RU2814965C2 - New drugs with cytotoxic activity based on azoloazine derivatives for breast cancer chemotherapy - Google Patents
New drugs with cytotoxic activity based on azoloazine derivatives for breast cancer chemotherapy Download PDFInfo
- Publication number
- RU2814965C2 RU2814965C2 RU2022123569A RU2022123569A RU2814965C2 RU 2814965 C2 RU2814965 C2 RU 2814965C2 RU 2022123569 A RU2022123569 A RU 2022123569A RU 2022123569 A RU2022123569 A RU 2022123569A RU 2814965 C2 RU2814965 C2 RU 2814965C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- breast cancer
- cancer chemotherapy
- derivatives
- agent
- cytotoxic activity
- Prior art date
Links
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 19
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 19
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000002547 new drug Substances 0.000 title description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- SHCRKMNTWSCEBT-UHFFFAOYSA-N N1N=NC=C2N=CC=C21 Chemical class N1N=NC=C2N=CC=C21 SHCRKMNTWSCEBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims abstract 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims abstract 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims abstract 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 15
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 abstract description 9
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical group O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- MNULEGDCPYONBU-UIXCWHRQSA-N (1R,4E,5'S,6S,6'S,7R,8S,10R,11R,12S,14R,15S,16R,18Z,20Z,22R,25S,27R,28S,29R)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-[(2R)-2-hydroxypropyl]-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C/C=C\1)[C@@H]2C MNULEGDCPYONBU-UIXCWHRQSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-CBLVMMTCSA-N (1R,4Z,5'S,6S,6'S,7R,8S,10R,11R,12S,14R,15S,16R,18Z,20Z,22R,25S,27R,28S,29R)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-[(2R)-2-hydroxypropyl]-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C/C=C\1)[C@@H]2C MNULEGDCPYONBU-CBLVMMTCSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-WABYXMGOSA-N (1S,4E,5'R,6R,6'R,7S,8R,10S,11S,12R,14S,15R,16S,18E,22S,25R,27S,28R,29S)-22-ethyl-7,11,14,15-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',6,8,10,12,14,16,28,29-nonamethylspiro[2,26-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-4,18,20-triene-27,2'-oxane]-3,9,13-trione Polymers CC[C@H]1CC[C@H]2O[C@@]3(CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O3)[C@H](C)[C@@H](OC(=O)\C=C\[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@](C)(O)[C@H](O)[C@@H](C)C\C=C\C=C1)[C@H]2C MNULEGDCPYONBU-WABYXMGOSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-QECWTJOCSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-(2-hydroxypropyl)-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](CC(C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-QECWTJOCSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11r,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-WMBHJXFZSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-BOXGPLBDSA-N (1r,4s,5e,5'r,6'r,7e,10s,11s,12s,14r,15s,16s,18r,19s,20r,21e,25s,26r,27s,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trio Polymers O([C@@H]1CC[C@@H](/C=C/C=C/C[C@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)O[C@H]([C@H]2C)[C@H]1C)CC)[C@]12CC[C@@H](C)[C@@H](C[C@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-BOXGPLBDSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-YOKYSHDFSA-N (5'R,10S,11R,12S,14S,15R,16R,18R,19S,20R,26R,29S)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2S)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C=CC(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)C=CC=CC(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-YOKYSHDFSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N (5e,5'r,7e,10s,11r,12s,14s,15r,16r,18r,19s,20r,21e,26r,29s)-4-ethyl-11,12,15,19-tetrahydroxy-6'-[(2s)-2-hydroxypropyl]-5',10,12,14,16,18,20,26,29-nonamethylspiro[24,28-dioxabicyclo[23.3.1]nonacosa-5,7,21-triene-27,2'-oxane]-13,17,23-trione Polymers C([C@H](C)[C@@H](O)[C@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)/C=C/C(=O)OC([C@H]1C)[C@H]2C)\C=C\C=C\C(CC)CCC2OC21CC[C@@H](C)C(C[C@H](C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-VVXVDZGXSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WWDMZNMQLRYMPJ-UHFFFAOYSA-N 2h-tetrazin-5-one Chemical group O=C1C=NNN=N1 WWDMZNMQLRYMPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 4-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1 WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BXJHWYVXLGLDMZ-UHFFFAOYSA-N 6-O-methylguanine Chemical compound COC1=NC(N)=NC2=C1NC=N2 BXJHWYVXLGLDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-MQLHLVDXSA-N CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C\1)C2C Polymers CC[C@@H]1CC[C@@H]2O[C@]3(CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O3)[C@@H](C)[C@H](OC(=O)\C=C\[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)C\C=C\C=C\1)C2C MNULEGDCPYONBU-MQLHLVDXSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010048610 Cardiotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010028116 Mucosal inflammation Diseases 0.000 description 1
- 201000010927 Mucositis Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N SYBR Green I Chemical compound CN(C)CCCN(CCC)C1=CC(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=C2C=CC=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000259 cardiotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000003927 comet assay Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 231100000226 haematotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- UCAPTQYAIUPNNR-UHFFFAOYSA-N imidazo[5,1-d][1,2,3,5]tetrazine Chemical compound C1=NN=NC2=CN=CN21 UCAPTQYAIUPNNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- QXYYYPFGTSJXNS-UHFFFAOYSA-N mitozolomide Chemical compound N1=NN(CCCl)C(=O)N2C1=C(C(=O)N)N=C2 QXYYYPFGTSJXNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950005967 mitozolomide Drugs 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N oligomycin A Natural products CC1C(C2C)OC(=O)C=CC(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)C(O)C(C)C(=O)C(C)(O)C(O)C(C)CC=CC=CC(CC)CCC2OC21CCC(C)C(CC(C)O)O2 MNULEGDCPYONBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N oligomycin A Polymers O([C@H]1CC[C@H](/C=C/C=C/C[C@@H](C)[C@H](O)[C@@](C)(O)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)/C=C/C(=O)O[C@@H]([C@@H]2C)[C@@H]1C)CC)[C@@]12CC[C@H](C)[C@H](C[C@@H](C)O)O1 MNULEGDCPYONBU-AWJDAWNUSA-N 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- VJJUDJLIPUABRN-UHFFFAOYSA-L potassium sodium dihydrogen phosphate chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].[K+].OP(O)([O-])=O VJJUDJLIPUABRN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229940080817 rotenone Drugs 0.000 description 1
- JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N rotenone Natural products O1C2=C3CC(C(C)=C)OC3=CC=C2C(=O)C2C1COC1=C2C=C(OC)C(OC)=C1 JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Description
Сперанский Дмитрий Леонидович, д.м.н., профессор кафедры онкологии, гематологии и трансплантологии ИНМФО; ВолгГМУ.Speransky Dmitry Leonidovich, Doctor of Medical Sciences, Professor of the Department of Oncology, Hematology and Transplantology, INMFO; Volg State Medical University.
Садчикова Елена Владимировна - к.х.н., доцент кафедры технологии органического синтеза химико-технологического института УрФУ.Sadchikova Elena Vladimirovna - Ph.D., Associate Professor of the Department of Technology of Organic Synthesis, Institute of Chemical Technology, UrFU.
1 область техники, к которой относится изобретение.1 field of technology to which the invention relates.
Рак молочной железы (РМЖ) имеет высокую заболеваемость и смертность, как в России, так и в мире, поэтому поиск новых способов его лечения является актуальной проблемой экспериментальной и клинической онкологии. Общеизвестные противоопухолевые препараты недостаточно эффективны, довольно высоко токсичны, к ним быстро развивается резистентность опухолевых клеток. Поэтому поиск и изучение новых лекарственных препаратов, обладающих специфической противоопухолевой активностью против клеток рака молочной железы и при этом невысокой токсичностью по отношению к организму пациента, является весьма актуальным.Breast cancer (BC) has a high morbidity and mortality, both in Russia and in the world, so the search for new methods of its treatment is an urgent problem in experimental and clinical oncology. Well-known antitumor drugs are not effective enough, are quite toxic, and resistance of tumor cells quickly develops to them. Therefore, the search and study of new drugs that have specific antitumor activity against breast cancer cells and at the same time low toxicity to the patient’s body is very relevant.
2 предшествующий уровень техники.2 prior art.
В последние годы было синтезировано большое количество производных соединений, которые в той или иной степени показали возможности перспективного использования в качестве комбинированной терапии разовых заболеваний.In recent years, a large number of derivative compounds have been synthesized, which to one degree or another have shown the possibility of promising use as a combination therapy for single diseases.
Начиная с 1980 годов, химические соединения, в основе которых лежит имидазо[5,1-d][1,2,3,5]тетразин, начали широко применяться в качестве противоопухолевых агентов.Since the 1980s, chemical compounds based on imidazo[5,1-d][1,2,3,5]tetrazine have been widely used as antitumor agents.
Темозоломид используется в клинической практике для лечения некоторых опухолей мозга, а также для усиления терапевтического эффекта ряда препаратов в комбинированной противоопухолевой терапии. При синтезе аналогичных производных было установлено, что заместитель в 3 положении тетразинонового кольца оказывает влияние на устойчивость данных соединений в твердом состоянии и в растворах. Temozolomide is used in clinical practice to treat certain brain tumors, as well as to enhance the therapeutic effect of a number of drugs in combination antitumor therapy. During the synthesis of similar derivatives, it was found that the substituent at the 3-position of the tetrazinone ring affects the stability of these compounds in the solid state and in solutions.
Многие данные свидетельствуют о том, что токсичность митозоломида коррелирует с образованием О6-метилгуанина. Аддукты, образуемые в О6 положении гуанина, считаются наиболее мутагенными и цитотоксичными. Темозоломид является препаратом выбора и используется в качестве средства первой линии для лечения глиом после их хирургической резекции. Однако из-за очень короткого периода полувыведения 1,8 ч и связывания с белками 15% требуется повторное введение препарата. Кроме того, препарат демонстрирует меньшую специфичность к месту, и, таким образом, количество препарата, достигающего места опухоли, становится ограниченным.Much evidence suggests that mitozolomide toxicity is correlated with the formation of O6 -methylguanine. Adducts formed at the O 6 position of guanine are considered the most mutagenic and cytotoxic. Temozolomide is the drug of choice and is used as a first-line treatment for gliomas after surgical resection. However, due to a very short half-life of 1.8 hours and protein binding of 15%, repeated administration of the drug is required. In addition, the drug exhibits less site specificity and thus the amount of drug reaching the tumor site becomes limited.
Эпирубицин, антрациклиновый противоопухолевый антибиотик, является одним из наиболее активных одиночных агентов, используемых в лечении пациентов с раком молочной железы. Основными побочными эффектами эпирубицина являются острая гематологическая токсичность, ограничивающая дозу, и кумулятивная кардиотоксичность, связанная с дозой. Другие основные побочные эффекты введения эпирубицина включают мукозит, тошноту и рвоту, обратимую алопецию и местные кожные и пузырные реакции.Epirubicin, an anthracycline anticancer antibiotic, is one of the most active single agents used in the treatment of patients with breast cancer. The main side effects of epirubicin are dose-limiting acute hematologic toxicity and dose-related cumulative cardiotoxicity. Other major side effects of epirubicin administration include mucositis, nausea and vomiting, reversible alopecia, and local skin and blistering reactions.
Разработка и внедрение в практику новых сведений об цитотоксическом и генотоксическом действии новых производных азолоазинов расширяет представления о механизмах действия и мишенях потенциальных противоопухолевых препаратов. Это является теоретической и эмпирической базой для их дальнейшего изучения с целью разработки новых противоопухолевых препаратов и, в итоге, для улучшения эффективности лечения РМЖ, снижения тяжести побочных эффектов и осложнений химиотерапии в онкологической практике.The development and implementation of new information about the cytotoxic and genotoxic effects of new azoloazine derivatives expands the understanding of the mechanisms of action and targets of potential anticancer drugs. This is a theoretical and empirical basis for their further study in order to develop new anticancer drugs and, ultimately, to improve the effectiveness of breast cancer treatment, reduce the severity of side effects and complications of chemotherapy in oncological practice.
3. Раскрытие сущности изобретения.3. Disclosure of the invention.
На одном из его этапов, предполагается анализ цитотоксических эффектов. В качестве модели используются клеточные культуры раковой опухоли молочной железы. Изучение дозозависимых цитотоксических свойств проводится при помощи теста MTT, показывающего жизнеспособность клеток в зависимости от введенной концентрации веществ.At one of its stages, an analysis of cytotoxic effects is expected. Breast cancer cell cultures are used as a model. The study of dose-dependent cytotoxic properties is carried out using the MTT test, which shows cell viability depending on the administered concentration of substances.
В качестве модели использовались культуры клеток рака молочной железы, на которых изучались фармакологические эффекты производных азолотриозина.Breast cancer cell cultures were used as a model to study the pharmacological effects of azolotriosine derivatives.
4-Амино-8-этоксикарбонилимидазо[5,1- с ][1,2,4]триазин-3- N -циклогексилкарбоксамид (Субстанция 1). Выход 246 мг (74 %), т.пл. 320-321°C. ИК спектр, νmax (KBr), см-1: 520, 570, 615, 660, 690, 715, 775, 820, 880, 990, 1030, 1055, 1155, 1185, 1240, 1280, 1305, 1340, 1360, 1385, 1440, 1505, 1535, 1620, 1655, 1700, 2845, 2925, 2975, 3040, 3090, 3265, 3415. Спектр 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d 6), δ, м. д. (J, Гц): 1.13-1.83 (10Н, м, C6H 11 ); 1.33 (3H, т, J = 6.8, ОCH2CH 3 ); 3.82-3.85 (1H, м, C6H11); 4.34 (2H, кв, J = 6.8, ОCH 2 CH3); 8.71 (1H, д, J = 7.9, NH); 8.77 (1H, с, H-6); 9.35 (1Н, уш.с, NH2); 9.69 (1Н, уш.с, NH2). Спектр 13C ЯМР (151 МГц, DMSO-d 6), δ, м. д.: 14.4 (с, OCH2 CH3); 24.9 (с, CH2-3',5'); 25.1 (с, CH2-4'); 32.2 (с, CH2-2',6'); 47.7 (с, CH2-1'); 59.8 (с, OCH2CH3); 118.0 (с, С-8); 120.1 (с, С-3); 124.5 (с, С-6); 138.6 (с, С-9); 141.0 (с, С-4); 161.5 (с, C=O); 164.5 (с, C=O). Найдено, %: C 54.09; H 6.02; N 25.41. C15H20N6O3. Вычислено, %: C 54.21; H 6.07; N 25.29. 4-Amino-8-ethoxycarbonylimidazo[5,1- c ][1,2,4]triazine-3- N -cyclohexylcarboxamide ( Substance 1 ). Yield 246 mg (74%), m.p. 320-321°C. IR spectrum, ν max (KBr), cm -1 : 520, 570, 615, 660, 690, 715, 775, 820, 880, 990, 1030, 1055, 1155, 1185, 1240, 1280, 1305, 1340, 1360 , 1385, 1440, 1505, 1535, 1620, 1655, 1700, 2845, 2925, 2975 , 3040, 3090, 3265, 3415. 1 H NMR spectrum (600 MHz, DMSO- d6 ), δ, ppm ( J , Hz): 1.13-1.83 (10H, m, C 6 H 11 ); 1.33 (3H, t, J = 6.8, ОCH 2 CH 3 ); 3.82-3.85 (1H, m, C6H11 ) ; 4.34 (2H, q, J = 6.8, OC H 2 CH 3 ); 8.71 (1H, d, J = 7.9, NH); 8.77 (1H, s, H-6); 9.35 (1Н, br.s, NH 2 ); 9.69 (1Н, br.s, NH 2 ). 13 C NMR spectrum (151 MHz, DMSO- d 6 ), δ, ppm: 14.4 (s, OCH 2 CH 3 ); 24.9 (s, CH 2 -3',5'); 25.1 (s, CH 2 -4'); 32.2 (s, CH 2 -2',6'); 47.7 (s, CH 2 -1'); 59.8 (s, O C H 2 CH 3 ); 118.0 (s, S-8); 120.1 (s, S-3); 124.5 (s, S-6); 138.6 (s, S-9); 141.0 (s, S-4); 161.5 (s, C=O); 164.5 (s, C=O). Found, %: C 54.09; H 6.02; N 25.41. C15H20N6O3 . Calculated, %: C 54.21; H 6.07; N 25.29.
4-Амино-8-этоксикарбонилимидазо[5,1- с ][1,2,4]триазин-3- N -бензилкарбоксамид (Субстанция 2). Выход 276 мг (81 %), т.пл. 332-333°C. ИК спектр, νmax (KBr), см-1: 555, 610, 630, 690, 730, 770, 900, 965, 990, 1035, 1070, 1125, 1155, 1205, 1240, 1260, 1290, 1305, 1335, 1365, 1385, 1420, 1455, 1520, 1550, 1620, 1650, 1680, 2900, 2925, 2980, 3025, 3110, 3275, 3345, 3440. Спектр 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d 6), δ, м. д. (J, Гц): 1.34 (3H, т, J = 7.1, ОCH2CH 3 ); 4.34 (2H, кв, J = 7.1, ОCH 2 CH3); 4.53 (2H, д, J = 6.3, NHCH 2 ); 7.22-7.24 (1Н, м, Н-4'); 7.31-7.33 (2H, м, H-3',5'); 7.37 (2H, д, J = 7.6, H-2',6'); 8.79 (1H, с, H-6); 9.37 (1Н, уш.с, NH2); 9.64-9.66 (2Н, м, NH2+NH). Спектр 13C ЯМР (151 МГц, DMSO-d 6), δ, м. д.: 14.4 (с, OCH2 CH3); 59.8 (с, OCH2CH3); 42.1 (с, CH2); 118.0 (с, С-8); 120.2 (с, С-3); 124.6 (с, С-6); 126.7 (с, С-4'); 127.4 (с, С-2',6'); 128.2 (с, С-3',5'); 138.6 (с, С-9); 139.7 (с, С-1'); 141.0 (с, С-4); 161.5 (с, C=O); 165.6 (с, C=O). Найдено, %: C 56.33; H 4.64; N 24.78. C16H16N6O3. Вычислено, %: C 56.47; H 4.74; N 24.69. 4-Amino-8-ethoxycarbonylimidazo[5,1- c ][1,2,4]triazine-3- N -benzylcarboxamide ( Substance 2 ). Yield 276 mg (81%), m.p. 332-333°C. IR spectrum, ν max (KBr), cm -1 : 555, 610, 630, 690, 730, 770, 900, 965, 990, 1035, 1070, 1125, 1155, 1205, 1240, 1260, 1290, 1305, 1335 , 1365, 1385, 1420, 1455, 1520, 1550, 1620, 1650, 1680, 2900, 2925, 2980, 3025, 3110, 3275, 3345, 3440. 1 H NMR spectrum (600 MHz, DMSO - d 6 ), δ , ppm ( J , Hz): 1.34 (3H, t, J = 7.1, ОCH 2 CH 3 ); 4.34 (2H, q, J = 7.1, OC H 2 CH 3 ); 4.53 (2H, d, J = 6.3, NHC H 2 ); 7.22-7.24 (1Н, m, Н-4'); 7.31-7.33 (2H, m, H-3',5'); 7.37 (2H, d, J = 7.6, H-2',6'); 8.79 (1H, s, H-6); 9.37 (1Н, br.s, NH 2 ); 9.64-9.66 (2H, m, NH 2 +NH). 13 C NMR spectrum (151 MHz, DMSO- d 6 ), δ, ppm: 14.4 (s, OCH 2 CH 3 ); 59.8 (s, O C H 2 CH 3 ); 42.1 (s, CH 2 ); 118.0 (s, S-8); 120.2 (s, S-3); 124.6 (s, S-6); 126.7 (s, C-4'); 127.4 (s, C-2',6'); 128.2 (s, C-3',5'); 138.6 (s, S-9); 139.7 (s, C-1'); 141.0 (s, S-4); 161.5 (s, C=O); 165.6 (s, C=O). Found, %: C 56.33; H 4.64; N 24.78. C16H16N6O3 . Calculated, %: C 56.47; H 4.74; N 24.69.
Краткое описание чертежейBrief description of drawings
Фигура 1 - 4-Амино-8-этоксикарбонилимидазо[5,1-с][1,2,4]триазин-3-N-циклогексилкарбоксамид (Субстанция 1).Figure 1 - 4-Amino-8-ethoxycarbonylimidazo[5,1-c][1,2,4]triazine-3-N-cyclohexylcarboxamide (Substance 1).
Фигура 2 - 4-Амино-8-этоксикарбонилимидазо[5,1-с][1,2,4]триазин-3-N-бензилкарбоксамид (Субстанция 2).Figure 2 - 4-Amino-8-ethoxycarbonylimidazo[5,1-c][1,2,4]triazine-3-N-benzylcarboxamide (Substance 2).
Активность азолоазинов проявляется в экспериментальных исследованиях при терапии: лейкозов, лимфом, асцитной карциномы Эрлиха, некоторых вирусных инфекций и т.д.The activity of azoloazines is manifested in experimental studies in the treatment of: leukemia, lymphomas, Ehrlich ascitic carcinoma, some viral infections, etc.
Исходя из изложенного, представляется перспективным провести скрининговую оценку потенциальной противоопухолевой активности in vitro и in vivo для группы соединений рассматриваемого класса производных азолоазинов. В настоящей заявке интерес сконцентрирован на азоло[5,1-c][1,2,4].Based on the above, it seems promising to conduct a screening assessment of the potential antitumor activity in vitro and in vivo for a group of compounds of the class of azoloazine derivatives under consideration. In this application, interest is concentrated on azolo[5,1-c][1,2,4].
Пример 1.Example 1.
Для культивирования клеток в работе были использованы следующие среды, реактивы и готовые смеси веществ: среда MEM без глутамина (ПанЭко, Россия); среда DMEM без глутамина (ПанЭко, Россия); эмбриональная телячья сыворотка (FCS, ПанЭко, Россия); 2 mM раствор L-глутамина (ПанЭко, Россия); 6 mM раствор D-Глюкозы (ПанЭко, Россия); L-аргинин (Реахим, Россия); смесь антибиотиков (1% стрептомицин + 1% пенициллин, АБ) производства ПанЭко, Россия; смесь антибиотик + антимикотик (АА, Healthcare, Австрия); гентамицин (Белмедпрепараты, Беларусь); 70% этиловый спирт (Россия).For cell cultivation, the following media, reagents and ready-made mixtures of substances were used in the work: MEM medium without glutamine (PanEko, Russia); DMEM medium without glutamine (PanEco, Russia); fetal calf serum (FCS, PanEko, Russia); 2 mM solution of L-glutamine (PanEko, Russia); 6 mM D-Glucose solution (PanEko, Russia); L-arginine (Reakhim, Russia); a mixture of antibiotics (1% streptomycin + 1% penicillin, AB) produced by PanEco, Russia; mixture of antibiotic + antimycotic (AA, Healthcare, Austria); gentamicin (Belmedpreparaty, Belarus); 70% ethyl alcohol (Russia).
Для манипуляций с клетками и определения их жизнеспособности использовали: трипсин 0,25%-ный раствор (ПанЭко, Россия), раствор Версена (ПанЭко, Россия), раствор Хенкса (ПанЭко, Россия), трис-HCl50 ммоль/л буфер рН 7,5 (Sigma), п-хлорфенол 6,0 ммоль/л (Sigma), раствор трипанового синего (Биолот, Россия).To manipulate cells and determine their viability, the following were used: trypsin 0.25% solution (PanEco, Russia), Versene solution (PanEco, Russia), Hanks solution (PanEco, Russia), Tris-HCl50 mmol/l buffer pH 7, 5 (Sigma), p-chlorophenol 6.0 mmol/l (Sigma), trypan blue solution (Biolot, Russia).
При проведении кометного анализа в работе использовали следующие реактивы: агароза, тип VII (Sigma-Aldrich, США); гидроксид натрия (чда), хлористый натрий (чда), хлористый калий гидрофосфат натрия (чда) и этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) производства «Реахим» (Россия); трис-(гидроксиметил)-аминометан (Reanal, Венгрия); диметилсульфоксид производства (ДМСО) «Pancreac» (Испания); ДМСО производства Тульской фармацевтической фабрики (Россия); Тритон Х-100 (SERVA, Германия); хлорид железа(III) 6-водный (ч) (Россия), краситель SYBR Green I (Applichem, Германия); галловая кислота, 3% перекись водорода и 70% этиловый спирт (Россия).When carrying out the comet analysis, the following reagents were used in the work: agarose, type VII (Sigma-Aldrich, USA); sodium hydroxide (analytical grade), sodium chloride (analytical grade), potassium chloride sodium hydrogen phosphate (analytical grade) and ethylenediaminetetraacetate (EDTA) produced by Reakhim (Russia); tris-(hydroxymethyl)-aminomethane (Reanal, Hungary); dimethyl sulfoxide (DMSO) produced by Pancreac (Spain); DMSO produced by the Tula Pharmaceutical Factory (Russia); Triton X-100 (SERVA, Germany); iron(III) chloride 6-water (pure grade) (Russia), dye SYBR Green I (Applichem, Germany); gallic acid, 3% hydrogen peroxide and 70% ethyl alcohol (Russia).
В биохимической части исследования использовали следующие реактивы и киты: коммерческие наборы для определения концентрации лактата Olvex Diagnosticum; молочная кислота (Реахим, Россия); этилендиаминтетрауксусная кислота, ЭДТА (Sigma-Aldrich, Швейцария); хлорид магния (Sigma-Aldrich, Китай); хлорид калия (Sigma-Aldrich, Китай); дигидрофосфат калия (Sigma, США); HEPES цвиттер - ионный органический буфер (ДИАЭМ, Германия); сахароза (Sigma-Aldrich, Швейцария); таурин (Sigma, США); Олигомицин А (Sigma-Aldrich, Германия); 2,4-динитрофенол, ДНФ (Sigma-Aldrich, Германия); ротенон («Sigma-Aldrich», Германия); дрожжи, 3% перекись водорода и 70% этиловый спирт (Россия). Тестируемые вещества растворяли в ДМСО в концентрации 10-2М. К культуре опухолевых клеток аденокарциномы MCF-7 добавляли различные концентрации тестируемых соединений. Каждую концентрацию повторяли трижды. В контрольные лунки вносили раствор ДМСО в концентрации не более 1%.In the biochemical part of the study, the following reagents and kits were used: commercial kits for determining lactate concentration Olvex Diagnosticum; lactic acid (Reakhim, Russia); ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA (Sigma-Aldrich, Switzerland); magnesium chloride (Sigma-Aldrich, China); potassium chloride (Sigma-Aldrich, China); potassium dihydrogen phosphate (Sigma, USA); HEPES zwitter - ionic organic buffer (DIAEM, Germany); sucrose (Sigma-Aldrich, Switzerland); taurine (Sigma, USA); Oligomycin A (Sigma-Aldrich, Germany); 2,4-dinitrophenol, DNP (Sigma-Aldrich, Germany); rotenone (Sigma-Aldrich, Germany); yeast, 3% hydrogen peroxide and 70% ethyl alcohol (Russia). The tested substances were dissolved in DMSO at a concentration of 10-2M. Various concentrations of test compounds were added to a culture of MCF-7 adenocarcinoma tumor cells. Each concentration was repeated three times. A DMSO solution at a concentration of no more than 1% was added to the control wells.
По истечении срока инкубации, растворы в лунках заменяли на 96% раствор DMSO, растворяя кристаллы формазана, после чего измеряли оптическую плотность при помощи спектрофотометра Olvex Diagnosticum (Россия). После получения результатов МТТ теста, проводили их обработку и построение графиков выживаемости клеток рака молочной железы по IC50. Цитотоксичность оценивали с помощью метода компьютеризированной проточной цитометрии против растворов противоопухолевых препаратов той же концентрации клеточных культур.After the incubation period, the solutions in the wells were replaced with a 96% DMSO solution, dissolving formazan crystals, after which the optical density was measured using an Olvex Diagnosticum spectrophotometer (Russia). After receiving the results of the MTT test, they were processed and graphs of breast cancer cell survival were plotted according to IC50 . Cytotoxicity was assessed using computerized flow cytometry against solutions of antitumor drugs of the same concentration of cell cultures.
Был проведен анализ цитотоксичности посредством МТТ-теста на двух производных азолотриазина (субстанции 1 и 2).Cytotoxicity analysis was carried out using the MTT test on two azolotriazine derivatives (substances 1 and 2).
В качестве препарата сравнения использовали эпирубицин.Epirubicin was used as a comparison drug.
Проведя оценку цитотоксичности производных азолотриазина по дозозависимым кривым, мы убедились, что не все производные похожи по свойствам и оказывают различий токсический эффект, что вызывает необходимость поиска более подходящих производных. Для выявления разницы между контрольным и опытными образцами проводили статистическое сравнение с культурой клеток без добавления каких-либо веществ. На первом этапе работы мы доказали, что токсичность у производных отличается между собой, что обусловило поиск новых, индивидуальных доз, для построения дозозависимых кривых. На втором этапе были проведены статистические расчеты и на третьем этапе произведен расчет IC50 для оценки выживаемости клеток рака молочной железы MCF-7 по дозозависимым кривым. Концентрация вещества, которая вызывает 50% гибель клеток (IC50) рассчитывается графически по дозозависимой кривой с помощью программного обеспечения Origin (OriginLabCorporation). Значение функции рассчитывается по формуле: , где А1 и А2 - выживаемость клеток; а значение IC50 по формуле: .Having assessed the cytotoxicity of azolotriazine derivatives using dose-dependent curves, we were convinced that not all derivatives are similar in properties and have different toxic effects, which necessitates the search for more suitable derivatives. To identify the difference between the control and experimental samples, a statistical comparison was carried out with a cell culture without the addition of any substances. At the first stage of the work, we proved that the toxicity of the derivatives differs from each other, which led to the search for new, individual doses to construct dose-dependent curves. At the second stage, statistical calculations were carried out and at the third stage, IC 50 was calculated to assess the survival of MCF-7 breast cancer cells using dose-dependent curves. The concentration of a substance that causes 50% cell death (IC 50 ) is calculated graphically from a dose-dependent curve using Origin software (OriginLabCorporation). The function value is calculated using the formula: , where A 1 and A 2 are cell survival; and the value of IC 50 according to the formula: .
Вначале был проведен анализ цитотоксичности эпирубицина в МТТ-тесте, как препарата сравнения. Максимальное подавление составило 1,72/0,82 = 2,10. Расчетная концентрация половинного ингибирование IC50 оказалась равной 9,37 мкмоль/л.First, an analysis of the cytotoxicity of epirubicin was carried out in the MTT test as a reference drug. The maximum suppression was 1.72/0.82 = 2.10. The calculated concentration of half-inhibition IC 50 was equal to 9.37 µmol/L.
Субстанция 1 снижала жизнеспособность клеток РМЖ во всем диапазоне концентраций. Максимальное подавление жизнеспособности было достигнуто при концентрации 5 мкмоль/л и составило 2,61, но и при других концентрациях величины показателя существенно не различались. Расчетная IC50 составила 5,50 мкмоль/л.Substance 1 reduced the viability of breast cancer cells over the entire concentration range. The maximum suppression of viability was achieved at a concentration of 5 µmol/l and amounted to 2.61, but at other concentrations the values of the indicator did not differ significantly. The calculated IC 50 was 5.50 µmol/L.
Субстанция 2 в умеренной степени вызвала дозозависимое снижение жизнеспособности клеток РМЖ на всем диапазоне концентраций, максимальное подавление Ск/Сmax составило 1,83/0,83 = 2,20 при максимальной концентрации 10 мкмоль/л. Расчетное половинное торможение IC50 было достигнуто при концентрации 8,44 мкмоль/л.Substance 2 moderately caused a dose-dependent decrease in the viability of breast cancer cells over the entire concentration range, the maximum suppression of C/Cmax was 1.83/0.83 = 2.20 at a maximum concentration of 10 µmol/l. The calculated half-inhibition IC50 was achieved at a concentration of 8.44 µmol/L.
Для эпирубицина показатель IC50 составляет 0,03979±0,0179М; для производного азолотриазина 1 - IC50: 0,00662 ± 0,00104М; для производного азолотриазина 2- IC50: 0,00805 ± 0,00191М, что подтверждает их более специфическую цитотоксическая активность.For epirubicin, the IC is50 is 0.03979±0.0179M; for azolotriazine derivative 1 - IC50: 0.00662 ± 0.00104M; for derivative Azolotriazine 2-IC50: 0.00805 ± 0.00191M, which confirms their more specific cytotoxic activity.
Значения IC50 производного азолотриазина (субстанция 1) и производного азолотриазина (субстанция 1) входят в доверительный интервал значений IC50 эпирубицина, что подтверждено статистически. Следовательно, данные производные схожи по цитотоксическому эффекту с препаратом сравнения - эпирубицином, но значимо менее токсичны.The IC 50 values of the azolotriazine derivative (substance 1) and the azolotriazine derivative (substance 1) are included in the confidence interval of the IC 50 values of epirubicin, which is confirmed statistically. Consequently, these derivatives are similar in cytotoxic effect to the reference drug, epirubicin, but are significantly less toxic.
Таким образом, найдены новые соединения - производные азолотриазина, как более специфичный и эффективный, по сравнению с общеизвестными противоопухолевыми химиопрепаратами, эффективность которых постоянно снижается из-за развития резистентности опухолевых клеток к противоопухолевой лекарственной терапии, - новый лекарственный препарат для лечения рака молочной железы, эффективность и безопасность которого доказана за счет использования расширений клеточных технологий.Thus, new compounds have been found - azolotriazine derivatives, which are more specific and effective, compared to well-known antitumor chemotherapy drugs, the effectiveness of which is constantly decreasing due to the development of tumor cell resistance to antitumor drug therapy - a new drug for the treatment of breast cancer, effectiveness and whose safety has been proven through the use of cell technology extensions.
Claims (5)
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2022123569A RU2022123569A (en) | 2024-03-04 |
| RU2814965C2 true RU2814965C2 (en) | 2024-03-07 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3750891A1 (en) * | 2018-02-06 | 2020-12-16 | Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. | Pyrazolo[1,5-a][1,3,5]triazine-2-amine derivative, preparation method therefor and medical use thereof |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3750891A1 (en) * | 2018-02-06 | 2020-12-16 | Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. | Pyrazolo[1,5-a][1,3,5]triazine-2-amine derivative, preparation method therefor and medical use thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| IZMEST’EV, A.N., et al. Synthesis and study of the influence of substituents on the cytotoxicity of oxindolylidene derivatives of imidazothiazolotriazinones. ChemTrends-2018: Сборник тезисов докладов Международной научной конференции "Органические и гибридные функциональные материалы и аддитивные технологии", 23-28 сентября 2018 г., Москва. - Москва: МАКС Пресс, 2018. - 114 с.: ил. RUSINOV, V.L., et al. Biologically active azolo-1,2,4-triazines and azolopyrimidines. Russ. Chem. Bull., Int. Ed., Vol. 67, No. 4, April, 2018. PP.573-599. IZMEST’EV, A.N., et al. Synthesis and Biological Activity of Oxindolylidene Derivatives of Imidazo[4,5-e]thiazolo[3,2-b]-1,2,4-triazin-7-ones and Imidazo[4,5-e]thiazolo[2,3-с]-1,2,4-triazin-8-ones. Russian Journal of Organic Chemistry, 2017, Vol. 53, No. 5, pp. 753-763. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2563638C2 (en) | Method of obtaining morpholinylanthracycline derivatives | |
| CN104497084B (en) | For the 7- deazapurine nucleosides of therapeutical uses | |
| CN103781472B (en) | The synthesis of propofol glycoside derivates and use | |
| US8334307B2 (en) | Hydroxypyridone derivatives, pharmaceutical compositions thereof, and their therapeutic use for treating proliferative diseases | |
| WO2021030472A1 (en) | Nanoparticle compositions | |
| WO2016130271A1 (en) | Substituted pyrrolo[2,3-d]pyrimidines for selectively targeting tumor cells with fr-alpha and fr-beta type receptors | |
| AU2013352106B2 (en) | Substituted biaryl sulfonamides and the use thereof | |
| RU2814965C2 (en) | New drugs with cytotoxic activity based on azoloazine derivatives for breast cancer chemotherapy | |
| CN109675053A (en) | Targeting preparation of Podophyllotoxin and its derivatives and preparation method thereof | |
| CN103450301B (en) | Farnesyl thiosalicylic acid-nucleosides conjugate, its preparation method and medicinal use thereof | |
| JPH10507771A (en) | L-erythrosyl nucleoside | |
| WO2011156321A9 (en) | Furanyl compounds and the use thereof | |
| CN101402667A (en) | Glycosylation modified nitric oxide donor type oleaolic acid compounds, preparation and uses thereof | |
| US20140088036A1 (en) | Polyphosphate and pyrophosphate derivative of saccharides | |
| CN110101866A (en) | A kind of pro-drug and its preparation method and application with tumor-targeting | |
| RU2418795C2 (en) | Dioxolane derivatives for cancer treatment | |
| JP7101279B2 (en) | New benzimidazole derivative, this manufacturing method and its anti-cancer agent use | |
| CN112409431B (en) | Cytarabine structural analogue, and preparation method and application thereof | |
| US8173610B2 (en) | Derivatives of epirubicin, their medicinal application and pharmaceuticaly acceptable forms of drugs | |
| CN109846873B (en) | Anti-tumor medicine composition | |
| CN111655710A (en) | Gemcitabine phosphorus-containing prodrugs | |
| JPH10507763A (en) | L-pyranosyl nucleoside | |
| RU2801306C2 (en) | New phosphate ether compound having a pyrrolopyrimidine skeleton, or a pharmaceutically acceptable salt thereof | |
| CN103012394A (en) | Rhodanine derivative and preparation method thereof | |
| CN111285900B (en) | Coupling molecule DCZ0847 compound based on pterostilbene and apocynin, preparation method and application thereof |