RU2818369C1 - Способ оценки сохранения жизнеспособности лактобактерий при воздействии различных концентраций антисептика - Google Patents
Способ оценки сохранения жизнеспособности лактобактерий при воздействии различных концентраций антисептика Download PDFInfo
- Publication number
- RU2818369C1 RU2818369C1 RU2023124472A RU2023124472A RU2818369C1 RU 2818369 C1 RU2818369 C1 RU 2818369C1 RU 2023124472 A RU2023124472 A RU 2023124472A RU 2023124472 A RU2023124472 A RU 2023124472A RU 2818369 C1 RU2818369 C1 RU 2818369C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antiseptic
- lactobacilli
- assessing
- viability
- lactobacillus
- Prior art date
Links
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 230000035899 viability Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 238000004321 preservation Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 7
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title abstract 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 6
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 abstract description 4
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 abstract description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 4
- 244000005706 microflora Species 0.000 abstract description 3
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000013100 final test Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- YUXKLHOWBIKGKB-UHFFFAOYSA-N benzyl-dimethyl-[3-(tetradecanoylamino)propyl]azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Cl-].CCCCCCCCCCCCCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 YUXKLHOWBIKGKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- 241000218492 Lactobacillus crispatus Species 0.000 description 2
- 241001561398 Lactobacillus jensenii Species 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии и гинекологии. Предложен способ оценки сохранения жизнеспособности лактобактерий при воздействии различных концентраций антисептика, характеризующийся тем, что штаммы лактобактерий вносят в пробирку с жидкой питательной средой для приготовления инокулюма плотностью 0,5 по стандарту МакФарланда, далее вносят антисептик в объеме, необходимом для создания конечной тестируемой концентрации; пробирки помещают в термостат, инкубируют в аэробных условиях в течение 48 ч при 37°С с последующим пересевом содержимого пробирок на агар для лактобактерий и инкубацией в микроаэрофильных условиях в течение 72 ч при 37°С с последующей оценкой сохранения жизнеспособности лактобактерий по наличию роста единичных колоний лактобактерий на плотной питательной среде для каждой концентрации антисептика. Изобретение обеспечивает сохранение максимально возможного количества представителей нормальной микрофлоры влагалища при профилактике и лечении воспалительных заболеваний в гинекологии. 1 табл., 1 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и гинекологии, и может быть использовано для оценки жизнеспособности лактобактерий при использовании антисептиков местного применения для профилактики и лечения воспалительных заболеваний в гинекологии.
Уровень техники
Известен способ оценки эффективности антимикробного воздействия антисептиков на бактерии, существующие в форме биопленки, заключающийся в создании модели бактериальной биопленки из любых бактериальных культур, выделенных из клинического материала пациента, подборе доз воздействия антисептиков. Регистрацию воздействия антисептиков на биопленку проводят дополнительно по изменению цвета питательной среды и ее помутнению с помощью микропланшетного фотометра, дополнительно проводят высев содержимого лунок на питательный агар. Оценка антимикробного эффекта рассчитывается как отношение рабочей концентрации антисептика к его минимальной подавляющей концентрации, и при величине индекса 2-4 считают антисептик активным. Изобретение повышает достоверность наличия воздействия антисептика, позволяет определить бактерицидный или бактериостатический тип действия антисептика на биопленочные формы бактерий, а оценка эффективности по индексу активности антисептика повышает точность оценки результатов [Патент РФ на изобретение №2603100, заявка 201514630/10, 29.10.2015, опубликовано: 20.11.2016. Бюл. №32].
Недостатками данного способа является использование микропланшетного фотометра для иммуноферментного анализа или биохимических исследований, что технически возможно не во всех бактериологических лабораториях.
Известен способ оценки эффективности средств местного антисептического воздействия, заключающийся в определении чувствительности планктонных и диспергированных ультразвуком биопленочных форм микроорганизмов к антисептикам, смешанным с питательным бульоном в соотношении один к четырем. Регистрацию воздействия антисептика на микроорганизмы проводят путем определения наличия роста в опытной и контрольной (без антисептика) пробирках: при наличии роста в контрольной и отсутствии в опытной - культуру относят к клинически чувствительной, при наличии роста в обеих пробирках - к клинически устойчивой к изучаемому антисептику. При этом в качестве модели бактериальной биопленки используют биопленку из любых бактериальных культур и их ассоциаций, выделенных из клинического материала пациентов, которую выращивают на дренажных полимерах [Теплякова О.В., Соседова Е.В и др. материалы 2-й научно-практической школы-семинара молодых ученых по мероприятию «Поддержка развития внутрироссийской мобильности научных и научно-педагогических кадров путем выполнения научных исследований молодыми учеными и преподавателями в научно-образовательных центрах» Тольятти 18-21 декабря 2012 г.].
Недостатками данного способа является субъективная визуальная оценка эффективности антисептика, применяемого только в одной концентрации, что не позволяет выявить штаммы микроорганизмов, устойчивых к низким концентрациям антисептика.
За прототип принимается способ оценки антибактериального действия антисептиков на микробные биопленки заключающийся в том, что оценивают влияние антисептического препарата на микробную биопленку, образованную смешанной культурой бактерий, представленной возбудителями инфекционных осложнений. Для этого полимикробные микробные биопленки, сформированные in vitro, подвергают 60-минутному воздействию антисептика, после чего оценивают и сравнивают с контролем (без воздействия антисептика) два показателя: массивность биопленки (в Ед ОП) и жизнеспособность (по числу КОЕ), входящих в ее состав бактерий. Если Ед ОП снизился на 70% и КОЕ не обнаружены, антисептик считают высокоэффективным; если Ед ОП снизился от 30 до 70% и число КОЕ снизилось на 4 порядка и более, антисептик считают среднеэффективным; при снижении Ед ОП менее 30% и снижении числа КОЕ менее чем на 4 порядка антисептик оценивают как низкоэффективный. Изобретение обеспечивает повышение точности и объективности способа за счет оценки антибактериального действия антисептика на полимикробные биопленки [Патент РФ на изобретение №2621306, заявка 2016122539, 07.06.2016, опубликовано: 01.06.2017 Бюл. №16].
Недостатками данного способа является использование микропланшетного ридера и ультразвуковой ванны, что технически возможно не во всех бактериологических лабораториях. Также данный способ предназначен для контроля пленкообразования патогенных микроорганизмов, таких как Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus, что может не подходить для оценки жизнеспособности нормальной и условно-патогенной микрофлоры.
Раскрытие изобретения
Задачей изобретения является определение оптимальной концентрации антисептиков местного применения для профилактики и лечения воспалительных заболеваний в гинекологии с целью сохранения максимально возможного количества представителей нормальной микрофлоры влагалища.
Это достигается тем, что в отличие от известных способов оценки антибактериального действия антисептиков штаммы лактобактерий вносятся в пробирку с жидкой питательной средой (бульоном), объемом 5 мл для приготовления инокулюма (бактериальной суспензии). Плотность инокулюма должна соответствовать 0,5 по стандарту МакФарланда, что эквивалентно количеству бактериальных клеток 108 КОЕ/мл. Для приготовления инокулюма используется жидкая питательная среда (бульон) Rogosa SL broth для выделения лактобактерий, определение оптической плотности бактериальных суспензий проводится с помощью денситометра. Далее в пробирку вносится антисептик в объеме, необходимом для создания конечной тестируемой концентрации. Пробирки помещаются в термостат, где инкубируются в аэробных условиях в течение 48 часов при температуре 37°С. Далее проводится посев содержимого пробирок на чашки Петри агаром для лактобактерий. Засеянные чашки Петри помещаются в термостат, где инкубируются в микроаэрофильных условиях в течение 72 часов при температуре 37°С. После этого оценивается видимой рост колоний лактобактерий с подсчетом колониеобразующих единиц (КОЕ), выраженный в процентах.
Осуществление изобретения
Сущность предложенного метода заключается в следующем: штаммы лактобактерий вносятся в пробирку с жидкой питательной средой (бульоном), объемом 5 мл для приготовления инокулюма (бактериальной суспензии). Плотность инокулюма должна соответствовать 0,5 по стандарту МакФарланда, что эквивалентно количеству бактериальных клеток 108 КОЕ/мл. Для приготовления инокулюма используется жидкая питательная среда (бульон) Rogosa SL broth для выделения лактобактерий, определение оптической плотности бактериальных суспензий проводится с помощью денситометра. Далее в пробирку вносится антисептик в объеме, необходимом для создания конечной тестируемой концентрации. Пробирки помещаются в термостат, где инкубируются в аэробных условиях в течение 48 часов при температуре 37°С. Далее содержимое пробирок засевается с использованием техники посева «газоном» на чашки Петри с агаром для лактобактерий. Засеянные чашки Петри помещаются в термостат, где инкубируются в микроаэрофильных условиях в течение 72 часов при температуре 37°С. После этого оценивается видимой рост колоний лактобактерий с подсчетом колониеобразующих единиц (КОЕ), выраженный в процентах.
В предложенном способе оценки сохранения жизнеспособности лактобактерий концентрации тестируемых антисептиков создаются в инокулюме (бактериальной суспензии), приготовленном с использованием жидкой питательной среды Rogosa SL broth, что создает оптимальные условия для выделения лактобактерий.
Осуществление предлагаемого способа можно продемонстрировать на следующем примере:
Оценено влияние различных концентраций бензилдиметил [3(миристоиламино)пропил] аммония хлорида моногидрата на сохранение жизнеспособности лактобактерий с использованием штаммов L.crispatus и L.jensenii. Бактериальные суспензии были приготовлены на основе бульона Мюллера-Хинтона, плотность суспензии соответствовала 0,5 по стандарту МакФарланда. Для моделирования возможных физиологических и патологических значений pH влагалища добавлялись различные объемы 90% раствора молочной кислоты, было смоделировано 3 значения: 3,0; 4,2; 5,6. Контроль значений pH проводился pH-метром. Положительный контроль включал бульон Мюллера-Хинтона с взвесью микроорганизмов и молочную кислоту в необходимом объеме для соответствующего рН, отрицательный контроль включал бульон Мюллера-Хинтона с взвесью микроорганизмов и раствор бензилдиметил [3(миристоиламино)пропил] аммония хлорида моногидрата в концентрации 0,01%. Каждый вид лактобактерий тестировался в 10 повторах при каждом значении pH. Сохранение жизнеспособности лактобактерий оценивалось при следующих концентрациях бензилдиметил [3(миристоиламино)пропил] аммония хлорида моногидрата: 0,04%, 0,02%, 0,01%, 0,005%, 0,0025%, 0,00125%.
Результат: после инкубации, рассева на плотные питательные среды и повторной инкубации образцов был зафиксирован рост единичных колоний на всех типах плотных питательных сред при концентрации бензилдиметил [3(миристоиламино)пропил] аммония хлорида моногидрата 0,00125% при рН 4,2. В других концентрациях антисептика роста микроорганизмов обнаружено не было. Контрольные образцы показали видимый рост в случае положительного контроля и отсутствие роста в случае отрицательного контроля во всех случаях. Выросшие колонии были идентифицированы до вида с помощью метода MALDI-ToF масс-спектрометрии.
Предлагаемый способ позволяет оценить жизнеспособность лактобактерий, составляющих нормальную микробиоту влагалища при использовании антисептиков местного применения, что способствует оптимизации профилактики и лечения воспалительных заболеваний в гинекологии.
| Оценка жизнеспособности лактобацилл при разных концентрациях бензилдиметил [3(миристоиламино)пропил] аммония хлорида моногидрата. | ||||||||||
| Вид | рН | N | Концентрация антисептика, % | Положительный контроль, % случаев | Отрицательный контроль, % случаев | |||||
| 0,04 | 0,02 | 0,01 | 0,005 | 0,0025 | 0,00125 | |||||
| L. crispatus | 3,0 | 10 | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | 100 | р/н |
| 4,2 | 10 | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | 33% | 100 | р/н | |
| 5,6 | 10 | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | 100 | р/н | |
| L. jensenii | 3,0 | 10 | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | 100 | р/н |
| 4,2 | 10 | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | 47% | 100 | р/н | |
| 5,6 | 10 | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | р/н | 100 | р/н | |
| р/н - роста нет | ||||||||||
Claims (1)
- Способ оценки сохранения жизнеспособности лактобактерий при воздействии различных концентраций антисептика, характеризующийся тем, что штаммы лактобактерий вносят в пробирку с жидкой питательной средой объемом 5 мл для приготовления инокулюма плотностью 0,5 по стандарту МакФарланда, далее в пробирку вносят антисептик в объеме, необходимом для создания конечной тестируемой концентрации; пробирки помещают в термостат, где инкубируют в аэробных условиях в течение 48 ч при температуре 37°С с последующим пересевом содержимого пробирок на агар для лактобактерий и инкубацией в микроаэрофильных условиях в течение 72 ч при температуре 37°С с последующей оценкой сохранения жизнеспособности лактобактерий по наличию роста единичных колоний лактобактерий на плотной питательной среде для каждой концентрации антисептика.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2818369C1 true RU2818369C1 (ru) | 2024-05-02 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2621306C1 (ru) * | 2016-06-07 | 2017-06-01 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ оценки антибактериального действия антисептиков на микробные биопленки |
| RU2781985C1 (ru) * | 2021-12-30 | 2022-10-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Приволжский исследовательский медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО "ПИМУ"Минздрава России) | Способ определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2621306C1 (ru) * | 2016-06-07 | 2017-06-01 | государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермский государственный медицинский университет имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ оценки антибактериального действия антисептиков на микробные биопленки |
| RU2781985C1 (ru) * | 2021-12-30 | 2022-10-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Приволжский исследовательский медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО "ПИМУ"Минздрава России) | Способ определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ДЕТУШЕВА Е.В. и др. "Чувствительность планктонных культур и биопленок грамотрицательных бактерий к коммерческим препаратам дезинфектантов и антисептиков"; Клиническая лабораторная диагностика, 2021, N 66(7), с. 438-447. САВИЧЕВА А.М. и др. "Отдаленные результаты двухэтапного лечения бактериального вагиноза с применением антисептиков и пробиотиков"; Акушерство и гинекология: новости, мнения, обучение. 2021, том 9, N 4, c. 19-28. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2505813C1 (ru) | Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам | |
| Sachivkina et al. | The evaluation of intensity of formation of biomembrane by microscopic fungi of the Candida genus | |
| RU2455355C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИОФАГА Pseudomonas aeruginosa, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ ОСНОВЫ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ АСЕПТИЧЕСКОГО СРЕДСТВА ПРОТИВ СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ | |
| Baillie | Chlorhexidine resistance among bacteria isolated from urine of catheterized patients | |
| RU2818369C1 (ru) | Способ оценки сохранения жизнеспособности лактобактерий при воздействии различных концентраций антисептика | |
| Hegde et al. | Effect of exposure to hydrogen peroxide on the virulence of Escherichia coli | |
| RU2319746C2 (ru) | Способ ускоренного определения чувствительности буркхольдерий к химиопрепаратам | |
| Rahman et al. | Isolation and identification of Escherichia coli from urine samples and their antibiotic susceptibility pattern | |
| Kundera et al. | Identification of Bacteria on Cockroach Feet (Periplaneta americana) in Resident Bay of Palu Permai and Sensitivity Test Against Antibiotics | |
| Khalil | Prevalence and antibiogram of uncomplicated lower urinary tract infections in human population of Gilgit, Northern Areas of Pakistan | |
| Isola et al. | Isolation and identification of microorganisms from surfaces in science laboratories | |
| Samuel et al. | ANTIBIOTIC RESISTANCE PATTERN OF BACTERIAL ISOLATES ASSOCIATED WITH ASYMPTOMATIC URINARY TRACT INFECTIONS IN WUKARI METROPOLIS, TARABA STATE, NIGERIA. | |
| Javeria et al. | Isolation of lichen forming fungus of Everniastrum cirrhatum and evaluate its antagonistic and antimicrobial activity | |
| Makia et al. | Biofilm production as a virulence factor in Uropathogenic bacteria and yeasts | |
| AL-Jumaa et al. | Laboratory Diagnosis of Mycoplasma spp. from the Upper Respiratory Tract and Conjunctival Infections in Shelter Cats | |
| RU2332671C2 (ru) | Способ прогнозирования хронического течения урогенитальной гонококковой инфекции | |
| RU2258220C1 (ru) | Способ прогнозирования течения пиодермий | |
| RU2194281C1 (ru) | Способ раннего прогнозирования хронического течения заболевания у детей, перенесших острый пиелонефрит | |
| UA120723C2 (uk) | Спосіб визначення антибактеріальної активності меду відносно proteus vulgaris | |
| Saleem et al. | Cefepime Resistance among Escherichia coli Isolates from Clinical Specimens in Mayo Hospital, Lahore | |
| RU2603100C1 (ru) | Способ оценки эффективности антимикробного воздействия антисептиков на бактерии, существующие в форме биопленки | |
| Omar | Prevalence and Gender Related Etiology of Asymptomatic Bacteriuria in Medical Student of the Libyan International Medical University | |
| RU2273854C2 (ru) | Способ индивидуального выбора эффективного химиотерапевтического средства для лечения воспалительных заболеваний микробной этиологии | |
| Kovalenko et al. | Sanitary microbiology: learning guide | |
| Kamel et al. | Effect of natural surface secretes of some common ornamental plants leaves on pathogenic micro-organisms |