RU2816581C2 - Purification of glucagon-like peptide-1 analogues - Google Patents
Purification of glucagon-like peptide-1 analogues Download PDFInfo
- Publication number
- RU2816581C2 RU2816581C2 RU2021125777A RU2021125777A RU2816581C2 RU 2816581 C2 RU2816581 C2 RU 2816581C2 RU 2021125777 A RU2021125777 A RU 2021125777A RU 2021125777 A RU2021125777 A RU 2021125777A RU 2816581 C2 RU2816581 C2 RU 2816581C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- liraglutide
- hplc
- acid
- sulfonic acid
- purification
- Prior art date
Links
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 21
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 title abstract description 3
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 claims abstract description 64
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 claims abstract description 64
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 claims abstract description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 21
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 17
- -1 alkane sulfonic acid salt Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 5
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QWSZRRAAFHGKCH-UHFFFAOYSA-M sodium;hexane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCS([O-])(=O)=O QWSZRRAAFHGKCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 229940015297 1-octanesulfonic acid Drugs 0.000 claims description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- WUOSYUHCXLQPQJ-UHFFFAOYSA-N n-(3-chlorophenyl)-n-methylacetamide Chemical compound CC(=O)N(C)C1=CC=CC(Cl)=C1 WUOSYUHCXLQPQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- REFMEZARFCPESH-UHFFFAOYSA-M sodium;heptane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCS([O-])(=O)=O REFMEZARFCPESH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- HRQDCDQDOPSGBR-UHFFFAOYSA-M sodium;octane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCS([O-])(=O)=O HRQDCDQDOPSGBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 20
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- WLGDAKIJYPIYLR-UHFFFAOYSA-N octane-1-sulfonic acid Chemical class CCCCCCCCS(O)(=O)=O WLGDAKIJYPIYLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 description 4
- 238000004190 ion pair chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- FYAQQULBLMNGAH-UHFFFAOYSA-N hexane-1-sulfonic acid Chemical class CCCCCCS(O)(=O)=O FYAQQULBLMNGAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- PSFLWCHUBVMPRM-UHFFFAOYSA-N hexane-1-sulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCS(O)(=O)=O PSFLWCHUBVMPRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 2
- HRQDCDQDOPSGBR-UHFFFAOYSA-N sodium;octane-1-sulfonic acid Chemical compound [Na+].CCCCCCCCS(O)(=O)=O HRQDCDQDOPSGBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940007428 victoza Drugs 0.000 description 2
- KVGOXGQSTGQXDD-UHFFFAOYSA-N 1-decane-sulfonic-acid Chemical compound CCCCCCCCCCS(O)(=O)=O KVGOXGQSTGQXDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDMOEFOXLIZJOW-UHFFFAOYSA-N 1-dodecanesulfonic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCS(O)(=O)=O LDMOEFOXLIZJOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 102400000322 Glucagon-like peptide 1 Human genes 0.000 description 1
- 229940089838 Glucagon-like peptide 1 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 101800004266 Glucagon-like peptide 1(7-37) Proteins 0.000 description 1
- 101500028774 Homo sapiens Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- QDHFHIQKOVNCNC-UHFFFAOYSA-N butane-1-sulfonic acid Chemical class CCCCS(O)(=O)=O QDHFHIQKOVNCNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 1
- AKRQHOWXVSDJEF-UHFFFAOYSA-N heptane-1-sulfonic acid Chemical class CCCCCCCS(O)(=O)=O AKRQHOWXVSDJEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVBFBKODLPVQOA-UHFFFAOYSA-N heptane-1-sulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCS(O)(=O)=O GVBFBKODLPVQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000008040 ionic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000003010 ionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- QXFHPLPMTXEJPV-UHFFFAOYSA-N octane-1-sulfonic acid;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCS(O)(=O)=O QXFHPLPMTXEJPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RJQRCOMHVBLQIH-UHFFFAOYSA-M pentane-1-sulfonate Chemical class CCCCCS([O-])(=O)=O RJQRCOMHVBLQIH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical class CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GTSMGKYOGFOSAR-UHFFFAOYSA-N tridecane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCS(O)(=O)=O GTSMGKYOGFOSAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- SJEYEFOHSMBQIX-UHFFFAOYSA-N undecane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCS(O)(=O)=O SJEYEFOHSMBQIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Description
Родственные заявкиRelated applications
Данная заявка испрашивает преимущество приоритета нашей заявки на патент Индии IN 201941004693, поданной 6 февраля 2019 года, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки.This application claims the benefit of priority to our Indian Patent Application IN 201941004693, filed February 6, 2019, which is incorporated herein by reference.
Область техникиField of technology
Настоящее изобретение относится к способу очистки неочищенного аналога глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1, от англ. glucagon-like peptide-1), в частности, лираглутида, представленного Формулой I.The present invention relates to a method for purifying a crude analog of glucagon-like peptide-1 (GLP-1), in particular liraglutide, represented by Formula I.
Предшествующий уровень техникиPrior Art
Лираглутид (VICTOZA®) представляет собой агонист рецептора глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1), назначаемый в качестве дополнения к рациону питания и физическим упражнениям для улучшения гликемического контроля у взрослых, страдающих сахарным диабетом 2 типа.Liraglutide (VICTOZA®) is a glucagon-like peptide-1 (GLP-1) receptor agonist prescribed as an adjunct to diet and exercise to improve glycemic control in adults with type 2 diabetes mellitus.
Лираглутид является аналогом пролонгированного действия природного человеческого глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1 (7-37)), в котором лизин в положении 34 заменен на аргинин, а к лизину в положении 26 присоединена пальмитоильная группа через глутамоиловый спейсер.Liraglutide is a long-acting analogue of natural human glucagon-like peptide-1 (GLP-1 (7-37)), in which the lysine at position 34 is replaced by arginine, and a palmitoyl group is attached to the lysine at position 26 through a glutamyl spacer.
Лираглутид (VICTOZA®), разработанный компанией Novo Nordisk, получил первоначальное одобрение в Соединенных Штатах Америки в 2010 в виде подкожной инъекции.Liraglutide (VICTOZA®), developed by Novo Nordisk, received initial approval in the United States in 2010 as a subcutaneous injection.
Благодаря своей длинной пептидной цепи и высокой гидрофобности, обусловленной пальмитоильной группой, лираглутид очень трудно поддается очистке.Due to its long peptide chain and high hydrophobicity due to the palmitoyl group, liraglutide is very difficult to purify.
Ранее сообщалось о нескольких попытках очистки аналогов GLP-1, включая лираглутид.Several attempts to purify GLP-1 analogues, including liraglutide, have been previously reported.
В работе, опубликованной в Journal of Medicinal Chemistry 43, 1664-1669, 2000, раскрыт способ очистки лираглутида при помощи обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ, англ. RP HPLC) с использованием цианопропильной колонки (Zorbax 300SB-CN) и стандартной системы ацетонитрил/TFA (англ. Trifluoroacetic acid - трифторуксусная кислота).The work, published in the Journal of Medicinal Chemistry 43, 1664-1669, 2000, discloses a method for purifying liraglutide using reverse phase high performance liquid chromatography (RP HPLC) using a cyanopropyl column (Zorbax 300SB-CN) and standard system acetonitrile/TFA (English Trifluoroacetic acid - trifluoroacetic acid).
В результате описанного выше способа получают низкий выход очистки, составляющий 35%.As a result of the method described above, a low purification yield of 35% is obtained.
В патентном документе WO 2013117135 раскрыт способ очистки лираглутида методом ОФ-ВЭЖХ с использованием системы изопропиловый спирт/TFA.Patent document WO 2013117135 discloses a method for purifying liraglutide by RP-HPLC using an isopropyl alcohol/TFA system.
Раскрытый способ включает в себя несколько стадий очистки, предполагающих 3 операции ОФ-ВЭЖХ, что является трудоемким процессом.The disclosed method includes several purification steps, involving 3 RP-HPLC operations, which is a labor-intensive process.
Пептиды GLP-1, полученные синтетическим или рекомбинантным способом, зачастую содержат близкородственные примеси, которые трудно отделить при помощи ОФ-ВЭЖХ. Эти примеси представляют собой примеси изомеров либо примеси, образующиеся в результате делеций/присоединений, и имеют характеристики, аналогичные исходной молекуле. Такие близкородственные примеси создают сложности при очистке.Synthetically or recombinantly produced GLP-1 peptides often contain closely related impurities that are difficult to separate by RP-HPLC. These impurities are isomer impurities or impurities resulting from deletions/additions and have characteristics similar to the parent molecule. Such closely related impurities create purification difficulties.
Хорошо известно, что использование ОФ-ВЭЖХ ограничено разделением и идентификацией сложных смесей, содержащих компоненты с большим разбросом значений рКа. Вследствие этого разделение при хроматографической очистке близко элюирующихся примесей всегда представляло собой сложную задачу. При разделении органических ионов стандартными методами ВЭЖХ в случаях, когда не работают обычные средства, такие как изменение соотношений элюентов или изменение неподвижной фазы, использование ион-парных реагентов может улучшить форму пиков и время удерживания. Такой способ иногда называют ион-парной хроматографией (англ. IPC, от англ. ion pair chromatography).It is well known that the use of RP-HPLC is limited to the separation and identification of complex mixtures containing components with a wide range of pKa values. As a result, separation during chromatographic purification of closely eluting impurities has always been a difficult task. When separating organic ions using standard HPLC methods, where conventional means such as changing eluent ratios or changing the stationary phase do not work, the use of ion-pair reagents can improve peak shapes and retention times. This method is sometimes called ion pair chromatography (IPC).
IPC представляет собой разновидность ОФ-ВЭЖХ, при которой в подвижную фазу добавляют ион-парные реагенты, способствующие образованию ионных пар с заряженными анализируемыми компонентами, что позволяет использовать колонку с обращенной фазой для разделения ионных молекул с ионной связью. Удерживание/разделение происходит за счет динамического сочетания механизмов обращенно-фазового и ионно-парного-ионного обмена.IPC is a variation of RP-HPLC in which ion-pairing reagents are added to the mobile phase to promote the formation of ion pairs with charged analytes, allowing the use of a reverse-phase column to separate ionic molecules with ion bonds. Containment/separation occurs through a dynamic combination of reversed-phase and ion-pair-ion exchange mechanisms.
Ион-парные реагенты состоят из длинной линейной алкильной цепи (от С3 до С16) и ионной группы, способной обратимо адсорбироваться на алкильных цепях (С8 или С18) RP-фазы (англ. RP, reversed phase - обращенная фаза), образуя динамичный ионообменник, с помощью которого могут быть разделены ионные соединения. Существует два основных типа ион-парных реагентов: анионные алкилсульфонаты для основных соединений и катионные четвертичные амины для кислотных соединений. Обычно при IPC используют алкилсульфонаты, представляющие собой натриевую соль гексансульфоновой кислоты, натриевую соль гептансульфоновой кислоты, натриевую соль 1-октансульфоновой кислоты и т.п. Селективность системы в значительной степени зависит от выбора и количества образователя ионной пары в подвижной фазе. Реагенты с длинной цепью будут значительно лучше адсорбироваться на RP-фазе, что положительно влияет на удерживание.Ion-pair reagents consist of a long linear alkyl chain (from C3 to C16) and an ionic group that can be reversibly adsorbed on the alkyl chains (C8 or C18) of the RP phase (reverse phase), forming a dynamic ion exchanger, with which ionic compounds can be separated. There are two main types of ion-pair reagents: anionic alkyl sulfonates for basic compounds and cationic quaternary amines for acidic compounds. Generally, alkyl sulfonates used in IPC are sodium hexane sulfonic acid, sodium heptane sulfonic acid, sodium 1-octane sulfonic acid, and the like. The selectivity of the system largely depends on the choice and amount of ion pairing agent in the mobile phase. Long chain reagents will adsorb significantly better on the RP phase, which has a positive effect on retention.
Отделение лираглутида от таких близкородственных примесей было изучено с помощью ОФ-ВЭЖХ в отсутствие и в присутствии агентов, образующих пары ионов, а именно натриевых солей 1-октансульфоновой кислоты, гексансульфоновой кислоты. Было отмечено, что разделение близкородственных примесей является более эффективным в присутствии агента, образующего пары ионов, приводя к общей более высокой чистоте по сравнению с циклом очистки, в котором агент для образования пары ионов не использовался.The separation of liraglutide from such closely related impurities was studied using RP-HPLC in the absence and presence of ion-pairing agents, namely sodium salts of 1-octane sulfonic acid, hexane sulfonic acid. It has been noted that separation of closely related impurities is more efficient in the presence of an ion pairing agent, resulting in overall higher purity compared to a purification cycle in which no ion pairing agent was used.
В настоящем изобретении предложен способ очистки лираглутида от таких близкородственных примесей, исследованный на примере ОФ-ВЭЖХ в отсутствие и в присутствии агентов, образующих пары ионов, а именно натриевых солей пропансульфоновой кислоты, бутансульфоновой кислоты, пентансульфоновой кислоты, гексансульфоновой кислоты, гептансульфоновой кислоты, октансульфоновой кислоты, нонансульфоновой кислоты, декансульфоновой кислоты, ундекансульфоновой кислоты, додекансульфоновой кислоты, тридекансульфоновой кислоты.The present invention proposes a method for purifying liraglutide from such closely related impurities, studied using RP-HPLC in the absence and presence of ion-pairing agents, namely sodium salts of propanesulfonic acid, butanesulfonic acid, pentanesulfonic acid, hexanesulfonic acid, heptanesulfonic acid, octanesulfonic acid , nonanesulfonic acid, decanesulfonic acid, undecanesulfonic acid, dodecanesulfonic acid, tridecanesulfonic acid.
Было отмечено, что разделение близкородственных примесей является более эффективным в присутствии агента, образующего пары ионов, приводя к общей более высокой чистоте по сравнению с очисткой методом ОФ-ВЭЖХ, где агент для образования пары ионов не использовалсяIt has been noted that separation of closely related impurities is more efficient in the presence of an ion pairing agent, resulting in overall higher purity compared to RP-HPLC purification where no ion pairing agent was used
Краткое описание сущности изобретенияBrief description of the invention
Аспекты настоящей заявки предусматривают способы очистки лираглутида.Aspects of the present application provide methods for purifying liraglutide.
Один из аспектов настоящего изобретения раскрывает способ очистки неочищенного лираглутида, при этом способ включает в себя:One aspect of the present invention discloses a method for purifying crude liraglutide, the method comprising:
a. получение раствора лираглутида путем растворения неочищенного лираглутида в смеси, содержащей водный раствор кислоты и ацетонитрил;a. preparing a solution of liraglutide by dissolving crude liraglutide in a mixture containing an aqueous acid solution and acetonitrile;
b. подвергание раствора неочищенного лираглутида первой очистке методом ВЭЖХ с использованием водного раствора кислоты и агента для образования пары ионов в качестве подвижной фазы А и ацетонитрила, содержащего спирт, в качестве подвижной фазы В;b. subjecting the crude liraglutide solution to a first purification by HPLC using an aqueous acid solution and an ion pairing agent as mobile phase A and acetonitrile containing alcohol as mobile phase B;
c. подвергание лираглутида после первой очистки методом ВЭЖХ второй очистке методом ВЭЖХ; иc. subjecting liraglutide, after the first HPLC purification, to a second HPLC purification; And
d. выделение очищенного лираглутида.d. isolation of purified liraglutide.
Другой аспект настоящего изобретения раскрывает способ очистки неочищенного лираглутида, где агент для образования пары ионов выбирают из соли алкансульфоновой кислоты.Another aspect of the present invention discloses a method for purifying crude liraglutide, wherein the ion pairing agent is selected from an alkane sulfonic acid salt.
Другой аспект настоящего изобретения раскрывает способ очистки неочищенного лираглутида, где соль алкансульфоновой кислоты выбирают из группы, состоящей из натриевой соли 1-октансульфоновой кислоты или натриевой соли 1-гептансульфоновой кислоты.Another aspect of the present invention discloses a method for purifying crude liraglutide, wherein the alkane sulfonic acid salt is selected from the group consisting of 1-octane sulfonic acid sodium salt or 1-heptane sulfonic acid sodium salt.
Другой аспект настоящего изобретения раскрывает способ очистки неочищенного лираглутида, где соль алкансульфоновой кислоты представляет собой натриевую соль 1-гексансульфоновой кислоты.Another aspect of the present invention discloses a method for purifying crude liraglutide, wherein the alkane sulfonic acid salt is the sodium salt of 1-hexane sulfonic acid.
Другой аспект настоящего изобретения раскрывает способ очистки неочищенного лираглутида, где водный раствор кислоты выбирают из лимонной кислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты или муравьиной кислоты.Another aspect of the present invention discloses a method for purifying crude liraglutide, wherein the aqueous acid solution is selected from citric acid, acetic acid, trifluoroacetic acid or formic acid.
Другой аспект настоящего изобретения раскрывает способ очистки неочищенного лираглутида методом ВЭЖХ с использованием агента для образования пары ионов.Another aspect of the present invention discloses a method for purifying crude liraglutide by HPLC using an ion pairing agent.
Параметры оборудования:Equipment parameters:
Параметры оборудования для ВЭЖХ:HPLC equipment parameters:
Колонка: С8, 150×4,6 мм, 2,7 мкмColumn: C8, 150×4.6 mm, 2.7 µm
Температура колонки: 60°СColumn temperature: 60°C
Детектирование: УФDetection: UV
Длина волны: 215 нмWavelength: 215 nm
Преимущества настоящего изиобретенияAdvantages of the present invention
Порошкообразный неочищенный лираглутид (содержание основного вещества 20-25%; чистота 30-50%) подвергают двум последовательным стадиям очистки методом ОФ-ВЭЖХ в разных условиях с последующей лиофилизацией с получением чистого лираглутида. Настоящее изобретение включает в себя использование на одной из стадий ОФ-ВЭЖХ селективных агентов для образования пары ионов для очистки неочищенного лираглутида от близкородственных примесей. При отсутствии во время процесса агентов для образования пары ионов разделения родственных примесей не происходит либо оно является недостаточным, что приводит к появлению примесей в конечном активном фармацевтическом ингредиенте (API, от англ. - active pharmaceutical ingredient).Powdered crude liraglutide (basic content 20-25%; purity 30-50%) is subjected to two successive RP-HPLC purification steps under different conditions, followed by lyophilization to obtain pure liraglutide. The present invention involves the use of selective ion pairing agents in one of the RP-HPLC steps to purify crude liraglutide from closely related impurities. In the absence of agents to form ion pairs during the process, separation of related impurities does not occur or is insufficient, which leads to the appearance of impurities in the final active pharmaceutical ingredient (API).
Сравнение профиля чистоты лираглутида без использования и с использованием октан-1-сульфоновой кислоты в качестве агента, образующего пары ионовComparison of the purity profile of liraglutide without and with octane-1-sulfonic acid as an ion pairing agent
В приведенной ниже таблице представлено сравнение профиля чистоты лираглутида в отношении близкородственных примесей, присутствующих при относительном времени удерживания (RRT, от англ. relative retention time) 0,93, 0,98 и 1,06 без использования и с использованием октан-1-сульфоновой кислоты в качестве агента для образования пары ионов.The table below compares the purity profile of liraglutide with respect to closely related impurities present at relative retention times (RRT) of 0.93, 0.98 and 1.06 without and with octane-1-sulfonic acid. acid as an agent to form an ion pair.
Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials
Для лучшего понимания и применения на практике настоящего раскрытия далее будут представлены примерные варианты осуществления, проиллюстрированные прилагаемыми графическими материалами. Графические материалы вместе с представленным ниже подробным описанием включены в описание, являются его частью и служат для дополнительной иллюстрации вариантов осуществления изобретения и объяснения различных принципов и преимуществ в соответствии с настоящим раскрытием, где:For a better understanding and practice of the present disclosure, exemplary embodiments will now be presented, illustrated in the accompanying drawings. The drawings, together with the detailed description provided below, are incorporated in, constitute a part of, and serve to further illustrate embodiments of the invention and explain the various principles and advantages of the present disclosure, wherein:
На Фиг. 1 изображена хроматограмма ВЭЖХ неочищенного лираглутида Формулы I.In FIG. 1 shows an HPLC chromatogram of crude liraglutide of Formula I.
На Фиг. 2 изображена хроматограмма ВЭЖХ лираглутида Формулы I после очистки без использования натриевой соли октан-1-сульфоновой кислоты (OSA).In FIG. 2 shows the HPLC chromatogram of liraglutide Formula I after purification without the use of sodium salt of octane-1-sulfonic acid (OSA).
На Фиг. 3 изображена хроматограмма ВЭЖХ лираглутида Формулы I после очистки с использованием OSA.In FIG. 3 depicts an HPLC chromatogram of liraglutide Formula I after purification using OSA.
На Фиг. 4 изображена хроматограмма ВЭЖХ лираглутида Формулы I после очистки с использованием HSA (англ. 1-hexane sulfonic acid sodium salt - натриевая соль 1-гексансульфоновой кислоты).In FIG. 4 shows an HPLC chromatogram of liraglutide Formula I after purification using HSA (1-hexane sulfonic acid sodium salt).
Подробное описание изобретенияDetailed Description of the Invention
Далее описаны варианты осуществления настоящего изобретения с помощью конкретных примеров, приведенных ниже. Примеры представлены для лучшего понимания некоторых вариантов осуществления изобретения, а никоим образом не для ограничения его объема. Возможные модификации и эквиваленты, очевидные для специалистов в данной области техники, использующих идеи настоящего описания и общие знания в области изобретения, также должны составлять часть данного описания и должны быть включены в объем изобретения.Embodiments of the present invention will now be described with specific examples given below. The examples are presented for a better understanding of certain embodiments of the invention and in no way to limit its scope. Possible modifications and equivalents obvious to those skilled in the art using the teachings of the present description and general knowledge in the field of the invention should also form part of this description and should be included within the scope of the invention.
Описание примеров осуществления изобретенияDescription of embodiments of the invention
Пример 1Example 1
275,5 мг неочищенного лираглутида, полученного твердофазным синтезом, растворяли в 250 мМ растворе моногидрата лимонной кислоты, содержащем 10% ацетонитрила (об./об.), фильтровали и подвергали двухстадийной очистке методом ОФ-ВЭЖХ.275.5 mg of crude liraglutide obtained by solid phase synthesis was dissolved in 250 mM citric acid monohydrate solution containing 10% acetonitrile (v/v), filtered and subjected to two-step purification by RP-HPLC.
ОФ-ВЭЖХ-1RP-HPLC-1
Раствор неочищенного лираглутида наносили на колонку емкостью 20 мл, заполненную С8 модифицированным силикагелем (размер частиц 10-13 мкм), уравновешенную приблизительно 60 мл 100 мМ раствора лимонной кислоты, содержащего 0,05 мас./об. % натриевой соли октан-1-сульфоновой кислоты (подвижная фаза А), 25% ацетонитрил : изопропанол (7:3) (подвижная фаза В), рН 2,0. После нанесения колонку промывали смесью буфер А: буфер В, 8:2. Продукт элюировали, используя градиент до 60% В. Длину волны детектирования устанавливали на уровне 215 нм. Температуру хроматографирования поддерживали на уровне 25°С. Объединяли фракции с чистотой более 91%, при этом средняя чистота объединенной фракции при RP-1 составляла более 95% с содержанием близкородственных примесей менее 0,50%.The crude liraglutide solution was applied to a 20 mL column packed with C8 modified silica gel (particle size 10-13 μm) equilibrated with approximately 60 mL of a 100 mM citric acid solution containing 0.05 w/v. % sodium octane-1-sulfonic acid (mobile phase A), 25% acetonitrile: isopropanol (7:3) (mobile phase B), pH 2.0. After application, the column was washed with a mixture of buffer A:buffer B, 8:2. The product was eluted using a gradient to 60% B. The detection wavelength was set at 215 nm. The chromatography temperature was maintained at 25°C. Fractions with a purity greater than 91% were pooled, with the average purity of the pooled fraction at RP-1 being greater than 95% with closely related impurities of less than 0.50%.
Продукт лираглутид после ОФ-ВЭЖХ-1 использовали далее для ОФ-ВЭЖХ-2The product liraglutide after RP-HPLC-1 was further used for RP-HPLC-2
Пример 2Example 2
275,5 мг неочищенного лираглутида, полученного твердофазным синтезом, растворяли в 250 мМ растворе моногидрата лимонной кислоты, содержащем 10% ацетонитрила (об./об.), фильтровали и подвергали двухстадийной очистке методом ОФ-ВЭЖХ.275.5 mg of crude liraglutide obtained by solid phase synthesis was dissolved in 250 mM citric acid monohydrate solution containing 10% acetonitrile (v/v), filtered and subjected to two-step purification by RP-HPLC.
ОФ-ВЭЖХ-1RP-HPLC-1
Раствор неочищенного лираглутида наносили на колонку емкостью 20 мл, заполненную С8 модифицированным силикагелем (размер частиц 10-13 мкм), уравновешенную приблизительно 60 мл 100 мМ раствора лимонной кислоты, содержащего 0,05% натриевой соли 1-гексансульфоновой кислоты (подвижная фаза А), 25% ацетонитрил : изопропанол (7:3) (подвижная фаза В), рН 2,0. После нанесения колонку промывали смесью буфер А: буфер В, 8:2. Продукт элюировали, используя градиент до 60%. Длину волны детектирования устанавливали на уровне 215 нм. Температуру хроматографирования поддерживали на уровне 25°С. Собирали фракции и анализировали их чистоту. Объединяли фракции с чистотой более 91%.The crude liraglutide solution was applied to a 20 mL column packed with C8 modified silica gel (particle size 10-13 μm) equilibrated with approximately 60 mL of 100 mM citric acid solution containing 0.05% sodium 1-hexanesulfonic acid (mobile phase A), 25% acetonitrile:isopropanol (7:3) (mobile phase B), pH 2.0. After application, the column was washed with a mixture of buffer A:buffer B, 8:2. The product was eluted using a gradient of up to 60%. The detection wavelength was set at 215 nm. The chromatography temperature was maintained at 25°C. Fractions were collected and their purity was analyzed. Fractions with a purity greater than 91% were combined.
Чистота лираглутида, очищенного с помощью ОФ-ВЭЖХ-1, по хроматограмме ВЭЖХ показана на Фиг. 4.The purity of RP-HPLC-1 purified liraglutide from the HPLC chromatogram is shown in FIG. 4.
Чистота по ВЭЖХ лираглутида, очищенного с помощью ОФ-ВЭЖХ, составляла более 95% с содержанием близкородственных примесей менее 2,0%.The HPLC purity of RP-HPLC-purified liraglutide was greater than 95% with less than 2.0% closely related impurities.
рН данной объединенной фракции доводили до 7,8 и упаривали при температуре 35°С для удаления органического растворителя. Осаждение проводили при рН 4,9 и выделяли лираглутид, очищенный с помощью ОФ-ВЭЖХ-1.The pH of this combined fraction was adjusted to 7.8 and evaporated at 35°C to remove organic solvent. Precipitation was carried out at pH 4.9 and liraglutide was isolated, purified by RP-HPLC-1.
Продукт лираглутид после ОФ-ВЭЖХ-1 использовали далее для ОФ-ВЭЖХ-2.The liraglutide product after RP-HPLC-1 was further used for RP-HPLC-2.
Пример 3Example 3
275,5 мг неочищенного лираглутида, полученного твердофазным синтезом, растворяли в 250 мМ растворе моногидрата лимонной кислоты, содержащем 10% ацетонитрила (об./об.), фильтровали и подвергали двухстадийной очистке методом ОФ-ВЭЖХ.275.5 mg of crude liraglutide obtained by solid phase synthesis was dissolved in 250 mM citric acid monohydrate solution containing 10% acetonitrile (v/v), filtered and subjected to two-step purification by RP-HPLC.
ОФ-ВЭЖХ-1RP-HPLC-1
Раствор неочищенного лираглутида наносили на колонку емкостью 20 мл, заполненную С8 модифицированным силикагелем (размер частиц 10-13 мкм), уравновешенную приблизительно 60 мл 100 мМ раствора лимонной кислоты (подвижная фаза А), 25% ацетонитрил : изопропанол (7:3) (подвижная фаза В), рН 2,0. После нанесения колонку промывали смесью буфер А: буфер В (8:2). Продукт элюировали, используя градиент до 60% В. Длину волны детектирования устанавливали на уровне 215 нм. Температуру хроматографирования поддерживали на уровне 25°С. Собирали фракции и анализировали их чистоту. Объединяли фракции с чистотой более 91%.The crude liraglutide solution was applied to a 20 mL column packed with C8 modified silica gel (particle size 10-13 μm) equilibrated with approximately 60 mL of 100 mM citric acid (mobile phase A), 25% acetonitrile:isopropanol (7:3) (mobile phase phase B), pH 2.0. After application, the column was washed with a mixture of buffer A:buffer B (8:2). The product was eluted using a gradient to 60% B. The detection wavelength was set at 215 nm. The chromatography temperature was maintained at 25°C. Fractions were collected and their purity was analyzed. Fractions with a purity greater than 91% were combined.
Чистота по ВЭЖХ лираглутида, очищенного с помощью ОФ-ВЭЖХ, составляла более 95% с содержанием близкородственных примесей менее 2,0%.The HPLC purity of RP-HPLC-purified liraglutide was greater than 95% with less than 2.0% closely related impurities.
Чистота лираглутида, очищенного с помощью ОФ-ВЭЖХ-1, по хроматограмме ВЭЖХ показана на Фиг. 2.The purity of RP-HPLC-1 purified liraglutide from the HPLC chromatogram is shown in FIG. 2.
Продукт лираглутид после ОФ-ВЭЖХ-1 использовали далее для ОФ-ВЭЖХ-2. Пример 4The liraglutide product after RP-HPLC-1 was further used for RP-HPLC-2. Example 4
32,6 г неочищенного лираглутида, полученного твердофазным синтезом, растворяли в 250 мМ растворе моногидрата лимонной кислоты, содержащем 10% ацетонитрила (об./об.), фильтровали и подвергали двухстадийной очистке методом ОФ-ВЭЖХ.32.6 g of crude liraglutide obtained by solid phase synthesis were dissolved in 250 mM citric acid monohydrate solution containing 10% acetonitrile (v/v), filtered and subjected to two-step RP-HPLC purification.
ОФ-ВЭЖХ-1RP-HPLC-1
Раствор неочищенного лираглутида наносили на колонку емкостью 2,4 л, заполненную С8 модифицированным силикагелем (размер частиц 10-13 мкм), уравновешенную приблизительно 7,2 л 100 мМ раствора лимонной кислоты, содержащего 0,05% натриевой соли октан-1-сульфоновой кислоты (подвижная фаза А), 25% ацетонитрил : изопропанол (7:3) (подвижная фаза В), рН 2,0. После нанесения колонку промывали смесью буфер А: буфер В, 8:2. Продукт элюировали, используя градиент до 60% В. Длину волны детектирования устанавливали на уровне 215 нм. Температуру хроматографирования поддерживали на уровне 25°С. Собирали фракции и анализировали их чистоту. Объединяли фракции с чистотой более 91%. Чистота лираглутида, очищенного с помощью ОФ-ВЭЖХ-1, по хроматограмме ВЭЖХ показана на Фиг. 3.The crude liraglutide solution was applied to a 2.4 L column packed with C8 modified silica gel (particle size 10-13 μm) equilibrated with approximately 7.2 L of 100 mM citric acid solution containing 0.05% sodium octane-1-sulfonic acid (mobile phase A), 25% acetonitrile:isopropanol (7:3) (mobile phase B), pH 2.0. After application, the column was washed with a mixture of buffer A:buffer B, 8:2. The product was eluted using a gradient to 60% B. The detection wavelength was set at 215 nm. The chromatography temperature was maintained at 25°C. Fractions were collected and their purity was analyzed. Fractions with a purity greater than 91% were combined. The purity of RP-HPLC-1 purified liraglutide from the HPLC chromatogram is shown in FIG. 3.
Чистота по ВЭЖХ лираглутида, очищенного с помощью ОФ-ВЭЖХ, составляла более 94% с содержанием близкородственных примесей менее 0,50%.The HPLC purity of RP-HPLC purified liraglutide was greater than 94% with less than 0.50% closely related impurities.
рН данной объединенной фракции доводили до 7,8 и упаривали при температуре 35°С для удаления органического растворителя. Осаждение проводили при рН 4,9 и выделяли лираглутид, очищенный с помощью ОФ-ВЭЖХ-1.The pH of this combined fraction was adjusted to 7.8 and evaporated at 35°C to remove organic solvent. Precipitation was carried out at pH 4.9 and liraglutide was isolated, purified by RP-HPLC-1.
Продукт лираглутид после ОФ-ВЭЖХ-1 использовали далее для ОФ-ВЭЖХ-2.The liraglutide product after RP-HPLC-1 was further used for RP-HPLC-2.
ОФ-ВЭЖХ-2RP-HPLC-2
3,1 л лираглутида, очищенного с помощью ОФ-ВЭЖХ-1, растворенного в 50 мМ растворе гидрофосфата натрия, содержащем 25% метанола, в концентрации 3 мг/мл, наносили на колонку емкостью 2,4 л, заполненную С8 модифицированным силикагелем (размер частиц 10-13 мкм), уравновешенную приблизительно 7,2 л 50 мМ натрий-фосфатного буфера с величиной рН 7,5, содержащего 5% ацетонитрила. Продукт элюировали, используя градиент до 41% В. Длину волны детектирования устанавливали на уровне 215 нм. Температуру хроматографирования поддерживали на уровне 25°С. Собирали отдельные фракции и анализировали их чистоту. Фракции с чистотой более 98,0% объединяли и упаривали при температуре 35°С для удаления органического растворителя. Осаждение проводили при величине рН 4,9. Очищенный лираглутид лиофилизировали. Чистота по ВЭЖХ лиофилизированного порошкообразного продукта составляла более 99% с содержанием примесей не более 0,20%.3.1 L of RP-HPLC-1 purified liraglutide, dissolved in 50 mM sodium hydrogen phosphate solution containing 25% methanol, at a concentration of 3 mg/ml, was applied to a 2.4 L column packed with C8 modified silica gel (size particles 10-13 μm), balanced with approximately 7.2 l of 50 mM sodium phosphate buffer with a pH value of 7.5 containing 5% acetonitrile. The product was eluted using a gradient to 41% B. The detection wavelength was set at 215 nm. The chromatography temperature was maintained at 25°C. Individual fractions were collected and their purity was analyzed. Fractions with a purity greater than 98.0% were combined and evaporated at 35°C to remove the organic solvent. Precipitation was carried out at a pH value of 4.9. Purified liraglutide was lyophilized. The HPLC purity of the lyophilized powdered product was greater than 99% with no more than 0.20% impurities.
Claims (10)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IN201941004693 | 2019-02-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2021125777A RU2021125777A (en) | 2023-03-06 |
| RU2816581C2 true RU2816581C2 (en) | 2024-04-02 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2813514A1 (en) * | 2012-02-10 | 2014-12-17 | Hybio Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for purifying solid-phase synthetic crude liraglutide |
| WO2016059609A1 (en) * | 2014-10-17 | 2016-04-21 | Dr. Reddy' S Laboratories Limited | Acylation process for preparation of liraglutide |
| WO2018104922A1 (en) * | 2016-12-10 | 2018-06-14 | Biocon Limited | Synthesis of liraglutide |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2813514A1 (en) * | 2012-02-10 | 2014-12-17 | Hybio Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for purifying solid-phase synthetic crude liraglutide |
| WO2016059609A1 (en) * | 2014-10-17 | 2016-04-21 | Dr. Reddy' S Laboratories Limited | Acylation process for preparation of liraglutide |
| WO2018104922A1 (en) * | 2016-12-10 | 2018-06-14 | Biocon Limited | Synthesis of liraglutide |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Moldoveanu, S. C et al "Retention Mechanisms in Different HPLC Types. Essentials in Modern HPLC Separations, 2013, 145-190, doi:10.1016/b978-0-12-385013-3.00. * |
| Е.Л. СТЫСКИН, Л.Б. ИЦИКСОН, Е.В. БРАУДЕ, Практическая Высокоэффективная Жидкостная ХРОМАТОГРАФИЯ, М., 1986,284 с. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2461564C2 (en) | Method of purifying cyclic or acyclic peptide | |
| FI91875B (en) | Process for isolating basic protein from protein mixtures containing such basic protein | |
| NO304190B1 (en) | Pure parathyroid hormone, process for its preparation as well as pharmaceutical composition containing it | |
| Hancock et al. | Use of mixed-mode, high-performance liquid chromatography for the separation of peptide and protein mixtures | |
| US6180757B1 (en) | Process for the separation of proteins using a CA++ containing eluant | |
| US9422330B2 (en) | Preparative RP-HPLC method for purifying peptides | |
| LT3329B (en) | Method for the purification of insulin | |
| US20150360146A1 (en) | Purification of Organic Compounds Using Surrogate Stationary Phases on Reversed Phase Columns | |
| Kazuhiro et al. | Liquid chromatographic determination of urinary dopamine and norepinephrine as fluorescamine derivatives | |
| RU2816581C2 (en) | Purification of glucagon-like peptide-1 analogues | |
| WO2010133071A1 (en) | Highly purified follicle stimulating hormone from urea and method for preparing thereof | |
| JPS62188963A (en) | Moving bed for liquid chromatography and method of purifyingprotein | |
| CA2024250A1 (en) | Method for purifying low molecular weight compounds of peptide of pseudo-peptide structure | |
| CN1325511C (en) | Glutathion purification and separation method | |
| Yamada et al. | Separation of peptide diastereomers by reversed-phase high-performance liquid chromatography and its applications: IV. New derivatization reagent for the enantiomeric analysis of α-and β-amino acids | |
| US4584400A (en) | Refining phenylalanine | |
| US20220411464A1 (en) | Purification of glp-1 analogues | |
| Wang et al. | Protein renaturation with simultaneous purification by protein folding liquid chromatography: recent developments | |
| KR101993563B1 (en) | METHODS, KITS, AND DEVICES FOR PREPARING Glycoconjugates | |
| WO2021129016A1 (en) | Method for desalting polypeptides | |
| CN114478750A (en) | Purification method of teriparatide | |
| CN108535398B (en) | Method for separating tiagabine hydrochloride chiral enantiomer by adopting reversed-phase high-performance liquid chromatography | |
| Sokol et al. | Aprotinin conformational distributions during reversed-phase liquid chromatography: Analysis by hydrogen-exchange mass spectrometry | |
| CN116284233B (en) | Method for preparing itracin | |
| JP7457023B2 (en) | Chromatography process for purification of insulin analogues |