RU2817986C1 - Method for evaluating efficacy of radioprotective drugs using humanised mice - Google Patents
Method for evaluating efficacy of radioprotective drugs using humanised mice Download PDFInfo
- Publication number
- RU2817986C1 RU2817986C1 RU2023104453A RU2023104453A RU2817986C1 RU 2817986 C1 RU2817986 C1 RU 2817986C1 RU 2023104453 A RU2023104453 A RU 2023104453A RU 2023104453 A RU2023104453 A RU 2023104453A RU 2817986 C1 RU2817986 C1 RU 2817986C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mice
- cells
- human
- hscs
- irradiation
- Prior art date
Links
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 title claims abstract description 72
- 239000000718 radiation-protective agent Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 50
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 33
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 67
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 claims description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 8
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 206010073306 Exposure to radiation Diseases 0.000 claims description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 claims description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 claims 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 16
- 230000005855 radiation Effects 0.000 abstract description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 11
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 5
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 238000011789 NOD SCID mouse Methods 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 3
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000000693 radiobiological effect Effects 0.000 description 2
- 230000003537 radioprotector Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 2
- 208000001395 Acute radiation syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 1
- 101100220044 Homo sapiens CD34 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 1
- 101000797623 Homo sapiens Protein AMBP Proteins 0.000 description 1
- 101150073096 NRAS gene Proteins 0.000 description 1
- 102100032859 Protein AMBP Human genes 0.000 description 1
- 206010068142 Radiation sickness syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003260 anti-sepsis Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 229940124554 radiomitigator Drugs 0.000 description 1
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно, к исследованию биологических материалов, в частности, крови и может использоваться в радиационной медицине, фармакологии.The invention relates to medicine, namely, to the study of biological materials, in particular blood, and can be used in radiation medicine and pharmacology.
Проблема заключается в следующем.The problem is this.
Экспериментальные модели для доклинических исследований являются очень важным инструментом в разработке новых лекарственных средств. Однако доклинические модели на животных из-за видоспецифических отличий часто недостаточно отражают физиологическую ситуацию у людей, что впоследствии приводит к неудачам лечения в клинических испытаниях. Особенно важным это является при проведении доклинических исследований радиозащитных средств, когда очень сложно организовать клинические исследования на II-IV стадиях клинических исследований вследствие редкой встречаемости острого радиационного синдрома. Поэтому доклинические исследования, где в качестве модели рассматриваются системы человека in vivo, в модели ксенотрансплантации, дают существенные преимущества, поскольку позволяют оценивать действие исследуемых препаратов на клетки человека in vivo.Experimental models for preclinical research are a very important tool in the development of new drugs. However, preclinical animal models, due to species-specific differences, often do not adequately reflect the physiological situation in humans, which subsequently leads to treatment failure in clinical trials. This is especially important when conducting preclinical studies of radioprotective agents, when it is very difficult to organize clinical studies at stages II-IV of clinical trials due to the rare occurrence of acute radiation syndrome. Therefore, preclinical studies, where human systems in vivo, in a xenotransplantation model, are considered as a model, provide significant advantages, since they allow one to evaluate the effect of the studied drugs on human cells in vivo.
В литературе описаны подходы к применению иммунодефицитных мышей с трансплантированными опухолями или опухолевыми клетками человека (ксенографтами) в доклинических исследованиях противоопухолевых средств (Wege, А.K., 2018; Cogels MM. et al. 2021; Gauthier L.M., 2022; Gbyli R. et al., 2020; Park N. et al., 2020). Однако опухолевые ксенографты не могут быть применены для доклинических исследований радиозащитных средств.The literature describes approaches to the use of immunodeficient mice with transplanted tumors or human tumor cells (xenografts) in preclinical studies of antitumor agents (Wege, A.K., 2018; Cogels M.M. et al. 2021; Gauthier L.M., 2022; Gbyli R. et al. al., 2020; Park N. et al., 2020). However, tumor xenografts cannot be used for preclinical studies of radioprotective agents.
Известен «Подкожный ксенографт клеточной линии беспигментной меланомы кожи человека mel Rac с мутацией NRAS для доклинического изучения противоопухолевых таргетных средств», представленный в п. РФ №2651939 С2.Known is “Subcutaneous xenograft of a cell line of non-pigmented human skin melanoma mel Rac with an NRAS mutation for preclinical study of antitumor targeted agents”, presented in clause of the Russian Federation No. 2651939 C2.
Известный способ характеризуется следующей формулой: «Применение подкожного ксенографта клеточной линии беспигментной меланомы кожи человека mel Rac с мутацией гена NRAS и с адаптацией к росту со стабильной кинетикой у иммунодефицитных мышей Balb/c nude для доклинического изучения таргетных противоопухолевых средств».The known method is characterized by the following formula: “The use of a subcutaneous xenograft of a cell line of non-pigmented human skin melanoma mel Rac with a mutation of the NRAS gene and with adaptation to growth with stable kinetics in immunodeficient Balb/c nude mice for preclinical study of targeted antitumor agents.”
Недостатком известного способа является то, что опухолевый ксенографт клеточной линии беспигментной меланомы кожи человека не является адекватной моделью для доклинических исследований радиозащитных средств. В организме человека при облучении в дозах до 10 Гр критическим является повреждение гемопоэтических стволовых клеток и других клеток системы кроветворения и иммунной системы.The disadvantage of this known method is that a tumor xenograft of a cell line of human skin amelanoma is not an adequate model for preclinical studies of radioprotective agents. In the human body, when irradiated at doses up to 10 Gy, damage to hematopoietic stem cells and other cells of the hematopoietic and immune system is critical.
Недостатком известных способов является невозможность создать модель радиационного поражения кроветворной системы человека, наиболее чувствительной к действию ионизирующего излучения. Именно на защиту кроветворной системы и ее восстановление после облучения должно быть направлено действие радиозащитных средств.The disadvantage of the known methods is the impossibility of creating a model of radiation damage to the human hematopoietic system, which is most sensitive to the action of ionizing radiation. The action of radioprotective agents should be aimed at protecting the hematopoietic system and its restoration after irradiation.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является способ использования мышей линии NOD SCID в качестве модели для радиобиологических исследований клеток человека in vivo, представленный в ст. Атаманюк Н.И. и др. «Радиационная индукция фокусов γ-Н2АХ в лимфоцитах человека в моделях in vitro и in vivo при ксенотрансплантации NOD SCID мышам» в журн. «Вопросы радиационной безопасности», 2019 г., №4, стр. 44-54 и выбранный в качестве прототипа (см. Приложение к заявке).The closest in technical essence to the claimed is the method of using NOD SCID mice as a model for radiobiological studies of human cells in vivo, presented in Art. Atamanyuk N.I. et al. “Radiation induction of γ-H2AX foci in human lymphocytes in in vitro and in vivo models during xenotransplantation of NOD SCID mice” in the journal. “Issues of Radiation Safety”, 2019, No. 4, pp. 44-54 and selected as a prototype (see Appendix to the application).
Известный способ заключается в следующем. Берут человека - донора, производят забор у него периферической крови, из которой выделяют лейкоциты, затем клетки от каждого донора вводят внутрибрюшинно двум мышам NOD SCID (линия СВ17-Prkdcscid/NcrCrl). Животные после инъекции человеческих клеток содержат в условиях SPF-вивария в течение 21 дня. Животных облучают в дозе 10 Гр через 21 день после введения клеток человека. Первой из двух мышей, получивших инъекцию клеток от одного и того же донора, вводят радиозащитный препарат (меркамин) внутрибрюшинно в дозе 205 мг/кг за 15 мин до облучения, вторую мышь с клетками того же донора облучают без радиопротектора. Через 30 мин и через 120 мин после облучения у мышей отбирают периферическую кровь из хвостовой вены, окрашивают клетки крови для подсчета числа человеческих CD45+клеток и измерения интенсивности флюоресценции антител γ-Н2АХ в клетках человека. Через 2 часа после облучения животных забивают, извлекают селезенки, гомогенизируют и окрашивают человеческие CD45+клетки и фокусы γ-Н2АХ в клетках человека в полученной суспензии спленоцитов. Измерения проводят методом проточной цитометрии. Сравнивают измеряемые показатели после облучения у мышей, получивших и не получивших инъекцию радиозащитного препарата.The known method is as follows. A human donor is taken, his peripheral blood is collected, from which leukocytes are isolated, then the cells from each donor are injected intraperitoneally into two NOD SCID mice (CB17-Prkdcscid/NcrCrl line). After injection of human cells, animals are kept in an SPF vivarium for 21 days. Animals are irradiated at a dose of 10 Gy 21 days after injection of human cells. The first of two mice that received an injection of cells from the same donor is injected with a radioprotective drug (mercamin) intraperitoneally at a dose of 205 mg/kg 15 minutes before irradiation; the second mouse with cells from the same donor is irradiated without a radioprotector. 30 min and 120 min after irradiation, peripheral blood was collected from the mice from the tail vein, blood cells were stained to count the number of human CD45+ cells and measure the fluorescence intensity of γ-H2AX antibodies in human cells. 2 hours after irradiation, the animals are sacrificed, the spleens are removed, human CD45+ cells and γ-H2AX foci in human cells are homogenized and stained in the resulting splenocyte suspension. Measurements are carried out using flow cytometry. The measured parameters after irradiation are compared in mice that received and did not receive an injection of a radioprotective drug.
Принцип использования иммунодефицитных мышей здесь состоит в следующем: после приживления человеческих клеток животное подвергается действию изучаемого фактора (определенный тип излучения, химический агент, лекарственный препарат), через некоторое время после воздействия оценивают ожидаемый эффект (например, такие показатели как количество клеток человека, радиационно-индуцированные повреждения ДНК, эффективность систем репарации, апоптоз, иммунологические реакции). Такие модели могут быть использованы также в целях отбора и тестирования лекарственных средств защиты человека от ионизирующих излучений.The principle of using immunodeficient mice here is as follows: after the engraftment of human cells, the animal is exposed to the factor being studied (a certain type of radiation, a chemical agent, a drug); some time after exposure, the expected effect is assessed (for example, indicators such as the number of human cells, radiation induced DNA damage, efficiency of repair systems, apoptosis, immunological reactions). Such models can also be used for the selection and testing of drugs to protect humans from ionizing radiation.
Недостатком известного решения является использование зрелых лейкоцитов, а не стволовых кроветворных клеток, отсутствие моделирования человеческого кроветворения, измерение показателей однократно через 2 часа после облучения без оценки последующего восстановления. Перечисленные недостатки снижают надежность оценки эффективности и безопасности радиозащитных лекарственных средств.The disadvantage of the known solution is the use of mature leukocytes rather than hematopoietic stem cells, the lack of modeling of human hematopoiesis, and measurement of indicators once 2 hours after irradiation without assessing subsequent recovery. The listed disadvantages reduce the reliability of assessing the effectiveness and safety of radioprotective drugs.
Задачей является повышение надежности оценки эффективности и безопасности радиозащитных лекарственных средств путем повышения качества проводимых доклинических исследований радиозащитных средств.The goal is to increase the reliability of assessing the effectiveness and safety of radioprotective drugs by improving the quality of preclinical studies of radioprotective drugs.
Поставленная задача решается тем, что в способе оценки эффективности радиозащитных лекарственных средств, заключающемся в том, что у человека - донора получают клетки крови, которые вводят мышам с тяжелым комбинированным иммунодефицитом, затем мышам вводят радиозащитное средство, подвергают мышей ионизирующему облучению, затем после воздействия облучения анализируют человеческие клетки СОГЛАСНО ИЗОБРЕТЕНИЮ, от человека-донора в качестве клеток крови получают гемопоэтические стволовые клетки - ГСК, до введения ГСК иммунодефицитных мышей подвергают гамма-облучению в дозе 2,5 Гр с мощностью дозы 0, 91 Гр/мин, затем ГСК вводят им внутривенно в боковую хвостовую вену в количестве 30-200 тыс. клеток на каждое животное, выдерживают мышей не менее 8 недель, после чего одной из групп - группе защищенных мышей вводят испытуемое радиозащитное средство, затем проводят гамма-облучение всех мышей в дозе 0,5 Гр или 1 Гр с мощностью дозы 0,91 Гр/мин, идентифицируют человеческие клетки в костном мозге и измеряют долю ГСК от общего количества всех CD451low/ CD45+клеток человека для каждого животного после облучения у группы мышей без применения радиозащитного средства и у группы защищенных мышей, при этом радиозащитное средство оценивают как эффективное, если коэффициент K 14/3 у защищенных мышей выше, чем коэффициент K 14/3 у незащищенных мышей, где коэффициент K 14/3 - это отношение доли ГСК на 14 сутки после облучения к доле ГгСК человека на третьи сутки после облучения.The problem is solved by the fact that in the method of assessing the effectiveness of radioprotective drugs, which consists in the fact that blood cells are obtained from a human donor, which are injected into mice with severe combined immunodeficiency, then the mice are injected with a radioprotective agent, the mice are exposed to ionizing radiation, then after exposure to radiation analyze human cells ACCORDING TO THE INVENTION, hematopoietic stem cells - HSCs - are obtained from a human donor as blood cells, before the introduction of HSCs, immunodeficient mice are subjected to gamma irradiation at a dose of 2.5 Gy with a dose rate of 0.91 Gy/min, then HSCs are injected into them intravenously into the lateral tail vein in the amount of 30-200 thousand cells per animal, keep the mice for at least 8 weeks, after which one of the groups - the group of protected mice - is injected with the test radioprotective agent, then gamma irradiation is carried out on all mice at a dose of 0.5 Gy or 1 Gy with a dose rate of 0.91 Gy/min, identify human cells in the bone marrow and measure the proportion of HSCs from the total number of all human CD451low/CD45+ cells for each animal after irradiation in a group of mice without the use of a radioprotective agent and in a group of protected ones mice, while the radioprotective agent is assessed as effective if the K 14/3 coefficient in protected mice is higher than the K 14/3 coefficient in unprotected mice, where the K 14/3 coefficient is the ratio of the proportion of HSCs on the 14th day after irradiation to the proportion of HgSCs person on the third day after irradiation.
При этом гемопоэтические стволовые клетки крови выделяют из пуповинной крови человека-донора методом иммуномагнитной сепарации клеток CD45 или гемопоэтические стволовые клетки человека получают из материала биопсии костного мозга, либо гемопоэтические стволовые клетки выделяют методом клеточного сортинга активируемого флуоресценцией или гемопоэтические стволовые клетки получают методами антител-опосредованной сортировки клеток.In this case, hematopoietic blood stem cells are isolated from the umbilical cord blood of a human donor by the method of immunomagnetic separation of CD45 cells, or human hematopoietic stem cells are obtained from bone marrow biopsy material, or hematopoietic stem cells are isolated by fluorescence-activated cell sorting, or hematopoietic stem cells are obtained by antibody-mediated sorting. cells.
Использование в заявляемом способе мышей, гуманизированных путем введения ГСК человека, в совокупности с тем, что для исследования часть мышей до введения ГСК иммунодефицитных мышей подвергают гамма-облучению в дозе 2,5 Гр с мощностью дозы 0,91 Гр/мин, затем ГСК вводят им внутривенно в боковую хвостовую вену в количестве 30-200 тыс. клеток на каждое животное, выдерживают мышей не менее 8 недель, после чего одной из групп - группе защищенных мышей вводят испытуемое радиозащитное средство, затем проводят гамма-облучение всех мышей в дозе 0,5 Гр или 1 Гр с мощностью дозы 0,91 Гр/мин, идентифицируют человеческие клетки в костном мозге и измеряют долю ГСК от общего количества всех CD451low/ CD45+клеток человека для каждого животного после облучения у группы мышей без применения радиозащитного средства и при применении испытуемого радиозащитного средства на 14-е сутки после облучения, позволяет оценить влияние применяемых радиозащитных средств на количество клеток человека после облучения, их гибель, восстановление.The use in the claimed method of mice humanized by introducing human HSCs, in combination with the fact that for the study, some mice, before the introduction of HSCs, immunodeficient mice are subjected to gamma irradiation at a dose of 2.5 Gy with a dose rate of 0.91 Gy/min, then HSCs are administered they are injected intravenously into the lateral tail vein in the amount of 30-200 thousand cells per animal, the mice are kept for at least 8 weeks, after which one of the groups - the group of protected mice - is injected with the test radioprotective agent, then gamma irradiation is carried out on all mice at a dose of 0. 5 Gy or 1 Gy at a dose rate of 0.91 Gy/min, identifies human cells in the bone marrow and measures the proportion of HSCs from the total number of all human CD451low/CD45+ cells for each animal after irradiation in a group of mice without and with radioprotective agent of the tested radioprotective agent on the 14th day after irradiation, allows one to evaluate the effect of the used radioprotective agents on the number of human cells after irradiation, their death, and recovery.
Измерение количества клеток человека, проводимое через 3 и 14 суток после облучения, дает возможность оценивать как повреждение, так и восстановление клеток человека с помощью коэффициента K14/3, равного отношению доли ГСК человека на 14 сутки после облучения к доле ГСК человека на 3 сутки после облучения.Measuring the number of human cells, carried out 3 and 14 days after irradiation, makes it possible to assess both damage and restoration of human cells using the K 14/3 coefficient, equal to the ratio of the proportion of human HSCs on the 14th day after irradiation to the proportion of human HSCs on the 3rd day after irradiation.
Анализ гемопоэза путем сравнения реакции ГСК на облучение после применения испытуемого средства с реакцией ГСК на облучение без его применения дает возможность более достоверно оценить эффективность радиозащитных средств. На основе этого анализа считают, что вещество обладает радиозащитным действием, если увеличивается коэффициент K14/3.Analysis of hematopoiesis by comparing the reaction of HSCs to irradiation after using the test agent with the reaction of HSCs to irradiation without its use makes it possible to more reliably assess the effectiveness of radioprotective agents. Based on this analysis, a substance is considered to have a radioprotective effect if the K 14/3 coefficient increases.
Технический результат - повышение достоверности оценки эффективности и безопасности радиозащитных лекарственных средств.The technical result is to increase the reliability of assessing the effectiveness and safety of radioprotective medicines.
Заявляемый способ обладает новизной в сравнении с прототипом, отличаясь от него такими существенными признаками как получение от человека-донора в качестве клеток крови гемопоэтических стволовых клеток - ГСК, гамма-облучение до введения ГСК иммунодефицитных мышей в дозе 2,5 Гр с мощностью дозы 0,91 Гр/мин, последующее введение ГСК мышам внутривенно в боковую хвостовую вену в количестве 30-200 тыс. клеток на каждое животное, выдерживание мышей не менее 8 недель, введение после этого одной из групп - группе защищенных мышей испытуемого радиозащитного средства, последующее гамма-облучение всех мышей в дозе 0,5 Гр или 1 Гр с мощностью дозы 0,91 Гр/мин, идентификация человеческих клеток в костном мозге и измерение доли ГСК от общего количества всех CD451low/ Сβ45+клеток человека для каждого животного после облучения у группы мышей без применения радиозащитного средства и у группы защищенных мышей, и оценка при этом радиозащитного средства как эффективное, если коэффициент K 14/3 у защищенных мышей выше, чем коэффициент K 14/3 у незащищенных мышей, где коэффициент K 14/3 - это отношение доли ГСК на 14 сутки после облучения к доле гСК человека на третьи сутки после облучения, обеспечивающими в совокупности достижение заданного результата.The inventive method is novel in comparison with the prototype, differing from it in such significant features as obtaining hematopoietic stem cells - HSCs - from a human donor as blood cells, gamma irradiation before the introduction of HSCs into immunodeficient mice at a dose of 2.5 Gy with a dose rate of 0, 91 Gy/min, subsequent administration of HSCs to mice intravenously into the lateral tail vein in the amount of 30-200 thousand cells per animal, keeping the mice for at least 8 weeks, after this administration of the tested radioprotective agent to one of the groups - the group of protected mice, subsequent gamma- irradiation of all mice with a dose of 0.5 Gy or 1 Gy with a dose rate of 0.91 Gy/min, identification of human cells in the bone marrow and measurement of the proportion of HSCs from the total number of all human CD451low/Cβ45+ cells for each animal after irradiation in a group of mice without the use of a radioprotective agent and in a group of protected mice, and assessing the radioprotective agent as effective if the K 14/3 ratio in protected mice is higher than the K 14/3 ratio in unprotected mice, where the K 14/3 ratio is the ratio of the proportion HSCs on the 14th day after irradiation to the proportion of human HSCs on the third day after irradiation, which together ensure the achievement of the desired result.
Заявителю неизвестны технические решения, обладающие указанными отличительными признаками, которые давали бы в совокупности достижение заявленного результата, поэтому он считает, что заявляемый способ соответствует критерию «изобретательский уровень».The applicant does not know technical solutions that have the specified distinctive features, which would collectively achieve the claimed result, therefore he believes that the claimed method meets the criterion of “inventive step”.
Заявляемый способ может найти широкое применение в радиационной медицине, радиобиологии и потому соответствует критерию «промышленная применимость».The inventive method can find wide application in radiation medicine, radiobiology and therefore meets the criterion of “industrial applicability”.
Изобретение иллюстрируется материалами, где приведены:The invention is illustrated by materials showing:
- на фиг. 1 - график, где показано сравнение коэффициента К14/3 у гуманизированных мышей, получивших клетки ГСК от трех разных доноров пуповинной крови, с применением и без применения вещества с известным радиозащитным действием - цистеамина;- in fig. 1 is a graph showing a comparison of the K14/3 ratio in humanized mice that received HSC cells from three different cord blood donors, with and without the use of a substance with a known radioprotective effect - cysteamine;
- на фиг. 2 - таблица, где приведены значения коэффициента К14/3 у гуманизированных мышей, получивших клетки ГСК от трех разных доноров пуповинной крови, с применением и без применения вещества с известным радиозащитным действием - цистеамина.- in fig. 2 is a table showing the values of the K14/3 coefficient in humanized mice that received HSC cells from three different cord blood donors, with and without the use of a substance with a known radioprotective effect - cysteamine.
Заявляемый способ заключается в следующем.The inventive method is as follows.
От человека-донора в качестве клеток крови получают гемопоэтические стволовые клетки -ГСК. До введения ГСК иммунодефицитных мышей подвергают гамма-облучению в дозе 2,5 Гр с мощностью дозы 0,91 Гр/мин. Затем ГСК вводят им внутривенно в боковую хвостовую вену в количестве 30-200 тыс. клеток на каждое животное и выдерживают мышей не менее 8 недель. После этого одной из групп - группе защищенных мышей вводят испытуемое радиозащитное средство и затем проводят гамма-облучение всех мышей в дозе 0,5 Гр или 1 Гр с мощностью дозы 0,91 Гр/мин. Далее идентифицируют человеческие клетки в костном мозге и измеряют долю ГСК от общего количества всех CD451low/ CD45+клеток человека для каждого животного после облучения у группы мышей без применения радиозащитного средства и у группы защищенных мышей. При этом радиозащитное средство оценивают как эффективное, если коэффициент K 14/3 у защищенных мышей выше, чем коэффициент K 14/3 у незащищенных мышей, где коэффициент K 14/3 - это отношение доли ГСК на 14 сутки после облучения к доле ГгСК человека на третьи сутки после облучения. При этом на практике способ выполняют в следующей последовательности:Hematopoietic stem cells (HSCs) are obtained from a human donor as blood cells. Before administration of HSCs, immunodeficient mice are subjected to gamma irradiation at a dose of 2.5 Gy with a dose rate of 0.91 Gy/min. Then HSCs are injected intravenously into the lateral tail vein in an amount of 30-200 thousand cells per animal and the mice are kept for at least 8 weeks. After this, one of the groups - the group of protected mice - is injected with the test radioprotective agent and then gamma irradiation of all mice is carried out at a dose of 0.5 Gy or 1 Gy with a dose rate of 0.91 Gy/min. Next, human cells in the bone marrow are identified and the proportion of HSCs from the total number of all human CD451low/CD45+ cells is measured for each animal after irradiation in a group of mice without the use of a radioprotective agent and in a group of protected mice. In this case, a radioprotective agent is assessed as effective if the K 14/3 coefficient in protected mice is higher than the K 14/3 coefficient in unprotected mice, where the K 14/3 coefficient is the ratio of the proportion of HSCs on the 14th day after irradiation to the proportion of human HGSCs on third day after irradiation. In practice, the method is performed in the following sequence:
Производят подготовку суспензии ГСК клеток человека для трансплантации мышам следующим образом.A suspension of human HSC cells is prepared for transplantation into mice as follows.
После сепарации клеток необходимо определить количество ГСК в полученной клеточной суспензии. ГСК идентифицируют как клетки с низкой экспрессией CD45 (CD45low) и высокой экспрессией CD34 (CD34+) методом проточной цитометрии. Следует подсчитать количество CD45lowCD34+ и CD45+CD34~ клеток. Доля CD45lowCD34+клеток должна составлять не менее 80% от количества всех CD45+ клеток.After cell separation, it is necessary to determine the number of HSCs in the resulting cell suspension. HSCs are identified as cells with low CD45 expression (CD45 low ) and high CD34 expression (CD34 + ) by flow cytometry. The number of CD45 low CD34 + and CD45 + CD34 ~ cells should be counted. The proportion of CD45 low CD34 + cells should be at least 80% of the number of all CD45 + cells.
Рекомендуется вводить не менее 30 тысяч ГСК на одно животное, общее количество ГСК, полученное от одного обследуемого лица, должно составлять не менее 150 тысяч клеток.It is recommended to administer at least 30 thousand HSCs per animal; the total number of HSCs obtained from one subject must be at least 150 thousand cells.
Суспензию клеток, полученную после сепарации, необходимо однократно отмыть в питательной среде 199 - центрифугировать при 1500 об/мин в течение 10 минут, слить надосадочную жидкость, осадок ресуспендировать в среде 199 до объема 200 мкл.The cell suspension obtained after separation must be washed once in nutrient medium 199 - centrifuged at 1500 rpm for 10 minutes, the supernatant liquid is drained, and the sediment is resuspended in medium 199 to a volume of 200 µl.
Иммунодефицитных мышей подвергают внешнему гамма-облучению в дозе 2,5 Гр с соблюдением правил асептики и антисептики.Immunodeficient mice are subjected to external gamma irradiation at a dose of 2.5 Gy in compliance with the rules of asepsis and antisepsis.
Далее выполняют трансплантацию ГСК человека мышам.Next, human HSCs are transplanted into mice.
ГСК человека вводят мышам после облучения внутривенно в латеральную хвостовую вену.Human HSCs are injected intravenously into the lateral tail vein into mice after irradiation.
Для каждого животного используется индивидуальный шприц. Манипуляции производят с соблюдением правил асептики и антисептики.An individual syringe is used for each animal. Manipulations are carried out in compliance with the rules of asepsis and antiseptics.
Объем вводимой суспензии должен составлять не более 200 мкл при внутривенном введении.The volume of the administered suspension should be no more than 200 μl for intravenous administration.
После трансплантации животных оставляют не менее чем на 8 недель для приживления ГСК человека и формирования человеческого кроветворения в костном мозге гуманизированных мышей.After transplantation, animals are left for at least 8 weeks to allow human HSCs to engraft and establish human hematopoiesis in the bone marrow of humanized mice.
Через 8 недель после трансплантации производят экспериментальное облучение животных.8 weeks after transplantation, experimental irradiation of animals is performed.
Проводят внешнее равномерное гамма-облучение животных.External uniform gamma irradiation of animals is carried out.
Перемещение животных из клеток постоянного содержания в установку для облучения следует выполнять, соблюдая правила асептики и антисептики: животных рекомендовано пересадить в стерильные контейнеры в чистом помещении или в ламинарном шкафу.The movement of animals from permanent cages to the irradiation installation should be carried out observing the rules of asepsis and antiseptics: it is recommended to transfer animals into sterile containers in a clean room or in a laminar flow hood.
Для проведения анализа показателей выполняют следующие операции.To analyze the indicators, perform the following operations.
Для анализа необходимо получить костный мозг гуманизированных животных из бедренной кости. Костный мозг извлекают путем промывания кости 1 мл раствора хлорида натрия 0,9%. Анализ проводят в разные сроки после облучения, например через 3 и 14 суток, для каждого срока используя одно облученное животное без введения тестируемого лекарственного радиозащитного средства, одно животное облученное с тестируемым лекарственным радиозащитным средством, одно необлученное животное.For analysis, it is necessary to obtain bone marrow from humanized animals from the femur. Bone marrow is removed by washing the bone with 1 ml of 0.9% sodium chloride solution. The analysis is carried out at different times after irradiation, for example, after 3 and 14 days, for each period using one irradiated animal without administration of the test radioprotective drug, one irradiated animal with the test radioprotective drug, one non-irradiated animal.
Необходимо измерение в костном мозге гуманизированных мышей количества CD34+ клеток человека (ГСК), CD45+ клеток человека, доли ГСК от общего числа CD45+ клеток человека, коэффициента K14/3 как отношения доли ГСК человека на 14 сутки после облучения к доле ГСК человека на 3 сутки после облучения.It is necessary to measure in the bone marrow of humanized mice the number of human CD34+ cells (HSCs), human CD45+ cells, the proportion of HSCs from the total number of human CD45+ cells, the K14/3 coefficient as the ratio of the proportion of human HSCs on the 14th day after irradiation to the proportion of human HSCs on the 3rd day after irradiation.
В суспензии клеток костного мозга методом проточной цитометрии необходимо измерить CD45lowCD34+ и CD45+ клеток человека.In a bone marrow cell suspension, CD45 low CD34 + and CD45 + human cells must be measured by flow cytometry.
Доля ГСК человека рассчитывается как отношение числа CD45lowCD34+ клеток к сумме CD45lowCD34+ клеток и CD45 CD34- клеток человека, выраженное в процентах.The proportion of human HSCs is calculated as the ratio of the number of CD45 low CD34 + cells to the sum of human CD45 low CD34 + cells and CD45 CD34 - human cells, expressed as a percentage.
Коэффициент К14/3 рассчитывается как отношение доли ГСК человека на 14 сутки после облучения к доле ГСК человека на 3 сутки после облучения у животных, гуманизированных ГСК от одного и того же донора.The coefficient K14/3 is calculated as the ratio of the proportion of human HSCs on the 14th day after irradiation to the proportion of human HSCs on the 3rd day after irradiation in animals humanized with HSCs from the same donor.
Перечисленные показатели сравнивают у мышей, гуманизированных ГСК одного и того же донора, получивших тестируемое лекарственное радиозащитное средство и не получавших его.The listed parameters are compared in mice humanized with HSCs from the same donor, receiving the tested radioprotective drug and not receiving it.
Для получения итоговых выводов производится следующая интерпретация результатов.To obtain final conclusions, the following interpretation of the results is made.
Считают, что вещество обладает радиозащитным действием или является радиомитигатором, если увеличивается коэффициент К14/3.A substance is considered to have a radioprotective effect or is a radiomitigator if the K14/3 coefficient increases.
Пример 1Example 1
Для получения гуманизированных мышей использовали иммунодефицитных мышей линии NOD SCID из питомника SPF-вивария ИЦиГ СО РАН, г. Новосибирск.To obtain humanized mice, we used immunodeficient mice of the NOD SCID line from the SPF-vivarium nursery of the Institute of Cytology and Genetics SB RAS, Novosibirsk.
Животным вводили ГСК из проб пуповинной крови, отобранных в ГБУЗ Областной Перинатальный Центр (всего три донора пуповинной крови). ГСК выделяли из крови методом иммуномагнитной сепарации с помощью набора EasySep Human Cord Blood CD34 Positive Selection Kit II (Stem Cell Technologies, Канада), идентифицировали как CD45lowCD34+ клетки.The animals were injected with HSC from umbilical cord blood samples collected at the Regional Perinatal Center (three cord blood donors in total). HSCs were isolated from the blood by immunomagnetic separation using the EasySep Human Cord Blood CD34 Positive Selection Kit II (Stem Cell Technologies, Canada) and identified as CD45 low CD34 + cells.
Мыши получали инъекцию ГСК пуповинной крови внутривенно в боковую хвостовую вену после предварительного острого внешнего гамма-облучения в дозе 2,5 Гр, в течение 9 недель происходило приживление ГСК в костном мозге мыши и формирование человеческого лимфогранулопоэза. ГСК, полученные от каждого донора пуповинной крови, вводили в равном количестве пяти мышам (количество вводимых ГСК составляло 30-200 тыс. клеток на каждое животное). Одна мышь оставалась контрольной, а четырех других вновь облучали через 9 недель после трансплантации ГСК. При этом двум из пяти гуманизированных мышей, полученных от каждого донора ГСК, за 30 минут до облучения водили внутрибрюшинно препарат с известным радиозащитным действием - 2-меркаптоэтиламин (цистеамин) в дозе 200 мг/кг массы тела (Serva, США). Животных от двух доноров облучали в дозе 0,5 Гр, а от третьего донора - в дозе 1 Гр. Сравнивали коэффициент К14/3 у гуманизированных мышей без цистеамина и у мышей с повышенной за счет цистеамина радиорезистентностью.Mice received an injection of umbilical cord blood HSCs intravenously into the lateral tail vein after preliminary acute external gamma irradiation at a dose of 2.5 Gy; within 9 weeks, the HSCs engrafted in the bone marrow of the mouse and the formation of human lymphogranulopoiesis. HSCs obtained from each cord blood donor were injected in equal quantities into five mice (the number of injected HSCs was 30-200 thousand cells per animal). One mouse remained as a control and four others were re-irradiated 9 weeks after HSC transplantation. In this case, two of the five humanized mice obtained from each HSC donor were intraperitoneally administered a drug with a known radioprotective effect - 2-mercaptoethylamine (cysteamine) at a dose of 200 mg/kg body weight (Serva, USA) 30 minutes before irradiation. Animals from two donors were irradiated at a dose of 0.5 Gy, and from a third donor - at a dose of 1 Gy. The K14/3 ratio was compared in humanized mice without cysteamine and in mice with increased radioresistance due to cysteamine.
Измеряли количество клеток человека и мыши в костном мозге бедренной кости контрольной мыши и у мышей через 3 суток и 14 суток после облучения.The number of human and mouse cells was measured in the bone marrow of the femur of a control mouse and in mice 3 days and 14 days after irradiation.
Облучение проводили на исследовательской радиобиологической гамма-установке ИГУР-1М (137Cs-источники, мощность дозы 0,91 Гр/мин, неравномерность гамма-поля не более 10%).Irradiation was carried out on a research radiobiological gamma installation IGUR-1M (137Cs sources, dose rate 0.91 Gy/min, gamma field unevenness no more than 10%).
Методом проточной цитометрии в костном мозге мышей измеряли количество мышиных CD45+ клеток (окраска моноклональными крысиными антителами антиСD45-РЕ, клон 30-F11, BD Pharmingen, США), человеческих лейкоцитарных CD45+ клеток (окраска моноклональными мышиными антителами aнтиCD45-FITC, клон HI30, Stem Cell Technologies, Канада) и человеческих стволовых CD45lowCD34+ клеток (окраска моноклональными мышиными антителами aнтиCD34-АРС, клон 581, Stem Cell Technologies, Канада). Измерения проводили на цитометре Accuri С6 (BD Biosciences, США), рассчитывали количество клеток в мл суспензии, содержащей клетки из одной кости.Using flow cytometry, the number of mouse CD45+ cells (stained with monoclonal rat antibodies antiCD45-PE, clone 30-F11, BD Pharmingen, USA), human leukocyte CD45+ cells (stained with monoclonal mouse antibodies antiCD45-FITC, clone HI30, Stem Cell) was measured in the bone marrow of mice Technologies, Canada) and human stem CD45lowCD34+ cells (stained with monoclonal mouse antibodies antiCD34-APC, clone 581, Stem Cell Technologies, Canada). Measurements were carried out on an Accuri C6 cytometer (BD Biosciences, USA), and the number of cells per ml of a suspension containing cells from one bone was calculated.
Рассчитывали выживаемость облученных клеток как отношение числа облученных клеток через 3 и 14 сутки к числу клеток того же донора у контрольной необлученной мыши для ГСК пуповинной крови, как отношение числа облученных клеток к числу необлученных клеток того же донора в тот же срок после облучения для ГСК периферической крови. Рассчитывали процентное содержание ГСК от общего количества всех CD45low/CD45+ клеток человека для каждого гуманизированного животного. Также определяли коэффициент, равный отношению доли ГСК на 14 сутки после облучения к доле ГСК на 3 сутки после облучения (К14/3).The survival rate of irradiated cells was calculated as the ratio of the number of irradiated cells after 3 and 14 days to the number of cells from the same donor in a control non-irradiated mouse for umbilical cord blood HSCs, as the ratio of the number of irradiated cells to the number of non-irradiated cells from the same donor at the same period after irradiation for peripheral HSCs blood. The percentage of HSCs from the total number of all human CD45low/CD45+ cells was calculated for each humanized animal. A coefficient was also determined equal to the ratio of the proportion of HSCs on the 14th day after irradiation to the proportion of HSCs on the 3rd day after irradiation (K14/3).
Было показано, что у защищенных с помощью радиопротектора гуманизированных мышей коэффициент К14/3 был выше, чем у незащищенных, облученных в той же дозе (см. ниже фиг. 1). Коэффициент 14/3 представляет собой отношение доли ГСК человека на 14 сутки после облучения к доле ГСК человека на 3 сутки после облучения у животных, гуманизированных ГСК от одного и того же донора. Этот показатель отражает эффективность репопуляции ГСК после облучения, их пролиферативный потенциал и эффективность восстановления пула стволовых клеток. Данный коэффициент предложен для использования в качестве критерия оценки радиочувствительности. Изменение коэффициента К14/3 при использовании радиопротекторного средства цистеамина в модели гуманизированных мышей с введением ГСК пуповинной крови показано ниже в таблице (фиг. 2).It was shown that in humanized mice protected with a radioprotector, the K14/3 ratio was higher than in unprotected mice irradiated at the same dose (see Fig. 1 below). The 14/3 coefficient is the ratio of the proportion of human HSCs on day 14 after irradiation to the proportion of human HSCs on day 3 after irradiation in animals humanized with HSCs from the same donor. This indicator reflects the efficiency of HSC repopulation after irradiation, their proliferative potential and the efficiency of restoration of the stem cell pool. This coefficient is proposed for use as a criterion for assessing radiosensitivity. The change in the K 14/3 coefficient when using the radioprotective agent cysteamine in a humanized mouse model with the introduction of umbilical cord blood HSCs is shown in the table below (Fig. 2).
В сравнении с прототипом заявляемый способ дает возможность повысить достоверность оценки действия тестируемого лекарственного средства на радиационно-индуцированную гибель и последующее восстановление ГСК человека.In comparison with the prototype, the proposed method makes it possible to increase the reliability of assessing the effect of the tested drug on radiation-induced death and subsequent restoration of human HSCs.
Claims (5)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2817986C1 true RU2817986C1 (en) | 2024-04-23 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2505817C1 (en) * | 2012-07-04 | 2014-01-27 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение "Медицинский Радиологический Научный Центр" Министерства Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации (ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России) | Method for assessing radiosensitivity of airway cancer |
| RU2651939C2 (en) * | 2016-04-12 | 2018-04-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) | Subdermal xenografts of cell line of amelanotic human skin melanoma mel rac with mutation nras for preclinical study of antineoplastic targeted agents |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2505817C1 (en) * | 2012-07-04 | 2014-01-27 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение "Медицинский Радиологический Научный Центр" Министерства Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации (ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России) | Method for assessing radiosensitivity of airway cancer |
| RU2651939C2 (en) * | 2016-04-12 | 2018-04-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) | Subdermal xenografts of cell line of amelanotic human skin melanoma mel rac with mutation nras for preclinical study of antineoplastic targeted agents |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| АТАМАНЮК Н.И. и др. КИНЕТИКА ГИБЕЛИ И ВОССТАНОВЛЕНИЯ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА У МЫШЕЙ ДВУХ ЛИНИЙ С РАЗНОЙ РАДИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬЮ ПОСЛЕ ОСТРОГО γ-ОБЛУЧЕНИЯ / ВОПРОСЫ РАДИАЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ, 2021, N 4, стр. 62-72. ТИТОВА К.А. и др. Мышь линии SCID как модельное животное для оценки эффективности препаратов против натуральной оспы / Вавиловский журнал генетики и селекции, 2015;19(4), стр. 487-493. МИНДАРЬ М.В. и др. Значение иммунодефицитных мышей для экспериментальных и доклинических исследований в онкологии / Сибирский научный медицинский журнал, 2020; 40 (3), стр. 10-20. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11207393B2 (en) | Regulatory T cell PD-1 modulation for regulating T cell effector immune responses | |
| Groves et al. | Role of infiltrating monocytes in the development of radiation-induced pulmonary fibrosis | |
| Giger et al. | Deficiency of leukocyte surface glycoproteins Mo1, LFA-1, and Leu M5 in a dog with recurrent bacterial infections: an animal model | |
| Lee et al. | Feasibility of real-time in vivo 89Zr-DFO-labeled CAR T-cell trafficking using PET imaging | |
| Zhou et al. | Validating the pivotal role of the immune system in low‐dose radiation‐induced tumor inhibition in Lewis lung cancer‐bearing mice | |
| Shen et al. | Use of folate-conjugated imaging agents to target alternatively activated macrophages in a murine model of asthma | |
| US20150282460A1 (en) | Animal model with human immune system | |
| Paganetti | A review on lymphocyte radiosensitivity and its impact on radiotherapy | |
| Faget et al. | Efficient and specific Ly6G+ cell depletion: A change in the current practices toward more relevant functional analyses of neutrophils | |
| Ellis et al. | Peripheral blood leucocytes subpopulation dynamics during Trypanosoma congolense infection in Boran and N'Dama cattle: an analysis using monoclonal antibodies and flow cytometry | |
| Akeem et al. | Bone marrow and peripheral blood cells toxicity of a single 2.0 Gy Cobalt60 ionizing radiation: An animal model | |
| Szade et al. | Cobalt protoporphyrin IX increases endogenous G‐CSF and mobilizes HSC and granulocytes to the blood | |
| Krigsfeld et al. | Evidence of disseminated intravascular coagulation in a porcine model following radiation exposure | |
| RU2817986C1 (en) | Method for evaluating efficacy of radioprotective drugs using humanised mice | |
| CN110770582A (en) | Method for determining toxicity of immunomodulatory drugs for use in humans | |
| JP6912800B2 (en) | Hematopoietic tumor therapeutic agent and screening method | |
| Kyoizumi et al. | Direct evaluation of radiation damage in human hematopoietic progenitor cells in vivo | |
| KR20210104681A (en) | Use of eggs grafted with tumor cells to study the anticancer efficacy of immunotherapy in the absence of immune effector cells other than immune effector cells of the grafted eggs | |
| RU2817984C1 (en) | Method for assessing personified radiosensitivity of person based on determining response of his haemopoietic stem cells to radiation exposure using humanized mice | |
| CN109628396A (en) | The application of memory lymphocyte group in the treatment of liver cancer | |
| Stabel et al. | Functional assessment of bovine monocytes isolated from peripheral blood | |
| EP1454137B1 (en) | Use of a labeled ligand having human cd4 specificity for producing a diagnostic used in the analysis of migration and/or distribution patterns of cell populations | |
| NÉNOT et al. | Clinical approaches to treatment of radiation-induced haemopoietic injury | |
| CN113874490A (en) | Natural killer cell with increased anticancer activity and immunotherapy application thereof | |
| KR102613264B1 (en) | The Humanized mouse model with transplantation of hematopoietic stem cells and immune-boosting, and its manufacturing method thereof |