RU2815165C1 - Method for diagnosing vegetative disorders in post-covid syndrome in school-aged children - Google Patents
Method for diagnosing vegetative disorders in post-covid syndrome in school-aged children Download PDFInfo
- Publication number
- RU2815165C1 RU2815165C1 RU2023131396A RU2023131396A RU2815165C1 RU 2815165 C1 RU2815165 C1 RU 2815165C1 RU 2023131396 A RU2023131396 A RU 2023131396A RU 2023131396 A RU2023131396 A RU 2023131396A RU 2815165 C1 RU2815165 C1 RU 2815165C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- covid
- post
- syndrome
- disorders
- school
- Prior art date
Links
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 208000027028 long COVID Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000000018 Chemokine CCL2 Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 claims description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 abstract 2
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 16
- 206010003840 Autonomic nervous system imbalance Diseases 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 5
- 102000014962 Monocyte Chemoattractant Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010064136 Monocyte Chemoattractant Proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 2
- 206010063080 Postural orthostatic tachycardia syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBWSOTREAMFOCQ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 OBWSOTREAMFOCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDPKBJZLAXLQGZ-KBIXCLLPSA-N Ala-Val-Asp-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DDPKBJZLAXLQGZ-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 208000014094 Dystonic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027534 Emotional disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 208000008457 Neurologic Manifestations Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 241000862969 Stella Species 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000019479 dysautonomia Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 208000010118 dystonia Diseases 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 208000018290 primary dysautonomia Diseases 0.000 description 1
- 238000013102 re-test Methods 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022925 sleep disturbance Diseases 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 206010042772 syncope Diseases 0.000 description 1
- 230000028016 temperature homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии и может быть использовано в качестве метода диагностики вегетативных нарушений при постковидном синдроме у детей школьного возраста.The invention relates to the field of medicine, in particular to neurology, and can be used as a method for diagnosing autonomic disorders in post-Covid syndrome in school-age children.
Под синдромом вегетативной дисфункции (СВД) понимается полисистемное расстройство, возникающие в результате нарушения деятельности надсегментарных вегетативных структур. Клинические проявления СВД проявляются вариативностью, при которой в патологический процесс вовлекаются большинство систем организма, при этом ведущее место отводится расстройствам сердечно-сосудистой системы. Симптоматика СВД зависит от вегетативного тонуса, возраста ребенка, эмоциональных нарушений, темперамента и характера личности [Синдром вегетативной дисфункции у детей и подростков / Л. С. Чутко, Т. Л. Корнишина, С. Ю. Сурушкина [и др.] // Журнал неврологии и психиатрии им. C.C. Корсакова. – 2018. – Т. 118, № 1. – С. 43-49. – DOI 10.17116/jnevro20181181143-49. – EDN YPBUCS].Autonomic dysfunction syndrome (AVDS) is understood as a multisystem disorder resulting from disruption of the activity of suprasegmental autonomic structures. Clinical manifestations of SVD are manifested by variability, in which most body systems are involved in the pathological process, with the leading place given to disorders of the cardiovascular system. The symptoms of SVD depend on the autonomic tone, the age of the child, emotional disorders, temperament and personality [Autonomous dysfunction syndrome in children and adolescents / L. S. Chutko, T. L. Kornishina, S. Yu. Surushkina [etc.] // Journal of Neurology and Psychiatry. C.C. Korsakov. – 2018. – T. 118, No. 1. – P. 43-49. – DOI 10.17116/jnevro20181181143-49. – EDN YPBUCS].
Вегетативные нарушения являются часто встречающимся облигатным признаком постковидных нарушений. Поперечное исследование показало, что симптомы постковидного периода могут сохраняться у 52% пациентов через 1 месяц после появления симптомов [Sugiyama, A., Miwata, K., Kitahara, Y., Okimoto, M., Abe, K. E. B., Ouoba, S., Akita, T.,Tanimine, N., Ohdan, H., Kubo, T., Nagasawa, A., Nakanishi, T., Takafuta, T., Tanaka, J., 2022. Long COVID occurrence in COVID-19 survivors. Sci.Rep. 12, 6039].Autonomic disorders are a common obligate symptom of post-Covid disorders. A cross-sectional study found that post-Covid symptoms may persist in 52% of patients 1 month after symptom onset [Sugiyama, A., Miwata, K., Kitahara, Y., Okimoto, M., Abe, K. E. B., Ouoba, S., Akita, T., Tanimine, N., Ohdan, H., Kubo, T., Nagasawa, A., Nakanishi, T., Takafuta, T., Tanaka, J., 2022. Long COVID occurrence in COVID-19 survivors . Sci.Rep. 12, 6039].
Многочисленные сообщения о случаях заболевания указывают на то, что вегетативная дисфункция или дизавтономия являются важным последствием длительного течения COVID [S. Blitshteyn, S. Whitelaw Postural orthostatic tachycardia syndrome (POTS) and other autonomic disorders after COVID-19 infection: a case series of 20 patients Immunol. Res., 69 (2021), pp. 205-211]. В проспективном мультицентровом исследовании отмечено, что вегетативные симптомы на этапе постCOVID-19 требуют наблюдения даже у пациентов без неврологических проявлений [A. Buoite Stella, G. Furlanis, N.A. Frezza, R. Valentinotti, M. Ajcevic, P. Manganotti Autonomic dysfunction in post-COVID patients with and without neurological symptoms: a prospective multidomain observational study].Numerous case reports indicate that autonomic dysfunction or dysautonomia is an important consequence of long-term COVID [S. Blitshteyn, S. Whitelaw Postural orthostatic tachycardia syndrome (POTS) and other autonomic disorders after COVID-19 infection: a case series of 20 patients Immunol. Res., 69 (2021), pp. 205-211]. A prospective multicenter study noted that autonomic symptoms in the post-COVID-19 stage require observation even in patients without neurological manifestations [A. Buoite Stella, G. Furlanis, N.A. Frezza, R. Valentinotti, M. Ajcevic, P. Manganotti Autonomic dysfunction in post-COVID patients with and without neurological symptoms: a prospective multidomain observational study].
При вегетативной дисфункции в детском возрасте отмечается ограниченное количество методов диагностики, что делает невозможным применение существующих способов (например, нагрузочные и фармакологические пробы) и ведет к несвоевременному выявлению этих нарушений. Наиболее распространенные методы диагностики (вегетативные пробы, исследование вариабельности сердечного ритма, тестирование по специальным опросникам) применяются лишь при появлении соответствующих жалоб, что, как правило, не используется у детей.For autonomic dysfunction in childhood, there is a limited number of diagnostic methods, which makes it impossible to use existing methods (for example, stress and pharmacological tests) and leads to untimely detection of these disorders. The most common diagnostic methods (vegetative tests, heart rate variability testing, testing using special questionnaires) are used only when relevant complaints appear, which, as a rule, is not used in children.
При большинстве положительных качеств, многие методы не имеют четких границ нормы и патологии, зачастую носят субъективный характер, требуют использования специального оборудования, значительных временных затрат. Всё это обусловливает необходимость разработки общедоступных методов своевременной объективной диагностики вегетативной дисфункции в постковидном периоде.Despite the majority of positive qualities, many methods do not have clear boundaries between normal and pathological, are often subjective in nature, require the use of special equipment, and significant time expenditure. All this necessitates the development of publicly available methods for timely objective diagnosis of autonomic dysfunction in the post-Covid period.
Известен способ верификации и вегетативных расстройств и определение их степени тяжести при помощи схемы, разработанной А.М. Вейном [Вегетативные расстройства: клиника, лечение, диагностика. Руководство для врачей. Под ред. Голубева В.Л. М.: Медицинское информационное агентство; 2010]. Способ основан на рейтинговой оценке выраженности вегетативных симптомов в баллах с использованием субшкал, включающих критерии диагностики сердечно-сосудистых, желудочно-кишечных, урологических, кожно-трофических, нарушений терморегуляции. Недостатком такого метода является субъективизм оценки состояния со стороны пациента и врача, что приводит к недостоверности полученных результатов. There is a known method for verifying autonomic disorders and determining their severity using a scheme developed by A.M. Wayne [Autonomic disorders: clinical picture, treatment, diagnosis. Guide for doctors. Ed. Golubeva V.L. M.: Medical Information Agency; 2010]. The method is based on a rating assessment of the severity of vegetative symptoms in points using subscales, including diagnostic criteria for cardiovascular, gastrointestinal, urological, skin-trophic, and thermoregulation disorders. The disadvantage of this method is the subjectivity of the assessment of the condition on the part of the patient and the doctor, which leads to the unreliability of the results obtained.
Неврологические симптомы распространены при постковидном синдроме и связаны с повышенными уровнями провоспалительных цитокинов IL-6, MCP-1 и TNF- у большинства пациентов [Tsilingiris, D.; Vallianou, N.G.; Karampela, I.; Christodoulatos, G.S.; Papavasileiou, G.; Petropoulou, D.; Magkos, F.; Dalamaga, M. Laboratory Findings and Biomarkers in Long COVID: What DoWe Know So Far? Insights into Epidemiology, Pathogenesis, Therapeutic Perspectives and Challenges. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 10458. https://doi.org/10.3390/ijms241310458].Neurological symptoms are common in post-Covid syndrome and are associated with increased levels of the pro-inflammatory cytokines IL-6, MCP-1 and TNF-α in most patients [Tsilingiris, D.; Vallianou, N. G.; Karampela, I.; Christodoulatos, G. S.; Papavasileiou, G.; Petropoulou, D.; Magkos, F.; Dalamaga, M. Laboratory Findings and Biomarkers in Long COVID: What Do We Know So Far? Insights into Epidemiology, Pathogenesis, Therapeutic Perspectives and Challenges. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 10458. https://doi.org/10.3390/ijms241310458].
Лица с наиболее частыми симптомами после COVID-19 имеют более высокие исходные уровни провоспалительных, хемотаксических цитокинов [Alfadda A. A. et al. Clinical and biochemical characteristics of people experiencing post-coronavirus disease 2019-related symptoms: A prospective follow-up investigation //Frontiers in medicine. – 2022. – Т. 9. – С. 1067082]. Это говорит нам о том, что постковидный период сопровождается иммунологическими нарушениями.Individuals with the most frequent symptoms following COVID-19 have higher baseline levels of pro-inflammatory, chemotactic cytokines [Alfadda A. A. et al. Clinical and biochemical characteristics of people experiencing post-coronavirus disease 2019-related symptoms: A prospective follow-up investigation //Frontiers in medicine. – 2022. – T. 9. – P. 1067082]. This tells us that the post-Covid period is accompanied by immunological disorders.
M. Salah и др. доказали, что моноцитарный хемотаксический фактор в плазме крови у взрослых, перенесших коронавирусную инфекцию, обладает повышенной чувствительностью. Так в случае контроля диапазон концентрации MCP-1 составлял 10-40 нг/мл, при лёгкой степени - 50-240 нг/мл, средне-тяжелой степени - 220-1580 нг/мл, у реконвалесцентов - 40-70 нг/мл. M. Salah et al. proved that the monocyte chemotactic factor in the blood plasma of adults who have had coronavirus infection has increased sensitivity. So, in the case of control, the concentration range of MCP-1 was 10-40 ng/ml, for mild degrees - 50-240 ng/ml, for moderate-severe degrees - 220-1580 ng/ml, for convalescents - 40-70 ng/ml.
Способов объективной лабораторной диагностики вегетативных нарушений у детей в изученных нами патентных источниках и научной медицинской литературе не обнаружено. No methods for objective laboratory diagnosis of autonomic disorders in children were found in the patent sources and scientific medical literature we studied.
Технический результат: повышение специфичности и точности диагностики вегетативных нарушений у детей школьного возраста, доступность, неинвазивность, объективизация способа диагностики. Technical result: increasing the specificity and accuracy of diagnosing autonomic disorders in school-age children, accessibility, non-invasiveness, objectification of the diagnostic method.
Указанный результат достигается путем определения в слюне пациента с постковидным синдромом концентрации моноцитарного хемотаксического протеина-1 (MCP-1). This result is achieved by determining the concentration of monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) in the saliva of a patient with post-Covid syndrome.
Способ осуществляют следующим образом: у обследуемого больного собирают ротовую жидкость в стерильную ёмкость для сдачи анализов. В последующем слюну центрифугируют при 3000 оборотах в течение 15 минут. Отделенную слюну можно хранить 2 часа при комнатной температуре и в течение длительного периода при -20 градусах и ниже [МСР-1-ИФА-БЕСТ (А-8782), серия 21 (ВЕКТОР-БЕСТ, Россия)]. Технология определения уровня моноцитарного хемотаксического белка (MCP-1) слюны базируется на проведении твердофазного ИФА (сэндвич-метод) с использованием специализированных стандартных тест-систем. The method is carried out as follows: oral fluid is collected from the patient being examined into a sterile container for testing. Subsequently, the saliva is centrifuged at 3000 rpm for 15 minutes. Separated saliva can be stored for 2 hours at room temperature and for a long period at -20 degrees and below [MSR-1-IFA-BEST (A-8782), series 21 (VECTOR-BEST, Russia)]. The technology for determining the level of monocyte chemotactic protein (MCP-1) in saliva is based on solid-phase ELISA (sandwich method) using specialized standard test systems.
Необходимые реактивы: иммуноферментный набор для количественного определения моноцитарного хемотаксического белка методом конкурентного ИФА в биологических жидкостях ("МСР-1-ИФА-БЕСТ ", страна-производитель - Россия), планшет разборный, калибровочные образцы, контрольный образец (инактивированный), конъюгат №1,2, раствор для восстановления калибровочных и контрольных образцов, раствор для разведения образцов, концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор тетраметилбензидина плюс, стоп-реагент, пленка для заклеивания планшета, трафарет для построения калибровочного графика, ванночка для реагента, наконечники для дозатора. Планшет разборный в наборе сорбирован моноклональными антителами, специфичными к моноцитарному хемотаксическому белку. Во все лунки планшета вносили по 100 мкл раствора для разведения образцов. В лунки первого стрипа вносили по 100 мкл калибровочных образцов и по 100 мкл контрольного образца в дублях, приготовленных согласно рекомендации производителя. В остальные лунки планшета вносили по 100 мкл анализируемых образцов ротовой жидкости. Планшет инкубировали 120 минут при температуре 37±1°С при перемешивании со скоростью 700 об/минуту в шейкере-термостате (ELMI, Латвия). После этого удаляли жидкость из лунок планшета и выполняли 5-кратную промывку лунок на вошере (ASYS, Англия). Во все лунки планшета вносили по 100 мкл конъюгата №1. Планшет инкубировали еще 1 час при температуре 37±1°С при перемешивании со скоростью 700 об/минуту в шейкере-термостате (ELMI, Латвия). Удаляли содержимое лунок планшета и промывали их пять раза внося по 350 мкл рабочего раствора промывающего буфера. Затем вносили по 100 мкл конъюгата № 2. Инкубировали 30 минут при температуре 37±1°С. Затем после 5-х кратной промывки в лунки планшета добавляли по 100 мкл раствора рабочего раствора субстрата ТМБ, который представляет собой стабилизированной раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида и субстратный буфер, содержащий перекись водорода. Инкубировали еще 20 - 25 минут при температуре 37±1°С и после развития окраски останавливали реакцию путем добавления 100 мкл стоп-реактива. Величину оптической плотности растворов в лунках стрипов регистрировали на фотометре c вертикальным сканированием (ридере) (Stat Fax 2100, Awareness, США) в двухволновом режиме: при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 640 нм. Required reagents: enzyme immunoassay kit for quantitative determination of monocyte chemotactic protein by competitive ELISA in biological fluids (MCR-1-ELISA-BEST, country of origin - Russia), collapsible tablet, calibration samples, control sample (inactivated), conjugate No. 1 ,2, solution for reconstitution of calibration and control samples, solution for diluting samples, phosphate-buffered saline solution with Tween, tetramethylbenzidine plus solution, stop reagent, film for sealing the plate, stencil for creating a calibration graph, reagent bath, tips for dispenser. The collapsible tablet in the kit is sorbed with monoclonal antibodies specific to the monocyte chemotactic protein. 100 μl of sample dilution solution was added to all wells of the plate. The wells of the first strip were filled with 100 μl of calibration samples and 100 μl of a control sample in duplicates prepared according to the manufacturer’s recommendations. 100 μl of the analyzed oral fluid samples were added to the remaining wells of the plate. The plate was incubated for 120 minutes at a temperature of 37±1°C with stirring at a speed of 700 rpm in a shaker-thermostat (ELMI, Latvia). After this, the liquid was removed from the wells of the plate and the wells were washed 5 times using a washer (ASYS, England). 100 μl of conjugate No. 1 was added to all wells of the plate. The plate was incubated for another 1 hour at a temperature of 37±1°C with stirring at a speed of 700 rpm in a shaker-thermostat (ELMI, Latvia). The contents of the plate wells were removed and washed five times by adding 350 μl of the working solution of washing buffer. Then 100 μl of conjugate No. 2 was added. The mixture was incubated for 30 minutes at a temperature of 37 ± 1°C. Then, after washing 5 times, 100 μl of a working solution of the TMB substrate, which is a stabilized solution of 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine hydrochloride and a substrate buffer containing hydrogen peroxide, was added to the wells of the plate. They incubated for another 20 - 25 minutes at a temperature of 37±1°C and after color development, the reaction was stopped by adding 100 μl of stop reagent. The optical density of the solutions in the wells of the strips was recorded on a vertical scanning photometer (reader) (Stat Fax 2100, Awareness, USA) in a dual-wave mode: with a main wavelength of 450 nm and a reference wavelength in the range of 640 nm.
Конкретные показатели, определяющие наличие вегетативных нарушений, высчитывались с использованием R-квадрата путем регрессионного анализа и сравнивались с результатами тестирования по шкале для оценки вегетативных нарушений (А.М. Вейн). Specific indicators that determine the presence of autonomic disorders were calculated using R-squared by regression analysis and compared with the results of testing on a scale for assessing autonomic disorders (A.M. Vein).
При значении МСР-1 от 3,5 пг/мл до 19,64 г/мл делают вывод об отсутствии вегетативных нарушений, при значении МСР-1 19,65 нг/мл и более диагностируют вегетативные нарушения. When the MCP-1 value is from 3.5 pg/ml to 19.64 g/ml, it is concluded that there are no autonomic disorders; when the MCP-1 value is 19.65 ng/ml or more, autonomic disorders are diagnosed.
Данный способ был апробирован при обследовании 60 детей с постковидным синдромом в возрасте от 8 до 14 лет, 30 мальчиков и 30 девочек. Группу контроля составили 20 практически здоровых лиц, сопоставимых по полу и возрасту с основной группой. This method was tested in a study of 60 children with post-Covid syndrome aged 8 to 14 years, 30 boys and 30 girls. The control group consisted of 20 practically healthy individuals, comparable in gender and age to the main group.
Примеры конкретного выполнения Examples of concrete implementation
Пример 1. Пациентка А., 12 лет. Перенесла новую коронавирусную инфекцию легкой степени тяжести в сентябре 2021 в форме назофарингита. Предъявляла жалобы на раздражительность, частые переживания, головные боли (по типу напряжения). Неврологический статус без патологии. Тестирование по схеме Вейна определило 20 баллов, по вопроснику Вейна - 12 баллов (результаты указывают на отсутствие субъективных симптомов вегетативной дистонии). Уровень MCP-1 в слюне оказался равным 6,9 пг/мл, что объективно подтверждает отсутствие вегетативной дисфункции. Example 1. Patient A., 12 years old. She suffered a new coronavirus infection of mild severity in September 2021 in the form of nasopharyngitis. She complained of irritability, frequent worries, headaches (of the tension type). Neurological status without pathology. Testing according to the Wein scheme determined 20 points, according to the Wein questionnaire - 12 points (the results indicate the absence of subjective symptoms of autonomic dystonia). The level of MCP-1 in saliva was 6.9 pg/ml, which objectively confirms the absence of autonomic dysfunction.
Пример 2. Пациент Р., мальчик 11 лет. Перенёс новую коронавирусную инфекцию средней степени тяжести в назофарингобронхиальной форме в декабре 2022 года. После окончания острого периода у пациента сохранялись жалобы на cнижение физической активности, нарушение сна, раздражительность, частые переживания, трудности общения с другими детьми, нарушение концентрации, памяти, ухудшение самочувствия при смене погоды, плохая переносимость холода, жары, духоты. При осмотре неврологических симптомов не выявлено. С помощью иммуноферментного анализа по вышеописанной методике определен сывороточный уровень моноцитарного хемотаксического белка в слюне – 33,6 пг/мл. При этом по схеме Вейна отмечалось 35 баллов, по опроснику Вейна - 28 баллов, данные показатели констатируют наличие вегетативной дисфункции.Example 2. Patient R., 11-year-old boy. He suffered a new coronavirus infection of moderate severity in the nasopharyngobronchial form in December 2022. After the end of the acute period, the patient continued to complain about decreased physical activity, sleep disturbances, irritability, frequent worries, difficulties communicating with other children, impaired concentration, memory, deterioration of well-being when the weather changes, poor tolerance of cold, heat, and stuffiness. Examination revealed no neurological symptoms. Using an enzyme immunoassay using the method described above, the serum level of monocyte chemotactic protein in saliva was determined to be 33.6 pg/ml. At the same time, according to the Wayne scheme, 35 points were noted, according to the Wayne questionnaire - 28 points, these indicators indicate the presence of autonomic dysfunction.
Пример 3. Пациентка С., 13 лет. Жалобы на повышение потливости дистальных отделов конечностей, повышение температуры до 37,3°С, головные боли (по типу напряжения), слабость, вялость плохая переносимость холода, жары, духоты, повышенная тревожность, обмороки, снижение концентрации, внимания, памяти. При осмотре выявлена локальная потливость кистей и стоп, астеничность. Пациентка негативно отреагировала на тестирование по опроснику Вейна, на все пункты давала отрицательные ответы, в итоге суммарный балл оказался равным 10 баллам (отсутствие вегетативной дисфункции). При проведении иммуноферментного анализа слюны был получен сывороточный уровень моноцитарного хемотаксического протеина-1 в количестве 48,9 пг/мл. При повторном тестировании вегетативного статуса через сутки было выявлено повышение баллов по опроснику Вейна (29 баллов) и по схеме Вейна (45 баллов), что подтвердило наличие вегетативной дисфункции. Example 3. Patient S., 13 years old. Complaints of increased sweating of the distal extremities, increased temperature up to 37.3°C, headaches (tension type), weakness, lethargy, poor tolerance of cold, heat, stuffiness, increased anxiety, fainting, decreased concentration, attention, memory. Upon examination, local sweating of the hands and feet and asthenicity were revealed. The patient reacted negatively to testing according to the Wayne questionnaire, gave negative answers to all points, and as a result, the total score was 10 points (absence of autonomic dysfunction). A salivary enzyme immunoassay revealed a serum level of monocyte chemotactic protein-1 of 48.9 pg/ml. When re-testing the vegetative status a day later, an increase in scores on the Wein questionnaire (29 points) and according to the Wein scheme (45 points) was revealed, which confirmed the presence of autonomic dysfunction.
Таким образом, способ обеспечивает точность диагностики наличия вегетативных нарушений при постковидном синдроме у детей, значительно сокращает диагностические сроки, а также повышает достоверность субъективных симптомов вегетативных проявлений, что позволяет проводить своевременную адекватную терапию.Thus, the method ensures the accuracy of diagnosing the presence of autonomic disorders in post-Covid syndrome in children, significantly reduces diagnostic time, and also increases the reliability of subjective symptoms of autonomic manifestations, which allows for timely adequate therapy.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2815165C1 true RU2815165C1 (en) | 2024-03-11 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2338459C1 (en) * | 2007-04-02 | 2008-11-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method of early diagnostics of dysfunction and type of dysfunction of vegetative nervous system at children and teenagers |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2338459C1 (en) * | 2007-04-02 | 2008-11-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method of early diagnostics of dysfunction and type of dysfunction of vegetative nervous system at children and teenagers |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| КОЛОТОВ К.А. и др. Моноцитарный хемотаксический протеин-1 в физиологии и медицине. Пермский медицинский журнал. 2018, 35(3), стр.99-105. ЗАХАРОВА И.Н. и др. Постковидный синдром у детей в структуре COVID-19. Педиатрия. Consilium Medicum. 2022, 1, стр.8-14. БАЛЫКОВА Л.А. и др. Постковидный синдром у детей и подростков: обзор литературы и описание клинического наблюдения. РМЖ. Мать и дитя. 2022, 5(4), стр.366-372. СЕРЕБРЯКОВА Е.Н. и др. К вопросу о постковидном синдроме у детей и подростков: подходы к терминологии, патогенезу, клинике, диагностике и лечению. Антибиотики и химиотер. 2022, 67, 11-12, стр.51-55. LOW R.N. et al. A review of cytokine-based pathophysiology of Long COVID symptoms. Front Med (Lausanne). 2023, 10, p.1011936. JIANG L. et al. COVID-19 and multisystem inflammatory syndrome in children and adolescents. Lancet Infect Dis. 2020, 20(11), p.e276-e288. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| González-García et al. | Short-term prognostic value of serum neuron specific enolase and S100B in acute stroke patients | |
| Cantwell | Classification of child and adolescent psychopathology | |
| Sheps et al. | The assessment of diagnostic tests: a survey of current medical research | |
| Eibschitz-Tsimhoni et al. | Early screening for amblyogenic risk factors lowers the prevalence and severity of amblyopia | |
| Sander et al. | Carotid‐intima media thickness is independently associated with cognitive decline. The INVADE study | |
| Janahi et al. | Diabetic peripheral neuropathy, is it an autoimmune disease? | |
| Zúñiga et al. | Validation of the salivary urea test as a method to diagnose chronic kidney disease | |
| Ng et al. | Primary Sjögrens syndrome is associated with impaired autonomic response to orthostasis and sympathetic failure | |
| Wang et al. | C-reactive protein, infection, and outcome after acute ischemic stroke: a registry and systematic review | |
| Le Sage et al. | Detection of S-100β protein in plasma and urine after a mild traumatic brain injury | |
| Werle et al. | Antibodies against serotonin have no diagnostic relevance in patients with fibromyalgia syndrome. | |
| Hickey et al. | Epidemiology of bleeding symptoms and hypermobile Ehlers-Danlos syndrome in paediatrics | |
| RU2815165C1 (en) | Method for diagnosing vegetative disorders in post-covid syndrome in school-aged children | |
| Goetz et al. | C-reactive protein in saliva and dried blood spot as markers of stress reactivity in healthy African–Americans | |
| Zhan et al. | Myelin basic protein and index for neuro-Behçet's disease | |
| Nakane et al. | Ganglionic acetylcholine receptor autoantibodies in patients with Guillain-Barre syndrome | |
| Lance et al. | Proteomic and biomarker studies and neurological complications of pediatric sickle cell disease | |
| Brooks et al. | Testing for N-methyl-D-aspartate receptor autoantibodies in clinical practice | |
| Uzun et al. | The Association of Flow‐Mediated Dilatation and Blood Parameters in Primary Raynaud’s Phenomenon | |
| Çakir et al. | Serum Occludin and Zonulin Levels in Children With Attention-Deficit/Hyperactivity Disorder and Healthy Controls | |
| RU2782491C1 (en) | Method for preventive assessment of the risk of reducing the level of health of adolescent boys | |
| Somers et al. | Screening for diabetes mellitus in learners residing in the Belhar, Delft and Mfuleni communities of Cape Town, Western Cape, South Africa | |
| RU2783698C1 (en) | Method for prediction of severity of autism spectrum disorders in children | |
| RU2712059C1 (en) | Diagnostic technique for severity of vegetative disorders in parkinson's disease | |
| Luo et al. | Longitudinal Study of SARS-CoV-2 Antibody Characteristics Using Label-Free Immunoassays |