептида или белка или его фрагмента (в контексте настоящего изобретения антигенная структура для одного из связывающих доменов включена в белок поверхностного антигена клетки-мишени). Например, когда молекула белка укладывается для формирования трехмерной структуры, определенные аминокислоты и/или полипептидный остов, формирующий (-е) конформационный эпитоп, сопоставляются, позволяя антителу распознавать эпитоп. Способы определения конформации эпитопов содержат, без ограничения перечисленными, рентгеновскую кристаллографию, спектроскопию двумерного ядерного магнитного резонанса, 2D-ЯМР (2D-NMR) и сайт-направленное спиновое мечение и спектроскопию электронного парамагнитного резонанса, ЭПР (EPR).
Взаимодействие между связывающим доменом и эпитопом или участком, включающим эпитоп, подразумевает, что связывающий домен проявляет заметную аффинность к эпитопу/участку, включающему эпитоп, на конкретном белке или антигене (здесь: рецептор NK-клеток, например CD16a, и поверхностный антиген клетки-мишени, соответственно) и, как правило, не проявляет значительной реактивности с белками или антигенами, кроме рецептора NK-клеток, например CD16a, и поверхностного антигена клетки-мишени. «Заметная аффинность» содержит связывание с аффинностью примерно 106 Μ (кД) или сильнее. Предпочтительно, связывание считается специфичным, когда аффинность связывания составляет около от 10-12 до 10-8 М, от 10-12 до 10-9 М, от 10-12 до 10-10 М, от 10-11 до 10-8 М, предпочтительно около от 10-11 до 10-9 М. Может ли связывающий домен специфично реагировать с или связываться с мишенью, можно легко проверить, среди прочего, путем сравнения реакции указанного связывающего домена с белком-мишенью или антигеном с реакцией указанного связывания домена с белками или антигенами, отличными от рецептора NK-клеток, например CD16a, и поверхностного антигена клетки-мишени. Предпочтительно, связывающий домен, как определено в контексте изобретения, по сути или по существу не связывается с белками или антигенами, отличными от рецептора NK-клетки, например CD16a и поверхностного антигена клетки-мишени (т.е. первый связывающий домен не способен связываться с белками, отличными от рецептора NK-клетки, например CD16a, и второй связывающий домен не способен связываться с белками, отличными от поверхностного антигена клетки-мишени).
Термин «по сути/по существу не связывается» или «не способен к связыванию» означает, что связывающий домен по настоящему изобретению не связывает белок или антиген, отличный от рецептора NK-клетки, например CD16a, и поверхностного антигена клетки-мишени, т.е. не проявляет реактивности более 30%, предпочтительно не более 20%, более предпочтительно не более 10%, особенно предпочтительно не более 9%, 8%, 7%, 6% или 5% с белками или антигенами, отличными от рецептора NK-клетки, например CD16a и поверхностного антигена клетки-мишени, каковым образом связывание с рецептором NK-клетки, например CD16a, и поверхностным антигеном клетки-мишени соответственно установлено равным 100%.
Полагают, что на специфичное связывание влияют специфичные мотивы в аминокислотной последовательности связывающего домена и антигена. Таким образом, связывание достигается как результат их первичной, вторичной и/или третичной структуры, а также как результат вторичных модификаций указанных структур. Специфичное взаимодействие сайта взаимодействия антигена с его специфичным антигеном может привести к простому связыванию указанного сайта с антигеном. Более того, специфичное взаимодействие сайта взаимодействия антигена с его специфичным антигеном может альтернативно или дополнительно привести к инициированию сигнала, например, за счет индукции изменения конформации антигена, олигомеризации антигена и т.д.
Термин «вариабельный» относится к частям доменов антитела или иммуноглобулина, которые проявляют вариабельность своей последовательности и которые подразумевают определение специфичности и аффинности связывания конкретного антитела (то есть «вариабельного (-ых) домена (-ов)»). Спаривание вариабельной тяжелой цепи (VH) и вариабельной легкой цепи (VL) вместе образует единый антиген-связывающий сайт.
Вариабельность неравномерно распределена по вариабельным доменам антител; она сконцентрирована в субдоменах каждого из вариабельных участков тяжелой и легкой цепи. Эти субдомены называются «гипервариабельными участками» или «участками, определяющими комплементарность» (CDR). Более консервативные (т.е. негипервариабельные) части вариабельных доменов называются «каркасными» участками (FRM или FR) и обеспечивают скелет для шести CDR в трехмерном пространстве для формирования антигенсвязывающей поверхности. Каждый из вариабельных доменов встречающихся в природе тяжелых и легких цепей включает четыре участка FRM (FR1, FR2, FR3 и FR4), в основном принимающих конфигурацию β-листа, соединенных тремя гипервариабельными участками, которые формируют петли, соединяющие, и в некоторых случаях образующие часть, структуры β-листа. Гипервариабельные участки в каждой цепи удерживаются вместе в непосредственной близости посредством FRM и вместе с гипервариабельными участками из другой цепи вносят вклад в формирование антигенсвязывающего сайта (см. Kabat et al., loc. cit.).
Термины «CDR» и его множественное число «CDR» относятся к участкам, определяющим комплементарность, три из которых выполняют связывающую роль в вариабельном участке легкой цепи (CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3), и три выполняют связывающую роль в вариабельном участке тяжелой цепи (CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3). CDR содержат большинство остатков, ответственных за специфичные взаимодействия антитела с антигеном, и, следовательно, вносят вклад в функциональную активность молекулы антитела: они являются основными детерминантами специфичности антигена.
Точные дефиниционные границы и длины CDR подлежат различным системам классификации и нумерации. Таким образом, CDR могут упоминаться согласно Kabat, Chothia, контактным или любым другим граничным определениям, содержа описанную в настоящем документе систему нумерации. Несмотря на разные границы, каждая из этих систем имеет некоторую степень сообщения в том, что составляет так называемые «гипервариабельные участки» внутри вариабельных последовательностей. Определения CDR в соответствии с этими системами могут, следовательно, различаться по длине и граничным областям по отношению к прилежащему каркасному участку. См., например, Kabat (подход, основанный на межвидовой изменчивости последовательностей), Chothia (подход, основанный на кристаллографических исследованиях комплексов антиген-антитело) и/или MacCallum (Kabat et al., loc. cit; Chothia et al., J Mol. Biol, 1987, 196: 901-917 и MacCallum et al., J. Mol. Biol, 1996, 262: 732). Еще одним стандартом для характеристики сайта связывания антигена является определение AbM, применяемое программой моделирования антител Oxford Molecular's AbM. См., например, Анализ последовательности и структуры белка вариабельных доменов антитела. В: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. и Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg). В той мере, в какой два метода идентификации остатков определяют перекрывающиеся, но не идентичные участки, они могут быть объединены для определения гибридного CDR. Однако предпочтительна нумерация по так называемой системе Kabat.
Обычно CDR формируют петлевую структуру, которую можно классифицировать как каноническую структуру. Термин «каноническая структура» относится к конформации основной цепи, которую принимают антиген-связывающие (CDR) петли. Сравнительными структурными исследованиями было обнаружено, что пять из шести антиген-связывающих петель имеют только ограниченный репертуар доступных конформаций. Каждую каноническую структуру можно охарактеризовать торсионными углами полипептидного остова. Соответствующие петли между антителами могут, следовательно, иметь очень похожие трехмерные структуры, несмотря на высокую вариабельность аминокислотной последовательности в большинстве частей петель (Chothia и Lesk, J. Mol. Biol., 1987, 196: 901; Chothia et al., Nature, 1989, 342: 877; Martin and Thornton, J. Mol. Biol, 1996, 263: 800). Кроме того, существует взаимосвязь между принятой структурой петли и окружающими ее аминокислотными последовательностями. Конформация конкретного канонического класса определяется длиной петли и аминокислотными остатками, находящимися в ключевых положениях внутри петли, а также внутри консервативного каркаса (т.е. вне петли). Отнесение к конкретному каноническому классу, следовательно, может быть выполнено на основе присутствия этих ключевых аминокислотных остатков.
Термин «каноническая структура» может также содержать соображения относительно линейной последовательности антитела, например, как каталогизировано Kabat (Kabat et al., Ioc. cit.). Схема (система) нумерации по Kabat является широко принятым стандартом для последовательной нумерации аминокислотных остатков вариабельного домена антитела и является предпочтительной схемой, задействованной в настоящем изобретении, как также упоминается везде в настоящем документе. Дополнительные структурные соображения также могут быть применены для определения канонической структуры антитела. Например, те различия, которые не полностью отражены в нумерации Kabat, могут быть описаны системой нумерации Chothia et al. и/или выявленные другими методами, например кристаллографией и двух- или трехмерным компьютерным моделированием. Соответственно, данная последовательность антитела может быть помещена в канонический класс, который позволяет, среди прочего, идентифицировать соответствующие последовательности шасси (например, на основании желания сделать библиотеку содержащей множество канонических структур). Нумерация по Kabat аминокислотных последовательностей антител и структурные соображения, как описано Chothia et al., Ioc. cit. и их значение для конструирования канонических аспектов структуры антитела описаны в литературе. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации различных классов иммуноглобулинов хорошо известны в данной области. Для обзора структуры антител см. Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, ред. Harlow et al., 1988. Глобальным референтным источником в иммуноинформатике является база данных трехмерной (3D) структуры Международной информационной системы ImMunoGenetics (IMGT) (Ehrenmann et al., 2010, Nucleic Acids Res., 38, D301-307). Структурные данные базы данных трехмерной структуры IMGT (IMGT/3Dstructure-DB) извлекаются из Банка данных белков (PDB) и аннотируются в соответствии с концепциями классификации IMGT с применением внутренних инструментов. Таким образом, IMGT/3Dstructure-DB обеспечивает ближайшие гены и аллели, которые экспрессируются в аминокислотных последовательностях трехмерных структур, путем выравнивания этих последовательностей со справочным каталогом IMGT. Этот каталог вмещает, для рецепторов антигенов, аминокислотные последовательности доменов, кодируемых константными генами, а также трансляцию вариабельной зародышевой линии и присоединяющихся генов. Участки CDR наших аминокислотных последовательностей предпочтительно определяли с применением базы данных IMGT/3Dstructure.
CDR3 легкой цепи и, особенно, CDR3 тяжелой цепи могут составлять наиболее важные детерминанты связывания антигена в вариабельных участках легкой и тяжелой цепи. В некоторых конструкциях антител CDR3 тяжелой цепи, по-видимому, составляет основную площадь контакта между антигеном и антителом. Схемы отбора in vitro, в которых варьируется только CDR3, можно применять для изменения связывающих свойств антитела или определения того, какие остатки вносят вклад в связывание антигена. Следовательно, CDR3 обычно является самым большим источником молекулярного разнообразия в сайте связывания антитела. Например, НЗ может состоять всего из двух аминокислотных остатков или из более чем 26 аминокислот.
В классическом полно размерном антителе или иммуноглобулине каждая легкая (L) цепь связана с тяжелой (Н) цепью одной ковалентной дисульфидной связью, в то время как две Η-цепи связаны друг с другом одной или более дисульфидными связями в зависимости от изотипа Η-цепи. Домен СН, наиболее проксимальный к VH, обычно обозначается как СН1. Константные («С») домены не подразумевают непосредственного участия в связывании антигена, но проявляют различные эффекторные функции, такие как антителозависимая, клеточно-опосредованная цитотоксичность и активация комплемента. Участок Fc антитела включен в константные домены тяжелой цепи и, например, способен взаимодействовать с рецепторами Fc, расположенными на клеточной поверхности.
Последовательность генов антител после сборки и соматической мутации сильно различается, и оценочно эти разнообразные гены кодируют 1010 различных молекул антител (Immunoglobulin Genes, 2-е изд., ред. Jonio et al., Academic Press, San Diego, CA, 1995). Соответственно, иммунная система обеспечивает репертуар иммуноглобулинов. Термин «репертуар» относится по меньшей мере к одному из группы, состоящей из нуклеотидных последовательностей, полностью или частично полученных из по меньшей мере одной последовательности, кодирующей по меньшей мере один иммуноглобулин. Последовательность (-и) может (-гут) быть получена (-ы) путем перестройки in vivo сегментов V, D и J тяжелых цепей и сегментов V и J легких цепей. Альтернативно, последовательность (-и) может (-гут) быть получена (-ы) из клетки, в ответ на которую происходит перестройка, например, стимуляция in vitro. Альтернативно, часть или вся последовательность (-и) может (-гут) быть получена (-ы) сплайсингом ДНК, синтезом нуклеотидов, мутагенезом и другими методами, см., например, патент США 5565332. Репертуар может содержать только одну последовательность или может содержать множество последовательностей, содержа те, которые входят в генетически диверсифицированную коллекцию.
Конструкция антитела, определенная в контексте изобретения, может также включать дополнительные домены, которые, например, полезны при выделении молекулы или относятся к адаптированному фармакокинетическому профилю молекулы. Домены, полезные для выделения конструкции антитела, могут быть выбраны из пептидных мотивов или вторично внесенных фрагментов, которые могут быть захвачены способом выделения, например колонкой для выделения. Неограничивающие варианты осуществления таких дополнительных доменов включают пептидные мотивы, известные как Мус-метка, НАТ-метка, НА-метка, ТАР-метка, GST-метка, хитин-связывающий домен (CBD-метка), мальтозо-связывающий белок (МВР-метка), Flag-метка, Strep-метка и их варианты (например, Strepll-метка) и His-метка. Все описанные в настоящем документе конструкции антител, характеризующиеся идентифицированными CDR, могут включать домен His-метка, который обычно известен как повтор последовательных остатков гистидина (His) в аминокислотной последовательности молекулы, предпочтительно пяти, а более предпочтительно шести остатков His (гекса-гистидин). His-метка может быть расположена, например, на N- или С-конце конструкции антитела, предпочтительно она расположена на С-конце. Наиболее предпочтительно гекса-гистидиновая метка (НННННН) (SEQ ID NO: 25) связана посредством пептидной связи с С-концом конструкции антитела согласно изобретению. Кроме того, система конъюгата полилактид-ко-гликолид полиэтиленгликоль - полилактид-ко-гликолид, ПЛГА-ПЭГ-ПЛГА (PLGA-PEG-PLGA) может быть объединена с полигистидиновой меткой для приложения с замедленным высвобождением и улучшения фармакокинетического профиля.
Также обдуманы модификации аминокислотной последовательности описанных в настоящем документе конструкций антител. Например, может быть желательно улучшить аффинность связывания и/или другие биологические свойства конструкции антитела. Варианты аминокислотных последовательностей конструкций антител получают путем внесения соответствующих нуклеотидных изменений в нуклеиновую кислоту конструкций антител или путем пептидного синтеза. Все описанные ниже модификации аминокислотной последовательности должны приводить к конструкции антитела, которая все же сохраняет желаемую биологическую активность (связывание с рецептором NK-клетки, например, CD16a, и поверхностным антигеном клетки-мишени) немодифицированной родительской молекулы.
Термин «аминокислота» или «аминокислотный остаток» обычно относится к аминокислоте, имеющей определение, принятое в данной области, такой как аминокислота, выбранная из группы, состоящей из: аланина (Ala или А); аргинина (Arg или R); аспарагина (Asn или N); аспарагиновой кислоты (Asp или D); цистеина (Cys или С); глутамина (Gin или Q); глутаминовой кислоты (Glu или Е); глицина (Gly или G); гистидина (His или Н); изолейцина (Не или I): лейцина (Leu или L); лизина (Lys или K); метионина (Met или М); фенилаланина (Phe или F); пролина (Pro или Р); серина (Ser или S); треонина (Thr или Т); триптофана (Trp или W); тирозина (Tyr или Y); и валина (Val или V), хотя при желании можно применять модифицированные, синтетические или редкие аминокислоты. Обычно аминокислоты могут быть сгруппированы как имеющие неполярную боковую цепь (например, Ala, Cys, Не, Leu, Met, Phe, Pro, Val); отрицательно заряженную боковую цепь (например, Asp, Glu); положительно заряженную боковую цепь (например, Arg, His, Lys); или незаряженную полярную боковую цепь (например, Asn, Cys, Gin, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp и Tyr).
Аминокислотные модификации содержат, например, удаления и/или вставки, и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях конструкций антител. Любая комбинация удаления, вставки и замены делается для получения конечной конструкции при обеспечении условия, что конечная конструкция обладает желаемыми характеристиками. Изменения аминокислот также могут изменять посттрансляционные процессы конструкций антител, такие как изменение количества или положения сайтов гликозилирования.
Например, 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислот могут быть вставлены, заменены или удалены в каждый из CDR (конечно, в зависимости от их длины), в то время как 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 25 аминокислот могут быть вставлены, заменены или удалены в каждом из FRob. Предпочтительно, вставки аминокислотной последовательности в конструкцию антитела содержат амино- и/или карбоксиконцевые слияния в диапазоне длины от 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 остатков до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также вставки внутрь последовательности одного или нескольких аминокислотных остатков. Соответствующие модификации также могут быть выполнены в третьем домене конструкции антитела, определенном в контексте изобретения. Вставочный вариант конструкции антитела, определенный в контексте изобретения, содержит слияние с N-концом или с С-концом конструкции антитела фермента или слияние с полипептидом.
Сайты, представляющие наибольший интерес для замещающего мутагенеза, содержат (без ограничения перечисленными) CDR тяжелой и/или легкой цепи, особенно гипервариабельные участки, но изменения FR в тяжелой и/или легкой цепи также рассматриваются. Замены предпочтительно представляют собой консервативные замены, как описано в настоящем документе. Предпочтительно, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот могут быть заменены в CDR, в то время как 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 25 аминокислот могут быть заменены в каркасных участках (FR), в зависимости от длины CDR или FR. Например, если последовательность CDR охватывает 6 аминокислот, предполагается, что одна, две или три из этих аминокислот заменены. Аналогичным образом, если последовательность CDR охватывает 15 аминокислот, предполагается, что одна, две, три, четыре, пять или шесть из этих аминокислот заменены.
Полезный способ идентификации определенных остатков или участков конструкций антител, которые являются предпочтительными местами для мутагенеза, называется «аланин-сканирующий мутагенез», какописано Cunningham и Wells в Science, 244:1081-1085 (1989). Здесь остаток или группа остатков-мишеней в конструкции антитела идентифицируются (например, заряженные остатки, такие как arg, asp, his, lys и glu) и заменяются нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (наиболее предпочтительно аланином или полиаланином), чтобы влиять на взаимодействие аминокислот с эпитопом.
Те положения аминокислот, которые демонстрируют функциональную чувствительность к заменам, затем усовершенствуют путем внесения дополнительных или других вариантов в, или для, сайты (-ов) замены. Таким образом, хотя сайт или участок для внесения вариации аминокислотной последовательности предопределены, природа мутации как таковая не требует предварительного определения. Например, чтобы проанализировать или оптимизировать эффект мутации в данном сайте, можно провести сканирование аланином или случайный мутагенез в целевом кодоне или участке, и экспрессированные варианты конструкции антитела подвергаются скринингу на предмет оптимальной комбинации желаемой активности. Техники создания заменяющих мутаций в заранее определенных сайтах ДНК, имеющих известную последовательность, хорошо известны, например, мутагенез с помощью праймера М13 и мутагенез с помощью ПЦР. Скрининг мутантов проводится с применением анализов активности связывания антигена, такого как рецептор NK-клеток, например CD16a, и связывания поверхностного антигена клетки-мишени.
Обычно, если аминокислоты замещены в одной или более или всех CDR тяжелой и/или легкой цепи, предпочтительно, чтобы полученная таким образом «замещенная» последовательность была по меньшей мере на 60% или 65%, еще более предпочтительно на 70% или 75%, даже более предпочтительно на 80% или 85% и особенно предпочтительно на 90% или 95% идентична «оригинальной» последовательности CDR. Это означает, что от длины CDR зависит то, в какой степени она идентична «замещенной» последовательности. Например, CDR, имеющий 5 аминокислот, предпочтительно на 80% идентичен его замещенной последовательности, чтобы иметь по меньшей мере одну аминокислоту замещенной. Соответственно, CDR конструкции антитела могут иметь различные степени идентичности с их замещенными последовательностями, например, CDRL1 может иметь 80%, тогда как CDRL3 может иметь 90%.
Предпочтительные замены (или замещения) представляют собой консервативные замены. Однако любая замена (содержа при этом неконсервативную замену или одну или более «иллюстративных замен», перечисленных в Таблице 3 ниже) предусматривается до тех пор, пока конструкция антитела сохраняет свою способность связываться с рецептором NK-клетки, например CD16a, через первый домен, и с поверхностным антигеном клетки-мишени через второй домен и/или его CDR идентичны замещенной последовательности (по меньшей мере на 60% или 65%, более предпочтительно на 70% или 75%, еще более предпочтительно на 80%% или 85%, и особенно предпочтительно на 90% или 95% идентичны «оригинальной» последовательности CDR).
Консервативные замены показаны в Таблице 1 под заголовком «предпочтительные замены». Если такие замены приводят к изменению биологической активности, тогда более существенные изменения, названные «иллюстративными заменами» в Таблице 1 или, как дополнительно описано ниже в соотношении с классами аминокислот, могут быть внесены, и продукты будут подвергаться скринингу на предмет желаемой характеристики.
Существенные модификации биологических свойств конструкции антитела по настоящему изобретению достигаются путем выбора замен, которые значительно различаются по своему влиянию на поддержание (а) структуры полипептидного остова в области замены, например, в виде листа или спиральной конформации, (b) заряда или гидрофобности молекулы в целевом сайте, или (с) массива боковой цепи. Встречающиеся в природе остатки делятся на группы на основе общих свойств боковой цепи: (1) гидрофобные: норлейцин, met, ala, val, leu, ile; (2) нейтральные гидрофильные: cys, ser, thr, asn, gin; (3) кислые: asp, glu; (4) основные: his, lys, arg; (5) остатки, влияющие на ориентацию цепи: gly, pro; и (6) ароматические: trp, tyr, phe.
Неконсервативные замены повлекут за собой замену члена одного из этих классов на другой класс. Любой остаток цистеина, в отношении которого не подразумевается, что он участвует в поддержании надлежащей конформации конструкции антитела, может быть заменен, как правило, серином для улучшения окислительной стабильности молекулы и предотвращения аберрантного перекрестного связывания. Напротив, цистеиновая (-ые) связь (-и) может (-гут) быть добавлена (-ы) к антителу для повышения его стабильности (особенно когда антитело представляет собой фрагмент антитела, такой как фрагмент Fv).
Для аминокислотных последовательностей идентичность и/или сходство последовательностей определяют с применением стандартных методик, известных в данной области, содержа, без ограничения перечисленными, алгоритм идентичности локальных последовательностей Smith и Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2: 482, алгоритм выравнивания идентичности последовательностей Needleman и Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443, способ поиска сходства Pearson и Lipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 85: 2444, компьютеризированные варианты реализации этих алгоритмов (GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA в пакете программного обеспечения Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.), программу последовательностей Best Fit, описанная Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12: 387-395, желательно с применением настроек по умолчанию или путем проверки. Предпочтительно процент идентичности рассчитывается FastDB на основе следующих параметров: штраф за несовпадение, составляющий 1; штраф за гэп, составляющий 1; штраф за длину гэпа, составляющий 0,33; и штраф за присоединение, составляющий 30, "Current Methods in Sequence Comparment and Analysis", Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, c. 127-149 (1988), Alan R. Liss, Inc.
Примером полезного алгоритма является PILEUP. PILEUP создает множественное выравнивание последовательностей из группы связанных последовательностей с применением прогрессивных попарных выравниваний. Он также может построить дерево, показывающее отношения кластеризации, применяемые для создания выравнивания. PILEUP применяет упрощение способа прогрессивного выравнивания Feng & Doolittle, 1987, J. Mol. Evol. 35: 351-360; способ аналогичен описанному Higgins и Sharp, 1989, CABIOS 5: 151-153. Полезные параметры PILEUP содержат вес гэпа по умолчанию, составляющий 3,00, вес длины гэпа по умолчанию, составляющий 0,10, и концевые гэпы с приданным весом.
Другим примером полезного алгоритма является алгоритм BLAST (Средство поиска основного локального выравнивания), описанный в: Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215: 403-410; Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402; и Karin et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 5873-5787. Особенно полезной программой BLAST является программа WU-BLAST-2, которая была получена от Altschul et al., 1996, Methods in Enzymology 266: 460-480. WU-BLAST-2 использует несколько параметров поиска, в большинстве из которых установлены значения по умолчанию. Регулируемые параметры устанавливаются со следующими значениями: охват перекрытия = 1, фракция перекрытия = 0,125, порог слова (Т)=II. Параметры HSP S и HSP S2 являются динамическими значениями и устанавливаются самой программой в зависимости от композиции конкретной последовательности и композиции конкретной базы данных, по которой выполняется поиск интересующей последовательности; однако значения можно отрегулировать для увеличения чувствительности.
Дополнительным полезным алгоритмом является BLAST с гэпами, как сообщается Altschul et al., 1993, Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402. BLAST с гэпами применяет очки за замену BLOSUM-62; пороговый параметр Τ установлен на 9; способ двух попаданий для запуска расширений без гэпов штрафует за длину гэпов, составляющую k, в размере 10+k; для Xu установлено значение 16, а для Xg установлено значение 40 для этапа поиска в базе данных и 67 для этапа вывода алгоритмов. Выравнивания с гэпами запускаются счетом, соответствующим около 22 битам.
Как правило, аминокислотная гомология, сходство или идентичность между индивидуальными вариантными CDR или последовательностями VH/VL составляет по меньшей мере 60% от последовательностей, указанных в данном документе, и более типично с предпочтительным увеличением гомологии или идентичности по меньшей мере на 65% или 70%, более предпочтительно по меньшей мере на 75% или 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% и почти на 91%. Аналогичным образом, «процент (%) идентичности последовательности нуклеиновой кислоты» по отношению к последовательности нуклеиновой кислоты связывающих белков, идентифицированных в настоящем документе, определяется как процент нуклеотидных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны нуклеотидным остаткам в кодирующей последовательности конструкции антитела. В специфичном способе используется модуль BLASTN (Медленное сравнение с целью поиска всех сходных последовательностей) программы WU-BLAST-2, настроенный на параметры по умолчанию, с охватом перекрытия и фракцией перекрытия, установленными на 1 и 0,125, соответственно.
Как правило, гомология, сходство или идентичность последовательностей нуклеиновых кислот между нуклеотидными последовательностями, кодирующими индивидуальные вариантные CDR или последовательности VH/VL, и нуклеотидными последовательностями, указанными в данном документе, составляют по меньшей мере 60%, и более типично с предпочтительно увеличивающейся гомологией или идентичностью по меньшей мере 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% и почти 100%. Таким образом, «вариантный CDR» или «вариантный участок VH/VL» является участком с указанной гомологией, сходством или идентичностью с родительским CDR/VH/VL, определенным в контексте изобретения, и разделяет биологическую функцию, включая, без ограничения перечисленным, по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% специфичности и/или активности родительского CDR или VH/VL.
В одном варианте осуществления процент идентичности с человеческой зародышевой линией конструкции антитела в соответствии с изобретением составляет более 70% или более 75%, более предпочтительно более 80% или более 85%, даже более предпочтительно более 90% и наиболее предпочтительно более 91%, более 92%, более 93%, более 94%, более 95% или даже более 96%. Идентичность продуктам генов зародышевой линии человеческих антител считается важным признаком снижения риска вызывания терапевтическими белками иммунного ответа против лекарственного средства у пациента во время лечения. Hwang & Foote ("Immunogenicity of engineered antibodies"; Methods 36 (2005) 3-10) демонстрируют, что уменьшение нечеловеческих частей конструкций лекарственных антител приводит к снижению риска индукции антител к лекарствам у пациентов во время лечения. Путем сравнения исчерпывающего количества клинически оцененных лекарств на основе антител и соответствующих данных об иммуногенности показана тенденция, согласно которой гуманизация V-участков антител делает белок менее иммуногенным (в среднем 5,1% пациентов), чем антитела, несущие неизмененные нечеловеческие V-участки (в среднем 23,59% пациентов). Более высокая степень идентичности человеческим последовательностям, следовательно, желательна для белковых терапевтических средств на основе V-участка в форме конструкций антител. Для этой цели определения идентичности зародышевой линии V-участки VL могут быть выровнены с аминокислотными последовательностями V-сегментов и J-сегментов человеческой зародышевой линии (http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/) с применением программного обеспечения Vector NTI и аминокислотной последовательности, рассчитанной путем деления идентичных аминокислотных остатков на общее количество аминокислотных остатков VL в процентах. То же самое может быть сделано для сегментов VH (http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/) за исключением того, что VH CDR3 может быть исключен из-за его высокого разнообразия и отсутствия существующих партнеров для выравнивания VH CDR3 человеческой зародышевой линии. Затем можно применять рекомбинантные техники для увеличения идентичности последовательности к генам антител человеческой зародышевой линии.
Термин «миеломная клетка» означает злокачественную (раковую) плазматическую клетку, возникающую из плазматической клетки в костном мозге в результате неопластической трансформации. При миеломе злокачественные плазматические клетки продуцируют большое количество аномальных антител, которые не способны бороться с инфекцией. Эти аномальные антитела представляют собой так называемый моноклональный белок или М-белок, который функционирует как опухолевый маркер миеломы. Клетка миеломы имеет фенотип CD19 -/CD38+/CD138+/BCMA+. Следовательно, CD38, CD138 и ВСМА представляют собой антигены, экспрессируемые на миеломной клетке. Также здесь содержатся злокачественные фенотипы в линии В-клеток, которые положительны по CD19/CD20/CD22/BCMA и другим антигенам (это должно содержать фенотипы, которые классически не понимаются как плазматические клетки, но могут развиваться из В-клеток памяти или пре-плазматической клеточной линии).
Термин «РЭФР» («EGFR») относится к рецептору эпидермального фактора роста (EGFR; ErbB-1; HER1) у человека, содержа все изоформы или варианты, описанные с активацией, мутациями и вовлеченные в патофизиологические процессы. Связывающий сайт антигена РЭФР (EGFR) распознает эпитоп во внеклеточном домене РЭФР (EGFR). В некоторых вариантах осуществления антиген-связывающий сайт специфично связывается с РЭФР (EGFR) человека и яванского макака. Рецептор эпидермального фактора роста, РЭФР (EGFR) является членом семейства HER рецепторных тирозинкиназ и состоит из четырех членов: EGFR (ErbB1/HER1), HER2/neu (ErbB2), HER3 (ErbB3) и HER4 (ErbB4). Стимуляция рецептора посредством связывания лиганда (например, EGF, TGFa, HB-EGF, нейрегулины, бетацеллулин, амфирегулин) активирует внутреннюю рецепторную тирозинкиназу во внутриклеточном домене через фосфорилирование тирозина и способствует гомо- или гетеродимеризации рецептора с членами семейства HER. Эти внутриклеточные фосфотирозины служат в качестве стыковочных сайтов для различных адаптерных белков или ферментов, включая SHC, GRB2, PLCg и PI(3)K/Akt, которые одновременно инициируют множество сигнальных каскадов, которые влияют на пролиферацию клеток, ангиогенез, устойчивость к апоптозу, инвазию и метастазирование.
СИФ (MFI) означает среднюю интенсивность флуоресценции.
Подробное описание изобретения:
Таким образом, в первом аспекте настоящее изобретение обеспечивает выделенные человеческие NK-клетки в криоконсервированном состоянии, предварительно нагруженные перед замораживанием конструкцией антитела, указанная конструкция антитела включает по меньшей мере первый связывающий домен, связывающийся с антигеном рецептора NK-клетки на клеточной поверхности иммунологической эффекторной клетки и второй связывающий домен, связывающий с клеточной поверхностью антиген на клеточной поверхности клетки-мишени.
Более того, в другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ восстановления/получения таких жизнеспособных человеческих NK-клеток, предварительно нагруженных такой конструкцией антитела, из криоконсервированного состояния.
На сегодняшний день готовые продукты (аллогенные) сильно отстают от индивидуализированных (аутологичных) подходов. Хотя аутологичный перенос клеток валидирован клинически, производство клеточных продуктов требуется наладить для каждого отдельного пациента. Индивидуализированное производства требует от 7 до 14 дней для выделения, размножения и получения клеток, несмотря на то, что используются различные стратегии оптимизации. Одним из ограничений является то, что для некоторых пациентов аутологичное размножение их иммунных клеток не дает достаточного количества клеток. Кроме того, было описано, что иммунные эффекторные клетки больного раком функционально ослаблены из-за иммуносупрессии и измененных фенотипов. Следовательно, вариабельность между пациентами отрицательно влияет как на индивидуализированное производство, так и на клиническую эффективность.
В отличие от аутологичных подходов, готовые аллогенные продукты предлагают уникальные преимущества: такие продукты могут быть задействованы по отношению к пациенту сразу же, то есть сразу после размораживания, что значительно сокращает время цепи снабжения/логистики и увеличивает доступность продукта вне одного централизованного госпиталя. Большие партии аллогенных иммунных эффекторных клеток могут быть произведены в централизованной производственной точке, что не только снижает производственные затраты, но также увеличивает однородность продукта иммунных эффекторных клеток, обеспечивая соблюдение высоких стандартов качества. Такие централизованные предприятия могут также позволить отбор подходящих здоровых доноров для применения наиболее функциональной популяции эффекторных клеток для производственного процесса.
Как уже указывалось выше, согласно первому варианту осуществления настоящего изобретения обеспечены выделенные человеческие NK-клетки в криоконсервированном состоянии, предварительно нагруженные перед замораживанием конструкцией антитела, указанная конструкция антитела содержит по меньшей мере первый связывающий домен, связывающийся с антигеном рецептора NK-клетки на клеточной поверхности иммунологической эффекторной клетки, и второй связывающий домен, связывающий с клеточной поверхностью антиген на клеточной поверхности клетки-мишени, который может происходить из любого из вышеуказанных источников.
NK-клетки, применяемые в контексте изобретения, представляют собой, например, выделенные из мононуклеарных клеток периферической крови, МКПК (РВМС) здоровых доноров, характеризующиеся различными фенотипами (например, адаптивные клетки памяти NK100), выделенные из ткани пуповины или плаценты, NK-клетки, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (полученные из ИПСК (iPSC)) (например, FT500 или FT516)) или NK-клеточных линий. Примеры подходящих линий NK-клеток включают, без ограничения перечисленными, клетки NK-92 (АТСС® CRL-2407™), клетки NK-YS (Tsuchiyama et al. 1998, Blood) или клетки NK-YT (Teshigawara et al., J. Immunol., 1985). Также в группу подходящих NK-клеток входят NK-клетки с химерным антигенным рецептором (CAR), которые могут быть получены из любого из вышеуказанных источников.
Термин «ИПСК» (iPSC) в контексте изобретения определяет индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, которые можно применять для создания дифференцированных и специализированных типов клеток (например, NK-клеток) с использованием принципов генной инженерии, определенных средств лечения с помощью малых молекул и размножения клеток.
В некоторых вариантах осуществления изобретения необходимо размножить и/или активировать NK-клетки до стадии предварительной нагрузки клеток указанной конструкцией антитела. Протоколы такого размножения известны в данной области, например, из WO2017/042393, WO2015/132415, US20110014162, US20120308986A1, US9062287B2, US8026097B2, US9260696B2; US20170119865.
В соответствии с изобретением NK-клетки можно культивировать перед инкубацией с конструкцией антитела. Такой этап клеточной культуры может быть необходим для размножения и/или активации соответствующих клеток. Типичные протоколы размножения могут включать отбор клеток CD34+, деплецию клеток CD3+ и инкубацию с питающими клетками, несущими 4-1BBL и/или трансмембранный IL-21, и, необязательно, дополнительную стимуляцию лимфопролиферативными цитокинами, такими как IL-2. В некоторых вариантах осуществления партия NK-клеток, предварительно нагруженных конструкцией антитела, включает 106 и 1012 клеток. Количество предварительно инкубированных клеток, которые могут быть введены пациенту, может находиться в диапазоне от 1×105 до 1×108 NK-клеток на кг веса тела.
В контексте изобретения «клетки в криоконсервированном состоянии» представляют собой клетки, которые были консервированы путем охлаждения до температуры ниже нуля (градусов Цельсия). Криоконсервированные клетки могут или могут не быть консервированы в присутствии криопротекторного агента. Криопротекторный агент, такой как диметилсульфоксид, ДМСО (DMSO), глицерин, этиленгликоль или пропиленгликоль, представляет собой вещество, которое защищает клетки от повреждений, связанных охранением при температуре ниже нуля и/или замораживании, например, от повреждения клеточной мембраны из-за образования кристаллов льда.
Термин «предварительно нагруженный перед замораживанием» относится к предварительной инкубации клеток перед охлаждением до температуры ниже нуля с идентифицированной конструкцией антитела.
Следует отметить, что первый связывающий домен описанной конструкции антитела связывает антиген рецептора NK-клетки на клеточной поверхности иммунологической эффекторной клетки с этим рецептором таким образом, который позволяет поддерживать связывание на клеточной поверхности даже во время и после того, как клетка находится в криоконсервированном состоянии. Как показано в прилагаемом примере 1, конструкции антител, имеющие первый связывающий домен, специфичный для CD16 (а или b), связываются со специфичным эпитопом, отличным от связывающего домена IgG FcRγIII. Предполагается, что связывание с таким специфичным эпитопом позволяет поддерживать связывание даже во время процесса охлаждения NK-клеток согласно одному аспекту изобретения до температуры ниже нуля и последующего восстановления клеток для введения субъекту, испытывающему в этом потребность. Подобные эпитопы существуют также для других антигенов рецептора NK-клеток на клеточной поверхности иммунологических эффекторных клеток, например NKp46 или NKG2D.
Согласно одному варианту осуществления изобретения выделенные человеческие NK-клетки были выделены из ткани пуповины или МКПК (РВМС) от здоровых доноров.
Кроме того, в одном варианте осуществления выделенные человеческие NK-клетки согласно одному аспекту изобретения консервированы в криорастворе. Криораствор в контексте изобретения включает, по меньшей мере, базальную среду для культивирования клеток и криозащитный агент. Более того, криораствор может дополнительно включать изотонический раствор, такой как Plasma-lyte, и/или сывороточный альбумин.
Неограничивающие примеры криозащитных агентов были обеспечены в данном документе выше. Определенными вариантами осуществления криозащитных агентов в контексте изобретения являются ДМСО (DMSO) и глицерин. Концентрация криозащитного агента может находиться в диапазоне от 1% до 30% (об/об), В некоторых вариантах осуществления в диапазоне от 5% до 25% (об/об), в других вариантах осуществления в диапазоне от 10% до 25% (об/об), также в некоторых вариантах осуществления в концентрации, составляющей 20% (об/об). Термин «базальная среда для культивирования клеток» относится в контексте изобретения к жидкой питательной среде для клеточной культуры, которая подходит для клеточной культуры клеток млекопитающих. Примеры таких «базальных среда для культивирования клеток» хорошо известны в данной области. Концентрация изотонического раствора может находиться в диапазоне от 1% до 60% (об/об), в некоторых вариантах осуществления в диапазоне от 10% до 50% (об/об), в других вариантах осуществления в диапазоне от 20% до 45% (об/об) и в одном варианте осуществления в концентрации, составляющей 40% (об/об). Сывороточный альбумин может быть человеческим или (фетальным) бычьим (предпочтительно человеческим) сывороточным альбумином, который был выделен от доноров или получен рекомбинантно. Концентрация альбумина в криорастворе может находиться в диапазоне от 1% до 40% (об/об), в некоторых вариантах осуществления в диапазоне от 5% до 25% (об/об), также в некоторых вариантах осуществления в диапазоне от 10% до 20% (об/об). Пример криораствора (замораживающей среды) может включать базальную среду, 40% Plasma-lyte, человеческий сывороточный альбумин, ЧСА (HSA) и 10% диметилсульфоксид, ДМСО (DMSO). Альтернативно можно применять фетальную бычью сыворотку, ФБС (FBS) или глицерин для замены ЧСА (HSA) и/или ДМСО (DMSO) соответственно. Наиболее часто применяемым криопротектором является ДМСО (DMSO). В силу разных причин ДМСО (DSMO) может быть заменен альтернативными соединениями, такими как глицерин, этиленгликоль или пропиленгликоль.
Согласно определенному варианту осуществления NK-клетки одного аспекта изобретения были предварительно нагружены в растворе, содержащем конструкцию антитела в концентрации по меньшей мере 5 нМ. В определенных вариантах осуществления концентрация составляет по меньшей мере 10 нМ, более того, в определенных вариантах осуществления концентрация составляет по меньшей мере 25 нМ, также в определенных вариантах осуществления концентрация составляет по меньшей мере 50 нМ, в определенных вариантах осуществления концентрация составляет по меньшей мере 75 нМ, 90 нМ, 100 нМ, 125 нМ или 150 нМ.
Антиген рецептора NK-клетки, с которым связывается первый связывающий домен конструкции антитела на поверхности выделенных человеческих NK-клеток согласно одному аспекту изобретения выбран из группы, состоящей из CD16a, CD16b, NKp46, NKG2D и CD16a+CD16b.
Определенные варианты осуществления рецепторов NK-клеток были определены в настоящем документе выше. Первый связывающий домен указанной конструкции антитела связывается, таким образом, либо специфично с CD16a, CD16b, либо с CD16a и CD16b. Более того, первый связывающий домен может специфично связываться с NKp46 или NKG2D.
Антиген клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени, с которой связывается второй связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD52, CD70, CD74, CD79b, CD123, CLL1, ВСМА, FCRH5, EGFR, EGFRvIII, HER2, GD2.
Эти антигены клеточной поверхности на поверхности клеток-мишеней связаны со специфичными патологическими образованиями. CD30 является антигеном клеточной поверхности, характерным для злокачественных клеток лимфомы Ходжкина. CD19, CD20, CD22, CD70, CD74 и CD79b являются антигенами клеточной поверхности, характерными для злокачественных клеток неходжкинских лимфом (диффузная крупно-В-клеточная лимфома (DLBCL), мантийноклеточная лимфома (MCL), фолликулярная лимфома (FL), Т- клеточные лимфомы (как периферические, так и кожные, содержа трансформированный грибовидный микоз/синдром Сезари TMF/SS и анапластическую крупноклеточную лимфому (ALCL)). CD52, CD33, CD123, CLL1 являются антигенами клеточной поверхности, характерными для злокачественных клеток при лейкозах (хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), острый лимфобластный лейкоз (ALL), острый миелоидный лейкоз (AML)). ВСМА, FCRH5 являются антигенами клеточной поверхности, характерными для злокачественных клеток при множественной миеломе. РЭФР (EGFR), HER2, GD2 являются антигенами клеточной поверхности, характерными для солидного рака (трижды отрицательный рак молочной железы (TNBC), рак молочной железы (ВС), коло ректальный рак (CRC), немелкоклеточная карцинома (NSCLC), мелкоклеточная карцинома (SCLC), также известная как «мелкоклеточный рак легкого» или «овсяноклеточная карцинома»), рак простаты (PC), глиобластома (также известная как мультиформная глиобластома (GBM)).
В одном варианте осуществления человеческих NK-клеток согласно одному аспекту изобретения конструкция антитела включает в первом связывающем домене три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из:
(a) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 29, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 30, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 31, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 32, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 33, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 34;
(b) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 40, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 41, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 42, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 43, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 44, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 45;
(c) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 51, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 52, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 53, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 54, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 55, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 56;
(d) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 62, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 63, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 64, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 65, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 66, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 67;
(e) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 73, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 74, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 75, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 76, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 77, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 78;
(f) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 84, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 85, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 86, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 87, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 88, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 89; и
(g) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 95, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 96, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 97, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 98, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 99, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 100.
Также в одном варианте осуществления выделенных человеческих NK-клеток в соответствии с одним аспектом изобретения конструкция антитела включает в первом связывающем домене пары VH- и VL-цепей, имеющих последовательность, указанную в парах последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 35 и SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 57 и SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90 и SEQ ID NO: 91, и SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 102.
В варианте осуществления выделенных человеческих NK-клеток согласно одному аспекту изобретения конструкция антитела включает во втором связывающем домене три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из:
(a) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 106, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 107, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 108, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 109, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 110, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 111;
(b) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 106, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 107, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 108, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 109, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 110, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 111;
(c) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 117, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 118, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 119, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 120, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 121, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 122.
Кроме того, в одном варианте осуществления выделенных человеческих NK-клеток в соответствии с одним аспектом изобретения конструкция антитела включает во втором связывающем домене пары VH- и VL-цепей, имеющих последовательность, указанную в парах последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 123 и SEQ ID NO: 124, и SEQ ID NO: 134 и SEQ ID NO: 135.
В одном варианте осуществления выделенной NK-клетки человека согласно одному аспекту изобретения конструкция антитела включает последовательность белка, указанную в SEQ ID NOs: 161-171.
В альтернативном варианте осуществления согласно настоящему изобретению предложен способ получения криоконсервированных предварительно нагруженных человеческих NK-клеток в криоконсервированном состоянии, указанный способ включает
(i) инкубирование NK-клеток с конструкцией антитела, указанная конструкция антитела включает, по меньшей мере, первый связывающий домен, связывающийся с антигеном рецептора NK-клетки на клеточной поверхности иммунологической эффекторной клетки, и второй связывающий домен, связывающий с клеточной поверхностью антиген на клеточной поверхности клетки-мишени; и
(ii) замораживание NK-клеток.
Кроме того, согласно настоящему изобретению предложен такой способ, в котором NK-клетки выделяют из ткани пуповины, ИПСК (iPSC) или МКПК (РВМС) от здоровых доноров.
Как описано выше, NK-клетки, указанные в способе согласно одному аспекту изобретения, были предварительно нагружены в растворе, содержащем конструкцию антитела в концентрации по меньшей мере 5 нМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация составляет по меньшей мере 10 нМ, в некоторых вариантах осуществления в концентрации по меньшей мере 25 нМ, по меньшей мере 50 нМ или по меньшей мере 75 нМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация составляет по меньшей мере 90 нМ, 100 нМ, 125 нМ или 150 нМ.
В одном варианте осуществления способа согласно одному аспекту изобретения антиген рецептора NK-клетки, с которым связывается первый связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD16a, CD16b, NKp46, NKG2D и CD16a+CD16b.
Кроме того, согласно определенным вариантам осуществления, антиген клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени, с которой связывается второй связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD52, CD70, CD74, CD79b, CD123, CLL1, ВСМА, FCRH5, EGFR, HER2, GD2.
В соответствии со способом согласно одному аспекту изобретения для получения криоконсервированных предварительно нагруженных человеческих NK-клеток этап замораживания NK-клеток выполняется с применением среды для замораживания/криораствора. Некоторые композиции и соединения замораживающей среды/криораствора в соответствии с изобретением были описаны в настоящем документе выше.
В некоторых вариантах этого способа NK-клетки выделяют из ткани пуповины, ИПСК (iPSC) или МКПК (РВМС) от здоровых доноров.
Также для этого способа в одном аспекте изобретения предусмотрено, что NK-клетки предварительно нагружают в растворе, включающем конструкцию антитела в концентрации по меньшей мере 5 нМ.
Более того, в соответствии с изобретением находится то, что антиген рецептора NK-клетки, с которым связывается первый связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD16a, CD16b, NKp46, NKG2D и CD16a+CD16b.
Также для этого способа в одном аспекте изобретения предусмотрено, что антиген клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени, с которой связывается второй связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD19, CD22, CD30, CD33, CD52, CD70, CD74, CD79b, CD123, CLL1, ВСМА, FCRH5, EGFR, HER2, GD2.
Согласно одному варианту осуществления этого способа в одном аспекте изобретения этап замораживания NK-клеток выполняется с применением среды для замораживания, которая вмещает, по меньшей мере, базальную среду для культивирования клеток и криозащитный агент.
В одном аспекте способа по изобретению конструкция антитела, применяемая в способе, представляет собой одну из конструкций антитела, описанных в настоящем документе выше. В некоторых вариантах осуществления способа изобретения указанная конструкция антитела включает последовательность белка, указанную в SEQ ID NOs: 161-171.
В альтернативном варианте осуществления согласно настоящему изобретению предложен способ восстановления/получения жизнеспособных предварительно нагруженных человеческих NK-клеток из человеческих NK-клеток согласно одному аспекту изобретения в криоконсервированном состоянии, описанном в настоящем документе выше, или полученных согласно способу согласно одному аспекту изобретения для получения криоконсервированных предварительно нагруженных человеческих NK-клеток в криоконсервированном состоянии для введения указанных клеток субъекту, испытывающему в этом потребность, указанный способ включает этап восстановления/получения клеток для введения пациенту путем размораживания.
Размораживание замороженных клеток может быть выполнено хорошо известными способами. Общие процедуры размораживания подразумевают быстрое перемещение замороженных клеток в водяную баню с температурой 37°С и осторожное перемешивание до полного размораживания активированных NK-клеток. После размораживания размороженные NK-клетки можно получить для введения пациенту путем добавления, предпочтительно по каплям, фармацевтически приемлемых носителей при комнатной температуре, например, для разбавления концентрации среды для замораживания и/или промывки ранее активированных NK-клеток. Как показано в настоящем документе, популяции клеток по настоящему изобретению сохраняют свое активированное состояние в комбинации с конструкцией антитела после такой консервации. Подготовка клеток к введению после консервирования зависит от способа консервирования. Например, клетки могут быть получены для введения после консервации клеточной культурой и/или замораживанием одним или более способами: промывка клеток, ресуспендирование клеток в фармацевтически приемлемом носителе и/или помещением клеток в подходящее устройство для доставки, например, шприц. В одном варианте осуществления клетки готовят для введения после криоконсервации путем размораживания, например, осторожным перемешиванием на водяной бане при 37°С, а затем помещают клетки в подходящее устройство для доставки, например, шприц. Неожиданно, эти размороженные популяции клеток могут применяться в клинике почти сразу по мере потребности, например, без реактивации или других обширных и/или длительных манипуляций.
Соответственно, хотя и не необходимо, клетки, полученные для введения после криоконсервации, могут быть дополнительно приготовлены путем добавления, предпочтительно по каплям, фармацевтически приемлемого носителя при комнатной температуре, например, для разбавления концентрации и/или отмывания клеток от среды для замораживания. В одном варианте фармацевтически приемлемый носитель по существу не содержит активирующего агента.
В другом альтернативном варианте осуществления согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция, включающая человеческие NK-клетки, которые были восстановлены из человеческих NK-клеток в криоконсервированном состоянии в соответствии с изобретением или получены способом в соответствии с изобретением.
Некоторые варианты осуществления обеспечивают фармацевтические композиции, включающие предварительно нагруженные NK-клетки, определенные в контексте изобретения, и дополнительно один или более вспомогательных веществ, таких какте, которые иллюстративно описаны в этом разделе и в любых других местах настоящего документа. Вспомогательные вещества могут применяться в изобретении в этом отношении для широкого круга целей, таких как регулировка физических, химических или биологических свойств препаратов, таких как регулировка вязкости, и или способы одного аспекта изобретения для повышения эффективности и или для стабилизации таких препаратов и способов от деградации и порчи вследствие, например, стрессов, возникающих во время производства, транспортировки, хранения, подготовки перед применением, введения и после этого.
В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может вмещать материалы препаратов для целей модификации, поддержания или консервации, например, рН, осмолярности, вязкости, прозрачности, цвета, изотоничности, запаха, стерильности, стабильности, скорости растворения или высвобождения, адсорбции или проникновения в композицию (см. REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18" Edition, (AR Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company). В таких вариантах осуществления подходящие материалы препаратов могут содержать, без ограничения перечисленными:
• аминокислоты, такие как глицин, аланин, глутамин, аспарагин, треонин, пролин, 2-фенилаланин, содержа заряженные аминокислоты, предпочтительно лизин, ацетат лизина, аргинин, глутамат и/или гистидин
• противомикробные, такие как антибактериальные и противогрибковые агенты
• антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, метионин, сульфит натрия или гидросульфит натрия;
• буферы, буферные системы и буферные агенты, которые применяются для поддержания композиции при физиологическом рН или немного более низком рН; примерами буферов являются борат, бикарбонат,
• Трис-HCl, цитраты, фосфаты или другие органические кислоты, сукцинат, фосфат и гистидин; например, Трис-буфер с рН около 7,0-8,5;
• неводные растворители, такие как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и сложные органические эфиры для инъекций, такие как этилолеат;
• водные носители, содержа воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, содержа физиологический раствор и забуференные среды;
• биоразлагаемые полимеры, такие как полиэфиры;
• объемообразующие агенты, такие как маннит или глицин;
• хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота, ЭДТА (EDTA);
• изотонические и замедляющие абсорбцию агенты;
• комплексообразователи, такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин)
• наполнители;
• моносахариды; дисахариды; и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины); углеводы могут быть невосстанавливающими сахарами, предпочтительно трегалозой, сахарозой, октасульфатом, сорбитолом или ксилитом;
• (низкомолекулярные) белки, полипептиды или белковые носители, такие как человеческий или бычий сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины, предпочтительно человеческого происхождения;
• красители и ароматизаторы;
• серосодержащие восстановители, такие как глутатион, тиоктовая кислота, тиогликолят натрия, тиоглицерин, альфа-монотиоглицерин и тиосульфат натрия
• разбавители;
• эмульгаторы;
• гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон)
• солеобразующие противоионы, такие как натрий;
• консерванты, такие как противомикробные средства, антиоксиданты, хелатирующие агенты, инертные газы и тому подобное; примерами являются: бензалкония хлорид, бензойная кислота, салициловая кислота, тиомерсал, фенилэтиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или пероксид водорода);
• комплексы металлов, такие как комплексы Zn-белок;
• растворители и сорастворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль);
• сахара и сахарные спирты, такие как трегалоза, сахароза, октасульфат, маннит, сорбитол или ксилит, стахиоза, манноза, сорбоза, ксилоза, рибоза, миоинизитоза, галактоза, лактитол, рибитол, миоинозитол, галактитол, глицерин, циклитолы (например, инозитол), полиэтиленгликоль; и многоатомные сахарные спирты;
• суспендирующие агенты;
• поверхностно-активные вещества или смачивающие агенты, такие как плюроники, ПЭГ, эфиры сорбитана, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат, тритон, трометамин, лецитин, холестерин, тилоксапал; поверхностно-активные вещества могут быть детергентами, предпочтительно с молекулярной массой более 1,2 кД и/или полиэфиром, предпочтительно с молекулярной массой более 3 кД; неограничивающими примерами предпочтительных детергентов являются Твин 20, Твин 40, Твин 60, Твин 80 и Твин 85; неограничивающими примерами предпочтительных полиэфиров являются ПЭГ 3000, ПЭГ 3350, ПЭГ 4000 и ПЭГ 5000;
• агенты, повышающие стабильность, такие как сахароза или сорбитол;
• агенты, повышающие тоничность, такие как галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия, маннитол сорбитол;
• основы для парентеральной доставки, содержащие раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактат Рингера или жирные масла;
• основы для внутривенной доставки, содержащие пополнители жидкости и питательных веществ, пополнители электролитов (например, на основе декстрозы Рингера).
Для специалистов в данной области очевидно, что различные составляющие фармацевтической композиции (например, перечисленные выше) могут иметь разные эффекты, например, и аминокислота может действовать как буфер, стабилизатор и/или антиоксидант; маннит может действовать как наполнитель и/или агент, повышающий тоничность; хлорид натрия может действовать как основа для доставки и/или агент, повышающий тоничность; и т.д.
В некоторых вариантах осуществления оптимальная фармацевтическая композиция будет определена специалистом в данной области в зависимости, например, от предполагаемого способа введения, формата доставки и желаемой дозировки. См., например, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, выше. Например, подходящей основой или носителем может быть вода для инъекций, физиологический раствор или искусственная спинномозговая жидкость, возможно, с добавлением других материалов, обычно используемых в композициях для парентерального введения. Нейтральный забуференный физиологический раствор или физиологический раствор, смешанный с сывороточным альбумином, являются дополнительными иллюстративными основами.
В одном варианте осуществления фармацевтической композиции согласно одному аспекту изобретения композиция вводится пациенту внутривенно.
Способы и протоколы внутривенного (iv) введения фармацевтических композиций, описанных здесь, хорошо известны в данной области.
В одном аспекте фармацевтической композиции по изобретению указанная фармацевтическая композиция применяется для предотвращения, лечения или облегчения заболевания, выбранного из пролиферативного заболевания, опухолевого заболевания или иммунологического расстройства. Предпочтительно указанное опухолевое заболевание представляет собой злокачественное заболевание, предпочтительно рак.
В одном варианте осуществления фармацевтической композиции по изобретению идентифицированное злокачественное заболевание выбрано из группы, состоящей из лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, лейкоза, множественной миеломы и солидных опухолей.
Кроме того, в одном варианте осуществления согласно настоящему изобретению предложен способ лечения или облегчения заболевания, указанный способ включает этап введения субъекту, испытывающему в этом потребность, предварительно нагруженных человеческих NK-клеток, которые были восстановлены из человеческих NK-клеток в криоконсервированном состоянии в соответствии с изобретением, или получены способом в соответствии с аспектами изобретения для восстановления/получения жизнеспособных предварительно нагруженных человеческих NK-клеток из криоконсервированного состояния.
В соответствии с одним аспектом способа лечения или облегчения по изобретению предварительно нагруженные человеческие NK-клетки вводятся пациенту внутривенно.
В одном варианте осуществления указанного способа лечения или облегчения субъект страдает пролиферативным заболеванием, опухолевым заболеванием или иммунологическим расстройством.
Предпочтительно, чтобы указанное опухолевое заболевание представляло собой злокачественное заболевание, предпочтительно рак.
В одном варианте осуществления указанного способа для лечения или облегчения заболевания упомянутое злокачественное заболевание выбрано из группы, состоящей из лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, лейкоза, множественной миеломы и солидных опухолей.
Следует отметить, что в настоящем документе формы единственного числа содержат и ссылки на множественное число, если контекст явно не указывает иное. Таким образом, например, ссылка на «реагент» содержит один или более таких различных реагентов, и ссылка на «способ» содержит ссылку на эквивалентные этапы и способы, известные рядовым специалистам в данной области, которые могут быть модифицированы или заменены на способы, описанные в настоящем документе.
Если не указано иное, термин «по меньшей мере», предшествующий серии элементов, следует понимать как относящийся к каждому элементу в серии. Специалисты в данной области поймут или смогут установить, используя не более чем рутинное экспериментирование, многие эквиваленты специфичных вариантов осуществления изобретения, описанных в данном документе. Предполагается, что такие эквиваленты охватываются настоящим изобретением.
Термин «и/или», где бы он ни применялся в настоящем документе, содержит значение «и», «или» и «все или любая другая комбинация элементов, связанных указанным термином».
Термин «около» или «примерно» в контексте настоящего описания означает в пределах 20%, предпочтительно в пределах 10%, и более предпочтительно в пределах 5% от заданного значения или диапазона. Однако оно содержит и конкретное число, например, около 20 включает 20.
Термин «менее чем» или «более чем» содержит конкретное число. Например, менее 20 означает менее или равно. Аналогично, более или больше означает более или равно, или больше или равно, соответственно.
В этом описании и формуле изобретения, если контекст не требует иного, слово «включать» и варианты, такие как «включает» и «включающий», будут пониматься как подразумевающие включение указанного целого или этапа или группы целых или этапов, но не исключение любого другого целого или этапа или группы целых или этапа. При применении в данном документе термин «включающий» может быть заменен термином «вмещающий» или «содержащий», а иногда при применении в настоящем документе термином «имеющий».
При применении в настоящем документе термин «состоящий из» исключает любой элемент, этап или ингредиент, не указанные в элементе формулы изобретения. При применении в настоящем документе термин «по сути состоящий из» не исключает материалы или этапы, которые вещественно не влияют на основные и новые характеристики формулы изобретения.
В каждом случае в настоящем документе любой из терминов «включающий», «по сути состоящий из» и «состоящий из» может быть заменен любым из двух других терминов.
Следует понимать, что это изобретение не ограничивается конкретной методологией, протоколами, материалами, реагентами и веществами и т.д., описанными в настоящем документе, и как таковое может варьироваться. Применяемая в настоящем документе терминология предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения, которое определяется исключительно формулой изобретения.
Все публикации и патенты, цитируемые по всему тексту настоящего описания (включая все патенты, патентные заявки, научные публикации, описания производителя, инструкции и т.д.), выше или ниже, включены в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Ничто в настоящем документе не должно толковаться как признание того, что изобретение не имеет права датировать такое раскрытие задним числом на основании предшествующего изобретения. В той степени, в которой материал, включенный посредством ссылки, противоречит или не согласуется с этим описанием, данное описание заменяет любой такой материал.
Примеры конструкций антител, которые можно применять в соответствии с данным изобретением, описаны в MAbs. 2019 Jul; 11(5):899-918.
Лучшее понимание настоящего изобретения и его преимуществ будет получено из следующих примеров, предлагаемых только для иллюстративных целей. Примеры никоим образом не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Пример 1: Оценка опосредованной антителами цитотоксичности NK-клетками после предварительной нагрузки и замораживания/размораживания.
Культура клеточных линий
MM.1S (Американская коллекция типовых культур, АКТК (АТСС), каталожный №: CRL2974) и DK-MG (Немецкая коллекция микроорганизмов и клеточных культур, НКМКК (DSMZ), каталожный №: АСС277) культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки, ФТС (FCS), 2 мМ L-глутамина и 100 МЕ/мл пенициллина G натрия и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата. Все клеточные линии культивировали в стандартных условиях и субкультивпровали в соответствии с рекомендациями поставщика при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% CO2.
Выделение МКПК (РВМС) из лейкоцитарной пленки и обогащение человеческих NK-клеток
МКПК (РВМС) выделяли из лейкоцитарной пленки (Немецкий Красный Крест, Мангейм, Германия) центрифугированием в градиенте плотности. Образцы лейкоцитарной пленки разбавляли двукратным или трехкратным объемом фосфатно-солевого буфера, ФСБ (PBS) (Invitrogen, каталожный №: 14190-169), наносили на подушку из Lymphoprep (Stem Cell Technologies, каталожный №: 07861) и центрифугировали при 800 × g в течение 25 мин при комнатной температуре без тормоза. МКПК (РВМС), расположенные на границе раздела сред, забирали и промывали 3 раза ФСБ (PBS) перед тем, как их культивировали в полной среде RPMI 1640 (среда RPMI 1640 с добавкой 10% инактивированной нагреванием ФТС (FCS), 2 мМ L-глутамина и 100 МЕ/мл пенициллина G натрия и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата (все компоненты от Invitrogen)) в течение ночи без стимуляции. Для обогащения NK-клеток МКПК (РВМС) собирали из ночных культур и применяли для одного раунда отрицательного отбора с применением набора EasySep™ Human N K Cell Enrichment Kit (Stem Cell Technologies, каталожный №: 17055) для иммуномагнитного выделения нетронутых человеческих NK-клеток и Big Easy EasySep™ Magnet (Stem Cell Technologies, каталожный №: 18001) в соответствии с инструкциями производителя.
Предварительная нагрузка NK-клеток и замораживание/размораживание
Аликвоты обогащенных первичных человеческих NK-клеток ресуспендировали в полной среде RPMI 1640, содержащей 10 мкг/мл указанных конструкций антител в общем объеме 0,5 мл, и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Как указано, половину аликвот дважды промывали 5 мл полной среды RPMI 1640 и затем ресуспендировали в 0,5 мл полной среды RPMI 1640, а вторую половину аликвот не промывали перед тем, как добавка ФТС (FCS) с 20% ДМСО (DMSO) (Sigma) была добавлена. Затем клеточные суспензии переносили в криопробирки 2 мл (Greiner bio-one) и замораживали при -80°С в крио 1°С морозильном контейнере (NaIgene) более чем на 12 часов.
4-часовой анализ цитотоксичности с высвобождением кальцеина
Для анализов цитотоксичности с высвобождением кальцеина указанные клетки-мишени собирали из культур, промывали средой RPMI 1640 без ФТС (FCS) и метили 10 мкМ кальцеина AM (Invitrogen/Molecular Probes, каталожный №: С3100МР) в течение 30 минут в среде RPMI без ФТС (FCS) при температуре 37°С. После осторожной отмывки меченые клетки ресуспендировали в полной среде RPMI 1640 до плотности 1×105/мл, а затем аликвоты 1×104 клеток-мишеней высевали в отдельные лунки 96-луночного круглодонного микропланшета. Параллельно, NK-клетки размораживали из -80°С путем инкубации криопробирок на водяной бане при 37°С. Когда были видны последние кристаллы льда, клеточную суспензию разбавляли полной средой RPMI 1640, центрифугировали и один раз промывали перед добавлением клеток к клеткам-мишеням при указанном соотношении эффектор-мишень (Е:Т) с добавлением или без добавления свежего антитела, как указано, в общем объеме 200 мкл в дубликатах. Спонтанное высвобождение определяли инкубацией клеток-мишеней в отсутствие эффекторных клеток и без антител, и максимальное высвобождение индуцировали добавлением 1% Тритона Х-100 (конечная концентрация, Roth), и также измеряли четырежды на каждом планшете.
После центрифугирования в течение 2 мин при 200 g анализ инкубировали в течение 4 ч при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% СО2. 100 мкл супернатанта клеточной культуры собирали из каждой лунки после дополнительного центрифугирования в течение 5 минут при 500 g, и флуоресценцию высвобожденного кальцеина измеряли при 520 нм с применением флуоресцентного мультипланшетного ридера (Victor 3 или EnSight, Perkin Elmer). На основе измеренных количеств был рассчитан специфичный лизис клеток по следующей формуле: [флуоресценция (образец) - флуоресценция (спонтанная)]/[флуоресценция (максимальная) - флуоресценция (спонтанная)] × 100%. Флуоресценция (спонтанная) представляет собой количество флуоресценции от клеток-мишеней в отсутствие эффекторных клеток и антител, а флуоресценция (максимальная) представляет общий лизис клеток, индуцированный добавлением Тритона Х-100. Величины лизиса анализировали, и среднее значение и стандартное отклонение строили с применением программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Prism версии 7.04 для Windows, GraphPad Software, La Jolla California USA).
Результаты показаны на Фигуре 1.
Пример 2: Анализ связывания антител к CD16 с различными вариантами антигена
FcgRIII (CD16), низкоаффинный рецептор к части Fc IgG, существует в двух изоформах, кодируемых двумя почти идентичными генами: FCGR3A (CD16A) и FCGR3B (CD16B), что приводит ктканеспецифичной экспрессии альтернативных заякоренных в мембране изоформ (Ravetch и Perussia, 1989, J Exp Med.):
- FcgRIIIA (CD16A) экспрессируется как трансмембранный белок на NK-клетках, макрофагах и подгруппах моноцитов и Т-клеток
- FcgRIIIB (CD16B) экспрессируется гликозилфосфатидилинозитол, ГФИ (GPI) -заякоренным нейтрофилами и после стимуляции гамма-интерфероном эозинофилами.
Аллельные варианты/полиморфизмы и CD16A, и CD16B хорошо известны (обобщены в Таблице 2).
Аллотипические варианты CD16B различаются пятью аминокислотами ECD (Таблица 2). Два из них делают возможным дополнительное гликозилирование, приводя к трем различным вариантам ГФИ (GPI) - заякоренных гранулоцитарных антигенов FcγRIIIB HNA-1a, -1b и -1с (ранее называвшихся NA1, NA2 и SH).
Есть лишь несколько различий в аминокислотных последовательностях CD16A и В. Их различия ограничиваются двумя альтернативными аминокислотами в зрелом ECD (Таблица 2). Дополнительные различия заключаются в несопоставимых режимах заякоривания CD16A и CD16B к мембране. С-концевая пропептидная последовательность CD16B, которая отщепляется в зрелой ГФИ (GPI) - заякоренной форме, высоко гомологична последовательности, соединяющей ECD CD16A с его трансмембранным доменом (Таблица 2).
Выделение CD16A-специфичного антитела «LSIV21», лишенного связывания с CD16B, было описано ранее (Reusch et al., 2014, MAbs).
Чтобы исследовать, какая из вариаций последовательностей CD16A/CD16B определяет связывающий сайт для наших CD16A-селективных антител, мы создали и охарактеризовали набор растворимых рекомбинантных вариантов CD16A- и CD16B-антигенов.
Рекомбинантный белок ECDCD16B (NA1) экспрессировался либо в виде зрелой формы (без пропептида) (CD16Bmat), либо в виде варианта, содержащего последовательность пропептида (CD16Bpr). Вдобавок, были сконструированы, экспрессированы и протестированы в анализах связывания мутанты ECD CD16B, в которых CD16B-специфичные аминокислоты были заменены соответствующими остатками CD16A: CD16BD129G, CD16BH140Y, CD16BS185F. Все эти варианты антигенов были слиты посредством глицин-серинового линкера с растворимым мономерным Fc (Ying et al., 2012, J. Biol. Chem.), экспрессированы в яичник китайского хомяка (СНО) и очищены от супернатантов клеточных культур.
Антитело scFv, включающее вариабельные последовательности тяжелой и легкой цепи опубликованного CD16A- и CD16B-реактивного антитела 3G8, распознает все протестированные варианты антигенов CD16A и CD16B (Фигура 2, Таблица 3). Различные антитела, содержащие вариабельные последовательности тяжелой и легкой цепей «LSIV21» или «Р2С47» с улучшенной аффинностью (в форме моновалентных scFv или бивалентно связывающихся тетравалентных биспецифичных тандемных днательных антител), распознавали CD16A, но не зрелые или содержащие пропептид антигены CD16B, сливающиеся с ECD. Однако если гистидин (Н) в положении 140 в ECD CD16B мутировал в тирозин (Y) - аминокислоту, присутствующую в соответствующем положении в CD16A, - эта мутантная форма CD16B (CD16BH140Y) хорошо распознавалась антителами, содержащими вариабельные домены «LSIV21» или «Р2С47» (Фигура 2, Таблица 3).
Дополнительную аффинность созревших антител scFv к CD16 анализировали аналогичным образом с помощью ИФА (ELISA). Результаты показывают, что, за исключением scFv «CD16-5», которые демонстрируют слабую перекрестную реактивность с CD16B, другие антитела scFv против CD16 с созревшей аффинностью поддерживают свойство избирательного связывания CD16A родительского антитела. Они не связываются с CD16B, если только CD16B не вмещает ранее описанную аминокислотную замену CD16BH140Y (Таблица 4). Все антитела против CD16 демонстрируют очень хорошую перекрестную реактивность с CD16A яванского макака (Таблица 4), несмотря на то, что последовательность ECD CD16A яванского макака отличается в общей сложности на 16 аминокислот от человеческого CD16A (см. выравнивание на Фигуре 4).
Важность тирозина (Y) в положении 140 в ECD CD16 для CD16A-специфичного распознавания нашими антителами также была подтверждена с применением рекомбинантных клеток яичника китайского хомяка (СНО) с трансгенной экспрессией различных вариантов антигена CD16 на клеточной поверхности. Последовательности ECD были либо слиты с трансмембранным доменом человеческого РЭФР (EGFR) (Wang et al., 2011, Blood 118 (5) 1255), либо заякорены через ГФИ (GPI) с использованием эндогенной последовательности человеческого CD16B с полноразмерной пропептидной последовательностью для посттрансляционного процессинга и липидирования для GPI-заякоривания.
Антитело scFv, включающее вариабельные последовательности тяжелой и легкой цепи опубликованного CD16A- и CD16B-реактивного антитела 3G8, распознает все варианты антигена CD16An CD16B, экспрессируемые на клеточной поверхности (Фигура 3), но не рекомбинантный РЭФР (EGFR), экспрессируемый в качестве контроля специфичности. Антитела scFv, содержащие вариабельные последовательности тяжелой и легкой цепей «LSIV21» или «Р2С47» с улучшенной аффинностью, распознают варианты CD16A, экспрессируемые на поверхности клеток яичника китайского хомяка (СНО), но не зрелые или содержащие пропептиды ECD CD16B (NA1). Однако, если гистидин (Н) в положении 140 в ECD мембранно-заякоренного CD16B клеток яичника китайского хомяка (СНО) мутировал в тирозин (Y) - аминокислоту, присутствующую в соответствующем положении в CD16A - эта мутантная форма CD16B (CD16BH140Y) хорошо распознавалась антителами scFv, содержащими вариабельные домены «LSIV21» или «Р2С47» (Фигура 3).
Варианты антигенов CD16A и CD16BH140Y, но не антигена CD16B, также распознавались после SDS-ΠΑΑΓ (SDS-PAGE) и вестерн-блоттинга, когда образцы обрабатывались в невосстанавливающих условиях антителами, содержащими «LSIV21», «Р2С47» или вариабельные домены с созревшей аффинностью (Фиг. 5), тогда как антитело 3G8 распознает все варианты антигенов CD16A и CD16B. Когда образцы редуцировались перед загрузкой в гели SDS-ΠΑΑΓ (SDS-PAGE), на вестерн-блоттинге не получали сигналов (данные не показаны), что свидетельствует о нелинейной последовательности, но скорее о трехмерной структуре в качестве связывающего эпитопа. В случае распознавания «LSIV21», «Р2С47» или вариантами этих антител с созревшей аффинностью, трехмерная структура эпитопа, вероятно, определяется тирозином в положении 140 CD16.
Связывающий сайт IgG FcgRIII представляет собой прерывистую область связывания на мембранном проксимальном внеклеточном домене рецептора. Ключевые аминокислоты для низкоаффинного взаимодействия FcgRIIIA (CD16A) с Fc-частью IgG были ранее идентифицированы и описаны (например, Ahmed et al., 2016). Остатками CD16A, подразумевающими взаимодействие с доменом СН2 частей Fc, являются К120, Y132, Н134, Н135 и К161. Хотя сообщалось, что антитело 3G8 связывает CD16A и CD16B и блокирует связывание IgG (Tamm and Schmidt, 1996), мы не наблюдали блокирования связывания наших антител к CD16 с CD16A посредством IgG. Чтобы поддержать гипотезу о том, что связывающий сайт наших специфичных антител к CD16A отличается от связывающего сайта IgG на FcgRIIIA, мы провели конкурентный ИФА (ELISA). Хотя связывание моноклональных антител 3G8 с CD16A блокируется возрастающими концентрациями антитела scFv, содержащего вариабельные домены 3G8, другие антитела scFv против CD16 не блокируют или не вытесняют моноклональные антитела 3G8 на CD16A и связываются независимо (Фигура 6). Поскольку известно, что связывающий сайт 3G8 блокирует связывание IgG, мы пришли к выводу, что связывающий сайт наших антител к CD16 отличается от связывающего сайта IgG.
Анализ связывания ИФА (ELISA)
96-луночные планшеты для ИФА (ELISA) (Immuno MaxiSorp; Nunc) покрывали на ночь при 4°С рекомбинантно полученными гибридными белками вариантов антигена внеклеточного домена (ECD) CD16, слитыми с Fc человеческого IgG1 или мономерным mFc.67 (Ying et al, 2012, J. Biol. Chem.) в 100 мМ карбонатно-бикарбонатного буфера в концентрации 1,5 или 3 мкг/мл. После этапа блокирования 3% (мас./об) сухого обезжиренного молока (Merck), растворенного в ФСБ (PBS), серийные разведения различных антител в ФСБ (PBS), содержащем 0,3% (мас./об) сухого обезжиренного молока, инкубировали на планшетах в течение 1,5 ч при комнатной температуре. После трехкратного отмывания 300 мкл на лунку ФСБ (PBS), содержащего 0,1% (об/об) Твин 20, планшеты инкубировали с детектирующими антителами в течение 1 ч при комнатной температуре. Для детекции аналитов, меченных His, применяли Penta-HIS-HRP (Qiagen) при разведении 1:3000. Для обнаружения четырехвалентных биспецифичных антител тандемных диател BCMA/CD16, Т763, применяли конъюгат Protein L-HRP (Pierce) при разведении 1:20000 в течение 1 часа при комнатной температуре. После трехкратного отмывания 300 мкл на лунку ФСБ (PBS), содержащего 0,1% (об/об) Твин 20, планшеты инкубировали с субстратом ТМБ (ТМВ) (Seramun) до тех пор, пока не стало ясно видимым проявление цвета. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл на лунку 0,5 Μ H2SO4. Поглощение измеряли при 450 нм с применением многометочного планшетного ридера (Victor, Perkin Elmer). Значения абсорбции были построены и проанализированы с применением нелинейной регрессии, сигмоидальной зависимости доза-ответ (переменный наклон), аппроксимации методом наименьших квадратов (обычный) с помощью GraphPad Prism версии 6.07 (GraphPad Software, La Jolla California USA).
Анализ связывания после SDS-ΠΑΑΓ (SDS-PAGE) и вестерн-блоттинга
Очищенные рекомбинантные варианты антигена CD16 (человеческий CD16A48R, 158V" mFc.67, человеческий CD16B(NA1)pr-mFc.67 и huCD16B(NA1)prH140Y-mFc.67 разводили в ФСБ (PBS) до 0,5 мкг/мл, смешивая с равным объем невосстанавливающего буфера для образцов и 8 мкл смеси загружали в лунки с 4-20% гелями Criterion TGX Precast Gels (Biorad). Гели прогоняли при 300 В в 1х TGS-буфере (Biorad) в течение 22 минут, и общий белок отображали с применением системы документирования гелей Biorad Molecular Imager Gel Documentation system. Белок переносили вестерн-блоттингом на миди-мембраны PVDF Midi Membranes (Biorad) с использованием системы Trans-Blot Turbo system (Biorad). Мембраны инкубировали в течение 30 минут с 3% (мас/об) сухим обезжиренным молоком (Merck), растворенным в трис-забуференном физиологическом растворе, ТЗФР (TBS) для блокирования неспецифичных связывающих сайтов, а затем инкубировали с разведениями первичных антител: антитела KCD16 разбавляли в ТЗФР (TBS), содержащем 3% (мас/об)) сухого обезжиренного молока до концентрации 4 мкг/мл и инкубировали на мембранах в течение 1 часа при комнатной температуре. После промывания ТЗФРТ (TBST) (ТЗФР (TBS), содержащий 0,1% (об/об) Твин 20) и два раза с ТЗФР (TBS), мембраны инкубировали с конъюгатами для обнаружения вторичных антител: Мембраны, инкубированные санти-CD16A, содержащими антитела scFv-IgAb, инкубировали с Protein L-HRP (Pierce), 1: 10000, разведенным в ТЗФР (TBS), содержащем 3% (мас/об) сухого обезжиренного молока, мембраны, инкубированные с антителами против CD16 scFv, инкубировали с анти-Penta-His-HRP (QIAGEN) 1:3000, разведенным в ТЗФР (TBS), содержащем 3% (мас/об) сухого обезжиренного молока, в течение 1 часа при комнатной температуре. После отмывки ТЗФРТ (TBST) и двухкратной отмывки ТЗФР (TBS) колориметрическое проявление начинали добавлением свежеприготовленной смеси 0,66 мг/мл ДАБ (DAB), 0,02% CoCl2, 0,015% Н202 в ТЗФР (TBS) и инкубировали на мембранах до проявления цвета. Реакцию останавливали промыванием мембран водой. Мембраны высушивали и фотографировали.
Конкурентный ИФА (ELISA) CD16A
96-луночные планшеты для ИФА (ELISA) (Immuno MaxiSorp; Nunc) покрывали на ночь при 4°С рекомбинантно полученными гибридными белками ECD CD16A (48R, 158V), слитыми с мономерным mFc.67 (Ying et al, 2012, J. Biol. Chem.) в 100 мМ карбонатно-б и карбонатного буфера в концентрации 1,5 мкг/мл. После этапа блокирования 3% (мас./об) сухого обезжиренного молока (Merck), растворенного в ФСБ (PBS), серийные разведения различных scFv-антител в ФСБ (PBS), содержащем 0,3% (мас./об) сухого обезжиренного молока, смешивали с 1 нМ анти-CD16 mAb 3G8 (BD Bioscience) и совместно инкубировали на планшетах в течение 1,5 ч при комнатной температуре. После трехкратного отмывания 300 мкл на лунку ФСБ (PBS), содержащего 0,1% (об/об) Твин 20, планшеты инкубировали с детектирующими антителами в течение 1 ч при комнатной температуре. Для обнаружения CD16A-связанного 3G8 применяли козий антимышиный IgG (H+L)-HRPO (Dianova 115-035-003) при разведении 1:10000. После трехкратного отмывания 300 мкл на лунку ФСБ (PBS), содержащего 0,1% (об/об) Твин 20, планшеты инкубировали с субстратом ТМБ (ТМВ) (Seramun) до тех пор, пока не стало ясно видимым проявление цвета. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл на лунку 0,5 Μ H2S04. Поглощение измеряли при 450 нм с применением многометочного планшетного ридера (Victor, Perkin Elmer). Значения абсорбции были построены и проанализированы с применением нелинейной регрессии, сигмоидальной зависимости доза-ответ (переменный наклон), аппроксимации методом наименьших квадратов (обычный) с помощью GraphPad Prism версии 6.07 (GraphPad Software, La Jolla California USA).
Пример 3: Связывание анти-CD16A scFv с первичными NK-клетками человека при 37°С в присутствии или в отсутствие 10 мг/мл поликлонального человеческого IgG
Способы:
Выделение МКПК (РВМС) из лейкоцитарной пленки и обогащение человеческих NK-клеток
МКПК (РВМС) выделяли из лейкоцитарной пленки (Немецкий Красный Крест, Мангейм, Германия) центрифугированием в градиенте плотности. Образцы лейкоцитарной пленки разбавляли двукратным или трехкратным объемом фосфатно-солевого буфера, ФСБ (PBS) (Invitrogen, каталожный №: 14190-169), наносили на подушку из Lymphoprep (Stem Cell Technologies, каталожный №: 07861) и центрифугировали при 800 × g в течение 25 мин при комнатной температуре без тормоза. МКПК (РВМС), расположенные на границе раздела сред, забирали и промывали 3 раза ФСБ (PBS) перед тем, как их культивировали в полной среде RPMI 1640 (среда RPMI 1640 с добавкой 10% инактивированной нагреванием ФТС (FCS), 2 мМ L-глутамина и 100 МЕ/мл пенициллина G натрия и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата (все компоненты от Invitrogen)) в течение ночи без стимуляции. Для обогащения NK-клеток МКПК (РВМС) собирали из ночных культур и применяли для одного раунда отрицательного отбора с применением набора EasySep™ Human NKCell Enrichment Kit (Stem Cell Technologies, каталожный №: 17055) для иммуномагнитного выделения нетронутых человеческих NK-клеток и Big Easy EasySep™ Magnet (Stem Cell Technologies, каталожный №: 18001) в соответствии с инструкциями производителя.
Анализы связывания клеток и анализы проточной цитометрии
Аликвоты 0,2-1 × 106 обогащенных человеческих NK-клеток инкубировали со 100 мкл серийных разведений указанных конструкций scFv в буфере флуоресцентно активируемой клеточной сортировки, ФАКС (FACS) (PBS, Invitrogen, каталожный №: 14190-169), содержащем 2% инактивированную нагреванием ФТС (FCS) (Invitrogen, каталожный №: 10270-106), 0,1% азид натрия (Roth, Карлсруэ, Германия, каталожный №: А1430.0100) в присутствии 10 мкг/мл поликлонального человеческого IgG (Gammanorm, Octapharma) или соответствующего буфера в течение 45 мин при 37°С. После повторной отмывки буфером для ФАКС (FACS) связанные с клетками антитела выявляли с помощью 10 мкг/мл анти-His моноклональных антител 13/45/31-2 (Dianova, Гамбург, Германия, каталожный №: DIA910-1MG) с последующим введением 15 мкг/мл флуоресцеин изотиоцианат, ФИТЦ (FITC) - конъюгированного козьего антимышиного IgG (Dianova, каталожный №: 115-095-062). После последнего этапа окрашивания клетки снова отмывали и ресуспендировали в 0,2 мл буфера для ФАКС (FACS), содержащего 2 мкг/мл йодида пропидия (PI) (Sigma, каталожный №: Р4170), чтобы исключить мертвые клетки. Флуоресценцию 2-5 × 103 живых клеток измеряли с применением проточного цитометра Millipore Guava EasyCyte (Merck Millipore, Швальбах, Германия) или цитометра CytoFlex (Beckman Coulter, Крефельд, Германия) и определяли среднюю интенсивность флуоресценции образцов клеток. После вычитания значений интенсивности флуоресценции клеток, окрашенных только вторичными и третичными реагентами, эти значения применяли для анализа нелинейной регрессии с применением программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Prism версии 7.04 для Windows, GraphPad Software, La Jolla California USA). Для расчета KD применяли уравнение для связывания с одним сайтом (гипербола).
Результаты
ScFv против CD16, содержащие домены Fv человека из клона CD16-1, scFv, содержащие домены Fv человека против CD16 из клона CD16-2, и scFv_3G8, содержащие мышиные домены Fv из моноклональных антител 3G8, титровали на первичных NK-клетках человека при 37°С в присутствии или отсутствии 10 мг/мл поликлонального человеческого IgG. Соответствующие результаты изображены на Фигуре 7.
Пример 4: Оценка опосредованной антителами цитотоксичности NK-клеток после предварительной нагрузки антителами против ЕрСАМ и CD30 и замораживания/размораживания.
Способы:
Культура клеточных линий
Клетки COLO 205 (любезно предоставлены доктором G. Moldenhauer, German Cancer Research Center, Гейдельберг, Германия) и клетки KARPAS-299 (DSMZ, каталожный №: АСС31) культивировали в среде RPMI 1640 с добавкой 10% инактивированной нагреванием ФТС (FCS), 2 мМ L-глутамина и 100 МЕ/мл пенициллина G натрия и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата. Все клеточные линии культивировали в стандартных условиях и субкультивировали в соответствии с рекомендациями поставщика при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% СО2.
Выделение МКПК (РВМС) из лейкоцитарной пленки и обогащение человеческих NK-клеток
МКПК (РВМС) выделяли из лейкоцитарной пленки (Немецкий Красный Крест, Мангейм, Германия) центрифугированием в градиенте плотности. Образцы лейкоцитарной пленки разбавляли двукратным или трехкратным объемом фосфатно-солевого буфера, ФСБ (PBS) (Invitrogen, каталожный №: 14190-169), наносили на подушку из Lymphoprep (Stem Cell Technologies, каталожный №: 07861) и центрифугировали при 800 × g в течение 25 мин при комнатной температуре без тормоза. МКПК (РВМС), расположенные на границе раздела сред, забирали и промывали 3 раза ФСБ (PBS) перед тем, как их культивировали в полной среде RPMI 1640 (среда RPMI 1640 с добавкой 10% инактивированной нагреванием ФТС (FCS), 2 мМ L-глутамина и 100 МЕ/мл пенициллина G натрия и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата (все компоненты от Invitrogen)) в течение ночи без стимуляции. Для обогащения NK-клеток МКПК (РВМС) собирали из ночных культур и применяли для одного раунда отрицательного отбора с применением набора EasySep™ Human NK Cell Enrichment Kit (Stem Cell Technologies, каталожный №: 17055) для иммуномагнитного выделения нетронутых человеческих NK-клеток и Big Easy EasySep™ Magnet (Stem Cell Technologies, каталожный №: 18001) в соответствии с инструкциями производителя.
Предварительная нагрузка NK-клеток и замораживание/размораживание
Аликвоты обогащенных первичных NK-клеток человека ресуспендировали в полной среде RPMI 1640, содержащей 10 мкг/мл указанных конструкций антител в общем объеме 0,5 мл, и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. После добавления 0,5 мл ФТС (FCS) с добавкой 20% ДМСО (DMSO) (Sigma) клеточные суспензии затем переносили в криопробирки 2 мл (Greiner bio-one) и замораживали при -80°С в крио 1°С морозильном контейнере (NaIgene) более чем на 12 часов.
4-часовой анализ цитотоксичности с высвобождением кальцеина
Для анализов цитотоксичности с высвобождением кальцеина указанные клетки-мишени собирали из культур, промывали средой RPMI 1640 без ФТС (FCS) и метили 10 мкМ кальцеина AM (Invitrogen/Molecular Probes, каталожный №: С3100МР) в течение 30 минут в среде RPMI без ФТС (FCS) при температуре 37°С. После осторожной отмывки меченые клетки ресуспендировали в полной среде RPMI 1640 до плотности 1×105/мл, а затем аликвоты 1×104 клеток-мишеней высевали в отдельные лунки 96-луночного круглодонного микропланшета. Параллельно, NK-клетки размораживали из -80°С путем инкубации криопробирок на водяной бане при 37°С. Когда были видны последние кристаллы льда, клеточную суспензию разбавляли полной средой RPMI 1640, центрифугировали и один раз промывали перед добавлением клеток к клеткам-мишеням при указанном соотношении эффектор-мишень (Е:Т) с добавлением или без добавления свежего антитела, как указано, в общем объеме 200 мкл в дубликатах. Спонтанное высвобождение определяли инкубацией клеток-мишеней в отсутствие эффекторных клеток и без антител, и максимальное высвобождение индуцировали добавлением 1% Тритона Х-100 (конечная концентрация, Roth), и также измеряли четырежды на каждом планшете.
После центрифугирования в течение 2 мин при 200 g анализ инкубировали в течение 4 ч при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% CO2. 100 мкл супернатанта клеточной культуры собирали из каждой лунки после дополнительного центрифугирования в течение 5 минут при 500 g, и флуоресценцию высвобожденного кальцеина измеряли при 520 нм с применением флуоресцентного мультипланшетного ридера (Victor 3 или EnSight, Perkin Elmer). На основе измеренных количеств был рассчитан специфичный лизис клеток по следующей формуле: [флуоресценция (образец) - флуоресценция (спонтанная)]/[флуоресценция (максимальная) - флуоресценция (спонтанная)] × 100%. Флуоресценция (спонтанная) представляет собой количество флуоресценции от клеток-мишеней в отсутствие эффекторных клеток и антител, а флуоресценция (максимальная) представляет общий лизис клеток, индуцированный добавлением Тритона Х-100. Величины лизиса анализировали, и среднее значение и стандартное отклонение строили с применением программного обеспечения GraphPad Prism (GraphPad Prism версии 7.04 для Windows, GraphPad Software, La Jolla California USA).
Результаты:
Первичные NK-клетки человека, которые были предварительно нагружены конструкциями антител против ЕрСАМ, такими как scFv-IgAb_73 EpCAM/NKp46, scFv-IgAb_75 EpCAM/NKG2D, scFv-IgAb_80 EpCAM/CD16A и IgG против ЕрСАМ, индуцировали специфичный лизис ЕрСАМ-положительных клеток COLO 205, но не ЕрСАМ-отрицательных клеток KARPAS-299. Среди биспецифичных конструкций против ЕрСАМ, NK-клетки, предварительно нагруженные scFv-IgAb_80 EpCAM/CD16A, проявляли наивысшую эффективность в лизисе клеток COLO 205, а NK-клетки, нагруженные scFv-IgAb_75 EpCAM/NKG2D, имели самую низкую эффективность. Ни один из препаратов NK-клеток, предварительно нагруженных конструкциями анти-CD30 антител, не опосредовал существенный лизис COLO 205 (Фигура 8А и Таблица 6).
Напротив, NK-клетки, которые были предварительно нагружены тандемными диателами CD30/CD16A или Fc-усиленным анти-CD30 IgG, опосредовали лизис CD30-положительных клеток KARPAS-299, но не CD30-отрицательных клеток COLO 205. NK-клетки, предварительно нагруженные анти-CD30 IgG дикого типа, не опосредовали лизис KARPAS-299, что позволяет предположить, что этот анти-CD30 IgG дикого типа слишком быстро диссоциировал от NK-клеток во время замораживания, размораживания и отмывки, и что количество оставшегося IgG было слишком низким, чтобы опосредовать существенный лизис клеток-мишеней (Фигура 8 В и Таблица 6).
Интересно, что NK-клетки, которые были предварительно нагружены 10 мкг/мл scFv-IgAb_75 EpCAM/NKG2D или тандемными диателами CD30/CD16A, заморожены, разморожены и отмыты, индуцировали такой же лизис клеток COLO 205 или KARPAS-299 соответственно, как NK-клетки, которые не были предварительно нагружены, но к ним в анализе цитотоксичности было добавлено 10 мкг/мл свежих scFv-IgAb_75 EpCAM/NKG2D или тандемных диател CD30/CD16A.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Affimed GmbH
<120> Криоконсервированные натуральные киллерные клетки,
предварительно нагруженные конструктом антитела
<130> A 3319PCT
<150> EP18191031.6
<151> 2018-08-27
<160> 178
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер
<400> 1
Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1. 5
<210> 2
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер
<400> 2
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1. 5 10 15
Gly Ser
<210> 3
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер
<400> 3
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
1. 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Ser
20
<210> 4
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер
<400> 4
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1. 5
<210> 5
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер
<400> 5
Gly Gly Gly Gly Ser
1. 5
<210> 6
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер
<400> 6
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1. 5 10
<210> 7
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер
<400> 7
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1. 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 8
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> линкер
<400> 8
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1. 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 9
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> шарнир
<400> 9
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1. 5 10 15
<210> 10
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> шарнир
<400> 10
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1. 5 10
<210> 11
<211> 328
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> константный домен тяжелой цепи
<400> 11
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1. 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
65 70 75 80
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
100 105 110
Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 12
<211> 328
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> константный домен тяжелой цепи
<400> 12
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1. 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
65 70 75 80
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
100 105 110
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
115 120 125
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
130 135 140
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
145 150 155 160
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
165 170 175
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
180 185 190
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
195 200 205
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
225 230 235 240
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 13
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> константный домен легкой цепи
<400> 13
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1. 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 14
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> константный домен легкой цепи
<400> 14
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1. 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 15
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> константный домен CH2-CH3
<400> 15
Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1. 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215
<210> 16
<211> 215
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> константный домен CH2-CH3
<400> 16
Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1. 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu
165 170 175
Ala Ser Tyr Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
210 215
<210> 17
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> константный домен ch2-ch3
<400> 17
Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1. 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Tyr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215
<210> 18
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> константный домен ch2-ch3
<400> 18
Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1. 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Thr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215
<210> 19
<211> 98
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> домен ch1
<400> 19
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1. 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val
<210> 20
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> домен cl
<400> 20
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1. 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Ser Ser
100 105
<210> 21
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> домен cl
<400> 21
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1. 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Ser
100 105
<210> 22
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> домен ch2-ch3
<400> 22
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1. 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215
<210> 23
<211> 192
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<220>
<223> CD16a
<400> 23
Gly Met Arg Thr Glu Asp Leu Pro Lys Ala Val Val Phe Leu Glu Pro
1. 5 10 15
Gln Trp Tyr Arg Val Leu Glu Lys Asp Ser Val Thr Leu Lys Cys Gln
20 25 30
Gly Ala Tyr Ser Pro Glu Asp Asn Ser Thr Gln Trp Phe His Asn Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Ser Gln Ala Ser Ser Tyr Phe Ile Asp Ala Ala Thr
50 55 60
Val Asp Asp Ser Gly Glu Tyr Arg Cys Gln Thr Asn Leu Ser Thr Leu
65 70 75 80
Ser Asp Pro Val Gln Leu Glu Val His Ile Gly Trp Leu Leu Leu Gln
85 90 95
Ala Pro Arg Trp Val Phe Lys Glu Glu Asp Pro Ile His Leu Arg Cys
100 105 110
His Ser Trp Lys Asn Thr Ala Leu His Lys Val Thr Tyr Leu Gln Asn
115 120 125
Gly Lys Gly Arg Lys Tyr Phe His His Asn Ser Asp Phe Tyr Ile Pro
130 135 140
Lys Ala Thr Leu Lys Asp Ser Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Phe
145 150 155 160
Gly Ser Lys Asn Val Ser Ser Glu Thr Val Asn Ile Thr Ile Thr Gln
165 170 175
Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln
180 185 190
<210> 24
<211> 192
<212> БЕЛОК
<213> Яванский макак
<220>
<223> CD16a
<400> 24
Gly Met Arg Ala Glu Asp Leu Pro Lys Ala Val Val Phe Leu Glu Pro
1. 5 10 15
Gln Trp Tyr Arg Val Leu Glu Lys Asp Arg Val Thr Leu Lys Cys Gln
20 25 30
Gly Ala Tyr Ser Pro Glu Asp Asn Ser Thr Arg Trp Phe His Asn Glu
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Ser Gln Thr Ser Ser Tyr Phe Ile Ala Ala Ala Arg
50 55 60
Val Asn Asn Ser Gly Glu Tyr Arg Cys Gln Thr Ser Leu Ser Thr Leu
65 70 75 80
Ser Asp Pro Val Gln Leu Glu Val His Ile Gly Trp Leu Leu Leu Gln
85 90 95
Ala Pro Arg Trp Val Phe Lys Glu Glu Glu Ser Ile His Leu Arg Cys
100 105 110
His Ser Trp Lys Asn Thr Leu Leu His Lys Val Thr Tyr Leu Gln Asn
115 120 125
Gly Lys Gly Arg Lys Tyr Phe His Gln Asn Ser Asp Phe Tyr Ile Pro
130 135 140
Lys Ala Thr Leu Lys Asp Ser Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Ile
145 150 155 160
Gly Ser Lys Asn Val Ser Ser Glu Thr Val Asn Ile Thr Ile Thr Gln
165 170 175
Asp Leu Ala Val Ser Ser Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln
180 185 190
<210> 25
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> пептидная метка
<400> 25
His His His His His His
1. 5
<210> 26
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> пептидная метка
<400> 26
Glu Pro Glu Ala
1
<210> 27
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 27
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Trp Ala Ser Gly Thr Thr Phe Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Thr Val Pro Gly Tyr Ser Thr Ala Pro Tyr Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ser Ser Pro Ser Val Trp Ser Asn
20 25 30
Phe Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Thr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Gly Tyr Ser Ser Ile
85 90 95
Ser Asp Thr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 29
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 29
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1. 5
<210> 30
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 30
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1. 5
<210> 31
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 31
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr
1. 5 10
<210> 32
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 32
Asn Ile Gly Ser Lys Asn
1. 5
<210> 33
<400> 33
000
<210> 34
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 34
Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
1. 5
<210> 35
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 36
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 36
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 37
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Ser Cys
145 150 155 160
Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln Arg
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250 255
<210> 38
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 38
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 39
<211> 212
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 39
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 40
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 40
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1. 5
<210> 41
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 41
Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr
1. 5
<210> 42
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 42
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr
1. 5 10
<210> 43
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 43
Asn Ile Gly Ser Lys Asn
1. 5
<210> 44
<400> 44
000
<210> 45
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 45
Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
1. 5
<210> 46
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 47
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 47
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 48
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Ser Cys
145 150 155 160
Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln Arg
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250 255
<210> 49
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 50
<211> 212
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 50
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 51
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 51
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr
1. 5
<210> 52
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 52
Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr
1. 5
<210> 53
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 53
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr
1. 5 10
<210> 54
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 54
Asn Ile Gly Ser Gln Ser
1. 5
<210> 55
<400> 55
000
<210> 56
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 56
Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Val
1. 5
<210> 57
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 58
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 58
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Gln Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 59
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys
145 150 155 160
Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Gln Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Ser Lys Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250 255
<210> 60
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 61
<211> 212
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 61
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Gln Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 62
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 62
Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Phe Tyr
1. 5
<210> 63
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 63
Ile Asn Pro Gly Gly Ala Ser Thr
1. 5
<210> 64
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 64
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr
1. 5 10
<210> 65
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 65
Asn Ile Gly Arg Gln Ser
1. 5
<210> 66
<400> 66
000
<210> 67
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 67
Gln Val Trp Asp Asn Tyr Thr Val Val
1. 5
<210> 68
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 68
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 69
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 69
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Tyr Asn Ile Gly Arg Gln Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Thr Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 70
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 70
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys
145 150 155 160
Gly Gly Tyr Asn Ile Gly Arg Gln Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Ser Lys Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250 255
<210> 71
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Ala Ser Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 72
<211> 212
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 72
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Tyr Asn Ile Gly Arg Gln Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Thr Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 73
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 73
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Tyr
1. 5
<210> 74
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 74
Ile Glu Pro Arg Gly Val Arg Ile
1. 5
<210> 75
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 75
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr
1. 5 10
<210> 76
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 76
Asn Ile Gly Ser Thr Asn
1. 5
<210> 77
<400> 77
000
<210> 78
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 78
Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Gln
1. 5
<210> 79
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 79
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Glu Pro Arg Gly Val Arg Ile Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 80
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 80
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Thr Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Gln
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 81
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 81
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Glu Pro Arg Gly Val Arg Ile Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys
145 150 155 160
Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Thr Asn Val His Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Ser Lys Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Gln Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250 255
<210> 82
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 82
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ala Ile Glu Pro Arg Gly Val Arg Ile Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 83
<211> 212
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 83
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Thr Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Gln
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 84
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 84
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr
1. 5
<210> 85
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 85
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr
1. 5
<210> 86
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 86
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr
1. 5 10
<210> 87
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 87
Asn Ile Gly Ser Lys Ser
1. 5
<210> 88
<400> 88
000
<210> 89
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 89
Gln Val Trp Asp Asp Tyr Ile Val Leu
1. 5
<210> 90
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 90
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 91
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 91
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asp Tyr Ile Val Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 92
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 92
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys
145 150 155 160
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Lys Lys Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Val Trp Asp Asp Tyr Ile Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250 255
<210> 93
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 93
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Val Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 94
<211> 212
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 94
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asp Tyr Ile Val Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 95
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 95
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Tyr
1. 5
<210> 96
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 96
Ile Glu Pro Asp Gly Gly Arg Arg
1. 5
<210> 97
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 97
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr
1. 5 10
<210> 98
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 98
Gln Gly Val Ser Gly Asp
1. 5
<210> 99
<400> 99
000
<210> 100
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 100
Gln Gln Trp Asp Asn Tyr Ser Val Thr
1. 5
<210> 101
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 101
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Glu Pro Asp Gly Gly Arg Arg Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 102
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 102
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1. 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Gly His Gln Gly Val Ser Gly Asp
20 25 30
Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gln Ala Asn Lys Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asp Asn Tyr Ser Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 103
<211> 256
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 103
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Glu Pro Asp Gly Gly Arg Arg Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser
145 150 155 160
Cys Arg Gly His Gln Gly Val Ser Gly Asp Val His Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Asn Lys Arg
180 185 190
Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu
195 200 205
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Gln Gln Trp Asp Asn Tyr Ser Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Lys Val Glu Ile Lys Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250 255
<210> 104
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 104
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Glu Pro Asp Gly Gly Arg Arg Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 105
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 105
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1. 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Gly His Gln Gly Val Ser Gly Asp
20 25 30
Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gln Ala Asn Lys Arg Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asp Asn Tyr Ser Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 106
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 106
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
1. 5
<210> 107
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 107
Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr
1. 5
<210> 108
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 108
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr
1. 5 10
<210> 109
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 109
Glu Asp Ile Tyr Asn Gly
1. 5
<210> 110
<400> 110
000
<210> 111
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 111
Ala Gly Pro His Lys Tyr Pro Leu Thr
1. 5
<210> 112
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 112
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 113
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 113
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Pro His Lys Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 114
<211> 254
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 114
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Gly Pro His Lys Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250
<210> 115
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 115
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 116
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 116
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Pro His Lys Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 117
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 117
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe Asp
1. 5
<210> 118
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 118
Ile Thr Thr Gly Gly Gly Asp Thr
1. 5
<210> 119
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 119
Val Arg His Gly Tyr Tyr Asp Gly Tyr His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
1. 5 10 15
<210> 120
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 120
Gln Gly Ile Ser Asn Asn
1. 5
<210> 121
<400> 121
000
<210> 122
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 122
Gln Gln Phe Thr Ser Leu Pro Tyr Thr
1. 5
<210> 123
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 123
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Thr Thr Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg His Gly Tyr Tyr Asp Gly Tyr His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 124
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 124
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asn Gln Gly Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 125
<211> 254
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Thr Thr Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg His Gly Tyr Tyr Asp Gly Tyr His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Asn Gln Gly Ile Ser Asn Asn Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Phe Thr Ser Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250
<210> 126
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 126
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Phe
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Thr Thr Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Arg His Gly Tyr Tyr Asp Gly Tyr His Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 127
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 127
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Asn Gln Gly Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Thr Ser Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 128
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 128
Gly Ser Val Ser Ser Gly Ser Tyr Tyr
1. 5
<210> 129
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 129
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1. 5
<210> 130
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 130
Ala Arg Asn Pro Ile Ser Ile Pro Ala Phe Asp Ile
1. 5 10
<210> 131
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 131
Asn Ile Gly Ser Lys Ser
1. 5
<210> 132
<400> 132
000
<210> 133
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 133
Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Asp His Val Leu
1. 5 10
<210> 134
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 134
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1. 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asn Pro Ile Ser Ile Pro Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 135
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 135
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 136
<211> 257
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 136
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1. 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asn Pro Ile Ser Ile Pro Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys Thr Ala Arg Ile Thr Cys
145 150 155 160
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Tyr Asp Ser Asp Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Asp His Val Leu Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His
245 250 255
His
<210> 137
<211> 217
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 137
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1. 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asn Pro Ile Ser Ile Pro Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 138
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 138
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1. 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 139
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 139
Gly Tyr Met Phe Ser Thr Phe Trp
1. 5
<210> 140
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 140
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asn Thr
1. 5
<210> 141
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 141
Ala Lys Ile Arg Asp Gly Tyr Ser Tyr Asp Ala Phe Asp Leu
1. 5 10
<210> 142
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 142
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1. 5
<210> 143
<400> 143
000
<210> 144
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 144
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Leu Ala Tyr Val
1. 5 10
<210> 145
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 145
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Ala Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Met Phe Ser Thr Phe
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asn Thr Ile Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Gly Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Arg Asp Gly Tyr Ser Tyr Asp Ala Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 146
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 146
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 147
<211> 262
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 147
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Ala Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Met Phe Ser Thr Phe
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asn Thr Ile Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Gly Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Arg Asp Gly Tyr Ser Tyr Asp Ala Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr
130 135 140
Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser
145 150 155 160
Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Asp Val
180 185 190
Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
195 200 205
Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Leu Ala Tyr
225 230 235 240
Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser
245 250 255
His His His His His His
260
<210> 148
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 148
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Ala Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Met Phe Ser Thr Phe
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asn Thr Ile Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn Thr Thr Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Gly Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ile Arg Asp Gly Tyr Ser Tyr Asp Ala Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 149
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 149
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
115 120 125
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
130 135 140
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
145 150 155 160
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
165 170 175
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
180 185 190
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
195 200 205
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 150
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 150
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1. 5
<210> 151
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 151
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1. 5
<210> 152
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 152
Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Tyr His Tyr Gly Leu Asp Val
1. 5 10
<210> 153
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 153
Lys Leu Gly Asp Lys Tyr
1. 5
<210> 154
<400> 154
000
<210> 155
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> участок, определяющий комплементарность (cdr)
<400> 155
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Gly Val
1. 5
<210> 156
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 156
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Tyr His Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 157
<211> 106
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> вариабельный домен
<400> 157
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ala Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Gly Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 158
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> scFv
<400> 158
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Tyr His Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys
145 150 155 160
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Arg Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Leu Ile Tyr Gln Asp Ala Lys Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Thr Val Leu Ala Ala Ala Gly Ser His His His His His His
245 250 255
<210> 159
<211> 217
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VH
<400> 159
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Gly Tyr Tyr His Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215
<210> 160
<211> 212
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Fab VL
<400> 160
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ala Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Gly Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 161
<211> 489
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> конструкт тандемного диатела
<400> 161
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1. 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asn Pro Ile Ser Ile Pro Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly
130 135 140
Gln Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn
145 150 155 160
Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile
165 170 175
Tyr Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
180 185 190
Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala
195 200 205
Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val
210 215 220
Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly
225 230 235 240
Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
245 250 255
Glu Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser
260 265 270
Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
275 280 285
Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys
290 295 300
Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val
305 310 315 320
Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
325 330 335
Cys Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly
340 345 350
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
355 360 365
Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro
370 375 380
Gly Lys Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys
385 390 395 400
Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val
405 410 415
Ile Tyr Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser
420 425 430
Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu
435 440 445
Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser
450 455 460
Asp His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ala Ala
465 470 475 480
Ala Gly Ser His His His His His His
485
<210> 162
<211> 705
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-IgAb
<400> 162
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1. 5 10 15
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln
450 455 460
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr
465 470 475 480
Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly Ser Tyr Tyr Trp Ser
485 490 495
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile
500 505 510
Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val
515 520 525
Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser
530 535 540
Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Pro
545 550 555 560
Ile Ser Ile Pro Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr
565 570 575
Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
580 585 590
Gly Ser Gly Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
595 600 605
Val Ala Pro Gly Lys Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile
610 615 620
Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
625 630 635 640
Val Leu Val Ile Tyr Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
645 650 655
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
660 665 670
Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp
675 680 685
Thr Ser Ser Asp His Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val
690 695 700
Leu
705
<210> 163
<211> 212
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-IgAb
<400> 163
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 164
<211> 481
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> конструкт тандемного диатела
<400> 164
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile
145 150 155 160
Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro
165 170 175
Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp
210 215 220
Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro
245 250 255
Gly Glu Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
260 265 270
Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu
275 280 285
Trp Met Gly Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln
290 295 300
Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr
305 310 315 320
Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr
325 330 335
Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp
340 345 350
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
355 360 365
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
370 375 380
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
385 390 395 400
Glu Asp Ile Tyr Asn Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
405 410 415
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val
420 425 430
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
435 440 445
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly
450 455 460
Pro His Lys Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
465 470 475 480
Lys
<210> 165
<211> 727
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-IgAb
<400> 165
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
465 470 475 480
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
485 490 495
Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
500 505 510
His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
515 520 525
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
530 535 540
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
545 550 555 560
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
565 570 575
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser
580 585 590
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln
595 600 605
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser
610 615 620
Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
625 630 635 640
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
645 650 655
Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
660 665 670
Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met
675 680 685
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
690 695 700
Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
705 710 715 720
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
725
<210> 166
<211> 214
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-IgAb
<400> 166
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1. 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Pro His Lys Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 167
<211> 729
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь KiH-scDb-Fc
<400> 167
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
1. 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Thr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu
225 230 235 240
Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile
245 250 255
Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln
260 265 270
Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys
275 280 285
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn
290 295 300
Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp
305 310 315 320
Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly
325 330 335
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
340 345 350
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Val
355 360 365
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp
370 375 380
Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ala Ile Glu
385 390 395 400
Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val
405 410 415
Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser
420 425 430
Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser
435 440 445
Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
450 455 460
Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
465 470 475 480
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val
485 490 495
Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn
500 505 510
Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
515 520 525
Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro
530 535 540
Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile
545 550 555 560
Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp
565 570 575
Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
580 585 590
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu
595 600 605
Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
610 615 620
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
625 630 635 640
Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr
645 650 655
Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr
660 665 670
Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
675 680 685
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe
690 695 700
Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala
705 710 715 720
Ala Gly Ser His His His His His His
725
<210> 168
<211> 469
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь KiH-scDb-Fc
<400> 168
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Gly Pro His Lys Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Tyr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly
465
<210> 169
<211> 721
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь Db-Fc
<400> 169
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser
100 105 110
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
115 120 125
Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
130 135 140
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
145 150 155 160
Gly Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
165 170 175
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
180 185 190
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
195 200 205
Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln
210 215 220
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
245 250 255
Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
260 265 270
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val
275 280 285
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
290 295 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
305 310 315 320
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
325 330 335
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
340 345 350
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
355 360 365
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
420 425 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435 440 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450 455 460
Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val
465 470 475 480
Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
485 490 495
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp Met
500 505 510
Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser
515 520 525
Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly
530 535 540
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
545 550 555 560
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
565 570 575
Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
580 585 590
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
595 600 605
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
610 615 620
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
625 630 635 640
Glu Asp Ile Tyr Asn Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
645 650 655
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp Gly Val
660 665 670
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
675 680 685
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly
690 695 700
Pro His Lys Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
705 710 715 720
Lys
<210> 170
<211> 960
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scDb-mFc
<400> 170
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Gly Pro His Lys Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Glu
245 250 255
Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala Ser Tyr
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr
465 470 475 480
Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala
485 490 495
Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp
500 505 510
Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp
515 520 525
Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
530 535 540
Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu
545 550 555 560
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly
565 570 575
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Val
580 585 590
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu
595 600 605
Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met
610 615 620
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ala
625 630 635 640
Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
645 650 655
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
660 665 670
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
675 680 685
Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
690 695 700
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
705 710 715 720
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser
725 730 735
Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly
740 745 750
His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly
755 760 765
Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly
770 775 780
Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu
785 790 795 800
Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln
805 810 815
Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
820 825 830
Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly
835 840 845
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala
850 855 860
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala
865 870 875 880
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly
885 890 895
Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg
900 905 910
Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
915 920 925
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr
930 935 940
Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
945 950 955 960
<210> 171
<211> 960
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь Bi-scFv-Fc
<400> 171
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1. 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Arg Gly Asp Ile Thr Ser Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Asp Tyr Tyr Thr Asp Tyr Met Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Asp
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Gly Pro His Lys Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Pro Glu
245 250 255
Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Lys Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Ser Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Val Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Ala Ser Tyr
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr
465 470 475 480
Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala
485 490 495
Thr Ile Ser Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp
500 505 510
Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp
515 520 525
Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
530 535 540
Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu
545 550 555 560
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly
565 570 575
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Val
580 585 590
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu
595 600 605
Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met
610 615 620
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ala
625 630 635 640
Ile Glu Pro Met Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
645 650 655
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
660 665 670
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
675 680 685
Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
690 695 700
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
705 710 715 720
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser
725 730 735
Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Ser Cys Gly Gly
740 745 750
His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly
755 760 765
Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly
770 775 780
Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu
785 790 795 800
Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln
805 810 815
Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
820 825 830
Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly
835 840 845
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Val Ser Cys Lys Ala
850 855 860
Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala
865 870 875 880
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ala Ile Glu Pro Met Tyr Gly
885 890 895
Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg
900 905 910
Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser
915 920 925
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Ala Tyr Tyr Tyr
930 935 940
Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
945 950 955 960
<210> 172
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 172
Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln
1. 5
<210> 173
<211> 725
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-Ig
<400> 173
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1. 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Gly Trp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
465 470 475 480
Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile
485 490 495
Thr Cys Arg Val Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln
500 505 510
Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr
515 520 525
Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
530 535 540
Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Ser
545 550 555 560
Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly
565 570 575
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
580 585 590
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln
595 600 605
Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser Leu Thr
610 615 620
Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp
625 630 635 640
Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Thr
645 650 655
Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Glu Ser Arg Ile Ser
660 665 670
Ile Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu Asn Ser
675 680 685
Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr
690 695 700
Tyr Gly Ser Ser Trp Gly Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
705 710 715 720
Val Thr Val Ser Ala
725
<210> 174
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-Ig
<400> 174
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Arg Val Ile Ile Ser Cys Ser Gly Ser His Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asn Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Phe Cys Gly Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 175
<211> 727
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-Ig
<400> 175
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1. 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Gly Trp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr
465 470 475 480
Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser
485 490 495
Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn Trp Tyr
500 505 510
Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Asp Asp
515 520 525
Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
530 535 540
Thr Ser Ala Phe Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala
545 550 555 560
Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val Phe
565 570 575
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly
580 585 590
Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Val
595 600 605
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser Leu
610 615 620
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met
625 630 635 640
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Phe
645 650 655
Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
660 665 670
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
675 680 685
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
690 695 700
Asp Arg Gly Leu Gly Asp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
705 710 715 720
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
725
<210> 176
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-Ig
<400> 176
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Arg Val Ile Ile Ser Cys Ser Gly Ser His Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asn Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Phe Cys Gly Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 177
<211> 722
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-Ig
<400> 177
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1. 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Ser Gly Trp Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr
465 470 475 480
Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Thr Ile Ser
485 490 495
Cys Gly Gly His Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln
500 505 510
Arg Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Asn Lys Arg
515 520 525
Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr
530 535 540
Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr
545 550 555 560
Tyr Cys Gln Val Trp Asp Asn Tyr Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr
565 570 575
Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
580 585 590
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln
595 600 605
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Val Ser Cys
610 615 620
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg
625 630 635 640
Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ala Ile Glu Pro Met
645 650 655
Tyr Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met
660 665 670
Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu
675 680 685
Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Ala Tyr
690 695 700
Tyr Tyr Asp Phe Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
705 710 715 720
Ser Ser
<210> 178
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> полипептидная цепь scFv-Ig
<400> 178
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1. 5 10 15
Arg Val Ile Ile Ser Cys Ser Gly Ser His Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asn Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ser Asp Tyr Phe Cys Gly Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<---
Claims (41)
1. Выделенная клетка-естественный киллер (NK-клетка) человека в криоконсервированном состоянии для получения NK-клетки, способной проявлять цитотоксическое действие в отношении клетки-мишени, предварительно нагруженная перед замораживанием конструкцией антитела, указанная конструкция антитела содержит по меньшей мере первый связывающий домен, связывающийся с аффинностью по меньшей мере 106 М с антигеном рецептора NK-клетки на клеточной поверхности иммунологической эффекторной клетки, указанный первый связывающий домен содержит три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи, и второй связывающий домен, связывающийся с антигеном клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени, указанный второй связывающий домен содержит три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи.
2. Выделенная NK-клетка человека согласно п. 1, отличающаяся тем, что указанная NK-клетка выделена из ткани пуповины или плаценты, индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSC) или мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) от здоровых доноров.
3. Выделенная NK-клетка человека согласно п. 1 или 2, отличающаяся тем, что указанная NK-клетка консервирована в криорастворе.
4. Выделенная NK-клетка человека согласно любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанная NK-клетка предварительно нагружена в растворе, содержащем указанную конструкцию антитела в концентрации по меньшей мере 5 нМ.
5. Выделенная NK-клетка человека согласно любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что указанный антиген рецептора NK-клеток, с которым связывается указанный первый связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD16a, CD16b, NKp46, NKG2D и CD16a + CD16b.
6. Выделенная NK-клетка человека согласно любому из пп. 1-5, отличающаяся тем, что указанный антиген клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени, с которым связывается указанный второй связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD52, CD70, CD74, CD79b, CD123, CLL1, BCMA, FCRH5, EGFR, EGFRvIII, HER2 и GD2.
7. Выделенная NK-клетка человека согласно любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что указанная конструкция антитела содержит первый связывающий домен, связывающийся с CD16a, и второй связывающий домен, связывающийся с антигеном, выбранным из группы, состоящей из CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD52, CD70, CD74, CD79b, CD123, CLL1, BCMA, FCRH5, EGFR, EGFRvIII, HER2 и GD2.
8. Выделенная NK-клетка человека согласно п. 7, отличающаяся тем, что указанная конструкция антитела содержит в указанном первом связывающем домене три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из:
(a) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 29, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 30, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 31, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 32, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 33, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 34;
(b) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 40, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 41, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 42, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 43, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 44, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 45;
(c) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 51, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 52, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 53, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 54, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 55, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 56;
(d) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 62, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 63, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 64, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 65, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 66, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 67;
(e) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 73, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 74, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 75, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 76, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 77, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 78;
(f) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 84, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 85, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 86, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 87, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 88, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 89; и
(g) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 95, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 96, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 97, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 98, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 99, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 100.
9. Выделенная NK-клетка человека согласно п. 8, отличающаяся тем, что указанная конструкция антитела содержит в указанном первом связывающем домене пары VH- и VL-цепей, имеющих последовательность, указанную в парах последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 35 и SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 57 и SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 90 и SEQ ID NO: 91 и SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 102.
10. Выделенная NK-клетка человека согласно любому из пп. 7-9, отличающаяся тем, что указанная конструкция антитела содержит в указанном втором связывающем домене три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи, выбранные из группы, состоящей из:
(a) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 106, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 107, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 108, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 109, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 110, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 111;
(b) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 128, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 129, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 130, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 131, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 132, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 133;
(c) CDR-H1, указанного под SEQ ID NO: 117, CDR-H2, указанного под SEQ ID NO: 118, CDR-H3, указанного под SEQ ID NO: 119, CDR-L1, указанного под SEQ ID NO: 120, CDR-L2, указанного под SEQ ID NO: 121, CDR-L3, указанного под SEQ ID NO: 122.
11. Выделенная NK-клетка человека согласно любому из пп. 7-10, отличающаяся тем, что указанная конструкция антитела содержит в указанном втором связывающем домене пары VH- и VL-цепей, имеющих последовательность, указанную в парах последовательностей, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 123 и SEQ ID NO: 124, и SEQ ID NO: 134 и SEQ ID NO: 135.
12. Выделенная NK-клетка человека согласно любому из пп. 7-11, отличающаяся тем, что указанная конструкция антитела содержит последовательность белка, указанную под SEQ ID NO: 161-171.
13. Способ получения криоконсервированной предварительно нагруженной NK-клетки человека, указанный способ включает
(i) инкубирование NK-клетки с конструкцией антитела в базальной среде для культивирования клеток, причем указанная конструкция антитела находится в концентрации по меньшей мере 5 нМ и содержит по меньшей мере первый связывающий домен, связывающийся с аффинностью по меньшей мере 106 М с антигеном рецептора NK-клетки на клеточной поверхности иммунологической эффекторной клетки, указанный первый связывающий домен содержит три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи, и второй связывающий домен, связывающийся с антигеном клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени, указанный второй связывающий домен содержит три CDR легкой цепи и три CDR тяжелой цепи; и
(ii) замораживание указанной NK-клетки путем охлаждения до температуры ниже нуля в среде для замораживания, которая содержит базальную среду для культивирования клеток, криозащитный агент и, необязательно, изотонический раствор.
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что указанная NK-клетка выделена из ткани пуповины, iPSC или РВМС от здоровых доноров.
15. Способ по пп. 13 и 14, отличающийся тем, что криопротекторный агент находится в концентрации от 1% до 30% (об./об.).
16. Способ согласно любому из пп. 13-15, отличающийся тем, что указанный антиген рецептора NK-клетки, с которым связывается указанный первый связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD16a, CD16b, NKp46, NKG2D и CD16a + CD16b.
17. Способ согласно любому из пп. 13-16, отличающийся тем, что указанный антиген клеточной поверхности на клеточной поверхности клетки-мишени, с которым связывается указанный второй связывающий домен конструкции антитела, выбран из группы, состоящей из CD19, CD22, CD30, CD33, CD52, CD70, CD74, CD79b, CD123, CLL1, BCMA, FCRH5, EGFR, HER2, GD2.
18. Способ согласно любому из пп. 13-17, отличающийся тем, что среда для замораживания содержит изотонический раствор в диапазоне от 1% до 60% (об./об.).
19. Способ согласно любому из пп. 13-18, отличающийся тем, что указанная конструкция антитела содержит последовательность белка, указанную под SEQ ID NO: 161-171.
20. Способ получения жизнеспособной предварительно нагруженной NK-клетки человека из NK-клетки человека в криоконсервированном состоянии согласно любому из пп. 1-12 для введения указанной клетки субъекту, нуждающемуся в этом, указанный способ характеризуется тем, что он включает стадию получения указанной клетки для введения пациенту путем размораживания NK клетки по любому из пп. 1-12.
21. Фармацевтическая композиция для введения NK-клетки человека пациенту, содержащая NK-клетку человека, которая получена из NK-клетки человека в криоконсервированном состоянии согласно любому из пп. 1-12, и по меньшей мере одно фармацевтическое вспомогательное вещество.
22. Фармацевтическая композиция согласно п. 21, которую вводят пациенту внутривенно.
23. Фармацевтическая композиция согласно п. 21 или 22 для применения для предотвращения, лечения или облегчения заболевания, выбранного из пролиферативного заболевания, опухолевого заболевания или иммунологического расстройства.
24. Фармацевтическая композиция согласно п. 23, отличающаяся тем, что указанное опухолевое заболевание представляет собой злокачественное заболевание, предпочтительно рак.
25. Фармацевтическая композиция согласно п. 24, отличающаяся тем, что указанное злокачественное заболевание выбрано из группы, состоящей из лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, лейкоза, множественной миеломы и солидных опухолей.
26. Способ лечения опухолевого заболевания, указанный способ включает стадию введения субъекту, нуждающемуся в этом, предварительно нагруженной NK-клетки человека, которая была получена из NK-клетки человека в криоконсервированном состоянии согласно любому из пп. 6-12.
27. Способ согласно п. 26, отличающийся тем, что указанную предварительно нагруженную NK-клетку человека вводят пациенту внутривенно.
28. Способ согласно п. 26 или 27, отличающийся тем, что указанное опухолевое заболевание представляет собой злокачественное заболевание, предпочтительно рак.
29. Способ согласно п. 28, отличающийся тем, что указанное злокачественное заболевание выбрано из группы, состоящей из лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, лейкоза, множественной миеломы и солидных опухолей.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP18191031.6 | 2018-08-27 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2021103735A RU2021103735A (ru) | 2022-09-29 |
RU2819927C2 true RU2819927C2 (ru) | 2024-05-28 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011004201A1 (en) * | 2009-07-10 | 2011-01-13 | Mark Lowdell | Preserved compositions of activated nk cells and methods of using the same |
RU2491294C2 (ru) * | 2005-05-26 | 2013-08-27 | Аффимед Терапеутикс Аг | Анти-cd 16 связывающие молекулы |
RU2573307C2 (ru) * | 2009-02-19 | 2016-01-20 | НАТУРИН ГМБХ унд КО. | Способ криоконсервации клеток, искусственные клеточные конструкции или трехмерные сложные комплексы тканей |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2491294C2 (ru) * | 2005-05-26 | 2013-08-27 | Аффимед Терапеутикс Аг | Анти-cd 16 связывающие молекулы |
RU2573307C2 (ru) * | 2009-02-19 | 2016-01-20 | НАТУРИН ГМБХ унд КО. | Способ криоконсервации клеток, искусственные клеточные конструкции или трехмерные сложные комплексы тканей |
WO2011004201A1 (en) * | 2009-07-10 | 2011-01-13 | Mark Lowdell | Preserved compositions of activated nk cells and methods of using the same |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
REUSCH U. et al., A novel tetravalent bispecific TandAb (CD30/CD16A) efficiently recruits NK cells for the lysis of CD30 + tumor cells, MABS, 2014, vol. 6, No. 3, pp. 727-738. * |
S. PASLEY et al., Natural killer-92 cells maintain cytotoxic activity after long-term cryopreservation in novel DMSO-free media, Immunology Letters, 2017, v.192, pp. 35-41. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20220153837A1 (en) | Anti-tigit antibodies and their use as therapeutics and diagnostics | |
RU2725811C1 (ru) | Антитела против 4-1bb человека и их применение | |
EP3843757B1 (en) | Cryopreserved nk cells preloaded with an antibody construct | |
KR102372274B1 (ko) | 세포독성 t-림프구-관련 단백질 4 (ctla-4)에 대한 신규의 단일클론 항체 | |
BR112021002032A2 (pt) | construtos de anticorpos para cldn18.2 e cd3 | |
AU2016302683A1 (en) | Bispecific antibody constructs binding EGFRVIII and CD3 | |
EA036396B1 (ru) | Анти-ctla4 моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, фармацевтическая композиция и применение | |
US20230365709A1 (en) | Trispecific binders | |
CN112625130A (zh) | 抗-tigit抗体及使用之方法 | |
KR20210013090A (ko) | 당단백질 vi를 표적으로 하는 항체 | |
RU2819927C2 (ru) | Криоконсервированные клетки-естественные киллеры, предварительно нагруженные конструкцией антитела | |
JP2024081678A (ja) | 抗体構築物がプレロードされた凍結保存nk細胞 | |
CA3216098A1 (en) | Duplexbodies | |
AU2022382368A1 (en) | Bispecific cd16a binders | |
KR20240099382A (ko) | 이중특이적 cd16a 결합제 |