RU2816760C1 - Micobacterium avium subspecies paratuberculosis viev strain for producing tuberculoproteins - Google Patents
Micobacterium avium subspecies paratuberculosis viev strain for producing tuberculoproteins Download PDFInfo
- Publication number
- RU2816760C1 RU2816760C1 RU2023117987A RU2023117987A RU2816760C1 RU 2816760 C1 RU2816760 C1 RU 2816760C1 RU 2023117987 A RU2023117987 A RU 2023117987A RU 2023117987 A RU2023117987 A RU 2023117987A RU 2816760 C1 RU2816760 C1 RU 2816760C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- paratuberculosis
- strain
- viev
- micobacterium
- avium subspecies
- Prior art date
Links
- 208000026681 Paratuberculosis Diseases 0.000 title claims abstract description 68
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 claims description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 6
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000007815 allergy Effects 0.000 abstract description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 241000186367 Mycobacterium avium Species 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241000187482 Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Species 0.000 description 7
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 7
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 4
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 4
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 2
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 2
- 229930183781 Mycobactin Natural products 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000003766 bioinformatics method Methods 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical class NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- XZGYBQIQSLSHDH-COEJQBHMSA-N mycobactin Chemical compound C1CCCN(O)C(=O)C1NC(=O)C(C)C(CC)OC(=O)C(CCCCN(O)C(=O)\C=C/CCCCCCCCCCCCCCC)NC(=O)C(N=1)COC=1C1=C(C)C=CC=C1O XZGYBQIQSLSHDH-COEJQBHMSA-N 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009133 Arylsulfatases Human genes 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000186360 Mycobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 206010062207 Mycobacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000180044 Mycobacterium avium subsp. avium Species 0.000 description 1
- 241000178954 Mycobacterium avium subsp. silvaticum Species 0.000 description 1
- 108010019703 Nicotinamidase Proteins 0.000 description 1
- 241000576755 Sclerotia Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 208000016253 exhaustion Diseases 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 201000008267 intestinal tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 239000006379 löwenstein-jensen medium Substances 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- BFPJYWDBBLZXOM-UHFFFAOYSA-L potassium tellurite Chemical compound [K+].[K+].[O-][Te]([O-])=O BFPJYWDBBLZXOM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000009966 trimming Methods 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, и биотехнологии может быть использовано в научно-исследовательских целях и при производстве паратуберкулезного аллергена на предприятиях биологической промышленности.The invention relates to the field of veterinary microbiology, and biotechnology can be used for research purposes and in the production of paratuberculosis allergen at biological industry enterprises.
Штамм Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV депонирован во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных Федерального научного центра - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук под номером В-1402.The Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV strain was deposited in the All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms Causative of Infectious Animal Diseases of the Federal Scientific Center - All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after. K.I. Scriabin and Y.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences under number B-1402.
Паратуберкулез, паратуберкулезный энтерит, болезнь Йоне (Johnes disease - англ.; Paratuberculose der Rinder, Johnesche Krankheit - нем.; Paratuberculeuse - франц.) - хроническая инфекционная болезнь, в основном, жвачных животных, чаще всего протекающая латентно, характеризующаяся поражением кишечника и мезентериальных лимфатических узлов и как следствие - сопровождающаяся расстройством желудочно-кишечного тракта (диареей) с прогрессирующим истощением - до летального исхода.Paratuberculosis, paratuberculous enteritis, John's disease (Jones disease - English; Paratuberculose der Rinder, Johnesche Krankheit - German; Paratuberculeuse - French) is a chronic infectious disease, mainly of ruminants, most often occurring latently, characterized by damage to the intestines and mesenteric tissues. lymph nodes and, as a consequence, accompanied by a disorder of the gastrointestinal tract (diarrhea) with progressive exhaustion - to death.
Паратуберкулез крупного рогатого скота впервые был описан A. Johne, L. Frothingham в 1895 году, как особая форма туберкулеза кишечника, вызываемая ослабленным возбудителем туберкулеза бычьего или птичьего видов [Найманов А.Х., Гулюкин М.И. Микобактериальные инфекции крупного рогатого скота (туберкулез и паратуберкулез) // Москва: Зооветкнига, 2014 -235 с.]Cattle paratuberculosis was first described by A. Johne, L. Frothingham in 1895, as a special form of intestinal tuberculosis caused by a weakened tuberculosis pathogen of bovine or avian species [Naimanov A.Kh., Gulyukin M.I. Mycobacterial infections of cattle (tuberculosis and paratuberculosis) // Moscow: Zoovetkniga, 2014 -235 p.]
В 1902 году Мс. Fadylan назвал эту болезнь в честь первого автора - болезнью Йоне. [Найманов А.Х., Вангели Е.П., Мясоедов Ю.М. и др. Хронические инфекции животных. Паратуберкулез // монография - Москва: Спутник+, 2022, -с. 3].In 1902 Ms. Fadylan named this disease after the first author - Jone's disease. [Naimanov A.Kh., Vangeli E.P., Myasoedov Yu.M. and others. Chronic infections of animals. Paratuberculosis // monograph - Moscow: Sputnik+, 2022, -p. 3].
В дальнейшем - возбудитель заболевания был квалифицирован как Mycobacterium paratuberculosis, а болезнь названа паратуберкулезом. После исследований с применением молекулярно-генетических методов было доказано, что гены М. avium и М. paratuberculosis на 99% гомологичны. Впоследствии, по предложению M.F. Thorel et al., возбудитель паратуберкулеза стали считать подвидом микобактерий птичьего вида -Micobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) [Thorel M.F, Krichevsky M., Levy-Frebault V. Numerical taxonomy of mycobactin-dependent mycobacteria, emended description of Mycobacterium avium subsp.avium subsp.nov., Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis subsp.nov., and Mycobacterium avium subsp.silvaticum subsp.nov. // Int. J. Syst. Bacterid., 1990, 40, 254-260].Subsequently, the causative agent of the disease was classified as Mycobacterium paratuberculosis, and the disease was named paratuberculosis. After studies using molecular genetic methods, it was proven that the genes of M. avium and M. paratuberculosis are 99% homologous. Subsequently, at the suggestion of M.F. Thorel et al., the causative agent of paratuberculosis began to be considered a subspecies of avian mycobacteria - Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP) [Thorel M.F., Krichevsky M., Levy-Frebault V. Numerical taxonomy of mycobactin-dependent mycobacteria, emended description of Mycobacterium avium subsp.avium subsp.nov., Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis subsp.nov., and Mycobacterium avium subsp.silvaticum subsp.nov. // Int. J. Syst. Bacterid., 1990, 40, 254-260].
При паратуберкулезе нет высокоэффективных методов диагностики, лечения и вакцинопрофилактики. По мнению многих исследователей ни один из существующих методов диагностики паратуберкулеза не обладает 100% эффективностью, поэтому рекомендуется применять комплексный подход к диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота [Larson, J. Johne's Disease - Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: A Debilitating Enteric Disease of Ruminants // U.S. Department of Agriculture. Agricultural Research Service. National Agricultural Library Animal Welfare Information Center. - 2002].There are no highly effective methods of diagnosis, treatment or vaccine prevention for paratuberculosis. According to many researchers, none of the existing methods for diagnosing paratuberculosis is 100% effective, so it is recommended to use an integrated approach to diagnosing paratuberculosis in cattle [Larson, J. Johne's Disease - Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: A Debilitating Enteric Disease of Ruminants // U.S. Department of Agriculture. Agricultural Research Service. National Agricultural Library Animal Welfare Information Center. - 2002].
В соответствии с «Кодексом здоровья наземных животных МЭБ» в редакции 2019 года при паратуберкулезе нет рекомендуемых тестов, а в качестве альтернативных тестов предлагается внутрикожная туберкулиновая проба и иммуноферментный анализ.In accordance with the OIE Terrestrial Animal Health Code, as amended in 2019, there are no recommended tests for paratuberculosis, and intradermal tuberculin test and enzyme-linked immunosorbent assay are proposed as alternative tests.
В «скрытости» инфекции, низкой чувствительности и специфичности методов диагностики, сложности выделения, культивирования и идентификации возбудителя в отсутствии возможности воспроизведения болезни на лабораторных животных - заключаются основные сложности в установлении диагноза на паратуберкулез. До настоящего времени нет единого мнения о диагностической ценности туберкулина для птиц и ионина (паратуберкулина), применяемых в ветеринарной практике. Своевременная диагностика является непременным условием эффективности комплекса профилактических и оздоровительных мероприятий. Основной проблемой аллергической диагностики паратуберкулеза крупного рогатого скота является выявление реагирующих на ионин и туберкулин для птиц животных, сенсибилизированных различными видами микобактерий.The “hiddenness” of the infection, the low sensitivity and specificity of diagnostic methods, the difficulty of isolating, cultivating and identifying the pathogen in the absence of the possibility of reproducing the disease in laboratory animals are the main difficulties in establishing a diagnosis of paratuberculosis. To date, there is no consensus on the diagnostic value of tuberculin for birds and ionin (paratuberculin) used in veterinary practice. Timely diagnosis is an indispensable condition for the effectiveness of a complex of preventive and health measures. The main problem of allergic diagnosis of paratuberculosis in cattle is the identification of animals sensitized with various types of mycobacteria that respond to ionin and tuberculin for birds.
Уровень техникиState of the art
В соответствии «Наставления по диагностике паратуберкулеза животных», утвержденного Департаментом ветеринарии МСХ РФ 05.04.2001 г., исследования на паратуберкулез в благополучных хозяйствах проводят при обнаружении животных, вызывающих подозрение на заболевание, а в неблагополучных хозяйствах - для выявления больных животных. Диагноз на паратуберкулез устанавливают на основании результатов клинического осмотра животных, аллергического, серологического, бактериоскопического, патологоанатомического и гистологического методов исследования с учетом эпизоотологических данных.In accordance with the “Manuals for the diagnosis of paratuberculosis in animals”, approved by the Department of Veterinary Medicine of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation on 04/05/2001, tests for paratuberculosis in healthy farms are carried out when animals are detected that raise suspicion of the disease, and in dysfunctional farms - to identify sick animals. The diagnosis of paratuberculosis is established based on the results of a clinical examination of animals, allergic, serological, bacterioscopic, pathoanatomical and histological research methods, taking into account epidemiological data.
В нашей стране аллергические исследования животных на паратуберкулез проводят внутрикожной пробой с ППД-туберкулином для птиц. Учет и оценку реакции проводят через 72 часа после введения аллергена. Реагирующими считают животных с увеличением толщины кожной складки на 6 мм и более.In our country, allergic tests of animals for paratuberculosis are carried out using an intradermal test with PPD-tuberculin for birds. Accounting and assessment of the reaction is carried out 72 hours after the introduction of the allergen. Animals with an increase in the thickness of the skin fold by 6 mm or more are considered responsive.
Известен ряд штаммов Micobacterium avium subspecies paratuberculosis (шт. А, шт. P-06, шт. 179, шт Б) который использовались в качестве продуцентов туберкулопротеинов-йонинов предназначенных для выявления животных больных паратуберкулезом аллергическим методом [Найманов А.Х., Вангели Е.П., Мясоедов Ю.М. и др. Хронические инфекции животных. Паратуберкулез // Москва: Спутник+, 2022, - с. 24-28]A number of strains of Micobacterium avium subspecies paratuberculosis are known (item A, item P-06, item 179, item B) which were used as producers of tuberculoproteins-jonins intended for identifying animals with paratuberculosis using the allergic method [Naimanov A.Kh., Vangeli E .P., Myasoedov Yu.M. and others. Chronic infections of animals. Paratuberculosis // Moscow: Sputnik+, 2022, - p. 24-28]
Наиболее близким аналогом для заявляемого Штамма является типовой штамм М. avium subspecies paratuberculosis №19698 АТСС, используемый в качестве продуцента туберкулопротеинов при изготовлении комплексного аллергена для диагностики паратуберкулеза. (Прототип) [Патент Комплексный аллерген для диагностики паратуберкулеза №2771778 от 2021].The closest analogue for the claimed Strain is the type strain of M. avium subspecies paratuberculosis No. 19698 ATCC, used as a producer of tuberculoproteins in the manufacture of a complex allergen for the diagnosis of paratuberculosis. (Prototype) [Patent Complex allergen for the diagnosis of paratuberculosis No. 2771778 of 2021].
Технической проблемой, на решение которой направлено данное изобретение, является необходимость расширения арсенала штаммов паратуберкулеза - продуцентов туберкулопротеинов предназначенных для производства паратуберкулезных аллерго-диагностикумов.The technical problem to which this invention is aimed is the need to expand the arsenal of paratuberculosis strains - producers of tuberculoproteins intended for the production of paratuberculosis allergy diagnostics.
Раскрытие сущности изобретенияDisclosure of the invention
Технический результат изобретения получение охарактеризованного штамма, продуцента туберкулопротеинов обладающего стабильными культурально-морфологическим и антигенным свойствами, расширяющего арсенал штаммов паратуберкулеза - продуцентов туберкулопротеинов предназначенных для производства паратуберкулезных аллерго-диагностикумов.The technical result of the invention is the production of a characterized strain, a tuberculoprotein producer with stable cultural, morphological and antigenic properties, expanding the arsenal of paratuberculosis strains - tuberculoprotein producers intended for the production of paratuberculosis allergy diagnostics.
Для получения паратуберкулезного аллерго-диагностикума предлагается новый хорошо изученный и охарактеризованный штамм Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV, депонированный во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН под номером В-1402. Использование предложенного штамма при производстве аллергодиагностикума позволит достоверности повысить уровень выявляемость животных, инфицированных паратуберкулезом на территории страны.To obtain a paratuberculosis allergy diagnosticum, a new well-studied and characterized strain of Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV is proposed, deposited in the All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms that Cause Infectious Animal Diseases of the Federal State Budgetary Scientific Institution FSC VIEV RAS under number B-1402. The use of the proposed strain in the production of allergodiagnosticum will make it possible to reliably increase the level of detection of animals infected with paratuberculosis in the country.
Осуществление изобретенияCarrying out the invention
Пример 1. Авторский штамм микроорганизма Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV.Example 1. Author's strain of the microorganism Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV.
1. Вид микроорганизма: Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis, рода Mycobacterium paratuberculosis Mycobacterium, семейства Mycobacteriaceae, порядка Actynomycetales.1. Type of microorganism: Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis, genus Mycobacterium paratuberculosis Mycobacterium, family Mycobacteriaceae, order Actynomycetales.
2. Штамм депонирован в «Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных», Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук», (ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) 11.05.2023 г., под номером В-14022. The strain is deposited in the “All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms that Cause Infectious Animal Diseases”, Federal State Budgetary Scientific Institution “Federal Scientific Center - All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after K.I. Scriabin and Y.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences", (FGBNU FSC VIEV RAS) 05/11/2023, under number B-1402
3. Основание для депонирования: штамм микобактерий для производства диагностических и профилактических средств специфической профилактик паратуберкулеза у сельскохозяйственных животных. Штамм Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV является продуцентом туберкулопротеинов.3. Reason for deposit: a strain of mycobacteria for the production of diagnostic and prophylactic agents for the specific prevention of paratuberculosis in farm animals. The strain Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV is a producer of tuberculoproteins.
4. Патогенность: в соответствии с классификацией микроорганизмов по группам патогенности санитарных правил и норм САНПИН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней» бактериальные агенты рода Mycobacterium spp. относятся к IV группе патогенности4. Pathogenicity: in accordance with the classification of microorganisms by pathogenicity groups of sanitary rules and regulations SANPIN 3.3686-21 “Sanitary and epidemiological requirements for the prevention of infectious diseases,” bacterial agents of the genus Mycobacterium spp. belong to pathogenicity group IV
5. Дата, источник и место выделения: штамм выделен в 2020 году в лаборатории хронических инфекций ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН от положительно реагирующей в РСК коровы из длительно неблагополучного по паратуберкулезу СПК «Нива» Юкаменского района, Удмуртской республики, авторами штамма.5. Date, source and place of isolation: the strain was isolated in 2020 in the laboratory of chronic infections of the Federal State Budgetary Scientific Institution FSC VIEV RAS from a cow that reacted positively in the RSC from a long-term paratuberculosis-unaffected agricultural production complex "Niva" of the Yukamensky district, Udmurt Republic, by the authors of the strain.
6. Где идентифицирована культура: в лаборатории хронических инфекций авторами штамма ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН6. Where the culture was identified: in the laboratory of chronic infections by the authors of the strain FGBNU FSC VIEV RAS
7. Методы идентификации: штамм идентифицирован на основании изученных морфологических и физиологических свойств и молекулярно-генетических исследований в соответствии с микробиологическими определителями и генетической базой данных.7. Identification methods: the strain was identified on the basis of the studied morphological and physiological properties and molecular genetic studies in accordance with microbiological determinants and a genetic database.
7.1. Проведено полногеномное секвенирование штамма Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV на платформе Illumina NovaSeq с использованием технологии парных прочтений. Биоинформатический анализ включал фильтрацию и тримминг прочтений с использованием программ fastqc (0.11.9) и trimmomatic (0.39). Сборка генома осуществлялась с помощью программы Unicycler (0.4.8). Полученные контиги проверялись на таксономическую принадлежность с помощью программ kraken2 (2.1.2) и blastn (2.5.0). Биоинформатический анализ подтвердил принадлежность вышеупомянутого штамма к виду Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis.7.1. Whole-genome sequencing of the Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV strain was carried out on the Illumina NovaSeq platform using paired-read technology. Bioinformatics analysis included filtering and trimming of reads using the fastqc (0.11.9) and trimmomatic (0.39) programs. The genome assembly was carried out using the Unicycler program (0.4.8). The resulting contigs were checked for taxonomic affiliation using the kraken2 (2.1.2) and blastn (2.5.0) programs. Bioinformatics analysis confirmed that the above-mentioned strain belongs to the species Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis.
8. Морфологические признаки: Макроморфологические признаки: на твердых питательных средах культура растет в виде мельчайших гладких, шаровидных, непигментированных колоний Микроморфологические признаки: Возбудитель паратуберкулеза - самая мелкая из микобактерий, тонкая полиморфная неподвижная палочка с закругленными концами, длиной 0,5 - 1,5 мкм, шириной 0,2 -0,5 мкм, спор и капсул не образует, грамположительна, кислото-спиртоустойчивая, хорошо окрашивается по Цилю-Нильсену.8. Morphological characteristics: Macromorphological characteristics: on solid nutrient media, the culture grows in the form of tiny smooth, spherical, non-pigmented colonies Micromorphological characteristics: The causative agent of paratuberculosis is the smallest of mycobacteria, a thin polymorphic fixed rod with rounded ends, 0.5 - 1.5 in length µm, width 0.2 -0.5 µm, does not form spores or capsules, gram-positive, acid-alcohol-resistant, stains well according to Ziehl-Neelsen.
8.1. Культуральные особенности: типичными для вида Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis. Культура штамма Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis плохо растет на искусственных питательных средах. Растет в аэробных условиях очень медленно, первичный рост появляется в промежуток времени от 8 -12 недель до 4 - 6 мес. на яичных и других специальных питательных средах (Левенштейна-Йенсена, модифицированная казеиновая среда Дюбо-Смита, среды Данкина, Гона, Ренжара и др.) с добавлением фактора роста - экстракта из М. phlei.8.1. Cultural characteristics: typical for the species Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis. The culture of the Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis strain grows poorly on artificial nutrient media. It grows very slowly in aerobic conditions, primary growth appears in a period of time from 8 -12 weeks to 4 - 6 months. on egg and other special nutrient media (Levenshtein-Jensen, modified casein Dubo-Smith medium, Dunkin, Ghosn, Renjar, etc.) with the addition of a growth factor - extract from M. phlei.
9. Дополнительные признаки: наличие хламидоспор, артроспор, склероциев и т.д. не выявлены.9. Additional signs: the presence of chlamydospores, arthrospores, sclerotia, etc. not identified.
10. Биохимические свойства: низкая катал азная активность, не восстанавливает нитраты, не обладает арилсульфатазной активностью, не вызывает гидролиз Твин 80, восстанавливает теллурит калия. Обладает никотинамидазной активностью.10. Biochemical properties: low catalase activity, does not reduce nitrates, does not have arylsulfatase activity, does not cause hydrolysis of Tween 80, reduces potassium tellurite. Has nicotinamidase activity.
11. Серологические свойства: положительная реакция в РСК с паратуберкулезным антигеном11. Serological properties: positive reaction in RSC with paratuberculosis antigen
12. Продукция антигенов, ферментов, токсинов: в процессе роста в жидких питательных средах накапливается эндотоксическое вещество (паратуберкулин или йонин), вызывающее у зараженного животного аллергическую реакцию.12. Production of antigens, enzymes, toxins: during the growth process, an endotoxic substance (paratuberculin or yonin) accumulates in liquid nutrient media, causing an allergic reaction in the infected animal.
13. Вирулентность для лабораторных животных: отсутствует13. Virulence for laboratory animals: absent
14. Молекулярно-генетические характеристики штамма: Полногеномный проект штамма Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV депонирован в GenBank NCBI под номером JARWSH000000000; BioProject ID: PRJNA956706; BioSample: SAMN34228878; SUBID: SUB 1286403214. Molecular genetic characteristics of the strain: The full-genome project of the Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV strain has been deposited in GenBank NCBI under number JARWSH000000000; BioProject ID: PRJNA956706; BioSample: SAMN34228878; SUBID: SUB 12864032
15. Условия культивирования: Растет в аэробных условиях при температуре 37°С на яичных и других специальных питательных средах (Левенштейна-Йенсена, модифицированная казеиновая среда Дюбо-Смита, среды Данкина, Гона, Ренжара и др.) с добавлением фактора роста - экстракта из М. phlei.15. Cultivation conditions: Grows in aerobic conditions at a temperature of 37°C on egg and other special nutrient media (Levenshtein-Jensen, modified casein Dubo-Smith medium, Dunkin, Ghosn, Renjar, etc.) with the addition of growth factor - extract from M. phlei.
16. Условия хранения: культуры штамма хранятся в лиофилизированном состоянии под вакуумом в ампулах или в пробирках на среде Левенштейна-Йенсена с добавлением микобактина под ватно-марлевыми пробками, при температуре от 4 до 6°С. Периодичность пересевов из пробирок один раз в 6 месяцев, из ампул - один раз в 5 лет.16. Storage conditions: strain cultures are stored in a lyophilized state under vacuum in ampoules or in test tubes on Lowenstein-Jensen medium with the addition of mycobactin under cotton-gauze plugs, at a temperature of 4 to 6°C. The frequency of subcultures from test tubes is once every 6 months, from ampoules - once every 5 years.
Пример 2. Получение туберкулопротеинов для диагностики паратуберкулеза.Example 2. Obtaining tuberculoproteins for the diagnosis of paratuberculosis.
Для получения туберкулопротеинов использовали: штаммы Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV и штамм M. avium subspecies paratuberculosis №19698 АТСС, которые параллельно и раздельно культивировали на глицериново-картофельной среде, при температуре 39°С, в течение 30 суток. После окончания периода культивирования указанных микобактерий на глицериново-картофельной среде (вся поверхность картофельного клина покрыта сплошным слоем микобактерий) осуществляли два последовательных пересева колоний на мясо-пептонный глицериново-картофельный бульон (культивирование при температуре 39°С в течение 30 суток).To obtain tuberculoproteins, we used the following strains: Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV and M. avium subspecies paratuberculosis strain No. 19698 ATCC, which were cultivated in parallel and separately on a glycerol-potato medium at a temperature of 39°C for 30 days. After the end of the period of cultivation of these mycobacteria on a glycerin-potato medium (the entire surface of the potato wedge is covered with a continuous layer of mycobacteria), two successive subcultures of the colonies were carried out on meat-peptone glycerin-potato broth (cultivation at a temperature of 39°C for 30 days).
Второй пересев на мясо-пептонный глицериново-картофельный бульон характеризовался сплошной пленкой, который и использовали для посева на синтетическую среду. Культуры микобактерий штамм Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV и штамм M. avium subspecies, paratuberculosis №19698 АТСС характеризовались сплошным ростом на поверхности синтетической питательной среде (Культивирование при температуре 39°С в течение 55 суток в бутылях). После окончания периода культивирования штаммов микобактерий на синтетической среде, проводили стерилизацию посевов при температуре 120°С в течение 30 минут и последующим охлаждением до температуры 18-20°С, в течение 4 часов. Жидкость из бутылей фильтровали через фильтр-полотно получая культуральный фильтрат. Раздельно проводили обработку культурального фильтрата микобактерий Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV и культурального фильтрата микобактерий М. avium subspecies paratuberculosis №19698 АТСС, согласно последовательности, представленной ниже. Обработка вариантов культурального фильтрата проводилась 50% раствором трихлоруксусной кислоты при перемешивании на мешалке в течение 5-10 минут, после чего проводили отстаивание в течение 16-18 часов при 4-6°С. В течение указанного периода происходило взаимодействие трихлоруксусной кислоты и протеинов культуральных фильтратов. После этого сливали надосадочную жидкость, а осадок (туберкулопротеин) центрифугировали при 3000 об/мин. в течение 20-25 минут, с последующим удалением надосадочной жидкости. Полученный осадок вариантов туберкулопротеина растворяли дистиллированной водой из расчета 1:5 и подщелачивали 10% раствором нашатырного спирта до рН 7,2-7,4. Растворы туберкулопротеинов подкисляли 10% раствором уксусной кислоты до рН 4,0-5,0 и смешивали с равным количеством насыщенного раствора сернокислого аммония, перемешивали три раза с интервалом 10-15 минут и отстаивали в течение 18 часов при 6°С. После этого проводили центрифугирование при 3000 об/мин. в течение 20-30 минут, надосадок сливали, а осадок растворяли в дистиллированной воде в соотношении 1:5. После этого подщелачивали 10% раствором нашатырного спирта до рН 7,4-7,6 и проводили диализ в проточной водопроводной воде в течение 4 суток, после этого подщелачивают до рН 7,2-7,4 10% раствором аммиака, центрифугировали при 3000 об/мин. в течение 30 минут и фильтровали через стерилизующий фильтр. Таким образом, были получены растворы туберкулопротеинов микобактерий из Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV и Micobacterium avium subspecies paratuberculosis штамм №19698 АТСС.The second transfer to meat-peptone glycerin-potato broth was characterized by a continuous film, which was used for sowing on a synthetic medium. Mycobacterial cultures, strain Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV and strain M. avium subspecies, paratuberculosis No. 19698 ATCC, were characterized by continuous growth on the surface of a synthetic nutrient medium (Cultivation at a temperature of 39°C for 55 days in bottles). After the end of the period of cultivation of mycobacterial strains on a synthetic medium, the crops were sterilized at a temperature of 120°C for 30 minutes and subsequent cooling to a temperature of 18-20°C for 4 hours. The liquid from the bottles was filtered through a filter cloth to obtain a culture filtrate. The cultural filtrate of mycobacteria Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV and the cultural filtrate of mycobacteria M. avium subspecies paratuberculosis No. 19698 ATCC were processed separately, according to the sequence presented below. Treatment of variants of the culture filtrate was carried out with a 50% solution of trichloroacetic acid with stirring on a stirrer for 5-10 minutes, after which settling was carried out for 16-18 hours at 4-6°C. During this period, interaction between trichloroacetic acid and proteins in culture filtrates occurred. After this, the supernatant liquid was discarded, and the sediment (tuberculoprotein) was centrifuged at 3000 rpm. for 20-25 minutes, followed by removal of the supernatant. The resulting sediment of tuberculoprotein variants was dissolved with distilled water at a ratio of 1:5 and alkalinized with a 10% ammonia solution to pH 7.2-7.4. Solutions of tuberculoproteins were acidified with a 10% solution of acetic acid to pH 4.0-5.0 and mixed with an equal amount of saturated ammonium sulfate solution, stirred three times at intervals of 10-15 minutes and left for 18 hours at 6°C. After this, centrifugation was carried out at 3000 rpm. for 20-30 minutes, the supernatant was poured off, and the sediment was dissolved in distilled water in a ratio of 1:5. After this, they were alkalized with a 10% ammonia solution to pH 7.4-7.6 and dialyzed in running tap water for 4 days, after which they were alkalized to pH 7.2-7.4 with a 10% ammonia solution, centrifuged at 3000 vol. /min. for 30 minutes and filtered through a sterilizing filter. Thus, solutions of mycobacterial tuberculoproteins were obtained from Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV and Micobacterium avium subspecies paratuberculosis strain No. 19698 ATCC.
В полученных растворах определили концентрацию туберкулопротеинов. Биологическую активность туберкулопротеинов определяли по Международному стандарту ППД для птиц на морских свинках, сенсибилизированных микобактериями птичьего типа.The concentration of tuberculoproteins in the resulting solutions was determined. The biological activity of tuberculoproteins was determined according to the International Standard for Poultry PPD in guinea pigs sensitized with avian-type mycobacteria.
Биологическая активность туберкулопротеина полученного из культурального фильтрата микобактерий Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV соответствовала 9000 МЕ/мл.The biological activity of tuberculoprotein obtained from the cultural filtrate of the mycobacterium Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV corresponded to 9000 IU/ml.
Биологическая активность туберкулопротеина полученного из культурального фильтрата микобактерий Micobacterium avium subspecies paratuberculosis №19698 АТСС соответствовала 8000 МЕ/мл.The biological activity of tuberculoprotein obtained from the cultural filtrate of mycobacteria Micobacterium avium subspecies paratuberculosis No. 19698 ATCC corresponded to 8000 IU/ml.
Результаты, полученные при определении выхода туберкулопротеина с единицы среды и его специфическая активность представлена в таблице 1The results obtained when determining the yield of tuberculoprotein per unit of medium and its specific activity are presented in Table 1
На основании проведенных исследований сделано заключение, что выход туберкулопротеинов - ионинов с единицы среды, изготовленных из Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV выше, чем у штамма Micobacterium avium subspecies paratuberculosis №19698 АТСС.Based on the studies conducted, it was concluded that the yield of tuberculoproteins - ionins per unit of medium made from Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV is higher than that of the Micobacterium avium subspecies paratuberculosis strain No. 19698 ATCC.
Полученные растворы туберкулопротеинов разводили растворителем для микобактериальных аллергенов до стандартной рабочей концентрации (2500МЕ) помещали во флаконы, закрывали резиновыми пробками и закатывали алюминиевыми колпачками, и стерилизовали при температуре 120°С в течение 30 минут. После охлаждения до температуры 20°С растворы туберкулопротеинов использовали для оценки и сравнения их специфической активности на морских свинках.The resulting solutions of tuberculoproteins were diluted with a solvent for mycobacterial allergens to a standard working concentration (2500 IU), placed in vials, closed with rubber stoppers and rolled up with aluminum caps, and sterilized at a temperature of 120°C for 30 minutes. After cooling to 20°C, tuberculoprotein solutions were used to evaluate and compare their specific activity in guinea pigs.
Пример 3. Сравнение биологической активности туберкулопротеинов полученных из штаммов Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV и Micobacterium avium subspecies paratuberculosis №19698 ATCC.Example 3. Comparison of the biological activity of tuberculoproteins obtained from strains Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV and Micobacterium avium subspecies paratuberculosis No. 19698 ATCC.
Активность микобактериальных аллергенов осуществлялось на морских свинках. Морских свинок весом 350-400 грамм сенсибилизировали культурой М. paratuberculosis в ланолин-вазелиновом адъюванте. Культуру вводили подкожно в область холки и крестца из расчета 0,5 см3 адъюванта, содержащего 5 мг микобактерий.The activity of mycobacterial allergens was carried out on guinea pigs. Guinea pigs weighing 350-400 grams were sensitized with a culture of M. paratuberculosis in a lanolin-vaseline adjuvant. The culture was injected subcutaneously into the area of the withers and sacrum at the rate of 0.5 cm 3 of adjuvant containing 5 mg of mycobacteria.
Определение специфической активности осуществлялось через 35 дней после сенсибилизации. У сенсибилизированных и контрольных свинок боковые поверхности справа и слева депилировали и внутрикожно в объеме 0,1 см3 инъецировали туберкулопротеины, справа полученные из штамма Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV, а слева из штамма Micobacterium avium subspecies paratuberculosis №19698 АТСС. Результаты учитывали через 24 часа после введения аллергенов.Determination of specific activity was carried out 35 days after sensitization. In sensitized and control pigs, the lateral surfaces on the right and left were depilated and tuberculoproteins were injected intradermally in a volume of 0.1 cm 3 , on the right obtained from the strain Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV, and on the left from the strain Micobacterium avium subspecies paratuberculosis No. 19698 ATCC. The results were taken into account 24 hours after the introduction of allergens.
Как видно из таблицы 1, что накопление туберкулопротеинов полученных при культивировании Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV и их биологическая активность выше, чем при использовании штамма Micobacterium avium subspecies paratuberculosis №19698 АТСС.As can be seen from Table 1, the accumulation of tuberculoproteins obtained during the cultivation of Micobacterium avium subspecies paratuberculosis VIEV and their biological activity are higher than when using the strain Micobacterium avium subspecies paratuberculosis No. 19698 ATCC.
Полученные данные характеризуют штамм Micobacterium avium subspecies, paratuberculosis VIEV, депонированный во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных Федерального научного центра - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук под номером В-1402 как продуцента туберкулопротеинов пригодных для получения аллергодиагностикума.The data obtained characterize the strain Micobacterium avium subspecies, paratuberculosis VIEV, deposited in the All-Russian State Collection of Pathogenic and Vaccine Strains of Microorganisms that Cause Infectious Animal Diseases of the Federal Scientific Center - All-Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine named after. K.I. Scriabin and Y.R. Kovalenko of the Russian Academy of Sciences under number B-1402 as a producer of tuberculoproteins suitable for obtaining allergodiagnosticum.
Claims (1)
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2816760C1 true RU2816760C1 (en) | 2024-04-04 |
| RU2816760C9 RU2816760C9 (en) | 2024-07-03 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2771778C1 (en) * | 2021-07-20 | 2022-05-12 | Федеральное Государственное Бюджетное Научное Учреждение "Федеральный Научный Центр - Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Экспериментальной Ветеринарии Имени К.И. Скрябина И Я.Р. Коваленко Российской Академии Наук" (Фгбу Фнц Виэв Ран) | Complex allergen for diagnosing paratuberculosis |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2771778C1 (en) * | 2021-07-20 | 2022-05-12 | Федеральное Государственное Бюджетное Научное Учреждение "Федеральный Научный Центр - Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Экспериментальной Ветеринарии Имени К.И. Скрябина И Я.Р. Коваленко Российской Академии Наук" (Фгбу Фнц Виэв Ран) | Complex allergen for diagnosing paratuberculosis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MARIA ALJANDRA COLOMBATTI OLIVIERI "Evaluation of a virulent strain of Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis used as a heat-killed vaccine"; Vaccine, 2021, v.39(51), pp.7401-7412. NAIARA ABENDANO et al. "Quantification of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis strain representing distinct genotypes and isolated from domestic and wildlife animal species by use of an automatic liquid culture system"; Clinical Microbiology, 2012, N 50(8), pp.1-31. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Avery et al. | Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types: induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type III | |
| JP4263212B2 (en) | Lawsonia intracellularis culture, anti-Losonia intracellularis vaccine and diagnostics | |
| Avery et al. | Studies on the Chemical Nature of the Substance Inducing Transformation of Pneumococcal Types: Induction of Transformation by a Desoxyribonucleic Acid Fraction Isolated from Pneumococcus Type III | |
| Garcia-Delgado et al. | A comparison of various Haemophilus somnus strains | |
| Karlson et al. | Corynebacterium equi (Magnusson, 1923) in the submaxillary lymph nodes of swine | |
| Rahman et al. | Development of experimental oil based inactivated HS vaccine from field Isolates of Pasteurella multocida from Cattle in Bangladesh | |
| Ryan | Throat infection and rash associated with an unusual Corynebacterium | |
| RU2816760C1 (en) | Micobacterium avium subspecies paratuberculosis viev strain for producing tuberculoproteins | |
| RU2816760C9 (en) | Micobacterium avium subspecies paratuberculosis viev strain for producing tuberculoproteins | |
| CN114752532B (en) | Coli isolate capable of simultaneously adhering and colonizing and changing susceptibility of mice and application thereof | |
| Abd-Elsadek et al. | Molecular studies on Pasteurella multocida in ducks | |
| Bkiri et al. | Biological and molecular characterization of a sheep pathogen isolate of Mannheimia haemolytica and leukotoxin production kinetics | |
| CN1519311B (en) | Lawsonia intracellularis cultivation, anti-lawsonia intracelluaris vaccines and diagnostic agents | |
| RU2771778C1 (en) | Complex allergen for diagnosing paratuberculosis | |
| Lentsch et al. | Isolation of Actinobacillus lignieresii and Actinobacillus equuli from laboratory rodents | |
| Lee et al. | Characterization and identification of Erysipelothrix rhusiopathiae isolated from an unnatural host, a cat, with a clinical manifestation of depression | |
| Bird et al. | Serology of Campylobacter fetus fetus strains from four outbreaks of ovine abortion | |
| Ali et al. | Factors influencing production of Salmonella enterotoxin (Stn) | |
| Matthews et al. | Isolation of mycobacteria from dairy creamery effluent sludge | |
| CN100497592C (en) | Mycobactrium tuberculosis protein for diagnosing rifampicin dependent mycobacterium tuberculosis | |
| RU2703485C1 (en) | Strains of streptococcus equi bacteria used to make a horse strangle vaccine | |
| RU2627897C1 (en) | Method for obtaining of antigen for determination of antibrucellar immunity | |
| Mhawesh et al. | Isolation and Diagnosis of Mycoplasma by Conventional and Molecular Methods from Pneumonia in Feedlot Calves | |
| RU2131263C1 (en) | Method of tuberculin preparing | |
| Dall'Stella et al. | Development of bioprocess for the production of purified protein derivative with Brazilian strains of Mycobacterium tuberculosis for diagnosis use |